JP5967607B2 - Yeast and method for producing fermented food and drink - Google Patents

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Description

本発明は、酵母、おび発酵飲食品の製造方法に係り、特に、ミツバチから採取された酵母、おび発酵飲食品の製造方法に関する。 The present invention, yeast, relates to a method of manufacturing a your good beauty fermented foods and beverages, in particular, yeast that has been collected from the bees to a process for the preparation of your good beauty fermented foods and drinks.

現在、食品に対する消費者のニーズは多様化しており、各消費者の食品への購買意欲は、味、香り、外観等に左右されるだけでなく、材料、製造工程、さらには、食品の生み出された背景・経緯によっても大きく左右される。
このことは、ワイン、ビール、パンをはじめとする各種の発酵飲食品ついても例外ではなく、消費者の多様化したニーズを満たすために様々な発酵飲食品が開発されている。
Currently, consumer needs for food are diversified, and each consumer's willingness to purchase food is not only influenced by taste, fragrance, appearance, etc., but also the materials, manufacturing process, and food production. It depends greatly on the background and background.
This is not an exception for various fermented foods and drinks including wine, beer and bread, and various fermented foods and drinks have been developed to satisfy the diversified needs of consumers.

ここで、発酵飲食品の多様化を図る1つの方法として、発酵飲食品の発酵を行う酵母について従来使用されてきたものとは異なる新規な酵母を使用するという方法が存在する。
この方法により発酵飲食品の多様化を図る技術に関して、以下のような様々な技術が提案されている。
Here, as one method for diversifying fermented foods and drinks, there is a method of using new yeasts different from those conventionally used for yeasts that ferment fermented foods and drinks.
The following various techniques have been proposed for techniques for diversifying fermented foods and drinks by this method.

例えば、特許文献1には、桜の花びらより採取された酵母(受託番号:FERM P−18560)、および、当該酵母を用いて製造される発酵飲食品が提案されている。
また、特許文献2には、ナラノヤエザクラの花びらより採取された酵母(受託番号:NITE P−684)、および、当該酵母を用いて製造される発酵飲食品が提案されている。
また、特許文献3には、梅の花から採取された酵母(受託番号:NITE P−1056)、および、当該酵母を用いて製造される発酵飲食品が提案されている。
For example, Patent Document 1 proposes a yeast (accession number: FERM P-18560) collected from cherry blossom petals and a fermented food or drink produced using the yeast.
Patent Document 2 proposes a yeast (accession number: NITE P-684) collected from petals of Naranoya ezakura and a fermented food or drink produced using the yeast.
Patent Document 3 proposes yeast collected from plum flowers (Accession Number: NITE P-1056) and fermented foods and beverages produced using the yeast.

特許第3846623号公報Japanese Patent No. 3846623 特許第4601015号公報Japanese Patent No. 4601015 特許第4899138号公報Japanese Patent No. 4899138

特許文献1〜3に係る技術は、それぞれ、桜や梅より採取された酵母を用いる技術であり、桜や梅は鑑賞用の植物として人気が高いことから、これらの酵母由来の発酵飲食品は、消費者の購買意欲を高められると考えられる。
ここで、桜や梅といった植物とは大きく異なるが、古来より、様々な効能・効果が謳われてきた蜂蜜(ミツバチにより集蜜された蜜)から酵母を採取することができれば、当該酵母由来の発酵飲食品を製造することにより、消費者の多様化したニーズをさらに満たすことができると考えられる。
The technologies according to Patent Documents 1 to 3 are technologies using yeasts collected from cherry blossoms and plums, respectively. Since cherry blossoms and plums are popular as ornamental plants, fermented foods and beverages derived from these yeasts are It is thought that consumers' willingness to purchase can be enhanced.
Here, it is very different from plants such as cherry blossoms and plums, but if it can be collected from honey (honey collected by bees) that has been praised for various effects since ancient times, It is considered that the diversified needs of consumers can be further satisfied by producing fermented foods and drinks.

そこで、本発明は、新規な酵母、おび発酵飲食品の製造方法を提供することを課題とする。 Therefore, an object of the present invention to provide novel yeast, a method of manufacturing your good beauty fermented foods and drinks.

蜂蜜は、訪花した蜂が集蜜し、集蜜された蜜が蜂の巣内で加工、貯蔵されることで製造される。詳細には、蜂により集蜜された蜜が、蜂の体内(口器等)でグルコース(ブドウ糖)やフルクトース(果糖)に分解されるとともに、蜂の巣内による水分発散作業(羽での扇風等)により、糖度の高い蜂蜜が製造される。   Honey is produced by collecting the bees that have visited, and processing and storing the collected honey in the beehive. Specifically, the nectar collected by the bees is broken down into glucose (glucose) and fructose (fructose) in the bee's body (mouth etc.), and the moisture is released in the beehive (fans with feathers, etc.) ) Produces honey with a high sugar content.

ここで、蜂蜜は糖度が非常に高いことから、当該蜂蜜中に存在する酵母は高い浸透圧により大半が死滅してしまう。特に、発酵飲食品の製造に用いられる有効な酵母であるサッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae:以下、適宜、S.cerevisiaeという)は生存することが非常に難しい。よって、発明者らは、発酵飲食品の製造に用いられる有効な酵母を蜂蜜から分離するのは極めて困難であると判断した。
発明者らは鋭意研究した結果、糖度の高い蜂蜜から酵母を採取するよりも、糖度が高くなっていない状態の蜜を有するミツバチから酵母を採取するという新たな発想に基づき、本発明を完成するに至った。
Here, since honey has a very high sugar content, most of the yeast present in the honey is killed by high osmotic pressure. In particular, Saccharomyces cerevisiae (hereinafter referred to as S. cerevisiae), which is an effective yeast used in the production of fermented foods and drinks, is very difficult to survive. Therefore, the inventors determined that it is extremely difficult to separate effective yeast used for the production of fermented food and drink from honey.
As a result of intensive research, the inventors have completed the present invention based on a new idea of collecting yeast from bees having nectar in a state where sugar content is not high rather than collecting yeast from honey having high sugar content. It came to.

すなわち、本発明に係る酵母は、ニホンミツバチ由来であって、サッカロミセス セレビシエに属するSBC5910(受託番号:NITE P−1376)であることを特徴とする。そして、本発明に係る発酵飲食品の製造方法は、前記酵母を用いて発酵する発酵工程を含むことを特徴とする。
このように、本発明に係る酵母は、新規な酵母であることから、当該酵母由来の発酵飲食品を製造することにより、消費者の多様化したニーズを満たすことができる。
また、本発明に係る発酵飲食品の製造方法は、前記酵母を用いて製造されることにより、燻製香(グアイヤコール)を有するから、従来のものとは異なる独特の香りを発酵飲食品に付与することができ、商品の差別化を図ることができる。
That is, the yeast according to the present invention is SBC5910 (accession number: NITE P-1376) which is derived from Japanese bees and belongs to Saccharomyces cerevisiae. And the manufacturing method of the fermented food / beverage products which concerns on this invention is characterized by including the fermentation process fermented using the said yeast.
Thus, since the yeast according to the present invention is a novel yeast, the diversified needs of consumers can be satisfied by producing fermented foods and beverages derived from the yeast.
Moreover, since the manufacturing method of the fermented food / beverage products which concerns on this invention has a smoked incense (guaiacol) by being manufactured using the said yeast, it gives the fermented food / beverage products a unique fragrance different from the conventional thing. And product differentiation.

本発明に係る酵母分離方法は、ミツバチから酵母を分離する酵母分離方法であって、エタノールと炭素源とを含む培地を用いて、嫌気下において酵母を集積培養する集積培養工程を含むことを特徴とする。
このように、本発明に係る酵母分離方法は、前記集積培養工程を含むことから、ミツバチから所望の酵母の分離を適切に行うことができる。
The yeast separation method according to the present invention is a yeast separation method for separating yeast from bees, and includes an accumulation culture step in which yeast is accumulated and cultured under anaerobic conditions using a medium containing ethanol and a carbon source. And
Thus, since the yeast isolation | separation method which concerns on this invention includes the said accumulation | cultivation process, it can isolate | separate a desired yeast from a bee appropriately.

また、本発明に係る酵母分離方法は、前記集積培養工程の後に、リジンを唯一の窒素源とする完全合成培地であるSDK寒天培地と、マルトースを唯一の炭素源とする完全合成培地であるSM寒天培地と、を用いて、リジン資化性を有さないとともにマルトース資化性を有する酵母を選抜する選抜工程を含むことを特徴とする。
このように、本発明に係る酵母分離方法は、前記選抜工程を含むことから、リジン資化性を有さないとともにマルトース資化性を有する所望の酵母の分離をさらに適切に行うことができる。
加えて、本発明に係る酵母分離方法は、SDK寒天培地、SM寒天培地という非常に作成し易い培地を使用することから、ミツバチから所望の酵母を簡便に分離することができる。
Moreover, the yeast separation method according to the present invention includes an SDK agar medium, which is a complete synthetic medium containing lysine as the only nitrogen source, and an SM, which is a complete synthetic medium containing maltose as the only carbon source, after the enrichment culture step. And a selection step of selecting a yeast having no lysine assimilation and maltose assimilation using an agar medium.
Thus, since the yeast separation method according to the present invention includes the selection step, it is possible to more appropriately perform separation of a desired yeast that does not have lysine utilization and has maltose utilization.
In addition, since the yeast separation method according to the present invention uses an easily prepared medium such as an SDK agar medium or an SM agar medium, the desired yeast can be easily separated from the bees.

本発明に係る酵母作出方法は、前記酵母分離方法により分離した酵母を、マルトースに馴化させる馴化工程を含むことを特徴とする。
このように本発明に係る酵母作出方法は、酵母をマルトースに馴化させる馴化工程を含むことから、マルトース発酵性が高められた酵母を作出することができる。
The yeast production method according to the present invention is characterized by including a acclimation step of acclimating the yeast separated by the yeast separation method to maltose.
Thus, since the yeast production method according to the present invention includes an acclimatization step for acclimatizing yeast to maltose, it is possible to produce yeast with enhanced maltose fermentability.

本発明によれば、新規な酵母、おび発酵飲食品の製造方法を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide novel yeast, a method of manufacturing your good beauty fermented foods and drinks.

本発明に係る酵母分離方法のフローチャートである。It is a flowchart of the yeast separation method which concerns on this invention. 各種酵母の顕微鏡写真であって、(a)は、天然培地(YEPD寒天培地)において培養した後の各種酵母の顕微鏡写真、(b)は、胞子形成培地(KAc寒天培地)において培養した後の各種酵母の顕微鏡写真である。It is the microscope picture of various yeast, Comprising: (a) is the microscope picture of various yeast after culture | cultivating in a natural medium (YEPD agar medium), (b) is after culture | cultivating in a spore formation culture medium (KAc agar medium). It is a microscope picture of various yeast. 各種酵母の発酵試験(麦汁)の結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the fermentation test (wort) of various yeasts.

以下、本発明に係る酵母、この酵母を用いて製造される発酵飲食品、酵母分離方法、および、酵母作出方法を実施するための形態について説明する。   Hereinafter, the form for implementing the yeast concerning this invention, the fermented food / beverage products manufactured using this yeast, the yeast isolation | separation method, and the yeast production method is demonstrated.

[酵母]
本発明に係る酵母は、ミツバチから採取された新規な酵母であり、後記の分類学的特徴および生理学的特徴を有するS.cerevisiaeに属する菌株である。
[yeast]
The yeast according to the present invention is a novel yeast collected from bees and has the taxonomic and physiological characteristics described below. It is a strain belonging to cerevisiae.

(分類学的特徴)
本発明に係る酵母のrRNAをコードするDNAの塩基配列のうち、LSU(large subunit、26S)D2領域およびITS1(internal transcribed spacer 1)領域の塩基配列をキャピラリーシーケンサー(ABI3500)で解析し、BLAST検索で同定を行った結果、S.cerevisiaeと100%マッチングした。
よって、本発明に係る酵母は、S.cerevisiaeに属する酵母である。
(Taxonomic features)
Among the nucleotide sequences of the DNA encoding the yeast rRNA according to the present invention, the nucleotide sequences of the LSU (large subunit, 26S) D2 region and the ITS1 (internal transcribed spacer 1) region are analyzed with a capillary sequencer (ABI3500), and BLAST search is performed. As a result of identification in S. 100% match with cerevisiae.
Therefore, the yeast according to the present invention is S. aureus. It is a yeast belonging to cerevisiae.

本発明に係る酵母は、微生物の表示(識別の表示)を「SBC5910」として、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに、「受番号:NITE−1376」(寄託日:2012年6月14日)として受されている。 Yeast according to the present invention, the display of microorganisms (display of identification) as "SBC5910", the National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganisms Depositary Center, "consignment number: NITE P -1376" (date of deposit: 2012 has been entrusted as the year June 14, 2008).

(生理学的特徴)
本発明に係る酵母は、胞子形成能を有する。よって、本発明に係る酵母を使用して交配が可能であり、各発酵飲食品により適した優良株を作成することができる。
なお、図2(b)の一番右側の写真は、本発明に係る酵母を胞子形成培地で、25℃、5日間培養した状態の顕微鏡写真(対物×100、位相差)であるが、全ての酵母が胞子を形成していることがわかる。
(Physiological features)
The yeast according to the present invention has the ability to form spores. Therefore, mating is possible using the yeast according to the present invention, and excellent strains more suitable for each fermented food and drink can be created.
The rightmost photograph in FIG. 2 (b) is a photomicrograph (object x100, phase difference) of the yeast according to the present invention cultured in a spore-forming medium at 25 ° C. for 5 days. It can be seen that the yeasts form spores.

本発明に係る酵母は、発酵するとグアイヤコールを発するという特徴を有する。よって、本発明に係る酵母を用いて、例えば、麦芽発酵飲料を製造した場合、従来のものとは異なる独特の香りを麦芽発酵飲料に付与することができ、商品の差別化を図ることができる。
ただし、発酵飲食品の中には、本発明に係る酵母を用いて製造しても、グアイヤコールがほとんど感じられないものも存在する。
The yeast according to the present invention has a feature of producing guaiacol upon fermentation. Therefore, for example, when a malt fermented beverage is produced using the yeast according to the present invention, a unique aroma different from the conventional one can be imparted to the malt fermented beverage, and the product can be differentiated. .
However, some fermented foods and drinks have almost no guaiacol even if they are produced using the yeast according to the present invention.

本発明に係る酵母は、炭素源として、グルコース、マルトースを資化するという特徴を有する。よって、本発明に係る酵母は、グルコースを唯一の炭素源として生育することができるとともに、マルトースを唯一の炭素源として生育することができる。
一方、本発明に係る酵母は、リジンを資化しないという特徴を有する。よって、本発明に係る酵母は、リジンを唯一の窒素源として生育することができない。
The yeast according to the present invention is characterized by assimilating glucose and maltose as a carbon source. Therefore, the yeast according to the present invention can grow using glucose as the sole carbon source and can grow using maltose as the sole carbon source.
On the other hand, the yeast according to the present invention is characterized by not assimilating lysine. Therefore, the yeast according to the present invention cannot grow using lysine as a sole nitrogen source.

なお、本発明に係る酵母の前記生理学的特徴およびその他の生理学的特徴について、下面ビール酵母(Saccharomyces pastorianus:以下、適宜、S.pastorianusという)、および、上面ビール酵母(S.cerevisiae)と比較して下記表1に示す。
表1中の「+」は陽性を示し、「−」は陰性を示す。
Note that the physiological characteristics and other physiological characteristics of the yeast according to the present invention are compared with those of a lower brewer's yeast (Saccharomyces pastorianus: hereinafter referred to as S. pastorianus as appropriate) and an upper brewer's yeast (S. cerevisiae). Table 1 below shows.
In Table 1, “+” indicates positive, and “−” indicates negative.

[酵母を用いて製造される発酵飲食品]
本発明に係る発酵飲食品とは、本発明に係る酵母の発酵により製造された飲食品であり、例えば、ワイン、清酒、麦芽発酵飲料といった発酵飲料や、パンをはじめとする発酵食品を挙げることができる。
[Fermented food and drink manufactured using yeast]
The fermented food and drink according to the present invention is a food and drink manufactured by fermentation of the yeast according to the present invention, and examples include fermented drinks such as wine, sake, and malt fermented drinks, and fermented foods including bread. Can do.

なお、本発明に係る発酵飲食品の製造方法については、従来公知の各発酵飲食品の製造方法を用いればよい。
ただし、本発明に係る酵母は、マルトースに馴化し、マルトース発酵性を高めた後でも、マルトース発酵性が若干弱いため、マルトースが多く含まれている発酵対象を取り扱う際には、マルトースを分解する酵素(例えば、グルコアミラーゼ)を発酵工程前(または発酵工程中)に添加するのが好ましい。
In addition, about the manufacturing method of the fermented food / beverage products which concern on this invention, what is necessary is just to use the manufacturing method of each conventionally well-known fermented food / beverage products.
However, the yeast according to the present invention is apt to maltose, and even after increasing maltose fermentability, maltose fermentability is slightly weak, so when handling a fermentation object containing a lot of maltose, maltose is decomposed. It is preferred to add the enzyme (eg glucoamylase) before the fermentation process (or during the fermentation process).

[酵母分離方法]
本発明に係る酵母分離方法は、ミツバチから酵母を分離する酵母分離方法であって、エタノールと炭素源とを含む培地を用いて、嫌気下において酵母を集積培養する集積培養工程を含むことを特徴とする。
そして、本発明に係る酵母分離方法は、前記集積培養工程の後に、リジンを唯一の窒素源とする完全合成培地であるSDK寒天培地と、マルトースを唯一の炭素源とする完全合成培地であるSM寒天培地と、を用いて、リジン資化性を有さないとともにマルトース資化性を有する酵母を選抜する選抜工程を含むことが好ましい。
[Yeast separation method]
The yeast separation method according to the present invention is a yeast separation method for separating yeast from bees, and includes an accumulation culture step in which yeast is accumulated and cultured under anaerobic conditions using a medium containing ethanol and a carbon source. And
The yeast separation method according to the present invention includes an SDK agar medium, which is a complete synthetic medium containing lysine as a sole nitrogen source, and a SM, which is a complete synthetic medium containing maltose as a sole carbon source, after the enrichment culture step. It is preferable to include a selection step of selecting a yeast that does not have lysine utilization and has maltose utilization using an agar medium.

以下、図1のフローチャートを用いて、本発明に係る酵母分離方法を詳細に説明する。
(サンプリング)
サンプリングS1では、訪花から巣箱に帰還した蜂を、ピンセットで採取する。詳細には、東京都中央区銀座に設置されている巣箱に帰還したニホンミツバチ(Apis cerana japonica Rad)を採取する。
なお、蜂の採取場所については、前記場所に限定されない。
Hereinafter, the yeast separation method according to the present invention will be described in detail with reference to the flowchart of FIG.
(sampling)
In sampling S1, the bees that have returned to the nest box from visiting flowers are collected with tweezers. Specifically, Japanese bee (Apis cerana japonica Rad) that has returned to the nest box installed in Ginza, Chuo-ku, Tokyo is collected.
In addition, about the collection place of a bee, it is not limited to the said place.

(集積培養)
集積培養S2では、エタノールと炭素源とを含む液体培地に、サンプリングS1で採取した蜂を投入し、嫌気下において酵母を集積培養する(条件A)。この集積培養S2における培養温度は約25℃が好ましい。
なお、本発明における集積培養では、気泡の発生を確認するため、ダーラム管(ダーラム発酵管)を用いるのが好ましい。
(Aggregated culture)
In the enrichment culture S2, the bee collected in the sampling S1 is put into a liquid medium containing ethanol and a carbon source, and the yeast is enriched and cultured under anaerobic conditions (condition A). The culture temperature in the enrichment culture S2 is preferably about 25 ° C.
In addition, in the enrichment culture in the present invention, it is preferable to use a Durham tube (Durham fermentation tube) in order to confirm the generation of bubbles.

この集積培養S2の培地は、エタノールと2w/v%以上の炭素源(グルコース、マルトース、スクロースのうちの1種または2種以上)とを含むことが好ましく、2〜4v/v%のエタノールと2〜6w/v%の炭素源とを含むのがさらに好ましい。その他、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトン等を含んでもよい。   The culture medium of the enrichment culture S2 preferably contains ethanol and 2 w / v% or more of a carbon source (one or more of glucose, maltose, and sucrose), and 2 to 4 v / v% ethanol and More preferably, it contains 2 to 6% w / v carbon source. In addition, yeast extract, malt extract, peptone and the like may be included.

集積培養S2において、1週間以内に気泡が発生した場合は(Yes)、集積培養S4の処理に移行する。
一方、集積培養S2において、1週間経過しても気泡が発生しなかった場合は(No)、同じ条件(条件A)で、さらに1週間集積培養を行い、気泡の発生を確認する(集積培養S3)。
When bubbles are generated within one week in the enrichment culture S2 (Yes), the process proceeds to the enrichment culture S4.
On the other hand, in the enrichment culture S2, if no bubbles are generated even after one week has passed (No), the enrichment culture is further performed under the same conditions (condition A) for one week to confirm the occurrence of bubbles (accumulation culture). S3).

集積培養S3において、集積培養S2の開始時から起算して2週間以内に気泡が発生した場合は(Yes)、集積培養S4の処理に移行する。
一方、集積培養S3において、集積培養S2の開始時から起算して合計2週間経過しても気泡が発生しなかった場合は(No)、酵母の分離が失敗した(NG)と判断する。
In the enrichment culture S3, when bubbles are generated within 2 weeks from the start of the enrichment culture S2 (Yes), the process proceeds to the enrichment culture S4.
On the other hand, in the enrichment culture S3, when no bubbles are generated even after a total of 2 weeks from the start of the enrichment culture S2 (No), it is determined that the separation of the yeast has failed (NG).

集積培養S4では、集積培養S2の培地と異なる培地を使用する以外は、集積培養S2と同じ条件で酵母を集積培養する(条件B)。
この集積培養S4の培地は、4〜6v/v%のエタノールと6〜10w/v%の炭素源(グルコース、マルトース、スクロースのうちの1種または2種以上)とを含むことを特徴とする。そして、集積培養S4の培地は、集積培養S2の培地と比較して、エタノールおよび炭素源の含有量が高くなるように調製されているのが好ましい。その他、酵母エキス、麦芽エキス、ペプトン等を含んでもよい。
In the enrichment culture S4, yeast is enriched and cultured under the same conditions as the enrichment culture S2 except that a medium different from that of the enrichment culture S2 is used (condition B).
The culture medium of this enrichment culture S4 contains 4-6 v / v% ethanol and 6-10 w / v% carbon source (one or more of glucose, maltose, and sucrose). . And it is preferable that the culture medium of enrichment culture S4 is prepared so that content of ethanol and a carbon source may become high compared with the culture medium of enrichment culture S2. In addition, yeast extract, malt extract, peptone and the like may be included.

集積培養S4において、2週間以内に気泡が発生した場合は(Yes)、プレーティングS5の処理に移行する。
一方、集積培養S4において、2週間経過しても気泡が発生しなかった場合は(No)、酵母の分離が失敗した(NG)と判断する。
In the enrichment culture S4, when bubbles are generated within two weeks (Yes), the process proceeds to the plating S5.
On the other hand, in the enrichment culture S4, when no bubbles are generated even after 2 weeks (No), it is determined that the separation of the yeast has failed (NG).

なお、請求項における集積培養工程とは、集積培養S2の処理のみを行う工程(S2でYesの場合はS5に移行、Noの場合はNG)、集積培養S2およびS3の処理のみを行う工程(S2またはS3でYesの場合はS5に移行、S2でNoの場合はS3に移行、S3でNoの場合はNG)、集積培養S2およびS4の処理のみを行う工程(S2でYesの場合はS4に移行、S2でNoの場合はNG、S4でYesの場合はS5に移行、S4でNoの場合はNG)のいずれかであってもよいが、前記のとおり集積培養S2、S3、S4の処理を行う工程であれば、より好適に酵母を集積培養することができる。   In addition, the enrichment culture step in the claims is a step of performing only the treatment of the enrichment culture S2 (if S2 is Yes, the process proceeds to S5, if not, NG), a step of performing only the treatment of the enrichment cultures S2 and S3 ( If S2 or S3 is Yes, the process proceeds to S5, if S2 is No, the process proceeds to S3, and if S3 is No, NG), the process of performing only the processing of the enrichment cultures S2 and S4 (S4 in the case of Yes in S2) In the case of No in S2, it may be NG in the case of No, in S4 in the case of Yes, or in the case of No in S4, it may be NG), but as described above, the accumulation cultures S2, S3, S4 If it is the process of processing, yeast can be accumulated and cultured more suitably.

(プレーティング・観察)
プレーティングS5では、集積培養S4で得られた酵母をYEPD寒天培地で嫌気培養し、その後、培養した酵母を顕微鏡で観察する(観察S6)。
観察S6において、培養した酵母のコロニー形状や顕微鏡観察で、S.cerevisiaeの特徴を示した場合は(Yes)、選抜S7の処理に移行する。
一方、観察S6において、培養した酵母がS.cerevisiaeの特徴を示さなかった場合は(No)、酵母の分離が失敗した(NG)と判断する。
(Plating / observation)
In the plating S5, the yeast obtained in the enrichment culture S4 is anaerobically cultured on the YEPD agar medium, and then the cultured yeast is observed with a microscope (Observation S6).
In observation S6, the colony shape of the cultured yeast and the microscopic observation were obtained. When the characteristics of cerevisiae are indicated (Yes), the process proceeds to the selection S7.
On the other hand, in observation S6, the cultured yeast is S. cerevisiae. When the characteristics of cerevisiae are not shown (No), it is determined that the separation of the yeast has failed (NG).

(選抜)
選抜S7では、観察S6においてS.cerevisiaeである可能性が高い酵母から、リジン資化性を有さないとともにマルトース資化性を有する酵母を選抜する。
この選抜S7では、少なくとも、リジンを唯一の窒素源とする完全合成培地であるSDK寒天培地と、マルトースを唯一の炭素源とする完全合成培地であるSM寒天培地と、を用いるとともに、さらに、グルコースを唯一の炭素源とする完全合成培地であるSD寒天培地を用いるのが好ましい。
なお、SDK寒天培地は、SD寒天培地の窒素源をリジンに変更した培地であり、SM寒天培地は、SD寒天培地の炭素源をマルトースに変更した培地である。そして、完全合成培地とは、精製された化学薬品のみから調製可能な培地であり、組成が明確で培養の再現性が得やすい培地である。
(Selection)
In the selection S7, the S.P. A yeast that does not have lysine assimilation ability and has maltose assimilation ability is selected from yeasts that are highly likely to be cerevisiae.
In this selection S7, at least an SDK agar medium, which is a completely synthetic medium containing lysine as the only nitrogen source, and an SM agar medium, which is a fully synthetic medium containing maltose as the only carbon source, are used, and glucose It is preferable to use an SD agar medium, which is a completely synthetic medium containing as the only carbon source.
The SDK agar medium is a medium obtained by changing the nitrogen source of the SD agar medium to lysine, and the SM agar medium is a medium obtained by changing the carbon source of the SD agar medium to maltose. The completely synthetic medium is a medium that can be prepared only from purified chemicals, and is a medium that has a clear composition and is easy to obtain culture reproducibility.

詳細には、選抜S7では、SDK寒天培地、SD寒天培地、SM寒天培地にレプリカ培養を行い、SD寒天培地とSM寒天培地とで生育するとともに(SD+、SM+)、SDK寒天培地で生育しなかった(SDK−)酵母を選抜する。
選抜S7において、SD+、SM+、SDK−であった場合は(Yes)、シークエンスS8の処理に移行する。
一方、選抜S7において、SD−の場合は、SD+となるまで再度レプリカを行う。SD+の場合は、SM+またはSDK−のいずれかを満たさなかった場合(No)、酵母の分離が失敗した(NG)と判断する。
Specifically, in the selection S7, replica culture is performed on the SDK agar medium, the SD agar medium, and the SM agar medium, and it grows on the SD agar medium and the SM agar medium (SD +, SM +), but does not grow on the SDK agar medium. (SDK-) yeast is selected.
If it is SD +, SM +, SDK− in the selection S7 (Yes), the process proceeds to the sequence S8.
On the other hand, in the selection S7, in the case of SD-, the replica is performed again until it becomes SD +. In the case of SD +, when either SM + or SDK− is not satisfied (No), it is determined that the separation of the yeast has failed (NG).

(シークエンス)
シークエンスS8では、選抜S7で選抜した酵母のrRNAをコードするDNAの塩基配列を解析し、公知のS.cerevisiaeの塩基配列と比較する。
詳細には、シークエンスS8では、選抜S7で選抜した酵母のrRNAをコードするDNAの塩基配列のうち、例えば、LSU(large subunit、26S)D2領域およびITS1(internal transcribed spacer 1)領域の塩基配列をキャピラリーシーケンサー(ABI3500)で解析し、BLAST検索で同定を行い、S.cerevisiaeと99%以上マッチングするか否かを判断する。
(Sequence)
In the sequence S8, the nucleotide sequence of the DNA encoding the rRNA of the yeast selected in the selection S7 is analyzed. It is compared with the base sequence of cerevisiae.
Specifically, in the sequence S8, among the nucleotide sequences of DNAs encoding the yeast rRNA selected in the selection S7, for example, the nucleotide sequences of the LSU (large subunit, 26S) D2 region and the ITS1 (internal transferred spacer 1) region are used. Analysis with a capillary sequencer (ABI3500) and identification by BLAST search It is determined whether or not 99% or more matches with cerevisiae.

シークエンスS8において、S.cerevisiaeと99%以上マッチングした場合は(Yes)、候補株を取得することとなり(候補株取得S9)、酵母の分離を終了する(END)。
一方、シークエンスS8において、S.cerevisiaeとのマッチングが99%未満の場合は(No)、酵母の分離が失敗した(NG)と判断する。
In sequence S8, S.M. When 99% or more matches with cerevisiae (Yes), the candidate strain is acquired (candidate strain acquisition S9), and the yeast separation is terminated (END).
On the other hand, in sequence S8, S.M. When the matching with cerevisiae is less than 99% (No), it is determined that the separation of the yeast has failed (NG).

[酵母作出方法]
本発明に係る酵母作出方法は、前記分離方法により分離した酵母を、マルトースに馴化させる馴化工程を含むことを特徴とする。
馴化工程は、従来公知の酵母を馴化させる方法で行えば良く、例えば、マルトースを唯一の炭素源とする培地(2×YMM6)でマルトース資化性あるいは発酵性が向上するまで継代培養を実施する方法が挙げられる。
[Yeast production method]
The yeast production method according to the present invention is characterized in that it includes a habituation step for acclimating the yeast separated by the separation method to maltose.
The acclimatization process may be performed by a conventionally known method of acclimatizing yeast. For example, subculture is performed in a medium containing maltose as a sole carbon source (2 × YMM6) until maltose utilization or fermentability is improved. The method of doing is mentioned.

[本発明の効果等]
本発明に係る酵母分離方法によれば、ミツバチからS.cerevisiaeを適切に分離することができる。詳細には、ミツバチからS.cerevisiaeを分離する際に、擬陽性(ノイズ)となり易い真菌、例えば、Mucor、Zygosaccharomyces、Wickerhamomyces anomalus、Candida glabrata、Candida humilisを適切に除外することができる。
また、本発明に係る酵母分離方法によれば、使用する培地(SDK寒天培地、SM寒天培地)が非常に作成し易いことから、ミツバチからS.cerevisiaeを簡便に分離することができる。
[Effects of the present invention]
According to the method for separating yeast according to the present invention, S. cerevisiae can be properly separated. For details, see S. When isolating cerevisiae, fungi that are prone to false positives (noise), such as Mucor, Zygosaccharomyces, Wickerhamomyces anomalus, Candida glabrata, Candida humilis, can be appropriately excluded.
Further, according to the yeast separation method of the present invention, the medium to be used (SDK agar medium, SM agar medium) is very easy to prepare. cerevisiae can be easily separated.

本発明に係る酵母作出方法によれば、酵母をマルトースに馴化させる馴化工程を含むことから、酵母のマルトース発酵性を高めることができる。その結果、発酵対象にマルトースが含まれている場合であっても、マルトースの発酵能を高めることができる。   According to the method for producing yeast according to the present invention, since the acclimation step for acclimating yeast to maltose is included, the maltose fermentability of yeast can be enhanced. As a result, even if maltose is contained in the fermentation target, the fermentability of maltose can be increased.

本発明に係る酵母分離方法および酵母作出方法は以上説明したとおりであるが、本発明を行うにあたり、悪影響を与えない範囲において、前記各処理(工程)の間あるいは前後に、他の処理を含めてもよい。
そして、前記各処理において、明示していない条件については、従来公知の条件を用いればよく、前記各処理によって得られる効果を奏する限りにおいて、その条件を適宜変更できることは言うまでもない。
The method for separating yeast and the method for producing yeast according to the present invention are as described above. In performing the present invention, other treatments are included during or before and after each treatment (step) within a range that does not adversely affect the method. May be.
And in each said process, about the conditions which are not specified clearly, what is necessary is just to use a conventionally well-known condition, and as long as there exists an effect acquired by each said process, it cannot be overemphasized that the conditions can be changed suitably.

さらに、本発明に係る酵母分離方法は、ミツバチからのS.cerevisiaeの分離に非常に適した方法であるが、当該酵母以外の分離にも当然適用することができる。
例えば、リジン資化性の有無に基づき酵母を選抜したい場合は、SDK寒天培地を用いることで好適に所望の酵母を選抜することができ、マルトース資化性に基づき酵母を選抜したい場合は、SM寒天培地を用いることで好適に所望の酵母を選抜することができる。
Furthermore, the method for separating yeast according to the present invention comprises S. cerevisiae from bees. Although this method is very suitable for the separation of C. cerevisiae, it can naturally be applied to separations other than the yeast.
For example, when yeast is selected based on the presence or absence of lysine assimilation, a desired yeast can be suitably selected using an SDK agar medium. When yeast is selected based on maltose utilization, SM A desired yeast can be suitably selected by using an agar medium.

なお、本発明に係る酵母分離方法で使用するSDK寒天培地は、前記のとおり非常に有用な培地であることから、当該培地を完成するに至った経緯について説明しておく。
現時点において、S.cerevisiaeやS.pastorianus等の発酵産業酵母を特異的に選抜することのできる培地は存在しない。
しかしながら、これらの発酵産業酵母は、産業上有用な酵母であるため、環境中から見出すことには重要な意義がある。そこで、特異的に選抜できなくとも、環境中の多くの他の酵母を排除することができれば、これらの発酵産業酵母の選抜を優位に進めることができる。
In addition, since the SDK agar medium used with the yeast isolation | separation method based on this invention is a very useful culture medium as mentioned above, the background which led to the completion of the said medium is demonstrated.
At present, S. cerevisiae and S. cerevisiae. There is no medium that can specifically select fermentation industrial yeasts such as pastorianus.
However, since these fermentative industrial yeasts are industrially useful yeasts, it is important to find them in the environment. Therefore, even if it cannot be specifically selected, if many other yeasts in the environment can be excluded, the selection of these fermentation industry yeasts can be promoted.

現在、リジンを主要な窒素源とするリジン培地という培地が知られており、このリジン培地ではS.cerevisiaeやS.pastorianus等の発酵産業酵母は生育しないが、多くの野生酵母が増殖することから、発酵産業酵母中の野生酵母の分離・算定に用いられている。
しかし、リジン培地は組成が複雑であるため、作成が非常に困難であった。
そこで、発明者らは、酵母の合成培地として一般に使用されているSD寒天培地を活用することにより培地作成の容易化を図り、当該SD寒天培地の窒素源をリジンに代えた培地(SDK寒天培地)を完成するに至った。
Currently, a medium called lysine medium using lysine as a main nitrogen source is known. cerevisiae and S. cerevisiae. Although fermentative industrial yeasts such as pastorianus do not grow, many wild yeasts proliferate and are used for the separation and calculation of wild yeasts in fermented industrial yeasts.
However, the composition of lysine medium is very difficult because of its complicated composition.
Accordingly, the inventors have made use of an SD agar medium generally used as a yeast synthetic medium to facilitate the preparation of the medium, and a medium in which the nitrogen source of the SD agar medium is replaced with lysine (SDK agar medium). ) Has been completed.

なお、SDK寒天培地で種々の酵母の増殖性を調べたところ、S.cerevisiaeやS.pastorianusは増殖しないのに対し、Zygosaccharomyces rouxii、Z.mellis、Candida apicola、C.magnoliae、Stamerell sp.、Rhodotorula sp.、Brettanomyces anomalusでは増殖が認められた。   In addition, when the growth property of various yeasts was investigated on the SDK agar medium, cerevisiae and S. cerevisiae. pastorianus does not grow, whereas Zygosaccharomyces rouxii, Z. Mellis, Candida apicola, C.I. magnoliae, Stamerell sp. Rhodotorula sp. In Brettanomyces anomalus, proliferation was observed.

次に、本発明に係る酵母分離方法により得られた酵母の塩基配列、胞子形成能、発酵性等の試験結果について説明する。   Next, test results such as the base sequence, spore-forming ability, and fermentability of the yeast obtained by the yeast separation method according to the present invention will be described.

[酵母分離方法および酵母作出方法]
まず、東京都中央区銀座に設置されている巣箱に帰還したニホンミツバチ(Apis cerana japonica Rad)をピンセットで採取した。
[Yeast separation method and yeast production method]
First, Japanese honey bees (Apis cerana japonica Rad) returned to the nest box installed in Ginza, Chuo-ku, Tokyo were collected with tweezers.

そして、10mlの集積培地を含むダーラム管にサンプリングしたニホンミツバチ1〜4匹を無菌的に加え、25℃、嫌気(嫌気チェンバー、エスペック社EAN−140)という条件の下、1〜2週間静置して集積培養を行った。この集積培養において、菌体の増殖(目視による濁度の上昇)とダーラム管でのガス捕集が確認できたサンプルを一次候補とした。
なお、この集積培養で使用した集積培地は、後記表2に示す2×YM液体培地に、炭素源をグルコースからマルトースやスクロースに変更したり、炭素源濃度を2w/v%から2〜6w/v%に変更したり、エタノールを2〜4v/v%添加したり、条件を変えた培地を用いた(後記表2の2×YMD6液体培地、2×YMM6液体培地等)。
Then, 1 to 4 sampled Japanese bees were aseptically added to a Durham tube containing 10 ml of accumulation medium, and allowed to stand for 1 to 2 weeks under conditions of 25 ° C. and anaerobic (anaerobic chamber, ESPEC EAN-140). Then, enrichment culture was performed. In this enrichment culture, a sample in which cell growth (increase in turbidity by visual observation) and gas collection in a Durham tube were confirmed was used as a primary candidate.
The enrichment medium used in this enrichment culture is a 2 × YM liquid medium shown in Table 2 below, and the carbon source is changed from glucose to maltose or sucrose, or the carbon source concentration is changed from 2 w / v% to 2 to 6 w / The medium was changed to v%, ethanol was added at 2 to 4 v / v%, or the conditions were changed (2 × YMD6 liquid medium, 2 × YMM6 liquid medium, etc. in Table 2 below).

次に、10mlの確認培地(2×YMM6E6液体培地、2×YMU6E6液体培地)を含むダーラム管に一次候補株の集積培養液100μlを植菌して、25℃、嫌気という条件の下、2週間静置して集積培養を行った。この集積培養において、旺盛な増殖とガスの発生が確認できたサンプルを二次候補株とした。なお、2×YMM6E6液体培地を用いた場合は、ガスの発生が無くとも旺盛な増殖が確認できれば可とした。
その後、二次候補株の顕微鏡観察で、S.cerevisiaeの特徴を示すサンプルを三次候補株とした。
Next, 100 μl of the primary candidate enriched culture solution is inoculated into a Durham tube containing 10 ml of a confirmation medium (2 × YMM6E6 liquid medium, 2 × YMU6E6 liquid medium) for 2 weeks under conditions of anaerobic conditions at 25 ° C. The culture was performed by standing. A sample in which vigorous growth and gas generation were confirmed in this enrichment culture was used as a secondary candidate strain. In addition, when 2 × YMM6E6 liquid medium was used, it was acceptable if vigorous growth could be confirmed without generation of gas.
Thereafter, S. cerevisiae was observed by microscopic observation of the secondary candidate strain. A sample showing the characteristics of cerevisiae was designated as a third candidate strain.

そして、三次候補株を100cells/100μl程度になるように蒸留水で希釈して、SM寒天培地とYEPD寒天培地に100μl塗布した。そして、SM寒天培地では25℃好気培養を、YEPD寒天培地では25℃嫌気培養を行い複数のコロニーを得た。
この際、2つの確認培地で取得したサンプルを、SM寒天培地、YEPD寒天培地に各々塗布を行った。
Then, the third candidate strain was diluted with distilled water so as to be about 100 cells / 100 μl, and 100 μl was applied to SM agar medium and YEPD agar medium. Then, the SM agar medium was subjected to an aerobic culture at 25 ° C., and the YEPD agar medium was subjected to an anaerobic culture at 25 ° C. to obtain a plurality of colonies.
At this time, samples obtained with the two confirmation media were applied to the SM agar medium and the YEPD agar medium, respectively.

出現したコロニーの外観がS.cerevisiaeの特徴を示す事を確認した後、これをSD寒天培地、SDK寒天培地、SM寒天培地を用いてレプリカ培養を行い、SD寒天培地とSM寒天培地で生育し(SD+、SM+)、SDK寒天培地で生育しなかった(SDK−)コロニーを最終候補株とした。   The appearance of the appearing colonies is S. After confirming the characteristics of cerevisiae, this was replica-cultured using SD agar, SDK agar, and SM agar, grown on SD agar and SM agar (SD +, SM +), and SDK agar. Colonies that did not grow on the medium (SDK-) were used as final candidate strains.

最終候補株のrRNAをコードするDNAの塩基配列のうち、LSU(large subunit、26S)D2領域およびITS1(internal transcribed spacer 1)領域の塩基配列をキャピラリーシーケンサー(ABI3500)で解析し、BLAST検索で同定を行い、S.cerevisiaeと99%以上マッチングする株を取得した。
前記酵母分離方法より、ニホンミツバチからの酵母の分離を行った。そして、分離した酵母を、マルトースを唯一の炭素源とする培地(2×YMM6)でマルトース資化性あるいは発酵性が向上するまで継代培養を実施し、マルトースへの馴化を行うことで酵母(SBC5910)を作出した。
Among the nucleotide sequences of the DNA encoding the final candidate rRNA, the nucleotide sequences of the LSU (large subunit, 26S) D2 region and the ITS1 (internal transcribed spacer 1) region are analyzed with a capillary sequencer (ABI3500) and identified by BLAST search. And S. Strains that matched 99% or more with cerevisiae were obtained.
The yeast was separated from Japanese bees by the yeast separation method. Then, the isolated yeast is subcultured in a medium containing maltose as a sole carbon source (2 × YMM6) until maltose assimilation or fermentability is improved, and the yeast ( SBC5910) was created.

なお、実施例で使用した前記培地(2×YM、2×YMD6、2×YMM6、2×YMM6E6、2×YMU6E6、YEPD、SD、SDK、SM)の詳細な組成を表2、3に示す。表2、3中の「−」は含有量が0%であることを示す。
また、表2、3の培地について、集積培養(図1のS2、S3、S4)やプレーティング(図1のS5)の培地として用いる場合は、細菌やカビの増殖を防止するため、0.01w/v%のクロムフェニコール(和光純薬工業、分子生物学用試薬)と0.2w/v%のプロピオン酸ナトリウム(和光純薬工業、一級試薬)とを添加した。さらに、表2、3の培地について、寒天培地として用いる場合は、2w/v%の寒天(和光純薬工業)を添加した。
Tables 2 and 3 show the detailed compositions of the media (2 × YM, 2 × YMD6, 2 × YMM6, 2 × YMM6E6, 2 × YMU6E6, YEPD, SD, SDK, SM) used in the examples. "-" In Tables 2 and 3 indicates that the content is 0%.
In addition, when the media shown in Tables 2 and 3 are used as media for enrichment culture (S2, S3, S4 in FIG. 1) or plating (S5 in FIG. 1), 0. 01 w / v% chromium phenicol (Wako Pure Chemical Industries, molecular biology reagent) and 0.2 w / v% sodium propionate (Wako Pure Chemical Industries, first grade reagent) were added. Furthermore, about the culture medium of Table 2, 3, when using as an agar medium, 2 w / v% agar (Wako Pure Chemical Industries) was added.

[取得株の特徴解析]
(塩基配列)
前記酵母分離方法により取得した菌株の塩基配列をキャピラリーシーケンサー(ABI3500)で解析したところ、rRNAをコードするDNAの塩基配列のうち、LSUのD2領域およびITS領域について全て同一であるとともに、データベース上のS.cerevisiaeの塩基配列と100%のマッチングであったことから、S.cerevisiaeであるとの確証が得られた。
[Characteristic analysis of acquired strain]
(Base sequence)
When the base sequence of the strain obtained by the yeast separation method was analyzed with a capillary sequencer (ABI3500), the LSU D2 region and the ITS region were all the same among the DNA base sequences encoding rRNA, and S. cerevisiae base sequence and 100% matching. Confirmation of cerevisiae was obtained.

(胞子形成能)
前記酵母分離方法により分離した酵母について、天然培地(YEPD寒天培地)、胞子形成培地(KAc寒天培地)を用いて、25℃、5日間培養した。培養後の状態について顕微鏡写真(対物×100、位相差)を撮影した。また、比較例として、下面ビール酵母、上面ビール酵母についても同じ条件で培養を行い、顕微鏡写真を撮影した。
なお、胞子形成培地は、酢酸カリウム1w/v%、酵母エキス0.1w/v%、グルコース0.05w/v%、寒天2w/v%を含んで構成される培地であった。
(Spore-forming ability)
The yeast separated by the yeast separation method was cultured at 25 ° C. for 5 days using a natural medium (YEPD agar medium) and a spore formation medium (KAc agar medium). A micrograph (object x100, phase difference) was taken for the state after the culture. Moreover, as a comparative example, the lower surface brewer's yeast and the upper surface brewer's yeast were also cultured under the same conditions, and micrographs were taken.
The sporulation medium was a medium containing potassium acetate 1 w / v%, yeast extract 0.1 w / v%, glucose 0.05 w / v%, and agar 2 w / v%.

図2(a)は、天然培地で培養を行った後の状態を示す顕微鏡写真であり、図2(b)は、胞子形成培地で培養を行った後の状態を示す顕微鏡写真である。
図2(b)から明らかなように、下面ビール酵母は全く胞子を形成せず、上面ビール酵母もほとんど胞子を形成しなかったが、本発明に係る酵母(SBC5910)は、ほぼ全ての酵母が胞子を形成した。
また、図2(a)の天然培地で培養を行った場合でも、本発明に係る酵母(SBC5910)は、高頻度で4胞子を形成した。
したがって、本発明に係る酵母は、胞子形成能を有することがわかった。
FIG. 2A is a photomicrograph showing the state after culturing in a natural medium, and FIG. 2B is a photomicrograph showing the state after culturing in a spore formation medium.
As apparent from FIG. 2 (b), the lower brewer's yeast did not form any spores, and the upper brewer's yeast did not form any spores. However, the yeast according to the present invention (SBC5910) Spores formed.
Moreover, even when it culture | cultivated with the natural culture medium of Fig.2 (a), the yeast (SBC5910) based on this invention formed 4 spores with high frequency.
Therefore, it was found that the yeast according to the present invention has a spore-forming ability.

(発酵性:ダーラム管試験)
前記酵母分離方法により分離した酵母について、2×YMM6E6液体培地と、2×YMU6E6液体培地とを用いてダーラム管内でマルトースとスクロースとの発酵性を調べた。
その結果、本発明に係る酵母は、スクロース発酵性およびマルトース発酵性が確認された。
(Fermentability: Durham tube test)
About the yeast isolate | separated by the said yeast isolation | separation method, fermentability of maltose and sucrose was investigated in the Durham tube using 2 * YMM6E6 liquid medium and 2 * YMU6E6 liquid medium.
As a result, the sucrose fermentability and maltose fermentability were confirmed for the yeast according to the present invention.

(発酵性:80ml麦汁の発酵試験)
前記酵母分離方法により分離、マルトースに馴化した酵母(SBC5910)と、比較例として用意した上面ビール酵母、パン酵母と、を用いて、80ml麦汁の発酵試験を行った。
詳細には、80mlの麦汁に対して、各酵母を植菌して、20℃で7日間静置し、その後、培地内のエタノール濃度(v/v%)および仮性エキス(%)を測定した。
なお、発酵試験で用いた麦汁は、通常のビール麦汁であった。
(Fermentability: 80ml wort fermentation test)
An 80 ml wort fermentation test was performed using yeast (SBC5910) separated and maltose-accommodated by the yeast separation method, and upper surface beer yeast and baker's yeast prepared as comparative examples.
Specifically, each yeast was inoculated into 80 ml of wort and allowed to stand at 20 ° C. for 7 days, and then the ethanol concentration (v / v%) and pseudo extract (%) in the medium were measured. did.
The wort used in the fermentation test was normal beer wort.

図3は、発酵試験(麦汁)後のエタノール濃度および仮性エキスの結果を示すグラフである。
図3から明らかなように、本発明に係る酵母(SBC5910)は、麦汁中のエタノール濃度が若干低く、仮性エキスが若干多く残存してしまっていたことから、麦汁発酵性が若干弱いことがわかった。
FIG. 3 is a graph showing the ethanol concentration after the fermentation test (wort) and the results of the pseudo extract.
As is clear from FIG. 3, the yeast (SBC5910) according to the present invention has a slightly low ethanol concentration in the wort and a slight amount of the pseudo extract remains, so that the wort fermentability is slightly weak. I understood.

(発酵性:80ml果汁の発酵試験)
前記酵母分離方法により分離、マルトースに馴化した酵母(SBC5910)と、比較例として用意した下面ビール酵母、上面ビール酵母、パン酵母、ワイン酵母と、を用いて、80ml果汁の発酵試験を行った。
詳細には、ソーヴィニヨン・ブラン(Sauvignon Blanc)Brix68の濃縮果汁を水道水で5倍に希釈したもの、および、希釈したものに栄養分を添加したものを、各80ml用意し、植菌後、25℃で7日間静置し、各溶液中の成分を測定した。
(Fermentability: Fermentation test of 80ml fruit juice)
An 80 ml juice fermentation test was performed using yeast (SBC5910) separated and maltose-acclimated by the yeast separation method, and lower brewer's yeast, upper brewer's yeast, baker's yeast, and wine yeast prepared as comparative examples.
Specifically, 80 ml each of Sauvignon Blanc Brix68 concentrated fruit juice diluted 5-fold with tap water and diluted with nutrients were prepared, and after inoculation, 25 ° C. And allowed to stand for 7 days, and the components in each solution were measured.

なお、栄養分の添加については、硫酸アンモニウムが350mg/l、チアミン・HClが0.4mg/l、ビオチンが0.02mg/l、ピリドキシンが0.4mg/l、イノシトールが2mg/l、ニコチン酸が0.1mg/l、という終濃度となるように各物質を添加した。   Regarding addition of nutrients, ammonium sulfate was 350 mg / l, thiamine / HCl was 0.4 mg / l, biotin was 0.02 mg / l, pyridoxine was 0.4 mg / l, inositol was 2 mg / l, and nicotinic acid was 0. Each substance was added to a final concentration of 1 mg / l.

80ml果汁の発酵試験の結果を表4に示す。
なお、表4中の「無添加」とは、濃縮果汁を希釈後に栄養分を添加していないもの、「栄養添加」とは、濃縮果汁を希釈後に栄養分を添加したものを示す。
Table 4 shows the results of the 80 ml fruit juice fermentation test.
In Table 4, “No addition” indicates that no nutrient is added after dilution of concentrated fruit juice, and “nutrition addition” indicates that no nutrient is added after dilution of concentrated fruit juice.

表4から明らかなように、「無添加」、「栄養添加」のいずれの場合も、本発明に係る酵母(SBC5910)で発酵させた成分結果と、ワイン酵母で発酵させた成分結果との間において、エタノールおよび仮性エキスに大きな差異は存在しなかった。
したがって、本発明に係る酵母は、ワイン酵母と比較しても、遜色のない分析値ならびに香りのワインを製造できることがわかった。
As is clear from Table 4, in both cases of “no addition” and “nutrition addition”, the result of the component fermented with the yeast according to the present invention (SBC5910) and the result of the component fermented with wine yeast There was no significant difference between ethanol and pseudo extract.
Therefore, it was found that the yeast according to the present invention can produce a wine having an inferior analytical value and a fragrance even when compared with wine yeast.

(発泡性麦芽発酵飲料の製造)
前記80ml麦汁の発酵試験では、本発明に係る酵母は、麦汁発酵性が若干弱いことがわかった。これは、マルトース発酵性が若干弱いことに起因するものであると考える。
したがって、発泡性麦芽発酵飲料(ビール)を製造するにあたり、麦芽等の原料から麦汁を作る工程である仕込工程時においてグルコアミラーゼ(アマノGAS)を添加することにより、マルトースを分解させた。
なお、前記仕込工程におけるグルコアミラーゼの添加以外の製造方法は、通常の麦芽100%ビールの製造方法で仕込、発酵、貯酒およびろ過を実施した。
(Manufacturing of foaming malt fermented beverages)
In the 80 ml wort fermentation test, it was found that the yeast according to the present invention was slightly weak in wort fermentability. This is considered to be due to the slightly weak maltose fermentability.
Therefore, in producing an effervescent malt fermented beverage (beer), maltose was decomposed by adding glucoamylase (Amano GAS) during the preparation process, which is a process for producing wort from raw materials such as malt.
In addition, the manufacturing methods other than the addition of glucoamylase in the charging step were charged, fermented, liquor-stored, and filtered by a normal manufacturing method of 100% malt beer.

本発明に係る酵母を使用して製造した発泡性麦芽発酵飲料をガスクロマトグラフィーで測定したところ、グアイヤコールの起因物資である4−ビニルグアイヤコール(4−VG)が3.1ppm検出された。
なお、測定の詳細な方法は、測定試料をSPMEで抽出後、ガスクロマトグラフィー(カラム:DB−WAX(J&W) 30m×0.25mm 膜圧0.25μm、キャリアガス:He、コンスタントフロー 1ml/min、注入:スプリットレス、注入口温度 270℃、オーブン:50℃,3min→5℃/min→240℃,2min、トランスファーライン:240℃、MS条件:4−vinylguaiacol m/z 150,135,107、ガスクロ:アジレント6890+5973N)で測定するというものであった。
When the effervescent malt fermented drink manufactured using the yeast according to the present invention was measured by gas chromatography, 3.1 ppm of 4-vinyl guaiacol (4-VG), which is a causative substance of guaiacol, was detected.
In addition, the detailed method of a measurement is gas chromatography (column: DB-WAX (J & W) 30m x 0.25mm membrane pressure 0.25micrometer, carrier gas: He, constant flow 1ml / min after extracting a measurement sample with SPME. , Injection: splitless, inlet temperature: 270 ° C., oven: 50 ° C., 3 min → 5 ° C./min→240° C., 2 min, transfer line: 240 ° C., MS conditions: 4-vinylguiacol m / z 150, 135, 107, Gas chromatography: Agilent 6890 + 5973N).

下面ビール酵母を使用して製造する一般的な発泡性麦芽発酵飲料の4−VGが約0.2ppmであることを考慮すると、本発明に係る酵母を使用して製造した発泡性麦芽発酵飲料は、グアイヤコールという独特の香りを麦芽発酵飲料に付与することができ、商品の差別化を図ることができることがわかった。   Considering that 4-VG of a typical effervescent malt fermented beverage manufactured using bottom beer yeast is about 0.2 ppm, the effervescent malt fermented beverage manufactured using the yeast according to the present invention is It has been found that a unique scent of guaiacol can be imparted to malt fermented beverages and product differentiation can be achieved.

(パンの製造)
製パン機(サンヨー社製ホームベーカリーSPM−KP1)を使用し、当該製パン機に酵母を17.5g、強力粉260g、ショートニング20g、砂糖20g、塩4g、スキムミルク5g、水180mlを投入し、「天然酵母使用コース」(7時間)により、パンを製造した。
なお、酵母としては、本発明に係る酵母(SBC5910)と、比較例として用意したパン酵母とを使用した。
(Manufacture of bread)
Using a bread maker (Sanyo Home Bakery SPM-KP1), 17.5 g of yeast, 260 g of strong flour, 20 g of shortening, 20 g of sugar, 4 g of salt, 5 g of skim milk and 180 ml of water are added to the bread maker. Bread was produced by the “yeast use course” (7 hours).
In addition, as yeast, the yeast (SBC5910) based on this invention and the baker's yeast prepared as a comparative example were used.

本発明に係る酵母を使用して製造したパン、および、パン酵母を使用して製造したパンについて、10名のパネラーにより官能試験を実施した。その結果、5名が本発明に係る酵母を使用して製造したパンの方が美味しいと判断し、3名がパン酵母を使用して製造したパンの方が美味しいと判断し、2名は両者に差が無いと判断した。
また、本発明に係る酵母を使用して製造したパンと、パン酵母を使用して製造したパンとでは、パンの高さがほとんど変わらず、膨張率は同じであることがわかった。
したがって、本発明に係る酵母は、パン酵母と比較しても、遜色のないパンを製造できることがわかった。
A sensory test was conducted by 10 panelists on bread produced using the yeast according to the present invention and bread produced using baker's yeast. As a result, 5 people judged that the bread produced using the yeast according to the present invention was more delicious, 3 people judged that the bread produced using baker's yeast was more delicious, and 2 people both It was judged that there was no difference.
Moreover, it turned out that the bread height hardly changes with the bread manufactured using the yeast which concerns on this invention, and the bread manufactured using baker's yeast, and the expansion rate is the same.
Therefore, it was found that the yeast according to the present invention can produce bread that is inferior to baker's yeast.

以上、本発明に係る酵母、この酵母を用いて製造される発酵飲食品、酵母分離方法、および、酵母作出方法について、発明を実施する形態および実施例により詳細に説明したが、本発明の趣旨はこれらの説明に限定されるものではなく、特許請求の範囲の記載に基づいて広く解釈されなければならない。   As described above, the yeast according to the present invention, the fermented food and drink produced using the yeast, the yeast separation method, and the yeast production method have been described in detail according to embodiments and examples of the invention. Is not limited to these descriptions and should be construed broadly based on the claims.

Claims (2)

ニホンミツバチ由来であって、サッカロミセス セレビシエに属するSBC5910(受託番号:NITE P−1376)であることを特徴とする酵母。 A yeast characterized by SBC5910 (accession number: NITE P-1376), which is derived from Japanese bees and belongs to Saccharomyces cerevisiae. 請求項1に記載の酵母を用いて発酵する発酵工程を含む発酵飲食品の製造方法 The manufacturing method of fermented food / beverage products including the fermentation process fermented using the yeast of Claim 1.
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