JP5995643B2 - 酸性化合物の検出方法 - Google Patents

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Description

本発明は、酸性化合物の検出方法に係り、特に、質量分析計を用いた、塩基性残基を含まない酸性化合物の検出方法に関する。
リン酸化合物や有機酸に代表される酸性化合物は解糖系の中間体として生体内のエネルギー代謝を理解するために重要であるが、生体には微量しか存在しない酸性化合物も存在する。そのため、酸性化合物を高感度に検出できる分析手法が望まれている。塩基性残基を含まない酸性化合物を高感度に検出したい場合は、質量分析計（ＭＳ）にて、［Ｍ−Ｈ］−のネガティブモードでの検出が一般的である。
例えば、非特許文献１では、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）に飛行時間型質量分析計（ＴＯＦ−ＭＳ）を接続し、［Ｍ−Ｈ］−イオンとして検出している。又、非特許文献２では、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）に三連四重極質量分析計（ＱｑＱＭＳ）を接続し、前駆イオン（プリカーサーイオンとも称する）を［Ｍ−Ｈ］−イオンとして検出している。更に非特許文献３では、炭酸アンモニウムを含む溶媒中の塩基性残基を含まない酸性化合物をポジティブモードで検出しているが、ネガティブモードの方が感度が良いという結果になっている。
又、質量分析計により構造異性体を分離する際は、タンデム質量分析計を用いて前駆イオンを開裂させ生成イオン（プロダクトイオンとも称する）の違いにより区別するが、特にリン酸化合物をネガティブモードで検出する場合、主要な生成イオンはリン酸イオンであることが多く、異性体の区別が難しい。
Soga T et al., Anal Chem. 2009 Aug 1;81(15):6165-74. Kato H et al., J Biosci Bioeng. 2012 May;113(5):665-73. Pluskal T et al., Mol Biosyst. 2010 Jan;6(1):182-98.
前述の手法を用いても非検出の物質は存在するため、高感度な分析手法が望まれている。
そこで、本発明では、質量分析計を用いて、塩基性残基を含まない酸性化合物を高感度に検出することを課題としている。
本発明は、酸性残基を有しかつ塩基性残基を含まない酸性化合物を、ギ酸、酢酸もしくは酪酸及び次に示す塩基を含んだ溶媒に溶解し、質量分析計を用いてポジティブモードで検出することを特徴とする酸性化合物の検出方法により、前記課題を解決したものである。
ここで、質量分析計にて、プロトン付加もしくはプロトン付加した上での脱水もしくは次に示すイオンが付加した酸性化合物を生成させる段階と、
生成したイオンを質量分析計で検出する段階と、の各工程を含むことができる。
又、検出する酸性化合物を、塩基性残基を含まないリン酸化合物とすることができる。
又、検出する酸性化合物を、塩基性残基を含まない有機酸とすることができる。
又、検出する酸性化合物を、塩基性残基を含まない硫酸化合物とすることができる。
又、前記質量分析計をタンデム質量分析計とし、前記生成したイオンを前駆イオンとすることにより、前記酸性化合物を検出することができる。
又、ネガティブモードでは検出されないポジティブモード特有の生成イオンを用いて定量することができる。
又、前記リン酸化合物を、2-Phosphoglyceric acid、2,3-Bisphosphoglyceric acid、3-Phosphoglyceric acid、6-Phosphogluconic acid、Dihydroxyacetone phosphate、Erythrose 4-phosphate、Fructose 1-phosphate、Fructose 6-phosphate、Fructose 1,6-bisphosphate、Galactose 1-phosphate、Glucose 1-phosphate、Glucose 6-phosphate、Glyceraldehyde 3-phosphate、Glycerol 3-phosphate、Mannose 1-phosphate、Mannose 6-phosphate、Phosphoenolpyruvic acid、Phosphoribosyl pyrophosphate、Ribose 5-phosphate、Ribose 1-phosphate、Ribulose 5-phosphate、Sedoheptulose 7-phosphate、Xylulose 5-phosphateの少なくともいずれかとすることができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、2-Phosphoglyceric acidの生成イオンとしてm/z141±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、2,3-Bisphosphoglyceric acidの生成イオンとしてm/z277±0.5又はm/z259±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、3-Phosphoglyceric acidの生成イオンとしてm/z141±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、6-Phosphogluconic acidの生成イオンとしてm/z259±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Dihydroxyacetone phosphateの生成イオンとしてm/z171±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Erythrose 4-phosphateの生成イオンとしてm/z99±0.5又はm/z85±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Fructose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z145±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Fructose 6-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z109±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Fructose 1,6-bisphosphateの生成イオンとしてm/z323±0.5又はm/z207±0.5、m/z127±0.5、m/z109±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Galactose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z261±0.5又はm/z116±0.5、m/z99±0.5、m/z91±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Glucose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z261±0.5又はm/z116±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Glucose 6-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z127±0.5、m/z109±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Glyceraldehyde 3-phosphateの生成イオンとしてm/z171±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Glycerol 3-phosphateの生成イオンとしてm/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Mannose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z163±0.5又はm/z145±0.5、m/z85±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Mannose 6-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z109±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Phosphoenolpyruvic acidの生成イオンとしてm/z169±0.5又はm/z151±0.5、m/z43±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Phosphoribosyl pyrophosphateの生成イオンとしてm/z169±0.5又はm/z151±0.5、m/z43±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Ribose 5-phosphateの生成イオンとしてm/z97±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Ribose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z133±0.5又はm/z116±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Ribulose 5-phosphateの生成イオンとしてm/z231±0.5又はm/z133±0.5、m/z115±0.5、m/z97±0.5、m/z73±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Sedoheptulose 7-phosphateの生成イオンとしてm/z273±0.5又はm/z219±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Xylulose 5-phosphateの生成イオンとしてm/z231±0.5又はm/z133±0.5、m/z115±0.5、m/z97±0.5、m/z55±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記有機酸を、3-Hydroxybutyric acid又はGluconic acid、Mevalonic acidとすることができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、3-Hydroxybutyric acidの生成イオンとしてm/z87±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Gluconic acidの生成イオンとしてm/z179±0.5又はm/z133±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Mevalonic acidの生成イオンとしてm/z113±0.5又はm/z71±0.5、m/z59±0.5を選択し、検出することができる。
又、前記硫酸化合物を、Campher 10-sulfonic acidとすることができる。
又、前記タンデム質量分析計を用いて、Campher 10-sulfonic acidの生成イオンとしてm/z233±0.5を選択し、検出することができる。
塩基性残基を含まない酸性化合物を質量分析計で検出する際、一般的には、［Ｍ−Ｈ］−イオンなどのネガティブイオンとして検出するが、本発明では、［Ｍ＋ＮＨ４］＋などポジティブイオンを付加したので、塩基性残基を含まない酸性化合物のポジティブモードによる検出が可能となる。この際、ネガティブイオンとして検出するよりも、高感度に検出できる。更に、ポジティブモードで高感度に検出可能になったことにより、多様な生成イオンを検出することができる。
本発明を実施するためのエレクトロスプレーイオン源を装着したタンデム質量分析計の基本的な構成を示す図 本発明の実施形態における処理手順を示すフローチャート ネガティブモードにおけるGlucose 6-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ネガティブモードにおけるFructose 6-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ネガティブモードにおけるRibose 5-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ネガティブモードにおけるRibulose 5-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ポジティブモードにおけるGlucose 6-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ポジティブモードにおけるFructose 6-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ポジティブモードにおけるRibose 5-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図 ポジティブモードにおけるRibulose 5-phosphateの生成イオンのマススペクトルを示す図
以下、図面を参照して、本発明の実施形態を詳細に説明する。
本発明を実施するためのエレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）を装着したタンデム質量分析計（ＣＥ／ＭＳ／ＭＳ）の基本的な構成を図１に示す。図において、１０はキャピラリー電気泳動（ＣＥ）装置、１２は、エレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）、１４は、該ＥＳＩ１２でイオン化した様々なイオンから特定の質量の試料イオン（前駆イオン）を選択するための第１質量分離装置としての質量分析計（１段目のＭＳ）、１６は、前駆イオンを衝突させ壊して衝突誘起解離させ、生成イオンとするための衝突室、１８は、生成イオンの中から特定のイオンを検出するための第２質量分離装置としての質量分析計（２段目のＭＳ）、２０は記録系である。
本実施形態においては、図２に示す如く、まず、ステップ１００で、ギ酸、酢酸もしくは酪酸及び次に示す塩基を含んだ溶媒に酸性化合物を溶解し、
次いで、ステップ１１０で、前記ＥＳＩ１２にて、プロトン付加もしくは次に示すイオンが付加した酸性化合物を生成させ、
次いで、ステップ１２０で、生成したイオンを前駆イオンとして質量分析計１４、１８を用いてポジティブモードで検出する。
以下の分析条件で多重反応モニタリング（ＭＲＭ）により酸性化合物の測定を行い、検出限界を求めた。それぞれの酸性化合物について0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100μmol/Lの標準溶液を測定した。検出限界はシグナルノイズ比が３と定義し、シグナルノイズ比が３以上得られた最低濃度の標準溶液のシグナルノイズ比から検出限界を計算した。
キャピラリー電気泳動（ＣＥ）分析条件
キャピラリー電気泳動（ＣＥ）装置：Agilent社1600 CE System
キャピラリー：フューズドシリカキャピラリー（内径50μm、外径350μm、全長
80cm）
キャピラリー温度：20℃
緩衝液：50 mmol/L酢酸アンモニウム pH8.5
印加電圧：＋30 kV
試料注入：加圧法（50mbar、25秒間）
三連四重極質量分析計（ＱｑＱＭＳ）分析条件
ポジティブモード
質量分析計（ＭＳ）：Agilent社6460 LC/MS Triple Quad
イオン化電圧：4 kV
乾燥ガス：窒素 温度300℃ 7 L/min
ネブライザー圧力：7 psig
シース液：50％メタノール水溶液 10 μL/min
それぞれの化合物におけるポジティブモードのＭＲＭの前駆イオンと生成イオン及び検出限界は表１の如くであった。
比較例としてネガティブモードのＭＲＭにおける検出限界を示す。ＣＥの分析条件は実施例１と同じであり、ＱｑＱＭＳの分析条件は次に示す。
ＱｑＱＭＳ分析条件
ネガティブモード
ＭＳ：Agilent社6460 LC/MS Triple Quad
イオン化電圧：-3.5 kV
乾燥ガス：窒素 温度300℃ 7 L/min
ネブライザー圧力：7 psig
シース液：50％メタノール水溶液 10 μL/min
それぞれの化合物におけるネガティブモードのＭＲＭの前駆イオンと生成イオンを表２に示す。
検出限界の比較を表３に示す。
検出限界はネガティブモードで測定した場合と比較し、ポジティブモードで低くなっており、ポジティブモードで感度が改善していることが示されている。その比も大半が10倍以上であり、ポジティブモードで測定することにより大半の酸性化合物で10倍以上感度が改善している。
以下の分析条件で酸性化合物の測定を行い、検出限界を求めた。それぞれの酸性化合物について0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100μmol/Lの標準溶液を測定した。検出限界はシグナルノイズ比が３と定義し、シグナルノイズ比が３以上得られた最低濃度の標準溶液のシグナルノイズ比から検出限界を計算した。ＣＥの分析条件は実施例１と同じであり、飛行時間型質量分析計（ＴＯＦ−ＭＳ）の分析条件は次に示す。
ＴＯＦ−ＭＳ分析条件
ポジティブモード
ＭＳ：Agilent社1969A LC/MSD TOF
イオン化電圧：4 kV
乾燥ガス：窒素 温度300℃ 7 L/min
ネブライザー圧力：5 psig
シース液：50％メタノール水溶液 10 μL/min
フラグメンター電圧：125V
スキマー電圧：50V
OCT RFV：245V
比較例としてネガティブモードのＭＲＭにおける検出限界を求めた。ＣＥの分析条件は実施例１と同じであり、ＴＯＦ−ＭＳの分析条件は次に示す。
ＴＯＦ−ＭＳ分析条件
ネガティブモード
ＭＳ：Agilent社1969A LC/MSD TOF
イオン化電圧：-3.5 kV
乾燥ガス：窒素 温度300℃ 7 L/min
ネブライザー圧力：5 psig
シース液：50％メタノール水溶液 10 μL/min
フラグメンター電圧：125V
スキマー電圧：50V
OCT RFV：245V
検出限界の比較を表４に示す。
検出限界はネガティブモードで測定した場合と比較し、ポジティブモードで低くなっており、ポジティブモードで感度が改善していることが示されている。
多様な生成イオンが得られる例としてGlucose 6-phosphate及びFructose 6-phosphate、Ribose 5-phosphate、Ribulose 5-phosphateの生成イオンを示す。キャピラリー電気泳動（ＣＥ）の分析条件は実施例１と同じであり、三連四重極質量分析計（ＱｑＱＭＳ）の分析条件は下記に示す。
三連四重極質量分析計（ＱｑＱＭＳ）分析条件
ポジティブモード
ＭＳ：Agilent社6460 LC/MS Triple Quad
イオン化電圧：4kV
乾燥ガス：窒素 温度300℃ 7 L/min
ネブライザー圧力：7 psig
シース液：50％メタノール水溶液 10 μL/min
生成イオンスキャン条件 m/z 20-300
前駆イオン
・Glucose 6-phosphate m/z 278 衝突エナジー 5V
・Fructose 6-phosphate m/z 278 衝突エナジー 5V
・Ribose 5-phosphate m/z 248 衝突エナジー 5V
・Ribulose 5-phosphate m/z 248 衝突エナジー 5V
ネガティブモード
ＭＳ：Agilent社6460 LC/MS Triple Quad
イオン化電圧：-3.5 kV
乾燥ガス：窒素 温度300℃ 7 L/min
ネブライザー圧力：7 psig
シース液：50％メタノール水溶液 10 μL/min
生成イオンスキャン条件 m/z 20-300
前駆イオン
・Glucose 6-phosphate m/z 259 衝突エナジー 15V
・Fructose 6-phosphate m/z 259 衝突エナジー 15V
・Ribose 5-phosphate m/z 229 衝突エナジー 15V
・Ribulose 5-phosphate m/z 229 衝突エナジー 15V
ネガティブモードでの主要な生成イオンは、図３乃至図６に例示する如く、全ての化合物においてm/z 97（リン酸）もしくは79（リン酸の脱水物）であるのに対し、ポジティブモードでは、Glucose 6-phoshateでは図７に示す如くm/z 127 、Fructose 6-phosphateでは図８に示す如くm/z 109、Ribose 5-phosphateでは図９に示す如くm/z 97、Ribulose 5-phosphateでは図１０に示す如くm/z 133, 115, 97と多様なイオンが得られた。又、Glucose 6-phosphateおよびFructose 6-phosphate、Ribose 5-phosphate及びRibulose 5-phosphateはそれぞれ構造異性体であり、ネガティブモードに比べ構造異性体を選択的に検出できるといえる。
本発明は、ＭＳ単体によるインフュージョン分析や、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）やＣＥを接続したＭＳに対しても適用可能である。
１０…キャピラリー電気泳動（ＣＥ）装置
１２…エレクトロスプレーイオン源（ＥＳＩ）
１４、１８…質量分析計（ＭＳ）
１６…衝突室
２０…記録系

Claims (37)

  1. 酸性残基を有しかつ塩基性残基を含まない酸性化合物を、ギ酸、酢酸もしくは酪酸及び次に示す塩基を含んだ溶媒に溶解し、質量分析計を用いてポジティブモードで検出することを特徴とする酸性化合物の検出方法。
  2. 質量分析計にて、プロトン付加もしくはプロトン付加した上での脱水もしくは次に示すイオンが付加した酸性化合物を生成させる段階と、
    生成したイオンを質量分析計で検出する段階と、
    の各工程を含むことを特徴とする請求項１に記載の酸性化合物の検出方法。
  3. 検出する酸性化合物が、塩基性残基を含まないリン酸化合物であることを特徴とする請求項１又は２に記載の酸性化合物の検出方法。
  4. 検出する酸性化合物が、塩基性残基を含まない有機酸であることを特徴とする請求項１又は２に記載の酸性化合物の検出方法。
  5. 検出する酸性化合物が、塩基性残基を含まない硫酸化合物であることを特徴とする請求項１又は２に記載の酸性化合物の検出方法。
  6. 前記質量分析計がタンデム質量分析計であり、前記生成したイオンを前駆イオンとすることにより、前記酸性化合物を検出することを特徴とする請求項２に記載の酸性化合物の検出方法。
  7. ネガティブモードでは検出されないポジティブモード特有の生成イオンを用いて定量することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  8. 前記リン酸化合物が、2-Phosphoglyceric acid、2,3-Bisphosphoglyceric acid、3-Phosphoglyceric acid、6-Phosphogluconic acid、Dihydroxyacetone phosphate、Erythrose 4-phosphate、Fructose 1-phosphate、Fructose 6-phosphate、Fructose 1,6-bisphosphate、Galactose 1-phosphate、Glucose 1-phosphate、Glucose 6-phosphate、Glyceraldehyde 3-phosphate、Glycerol 3-phosphate、Mannose 1-phosphate、Mannose 6-phosphate、Phosphoenolpyruvic acid、Phosphoribosyl pyrophosphate、Ribose 5-phosphate、Ribose 1-phosphate、Ribulose 5-phosphate、Sedoheptulose 7-phosphate、Xylulose 5-phosphateの少なくともいずれかであることを特徴とする請求項３に記載の酸性化合物の検出方法。
  9. 前記タンデム質量分析計を用いて、2-Phosphoglyceric acidの生成イオンとしてm/z141±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  10. 前記タンデム質量分析計を用いて、2,3-Bisphosphoglyceric acidの生成イオンとしてm/z277±0.5又はm/z259±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  11. 前記タンデム質量分析計を用いて、3-Phosphoglyceric acidの生成イオンとしてm/z141±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  12. 前記タンデム質量分析計を用いて、6-Phosphogluconic acidの生成イオンとしてm/z259±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  13. 前記タンデム質量分析計を用いて、Dihydroxyacetone phosphateの生成イオンとしてm/z171±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  14. 前記タンデム質量分析計を用いて、Erythrose 4-phosphateの生成イオンとしてm/z99±0.5又はm/z85±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  15. 前記タンデム質量分析計を用いて、Fructose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z145±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  16. 前記タンデム質量分析計を用いて、Fructose 6-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z109±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  17. 前記タンデム質量分析計を用いて、Fructose 1,6-bisphosphateの生成イオンとしてm/z323±0.5又はm/z207±0.5、m/z127±0.5、m/z109±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  18. 前記タンデム質量分析計を用いて、Galactose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z261±0.5又はm/z116±0.5、m/z99±0.5、m/z91±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  19. 前記タンデム質量分析計を用いて、Glucose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z261±0.5又はm/z116±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  20. 前記タンデム質量分析計を用いて、Glucose 6-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z127±0.5、m/z109±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  21. 前記タンデム質量分析計を用いて、Glyceraldehyde 3-phosphateの生成イオンとしてm/z171±0.5又はm/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  22. 前記タンデム質量分析計を用いて、Glycerol 3-phosphateの生成イオンとしてm/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  23. 前記タンデム質量分析計を用いて、Mannose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z163±0.5又はm/z145±0.5、m/z85±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  24. 前記タンデム質量分析計を用いて、Mannose 6-phosphateの生成イオンとしてm/z243±0.5又はm/z109±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  25. 前記タンデム質量分析計を用いて、Phosphoenolpyruvic acidの生成イオンとしてm/z169±0.5又はm/z151±0.5、m/z43±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  26. 前記タンデム質量分析計を用いて、Phosphoribosyl pyrophosphateの生成イオンとしてm/z169±0.5又はm/z151±0.5、m/z43±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  27. 前記タンデム質量分析計を用いて、Ribose 5-phosphateの生成イオンとしてm/z97±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  28. 前記タンデム質量分析計を用いて、Ribose 1-phosphateの生成イオンとしてm/z133±0.5又はm/z116±0.5、m/z99±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  29. 前記タンデム質量分析計を用いて、Ribulose 5-phosphateの生成イオンとしてm/z231±0.5又はm/z133±0.5、m/z115±0.5、m/z97±0.5、m/z73±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  30. 前記タンデム質量分析計を用いて、Sedoheptulose 7-phosphateの生成イオンとしてm/z273±0.5又はm/z219±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  31. 前記タンデム質量分析計を用いて、Xylulose 5-phosphateの生成イオンとしてm/z231±0.5又はm/z133±0.5、m/z115±0.5、m/z97±0.5、m/z55±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  32. 前記有機酸が、3-Hydroxybutyric acid又はGluconic acid、Mevalonic acidであることを特徴とする請求項４に記載の酸性化合物の検出方法。
  33. 前記タンデム質量分析計を用いて、3-Hydroxybutyric acidの生成イオンとしてm/z87±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  34. 前記タンデム質量分析計を用いて、Gluconic acidの生成イオンとしてm/z179±0.5又はm/z133±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  35. 前記タンデム質量分析計を用いて、Mevalonic acidの生成イオンとしてm/z113±0.5又はm/z71±0.5、m/z59±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
  36. 前記硫酸化合物が、Campher 10-sulfonic acidであることを特徴とする請求項５に記載の酸性化合物の検出方法。
  37. 前記タンデム質量分析計を用いて、Campher 10-sulfonic acidの生成イオンとしてm/z233±0.5を選択し、検出することを特徴とする請求項６に記載の酸性化合物の検出方法。
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