JP6190105B2 - 皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法 - Google Patents
皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6190105B2 JP6190105B2 JP2012249509A JP2012249509A JP6190105B2 JP 6190105 B2 JP6190105 B2 JP 6190105B2 JP 2012249509 A JP2012249509 A JP 2012249509A JP 2012249509 A JP2012249509 A JP 2012249509A JP 6190105 B2 JP6190105 B2 JP 6190105B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- expression level
- gene
- related gene
- epidermal keratinocytes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims description 21
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 title description 23
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 123
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 120
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 117
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 109
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 87
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 50
- 108090000320 Hyaluronan Synthases Proteins 0.000 claims description 48
- 102000003918 Hyaluronan Synthases Human genes 0.000 claims description 45
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 40
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 35
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 35
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 34
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 32
- 101001054921 Homo sapiens Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Proteins 0.000 claims description 23
- 102100026849 Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor 1 Human genes 0.000 claims description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 19
- 101000962526 Homo sapiens Hyaluronidase-2 Proteins 0.000 claims description 17
- 102100039285 Hyaluronidase-2 Human genes 0.000 claims description 17
- 101000962530 Homo sapiens Hyaluronidase-1 Proteins 0.000 claims description 16
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 14
- 102100039283 Hyaluronidase-1 Human genes 0.000 claims description 14
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 12
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 10
- 125000000415 L-cysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])S[H] 0.000 claims description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 7
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims 3
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 18
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 15
- 244000294611 Punica granatum Species 0.000 description 13
- 235000014360 Punica granatum Nutrition 0.000 description 13
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 230000005068 transpiration Effects 0.000 description 11
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 10
- 235000017276 Salvia Nutrition 0.000 description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 9
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 description 8
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 7
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 229940058015 1,3-butylene glycol Drugs 0.000 description 5
- 241000218158 Clematis Species 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 235000019437 butane-1,3-diol Nutrition 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- -1 antiseptics Substances 0.000 description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000546188 Hypericum Species 0.000 description 3
- 235000017309 Hypericum perforatum Nutrition 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000183666 Nepsera aquatica Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 3
- 229940008099 dimethicone Drugs 0.000 description 3
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 3
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 3
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 241001072909 Salvia Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000036620 skin dryness Effects 0.000 description 2
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 2
- 230000037393 skin firmness Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WAYINTBTZWQNSN-UHFFFAOYSA-N 11-methyldodecyl 3,5,5-trimethylhexanoate Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCOC(=O)CC(C)CC(C)(C)C WAYINTBTZWQNSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 2-octyldodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCC(CO)CCCCCCCC LEACJMVNYZDSKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 101150017002 CD44 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- XMSXQFUHVRWGNA-UHFFFAOYSA-N Decamethylcyclopentasiloxane Chemical compound C[Si]1(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O1 XMSXQFUHVRWGNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013558 Developmental Bone disease Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 239000004129 EU approved improving agent Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 244000166124 Eucalyptus globulus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N Glycyrrhetinic acid Natural products C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 1
- MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N Glycyrrhetinsaeure Natural products C12C(=O)C=C3C4CC(C)(C(O)=O)CCC4(C)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150085382 HAS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150089672 HAS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150056481 HYAL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150001550 HYAL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150027313 Has2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001041128 Homo sapiens Hyaluronidase-3 Proteins 0.000 description 1
- 101001041120 Homo sapiens Hyaluronidase-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100021082 Hyaluronidase-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100021081 Hyaluronidase-4 Human genes 0.000 description 1
- 241000207923 Lamiaceae Species 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 1
- 239000009724 Salvia extract Substances 0.000 description 1
- 235000002912 Salvia officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 206010072610 Skeletal dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 1
- 230000006750 UV protection Effects 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- BTFJIXJJCSYFAL-UHFFFAOYSA-N arachidyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO BTFJIXJJCSYFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- MPBRYMWMMKKRGC-UHFFFAOYSA-M carbocyanin DBTC Chemical compound [Br-].C1=CC=CC2=C([N+](=C(C=C(C)C=C3N(C4=C5C=CC=CC5=CC=C4S3)CC)S3)CC)C3=CC=C21 MPBRYMWMMKKRGC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000004323 caveolae Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229940085262 cetyl dimethicone Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960003720 enoxolone Drugs 0.000 description 1
- 239000010696 ester oil Substances 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 229940091554 lauryl peg-9 polydimethylsiloxyethyl dimethicone Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940088608 peg-9 polydimethylsiloxyethyl dimethicone Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229940109529 pomegranate extract Drugs 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000011410 subtraction method Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 230000000475 sunscreen effect Effects 0.000 description 1
- 239000000516 sunscreening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
しかしながら、加齢に伴う皮膚の弾力性やハリの低下、皮膚の乾燥や肌荒れといった皮膚の変化を予防・改善することを目的としてヒアルロン酸の分解促進を試みる例は全く報告されていなかった。
そして、さらに研究を進めたところ、加齢および紫外線による表皮ケラチノサイトにおけるヒアルロン酸合成関連遺伝子(以下、単に合成関連遺伝子と言う場合がある)のみならず、ヒアルロン酸レセプター関連遺伝子(以下、単にレセプター関連遺伝子と言う場合がある)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子(以下、単に分解関連遺伝子と言う場合がある)が、皮膚バリア機能の改善に関連していることを突き止めた。
(1)紫外線を照射した若齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Cys)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Cyr)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Cyd)を測定するステップ
(2)紫外線を照射しない若齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Bys)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Byr)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Byd)を測定するステップ
(3)紫外線を照射した高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Cas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Car)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Cad)を測定するステップ
(4)紫外線を照射しない高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Bas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Bar)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Bad)を測定するステップ
(5)紫外線照射前又は、紫外線照射後又は、紫外線照射の前後に被験物質を加えた状態の高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Tas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Tar)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Tad)を測定するステップ
(6)前記(1)〜(5)の各ステップで得られた遺伝子の発現量において、Cys/Bys≧Tas/Bas≧Cas/BasかつCyr/Byr≧Tar/Bar≧Car/BarかつCyd/Byd≧Tad/Bad>Cad/Badとなる被験物質を有効成分として選択するステップ
Cys/Bys≧Tas/Bas≧Cas/Basかつ、Cyr/Byr≧Tar/Bar≧Car/Barかつ、Cyd/Byd≧Tad/Bad≧(Cyd/Byd+Cad/Bad)/2となる被験物質を有効成分として選択することを特徴とする請求項1の皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法である。
また、これまでにない新たな着想に基づく皮膚バリア機能改善剤及び皮膚外用剤が提供される。
本願発明のスクリーニング方法においては、加齢及び紫外線によりダメージを受けた皮膚を想定し、ヒアルロン酸の合成関連遺伝子、レセプター関連遺伝子、分解関連遺伝子の発現量を、若齢のヒトの皮膚における各遺伝子発現の状態に近づけさせる被験物質を選択する方法である。
(1)紫外線を照射した若齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Cys)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Cyr)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Cyd)を測定する。
(2)紫外線を照射しない若齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Bys)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Byr)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Byd)を測定する。
(3)紫外線を照射した高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Cas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Car)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Cad)を測定する。
(4)紫外線を照射しない高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Bas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Bar)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Bad)を測定する。
(5)紫外線照射前又は、紫外線照射後又は、紫外線照射の前後に被験物質を加えた状態の高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子の発現量(Tas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子の発現量(Tar)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子の発現量(Tad)を測定する。
(6)前記(1)〜(5)で得られた遺伝子の発現量において、Cys/Bys≧Tas/Bas≧Cas/BasかつCyr/Byr≧Tar/Bar≧Car/BarかつCyd/Byd≧Tad/Bad>Cad/Badとなる被験物質を有効成分として選択する。
具体的には、例えばヒアルロン酸合成関連遺伝子中、指標をHAS1とした際に、Cys/Bys≧Tas/Bas≧Cas/Basとなっていれば良いという意味である。この関係が、HAS2を指標とした場合、HAS3を指標にした際にも、それぞれ同様の関係であれば更に良い。 つまり、本関係を確認する場合には、遺伝子の種類は固定した上で判断する。
尚、HAS1、HAS2、HAS3それぞれの発現量の内、少なくとも1種以上の遺伝子の発現量が前記関係を満たしていれば良く、HAS1、HAS2、HAS3のいずれかの指標において、遺伝子の発現量がCys/Bys≧Tas/Bas≧Cas/Basとなっていないものがあっても差し支えない。
Journal of Investigative Dermatology 118: 43-48, 2002. )、ノックアウトマウスを用いた研究からHAS1とHAS3のノックアウトマウスでは目立った表現型が見られず、HASは互いに機能を補完し合っている可能性も示唆されている。
Antigenをコードする遺伝子である。
つまり、本関係を確認する場合には、遺伝子の種類は固定した上で判断する。
尚、HYAL1、HYAL2それぞれの発現量の内、少なくとも一方の遺伝子の発現量が前記関係を満たしていれば良く、HYAL1、HYAL2のいずれか一方の指標において、遺伝子の発現量がCyd/Byd≧Tad/Bad>Cad/Badなっていないものがあっても差し支えない。
RNAを抽出し、このTotal RNA中におけるヒアルロン酸代謝関連遺伝子(mRNA)の発現量を測定する。
al. Anal. Biochem, 162, 156-159, 1987.)等を採用することができる。例えば、市販品であるRNeasy
MINI Kit(QIAGEN)などが使用でき、抽出された全RNAは、必要に応じてさらにmRNAのみに精製して用いてもよい。
Human Epidermal Keratinocyte(クラボウ社)やHEK(東洋紡社)を使用することができ、培養に用いる好適な培地も各社がそれぞれの細胞種に対して推奨している培地を使用して差し支えない。
Human Epidermal Keratinocyte(クラボウ社)やHEK(東洋紡社)を使用することができ、培養に用いる好適な培地も各社がそれぞれの細胞種に対して推奨している培地を使用して差し支えない。
FL20S・E−30/DMR(TOSHIBA社)が好適に使用でき、紫外線照射量は15〜25mJ/cm2が望ましい。15mJ/cm2より少ないと紫外線による影響が明確に観察できず、25mJ/cm2より多いと培養表皮ケラチノサイトの生存率が著しく低下し、遺伝子発現量の変化が正しく観察できない。
試験に同意を得た20歳代の男性5名および50歳代の男性5名にて下記項目について評価した。露光部皮膚としては顔面、非露光部皮膚としては上腕内側部を測定部位とし、測定部位を洗顔料で洗浄後、20±1℃、湿度50±2%の環境下で10分間順化した後測定を行った。
1−1.角層水分量の測定
露光部皮膚および非露光部皮膚の角層水分量を角層水分量測定装置(Corneometer CM825,
Courage+Khazaka)にて測定した。各部位5点を測定し、平均値を各被験者の当該部位における角層水分量値とした。
露光部皮膚および非露光部皮膚の経表皮水分蒸散量を経表皮水分蒸散量測定装置(Tewameter TM210, Courage+Khazaka)にて測定した。各部位1点を測定し、1分間を超えて測定値が安定した時間帯の測定値を平均した値を各被験者の当該部位における経表皮水分蒸散量値とした。
2−1.角層ヒアルロン酸の採取
露光部皮膚および非露光部皮膚の3.6×4cmの範囲の角層を5回のテープストリッピングにより採取し、テープを15mLチューブに入れて0.5N
NaOH水溶液 3mLを添加し、一晩室温下で静置した。その後1N HCl水溶液1.5mLを添加して中和し、緩衝液(100mM Tris−HCl,5.0mM CaCl2,pH7.8)4.5mLを加えて10分間煮沸した。次いでプロテアーゼ
6mgを添加して50℃にて24時間インキュベートし、その後再度プロテアーゼ 6mgを添加した。さらに50℃にて24時間インキュベートした後、トリクロロ酢酸1mLを加え、4℃で1時間静置後、遠心分離(3500rpm,15分)してタンパクを沈殿させた。次に上清を採取して蒸留水に対して透析し、凍結乾燥した。得られた乾燥物に蒸留水
1mLを添加して溶解し、500μLずつ分注して再度凍結乾燥した。
2−1で調製された凍結乾燥物中に含まれるヒアルロン酸量を市販のELISA
Kit(QnE
Hyaluronic Acid(HA)ELISA Assay, Biotech Trading Partners)を使用し、Kitの指示通りに測定した。
2−1で調製された凍結乾燥物に蒸留水 10μLとLoading
Buffer(2Mスクロース,100mM Tris−borate,1mM EDTA, pH8.3) 10μLを添加した。これを試料として4%TBEポリアクリルアミドゲルを作製し、TBEバッファー中400Vで12分間電気泳動を行い、ゲルを0.005%
Stains−All 50%エタノール溶液(Sigma社)を用いて一晩染色後、10%エタノール水溶液中で脱色し、電気泳動像をスキャナーで取り込んだ。各試料のゲル上での移動距離を基に分子量を5段階に分類し(分子量の小さい方から1,2,3,4,5)、分子量スコアとした。具体的には、ヒアルロン酸の電気泳動は、タンパク質とは異なりテーリングをするので、陽極方向のテーリング最先端部(到達点側)の位置をスコアリングしている。つまり、本分子量スコアが上がるということは、低分子化したヒアルロン酸の蓄積がなくなり、正常分子量のヒアルロン酸が合成されていることが示される。
19歳および57歳健常ヒト由来ケラチノサイト(HEK, 東洋紡社)をそれぞれ7.5×104Cells/mLとなるようにKeratinocyte Growth Medium Kit(Cell Applications)に分散し、24ウェル細胞培養プレートの各ウェルに500μLずつ播種した。37℃、5%CO2下で24時間インキュベートした後、Keratinocyte Growth Medium Kitを除いてPBSに置換し、UVB 20mJ/cm2を照射した。その後PBSを取り除いて新しいKeratinocyte Growth Medium Kitに置換し、さらに37℃、5%CO2下で6時間インキュベートした。次に、市販のTotal RNA抽出Kit(RNeasy Mini Kit,QIAGEN)を使用し、Kitの指示通りにTotal RNAを抽出した。得られたTotal RNAは、市販の逆転写Kit(PrimeScript RT
Reagent Kit (Perfect Real Time), TaKaRa)を用い、GeneAmp PCR System
2700 (Applied Biosystems)にてKitの指示通りに逆転写した。ヒアルロン酸代謝関連遺伝子の発現量は、市販のReal−time PCR試薬(Power SYBR Green PCR Master Mix, Applied Biosystems)を用い、7500 Real Time PCR System (Applied Biosystems)にてKitの指示通りに測定した。この際に使用したプライマー配列は下記の通りである。
forward primer: 5‘−CCACATCGCTCAGACACCAT−3’
reverse primer: 5‘−TGACCAGGCGCCCAATA−3’
(2)HAS1
forward primer:5‘−ATATAGGAATAACCTCTTGCAGCAGTT−3’
reverse primer:5‘−TGGAGGTGTACTTGGTAGCATAACC−3’
(3)HAS2
forward primer:5‘−TGGATGACCTACGAAGCGATAA−3’
reverse primer:5‘−GCTGGATTACTGTGGCAATGAG−3’
(4)HAS3
forward primer: 5‘−CCTGCACCATCGAGATGCTT−3’
reverse primer: 5‘−CGTACTTGTTGAGGATCTGGACAT−3’
(5)CD44
forward primer: 5‘−CCTGGCGCAGATCGATTT−3’
reverse primer: 5‘−TGCTGTAGCGACCATTTTTCTC−3’
(6)HYAL1
forward primer: 5‘−TCTGGGTGAGCTGGGAAAATA−3’
reverse primer: 5‘−GCCCCAGTGTAGTGTCCATATACTC−3’
(7)HYAL2
forward primer: 5‘−GCACTCCCAGTCTACGTCTTCA−3’
reverse primer: 5‘−CGCACTCTCGCCAATGGTA−3’
1.被験物質の調製
オトギリソウ地上部、サルビア葉、ザクロ果皮、ザクロ花、アルテア葉、クレマティス葉、トウキンセンカ花を用いて、次の製造方法に従い、各植物抽出物(粉末)を得た。
Cellulose acetate, 0.45μm, 47mm)を用いて吸引ろ過後、エバポレーターにてエタノールを留去し、凍結乾燥することによって各植物抽出物(粉末)を得た。
57歳健常ヒト由来ケラチノサイト(HEK, 東洋紡社)を7.5×104Cells/mLとなるようにKeratinocyte Growth Medium Kitに分散し、24ウェル細胞培養プレートの各ウェルに500μLずつ播種した。37℃、5%CO2下で24時間インキュベートした後、被験物質を添加し、さらに37℃、5%CO2下で24時間インキュベートした。その後Keratinocyte Growth Medium Kitを除いてPBSに置換し、UVB 20mJ/cm2を照射した後、PBSを取り除いて新しいKeratinocyte Growth Medium Kitに置換し、再度被験物質を添加して37℃、5%CO2下で6時間インキュベートした。その後Total
RNAを調製して<実験例2>と同様の方法でヒアルロン酸代謝関連遺伝子の発現量を測定した。
尚、本実験では、紫外線照射の前後に被験物質の添加を行ったが、紫外線照射前のみ被験物質の添加を行っても良いし、紫外線照射後にのみ被験物質を添加して実験を行っても、遺伝子の発現量と皮膚バリア機能改善作用との関係は同様の傾向を示すので、被験物質に合わせて、適宜調整することが可能である。
サルビア葉抽出物、ザクロ花抽出物、あるいはクレマティス葉抽出物を用いて「表2」の処方により皮膚外用剤を調製し、試験に同意を得た50代男性5名を1群とし、第1群に実施例1と比較例2、第2群に実施例2と比較例2、第3群に比較例1と比較例2のテストサンプルを半顔に1日2回塗布してもらい、使用開始前、使用開始4週間後に<実験例1>と同様の方法で角層水分量、経表皮水分蒸散量、ヒアルロン酸分子量の測定を行った。試験結果は各測定日の比較例2使用部位の測定により得られた値を100%として表した。試験結果を図11〜14に示す。
サルビア葉抽出物 0.02
ステアリルアルコール 6.00
ステアリン酸 2.00
ワセリン 4.00
スクワラン 9.00
オクチルドデカノール 10.00
1,3−ブチレングリコール 6.00
グリセリン 4.00
POE(20)セチルアルコールエーテル 3.00
モノステアリン酸グリセリン 2.00
酸化防止剤 適量
防腐剤 適量
精製水 残部
合計 100.0
ザクロ葉抽出物 0.01
サルビア葉抽出物 0.01
タルク 5.00
セリサイト 8.00
酸化チタン 5.00
色顔料 適量
モノイソステアリン酸ポリグリセリル 3.00
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 1.50
イソノナン酸イソトリデシル 10.00
1,3−ブチレングリコール 5.00
酸化防止剤 適量
防腐剤 適量
精製水 残部
合計 100.0
ザクロ花抽出物 0.01
サルビア葉抽出物 0.01
酸化チタン 10.00
酸化亜鉛 10.00
PEG-9ポリジメチルシロキシエチルジメチコン 1.50
ラウリルPEG-9ポリジメチルシロキシエチルジメチコン 1.50
シクロペンタシロキサン 20.00
ジメチコン 10.00
(ジメチコン/ビニルジメチコン)クロスポリマー
0.50
セチルジメチコン 0.25
グリチルレチン酸エステル 0.05
メチルグルセス−20 1.00
1,3−ブチレングリコール 10.00
塩化ナトリウム 適量
酸化防止剤 適量
防腐剤 適量
精製水 残部
合計 100.0
Claims (2)
- 培養表皮ケラチノサイトについて、培養表皮ケラチノサイトに発現する遺伝子の発現量を比較することで、皮膚水分バリア機能改善剤をスクリーニングする方法であって、
(1)紫外線を照射した健常な10〜20歳代(以下若齢)のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子(HAS1、HAS2およびHAS3から選ばれる1種以上)の発現量(Cys)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子(CD44)の発現量(Cyr)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子(HYAL1およびHYAL2から選ばれる1種以上)の発現量(Cyd)を測定するステップ
(2)紫外線を照射しない若齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子(HAS1、HAS2およびHAS3から選ばれる1種以上)の発現量(Bys)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子(CD44)の発現量(Byr)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子(HYAL1およびHYAL2から選ばれる1種以上)の発現量(Byd)を測定するステップ
(3)紫外線を照射した健常な50歳以上(以下高齢)のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子(HAS1、HAS2およびHAS3から選ばれる1種以上)の発現量(Cas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子(CD44)の発現量(Car)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子(HYAL1およびHYAL2から選ばれる1種以上)の発現量(Cad)を測定するステップ
(4)紫外線を照射しない高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子(HAS1、HAS2およびHAS3から選ばれる1種以上)の発現量(Bas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子(CD44)の発現量(Bar)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子(HYAL1およびHYAL2から選ばれる1種以上)の発現量(Bad)を測定するステップ
(5)紫外線照射前又は、紫外線照射後又は、紫外線照射の前後に被験物質を加えた状態の高齢のヒトをドナーとする培養表皮ケラチノサイトのヒアルロン酸合成関連遺伝子(HAS1、HAS2およびHAS3から選ばれる1種以上)の発現量(Tas)およびヒアルロン酸レセプター関連遺伝子(CD44)の発現量(Tar)およびヒアルロン酸分解関連遺伝子(HYAL1およびHYAL2から選ばれる1種以上)の発現量(Tad)を測定するステップ
(6)前記(1)〜(5)の各ステップで得られた遺伝子の発現量において、
(Cys/Bys≧Tas/Bas>Cas/BasまたはCys/Bys>Tas/Bas>Cas/Bas)、
かつ(Cyr/Byr≧Tar/Bar>Car/BarまたはCyr/Byr>Tar/Bar≧Car/Bar)、
かつCyd/Byd≧Tad/Bad>Cad/Bad
となる被験物質を有効成分として選択することを特徴とする皮膚水分バリア機能改善剤のスクリーニング方法。 - Cyd/Byd≧Tad/Bad>(Cyd/Byd+Cad/Bad)/2となる被験物質を有効成分として選択することを特徴とする請求項1の皮膚水分バリア機能改善剤のスクリーニング方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012249509A JP6190105B2 (ja) | 2012-11-13 | 2012-11-13 | 皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012249509A JP6190105B2 (ja) | 2012-11-13 | 2012-11-13 | 皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014097000A JP2014097000A (ja) | 2014-05-29 |
JP6190105B2 true JP6190105B2 (ja) | 2017-08-30 |
Family
ID=50939627
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012249509A Active JP6190105B2 (ja) | 2012-11-13 | 2012-11-13 | 皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6190105B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014162748A (ja) * | 2013-02-25 | 2014-09-08 | Kagawa Univ | 皮膚の光老化抑制剤 |
EP3124620B1 (en) * | 2015-07-27 | 2018-08-08 | Chanel Parfums Beauté | Activators of uc.291 for use for improving skin barrier function and/or for preventing and/or attenuating skin ageing and/or for hydrating skin |
CN107095828B (zh) * | 2017-07-03 | 2020-08-11 | 四川省中医药科学院 | 一种具有皮肤屏障修复功能的日化用品组合物及其制备方法和用途 |
CN115243667A (zh) * | 2020-03-10 | 2022-10-25 | 三得利控股株式会社 | 皮肤屏障功能、4型胶原蛋白表达的下降抑制或改善用组合物以及相关物质的筛选方法 |
JP7370909B2 (ja) * | 2020-03-17 | 2023-10-30 | 日清食品ホールディングス株式会社 | ヒアルロン酸の調製方法及びヒアルロン酸の検出方法、並びにこれらのキット |
JP7395637B2 (ja) * | 2022-03-28 | 2023-12-11 | 株式会社ナリス化粧品 | ヒアルロニダーゼ阻害剤 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4768238B2 (ja) * | 2004-07-01 | 2011-09-07 | 丸善製薬株式会社 | プロフィラグリンmRNA発現促進剤 |
JP2009500394A (ja) * | 2005-07-08 | 2009-01-08 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | パーソナルケア組成物及び哺乳類の皮膚と毛髪を美化する方法 |
-
2012
- 2012-11-13 JP JP2012249509A patent/JP6190105B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2014097000A (ja) | 2014-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6190105B2 (ja) | 皮膚バリア機能改善剤のスクリーニング方法 | |
JP5085321B2 (ja) | 皮膚外用剤 | |
JP5108025B2 (ja) | ラン科植物から得られる抽出物およびその製造方法、ならびにラン科植物から得られる抽出物を含有する皮膚外用剤 | |
KR101967615B1 (ko) | 피부 외용제 | |
JP5683134B2 (ja) | 皮膚外用剤 | |
US20120195923A1 (en) | Use of skin care compositions comprising laminariacea extract for treatment of skin aging signs | |
JP7033160B2 (ja) | ビタミンd様作用剤 | |
CN113116755A (zh) | 一种促渗透的护肤组合物及其制备方法和应用 | |
WO2014182917A1 (en) | Formulations and methods for improving skin conditions | |
CN110946784A (zh) | 一种具有提升皮肤屏障功能、加强皮肤健康的护肤组合物 | |
US20130183257A1 (en) | Compositions and methods for improving skin appearance | |
JPH06128138A (ja) | 化粧料 | |
EP2092934A1 (en) | Ceramide synthesis accelerators, cosmetic preparation, skin preparation for external use, method of preventing aging, and method of diminishing wrinkle | |
EP2986983B1 (fr) | Utilisation de biomarqueurs de la barrière pour l'évaluation de l'efficacité d'actifs | |
JP4869751B2 (ja) | サンバーンセル形成抑制剤及びdna損傷修復促進剤 | |
EP2941254B1 (en) | Agent for sedating response to external stimulation in skin and method for sedating that response technical field | |
JP7212410B2 (ja) | ガラクトオリゴ糖、又はガラクトオリゴ糖及びコラーゲントリペプチドを含む免疫機能改善及び皮膚状態改善用の機能性食品組成物及び化粧料組成物 | |
CN108542803B (zh) | 一种防晒剂及其制备工艺 | |
EP2935199B1 (en) | Esters of glycyrrhetinic acid, preparation and cosmetic applications thereof | |
JP3235922B2 (ja) | 化粧料 | |
JP2006241095A (ja) | フィラグリン合成促進剤および紫外線傷害緩和剤 | |
JP5918168B2 (ja) | β−グルコセレブロシダーゼ活性増強剤 | |
JP2014167058A (ja) | 多糖体,皮膚バリア機能改善剤及び皮膚保湿剤 | |
JP5455248B2 (ja) | 保湿作用を有する皮膚外用剤 | |
EP3134086A2 (en) | Composition for topic use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150917 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160628 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160826 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170302 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170801 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170804 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6190105 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |