JP6198186B2 - 目的細胞の分離方法 - Google Patents
目的細胞の分離方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6198186B2 JP6198186B2 JP2012234653A JP2012234653A JP6198186B2 JP 6198186 B2 JP6198186 B2 JP 6198186B2 JP 2012234653 A JP2012234653 A JP 2012234653A JP 2012234653 A JP2012234653 A JP 2012234653A JP 6198186 B2 JP6198186 B2 JP 6198186B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- target cells
- specifically expressed
- protein
- cells
- size
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
〔1〕目的細胞の分離方法において、(a)目的細胞4および5の直径よりも小さいフィルタリングサイズを有するマイクロフィルター3と、このマイクロフィルター3の一部を構成する基板1表面に目的細胞の表面に特異的に発現しているたんぱく質と特異的に結合する生体高分子の修飾表面2とを形成し、(b)そこに特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´および特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい目的細胞と夾雑物としての特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより小さい非目的細胞5´が懸濁された溶液6を導入し、(c)前記修飾表面2の生体高分子2Aと前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´の表面に特異的に発現しているたんぱく質を反応させるための静置や送液を行い、(d)前記マイクロフィルター3の下流に陰圧、もしくは前記細胞が懸濁された溶液に陽圧を印加させて、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たず前記マイクロフィルター3のフィルタリングサイズより小さい非目的細胞5´を除去・回収することで、前記非目的細胞5´と前記目的細胞4,4´,5を分離し、(e)さらにリンス液7を導入し、(f)前記リンス液7を攪拌する操作を行い、前記マイクロフィルター3のフィルタリングサイズより大きい目的細胞5を回収することで、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい目的細胞5を分離することを可能とし、(g)前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´のみを前記基板1の修飾表面上に捕捉することにより、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´を前記非目的細胞5´から分離することを特徴とする。
2 基板の生体高分子の修飾表面
2A,13A 生体高分子
3 マイクロフィルター
4,4′,14,14′ 特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ細胞(目的細胞)
5, 15 特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい細胞(目的細胞)
5′,15′ 特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより小さい細胞(非目的細胞)
6,16 特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ細胞や特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たない細胞を含む溶液
7,17 リンス液
8,18 細胞剥離液
12 基板に形成された目的細胞の直径よりも小さい寸法の穴(マイクロフィルターとしての貫通穴フィルター)
13 貫通穴フィルターが形成された基板の表面に形成される生体高分子の修飾表面
21 分離後の目的細胞(特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ、もしくは細胞サイズがフィルタリングサイズより大きい細胞)
22 培溶液
31 電動ピペット
32 ピペットチップ
33 微小流体チップ
33A キャップ部分
33B マイクロフィルター層
33C ガラス基板
34 遠心分離管
Claims (5)
- (a)目的細胞4および5の直径よりも小さいフィルタリングサイズを有するマイクロフィルター3と、該マイクロフィルター3の一部を構成する基板1表面に目的細胞の表面に特異的に発現しているたんぱく質と特異的に結合する生体高分子の修飾表面2とを形成し、
(b)そこに特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´および特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい目的細胞と夾雑物としての特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより小さい非目的細胞5´が懸濁された溶液6を導入し、
(c)前記修飾表面2の生体高分子2Aと前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´の表面に特異的に発現しているたんぱく質を反応させるための静置や送液を行い、
(d)前記マイクロフィルター3の下流に陰圧、もしくは前記細胞が懸濁された溶液に陽圧を印加させて、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たず前記マイクロフィルター3のフィルタリングサイズより小さい非目的細胞5´を除去・回収することで、前記非目的細胞5´と前記目的細胞4,4´,5を分離し、
(e)さらにリンス液7を導入し、
(f)前記リンス液7を攪拌する操作を行い、前記マイクロフィルター3のフィルタリングサイズより大きい目的細胞5を回収することで、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい目的細胞5を分離することを可能とし、
(g)前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´のみを前記基板1の修飾表面上に捕捉することにより、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´を前記非目的細胞5´から分離することを特徴とする目的細胞の分離方法。 - 請求項1記載の目的細胞の分離方法において、細胞剥離液8を用いて前記修飾表面2上から前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´を離脱させ、その後に、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞4,4´をサイズ毎に回収することを特徴とする目的細胞の分離方法。
- (a)目的細胞14,15の直径よりも小さいフィルタリングサイズを有するマイクロフィルターとしての微細構造を有する貫通穴フィルター12を構成する基板11表面に目的細胞の表面に特異的に発現しているたんぱく質と特異的に結合する生体高分子の修飾表面13とを形成し、
(b)そこに特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞14,14´および特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい目的細胞15と夾雑物としての特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより小さい非目的細胞15´が懸濁された溶液16を導入し、
(c)前記修飾表面13の生体高分子13Aと前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞14,14´の表面に特異的に発現しているたんぱく質を反応させるための静置や送液を行い、
(d)続いて前記貫通穴フィルター12の下流に陰圧、もしくは前記細胞が懸濁された溶液に陽圧を印加することで、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たず前記貫通穴フィルター12のサイズより小さい非目的細胞15´を除去・回収し、
(e)さらにリンス液17を導入し、
(f)前記リンス液17を攪拌する操作を行い、前記貫通穴フィルター12のフィルタリングサイズより大きい目的細胞15を回収することで、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持たずフィルタリングサイズより大きい目的細胞15を分離することを可能とし、
(g)前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞14,14´のみを前記基板11の修飾表面上に捕捉することにより、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞14,14´を前記非目的細胞15´から分離することを特徴とする目的細胞の分離方法。 - 請求項3記載の目的細胞の分離方法において、細胞剥離液18を用いて前記基板11の修飾表面上から前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞14,14´を離脱させ、その後に、前記特異的に発現しているたんぱく質を表面に持つ目的細胞14,14´をサイズ毎に回収することを特徴とする目的細胞の分離方法。
- 請求項1又は3記載の目的細胞の分離方法において、前記生体高分子2A,13Aが抗体、核酸アプタマー又はペプチドアプタマーであることを特徴とする目的細胞の分離方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012234653A JP6198186B2 (ja) | 2012-10-24 | 2012-10-24 | 目的細胞の分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012234653A JP6198186B2 (ja) | 2012-10-24 | 2012-10-24 | 目的細胞の分離方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014083000A JP2014083000A (ja) | 2014-05-12 |
JP6198186B2 true JP6198186B2 (ja) | 2017-09-20 |
Family
ID=50786689
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012234653A Expired - Fee Related JP6198186B2 (ja) | 2012-10-24 | 2012-10-24 | 目的細胞の分離方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6198186B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6781877B2 (ja) * | 2015-10-27 | 2020-11-11 | 国立大学法人 熊本大学 | 標的細胞捕捉装置 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4043094B2 (ja) * | 1998-03-19 | 2008-02-06 | 旭化成クラレメディカル株式会社 | 細胞分離器 |
JP2010227013A (ja) * | 2009-03-27 | 2010-10-14 | Seiko Epson Corp | 細胞捕捉デバイスおよび細胞捕捉システム |
JP2010227014A (ja) * | 2009-03-27 | 2010-10-14 | Seiko Epson Corp | 細胞捕捉デバイスおよび細胞捕捉システム |
CN103189122B (zh) * | 2010-05-03 | 2016-11-16 | 柯丽安缇维微技术公司 | 聚合物微过滤器及其制造方法 |
WO2012105505A1 (ja) * | 2011-01-31 | 2012-08-09 | 独立行政法人国立国際医療研究センター | 多能性幹細胞由来高機能肝細胞とその製造方法及び薬剤代謝毒性試験方法 |
EP2692860A4 (en) * | 2011-03-31 | 2015-05-20 | Riken | ANAPLASTIC STATE REGULATOR AND CORRESPONDING APPLICATIONS |
-
2012
- 2012-10-24 JP JP2012234653A patent/JP6198186B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2014083000A (ja) | 2014-05-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2731723B1 (en) | Methods for magnetic separation | |
Diogo et al. | Separation technologies for stem cell bioprocessing | |
Zhu et al. | Stem cell separation technologies | |
EP2440941B1 (en) | Sheath flow devices and methods | |
US11077389B2 (en) | Methods for purifying biological cells | |
US20170268037A1 (en) | Methods and systems for cell separation using magnetic-and size-based separation | |
EP3531128B1 (en) | Integrated platform for single cell analysis | |
Kavanagh et al. | Current and emerging techniques of fetal cell separation from maternal blood | |
KR101279918B1 (ko) | 종양세포 검출장치 및 종양세포 검출방법 | |
EP2956541B1 (en) | Devices and methods for purification of biological cells | |
CN111440696A (zh) | 胎儿细胞捕获模块、用于胎儿细胞捕获的微流控芯片,及它们的使用方法 | |
US9637719B2 (en) | Devices and methods for purification of biological cells | |
Pensold et al. | Methods for single-cell isolation and preparation | |
Liu et al. | Microtechnology-enabled filtration-based liquid biopsy: challenges and practical considerations | |
JP6198186B2 (ja) | 目的細胞の分離方法 | |
Diogo et al. | Separation technologies for stem cell bioprocessing | |
EP3126027A1 (en) | Devices and methods for purification, detection and use of biological cells | |
Mukherjee et al. | Isolation and Purification of Various Mammalian Cells: Single Cell Isolation | |
JP7413692B2 (ja) | 細胞を含む試料の前処理方法 | |
Gur | A Tiered Microchip System for High Purity Isolation of Rare Cells from Blood | |
US20220349007A1 (en) | Method of Culturing and Analyzing at Least One Cell in a Microchamber Configured to Allow for Optical Inspection of the at Least One Cell, a Device for Use in the Method, a System and a Computer Program for Performing One or More of the Steps of the Method | |
JP2018061446A (ja) | 希少細胞回収方法 | |
Gužvić | Single Cell Analysis: Methods and Protocols | |
Alviano et al. | Recent patents and advances on tag-less microfluidic stem cell sorting methods: applications for perinatal stem cell isolation | |
JP2021019513A (ja) | 標的粒子の解析方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150928 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160830 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160928 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20170221 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170515 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170515 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20170602 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170808 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170814 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6198186 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |