JP5785603B2 - ミクロゲルを有する熱応答性基質、その調整方法、および生物細胞の培養方法 - Google Patents
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Description
ここで、Xは支持領域に対する結合基であり、R1はHまたはCH3であり、R2/R3は、少なくとも1つのエーテル基を有する脂肪族炭化水素鎖、好ましくは1乃至20のエーテル基(好ましくは、ポリエチレンオキオキシド)を有する脂肪族炭化水素鎖であり、R4は−H、脂肪族炭化水素鎖または官能基、例えば、− ハロゲン(基)、−N3(基)、−チオカルボニル(基)、−(ジ)チオカルバミル(基)である。
R3、R4、R5およびR6は、−H、−アルキル、アルケニル(基)、アルキニル(基)、アリール(基)であり、好ましくは、−R3は−イソプロピル、−R4は−H、−R4および−R5は、−C2H5、−CH3または−Hであり、特に好ましくは、−R3は−イソプロピル、−R4は−H、およびm:n=100:0であり、
および/または、R3、R4、R5およびR6は、
ここで、R7乃至R11は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、−アルキロイル(alkyloyl)(基)であり、少なくとも1つのRはHである。
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび−CH3、特に好ましくは−Hであり、
ここで、R3が−Hでない(≠−H)場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび/または−CH3、特に好ましくは−CH3であり、
もし、R3、R5が−H、およびR4、R6が−CH3、x=1およびy=7.5の場合、m:nは、好ましくは95:5乃至90:10、特に好ましくは93:7であり、
もし、R3、R5が−H、およびR4、R6が−CH3、x=1およびy=4.5の場合、m:nは、好ましくは93:7乃至80:20、特に好ましくは85:15である。
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび−CH3、特に好ましくは−Hであり、
ここで、R3が−Hでない(≠−H)場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび/または−CH3、特に好ましくは−Hであり、
もし、R1、R2が−H、およびR4、R6が−CH3、x=3およびy=4の場合、m:nは、好ましくは65:35乃至45:55、特に好ましくは60:40乃至50:50である。
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび−CH3、特に好ましくは−Hであり、
ここで、R3が−Hでない(≠−H)場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび/または−CH3、特に好ましくは−Hである。
ここで、R3が−Hでない(≠−H)場合、R5は−Hであり、
R2、R4は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび/または−CH3、特に好ましくは−CH3である。
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび−CH3、特に好ましくは−Hであり、
ここで、R3が−Hでない(≠−H)場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび/または−CH3、特に好ましくは−Hである。
ここで、R1は、−H、−アルキル、好ましくは−Hおよび−CH3、特に好ましくは−Hであり、
R2、R3は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
2≦n≦10、好ましくは3≦n≦6である。
ここで、R1が−Hでない(≠−H)場合、R3は−Hであり、
R2、R4は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、好ましくは−Hおよび/または−CH3である。
− 生体分子、例えば、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニン、
− 接着促進ペプチド、例えば、アミノ酸配列RGDを含むペプチド、
− 合成ポリマー、例えば、ポリ−L−リジン(poly-L-Lysin)、スルホン酸ポリスチレン(Polystyrolsulfonat)、ポリアリルアミン(Polyallylamin)、ポリエチレンイミン(Polyethylenimin)。
− タンパク質、例えば、ウシ血清アルブミン(Rinderserumalbumin)(bovine serum albumin、BSA)、
− 接着力低減ペプチド、例えば、高いロイシン(leucine)およびイソロイシン(isoleucine)の含有量を有するペプチド、
− 合成ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール(“PEG”)の鎖を含むポリマー、および
− 脂質。
− ポリマー鎖(チェーン)長さ、
− 架橋密度(例えば、鎖橋の形成)、
− 折り畳み状態での粒子半径R1、
− 非折り畳み状態での粒子半径R2、
− 折り畳み状態でのヤング率、
− 非折り畳み状態でのヤング率、および
− (任意選択的に)内側から外側の方向における半径方向の剛性の勾配(Gradient der Steifigkeit)。
− ケモカイン(Chemokines)。例えばFGF、これは走化性(Chemotaxis)を誘発する、または
− オステオネクチン(Osteonektin)(これは、幹細胞の心筋細胞への分化を誘発する)。
Claims (18)
- 基質(10)、特に生物細胞(20、21、22)を受け入れる基質であって、
− 支持領域(2)を有する基質本体(1)を含み、
− 熱応答性ミクロゲル(3)が前記支持領域(2)上に固定され、
− 少なくとも1種のモジュレータ物質(5)が配置され、
前記少なくとも1種のモジュレータ物質(5)に対して、生物細胞が、前記熱応答性ミクロゲル(3)に対する前記生物細胞の接着力とは異なる接着力を有し、および/または、前記少なくとも1種のモジュレータ物質(5)との細胞反応が、前記生物細胞の表面受容体との結合によって誘発可能であり、
− 前記少なくとも1種のモジュレータ物質(5)は、前記支持領域(2)上で、モジュレータ粒子(5.1、5.2)上におよび/またはモジュレータ層(5.3、5.4)として配置されるものであることを特徴とする、基質。 - − 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、少なくとも1つの荷電されていない非イオン性のポリマーで形成されるものである、請求項1に記載の基質。
- 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、次のポリマー(ホモポリマーまたはコポリマー):
−
−
R3、R4、R5およびR6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
および/または、R3、R4、R5およびR6は、
ここで、R7乃至R11は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、−アルキロイルであり、少なくとも1つのRはHである、
−
−
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
いずれの場合も、R3が−Hでない場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
−
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
いずれの場合も、R3が−Hでない場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
−
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
R3が−Hでない場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールである、
−
−
−
いずれの場合も、R3が−Hでない場合、R5は−Hであり、
R2、R4は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールである、
−
R3、R5は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
ここで、R3が−Hでない場合、R5は−Hであり、
R4、R6は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールである、
−
−
ここで、R1は、−H、−アルキルであり、
R2、R3は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールであり、
2≦n≦10である、
−
−
ここで、R1が−Hでない場合、R3は−Hであり、
R2、R4は、−H、−アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールである、
−
−
および、セルロース以外の多糖骨格をベースとする類似した構造のホモポリマーまたはコポリマー、
−
− エラスチン状の複数の単位を有するホモポリマーまたはコポリマー、および
− 変更されたモノマーを有する上記の全ての単位のコポリマー、
の中の少なくとも1種のポリマーで形成されるものである、請求項1または2に記載の基質。 - 前記ポリマー主鎖の少なくとも1つの末端の単位は、前記支持領域(2)に対する結合基を含むものである、請求項3に記載の基質。
- 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、次のポリマーの中の少なくとも1種のポリマーで形成され、
− ポリ−(N−イソプロピルアクリルアミド)、
− −X−(−CH2−CR1COO−R2−)n−(−CH2−CR1COO−R3−)m−R4、またはそのコポリマー、および
− −X−[(−CH2−CR1COO−R2−)n−(−CH2−CR1COO−R3−)m−R4]2、またはそのコポリマー、
ここで、Xは支持領域に対する結合基であり、R1はHまたはCH3であり、R2/R3は、エーテル基を有する脂肪族炭化水素鎖であり、R4は−H、脂肪族炭化水素鎖または官能基である、請求項1乃至4のいずれかに記載の基質。 - 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、少なくとも2種の異なるポリマーで形成され、および/または異なる直径を有するものである、請求項1乃至5のいずれかに記載の基質。
- 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、最小で10nmおよび/または最大で50μmの直径を有するものである、請求項1乃至6のいずれかに記載の基質。
- 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、コア−シェル構造を有するものである、請求項1乃至7のいずれかに記載の基質。
- − 前記熱応答性ミクロゲル(3)のシェルだけが熱応答性である、
− 前記熱応答性ミクロゲル(3)のコアの凝集は、二次原子価相互作用によって生じる、
− 前記熱応答性ミクロゲル(3)のコアの凝集は、化学的架橋によって生じる、
− 前記熱応答性ミクロゲル(3)のシェルにおけるポリマー鎖は、架橋されていない、
− 前記熱応答性ミクロゲル(3)のシェルにおけるポリマー鎖は、架橋されており、架橋位置の数は、非架橋の繰り返し単位20個当り1個以下である、
− 前記熱応答性ミクロゲル(3)のシェルの厚さは、少なくとも10nmである、
の特徴の中の少なくとも1つの特徴を有する、請求項8に記載の基質。 - 前記熱応答性ミクロゲル(3)は、単層、特に1つの閉じたまたは密状態の単層を形成するものである、請求項1乃至9のいずれかに記載の基質。
- 前記支持領域(2)には接着促進剤(4)が供給または配置されるものである、請求項1乃至10のいずれかに記載の基質。
- 前記熱応答性ミクロゲル(3)、前記接着促進剤および前記モジュレータ物質の中の少なくとも1つは、前記支持領域(2)上で密度勾配(6)を形成するものである、請求項1乃至11のいずれかに記載の基質。
- 少なくとも1つの培養キャビティ(9)が前記支持領域(2)上に設けられている、請求項1乃至12のいずれかに記載の基質。
- 前記基質本体(1)は培養装置(30)の一部である、請求項1乃至13のいずれかに記載の基質。
- 請求項1乃至14のいずれかに記載の基質(10)を調整する方法であって、
− 前記支持領域(2)を有する基質本体(1)を供給する工程と、
− 前記熱応答性マイクロゲル(3)の分散液を調整する工程と、
− 前記分散液を前記支持領域(2)に塗布する工程と、
− 前記支持領域(2)上に前記熱応答性ミクロゲル(3)を固定する工程と、
を含む、基質の調整方法。 - − 前記支持領域(2)に接着促進剤を塗布または配置する工程と、
− 前記支持領域(2)に少なくとも1種のモジュレータ物質(5)を塗布または配置する工程と、
− 前記支持領域(2)を殺菌する工程、
の中の少なくとも1つの工程を含む、請求項15に記載の方法。 - 請求項1乃至15のいずれかに記載の基質(10)上で生物細胞(20、21、22)を培養する方法であって、
− 前記基質(10)上に前記生物細胞(20、21、22)を堆積または被着する工程と、
− 前記生物細胞(20)が、成長、分化、および/または移動する(7)ように、培養条件を設定する工程と、
を含む、方法。 - − 温度を設定することによって、前記基質(10)上における前記生物細胞(20、21、22)の接着性を設定する工程と、
− 少なくとも1つのタイプの前記生物細胞(20、21、22)の、細胞タイプに固有の移動(7)を、細胞タイプに固有に作用するモジュレータ物質の密度勾配で設定する工程と、
− 前記生物細胞(20、21、22)が培養キャビティ(9)中に移動する形態で、少なくとも1つのタイプの前記生物細胞(20、21、22)の移動(7)を、モジュレータ物質の密度勾配によって設定する工程、
の中の少なくとも1つの工程を含む、請求項17に記載の方法。
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