JP6451956B2 - Antibacterial test liquid, antibacterial test liquid adhesion device, and antibacterial test method - Google Patents

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Description

本発明は、抗菌試験液、抗菌試験液付着装置、及び抗菌試験方法に関する。詳細には本発明は、再現性がよく、実環境に近い状態で評価することが可能な抗菌試験液、抗菌試験液付着装置、及び抗菌試験方法に関する。   The present invention relates to an antibacterial test solution, an antibacterial test solution adhering device, and an antibacterial test method. More specifically, the present invention relates to an antibacterial test solution, an antibacterial test solution adhering device, and an antibacterial test method that are highly reproducible and can be evaluated in a state close to a real environment.

抗菌性の評価方法としては、実環境にて対象物を暴露し、その場に存在する細菌数を拭き取り試験などにより評価する方法がある。しかし、この方法では検出可能な数まで細菌数を付着させて増殖させる必要があるため、長時間を要するという問題がある。また、環境により付着数や増殖数にバラツキがあるなどの問題がある。   As an antibacterial evaluation method, there is a method in which an object is exposed in an actual environment, and the number of bacteria present on the spot is evaluated by a wiping test or the like. However, this method has a problem that it takes a long time because it is necessary to allow the number of bacteria to grow to a detectable number. In addition, there are problems such as variations in the number of adhesions and the number of growth depending on the environment.

そのため、安定的な抗菌性試験法として、繊維製品等ではハロー法（AATCC Test Method 90-1982;American Association of Textile Chemists and Colorists）が用いられている。また、抗菌性試験法として、AATCC Test Method 100-1981も用いられている。さらに抗菌性試験法として、日本工業規格ＪＩＳ Ｚ２８０１（抗菌加工製品―抗菌試験方法・抗菌効果）なども規定されている。しかし、これらの試験法は、水を主成分とする緩衝液中において栄養素を含んだ状態で抗菌性評価が行われるため、一般の大気中と大きくかけ離れた結果が得られてしまうという問題があった。   Therefore, the halo method (AATCC Test Method 90-1982; American Association of Textile Chemists and Colorists) is used for textile products and the like as a stable antibacterial test method. AATCC Test Method 100-1981 is also used as an antibacterial test method. Furthermore, as an antibacterial test method, Japanese Industrial Standard JIS Z2801 (antibacterial processed product-antibacterial test method / antibacterial effect) is also defined. However, these test methods have the problem that the results are far from ordinary air because antibacterial evaluation is performed in a buffer containing water as a main component and containing nutrients. It was.

そこで、実環境で評価する方法として、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を用いた拭き取り検査が提案されている（例えば、非特許文献１参照）。   Therefore, a wiping inspection using adenosine triphosphate (ATP) has been proposed as a method for evaluation in an actual environment (for example, see Non-Patent Document 1).

厚生労働省監修、「食品衛生検査指針 微生物編２００４」、社団法人日本食品衛生協会、２００４年６月、ISBN 978-4-88925-002-2Supervised by the Ministry of Health, Labor and Welfare, “Food Sanitation Inspection Guidelines Microorganisms 2004”, Japan Food Sanitation Association, June 2004, ISBN 978-4-88925-002-2

非特許文献１に記載の評価方法は、微生物が生成する代謝物を測定しているため、洗浄の良し悪しを判断する方法としては適している。しかしながら、この評価方法は、抗菌剤の効果の有無を判断する方法としては適していないという問題があった。   The evaluation method described in Non-Patent Document 1 is suitable as a method for judging whether or not washing is good because it measures metabolites produced by microorganisms. However, this evaluation method has a problem that it is not suitable as a method for judging the presence or absence of an antibacterial agent.

本発明は、このような従来技術の有する課題に鑑みてなされたものである。そして、本発明の目的は、試験対象物の抗菌性能を再現性よく、実環境に近い状態にて、簡便に評価可能な抗菌試験液、抗菌試験液付着装置、及び抗菌試験方法を提供することにある。   The present invention has been made in view of such problems of the prior art. An object of the present invention is to provide an antibacterial test solution, an antibacterial test solution adhering device, and an antibacterial test method that can be easily evaluated in a state close to a real environment with good antibacterial performance of a test object. It is in.

上記課題を解決するために、本発明の第一の態様に係る抗菌試験液は、細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液と、ポリオール誘導体とを含有する。そして、当該抗菌試験液は、細菌懸濁液１０質量部に対してポリオール誘導体を１０〜５００質量部含む。   In order to solve the above problems, the antibacterial test solution according to the first aspect of the present invention contains a bacterial suspension in which bacteria are suspended in sterile physiological saline and a polyol derivative. And the said antimicrobial test liquid contains 10-500 mass parts of polyol derivatives with respect to 10 mass parts of bacterial suspensions.

本発明の第二の態様に係る抗菌試験液付着装置は、抗菌試験液を保持する液保持部と、抗菌試験液を試験対象物に付着させる付着部とを有する。   The antibacterial test solution adhering device according to the second aspect of the present invention has a liquid holding unit for holding the antibacterial test solution and an adhering unit for attaching the antibacterial test solution to the test object.

本発明の第三の態様に係る抗菌試験方法は、細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液を得る工程と、細菌懸濁液１０質量部に対して、ポリオール誘導体を１０〜５００質量部混合した抗菌試験液を得る工程とを有する。さらに抗菌試験方法は、抗菌試験液を試験対象物に対して付着させた後、所定時間暴露する工程と、暴露後に、試験対象物の表面から抗菌試験液を回収し、回収液を培養する工程とを有する。   The antibacterial test method according to the third aspect of the present invention comprises a step of obtaining a bacterial suspension in which bacteria are suspended in sterile physiological saline, and 10 to 10 parts by mass of the bacterial suspension. And a step of obtaining an antibacterial test solution mixed with 500 parts by mass. Furthermore, the antibacterial test method includes a step of attaching an antibacterial test solution to the test object, exposing the test object for a predetermined time, and a step of recovering the antibacterial test solution from the surface of the test object after exposure and culturing the recovered solution. And have.

図１は、本発明の実施形態に係る抗菌試験液付着装置の一例を示す概略図である。FIG. 1 is a schematic view showing an example of an antibacterial test solution attachment device according to an embodiment of the present invention. 図２は、本発明の実施形態に係る抗菌試験液付着装置の他の例を示す概略図である。FIG. 2 is a schematic view showing another example of the antibacterial test solution attachment device according to the embodiment of the present invention.

以下、本実施形態に係る抗菌試験液、抗菌試験液付着装置、及び抗菌試験方法について詳細に説明する。なお、図面の寸法比率は説明の都合上誇張されており、実際の比率とは異なる場合がある。   Hereinafter, the antibacterial test solution, the antibacterial test solution adhering device, and the antibacterial test method according to the present embodiment will be described in detail. In addition, the dimension ratio of drawing is exaggerated on account of description, and may differ from an actual ratio.

［抗菌試験方法］
まずは、本実施形態に係る抗菌試験方法について説明する。本実施形態に係る抗菌試験方法は、細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液を得る工程と、細菌懸濁液に対してポリオール誘導体を混合した抗菌試験液を得る工程とを有する。さらに抗菌試験方法は、抗菌試験液を試験対象物に対して付着させた後、所定時間暴露する工程と、暴露後に、試験対象物の表面から抗菌試験液を回収し、回収液を培養する工程とを有する。[Antimicrobial test method]
First, the antibacterial test method according to the present embodiment will be described. The antibacterial test method according to this embodiment includes a step of obtaining a bacterial suspension in which bacteria are suspended in sterile physiological saline, and a step of obtaining an antibacterial test solution in which a polyol derivative is mixed with the bacterial suspension. Have. Furthermore, the antibacterial test method includes a step of attaching an antibacterial test solution to the test object, exposing the test object for a predetermined time, and a step of recovering the antibacterial test solution from the surface of the test object and culturing the recovered solution after the exposure. And have.

本実施形態では、まず細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液を調製する。試験に用いる細菌としては特に限定されないが、接触感染を模擬する目的であれば表皮ブドウ球菌を用いることが望ましい。また、滅菌生理食塩水としては、塩化ナトリウムを０．９ｗｔ％含有する市販の生理食塩水を滅菌処理したものを使用することができる。   In this embodiment, first, a bacterial suspension is prepared by suspending bacteria in sterile physiological saline. Although it does not specifically limit as bacteria used for a test, For the purpose of simulating contact infection, it is desirable to use Staphylococcus epidermidis. Moreover, as a sterilized physiological saline, what sterilized the commercially available physiological saline containing 0.9 wt% of sodium chloride can be used.

細菌懸濁液における細菌濃度は、細菌によって調整することが望ましい。例えば、細菌として表皮ブドウ球菌を用いる場合には、細菌濃度は１×１０９ＣＦＵ／ｍＬとすることが好ましい。It is desirable to adjust the bacterial concentration in the bacterial suspension by the bacteria. For example, when Staphylococcus epidermidis is used as the bacterium, the bacterial concentration is preferably 1 × 10 9 CFU / mL.

次に、得られた細菌懸濁液にポリオール誘導体を混合することにより、抗菌試験液を調製する。これまで、抗菌性試験で使用する皮脂膜の成分として、脂肪酸、トリアシルグリセロール、ジアシルグリセロール、モノアシルグリセロール、ワックスエステル、スクアレン、コレステロール、コレステロールエステル等が使用できることが知られている。そして、本発明者らが細菌の繁殖における影響を検証した結果、ポリオール誘導体を用いて皮脂膜を模擬することにより、再現性よく評価できることを見いだし、本発明を完成させるに至った。   Next, an antimicrobial test solution is prepared by mixing a polyol derivative with the obtained bacterial suspension. Until now, it has been known that fatty acid, triacylglycerol, diacylglycerol, monoacylglycerol, wax ester, squalene, cholesterol, cholesterol ester, and the like can be used as components of sebum membranes used in antibacterial tests. And as a result of verifying the influence on reproduction of bacteria by the present inventors, it was found that the sebum membrane can be evaluated with good reproducibility by simulating a sebum film using a polyol derivative, and the present invention has been completed.

本実施形態において、ポリオール誘導体の添加量は、細菌懸濁液１０質量部に対して１０〜５００質量部とすることが好ましい。ポリオール誘導体の添加量がこの範囲内であることにより、後述する所定時間暴露する工程において、細菌の死滅を抑制することが可能となる。つまり、ポリオール誘導体を添加しない場合、細菌を試験対象物に塗布し暴露した際に、塗布膜が乾燥して細菌が死滅する恐れがある。そのため、評価結果の再現性が悪化し、適切な評価ができない場合があった。しかし、本実施形態では所定量のポリオール誘導体を含有しているため、乾燥による細菌の死滅を抑制し、再現性を向上させることが可能となる。また、ポリオール誘導体は、好気性細菌の場合は代謝物として生成されるものであるため、栄養素になり得ず、抗菌性試験に影響を与えない点も有用である。   In this embodiment, it is preferable that the addition amount of a polyol derivative shall be 10-500 mass parts with respect to 10 mass parts of bacterial suspensions. When the addition amount of the polyol derivative is within this range, it is possible to suppress the killing of bacteria in the step of exposure for a predetermined time described later. That is, when the polyol derivative is not added, when the bacteria are applied to the test object and exposed, the coating film may be dried and the bacteria may be killed. For this reason, the reproducibility of the evaluation results deteriorates, and appropriate evaluation may not be possible. However, since the present embodiment contains a predetermined amount of the polyol derivative, it is possible to suppress the death of bacteria due to drying and improve the reproducibility. In addition, since the polyol derivative is produced as a metabolite in the case of an aerobic bacterium, it cannot be a nutrient and does not affect the antibacterial test.

ポリオール誘導体としては、例えばポリエーテルポリオールやポリエステルポリオールが使用できる。具体的には、ポリオール誘導体としては、例えば株式会社ＡＤＥＫＡ製アデカポリエーテルＰシリーズ、Ｇシリーズ、ＥＤＰシリーズ、ＢＰＸシリーズ、ＦＣシリーズ、ＣＭシリーズを使用することができる。また、日油株式会社製ユニオックス（登録商標）ＨＣ−４０、ＨＣ−６０、ＳＴ−３０Ｅ、ＳＴ−４０Ｅ、Ｇ−４５０、Ｇ−７５０も使用することができる。さらに日油株式会社製ユニオール（登録商標）ＴＧ−３３０、ＴＧ−１０００、ＴＧ−３０００、ＴＧ−４０００、ＨＳ−１６００Ｄ、ＤＡ−４００、ＤＡ−７００、ＤＢ−４００も使用することができる。また、日油株式会社製ノニオン（登録商標）ＬＴ−２２１、ＳＴ−２２１、ＯＴ−２２１も使用することができる。 なお、これらのポリオール誘導体は一種を単独で使用してもよく、二種以上を組み合わせて使用してもよい。   As the polyol derivative, for example, polyether polyol or polyester polyol can be used. Specifically, as the polyol derivative, for example, ADEKA polyether P series, G series, EDP series, BPX series, FC series, and CM series manufactured by ADEKA Corporation can be used. In addition, UNIOX (registered trademark) HC-40, HC-60, ST-30E, ST-40E, G-450, and G-750 manufactured by NOF Corporation may be used. Further, Uniol (registered trademark) TG-330, TG-1000, TG-3000, TG-4000, HS-1600D, DA-400, DA-700, DB-400 manufactured by NOF Corporation can also be used. Nonionic (registered trademark) LT-221, ST-221 and OT-221 manufactured by NOF Corporation can also be used. In addition, these polyol derivatives may be used individually by 1 type, and may be used in combination of 2 or more type.

本実施形態の抗菌試験方法では、ポリオール誘導体がトリオールであることが好ましい。トリオールは人体の皮脂の主成分であることから、実環境に近い評価結果を得ることが可能となる。また、好気性細菌の代謝物として生成されるトリオールを使用することにより、有機物（栄養分）による抗菌性試験の影響を防止することができる。   In the antibacterial test method of this embodiment, the polyol derivative is preferably a triol. Since triol is the main component of sebum in the human body, it is possible to obtain an evaluation result close to the actual environment. Further, by using triol produced as a metabolite of aerobic bacteria, it is possible to prevent the influence of the antibacterial test due to organic matter (nutrient).

ポリオール誘導体の分子量は、本実施形態の効果が得られる限り特に限定されない。ただ、試験対象物の表面が撥水性である場合、抗菌試験液を弾き、抗菌性試験の再現性を低下させる可能性がある。そのため、抗菌試験液の粘度を増加させ、試験対象物の表面での弾きを抑制するために、分子量が高く粘性のあるポリオール誘導体を混合することが望ましい。そのため、抗菌試験液には、分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）が１０００〜３０００のポリオール誘導体や、分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）が３０００以上のポリオール誘導体を混合することが望ましい。   The molecular weight of the polyol derivative is not particularly limited as long as the effect of the present embodiment can be obtained. However, if the surface of the test object is water-repellent, the antibacterial test solution may be repelled to reduce the reproducibility of the antibacterial test. Therefore, in order to increase the viscosity of the antibacterial test solution and suppress the rebound on the surface of the test object, it is desirable to mix a polyol derivative having a high molecular weight and viscosity. Therefore, it is desirable to mix a polyol derivative having a molecular weight (weight average molecular weight; Mw) of 1000 to 3000 and a polyol derivative having a molecular weight (weight average molecular weight; Mw) of 3000 or more in the antibacterial test solution.

ここで、細菌懸濁液に対してポリオール誘導体を混合して抗菌試験液を得る際、細菌懸濁液に分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）が１００〜１０００の第一ポリオール誘導体を混合した後に、分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）が１０００を超える第二ポリオール誘導体を混合することが好ましい。つまり、細菌懸濁液に低分子量の第一ポリオール誘導体を混合して溶解させた後、高分子量の第二ポリオール誘導体を混合することが望ましい。上述のように、抗菌試験液の粘性を向上させるために、高分子量のポリオール誘導体を混合することが望ましい。ただ、高分子量のポリオール誘導体は、細菌懸濁液に溶解し難い可能性がある。そのため、まず細菌懸濁液に低分子量の第一ポリオール誘導体を混合し、ポリオール誘導体の溶解性を高めた後に、高分子量の第二ポリオール誘導体を混合することが望ましい。   Here, when the polyol derivative is mixed with the bacterial suspension to obtain an antibacterial test solution, the bacterial suspension is mixed with the first polyol derivative having a molecular weight (weight average molecular weight; Mw) of 100 to 1000, It is preferable to mix the second polyol derivative having a molecular weight (weight average molecular weight; Mw) exceeding 1000. That is, it is desirable to mix and dissolve the low molecular weight first polyol derivative in the bacterial suspension and then mix the high molecular weight second polyol derivative. As described above, in order to improve the viscosity of the antibacterial test solution, it is desirable to mix a high molecular weight polyol derivative. However, high molecular weight polyol derivatives may be difficult to dissolve in bacterial suspensions. Therefore, it is desirable to first mix the low-molecular-weight first polyol derivative with the bacterial suspension to increase the solubility of the polyol derivative, and then mix the high-molecular-weight second polyol derivative.

次に、上述のようにして得られた抗菌試験液を、試験対象物に対して付着させる。つまり、試験対象物の表面（試験面）に対して抗菌試験液を付着させる。この際、表面に抗菌加工が施されている場合には、抗菌加工面に対して抗菌試験液を付着させる。なお、抗菌試験液を付着させる方法としては、例えばピペット等を用いて所定量滴下してもよく、またゴムシートのような媒体を介して、抗菌試験液を付着させてもよい。さらに、後述する抗菌試験液付着装置を用いて、抗菌試験液を付着させてもよい。   Next, the antibacterial test solution obtained as described above is adhered to the test object. That is, the antibacterial test solution is adhered to the surface (test surface) of the test object. At this time, when antibacterial processing is applied to the surface, an antibacterial test solution is adhered to the antibacterial processed surface. In addition, as a method of attaching the antibacterial test solution, for example, a predetermined amount may be dropped using a pipette or the like, or the antibacterial test solution may be attached via a medium such as a rubber sheet. Furthermore, the antibacterial test solution may be adhered using an antibacterial test solution adhering device described later.

抗菌試験液を試験対象物に対して付着させた後、試験対象物を所定時間暴露する。例えば、試験対象物に光触媒による抗菌加工を施している場合には、抗菌加工面に対して所定時間光照射を行う。光照射条件は特に限定されないが、例えばＪＩＳ Ｒ１７０２（ファインセラミックス−光触媒抗菌加工製品の抗菌試験方法・抗菌効果）に規定の条件で行うことができる。   After the antibacterial test solution is attached to the test object, the test object is exposed for a predetermined time. For example, when the test object is subjected to antibacterial processing using a photocatalyst, light irradiation is performed on the antibacterial processing surface for a predetermined time. Although light irradiation conditions are not specifically limited, For example, it can carry out on conditions prescribed | regulated to JISR1702 (The antibacterial test method and antibacterial effect of a fine ceramics-photocatalyst antibacterial processed product).

試験対象物を所定時間暴露した後、試験対象物の表面から抗菌試験液を回収し、回収液を培養する。回収方法は特に限定されず、市販の回収器具を用いて回収することができる。培養方法は生菌数（コロニー数）を測定することができれば特に限定されないが、例えばＪＩＳ Ｒ１７０２に規定の条件で行うことができる。そして、回収液の培養後に、生菌数（コロニー数）を測定することにより、抗菌性能を評価することができる。   After the test object is exposed for a predetermined time, an antibacterial test solution is collected from the surface of the test object, and the collected solution is cultured. The recovery method is not particularly limited, and the recovery can be performed using a commercially available recovery instrument. The culture method is not particularly limited as long as the viable cell count (colony count) can be measured. For example, the culture method can be performed under the conditions specified in JIS R1702. And after culture | cultivation of a collection | recovery liquid, antimicrobial performance can be evaluated by measuring viable count (colony count).

このように、本実施形態に係る抗菌試験方法は、細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液を得る工程と、細菌懸濁液１０質量部に対して、ポリオール誘導体を１０〜５００質量部混合した抗菌試験液を得る工程とを有する。さらに、抗菌試験液を試験対象物に対して付着させた後、所定時間暴露する工程と、暴露後に試験対象物の表面から抗菌試験液を回収し、回収液を培養する工程とを有する。本実施形態では、抗菌試験液に皮脂膜の材料としてのポリオール誘導体を混合しているため、暴露中に乾燥して細菌が死滅することを抑制し、再現性を向上させることが可能となる。また、ポリオール誘導体は、好気性細菌の場合は代謝物として生成されるものであるため、栄養素に成り得ず、細菌の増加による抗菌性試験への影響を抑制することができる。   As described above, the antibacterial test method according to the present embodiment includes a step of obtaining a bacterial suspension in which bacteria are suspended in sterile physiological saline, and 10 parts by mass of the polyol derivative with respect to 10 parts by mass of the bacterial suspension. And a step of obtaining an antibacterial test solution mixed with 500 parts by mass. Furthermore, after attaching the antibacterial test solution to the test object, it has a step of exposing for a predetermined time, and after the exposure, collecting the antibacterial test solution from the surface of the test object and culturing the recovered solution. In this embodiment, since the polyol derivative as a material for the sebum membrane is mixed in the antibacterial test solution, it is possible to suppress the bacteria from being dried during exposure and to improve reproducibility. In addition, since the polyol derivative is produced as a metabolite in the case of an aerobic bacterium, it cannot become a nutrient, and the influence on the antibacterial test due to an increase in the bacterium can be suppressed.

［抗菌試験液］
次に、本実施形態の抗菌試験液について説明する。本実施形態の抗菌試験液は、細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液と、ポリオール誘導体とを含有する。そして、当該抗菌試験液は、細菌懸濁液１０質量部に対してポリオール誘導体を１０〜５００質量部含む。[Antimicrobial test solution]
Next, the antibacterial test solution of this embodiment will be described. The antibacterial test solution of this embodiment contains a bacterial suspension in which bacteria are suspended in sterile physiological saline and a polyol derivative. And the said antimicrobial test liquid contains 10-500 mass parts of polyol derivatives with respect to 10 mass parts of bacterial suspensions.

上述のように、本実施形態の抗菌試験液では、皮脂膜の模擬成分としてポリオール誘導体を用いている。また、細菌懸濁液１０質量部に対してポリオール誘導体を１０〜５００質量部含有させている。そのため、試験対象物に抗菌試験液を付着させて暴露させたとしても、暴露中に乾燥して細菌が死滅することを抑制し、再現性を向上させることが可能となる。さらに、当該抗菌試験液は、容易に入手できる材料を使用し、簡単に調製することができるため、安定で再現性の高い試験を容易に実施することが可能となる。なお、細菌懸濁液１０質量部に対してポリオール誘導体が１０質量部未満の場合には、ポリオール誘導体の含有量が少ないため、暴露中に乾燥して細菌が死滅し、抗菌性試験の再現性が低下する恐れがある。また、細菌懸濁液１０質量部に対してポリオール誘導体が５００質量部を超える場合には、抗菌試験液中の細菌数が不十分となるため、試験精度が低下する恐れがある。このような観点から、本実施形態の抗菌試験液において、細菌懸濁液１０質量部に対して、ポリオール誘導体を１０〜３００質量部含むことが好ましく、５０〜１５０質量部含むことがより好ましい。   As described above, in the antibacterial test solution of this embodiment, a polyol derivative is used as a simulated component of the sebum film. Moreover, 10-500 mass parts of polyol derivatives are contained with respect to 10 mass parts of bacterial suspensions. Therefore, even if an antibacterial test solution is attached to the test object and exposed, it is possible to suppress the bacteria from being dried during the exposure and to improve reproducibility. Furthermore, since the antibacterial test solution can be easily prepared using easily available materials, a stable and highly reproducible test can be easily performed. In addition, when the polyol derivative is less than 10 parts by mass with respect to 10 parts by mass of the bacterial suspension, the content of the polyol derivative is small, so that the bacteria are killed by drying during exposure, and the reproducibility of the antibacterial test May decrease. In addition, when the polyol derivative exceeds 500 parts by mass with respect to 10 parts by mass of the bacterial suspension, the number of bacteria in the antibacterial test solution becomes insufficient, which may reduce the test accuracy. From such a viewpoint, in the antibacterial test solution of the present embodiment, the polyol derivative is preferably contained in an amount of 10 to 300 parts by mass, more preferably 50 to 150 parts by mass with respect to 10 parts by mass of the bacterial suspension.

細菌懸濁液としては、上述のように、細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた溶液を用いることができ、ポリオール誘導体としては、例えばポリエーテルポリオールやポリエステルポリオールが使用できる。また、ポリオール誘導体がトリオールであることが好ましい。トリオールは人体の皮脂の主成分であることから、実環境に近い評価結果を得ることが可能となる。   As the bacterial suspension, as described above, a solution in which bacteria are suspended in sterile physiological saline can be used. As the polyol derivative, for example, polyether polyol or polyester polyol can be used. The polyol derivative is preferably a triol. Since triol is the main component of sebum in the human body, it is possible to obtain an evaluation result close to the actual environment.

また、ポリオール誘導体は、分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）が１００〜１０００である第一ポリオール誘導体と、分子量（重量平均分子量；Ｍｗ）が１０００を超える第二ポリオール誘導体とを含んでいることが好ましい。この場合、抗菌試験液の粘度を増加させて、試験対象物の表面での弾きを抑制し、抗菌性試験の再現性を高めることが可能となる。   Moreover, it is preferable that the polyol derivative contains the 1st polyol derivative whose molecular weight (weight average molecular weight; Mw) is 100-1000, and the 2nd polyol derivative whose molecular weight (weight average molecular weight; Mw) exceeds 1000. . In this case, it is possible to increase the viscosity of the antibacterial test solution, suppress the rebound on the surface of the test object, and improve the reproducibility of the antibacterial test.

［抗菌試験液付着装置］
次に、本実施形態の抗菌試験液付着装置について説明する。本実施形態の抗菌試験液付着装置は、抗菌試験液を保持する液保持部と、抗菌試験液を試験対象物に付着させる付着部とを有する。[Antimicrobial test solution adhesion device]
Next, the antibacterial test liquid adhesion apparatus of this embodiment is demonstrated. The antibacterial test solution adhering device of the present embodiment includes a liquid holding unit that holds the antibacterial test solution and an adhering unit that attaches the antibacterial test solution to the test object.

上述の抗菌試験液は、試験に用いる細菌が均一に分散した状態にあり、さらに皮脂のように粘性及び付着性のある液体であることが好ましい。そのため、本実施形態の抗菌試験液付着装置は、このような粘性のある抗菌試験液を、試験対象物に対して一定量を均一に付着できるものであることが好ましい。このような抗菌試験液付着装置としては、図１及び図２に示す装置を使用することができる。   The above-mentioned antibacterial test solution is preferably in a state where the bacteria used in the test are uniformly dispersed, and is a liquid having viscosity and adhesion like sebum. Therefore, it is preferable that the antibacterial test solution adhering apparatus of the present embodiment can uniformly adhere a certain amount of such viscous antibacterial test solution to the test object. As such an antibacterial test solution adhesion apparatus, the apparatus shown in FIGS. 1 and 2 can be used.

図１に示す抗菌試験液付着装置１０は、抗菌試験液を試験対象物１に塗布する装置である。具体的には、抗菌試験液付着装置１０は、抗菌試験液を保持する容器１１と、抗菌試験液を試験対象物１に塗布する塗布部１２とを備えている。容器１１は円筒形状であり、内部に抗菌試験液を保持している。容器１１の材質は特に限定されないが、例えばガラス、金属又は樹脂材料を用いることができる。塗布部１２は、容器１１によって保持されている抗菌試験液を外部に一定量吐出するものである。塗布部１２の材質は特に限定されないが、例えば粘性を有する抗菌試験液を透過することが可能な繊維状や多孔質な構造を有する樹脂材料を用いることができる。   An antibacterial test solution adhering device 10 shown in FIG. 1 is a device that applies an antibacterial test solution to a test object 1. Specifically, the antibacterial test solution adhering apparatus 10 includes a container 11 that holds the antibacterial test solution, and an application unit 12 that applies the antibacterial test solution to the test object 1. The container 11 has a cylindrical shape and holds an antibacterial test solution therein. Although the material of the container 11 is not specifically limited, For example, glass, a metal, or a resin material can be used. The application unit 12 discharges a predetermined amount of the antibacterial test liquid held by the container 11. Although the material of the application part 12 is not specifically limited, For example, the resin material which has the fibrous form and porous structure which can permeate | transmit the antimicrobial test liquid which has viscosity can be used.

抗菌試験液付着装置１０を用いて抗菌試験液を試験対象物１に塗布する際には、図１に示すように、抗菌試験液付着装置１０を逆さにした後、塗布部１２を試験対象物１に接触させる。これにより、抗菌試験液が塗布部１２を透過し、試験対象物１に塗布される。この際、抗菌試験液付着装置１０の塗布部１２を、試験対象物１の表面に沿って摺動させることにより、試験対象物１の表面全体に抗菌試験液を均一に塗布することができる。   When applying the antibacterial test solution to the test object 1 using the antibacterial test solution adhering apparatus 10, as shown in FIG. 1 is brought into contact. Thereby, the antibacterial test solution permeates the application part 12 and is applied to the test object 1. At this time, the antibacterial test liquid can be uniformly applied to the entire surface of the test object 1 by sliding the application part 12 of the antibacterial test liquid adhesion apparatus 10 along the surface of the test object 1.

図２に示す抗菌試験液付着装置２０は、抗菌試験液を試験対象物１に散布する装置である。具体的には、抗菌試験液付着装置２０は、抗菌試験液を加圧するポンプヘッド２１と、ポンプヘッド２１に設けられ、抗菌試験液を散布する散布部としてのノズル２２とを備えている。さらに、抗菌試験液付着装置２０は、抗菌試験液を保持する容器２３と、抗菌試験液に圧力をかける加圧ポンプ２４と、抗菌試験液を加圧ポンプ２４に送り出す給液ホース２５とを備えている。   The antibacterial test solution adhering device 20 shown in FIG. 2 is a device that sprays the antibacterial test solution onto the test object 1. Specifically, the antibacterial test solution attachment device 20 includes a pump head 21 that pressurizes the antibacterial test solution, and a nozzle 22 that is provided in the pump head 21 and serves as a spraying unit that sprays the antibacterial test solution. Further, the antibacterial test solution adhering device 20 includes a container 23 that holds the antibacterial test solution, a pressurizing pump 24 that applies pressure to the antibacterial test solution, and a liquid supply hose 25 that sends the antibacterial test solution to the pressurizing pump 24. ing.

抗菌試験液付着装置１０を用いて抗菌試験液を試験対象物１に散布する際には、ポンプヘッド２１を複数回押圧する。これにより、容器２３で保持されている抗菌試験液が給液ホース２５を通じて加圧ポンプ２４に吸引された後、抗菌試験液が加圧ポンプ２４での圧縮動力により加圧される。そして、加圧された抗菌試験液がノズル２２から吐出する際に霧化し、試験対象物１に散布される。この動作を複数回繰り返すことにより、試験対象物１の表面全体に抗菌試験液を均一に散布することができる。   When the antibacterial test solution is sprayed on the test object 1 using the antibacterial test solution adhering device 10, the pump head 21 is pressed a plurality of times. Thus, after the antibacterial test liquid held in the container 23 is sucked into the pressurization pump 24 through the liquid supply hose 25, the antibacterial test liquid is pressurized by the compression power of the pressurization pump 24. Then, when the pressurized antibacterial test liquid is ejected from the nozzle 22, it is atomized and sprayed on the test object 1. By repeating this operation a plurality of times, the antibacterial test solution can be uniformly sprayed over the entire surface of the test object 1.

このように、本実施形態の抗菌試験液付着装置１０，２０は、付着部が、抗菌試験液を試験対象物１に塗布するための塗布部１２であるか、又は抗菌試験液を試験対象物１に散布するための散布部（ノズル２２）であることが好ましい。これにより、抗菌試験液を試験対象物１の表面に均一に付着させることができ、抗菌性試験の再現性を高めることができる。また、抗菌試験液付着装置１０，２０は、水平面でも垂直面でも抗菌試験液を付着させることができるため、あらゆる試験対象物に対して抗菌性試験を行うことが可能となる。   As described above, in the antibacterial test solution adhering devices 10 and 20 of this embodiment, the adhering part is the application unit 12 for applying the antibacterial test solution to the test object 1 or the antibacterial test solution is used as the test object. It is preferable that it is a spraying part (nozzle 22) for spraying to 1. Thereby, an antimicrobial test liquid can be made to adhere uniformly to the surface of the test object 1, and the reproducibility of an antimicrobial test can be improved. Further, since the antibacterial test solution adhering devices 10 and 20 can attach the antibacterial test solution on a horizontal plane or a vertical plane, it is possible to perform an antibacterial test on any test object.

以下、本実施形態を実施例及び比較例によりさらに詳細に説明するが、本実施形態はこれら実施例に限定されるものではない。   Hereinafter, the present embodiment will be described in more detail with reference to examples and comparative examples, but the present embodiment is not limited to these examples.

［試験基材］
試験基材として、ポリエチレンテレフタラートからなり、厚みが１００μｍであるＰＥＴ基材を準備した。さらに、当該ＰＥＴ基材に、光触媒としての酸化チタンを担持したＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材も準備した。なお、ＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材は、昭和電工セラミックス株式会社製ＦＰ−６（平均一次粒子径：１５ｎｍ）をＰＥＴ基材に対して１０ｇ／ｍ２塗布することにより作製した。[Test substrate]
A PET substrate made of polyethylene terephthalate and having a thickness of 100 μm was prepared as a test substrate. Furthermore, a TiO 2 carrying PET substrate carrying titanium oxide as a photocatalyst on the PET substrate was also prepared. Incidentally, TiO 2 supported PET substrate, Showa Denko Ceramics Co. FP-6 (average primary particle diameter: 15 nm) was prepared by 10 g / m 2 is applied against the PET substrate.

［実施例］
まず、ＪＩＳ Ｚ２８０１に準拠して、平型寒天培地に表皮ブドウ球菌を前培養した。次に、得られた表皮ブドウ球菌を滅菌生理食塩水に懸濁し、濃度が１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの細菌懸濁液を得た。[Example]
First, in accordance with JIS Z2801, Staphylococcus epidermidis was precultured on a flat agar medium. Next, the resulting Staphylococcus epidermidis was suspended in sterile physiological saline to obtain a bacterial suspension having a concentration of 1 × 10 9 CFU / mL.

得られた細菌懸濁液１質量部に、日本油脂株式会社製ユニオールＴＧ−３３０（分子量Ｍｗ：３３０）を５質量部混合して攪拌した。さらに細菌懸濁液に対して、ユニオールＴＧ−１０００（分子量Ｍｗ：１０００）２質量部と、ユニオールＴＧ−３０００（分子量Ｍｗ：３０００）２質量部とを混合して攪拌することにより、抗菌試験液を得た。   To 1 part by mass of the obtained bacterial suspension, 5 parts by mass of Uniol TG-330 (Molecular weight Mw: 330) manufactured by NOF Corporation was mixed and stirred. Furthermore, 2 parts by mass of Uniol TG-1000 (molecular weight Mw: 1000) and 2 parts by weight of Uniol TG-3000 (molecular weight Mw: 3000) are mixed and stirred with respect to the bacterial suspension, thereby providing an antibacterial test solution. Got.

そして、得られた抗菌試験液を滅菌ガーゼに含浸させた後、厚みが５ｍｍで５ｃｍ角のシリコーンゴムシートに対して、２０ｇ／ｃｍ２の荷重で抗菌試験液を付着させた。さらに当該シリコーンゴムシートを上述のＰＥＴ基材及びＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材に２０ｇ／ｃｍ２の荷重で押し付け、抗菌試験液を付着させた。この際、抗菌試験液は、１枚のＰＥＴ基材と１０枚のＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材に付着させた。The obtained antibacterial test solution was impregnated in a sterile gauze, and then the antibacterial test solution was attached to a 5 mm square silicone rubber sheet with a load of 20 g / cm 2 . Further, the silicone rubber sheet was pressed against the above-described PET substrate and TiO 2 -supporting PET substrate with a load of 20 g / cm 2 to attach an antibacterial test solution. At this time, the antibacterial test solution was adhered to one PET substrate and ten TiO 2 -supporting PET substrates.

次に、抗菌試験液を付着させたＰＥＴ基材及びＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材を、２００Ｌｘの蛍光灯下にて２時間暴露した。その後、拭き取りキットとして、株式会社エルメックス製Ｐｒｏ・ｍｅｄｉａ ＳＴ−２５を用いて、暴露後のＰＥＴ基材及びＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材それぞれの表面の抗菌試験液を十分に拭き取った。そして、得られた抗菌試験液を、３Ｍ社製ペトリフィルム（登録商標）を用いて培養を行った後、各基材の生菌数を測定した。Next, the PET base material to which the antibacterial test solution was attached and the TiO 2 -supported PET base material were exposed for 2 hours under a 200 Lx fluorescent lamp. Thereafter, as a wiping kit, Pro · media ST-25 manufactured by Elmex Co., Ltd. was used to sufficiently wipe off the antibacterial test solution on the surfaces of the exposed PET substrate and TiO 2 -supported PET substrate. And after culturing the obtained antibacterial test liquid using 3M Petrifilm (trademark), the viable count of each base material was measured.

［比較例］
まず、ＪＩＳ Ｚ２８０１に準拠して、平型寒天培地に表皮ブドウ球菌を前培養した。次に、得られた表皮ブドウ球菌を滅菌生理食塩水に懸濁することにより、抗菌試験液として濃度が１×１０９ＣＦＵ／ｍＬの細菌懸濁液を得た。[Comparative example]
First, in accordance with JIS Z2801, Staphylococcus epidermidis was precultured on a flat agar medium. Next, the obtained Staphylococcus epidermidis was suspended in sterile physiological saline to obtain a bacterial suspension having a concentration of 1 × 10 9 CFU / mL as an antibacterial test solution.

得られた抗菌試験液を滅菌ガーゼに含浸させた後、厚みが５ｍｍで５ｃｍ角のシリコーンゴムシートに対して、２０ｇ／ｃｍ２の荷重で抗菌試験液を付着させた。さらに当該シリコーンゴムシートを上述のＰＥＴ基材及びＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材に２０ｇ／ｃｍ２の荷重で押し付け、抗菌試験液を付着させた。この際、抗菌試験液は、１枚のＰＥＴ基材と１０枚のＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材に付着させた。After the obtained antibacterial test solution was impregnated in sterile gauze, the antibacterial test solution was attached to a 5 mm square silicone rubber sheet with a load of 20 g / cm 2 . Further, the silicone rubber sheet was pressed against the above-described PET substrate and TiO 2 -supporting PET substrate with a load of 20 g / cm 2 to attach an antibacterial test solution. At this time, the antibacterial test solution was adhered to one PET substrate and ten TiO 2 -supporting PET substrates.

次に、抗菌試験液を付着させたＰＥＴ基材及びＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材を、２００Ｌｘの蛍光灯下にて２時間暴露した。その後、拭き取りキットとして、上述のＰｒｏ・ｍｅｄｉａ ＳＴ−２５を用いて、暴露後のＰＥＴ基材及びＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材それぞれの表面の抗菌試験液を十分に拭き取った。そして、得られた抗菌試験液を、上述のペトリフィルムを用いて培養を行った後、各基材の生菌数を測定した。Next, the PET base material to which the antibacterial test solution was attached and the TiO 2 -supported PET base material were exposed for 2 hours under a 200 Lx fluorescent lamp. Then, using the above-mentioned Pro · media ST-25 as a wiping kit, the antibacterial test solutions on the surfaces of the exposed PET substrate and TiO 2 -supported PET substrate were sufficiently wiped off. And after culturing the obtained antibacterial test liquid using the above-mentioned Petri film, the viable count of each base material was measured.

［実環境での試験］
まず、試験片として、上述の試験基材と同じＰＥＴ基材を１０ｃｍ角としたものを準備した。さらに、試験片として、上述の試験基材と同じＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材を１０ｃｍ角としたものも準備した。[Test in real environment]
First, as a test piece, a 10-cm square PET substrate same as the above-described test substrate was prepared. Further, as a specimen was also prepared that the same TiO 2 supported PET substrate with the aforementioned test substrate was 10cm square.

そして、１枚のＰＥＴ基材と１０枚のＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材とを事務机の天板上に１週間貼り付け、人の皮膚と接触させた。その後、上述のＰｒｏ・ｍｅｄｉａ ＳＴ−２５で各試験片の表面を十分に拭き取った。そして、得られた検液を、上述のペトリフィルムを用いて培養を行った後、各基材の生菌数を測定した。Then, one PET base material and ten TiO 2 -supporting PET base materials were pasted on the top plate of an office desk for one week and brought into contact with human skin. Thereafter, the surface of each test piece was sufficiently wiped with the above-mentioned Pro · media ST-25. And after culturing the obtained test liquid using the above-mentioned Petri film, the viable count of each base material was measured.

［評価］
ＰＥＴ基材の生菌数に対する、ＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材の生菌数の低減率を以下の式により算出した。各ＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材の低減率を表１に示す。
低減率（％）＝［ＴｉＯ２担持ＰＥＴ基材の生菌数］／［ＰＥＴ基材の生菌数］×１００[Evaluation]
The reduction rate of the viable cell count of the TiO 2 -supporting PET base material relative to the viable cell count of the PET base material was calculated by the following formula. Table 1 shows the reduction rate of each TiO 2 -supporting PET substrate.
Reduction rate (%) = [viable cell count of TiO 2 -supported PET substrate] / [viable cell count of PET substrate] × 100

Figure 0006451956
Figure 0006451956

表１に示すように、実施例の低減率は、実環境の低減率に近い値を示している。また、低減率のばらつきも実環境のばらつきに近い値を示している。これに対し、比較例の低減率は、実環境の低減率と乖離しており、さらに、ばらつきも大きい結果となっている。これは、抗菌試験液にポリオール誘導体が混合されていないため、水分の蒸発に伴い、多くの細菌が死滅し、正しく評価することができなかったためと推測される。   As shown in Table 1, the reduction rate of the example shows a value close to the reduction rate of the real environment. Also, the variation in the reduction rate is close to the variation in the actual environment. On the other hand, the reduction rate of the comparative example is different from the reduction rate of the actual environment, and the variation is large. This is presumed to be because, because no polyol derivative was mixed in the antibacterial test solution, many bacteria were killed along with the evaporation of water and could not be evaluated correctly.

このように、本実施形態の実施形態に係る抗菌試験方法は、抗菌性能を再現性よく実環境に近い状態で評価できることが分かる。   Thus, it can be seen that the antibacterial test method according to the embodiment of the present embodiment can evaluate the antibacterial performance in a state close to the real environment with good reproducibility.

特願２０１４−１６５９５４号（出願日：２０１４年８月１８日）の全内容は、ここに援用される。   The entire contents of Japanese Patent Application No. 2014-165594 (filing date: August 18, 2014) are incorporated herein by reference.

以上、実施例に沿って本実施形態の内容を説明したが、本実施形態はこれらの記載に限定されるものではなく、種々の変形及び改良が可能であることは、当業者には自明である。   As described above, the contents of the present embodiment have been described according to the examples. However, the present embodiment is not limited to these descriptions, and it is obvious to those skilled in the art that various modifications and improvements are possible. is there.

本発明では、試験対象物の表面に付着させる抗菌試験液に皮脂膜の材料としてのポリオール誘導体を混合している。そのため、試験中における細菌の死滅等を抑制し、試験対象物の抗菌性能を再現性よく、実環境に近い状態にて、簡便に評価することが可能となる。   In the present invention, a polyol derivative as a material for the sebum film is mixed with an antibacterial test solution to be adhered to the surface of the test object. For this reason, it is possible to easily evaluate the antibacterial performance of the test object in a state close to the real environment with good reproducibility by suppressing the death of bacteria during the test.

１ 試験対象物
１０，２０ 抗菌試験液付着装置
１２ 塗布部
２２ ノズル（散布部）
２０ 抗菌試験液付着装置1 Test object 10, 20 Antibacterial test liquid adhesion device 12 Application part 22 Nozzle (spreading part)
20 Antibacterial test solution adhesion device

Claims (4)

細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液と、
トリオールであるポリオール誘導体と、
を含有し、
前記細菌懸濁液１０質量部に対して、前記ポリオール誘導体を１０〜５００質量部含み、
前記ポリオール誘導体は、重量平均分子量が１００〜１０００である第一ポリオール誘導体と、重量平均分子量が１０００を超える第二ポリオール誘導体とを含む、抗菌試験液。 A bacterial suspension in which the bacteria are suspended in sterile saline;
A polyol derivative that is a triol;
Containing
10 to 500 parts by mass of the polyol derivative with respect to 10 parts by mass of the bacterial suspension,
The said polyol derivative is an antibacterial test liquid containing the 1st polyol derivative whose weight average molecular weight is 100-1000, and the 2nd polyol derivative whose weight average molecular weight exceeds 1000. 請求項１に記載の抗菌試験液を保持している液保持部と、
前記抗菌試験液を試験対象物に付着させる付着部と、
を有する、抗菌試験液付着装置。 A liquid holding portion that holds the antimicrobial test solution according to claim 1,
An adhering portion for adhering the antibacterial test solution to the test object;
An antibacterial test solution attachment device. 前記付着部は、前記抗菌試験液を前記試験対象物に塗布するための塗布部であるか、又は前記抗菌試験液を前記試験対象物に散布するための散布部である、請求項２に記載の抗菌試験液付着装置。   The said adhesion part is an application part for apply | coating the said antibacterial test liquid to the said test object, or is a spreading | diffusion part for spraying the said antibacterial test liquid to the said test object. Antibacterial test solution adhesion device. 細菌を滅菌生理食塩水中に懸濁させた細菌懸濁液を得る工程と、
前記細菌懸濁液１０質量部に対して、トリオールであるポリオール誘導体を１０〜５００質量部混合した抗菌試験液を得る工程と、
前記抗菌試験液を試験対象物に対して付着させた後、所定時間暴露する工程と、
前記暴露後に、前記試験対象物の表面から抗菌試験液を回収し、回収液を培養する工程と、
を有し、
前記抗菌試験液は、前記細菌懸濁液に重量平均分子量が１００〜１０００の第一ポリオール誘導体を混合した後に、重量平均分子量が１０００を超える第二ポリオール誘導体を混合することにより得られる抗菌試験方法。 Obtaining a bacterial suspension in which the bacteria are suspended in sterile saline;
A step of obtaining an antibacterial test liquid in which 10 to 500 parts by mass of a polyol derivative as a triol is mixed with 10 parts by mass of the bacterial suspension;
A step of exposing the antibacterial test solution to the test object, and then exposing for a predetermined time;
Collecting the antibacterial test solution from the surface of the test object after the exposure, and culturing the collected solution;
Have
The antibacterial test solution is obtained by mixing a first polyol derivative having a weight average molecular weight of 100 to 1000 with the bacterial suspension and then mixing a second polyol derivative having a weight average molecular weight exceeding 1000. .
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