JP6335121B2 - 固定化によって引き起こされた筋萎縮後の筋肉回復の促進 - Google Patents

固定化によって引き起こされた筋萎縮後の筋肉回復の促進 Download PDF

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Description

発明の詳細な説明
本発明は、一般には、医療栄養学（ｍｅｄｉｃａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）の分野に関する。例えば、本発明は、筋萎縮及びそれらの影響を治療する及び／又は回復させるために用いることができる組成物を提供する。本発明の一実施形態は、筋萎縮後に筋肉の回復を早めるのに用いることができるロイシン及び抗酸化栄養素を含む組成物に関する。
骨格筋は、可塑性の高い筋肉である。筋肉は、筋力トレーニング（ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｔｒａｉｎｉｎｇ）中に肥大し、持久力トレーニングに応じて酸化能を高める。対照的に、骨格筋は、例えば、疾患、加齢、又は身体活動性の低下などの多数の条件において萎縮する。
さらに、床上安静及び／又は固定化は、筋骨格損傷の治療で選択されることが多く、しばしばさらなる萎縮をもたらす変性の変化をさらに引き起こす。さらに、床上安静は、様々な疾患に関連する強制的な状態であり、床上安静に関係する身体活動性の低さは、筋肉が著しく低下する原因である。
筋肉の消耗は、タンパク質の合成と分解の速度の間の不均衡によって生じるが、アポトーシスと分化／再生プロセスとの間の不均衡によっても生じる。筋タンパクは、様々な疾患又はストレスの多い事象の場合において宿主防御のために他の臓器中でタンパク質を合成する基質を生成するために用いられる遊離アミノ酸（ＡＡ）に異化することができる。したがって、骨格筋の主な機能は、歩行運動をする及び姿勢をとるための力及び強さを与えることであるが、筋肉は、身体の中でタンパク質及びアミノ酸の主な貯蔵庫でもある。したがって、筋肉の消耗が制御されず持続すると、ヒトの運動は損なわれ、日常の活動を行いにくくなり、代謝に有害な影響を与える。
したがって、傷害及び／又は筋肉の廃用後の筋肉量の回復は、自律性を維持するために重要である。
運動などの物理的な介入は有益であるということが示されているが、筋肉の不活動性が特に創傷、外傷性全身障害又は衰弱するような疾患によって起こるとき、このような介入が、すべての状況に必ずしも適用可能であるとは限らない。
したがって、筋肉の回復を向上するために栄養学上の戦略などのさらなる戦略が必要である。
本発明者らは、この必要性に取り組んでいる。
したがって、本発明の目的は、現況技術を改善すること及び固定化によって引き起こされる筋萎縮後に骨格筋の回復を早めるために効率的に用いることができる組成物を当技術分野に提供することであった。
本発明者らは、独立クレームの対象によって本目的を達成し得るということがわかったことに驚きを感じた。従属クレームの対象は、本発明のアイデアをさらに発展させている。
本発明者らは、固定化及び（固定化後の）回復期中の栄養サポートによって、筋萎縮が制限され得る及び／又は筋タンパクの回復が促進され得るか否か試験している。
本発明者らは、ｏｒｂｉ−ソフトプラーク（ｏｒｂｉ−ｓｏｆｔ ｐｌａｑｕｅ）（Ｇｉｂａｕｄ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いてギプスし後肢を固定化している、ラット固定化モデルを用いている。本モデルが可逆的であり、したがって、回復期が試験できるため、本モデルを選んだ。
本発明者らは、抗酸化栄養素及びロイシンが豊富な食事を摂ると、固定化された筋肉の筋肉量の回復が加速するということを実証することが可能であった。
したがって、本発明は、筋萎縮の治療又は予防する、特に、筋萎縮後に筋肉の回復を早めるのに用いるための、組成物の全乾燥重量に基づいた２〜１０重量％の量のロイシン及び少なくとも１種の抗酸化物質を含む組成物に関する。
本発明はまた、筋萎縮の治療又は予防する、特に、筋萎縮後に筋肉の回復を早める上で、組成物を調製するための、ロイシン２〜１０重量％及び少なくとも１種の抗酸化物質の使用に関する。
本発明はさらに、固定化によって引き起こされる筋萎縮の治療又は予防に用いるために、組成物の全乾燥重量に基づいた２〜１０重量％の量のロイシン及び少なくとも１種の抗酸化物質を含む組成物に関する。
抗酸化物質として、任意の抗酸化物質を用いることができる。食品用の抗酸化物質が好ましい。化合物は、一般に、食品用途のための安全性が認められ、それが考慮されている場合、食品用と考えられる。
抗酸化物質の混合物を用いてもよい。例えば、抗酸化物質は、抗酸化物質が豊富であることが知られている食品組成物として又はそれらの抽出物として提供することができる。
抗酸化物質が豊富であるとは、通常、ＯＲＡＣ（ｏｘｙｇｅｎ ｒａｄｉｃａｌ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｃａｐａｃｉｔｙ：活性酸素吸収能力）が、１００ｇ当たり１０００と評価されていることを意味する。
米国農務省（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ）は、選択された食品の活性酸素吸収能力（ＯＲＡＣ）を評価する記事［Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅによるＯｘｙｇｅｎ Ｒａｄｉｃａｌ Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ Ｃａｐａｃｉｔｙ（ＯＲＡＣ） ｏｆ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｆｏｏｄｓ−２００７年］を発表している。
ココア、コーヒー又は紅茶は、高抗酸化物質である。
数種の香辛料又はハーブはまた、オレガノ、クミン、ショウガ、ニンニク、コリアンダー、タマネギ、タイム、マヨラナ、タラゴン、ペパーミント、及び／又はバジルなどを用いることもできる。
果実抽出物又は乾燥果実を用いてもよい。例としては、セイヨウナシ、リンゴ、レーズン、イチジク、ナツメヤシ、ツルコケモモ、ブルーベリー、クロイチゴ、ラズベリー、イチゴ、クロフサスグリ、サクランボ、オレンジ、マンゴー、及び／又はザクロである。
高抗酸化の野菜として、キャベツ、ブロッコリー、ビートの根及びホウレンソウを挙げることができる。
抗酸化物質はまた、精製された化合物又は部分的に精製された化合物として用いることもできる。
したがって、少なくとも１種の抗酸化物質は、ヘスペレチン−７−グルコシド、クルクミン、緑茶カテキン、ルチン、ビタミンＥ、ビタミンＡ、Ｚｎ、Ｓｅ又はそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。
これらの抗酸化物質の代謝産物を用いてもよい。
筋萎縮は、多くの理由があり得る。筋萎縮は、例えば、年齢に伴う（加齢プロセスに伴うサルコペニア）などの、固定化又は身体活動性の低さによって生じることも、疾患のいくつかの共存症、例えば、癌、ＡＩＤＳ、うっ血性心不全、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）、腎不全、外傷、敗血症、及び重度の熱傷などによって生じることもある。筋萎縮はまた、例えば、十分でない若しくは適切でない栄養又は飢餓によっても生じる。
非常によく知られているのは、筋萎縮は、それぞれの筋肉の廃用又は十分でない使用によって生じる。
これは、例えば、入院患者及び／又は骨折した患者の場合、及び／又は患者が完全に若しくは部分的に固定化された場合であることが多い。
したがって、本発明において、筋萎縮は、固定化によって引き起こされる。この固定化は、床上安静及び／又はギプスをすることによって引き起こされ得る。固定化は、完全又は部分的となり得る。部分的に固定化すると、ある運動は可能になるが、完全な筋肉組織を維持するのには不十分である。
サルコペニアの原因は、多因子性であり、廃用、内分泌機能の変化、慢性疾患、炎症、インスリン抵抗性及び栄養障害を含めることができる（Ｆｉｅｌｄｉｎｇら、Ｊ．Ａｍ Ｍｅｄ．Ｄｉｒ．Ａｓｓｏｃ．２０１１年、１２巻：２４９〜２５６頁）。
筋力低下に関して根底に多くの生理的理由が存在するということは、結果的に、異なる療法がそれぞれの理由に関して必要とされるということを含意している。例えば、加齢が、骨格筋の量及び機能の年齢に伴う低下として定義されるサルコペニアが関連し得るという報告がいくつかある。研究によって、高齢のサルコペニア患者の食事にロイシンを添加することは、サルコペニアを治療するのに有益となり得るということが示されている。Ｋａｓｔａｎｏｓら（Ａｍ Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２９１：Ｅ３８１〜Ｅ３８７、２００６年）による最近の研究では、食事の中にロイシンを添加すると、若年者の対象では筋タンパク合成は高まらず、一方、同様のロイシンを補給すると、高齢者では有効であったことが明らかに示されている。この著者らは、高齢者が、若年成人において観察されないロイシンへの筋タンパク合成の感受性の低下を示すと結論づけた。
したがって、年齢に関連するサルコペニアの治療又は予防に関わる機序は、固定化に伴う筋肉量の減少を単独で治療する又は予防するのとは異なり、したがって、加齢に伴わない筋肉量の低下の治療又は予防を成功させるには、高齢の患者とは異なるように実施しなければならないということが予想された。
本発明者らは、固定化に関係する筋肉量の減少を治療する又は予防するためにやはりロイシン補給を使用できるということがわかったことに驚きを感じた。
本発明者らは、ロイシン及び少なくとも１種の抗酸化物質の組み合わせが、本発明の目的を達成するのに非常に有効であることを見出している。
ロイシンは、遊離のロイシンとして又は高レベルのロイシンを含むタンパク源として提供することができる。このようなタンパク源は、例えば、乳漿タンパクであってもよい。
ロイシン及び少なくとも１種の抗酸化物質は、相乗的に働くことが判明した。
理論によって縛られることを望まないが、本発明者らは、ロイシンを補給することによって、食事後の筋タンパク合成を向上させ、回復を加速させ、一方、抗酸化物質を補給することによって、ロイシンのタンパク同化効果を増強させ、筋肉量を保ち、アポトーシスを減少させ、アポトーシス及びタンパク質分解をより速やかに正常化することに寄与すると現在考えている。
２５：１〜１：１、例えば、約１７：１〜２：１の範囲の重量比でロイシン及び少なくとも１種の抗酸化物質を含む組成物で良好な結果が得られた。
組成物は、組成物１ｋｇ当たりロイシン約２０〜１００ｇ、例えば、組成物１ｋｇ当たりロイシン約２５〜６０ｇを含むことができる。
治療用途において、組成物は、疾患及びそれらの合併症の症状を少なくとも部分的に治癒させる又は停止させるのに十分な量で投与される。これを達成するのに適切な量は、「治療上有効な用量」と定義される。こうした目的のために有効な量は、疾患の重症度並びに患者の体重及び全身状態など、当業者に公知のいくつかの因子に依存する。
予防の用途において、本発明による組成物は、疾患を発症するリスクを少なくとも部分的に軽減するのに十分な量で、ある特定の疾患に感受性の患者、或いはある特定の疾患のリスクのある患者に投与される。このような量は、「予防的に有効な用量」であると定義される。やはり、正確な量は、患者の健康状態及び体重などのいくつかの患者に特異的な因子に依存する。
本発明の組成物は、治療上有効な用量又は予防的に有効な用量で投与することとする。
治療上有効な用量又は予防的に有効な用量のどちらも、当業者によって決定することができる。
例えば、組成物は、体重１ｋｇ当たりロイシン約０．０３〜０．２ｇに対応する量で投与され得る。
ロイシンは、Ｄ−又はＬ−ロイシンから選択することができる。天然のＬ−型が好ましい。
例えば、組成物は、組成物１ｋｇ当たりロイシン約２０〜１００ｇ、例えば、組成物１ｋｇ当たりロイシン２５〜６０ｇを含むことができる。
３つの分枝鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）、ロイシン、バリン及びイソロイシンはすべて、第１の２つの分解ステップ、アミノ基転移、その後の脱炭酸のために共通の酵素を共有し、筋肉に活性がある分解代謝経路を有する唯一の不可欠アミノ酸でもある。したがって、単一のＢＣＡＡ（例えば、ロイシン）が大量に与えられると、他の２つのＢＣＡＡ（例えば、イソロイシン及びバリン）が脱炭酸／酸化を引き起こし、特に、ロイシンが「添加され（ｓｐｉｋｅｄ）」得る状況において脱炭酸／酸化を引き起こして筋タンパク合成を制限することがある。実際、Ｖｅｒｈｏｅｖｅｎらによる研究（Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ．２００９年５月；８９巻（５号）：１４６８〜７５頁）では、ロイシン補給をすると、イソロイシン及びバリンがそれぞれおよそ１５〜２５％減少することがやはり判明している。この場合、組成物中に、ロイシンの他にバリン及びイソロイシンを加え、したがって、ロイシンレベルに続くバリン及びイソロイシン循環濃度の減少を回避するのに有益である。
同様の理由で、他の分枝アミノ酸、すなわち、バリン及びイソロイシンの減少を誘導し得る多量のロイシンを投与することは推奨できず、有害となることがある。したがって、本発明の一目的は、可能な限り低い量でロイシンを投与し、さらに、筋萎縮後に筋肉の回復を早めるのに著しい効果を及ぼすことである。
したがって、本発明者らは、ロイシンの最大投与量が組成物の乾物の１０ｗｔ％であることを推奨する。
組成物は、バリン及び／又はイソロイシンが補充されてもよい。
例えば、組成物は、組成物１ｋｇ当たりバリン約１０〜５０ｇ、例えば、組成物１ｋｇ当たりバリン１５〜３０ｇを含むことができる。組成物はまた、組成物１ｋｇ当たりイソロイシン約１０〜５０ｇ、例えば、組成物１ｋｇ当たりイソロイシン１５〜３０ｇをも含むことができる。
本発明の組成物は、多くの日数、理想的には、完全な筋肉回復が達成されるまで、継続的に投与する場合、最も有効である。
例えば、本発明の組成物は、少なくとも１４、２１、３０、６０又は９０日間連続して毎日投与されるものとなり得る。
本発明の組成物の理想的な投与期間は、当業者によって決定することができる。
本発明の組成物は、固定化している間又は固定化した直後に投与することができる。本発明の組成物は、固定化期間後の回復期の開始から投与されるものとなり得る。
例えば、本発明の組成物は、固定化直後に投与されるものとなり得る。このように、本発明の組成物の筋肉回復に対する好ましい効果は、固定化後の筋肉の機能訓練によってさらに裏付けられる。
本発明の組成物は、経口摂取される場合有効である。そのため、組成物が、経口投与又は経腸投与される、例えば、経管栄養によって投与されるなら好ましい。
或いは、ある特定の臨床的状況の場合となり得るとき、経口若しくは経腸投与が可能でない又は勧められないより重症な場合では、本発明の組成物はまた、非経口投与されるべきこともある。
組成物は、ヒト又は動物、例えば、愛がん動物に投与されるものとなり得る。また、愛がん動物は、損傷及び／又は手術後に筋萎縮になることもあり、動物の筋肉を適正に用いる能力は、生活の質及び十分な回復には重大である。
本発明の組成物は、ヒト及び／又は動物の摂取に適している任意の種類の組成物となり得る。
例えば、組成物は、食品組成物、健康補助食品、栄養組成物、栄養補助食品、摂取の前に水又はミルク中で復元される粉末化した栄養製品、食品添加物、医薬品、飲料、及びペットフードからなる群から選択することができる。
本発明の組成物を必須的に消費することにより、あらゆる筋肉の回復は、萎縮後に支援され得る。
筋肉は、骨格筋であることが好ましい。
例えば、本発明の組成物は、腕及び／又は脚の筋肉の回復を支援するために用いることができる。
例えば、筋肉は、腓腹筋、脛骨筋、ヒラメ筋、足の長指伸筋（ＥＤＬ）、大腿二頭筋、半腱様筋、半膜様筋、大殿筋又はそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。
本発明の典型的な組成物は、食品組成物となり得、１ｋｇ当たり
ヘスペレチン−７−グルコシド ０．５〜１．５ｇ
クルクミン １〜２ｇ
緑茶カテキン １〜３ｇ
ルチン １〜３ｇ
ビタミンＥ： ３００ＩＵ
ビタミンＡ： ８０００ＩＵ
セレン： ４〜６μｇ
亜鉛： ９０〜１００μｇ
Ｌ−ロイシン ４０〜５０ｇ
Ｌ−バリン ３〜８ｇ、及び
Ｌ−イソロイシン ８〜１２ｇ
を含むことができる。
本発明の別の典型的な組成物は、食品組成物となり得、１ｋｇ当たり
乳漿タンパク ２０ｇ
クルクミン ０．５ｇ
ルチン ０．５ｇ
多価不飽和脂肪酸 ２ｇ
を含むことができる。
本発明の別の典型的な組成物は、食品組成物となり得、１ｋｇ当たり
乳漿タンパク ３００ｇ／ｋｇ
脂質 １７０ｇ／ｋｇ
炭水化物 ５００ｇ／ｋｇ
遊離ロイシン ２０ｇ
遊離バリン ２．５ｇ
遊離イソロイシン ３．０ｇ
ヘスペレチン−７−グルコシド、クルクミン、緑茶カテキン、ルチン、ビタミンＥ、ビタミンＡ、Ｚｎ、Ｓｅの群から選ばれた抗酸化物質 ５ｇ
を含むことができる。
当業者には、開示された本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に記載した本発明のすべての特徴を自由に組み合わせることができるということが理解されよう。特に、本発明の組成物について記載される特徴は、本発明の使用に適用することができ、逆の場合も同様にできる。
本発明のさらなる利点及び特徴は、以下の実施例及び図から明らかである。
実験計画を示す図である。 対照（Ｃ）食事群と比べたとき、栄養補給群（ＬＥＵ＋ＡＯＸ）において、Ｉ８日から固定化された脚からギプスを取り除いてからの筋肉量の回復がより速いことを示す図である（＊：ＬＥＵ＋ＡＯＸ群対Ｃ食事群ではＰ＜０．０５）。 Ｒ１５〜Ｒ４０まで（すなわち、２３〜４８日目まで）の回復期中の対照食事群の固定化された脚に比べて、栄養補助食（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｄｉｅｔ）を与えられたラットの固定化された脚において、筋タンパク合成率がより高いことを示す図である。これは、吸収後の状態で測定した（ａ： Ｃと異なる、ｂ： ＰＦと異なる、Ｐ＜０．０５）。 Ｒ１５〜Ｒ４０まで（すなわち、２３〜４８日目まで）の回復期中の対照食事群の固定化された脚に比べて、栄養補助食を与えられたラットの固定化された脚において、筋タンパク合成率がより高いことを示す図である。これは、食後の状態で測定した（ａ： Ｃと異なる、ｂ： ＰＦと異なる、Ｐ＜０．０５）。 回復１０日目の対照食事群の固定化された脚に比べて、栄養補助食を摂餌したラットの固定化された脚においてグルタチオンの筋肉内レベルがより高いことを示す図である（異なる文字：ａ、ｂ、ｃ、ｄのときの群間でＰ＜０．０５）。 食事組成物並びにミネラル及びビタミン混合組成物の組成を示す表である。 対照ビタミンミックス、栄養補助されたビタミンミックス、ＡＩＮ ９３Ｍミネラルミックス、及び栄養補助されたミネラルミックスの組成を示す表である。
ラットの後肢を、ｏｒｂｉ−ソフトプラークを用いて８日間（Ｉ０〜Ｉ８）固定化した（固定化されない反対側（ｃｏｎｔｒｏｌａｔｅｒａｌ）の後肢を、同一の動物における対照と考える）。
固定化すると、後肢の筋タンパク代謝の局所的な変化によって筋肉の消耗が誘導される。筋肉の消耗の激しさ及び筋力の低下を説明する代謝パラメータ（タンパク質合成／タンパク質分解）を、固定化期間前後に測定した。前もって固定化された後肢の回復する能力を、ギプス除去後に異なる時点で４０日を超えて測定した（動物は、固定化期間の終了後の日Ｒ１０、Ｒ１５、Ｒ２０、Ｒ３０、Ｒ４０）に屠殺した）。
固定化中及び回復期中の筋萎縮に対する食事中のロイシン（ＬＥＵ）を伴う抗酸化栄養補助剤（ＡＯＸ：ヘスペレチン−７−グルコシド、クルクミン、緑茶カテキン、ルチン、ビタミンＥ、ビタミンＡ、セレン、亜鉛）の有益な効果を、動物２群を用いて試験した、つまり、固定化期間（Ｉ０〜Ｉ８）中に、固定化された群は標準食（Ｃ）を摂餌させ、もう一方の群はＡＯＸ食を摂餌させ、次いで、Ｉ８〜Ｒ１５まで食事の中に組み合わせたＡＯＸ及びＬＥＵを摂餌させ、最後に、Ｒ１５〜Ｒ４０までＬＥＵ食を摂餌させた。食事はすべて、等エネルギーであり、ロイシンが栄養補助食中に存在する場合、等窒素（ｉｓｏｎｉｔｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）となるために、固定化された群及びペアフィード群において、対応する対照食事群と同じ量でアラニンを加えた（表１）。さらに、血漿ロイシンの上昇の結果、バリン及びイソロイシンが降下することを防ぐために、ＬＥＵ食にバリン及びイソロイシンを補充して、実験期間中にバリン及びイソロイシンの血漿濃度を増加させるのではなく、バリン及びイソロイシンが減少することを予防した。
固定化すると摂餌量が減少するため、Ｃ食を与えられる（固定化された動物に対する）ペアフィード（ＰＦ）動物の１群によって、固定化のみの筋タンパク代謝への影響の実証が可能となった。
最後に、タンパク代謝は動物の栄養状態に大いに依存するため、動物を、各時点で、食事後又は吸収後の状態で屠殺した。
雄のＷｉｓｔａｒラット（６〜８月齢及び体重約４００〜５００ｇ）３３７匹を、本実験に用いた（購入先：Ｊａｎｖｉｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ）。
実験群当たり、時間当たり及び栄養状態当たり９匹の動物を屠殺した。栄養状態は、吸収後（ＰＡ）及び食事後（ＰＰ）の状態に対応する。
受け入れ後、ラットの体重を測り、温度（２２〜２３℃）を制御した環境で個別ケージに入れた。動物を、照明を逆にした（２０：００〜０８：００まで点灯する）モジュールに置いた。動物に、（この群による）実験食を摂餌させる前にＣ食（１３％ カゼイン）を１カ月間摂餌させた（図１）。
摂餌量及びラットの体重を毎日記録した。
屠殺の前の日は、食事を１６：３０に取り除いた。屠殺日当日に、動物を、絶食（ＰＡ）を続ける又は１時間それぞれ食事を与え（ＰＰ）、次いで、屠殺の時間（食後１５０〜１８０分に行った）まで食事を取り除いた。屠殺の４０分前、１３Ｃバリン大量投与（ｆｌｏｏｄｉｎｇ ｄｏｓｅ）（１５０μｍｏｌ／ラット１００ｇ；ＭＰＥ＝９９％、静脈内注射）を行って、筋タンパク合成を評価した。
ラットに麻酔し（ペントバルビタールナトリウム ５０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射）、サンプル組織を量り、液体窒素で凍結させ（フリーズクランピング技法）、−８０℃で貯蔵した。血液採取を、大動脈で行った。各ラットの固定化された及び固定化されていない脚の腓腹筋、前脛骨筋、ヒラメ筋、足の長指伸筋を解剖した。
筋タンパクへの１３Ｃ バリンの取り込みを測定することによってタンパク質合成を評価した。タンパク質合成率を算出するために遊離及び結合バリン濃縮度を測定した。ＨＰ−５９７２ 四重極型有機質量分析計（ｏｒｇａｎｉｃ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）に連結したＨＰ−５８９０ ガスクロマトグラフを用いたガスクロマトグラフィー電子衝撃質量分析によって、そのｔ−ブチルジメチルシリル誘導体として、遊離［１−１３Ｃ］バリン濃縮度の測定をした。イオン ｍ／ｚ ３３６及び３３７をモニターした。［１−１３Ｃ］バリンの筋タンパクへの濃縮度を、そのＮ−アセチル−プロピル誘導体として測定した。バリンのＮ−アセチル−プロピル誘導体の形成後、１３ＣＯ２：１２ＣＯ２比を、ガスクロマトグラフィー−燃焼−同位体比質量分析（ＧＣ−Ｃ−ＩＲＭＳ、Ｉｓｏｐｒｉｍｅ、Ｃｈｅａｄｌｅ、ＵＫ）によって測定した。

Claims (11)

  1. 固定化によって引き起こされる筋萎縮の治療又は予防に使用するための、
    組成物の全乾燥重量に基づいた２〜１０重量％の量のロイシン並びに、イソロイシン、バリン及び少なくとも１種の抗酸化物質を含む組成物であって、
    １ｋｇ当たり
    ヘスペレチン−７−グルコシド ０．５〜１．５ｇ
    クルクミン １〜２ｇ
    緑茶カテキン １〜３ｇ
    ルチン １〜３ｇ
    ビタミンＥ： ３００ＩＵ
    ビタミンＡ： ８０００ＩＵ
    セレン： ４〜６μｇ
    亜鉛： ９０〜１００μｇ
    Ｌ−ロイシン ４０〜５０ｇ
    Ｌ−バリン ３〜８ｇ、及び
    Ｌ−イソロイシン ８〜１２ｇ
    を含む、組成物。
  2. 固定化が、床上安静及び／又はギプスをすることにより引き起こされる、請求項１に記載の組成物。
  3. ロイシン及び少なくとも１種の抗酸化物質を２５：１〜１：１の範囲の重量比で含む、請求項１又は２に記載の組成物。
  4. 体重１ｋｇ当たりロイシン０．０３〜０．２ｇに対応する量で投与されることを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. ロイシンが、Ｌ−ロイシンである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 少なくとも１４日間連続して毎日投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 固定化直後に投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 経口投与、経腸投与又は非経口投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. ヒト又はヒトを除く動物に投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 健康補助食品、栄養組成物、栄養補助食品、摂取の前に水又はミルク中で復元される粉末化した栄養製品、食品添加物、医薬品、飲料、及びペットフードからなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 筋肉が、腓腹筋、脛骨筋、ヒラメ筋、足の長指伸筋（ＥＤＬ）、大腿二頭筋、半腱様筋、半膜様筋、大殿筋又はそれらの組み合わせからなる群から選択される骨格筋である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
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