JP5963208B2 - 再生組織足場 - Google Patents
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Description
「無細胞組織マトリックス」(ATM)という用語は、本明細書で使用する場合、一般に、細胞および/または細胞成分を実質的に含まない任意の組織マトリックスを指す。皮膚、皮膚の一部(例えば、真皮)、および他の組織(血管、心臓弁、筋膜、軟骨、骨、および神経結合組織など)を使用して、本開示の範囲に入る無細胞マトリックスを作製してもよい。無細胞組織マトリックスが細胞および/または細胞成分を実質的に含まないかどうかを判定するために、多くの方法で無細胞組織マトリックスの試験または評価を行うことができる。例えば、処理された組織を光学顕微鏡検査で検査して、細胞(生細胞もしくは死細胞)および/または細胞成分が残存するかどうかを判定することができる。さらに、特定のアッセイを使用して細胞または細胞成分の有無を確認することができる。例えば、DNAまたは他の核酸のアッセイを使用して、組織マトリックス中に残存する核物質を定量化することができる。一般に、残存するDNAまたは他の核酸がない場合、完全に脱細胞化されている(即ち、細胞および/または細胞成分が除去されている)ことが分かる。最後に、細胞特有の成分(例えば、表面抗原)を同定する他のアッセイを使用して、組織マトリックスが無細胞であるかどうかを判定することができる。皮膚、皮膚の一部(例えば、真皮)、および他の組織(血管、心臓弁、筋膜、軟骨、骨、および神経結合組織など)を使用して、本開示の範囲に入る無細胞マトリックスを作製してもよい。
以下の手順を使用し、ALLODERM(登録商標)、STRATTICE(商標)または他の好適な無細胞組織マトリックスを使用して、粒子状無細胞組織マトリックスを作製することができる。包装から取り出した後、途切れのない「連続」回転刃(cutting wheel)を備えたZimmer mesherを使用して、ATMを細片に切断することができる。得られたATMの細長片を長さ約1cm〜約2cmの長さに切断してもよい。
ブタ真皮組織由来粒子状ATM(pADM)を有する再生組織足場の移植の効果を、後述の手順に従い、予備形成されたポリマー単独の移植と比較した。
ウサギの大腿骨顆部への再生組織足場の移植を評価した。実施例1に記載の手順に従って、BHA、pADM、およびNMPを含むインプラントを作製した。BHAを、NMP溶媒中のpADMと混合し、ウサギの大腿骨顆部に形成された約3.5×3mmの骨軟骨欠損部に注入した。4週間後にサンプルを取り出し、ヘマトキシリン・エオシンを用いた通常の組織学的染色を使用して、細胞の反応を評価した。サンプルを顕微鏡で20倍、100倍、および400倍の倍率(それぞれ、図5a〜c)で観察した。また、組織足場インプラント180bを示す大腿骨顆部の写真を12週目に撮影した(図6)。結果から、欠損部位のヒアリン様軟骨の付着により実証されるようにインプラントの持続性と再生組織反応が認められた。
Claims (24)
- 粒子状無細胞組織マトリックス(ATM)と;
ポリマーと;
水混和性溶媒と;
を含む組織足場混合物において、
前記粒子状ATMが、前記ポリマーの中に入っており、
前記混合物を水性媒体と接触させると、前記水混和性溶媒が前記混合物から拡散することができ、前記混合物が前記ポリマーと前記ATMから組織足場を形成することを可能にすることを特徴とする、組織足場混合物。 - 粒子状無細胞組織マトリックス(ATM)と;
ポリマーと;
水混和性溶媒と;
を含む組織足場混合物において、
前記粒子状ATMが、前記ポリマーの中に入っており、
前記混合物を動物に移植すると、前記水混和性溶媒が前記混合物から拡散することができ、前記混合物が前記ポリマーと前記ATMから組織足場を形成することを可能にすることを特徴とする、組織足場混合物。 - 請求項1又は2に記載の組織足場混合物において、前記組織足場が安定な三次元形状を有することを特徴とする、組織足場混合物。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載の組織足場混合物において、前記組織足場は、動物に移植された場合、前記ポリマー単独の場合より免疫反応または炎症反応が少ないことを特徴とする、組織足場混合物。
- 請求項1に記載の組織足場混合物において、前記免疫反応または炎症反応が、存在する炎症細胞の数により測定されることを特徴とする、組織足場混合物。
- 粒子状無細胞組織マトリックス(ATM)と;
ポリマーと;
溶媒と;
を含んでおり、
前記粒子状ATMが、前記ポリマーの中に入っていることを特徴とするキット。 - 請求項1〜6のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記溶媒が生体適合性であることを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記溶媒がジオキサン、N−メチル−2−ピロリドン、またはジメチルスルホキシドの少なくとも1つ、またはこれらの組み合わせを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリマーがポリカプロラクトンを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項9に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリカプロラクトンを溶媒に溶解させる場合、それが前記溶媒中に約5〜30%(w/v)の範囲の量で存在することを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項9に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリカプロラクトンを溶媒に溶解させる場合、それが前記溶媒中に約10〜20%(w/v)の範囲の量で存在することを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリマーがポリ−4−ヒドロキシブチレートを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項12に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリ−4−ヒドロキシブチレートを溶媒に溶解させる場合、それが前記溶媒中に約5〜40%(w/v)の範囲の量で存在することを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項12に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリ−4−ヒドロキシブチレートを溶媒に溶解させる場合、それが前記溶媒中に約10〜30%(w/v)の範囲の量で存在することを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ポリマーがヒアルロン酸のベンジルエステル誘導体を含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項15に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ヒアルロン酸のベンジルエステル誘導体を溶媒に溶解させる場合、それが前記溶媒中に約5〜50%(w/v)の範囲の量で存在することを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項15に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記ヒアルロン酸のベンジルエステル誘導体を溶媒に溶解させ、それが前記溶媒中に約5〜40%(w/v)の範囲の量で存在することを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜17のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記粒子状ATMが均一なサイズの粒子を含むことを特徴とするキットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜18のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記粒子状ATMが真皮ATM、軟骨組織マトリックス、骨組織マトリックス、またはこれらの組み合わせを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項19に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記真皮ATMがヒト組織マトリックスまたはブタ組織マトリックスであることを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項19に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記軟骨組織マトリックスがヒト軟骨マトリックスまたはブタ軟骨マトリックスを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項19に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記骨組織マトリックスがヒト骨またはブタ骨を含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項1〜22のいずれか1項に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記粒子状ATMが2種類以上の異なる組織からのATMを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
- 請求項23に記載のキットまたは組織足場混合物において、前記2種類以上の異なる組織が、真皮と軟骨、軟骨と骨、ヒト組織マトリックス、ブタ組織マトリックス、またはヒト組織マトリックスとブタ組織マトリックスを含むことを特徴とする、キットまたは組織足場混合物。
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