JP5764900B2 - Microbe test cover sheet, method for manufacturing microbe test cover sheet, and microbe test kit - Google Patents
Microbe test cover sheet, method for manufacturing microbe test cover sheet, and microbe test kit Download PDFInfo
- Publication number
- JP5764900B2 JP5764900B2 JP2010223097A JP2010223097A JP5764900B2 JP 5764900 B2 JP5764900 B2 JP 5764900B2 JP 2010223097 A JP2010223097 A JP 2010223097A JP 2010223097 A JP2010223097 A JP 2010223097A JP 5764900 B2 JP5764900 B2 JP 5764900B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cover sheet
- binder resin
- resin layer
- culture
- layer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 49
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 104
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 104
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 94
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 79
- 238000004040 coloring Methods 0.000 claims description 42
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 28
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical group [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 27
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 27
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 25
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 13
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 13
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 12
- 238000007646 gravure printing Methods 0.000 claims description 11
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 claims description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 5
- 229920006122 polyamide resin Polymers 0.000 claims description 5
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 claims description 4
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 239000000463 material Substances 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 8
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 8
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000003851 corona treatment Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 5
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 5
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 5
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 5
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 5
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 4
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 3
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 3
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- YJTKZCDBKVTVBY-UHFFFAOYSA-N 1,3-Diphenylbenzene Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1 YJTKZCDBKVTVBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- IDCBOTIENDVCBQ-UHFFFAOYSA-N TEPP Chemical compound CCOP(=O)(OCC)OP(=O)(OCC)OCC IDCBOTIENDVCBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 238000011955 best available control technology Methods 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 2
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 2
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 2
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 2
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002341 toxic gas Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- NCJWJQNOYLTOCG-UHFFFAOYSA-M 2-(4-methylphenyl)-3,5-diphenyltetrazol-2-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 NCJWJQNOYLTOCG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-LNNRFACYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-LNNRFACYSA-N 0.000 description 1
- JXCKZXHCJOVIAV-UHFFFAOYSA-N 6-[(5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl)oxy]-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid;cyclohexanamine Chemical compound [NH3+]C1CCCCC1.O1C(C([O-])=O)C(O)C(O)C(O)C1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 JXCKZXHCJOVIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920000161 Locust bean gum Polymers 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000004820 Pressure-sensitive adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000005456 alcohol based solvent Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- PLKYGPRDCKGEJH-UHFFFAOYSA-N azane;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;iron Chemical compound N.[Fe].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O PLKYGPRDCKGEJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229940075894 denatured ethanol Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007607 die coating method Methods 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229920000591 gum Polymers 0.000 description 1
- 239000012943 hotmelt Substances 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 235000010420 locust bean gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000711 locust bean gum Substances 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 description 1
- 229920001225 polyester resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004645 polyester resin Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005672 polyolefin resin Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000007650 screen-printing Methods 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- NASFKTWZWDYFER-UHFFFAOYSA-N sodium;hydrate Chemical compound O.[Na] NASFKTWZWDYFER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000010345 tape casting Methods 0.000 description 1
- RONADMZTCCPLEF-UHFFFAOYSA-M tetrazolium violet Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C3=CC=CC=C3C=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 RONADMZTCCPLEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、微生物検査に用いられる微生物培養器具に関し、詳細には、微生物の存在を確認するための発色指示薬を含有する微生物検査用カバーシート、微生物検査用カバーシートの製造方法、及び微生物検査用カバーシートを含む微生物検査用キットに関する。 The present invention relates to a microbial culture instrument used for microbial testing, and more specifically, a microbial test cover sheet containing a coloring indicator for confirming the presence of microorganisms, a method for producing a microbial test cover sheet, and microbial test The present invention relates to a microorganism testing kit including a cover sheet.
微生物の存在を確認したり、微生物数を測定したりする方法としては、寒天平板混釈法がある。この方法では、透明な寒天培地上で微生物が発育すると白濁したコロニーが形成されることから、このコロニー数を計測することで菌数検査を行っている。 As a method for confirming the presence of microorganisms or measuring the number of microorganisms, there is an agar plate mixing method. In this method, when microorganisms grow on a transparent agar medium, a cloudy colony is formed. Therefore, the number of colonies is counted to test the number of bacteria.
近年、微生物検査をより簡便に行えるように設計された微生物培養器具が開発されている。例えば、方形の粘着シート上に円形の水溶性高分子化合物層と多孔質マトリックス層とを積層し、その上に方形の透明フィルムを配設したシート状の微生物培養器がある（特許文献１参照）。また、その他にもプラスチック容器内に、水溶性高分子化合物、栄養成分、発色指示薬を含有した乾燥培地を備える簡易微生物培養器具もある（特許文献２参照）。 In recent years, a microbial culture instrument designed to perform a microbial test more easily has been developed. For example, there is a sheet-shaped microorganism incubator in which a circular water-soluble polymer compound layer and a porous matrix layer are laminated on a square pressure-sensitive adhesive sheet, and a square transparent film is disposed thereon (see Patent Document 1). ). In addition, there is also a simple microorganism culture device provided with a dry medium containing a water-soluble polymer compound, a nutrient component, and a color development indicator in a plastic container (see Patent Document 2).
ところで、微生物検査では、コロニーの計数が正確かつ容易に行える必要がある。そこで、形成されたコロニーの視認性を向上させるために、コロニーを着色することができる発色指示薬を培地中に含有させることが行われている。 By the way, in the microbiological examination, it is necessary to count colonies accurately and easily. Therefore, in order to improve the visibility of the formed colonies, a color developing indicator capable of coloring the colonies is contained in the medium.
しかしながら、発色指示薬は熱等に対して不安定なものが多く、試薬の管理や調製、滅菌処理の際に注意を払う必要がある。上記特許文献１では、ＴＴＣ等の発色指示薬を水溶性高分子化合物層に含有させているが、発色指示薬は、乾燥工程時の熱処理や滅菌工程時のγ線照射に不安定であり、さらに上記工程時に栄養成分等の様々な種類の材料と混在している状態で処理されるとより不安定化しやすくなる恐れがある。そのため、発色指示薬を培養層側に混入する際には、あらかじめ他の成分を添加した水溶性高分子化合物層を形成した後に、発色指示薬を添加した水溶性高分子化合物層を形成する等、熱処理をより低温にて行うための工夫がなされており、製造方法が煩雑なものとなっている。また、上記特許文献１，２では、滅菌手法も発色指示薬の分解等を抑制するために、エチレンオキサイドガス（ＥＯＧ）滅菌を採用しており、残留ガスの人体への影響が懸念される。 However, many color indicators are unstable with respect to heat and the like, and care must be taken during the management, preparation, and sterilization of reagents. In Patent Document 1, a color development indicator such as TTC is contained in the water-soluble polymer compound layer. However, the color development indicator is unstable to heat treatment during the drying process and γ-irradiation during the sterilization process, and further If it is processed in a state of being mixed with various kinds of materials such as nutrients during the process, it may be more unstable. Therefore, when mixing the coloring indicator on the culture layer side, after forming a water-soluble polymer compound layer to which other components have been added in advance, a water-soluble polymer compound layer to which a coloring indicator has been added is formed. Has been devised to carry out the process at a lower temperature, and the manufacturing method is complicated. In Patent Documents 1 and 2, ethylene oxide gas (EOG) sterilization is employed for the sterilization technique in order to suppress decomposition of the coloring indicator, and there is a concern about the influence of residual gas on the human body.
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、発色指示薬の安定性を維持するために煩雑な製造工程を経ることなく、コロニーの良好な視認性を実現することができる微生物検査用カバーシート、該微生物検査用カバーシートの製造方法、及び微生物検査用キットを提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and is for microbial testing that can realize good visibility of colonies without going through complicated manufacturing steps in order to maintain the stability of the color indicator. It is an object of the present invention to provide a cover sheet, a method for producing the cover sheet for microbe inspection, and a kit for microbe inspection.
本発明者が鋭意研究を重ねたところ、発色指示薬を、微生物を培養する培養層側ではなく、培養層の表面を被覆するカバーシート側に含有させることで、上記課題が解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、以下のようなものを提供する。 As a result of extensive research, the present inventor has found that the above problem can be solved by including a color developing indicator on the cover sheet side covering the surface of the culture layer, not on the culture layer side for culturing microorganisms. The invention has been completed. Specifically, the following are provided.
（１） 微生物を培養する培養層の表面を被覆する微生物検査用カバーシートであって、上記カバーシートは、微生物のコロニーを着色させる発色指示薬を含有するバインダー樹脂層を最外層に備えている微生物検査用カバーシート。 (1) A cover sheet for microbial examination that covers the surface of a culture layer for culturing microorganisms, wherein the cover sheet is provided with a binder resin layer containing a coloring indicator that colors the colonies of microorganisms as an outermost layer. Cover sheet for inspection.
（２） 上記バインダー樹脂層の厚みは、０．０５〜５．０μｍの範囲内である（１）に記載の微生物検査用カバーシート。 (2) The cover sheet for microbial testing according to (1), wherein the binder resin layer has a thickness in the range of 0.05 to 5.0 μm.
（３） 上記バインダー樹脂層は、ポリアミド系樹脂をバインダーとする（１）又は（２）に記載の微生物検査用カバーシート。 (3) The said binder resin layer is a cover sheet for microbe inspection as described in (1) or (2) which uses a polyamide-type resin as a binder.
（４） 上記発色指示薬は、トリフェニルテトラゾリウムクロライド、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、及び５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルフォスフェイト２ナトリウム１水和物からなる群から選択される少なくとも１種である（１）〜（３）いずれかに記載の微生物検査用カバーシート。 (4) The color-developing indicator is triphenyltetrazolium chloride, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside, and 5-bromo-4-chloro-3-indoxylphosphate 2 The cover sheet for microbiological examination according to any one of (1) to (3), which is at least one selected from the group consisting of sodium monohydrate.
（５） （１）〜（４）いずれかに記載のカバーシートと、当該カバーシート中に含まれている発色指示薬を実質的に含有しない培養層を備えている微生物培養シートと、を含む微生物検査用キット。 (5) A microorganism comprising the cover sheet according to any one of (1) to (4), and a microorganism culture sheet provided with a culture layer substantially not containing a coloring indicator contained in the cover sheet. Inspection kit.
（６） 微生物を培養する培養層の表面を被覆する微生物検査用カバーシートの製造方法であって、微生物のコロニーを着色させる発色指示薬をバインダー樹脂に溶解させてバインダー樹脂層形成用塗工液を調製するバインダー樹脂層形成用塗工液調製工程と、当該バインダー樹脂層形成用塗工液を用いて、基材上にバインダー樹脂層を形成するバインダー樹脂層形成工程と、を含む微生物検査用カバーシートの製造方法。 (6) A method for producing a cover sheet for microbial examination that covers the surface of a culture layer for culturing microorganisms, wherein a coloring indicator for coloring microbial colonies is dissolved in a binder resin to form a binder resin layer forming coating solution. A cover for microbial testing, comprising: a binder resin layer forming coating liquid preparation step to be prepared; and a binder resin layer forming step of forming a binder resin layer on a substrate using the binder resin layer forming coating solution Sheet manufacturing method.
（７） 上記バインダー樹脂層形成工程では、グラビア印刷法によりバインダー樹脂層を形成する（６）に記載の微生物検査用カバーシートの製造方法。 (7) In the said binder resin layer formation process, the manufacturing method of the cover sheet | seat for microbe inspection as described in (6) which forms a binder resin layer by the gravure printing method.
（８） 上記バインダー樹脂層形成工程後に、γ線照射により滅菌処理する滅菌処理工程を有する（６）又は（７）に記載の微生物検査用カバーシートの製造方法。 (8) The method for producing a cover sheet for microbiological examination according to (6) or (7), further comprising a sterilization process of sterilizing by γ-ray irradiation after the binder resin layer forming process.
本発明の微生物検査用カバーシートによれば、発色指示薬の安定性を維持するために煩雑な製造工程を経ることなく、コロニーの良好な視認性を実現することができる。また、γ線照射による滅菌処理が可能となるので、ＥＯＧ滅菌による残留ガスの問題が生じない。
本発明の微生物検査用カバーシートの製造方法によれば、上記効果を有する微生物検査用カバーシートを提供することができる。
本発明の微生物検査用キットによれば、コロニーの視認性が良好となり、コロニーの計数を正確かつ容易に行うことが可能となる。
According to the cover sheet for microbial examination of the present invention, good visibility of colonies can be realized without going through a complicated manufacturing process in order to maintain the stability of the coloring indicator. In addition, since sterilization by γ-ray irradiation is possible, there is no problem of residual gas due to EOG sterilization.
According to the method for producing a microbe test cover sheet of the present invention, a microbe test cover sheet having the above-described effects can be provided.
According to the microorganism testing kit of the present invention, colony visibility is improved, and colony counting can be performed accurately and easily.
以下、本発明の具体的な実施形態について詳細に説明するが、本発明は、以下の実施形態に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。 Hereinafter, specific embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the following embodiments, and may be implemented with appropriate modifications within the scope of the object of the present invention. be able to.
［微生物検査用カバーシート］
本発明の微生物検査用カバーシート（以下、カバーシートという）は、微生物を培養する培養層の表面を被覆するものであり、微生物のコロニーを着色させる発色指示薬を含有するバインダー樹脂層を最外層に備えている。また、培養層とは、微生物を培養するための栄養成分とコロニー形成を可能とする足場となるようなもの（例えば、ゲル状物質や不織布等）とからなる層をいい、被検液を接種した場合には、被検液を含有する上記層をいう。
[Microbe test cover sheet]
The cover sheet for microbe inspection of the present invention (hereinafter referred to as a cover sheet) covers the surface of a culture layer for culturing microorganisms, and a binder resin layer containing a color indicator that colors microbial colonies is used as the outermost layer. I have. The culture layer refers to a layer composed of a nutrient component for culturing microorganisms and a scaffold (for example, a gel-like substance or a nonwoven fabric) that can form a colony and inoculate a test solution. In this case, it refers to the layer containing the test solution.
従来、発色指示薬は微生物を培養する培養層に含有させていた。しかしながら、発色指示薬は、乾燥工程時の熱処理や滅菌工程時のγ線照射に不安定であり、さらに上記工程時に栄養成分等の様々な種類の材料と混在している状態で処理されることでより不安定となることから、発色指示薬を培養層に含有させる際には、煩雑な製造工程を経ていた。そこで、本発明では、発色指示薬を培養層の表面を被覆するカバーシートに含有させることとした。このように、発色指示薬をカバーシートに含有させると、培養層を形成する様々な成分とともに熱処理したり、γ線照射したりしなくてもよいため、発色指示薬の安定性を容易に維持することができ、有毒ガス発生の懸念がないγ線照射による滅菌処理も可能となる。さらに、本発明のカバーシートは、発色指示薬を含有するバインダー樹脂層を最外層に形成させ、培養層の表面に被覆させることで、発色指示薬を培養層に速やかに移行させ、培養層上に形成された微生物コロニーを着色させることを可能とした。 Conventionally, a coloring indicator has been contained in a culture layer in which microorganisms are cultured. However, the color development indicator is unstable to heat treatment during the drying process and γ-ray irradiation during the sterilization process, and is further processed during mixing with various types of materials such as nutritional components during the above process. Since it becomes more unstable, a complicated production process has occurred when the color development indicator is contained in the culture layer. Therefore, in the present invention, the coloring indicator is included in the cover sheet that covers the surface of the culture layer. In this way, when the color development indicator is included in the cover sheet, it is not necessary to heat-treat with various components forming the culture layer or to irradiate γ rays, so the stability of the color development indicator can be easily maintained. It is possible to sterilize by γ-ray irradiation without fear of toxic gas generation. Furthermore, the cover sheet of the present invention is formed on the culture layer by forming the binder resin layer containing the color development indicator on the outermost layer and coating the surface of the culture layer to quickly transfer the color development indicator to the culture layer. It was possible to color the produced microbial colonies.
以下、本発明の一実施形態に係るカバーシートの構成について、図面を用いて説明する。なお、以下に示す各図（図１〜３）は、模式的に示した図であり、各部の大きさ、形状は、理解を容易にするために、適宜誇張して示している。 Hereinafter, the structure of the cover sheet which concerns on one Embodiment of this invention is demonstrated using drawing. In addition, each figure (FIGS. 1-3) shown below is the figure typically shown, and the magnitude | size and shape of each part are exaggerated suitably for easy understanding.
図１は、本発明の一実施形態に係るカバーシートを模式的に示した断面図である。図１において、カバーシート１０は、基材２０の一方の面に発色指示薬を含有するバインダー樹脂層２１がカバーシート１０の最外層となるように形成された構成となっている。そして、基材２０の他方の面には、桝目柄が印刷されている。 FIG. 1 is a cross-sectional view schematically showing a cover sheet according to an embodiment of the present invention. In FIG. 1, the cover sheet 10 has a configuration in which a binder resin layer 21 containing a coloring indicator is formed on one surface of a base material 20 as the outermost layer of the cover sheet 10. A check pattern is printed on the other surface of the substrate 20.
本発明の一実施形態に係るカバーシート１０によれば、発色指示薬を含有するバインダー樹脂層２１がカバーシート１０の最外層となるように形成されているので、培養層の表面と接触するように被覆するだけで、バインダー樹脂層２１中の発色指示薬が培養層側に移行し、培養層上に形成された微生物のコロニーを着色させることができる。また、不安定な発色指示薬をバインダー樹脂層２１に含有させているので、有毒ガス発生の懸念がないγ線照射による滅菌処理が可能である。 According to the cover sheet 10 according to one embodiment of the present invention, the binder resin layer 21 containing the color indicator is formed so as to be the outermost layer of the cover sheet 10, so that it comes into contact with the surface of the culture layer. By simply coating, the coloring indicator in the binder resin layer 21 moves to the culture layer side, and the microbial colonies formed on the culture layer can be colored. In addition, since an unstable coloring indicator is contained in the binder resin layer 21, sterilization by γ-ray irradiation is possible without the concern of toxic gas generation.
また、本発明の一実施形態に係るカバーシート１０によれば、基材２０に桝目柄が印刷されているので、微生物のコロニーが多数形成された場合に、数ヶ所の桝目内のコロニーを計測按分するだけで、おおよその全体数を求めることができる。 Moreover, according to the cover sheet 10 which concerns on one Embodiment of this invention, since the grid pattern is printed on the base material 20, when many colonies of microorganisms are formed, the colonies in several grids are measured. Just apportioning, you can find the approximate total number.
なお、本発明の一実施形態に係るカバーシートでは、基材２０の一方の面にバインダー樹脂層２１が形成され、他方の面に桝目柄が印刷されている場合について説明したが、基材２０の桝目柄が印刷されている面が、バインダー樹脂層２１の面と対向している構成であってもよい。 In addition, in the cover sheet which concerns on one Embodiment of this invention, although the binder resin layer 21 was formed in one surface of the base material 20, and the grid pattern was printed on the other surface, the base material 20 was demonstrated. The surface on which the grid pattern is printed may be opposed to the surface of the binder resin layer 21.
以下、本発明の実施形態に係るカバーシート１０の各構成について、詳細に説明する。 Hereinafter, each structure of the cover sheet 10 which concerns on embodiment of this invention is demonstrated in detail.
＜バインダー樹脂層＞
本発明のカバーシートは、微生物のコロニーを着色させる発色指示薬を含有するバインダー樹脂層を備えている。発色指示薬は、培養過程で発育する微生物の代謝により産出される特異物質との反応、ｐＨ変化の認識、酵素との反応等によって発色してコロニーを着色し、コロニー数の計測を極めて容易にする効果を有するものである。しかしながら、一般に、発色指示薬は熱等に対して不安定であり、微生物培養器具では、製造工程中に発色指示薬の熱変性や熱分解を生じやすい。本発明のカバーシートによれば、製造工程中も発色指示薬の安定性を維持することが可能となる。本発明のカバーシートにおいて、バインダー樹脂層に含まれる発色指示薬は、特に限定されるものではなく、例えば、一般生菌用としては、トリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ペテトリルテトラゾリウムブルー等のテトラゾリウム塩が挙げられる。大腸菌・大腸菌群用としては、酵素基質反応を利用する５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド（Ｂｌｕｇａｌ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｘ−Ｇｌｕｃ）等が挙げられる。黄色ブドウ球菌用としては、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルフォスフェイト２ナトリウム１水和物、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルフォスフェイト２ナトリウム３水和物等が挙げられる。これらの中でも、ＴＴＣ、Ｘ−Ｇａｌ、及び５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルフォスフェイト２ナトリウム１水和物が好ましく、ＴＴＣがより好ましい。ＴＴＣは、還元性物質であり、熱や光に対して不安定で、かつ、γ線照射時にも変性又は変色しやすいことから、本発明において使用する発色指示薬としてより好適である。
<Binder resin layer>
The cover sheet of the present invention includes a binder resin layer containing a coloring indicator that colors microbial colonies. Coloring indicator colorizes colonies by reacting with specific substances produced by metabolism of microorganisms that grow during the culture process, recognizing pH changes, reacting with enzymes, etc., making it easy to measure the number of colonies It has an effect. However, in general, the color development indicator is unstable with respect to heat or the like, and the microorganism culture apparatus tends to cause thermal denaturation or thermal decomposition of the color development indicator during the production process. According to the cover sheet of the present invention, it is possible to maintain the stability of the coloring indicator during the production process. In the cover sheet of the present invention, the color developing indicator contained in the binder resin layer is not particularly limited. For example, for general viable bacteria, triphenyltetrazolium chloride (TTC), p-tolyltetrazolium red, tetrazolium violet And tetrazolium salts such as petetylyltetrazolium blue. For E. coli and coliforms, 5-bromo-3-indolyl-β-D-galactoside (Blugal), 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyrano using enzyme substrate reaction Sid (X-Gal), 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranoside (X-Gluc) and the like. For S. aureus, 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl phosphate disodium monohydrate, 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl phosphate disodium trihydrate, etc. Can be mentioned. Among these, TTC, X-Gal, and 5-bromo-4-chloro-3-indoxyl phosphate disodium monohydrate are preferable, and TTC is more preferable. TTC is a reducing substance, is unstable to heat and light, and easily denatures or discolors even when irradiated with γ-rays. Therefore, TTC is more suitable as a coloring indicator used in the present invention.
本発明のカバーシートでは、バインダー樹脂層を構成するバインダー樹脂は、上記発色指示薬が溶解可能な溶剤に溶解又は分散し、印刷や塗布が可能であれば、特に限定されず、従来公知の樹脂を用いることができる。例えば、一般生菌用の発色指示薬であるＴＴＣは、アルコール系溶媒や水に溶解することから、ＴＴＣをバインダー樹脂層に含有させる場合には、アルコール系溶媒や水に溶解又は分散する樹脂を選択するとよい。上記したように、発色指示薬は熱に対して不安定であり、分解や変性を生じやすい。そのため、バインダー樹脂層形成時の溶剤除去に、高温加熱を必要としないアルコール系溶媒に溶解又は分散し、印刷や塗布が可能な樹脂を選択することが好ましい。アルコール系溶媒としては、炭素数が１〜５のアルコールが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール等が挙げられる。これらのアルコールを単独又は２種以上混合したものに溶解又は分散し、インキ化可能な樹脂を選択することがより好ましい。このような樹脂としては、ポリアミド系樹脂、ポリ（メタ）アクリル系樹脂、ポリオレフィン系樹脂、ポリエステル系樹脂等の公知の樹脂が挙げられる。これらは、単独又は２種以上を組み合わせて用いることができる。本発明のカバーシートでは、発色指示薬を安定に保持しつつ、培養層と接触した際に徐々に発色指示薬を放出できるという点において、ポリアミド系樹脂が好ましい。また、バインダー樹脂は微生物の発育を阻害しない樹脂であることが好ましい。 In the cover sheet of the present invention, the binder resin that constitutes the binder resin layer is not particularly limited as long as it can be dissolved or dispersed in a solvent in which the coloring indicator is soluble and can be printed or applied. Can be used. For example, TTC, which is a color indicator for live bacteria, dissolves in alcoholic solvents and water. Therefore, when TTC is contained in the binder resin layer, select a resin that dissolves or disperses in alcoholic solvents or water. Good. As described above, the color development indicator is unstable to heat and tends to be decomposed or denatured. Therefore, it is preferable to select a resin that can be dissolved or dispersed in an alcohol solvent that does not require high-temperature heating to remove the solvent when forming the binder resin layer, and that can be printed or applied. The alcohol solvent is preferably an alcohol having 1 to 5 carbon atoms, and examples thereof include methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol and the like. It is more preferable to select a resin that can be dissolved or dispersed in one or a mixture of two or more of these alcohols to make an ink. Examples of such resins include known resins such as polyamide resins, poly (meth) acrylic resins, polyolefin resins, and polyester resins. These can be used alone or in combination of two or more. In the cover sheet of the present invention, a polyamide-based resin is preferable in that the color development indicator can be gradually released when it comes into contact with the culture layer while stably holding the color development indicator. The binder resin is preferably a resin that does not inhibit the growth of microorganisms.
本発明のカバーシートでは、培養層を被覆する際に、該培養層と直接接する態様となることで、バインダー樹脂層内の発色指示薬が培養層側に移行する。そのため、バインダー樹脂は、粘着性を有していないものが好ましい。バインダー樹脂が粘着性を有していると、カバーシートを培養層に被覆する際に、粘着部位が基材や容器、培養層等に接触することで隙間が生じやすくなったり、シワがよりやすくなったりする等の問題が発生する確率が高くなるからである。その他にも、製造時やキット販売する際に粘着性が作業に悪影響を与えたり、製品を積み重ねる際に製品同士が張り付いたりする可能性があるため、粘着性を有するバインダー樹脂層に離型紙を貼り合わせる等の工夫が必要となる場合がある。その結果、製品のコスト増加に繋がる。 In the cover sheet of the present invention, when the culture layer is coated, the color development indicator in the binder resin layer moves to the culture layer side by being in direct contact with the culture layer. For this reason, the binder resin preferably does not have adhesiveness. When the binder resin has adhesiveness, when the cover sheet is coated on the culture layer, the adhesive part comes into contact with the base material, container, culture layer, etc., and gaps are likely to occur, and wrinkles are more likely to occur. This is because the probability of occurrence of a problem such as becoming higher becomes higher. In addition, the adhesive may adversely affect work during manufacturing and kit sales, and products may stick to each other when stacking products, so release paper is applied to the adhesive binder resin layer. It may be necessary to devise such as pasting together. As a result, the cost of the product is increased.
なお、バインダー樹脂の粘着性の有無を判断する指標としては、例えばガラス転移点（Ｔｇ）が挙げられ、本発明では、バインダー樹脂のガラス転移点が５０℃以上であることが好ましい。バインダー樹脂のガラス転移点が５０℃以上であれば、通常、室温下で行われる製造や培養作業時にバインダー樹脂による粘着力が小さく、上記問題が発生しにくくなる。ガラス転移点は、例えば動的粘弾性測定（ＤＭＡ）や示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定することができる。また、バインダー樹脂の粘着性の有無は、貯蔵弾性率（Ｇ’）やタック力によっても判断することができる。貯蔵弾性率（Ｇ’）はＤＭＡにより測定することができ、本発明では、室温下においてこの値が１０８Ｐａ以上であることが好ましい。タック力は、例えば株式会社ＲＨＥＳＣＡ製のプローブタック試験機ＴＡＣ−ＩＩを用い、ＪＩＳ Ｚ ０２３７に準拠した方法にて測定することができ、本発明では、室温下においてこの値が１００ｋＰａ以下であることが好ましく、１０ｋＰａ以下であることがより好ましい。貯蔵弾性率やタック力が上記値であれば、ガラス転移点の場合と同様に、製造や培養作業時において上記問題が発生しにくくなる。 An example of an index for determining whether or not the binder resin is sticky is the glass transition point (Tg). In the present invention, the glass transition point of the binder resin is preferably 50 ° C. or higher. When the glass transition point of the binder resin is 50 ° C. or higher, the adhesive force due to the binder resin is usually small at the time of production and culturing operations performed at room temperature, and the above-described problem is unlikely to occur. The glass transition point can be measured, for example, by dynamic viscoelasticity measurement (DMA) or differential scanning calorimetry (DSC). Moreover, the presence or absence of the adhesiveness of the binder resin can also be determined by the storage elastic modulus (G ′) and the tack force. The storage elastic modulus (G ′) can be measured by DMA. In the present invention, this value is preferably 10 8 Pa or more at room temperature. The tack force can be measured by, for example, a method based on JIS Z 0237 using a probe tack tester TAC-II manufactured by RHESCA, and in the present invention, this value is 100 kPa or less at room temperature. Is preferable, and it is more preferable that it is 10 kPa or less. If the storage elastic modulus and tack force are the above values, the above-mentioned problem is unlikely to occur at the time of manufacturing and culturing operations as in the case of the glass transition point.
バインダー樹脂層における発色指示薬の含有量は、含有させる発色指示薬の種類により異なるため、一概に規定することはできない。そのため、発色指示薬の種類に応じて、適宜、調整するとよい。通常、コロニーを良好に視認できる着色が可能で、かつ、微生物の発育を阻害しない適切な量を含有させる。 Since the content of the color indicator in the binder resin layer varies depending on the type of the color indicator to be contained, it cannot be generally specified. Therefore, it is good to adjust appropriately according to the kind of coloring indicator. Usually, the coloring which can recognize a colony favorably is possible, and the appropriate quantity which does not inhibit microbial growth is contained.
バインダー樹脂層の厚みは、特に限定されるものではないが、好ましくは０．０５〜５．０μｍであり、より好ましくは０．１〜１．５μｍである。０．０５〜５．０μｍであれば、所望の着色効果を発揮させるために必要な量の発色指示薬を含有させることができ、かつ、グラビア印刷法による形成が可能となるため、カバーシートの生産効率を向上させることができる。なお、５．０μｍを超えると、グラビア印刷法により形成した場合に溶剤の乾燥が困難になるためカバーシートの生産速度が遅くなったり、カバーシートの巻き取り保管が困難になったりする等の問題が生じたり、透明性や柔軟性が低下することにより、操作性が悪くなったりする場合がある。また、０．０５μｍに満たないと、所望の着色効果を発揮させるために、発色指示薬の含有量を増加させる必要が生じ、発色指示薬を安定な状態でバインダー樹脂層に含有させることが困難となる場合がある。バインダー樹脂層の形成方法は、特に限定されるものではなく、従来公知の印刷、塗布、コーティング等の手法により形成することができる。印刷による形成方法としては、グラビア印刷法、フレキソ印刷法、スクリーン印刷法等が挙げられる。塗布による形成方法としては、ディスペンサーによる塗布等が挙げられる。コーティングによる形成方法としては、ナイフコート、ダイコート、リップコート、ロールコート、リバースコート等が挙げられる。 Although the thickness of a binder resin layer is not specifically limited, Preferably it is 0.05-5.0 micrometers, More preferably, it is 0.1-1.5 micrometers. If it is 0.05 to 5.0 μm, it is possible to contain a coloring indicator in an amount necessary for exhibiting a desired coloring effect, and formation by a gravure printing method is possible. Efficiency can be improved. If the thickness exceeds 5.0 μm, it becomes difficult to dry the solvent when it is formed by the gravure printing method, so that the production speed of the cover sheet is slow, and the cover sheet is difficult to wind and store. May occur, and operability may deteriorate due to a decrease in transparency and flexibility. On the other hand, if it is less than 0.05 μm, it is necessary to increase the content of the color indicator in order to exert the desired coloring effect, and it becomes difficult to contain the color indicator in the binder resin layer in a stable state. There is a case. The formation method of a binder resin layer is not specifically limited, It can form by conventionally well-known methods, such as printing, application | coating, and coating. Examples of the forming method by printing include a gravure printing method, a flexographic printing method, and a screen printing method. Examples of the forming method by application include application by a dispenser. Examples of the forming method by coating include knife coating, die coating, lip coating, roll coating, and reverse coating.
上記バインダー樹脂層には、本発明の目的を損なわない範囲で必要に応じて、滑り性向上のための添加剤やブロッキング防止剤等の各種添加剤を配合してもよい。 In the binder resin layer, various additives such as an additive for improving slipperiness and an anti-blocking agent may be blended as necessary within the range not impairing the object of the present invention.
＜基材＞
本発明のカバーシートでは、基材は、特に限定されるものでないが、防水性、水蒸気不透過性を有すると同時に、微生物の培養後、カバーシートを通してコロニーを観察したり、計数したりできるように、透明であることが好ましい。例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル等のプラスチックフィルムが好適である。カバーシートは、培養層や被検液を被覆する際に作業を効率化するために、適度な柔軟性を有することが好ましい。この点を考慮すると、これらの中でもポリエステルフィルムやポリオレフィンフィルムがより好適である。
<Base material>
In the cover sheet of the present invention, the base material is not particularly limited, but it has waterproofness and water vapor impermeability, and at the same time, colonies can be observed and counted through the cover sheet after cultivation of microorganisms. Furthermore, it is preferable that it is transparent. For example, polyolefin films such as polyethylene and polypropylene, and plastic films such as polyester, polyamide, polystyrene, polycarbonate, and polyvinyl chloride are suitable. The cover sheet preferably has appropriate flexibility in order to improve work efficiency when coating the culture layer or the test solution. Considering this point, among these, a polyester film and a polyolefin film are more preferable.
基材の厚みは、特に限定されるものではないが、好ましくは１０〜２００μｍであり、より好ましくは２０〜７０μｍである。基材の厚みが、上記範囲内であれば、適度な柔軟性を有するので、カバーシートの作業性が良好となる。また、機械的強度が十分であり、連続帯状で供給して加工することも可能である。なお、基材の大きさは、どのような形状であってもよいが、雑菌の進入を防ぐため、培養層を被覆できるように培養層よりも大きいサイズであることが好ましい。 Although the thickness of a base material is not specifically limited, Preferably it is 10-200 micrometers, More preferably, it is 20-70 micrometers. If the thickness of the substrate is within the above range, the cover sheet has good flexibility, so that the workability of the cover sheet is good. Further, it has sufficient mechanical strength, and can be supplied and processed in a continuous belt shape. In addition, although the magnitude | size of a base material may be what kind of shape, in order to prevent invasion of various bacteria, it is preferable that it is a size larger than a culture layer so that a culture layer can be coat | covered.
本発明のカバーシートでは、基材上にバインダー樹脂層を形成する。そこで、バインダー樹脂層と基材との密着性を向上させるために、表面処理を施した基材を使用することが好ましい。表面処理は、特に限定されるものではなく、例えば、コロナ放電処理、オゾン処理、グロー放電処理、酸素ガス又は窒素ガスを用いる低温プラズマ処理等の公知の表面処理が挙げられる。また、アンカーコート剤の塗布による表面処理を施してもよい。 In the cover sheet of the present invention, a binder resin layer is formed on the substrate. Therefore, in order to improve the adhesion between the binder resin layer and the base material, it is preferable to use a base material that has been subjected to a surface treatment. The surface treatment is not particularly limited, and examples thereof include known surface treatments such as corona discharge treatment, ozone treatment, glow discharge treatment, and low-temperature plasma treatment using oxygen gas or nitrogen gas. Moreover, you may perform the surface treatment by application | coating of an anchor coating agent.
本発明のカバーシートでは、基材に桝目柄が印刷されていてもよい。桝目柄が印刷された基材を備えているカバーシートによれば、コロニーが多数形成された場合に、数ヶ所の枡目内の菌数を計測按分するだけで、おおよその全体数を求めることができる。使用するインクは、水に不溶で、微生物の生育に影響を与えないものを使用する。印刷の版式は、着色剤、樹脂、溶剤等の選択範囲が広い点でグラビア印刷が好ましい。枡目の大きさは１ｃｍ角程度が適当である。 In the cover sheet of the present invention, a grid pattern may be printed on the base material. According to the cover sheet equipped with a base material printed with a checkered pattern, when a large number of colonies are formed, just calculate and apportion the number of bacteria in a few checkered points to obtain an approximate total number Can do. The ink used is insoluble in water and does not affect the growth of microorganisms. The printing plate type is preferably gravure printing because it has a wide selection range of colorants, resins, solvents and the like. The size of the mesh is about 1 cm square.
［カバーシートの製造方法］
次に、本発明の一実施形態に係るカバーシートの製造方法について詳細に説明する。
[Method for manufacturing cover sheet]
Next, the manufacturing method of the cover sheet which concerns on one Embodiment of this invention is demonstrated in detail.
一例として、発色指示薬としてＴＴＣ、バインダーとしてポリアミド樹脂を選択し、グラビア印刷法により、基材上にバインダー樹脂層を形成する場合について、説明する。まず、アルコール系溶媒にポリアミド樹脂を溶解させ、グラビア印刷が可能な粘度のバインダー溶液を調製する。該バインダー溶液に、発色指示薬であるＴＴＣを溶解させ、バインダー樹脂層形成用塗工液を調製する。そして、基材の表面処理を施した面に、バインダー樹脂層形成用塗工液をグラビア印刷した後、乾燥させ、バインダー樹脂層を形成することにより、カバーシートを得ることができる。得られたカバーシートは、γ線照射により滅菌処理を施すことで製品とする。なお、上記のように、グラビア印刷によってバインダー樹脂層を形成すると、７０℃、１秒以下での乾燥が可能となる。 As an example, a case will be described in which TTC is selected as a color development indicator, polyamide resin is selected as a binder, and a binder resin layer is formed on a substrate by a gravure printing method. First, a polyamide resin is dissolved in an alcohol solvent to prepare a binder solution having a viscosity capable of gravure printing. In the binder solution, TTC, which is a color development indicator, is dissolved to prepare a coating solution for forming a binder resin layer. And a cover sheet can be obtained by carrying out the gravure printing of the coating liquid for binder resin layer formation on the surface which surface-treated the base material, and drying and forming a binder resin layer. The obtained cover sheet is sterilized by γ-ray irradiation to obtain a product. As described above, when the binder resin layer is formed by gravure printing, drying at 70 ° C. for 1 second or less becomes possible.
滅菌処理としては、ＥＯＧによる滅菌も可能であるが、有害なガスを使用するため人体への影響が懸念される。そのため、より安全性の高いγ線照射による滅菌処理を採用することが好ましい。基本的に、γ線照射すると多くの成分はラジカルを発生する。ラジカルは非常に反応性が高いので、ＴＴＣ等の発色指示薬の変性（還元）を促進する。培養層中には、栄養成分（種々のタンパク成分）、ゲル化剤、バインダー等が存在しているので、ラジカルの発生量が多く、培養層中に発色指示薬が含まれていると、発色指示薬が変性しやすい。しかしながら、本発明では、上記のラジカルが多く発生しやすい成分を含まないカバーシートに発色指示薬を含有させているので、γ線照射したとしてもラジカルの発生量が少なく、変性が生じ難いと推測される。 As the sterilization treatment, sterilization by EOG is possible, but since harmful gas is used, there is a concern about the influence on the human body. Therefore, it is preferable to employ a sterilization process by γ-ray irradiation with higher safety. Basically, many components generate radicals when irradiated with gamma rays. Since radicals are very reactive, they promote the denaturation (reduction) of color indicators such as TTC. Nutritional components (various protein components), gelling agents, binders, etc. are present in the culture layer, so that a large amount of radicals are generated, and if a color development indicator is contained in the culture layer, a color development indicator Is easily denatured. However, in the present invention, since the coloring indicator is contained in the cover sheet that does not contain a component that is likely to generate a large amount of radicals, it is presumed that the amount of radical generation is small even when γ-irradiation is performed, and that denaturation does not easily occur. The
カバーシートの厚みは、１０〜２００μｍであることが好ましく、２０〜８０μｍであることがより好ましい。上記範囲内であれば、作業性が良好となる。 The thickness of the cover sheet is preferably 10 to 200 μm, and more preferably 20 to 80 μm. If it is in the said range, workability | operativity will become favorable.
［微生物検査用キット］
本発明では、上記カバーシートと、該カバーシート中に含まれている発色指示薬を実質的に含有しない培養層を備えている微生物培養シートとを組み合わせて、微生物検査用キットとすることができる。ここで、発色指示薬を実質的に含有しないとは、発色指示薬としての機能を発揮する程度の量を含有していないことを意味する。
[Microbiological test kit]
In the present invention, the above-described cover sheet and a microorganism culture sheet provided with a culture layer that does not substantially contain the color-developing indicator contained in the cover sheet can be combined to form a microorganism testing kit. Here, “substantially not containing a color indicator” means that it does not contain an amount that exhibits a function as a color indicator.
図２は、本発明の一実施形態に係る微生物検査用キット３０を模式的に示した断面図である。図２において、カバーシート１０は、基材２０の一方の面に発色指示薬を含有するバインダー樹脂層２１がカバーシート１０の最外層となるように形成された構成となっている。そして、基材の他方の面には、桝目柄が印刷されている。そして、微生物培養シート４０は、基材５０上に、上記カバーシート１０中に含まれている発色指示薬を含有しない培養層５１が形成されている。 FIG. 2 is a cross-sectional view schematically showing a microorganism testing kit 30 according to an embodiment of the present invention. In FIG. 2, the cover sheet 10 has a configuration in which a binder resin layer 21 containing a coloring indicator is formed on one surface of a base material 20 as the outermost layer of the cover sheet 10. A check pattern is printed on the other surface of the substrate. In the microorganism culture sheet 40, a culture layer 51 that does not contain the coloring indicator contained in the cover sheet 10 is formed on the substrate 50.
本発明の一実施形態に係る微生物検査用キット３０によれば、熱に不安定な発色指示薬を含有するバインダー樹脂層２１を備えているカバーシート１０と、該カバーシート１０
中に含まれている発色指示薬を含有しない培養層５１を備えている微生物培養シート４０と、を別々に製造し、滅菌処理を行うことで発色指示薬を安定に保持した微生物検査用キット３０とすることができる。これらの微生物検査用キット３０を用いることで、微生物検査に際して、発色指示薬の安定性が維持された状態での微生物検査が可能となり、発色指示薬が本来有する効果を十分に発揮させることができる。
According to the microorganism testing kit 30 according to the embodiment of the present invention, the cover sheet 10 including the binder resin layer 21 containing the color indicator that is unstable to heat, and the cover sheet 10.
The microorganism culture sheet 40 provided with the culture layer 51 that does not contain the coloring indicator contained therein is manufactured separately and sterilized to obtain a microorganism testing kit 30 that stably holds the coloring indicator. be able to. By using these microbial test kits 30, microbial tests can be performed in a state in which the stability of the coloring indicator is maintained during the microbial testing, and the effects inherent to the coloring indicator can be sufficiently exhibited.
なお、図２に示す本発明の一実施形態に係る微生物検査用キット３０では、基材５０上に培養層５１のみが形成されている微生物培養シート４０について説明したが、該微生物培養シート４０は、培養層５１の外周に疎水性樹脂からなる枠層が形成された構成となっていてもよい。微生物培養シート４０が、培養層５１の外周に疎水性樹脂からなる枠層を備えていると、被検液を培養層５１上に接種した場合に、被検液が枠層まで速やかに拡がるため、培養層５１による被検液の吸水を待たずにカバーシート１０を被覆することができ、接種操作を短時間で行うことが可能となる。 In the microorganism testing kit 30 according to the embodiment of the present invention shown in FIG. 2, the microorganism culture sheet 40 in which only the culture layer 51 is formed on the base material 50 has been described. The frame layer made of a hydrophobic resin may be formed on the outer periphery of the culture layer 51. When the microorganism culture sheet 40 includes a frame layer made of a hydrophobic resin on the outer periphery of the culture layer 51, the test solution spreads rapidly to the frame layer when the test solution is inoculated on the culture layer 51. The cover sheet 10 can be covered without waiting for the culture layer 51 to absorb the test solution, and the inoculation operation can be performed in a short time.
［微生物検査用キットの使用方法］
図３は、本発明の一実施形態に係る微生物検査用キットの使用態様の一例を示す断面図である。本発明の一実施形態に係る微生物検査用キットは、発色指示薬を含有するバインダー樹脂層を最外層に備えているカバーシートと、微生物を培養可能な培養層を備えている微生物培養シートとから構成されている。本発明の一実施形態に係る微生物検査用キット３０では、微生物培養シート４０に備えられている培養層５１上に被検液を接種した後、カバーシート１０の最外層に備えられているバインダー樹脂層２１の面と、微生物培養シート４０に備えられている培養層５１の面とが対向するように、カバーシート１０を培養層５１に被覆させる。そうすると、バインダー樹脂層２１の面が培養層５１の面に接触し、バインダー樹脂層２１に含まれる発色指示薬が培養層５１側に移行する。ここで、カバーシート１０を培養層５１に被覆させるタイミングは、図３（ａ）に示すように、培養層５１上に被検液５２を接種した直後であってもよい。このように、バインダー樹脂層２１の面が被検液５２の面に接触する態様で被覆することで、バインダー樹脂層２１中の発色指示薬を速やかに培養層５１側に移行させることができる。また、図３（ｂ）に示すように、培養層５１上に被検液５２を接種した後、被検液５２を吸水して膨潤した培養層５１の面に、バインダー樹脂層２１の面が接触する態様で被覆してもよい。このように被覆することで、コロニーが生成される培養層５１の表面に、発色指示薬を効率的に移行させることができる。
[How to use microbiological testing kit]
FIG. 3 is a cross-sectional view showing an example of how the microorganism testing kit according to one embodiment of the present invention is used. A kit for testing microorganisms according to an embodiment of the present invention includes a cover sheet having a binder resin layer containing a color developing indicator as an outermost layer, and a microorganism culture sheet having a culture layer capable of culturing microorganisms. Has been. In the microorganism testing kit 30 according to an embodiment of the present invention, the binder resin provided in the outermost layer of the cover sheet 10 after inoculating the test solution on the culture layer 51 provided in the microorganism culture sheet 40. The cover sheet 10 is covered with the culture layer 51 so that the surface of the layer 21 and the surface of the culture layer 51 provided in the microorganism culture sheet 40 face each other. If it does so, the surface of the binder resin layer 21 will contact the surface of the culture layer 51, and the color development indicator contained in the binder resin layer 21 will transfer to the culture layer 51 side. Here, the timing at which the cover sheet 10 is coated on the culture layer 51 may be immediately after inoculating the test solution 52 on the culture layer 51 as shown in FIG. Thus, by covering the surface of the binder resin layer 21 so as to be in contact with the surface of the test liquid 52, the color development indicator in the binder resin layer 21 can be quickly transferred to the culture layer 51 side. Further, as shown in FIG. 3 (b), after inoculating the test solution 52 on the culture layer 51, the surface of the binder resin layer 21 is on the surface of the culture layer 51 swollen by absorbing the test solution 52. You may coat | cover in the aspect which contacts. By covering in this way, the coloring indicator can be efficiently transferred to the surface of the culture layer 51 where the colonies are generated.
［微生物培養シート］
本発明の微生物検査用キットに含まれる微生物培養シートは、上記カバーシート中に含まれている発色指示薬を含有せず、かつ、微生物を培養可能な培養層を備えていれば、特に限定されるものではない。例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル等のプラスチックシート等の耐水性と耐熱性とを有する基材上に、培養層が形成されているものが挙げられる。培養層は、微生物を培養するための栄養成分とコロニー形成を可能とする足場となるようなもの（例えば、ゲル状物質や不織布等）からなる層であることが好ましい。より好ましくは、バインダーに、ゲル化剤、栄養成分、選択剤等の他の成分を含有させた培地液を印刷や塗布することにより形成した培養層を使用する。ここで、バインダーとは、ゲル化剤、栄養成分、選択剤等の他の成分を基材に固着させる役割を有するものであり、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンオキサイド、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール等が挙げられる。ゲル化剤としては、例えば、カラギーナン、グアーガム、キタンサンガム、ローカストビーンガム、アルギン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等が挙げられる。ゲル化剤によれば、被検液の滴下により培養層が増粘又はゲル化し、微生物の発育に適した環境となるとともに、カバーシートとの密着性が向上するので、バインダー樹脂層から培養層へ発色指示薬を確実かつ速やかに移行させることができる。また、培養時の水分の蒸発を抑制することもできる。
[Microbe culture sheet]
The microorganism culture sheet contained in the microorganism testing kit of the present invention is not particularly limited as long as it does not contain the coloring indicator contained in the cover sheet and has a culture layer capable of culturing microorganisms. It is not a thing. Examples thereof include those in which a culture layer is formed on a substrate having water resistance and heat resistance, such as plastic sheets such as polyester, polyethylene, polypropylene, polystyrene, polycarbonate, and polyvinyl chloride. The culture layer is preferably a layer made of a nutrient component for culturing microorganisms and a scaffold (for example, a gel-like substance or a nonwoven fabric) that becomes a scaffold that enables colony formation. More preferably, a culture layer formed by printing or applying a medium solution containing other components such as a gelling agent, a nutrient component, and a selective agent in a binder is used. Here, the binder has a role of fixing other components such as a gelling agent, a nutrient component, and a selective agent to the base material. For example, polyvinyl pyrrolidone, polyethylene oxide, hydroxypropyl cellulose, polyvinyl alcohol, Can be mentioned. Examples of the gelling agent include carrageenan, guar gum, chitansan gum, locust bean gum, algin, carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose and the like. According to the gelling agent, the culture layer is thickened or gelled by dropping the test solution, and it becomes an environment suitable for the growth of microorganisms, and the adhesion with the cover sheet is improved. The color development indicator can be transferred reliably and promptly. In addition, evaporation of moisture during culture can be suppressed.
栄養成分は、微生物の種類に応じて、適宜選択することができる。例えば、一般生菌検査用としては、酵母エキス・ペプトン・ブドウ糖混合物、肉エキス・ペプトン混合物、ペプトン・大豆ペプトン・ブドウ糖混合物等や、これらにリン酸二カリウム及び／又は塩化ナトリウムを加えた混合物が挙げられ、大腸菌・大腸菌群検査用としては、デソキシコール酸ナトリウム・ペプトン・クエン酸鉄アンモニウム・塩化ナトリウム・リン酸二カリウム・乳糖混合物、ペプトン・乳糖・リン酸二カリウム混合物等が挙げられる。これらの中から、発育させようとする微生物の種類に応じて、１種類又はそれ以上を選択し、混合して使用することができる。選択剤は、検出目的以外の微生物の発育を抑える役割を有するものであり、例えば、抗生物質、合成抗菌剤、静菌又は殺菌作用を有する色素等が挙げられる。 The nutrient component can be appropriately selected according to the type of microorganism. For example, for the inspection of general viable bacteria, yeast extract / pepton / glucose mixture, meat extract / pepton mixture, peptone / soybean peptone / glucose mixture, etc., and mixtures obtained by adding dipotassium phosphate and / or sodium chloride to these Examples of the test for Escherichia coli and coliform group include sodium desoxycholate / peptone / ammonium iron citrate / sodium chloride / dipotassium phosphate / lactose mixture, and peptone / lactose / dipotassium phosphate mixture. From these, one or more types can be selected and mixed for use according to the type of microorganism to be grown. The selection agent has a role of suppressing the growth of microorganisms other than the detection purpose, and examples thereof include antibiotics, synthetic antibacterial agents, bacteriostatic or bactericidal dyes, and the like.
本発明の微生物検査用キットに含まれる微生物培養シートは、例えば、以下の方法により製造することができる。バインダーをアルコール系溶媒に溶解させた後、該溶解液に、ゲル化剤、栄養成分、選択剤等の成分を少なくとも１種を含有させた培地液を調製し、該調製液を基材上にパターン形成する。次いで、上記培地液に含まれる上記アルコールを除去して培養層を形成する。培養層の外周に枠層を備える微生物培養シートの場合には、培養層の形成前又は形成後に、基材上に疎水性樹脂を用いて枠層をパターン形成する。疎水性樹脂としては、例えば、ＵＶ硬化樹脂、ホットメルト樹脂、熱発泡インク、ＵＶ発泡剤等を好適に使用することができる。 The microorganism culture sheet contained in the kit for microorganism testing of the present invention can be produced, for example, by the following method. After dissolving the binder in an alcohol-based solvent, a medium solution containing at least one component such as a gelling agent, a nutrient component, and a selective agent is prepared in the solution, and the prepared solution is placed on the substrate. Form a pattern. Next, the alcohol contained in the medium solution is removed to form a culture layer. In the case of a microorganism culture sheet having a frame layer on the outer periphery of the culture layer, the frame layer is patterned on the substrate using a hydrophobic resin before or after the culture layer is formed. As the hydrophobic resin, for example, UV curable resin, hot melt resin, thermally foamed ink, UV foaming agent and the like can be suitably used.
以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら制限を受けるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention does not receive a restriction | limiting at all in these description.
［製造例１］微生物培養シート（Ａ）の製造方法
ゲル化剤としてグアーガム粉末（商品名「ＮＥＯＶＩＳＣＯ Ｇ」，４００メッシュタイプ，三晶社製）６０ｇ、栄養成分としてトリプトン（商品名「ＢＡＣＴ ＴＲＹＰＴＯＮＥ」，Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）３．２６ｇ、肉エキス（商品名「Ｌａｂ−Ｌｅｍｃｏ」，Ｏｘｏｉｄ社製）０．８２ｇ、酵母エキス（商品名「ＹＥＡＳＴ ＥＸＴＲＡＣＴ」，Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）０．０３ｇ、ブドウ糖（商品名「Ｄ−（＋）−ＧＬＵＣＯＳＥ」，和光純薬工業社製）０．１６ｇ、塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）０．４１ｇ、及びリン酸水素二ナトリウム（和光純薬工業社製）０．３７ｇを培養時に影響を与えない固着剤（ポリビニルピロリドン，商品名「ＰＶＰ Ｋ−９０」，日本触媒社製）のメタノール溶液と混合して培養層形成用培地液を調製した。そして、この培養層形成用培地液を用いて、基材シート（ポリエチレンテレフタレートフィルム，商品名「テイジンテトロンフィルム」，帝人デュポンフィルム社製）上に、ワイヤバーによってコーティングすることで培養層を形成し、微生物培養シート（Ａ）を得た。
[Production Example 1] Production Method of Microorganism Culture Sheet (A) Guar gum powder (trade name “NEOVISCO G”, 400 mesh type, manufactured by Sankisha Co., Ltd.) 60 g as gelling agent, and tryptone (trade name “BACT TRYPTONE” as nutritional component) , Becton, Dickinson and Company) 3.26 g, meat extract (trade name “Lab-Lemco”, Oxoid) 0.82 g, yeast extract (trade name “YEAST EXTRAACT”, Becton, Dickinson and Company) 0.03 g, glucose (trade name “D-(+)-GLUCOSE”, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.16 g, sodium chloride (produced by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.41 g, and disodium hydrogen phosphate ( Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.37g is affected during culture No sticking agents (polyvinylpyrrolidone, trade name "PVP K-90", manufactured by Nippon Shokubai Co., Ltd.) to prepare a methanol solution and then mixed culture layer forming medium solution. And, using this culture layer forming medium solution, a culture layer is formed by coating with a wire bar on a base sheet (polyethylene terephthalate film, trade name “Teijin Tetron Film”, manufactured by Teijin DuPont Films Ltd.) A microorganism culture sheet (A) was obtained.
［製造例２］微生物培養シート（Ｂ）の製造方法
ゲル化剤としてグアーガム粉末（商品名「ＮＥＯＶＩＳＣＯ Ｇ」，４００メッシュタイプ，三晶社製）６０ｇ、栄養成分としてトリプトン（商品名「ＢＡＣＴ ＴＲＹＰＴＯＮＥ」，Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）３．２６ｇ、肉エキス（商品名「Ｌａｂ−Ｌｅｍｃｏ」，Ｏｘｏｉｄ社製）０．８２ｇ、酵母エキス（商品名「ＹＥＡＳＴ ＥＸＴＲＡＣＴ」，Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）０．０３ｇ、ブドウ糖（商品名「Ｄ−（＋）−ＧＬＵＣＯＳＥ」，和光純薬工業社製）０．１６ｇ、塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）０．４１ｇ、リン酸水素２ナトリウム（和光純薬工業社製）０．３７ｇ、及びトリフェニルテトラゾリウムクロライド（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）０．０２ｇを培養時に影響を与えない固着剤（ポリビニルピロリドン，商品名「ＰＶＰ Ｋ−９０」，日本触媒社製）のメタノール溶液と混合して、培養層形成用培地液を調製した。そして、この培養層形成用培地液を用いて、基材シート（ポリエチレンテレフタレートフィルム，商品名「テイジンテトロンフィルム」，帝人デュポンフィルム社製）上に、ワイヤバーによってコーティングすることで培養層を形成し、微生物培養シート（Ｂ）を得た。
[Production Example 2] Production method of microorganism culture sheet (B) Guar gum powder (trade name "NEOVISCO G", 400 mesh type, manufactured by Sankisha) 60 g as gelling agent, tryptone (trade name "BACT TRYPTONE" as nutritional component) , Becton, Dickinson and Company) 3.26 g, meat extract (trade name “Lab-Lemco”, Oxoid) 0.82 g, yeast extract (trade name “YEAST EXTRAACT”, Becton, Dickinson and Company) 0.03 g, glucose (trade name “D-(+)-GLUCOSE”, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.16 g, sodium chloride (produced by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.41 g, disodium hydrogen phosphate (Japanese) (Manufactured by Kojun Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.37 g and triphenyl tet For culture layer formation, 0.02 g of Zorium chloride (manufactured by Aldrich) is mixed with a methanol solution of a fixing agent (polyvinylpyrrolidone, trade name “PVP K-90”, manufactured by Nippon Shokubai Co., Ltd.) that does not affect the culture. A medium solution was prepared. And, using this culture layer forming medium solution, a culture layer is formed by coating with a wire bar on a base sheet (polyethylene terephthalate film, trade name “Teijin Tetron Film”, manufactured by Teijin DuPont Films Ltd.) A microorganism culture sheet (B) was obtained.
［製造例３］カバーシート（Ａ）の製造方法
ポリアミド樹脂（商品名「バーサミド７１３」，コグニスジャパン社製）を１−プロパノール及び変性エタノールの混合溶媒（混合比＝１：１）に溶解させ、グラビア印刷が可能な粘度となるように調製した。これに、発色指示薬であるトリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）をさらに溶解させ、バインダー樹脂層形成用塗工液を調製した。そして、厚さ４０μｍのＯＰＰフィルム（商品名「ＯＰ−Ｕ１」，片面コロナ処理，東セロ社製）のコロナ処理面に、バインダー樹脂層形成用塗工液をグラビア印刷した後、乾燥させ、バインダー樹脂層（乾燥後の厚み：約１μｍ，乾燥後の塗布量：約１．０ｇ／ｍ２，ＴＴＣの含有量：約６０ｍｇ／ｍ２）を形成し、カバーシート（Ａ）を得た。
[Production Example 3] Production method of cover sheet (A) Polyamide resin (trade name “Versamide 713”, manufactured by Cognis Japan) was dissolved in a mixed solvent of 1-propanol and denatured ethanol (mixing ratio = 1: 1), The viscosity was adjusted to allow gravure printing. To this, triphenyltetrazolium chloride (TTC), which is a color development indicator, was further dissolved to prepare a coating solution for forming a binder resin layer. Then, the coating liquid for forming the binder resin layer is gravure-printed on the corona-treated surface of the 40 μm-thick OPP film (trade name “OP-U1”, single-sided corona treatment, manufactured by Tosero Co., Ltd.), then dried, and the binder resin A layer (thickness after drying: about 1 μm, coating amount after drying: about 1.0 g / m 2 , TTC content: about 60 mg / m 2 ) was formed to obtain a cover sheet (A).
［製造例４］カバーシート（Ｂ）の製造方法
アクリル酸エステル樹脂を酢酸エチルとメタノールとの混合溶媒（混合比４：１）に溶解させたもの（商品名「ＮＫポリマーＭＫ−１００ＩＣ」，新中村化学社製）に、発色指示薬であるトリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）を溶解させ、インキを調製した。そして、厚さ４０μｍのＯＰＰフィルム（商品名「ＯＰ−Ｕ１」，片面コロナ処理，東セロ社製）のコロナ処理面に、上記インキをワイヤバーにより塗工した後、６０℃で２分間乾燥させ、バインダー樹脂層（乾燥後の塗布量：約２．０ｇ／ｍ２，ＴＴＣの含有量：約８０ｍｇ／ｍ２）を形成し、カバーシート（Ｂ）を得た。
[Production Example 4] Production method of cover sheet (B) A product obtained by dissolving an acrylate resin in a mixed solvent of ethyl acetate and methanol (mixing ratio 4: 1) (trade name "NK Polymer MK-100IC", new (Nakamura Chemical Co., Ltd.) was dissolved in triphenyltetrazolium chloride (TTC), which is a color development indicator, to prepare an ink. The ink was applied to the corona-treated surface of a 40 μm thick OPP film (trade name “OP-U1”, single-sided corona treatment, manufactured by Tosero Co., Ltd.) with a wire bar, and then dried at 60 ° C. for 2 minutes. A resin layer (coating amount after drying: about 2.0 g / m 2 , content of TTC: about 80 mg / m 2 ) was formed to obtain a cover sheet (B).
［製造例５］カバーシート（Ｃ）の製造方法
塩素化ポリプロピレン樹脂を水に分散させたエマルジョン溶液（商品名「スーパークロンＥ−５０３」，日本製紙ケミカル社製）に、発色指示薬であるトリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）を溶解させ、インキを調製した。そして、厚さ４０μｍのＯＰＰフィルム（商品名「ＯＰ−Ｕ１」，片面コロナ処理，東セロ社製）のコロナ処理面に、上記インキをワイヤバーにより塗工した後、６０℃で２分間乾燥させ、バインダー樹脂層（乾燥後の塗布量：約１．５ｇ／ｍ２，ＴＴＣの含有量：約８０ｍｇ／ｍ２）を形成し、カバーシート（Ｃ）を得た。
[Production Example 5] Production method of cover sheet (C) Triphenyl which is a color indicator in an emulsion solution (trade name "Supercron E-503", manufactured by Nippon Paper Chemical Co., Ltd.) in which chlorinated polypropylene resin is dispersed in water. Tetrazolium chloride (TTC) was dissolved to prepare an ink. The ink was applied to the corona-treated surface of a 40 μm thick OPP film (trade name “OP-U1”, single-sided corona treatment, manufactured by Tosero Co., Ltd.) with a wire bar, and then dried at 60 ° C. for 2 minutes. A resin layer (coating amount after drying: about 1.5 g / m 2 , TTC content: about 80 mg / m 2 ) was formed to obtain a cover sheet (C).
＜実施例１＞
製造例１で得た培養層を有する微生物培養シート（Ａ）と、製造例３で得たバインダー樹脂層を有するカバーシート（Ａ）とを、培養層とバインダー樹脂層とが対向するように重ね、一辺の端部を接着し、実施例１の微生物培養器具を得た。
<Example 1>
The microorganism culture sheet (A) having the culture layer obtained in Production Example 1 and the cover sheet (A) having the binder resin layer obtained in Production Example 3 are stacked so that the culture layer and the binder resin layer face each other. The edge part of one side was adhere | attached and the microorganism culture instrument of Example 1 was obtained.
＜実施例２＞
製造例１で得た培養層を有する微生物培養シート（Ａ）と、製造例４で得たバインダー樹脂層を有するカバーシート（Ｂ）とを、培養層とバインダー樹脂層とが対向するように重ね、一辺の端部を接着し、実施例２の微生物培養器具を得た。
<Example 2>
The microorganism culture sheet (A) having the culture layer obtained in Production Example 1 and the cover sheet (B) having the binder resin layer obtained in Production Example 4 are stacked so that the culture layer and the binder resin layer face each other. The edge part of one side was adhere | attached and the microorganism culture instrument of Example 2 was obtained.
＜実施例３＞
製造例１で得た培養層を有する微生物培養シート（Ａ）と、製造例５で得たバインダー樹脂層を有するカバーシート（Ｃ）とを、培養層とバインダー樹脂層とが対向するように重ね、一辺の端部を接着し、実施例３の微生物培養器具を得た。
<Example 3>
The microorganism culture sheet (A) having the culture layer obtained in Production Example 1 and the cover sheet (C) having the binder resin layer obtained in Production Example 5 are stacked so that the culture layer and the binder resin layer face each other. The edge part of one side was adhere | attached and the microorganism culture instrument of Example 3 was obtained.
＜実施例４＞
標準寒天培地（商品名「標準寒天培地」，Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）を滅菌精製水に溶かし、培地液を調製した。そして、この培地液をシャーレに適正量分注し、寒天平板培地を調製した。次いで、製造例３で得たバインダー樹脂層を有するカバーシート（Ａ）を、該カバーシート（Ａ）のバインダー樹脂層面が寒天平板培地面と接触するように被覆し、実施例４の微生物培養器具を得た。
<Example 4>
A standard agar medium (trade name “Standard Agar Medium”, manufactured by Becton, Dickinson and Company) was dissolved in sterilized purified water to prepare a medium solution. Then, an appropriate amount of this medium solution was dispensed into a petri dish to prepare an agar plate medium. Next, the cover sheet (A) having the binder resin layer obtained in Production Example 3 was coated so that the binder resin layer surface of the cover sheet (A) was in contact with the agar plate medium surface, and the microorganism culture instrument of Example 4 Got.
＜比較例１＞
製造例２で得た培養層を有する微生物培養シート（Ｂ）と、厚さ４０μｍのＯＰＰフィルム（商品名「ＯＰ−Ｕ１」，片面コロナ処理，東セロ社製）とを、培養層とＯＰＰフィルムとが対向するように重ね、一辺の端部を接着し、比較例１の微生物培養器具を得た。
<Comparative Example 1>
A microorganism culture sheet (B) having a culture layer obtained in Production Example 2, and an OPP film having a thickness of 40 μm (trade name “OP-U1”, single-sided corona treatment, manufactured by Tosero Corp.), a culture layer and an OPP film, Were stacked so as to face each other, and the ends of one side were adhered to each other to obtain a microorganism culture instrument of Comparative Example 1.
［発色指示薬安定性試験］
実施例１〜３及び比較例１の微生物培養器具に対して、γ線照射による滅菌処理を行い、発色指示薬の安定性を確認した。なお、γ線の線量は約１０ｋＧｙとした。その結果、発色指示薬であるＴＴＣを培養層に含有させた微生物培養器具（比較例１）では、ＴＴＣが変色し、培養層全体が赤く着色した。これに対して、ＴＴＣをカバーシートに含有させた微生物培養器具（実施例１〜３）では、ＴＴＣは変色することなくカバーシートに安定に保持されており、培養層の着色は認められなかった。
[Coloring indicator stability test]
The microorganism culture devices of Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were sterilized by γ-ray irradiation, and the stability of the color indicator was confirmed. The dose of γ rays was about 10 kGy. As a result, in the microorganism culture device (Comparative Example 1) in which TTC, which is a color development indicator, was contained in the culture layer, TTC was discolored and the entire culture layer was colored red. On the other hand, in the microorganism culture apparatus (Examples 1 to 3) containing TTC in the cover sheet, TTC was stably held in the cover sheet without discoloration, and coloring of the culture layer was not recognized. .
［培養試験］
実施例１〜４の微生物培養器具を用いて、培養試験を行った。Ｅ．ｃｏｌｉ（ＡＴＣＣ ２５９２２）を液体培地（ＴＲＹＰＴＩＣ ＳＯＹ ＢＲＯＴＨ）にて３６±１℃で１８時間振盪培養した。そして、得られた被検液を菌数が１０２／ｍｌとなるように滅菌生理食塩水で希釈し、培養試験用被検液を調製した。この培養試験用被検液を、実施例１〜３の微生物培養器具の培養層上に滅菌済みのピペットで１ｍｌ接種した後、カバーシートを被せることで培養試験用被検液を培養層全体に拡げ、約１分間静置してゲルを形成させた。その後、孵卵器に入れ、３７℃±１℃で４８時間培養し、培養後に発生したコロニーの発色状態を目視にて確認した。なお、実施例４の微生物培養器具については、以下の方法にて培養試験を行った。上記培地液分注の際に、あらかじめシャーレ内に滅菌済みのピペットで１ｍｌの培養試験用被検液を添加し、そこに６０℃に加温して流動性を与えた培地液を分注し、軽く混釈した後、室温まで冷却し寒天を固化させた。次いで、カバーシートを寒天培地表面に被せ、実施例１〜３と同様に孵卵器に入れ、３７℃±１℃で４８時間培養し、培養後に発生したコロニーの発色状態を目視にて確認した。その結果、実施例１〜４のいずれの微生物培養器具についても、菌の発育が確認可能な程度にまでコロニーが着色されており、視認性が良好であった。実施例１の微生物培養器具におけるコロニーの着色状態を図４に示す。
[Culture test]
A culture test was conducted using the microorganism culture apparatus of Examples 1 to 4. E. E. coli (ATCC 25922) was cultured with shaking in a liquid medium (TRYPTIC SOY BROTH) at 36 ± 1 ° C. for 18 hours. Then, the obtained test solution was diluted with sterile physiological saline so that the number of bacteria was 10 2 / ml, and a test solution for a culture test was prepared. After inoculating 1 ml of this culture test liquid with a sterilized pipette on the culture layer of the microorganism culture apparatus of Examples 1 to 3, the culture test liquid is applied to the whole culture layer by covering with a cover sheet. Spread out and let stand for about 1 minute to form a gel. Then, it put into the incubator, and it culture | cultivated at 37 degreeC +/- 1 degreeC for 48 hours, and confirmed the color development state of the colony generated after culture | cultivation visually. In addition, about the microorganism culture instrument of Example 4, the culture | cultivation test was done with the following method. At the time of the above-mentioned medium solution dispensing, 1 ml of a test solution for culture test was added to the petri dish in advance with a sterilized pipette, and the medium solution which was heated to 60 ° C. and given fluidity was then dispensed. After lightly mixing, the mixture was cooled to room temperature to solidify the agar. Subsequently, the cover sheet was put on the surface of the agar medium, put into an incubator in the same manner as in Examples 1 to 3, cultured at 37 ° C. ± 1 ° C. for 48 hours, and the color development state of the colonies generated after the culture was visually confirmed. As a result, the colonies were colored to such an extent that fungal growth could be confirmed in any of the microbial culture apparatuses of Examples 1 to 4, and the visibility was good. The coloring state of the colony in the microorganism culture instrument of Example 1 is shown in FIG.
１０ 微生物検査用カバーシート
２０ 基材
２１ バインダー樹脂層
３０ 微生物検査用キット
４０ 微生物培養シート
５０ 基材
５１ 培養層
５２ 被検液
DESCRIPTION OF SYMBOLS 10 Microorganism test cover sheet 20 Base material 21 Binder resin layer 30 Microorganism test kit 40 Microorganism culture sheet 50 Base material 51 Culture layer 52 Test solution
Claims (7)
前記カバーシートは、微生物のコロニーを着色させる発色指示薬を含有するバインダー樹脂層を最外層に備え、
前記バインダー樹脂層は、ポリアミド系樹脂をバインダーとする、微生物検査用カバーシート。 A cover sheet for testing microorganisms that covers the surface of a culture layer for culturing microorganisms,
The cover sheet is provided with a binder resin layer containing a coloring indicator for coloring microbial colonies in the outermost layer ,
The said binder resin layer is a cover sheet for microbe inspection which uses a polyamide-type resin as a binder .
微生物のコロニーを着色させる発色指示薬をバインダー樹脂に溶解させてバインダー樹脂層形成用塗工液を調製するバインダー樹脂層形成用塗工液調製工程と、
当該バインダー樹脂層形成用塗工液を用いて、基材上にバインダー樹脂層を形成するバインダー樹脂層形成工程と、を含み、
前記バインダー樹脂は、ポリアミド系樹脂である、微生物検査用カバーシートの製造方法。 A method for producing a cover sheet for microbiological examination that covers the surface of a culture layer for culturing microorganisms,
A binder resin layer-forming coating solution preparation step of preparing a binder resin layer-forming coating solution by dissolving a coloring indicator that colors microbial colonies in a binder resin;
By using the binder resin layer forming coating solution, viewed contains a binder resin layer forming step of forming a binder resin layer on a substrate,
The method for producing a cover sheet for microbiological testing , wherein the binder resin is a polyamide resin .
The method for producing a cover sheet for microbial examination according to claim 5 or 6 , further comprising a sterilization treatment step of sterilizing by γ-ray irradiation after the binder resin layer forming step.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010223097A JP5764900B2 (en) | 2010-09-30 | 2010-09-30 | Microbe test cover sheet, method for manufacturing microbe test cover sheet, and microbe test kit |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010223097A JP5764900B2 (en) | 2010-09-30 | 2010-09-30 | Microbe test cover sheet, method for manufacturing microbe test cover sheet, and microbe test kit |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2012075377A JP2012075377A (en) | 2012-04-19 |
| JP5764900B2 true JP5764900B2 (en) | 2015-08-19 |
Family
ID=46236405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010223097A Active JP5764900B2 (en) | 2010-09-30 | 2010-09-30 | Microbe test cover sheet, method for manufacturing microbe test cover sheet, and microbe test kit |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5764900B2 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015029441A (en) * | 2013-07-31 | 2015-02-16 | 大日本印刷株式会社 | Microorganism culture sheet |
| JP6451956B2 (en) * | 2014-08-18 | 2019-01-16 | パナソニックＩｐマネジメント株式会社 | Antibacterial test liquid, antibacterial test liquid adhesion device, and antibacterial test method |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1982002563A1 (en) * | 1981-01-27 | 1982-08-05 | Minnesota Mining & Mfg | Dry culture media |
| JPH08332076A (en) * | 1995-06-06 | 1996-12-17 | Dainippon Printing Co Ltd | Culture device |
| JPH0975062A (en) * | 1995-09-14 | 1997-03-25 | Dainippon Printing Co Ltd | Apparatus for culturing |
| JPH11513248A (en) * | 1995-09-18 | 1999-11-16 | ミネソタ・マイニング・アンド・マニュファクチャリング・カンパニー | Thin-film culture plate device containing granular medium particles |
| JPH09206062A (en) * | 1996-02-06 | 1997-08-12 | Dainippon Printing Co Ltd | Culture apparatus |
| JP2001128658A (en) * | 1999-11-05 | 2001-05-15 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Microorganism-detecting device |
| JP2002142797A (en) * | 2000-11-09 | 2002-05-21 | Nitto Denko Corp | Method for examining microorganism on surface of solid and kit therefor |
-
2010
- 2010-09-30 JP JP2010223097A patent/JP5764900B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2012075377A (en) | 2012-04-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6460170B2 (en) | Microbial culture sheet and method for producing the same | |
| JP5803677B2 (en) | Microbe culture sheet | |
| JP4396078B2 (en) | Microorganism incubator and microorganism medium using the same | |
| JP5082930B2 (en) | Microbe culture sheet | |
| JP2011072279A (en) | Microorganism culture sheet | |
| JP5764900B2 (en) | Microbe test cover sheet, method for manufacturing microbe test cover sheet, and microbe test kit | |
| JP6065073B2 (en) | Microbe culture sheet | |
| JP5724220B2 (en) | Microorganism culture sheet, method for producing microorganism culture sheet, and culture medium injection device | |
| JP2009153500A (en) | Microorganism-culturing sheet | |
| JPH09206062A (en) | Culture apparatus | |
| JP5796294B2 (en) | Microbe culture sheet | |
| JP2014090700A (en) | Microorganism culture device, and microorganism inspection method using the same | |
| JP6443060B2 (en) | Microbe culture sheet | |
| JP6724333B2 (en) | Microorganism culture sheet and method for detecting microorganisms | |
| JP2019030337A (en) | Microorganism culture sheet | |
| JPH08266268A (en) | Tool or implement for culturing microorganism | |
| JP2006230220A (en) | Kit for examining microorganism and method for examining microorganism by using the kit | |
| JP2006136274A (en) | Adhesive sheet for examining microorganism, method for producing the same, and method and kit for examining the microorganism by using the adhesive sheet | |
| JPH08228758A (en) | Culture device |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130725 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141118 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141226 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150519 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150601 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5764900 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |