JP5762286B2 - 分化無核細胞、及び該無核細胞の作成方法 - Google Patents
分化無核細胞、及び該無核細胞の作成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5762286B2 JP5762286B2 JP2011520133A JP2011520133A JP5762286B2 JP 5762286 B2 JP5762286 B2 JP 5762286B2 JP 2011520133 A JP2011520133 A JP 2011520133A JP 2011520133 A JP2011520133 A JP 2011520133A JP 5762286 B2 JP5762286 B2 JP 5762286B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- stem cells
- cells
- cell
- peptide
- myc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0641—Erythrocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/04—Immortalised cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
- C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES
Description
本明細書に記載される実施形態の実行又は試験に用いられる、本明細書に記載されるあらゆる方法及び物質に類似するもの又は同等物は、部分的に即座に開示されていると考えられる。
幹細胞
不死化される、又は条件的に不死化される幹細胞(例えば、造血幹細胞)は、あらゆる適切なソースから獲得される。特定の実施形態において、利用される幹細胞(例えば、造血幹細胞)は、動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、サル、ラット、ネズミ又はこれらと同類のもの由来である。いくつかの実施形態において、幹細胞は、個体の骨髄、末梢血、臍帯又は胎児組織から獲得される、あるいは、個体の骨髄、末梢血、臍帯又は胎児組織から入手される。
特定の実施形態において、条件的に不死化された幹細胞(例えば、造血幹細胞)は、適切な期間、適切な条件下で継続して維持され、不死化された又は条件的に不死化された幹細胞株の確立に成功した。
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるのは、選択された型の複数の細胞を生成する方法であり、該方法は、(a)幹細胞を提供する工程と、(b)条件的に不死化された幹細胞を生成するために、不死化を誘導する剤をコードする導入遺伝子又は、不死化を誘導する腫瘍−ペプチドを、条件的に不死化された幹細胞へと導入する工程と、(c)不死化された複数の幹細胞(例えば、造血幹細胞)の分化を複数の細胞の型へと誘導する工程を備える。
さらに、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載されるあらゆる方法に基づいて作成される分化細胞(例えば赤血球、血小板又は前駆体)である。
特定の実施形態において、本明細書に提供されるのは、条件的に不死化された幹細胞(例えば、造血幹細胞)の分化を選択的に誘導する化合物を同定する方法及びキットであり、該キット及び方法は、(a)条件的に不死化された幹細胞を提供すること、(b)条件的に不死化された幹細胞を化合物に接触させること、(c)条件的に不死化された幹細胞の分化の状況における化合物の効果を検知又は測定すること、(d)不死化された幹細胞と接触する際に化合物の同定が不明である場合、不死化された幹細胞と接触される化合物を任意で分離及び特徴付けることにより行なわれる。
本明細書のあらゆる方法に基づいて作成された細胞は、任意で、治療として用いられるあるいは、研究目的の細胞のソースとして用いられる。
特定の実施形態において、本明細書に記載されるのは、無核細胞の欠乏により特徴付けられる疾患を処置する方法であって、該方法は、本明細書に開示される方法に基づいて作成される無核細胞を投与する工程を備える。いくつかの実施形態において、疾患は、貧血(例えば、再生不良性貧血、悪性貧血、鉄欠乏性貧血、鎌状赤血球貧血、球状赤血球症、溶血性貧血)、ゴーシェ病、溶血、好中球減少、血小板減少、果粒球減少症、血友病、ホジキンリンパ腫、非ホジキン型リンパ腫、B細胞性慢性リンパ性白血病、バーキットリンパ腫、濾胞状リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、プレ-B急性リンパ性白血病、プレ-T急性リンパ性白血病、急性前骨髄球性白血病、難治性白血病、又はこれらの組合せである。特定の例において、無核細胞における欠乏により特徴付けられる疾患は、化学療法を原因とする(部分的又は完全に)。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される方法により生成される無核細胞は、化学療法と同時に投与される。
本明細書に開示されるあらゆる方法に基づいて作成された細胞は、所望のポリペプチドの送達ビヒクルとして、例えば、治療的又は診断的目的のために、患者に対して任意に投与される。例えば、タンパク質送達のために、本明細書に記載される方法により作成された細胞、例えば赤血球及び血小板を用いる重要な利点は、細胞の一時的性質、爛熟した無核細胞における遺伝物質の欠乏、個体発生からのリンパ領域による送達のための「自己血管(self vessel)」の耐性を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、治療的に有益なポリペプチドである。他の実施形態において、ポリペプチドは、診断のポリペプチドである。特定の実施形態において、ポリペプチドは、腫瘍−ペプチドではない。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、エクスポート配列及び細胞膜保持エレメントを備え、これにより、細胞におけるポリペプチド又は細胞により発現されたポリペプチドは、細胞膜に維持される。いくつかの限定しない実施形態において、細胞膜保持エレメントは、GPI−結合タンパク質、CD8又はCD16である。特定の実施形態において、細胞におけるポリペプチド又は細胞により発現されたポリペプチドは、細胞膜に保持されると、ポリペプチドはさらに、プロテアーゼ開裂部位などの細胞表面からポリペプチドの除去を促進する配列を備える。いくつかの実施形態において、プロテアーゼ開裂部位は、例えばヒト血清プロテアーゼといった血清プロテアーゼの基質である。この手法により生成された細胞は、特異的なペプチドを、患者の末梢血に導入することで患者に送達するのに用いられ、この場合、血清プロテアーゼは、細胞表面からペプチドを開裂及び開放する。本明細書に開示される手法で生成される開裂可能なポリペプチドを含む細胞膜上で選択されたポリペプチドを発現する細胞は、治療的なタンパク質の送達のためのビヒクルである。例えば、特定の実施形態において、赤血球がタンパク質送達のためのビヒクルとして用いられると、重要な利点は、赤血球の一時的性質及び赤血球が送達するコードされたタンパク質、爛熟した無核の赤血球における遺伝物質の欠乏、個体発生からのリンパ領域による許容されるための「管」の使用、及びインビトロで送達するための細胞を生成する能力を含む。
いくつかの実施形態において、分化された血液細胞(例えば、赤血球又は血小板)の生成は、バイオリアクタの使用により達成される。特定の実施形態において、バイオリアクタは、フローリアクタ又はバッチリアクタである。特定の実施形態において、フローリアクタは、連続フローリアクタ、又はバッチフローリアクタである。特定の実施形態において、リアクタにおける合成は、容器に不死化された又は条件的に不死化された幹細胞の集団をシードすることで達成される。いくつかの実施形態において、不死化された又は条件的に不死化された幹細胞の集団は誘導され、または増殖が可能となる(例えば、ポリペプチドにより引き起こされた細胞生存、生存能及び/又は増殖を促進することによる)。不死化された又は条件的に不死化された幹細胞の十分な集団(例えば、少なくとも0.1kg、1kg、10kg又は100kg)が作成されると、条件的に不死化された幹細胞(例えば、造血幹細胞)は、条件的に不死化された幹細胞(例えば、造血幹細胞)を所望の細胞へと分化を誘導する培地に、例えば、本明細書に記載されるあらゆる方法に基づいて、接触させる。特定の実施形態において、所望の分化された細胞(例えば、前駆体及び/又は高分化された細胞)がその後収集される。
実施例1
図1Aは、プライマリマウスHSC細胞を、MYC.ER及びBcl-2で形質導入するのに用いられるレトロウイルスコンストラクトの概略的表示を示す。pMSCVのバックボーンの変異体が生成され、ヒトMYC.ERまたはBcr-2の他にIRESエレメントのcDNA、及びレポーター遺伝子をコードする。結果として得られたウイルスはバイシストロニック転写物を生成することにより、レポーター遺伝子の発現のレベルが第1cDNAの発現レベルに互いに関係付けられる。図1Bは、pMIG-MYC.ER及びpMIG-Bcl-2.で形質導入後に、5-フルオロウラシルで処置されたドナーから獲得されたHSCのフローサイトメトリ分析を示す。図1Cは、パネルBで示される形質導入されたHSCが移植されたマウスの白血病誘導の動態を示す。致死的に放射線照射されたマウスのコホートは、pMIG-MYC.ER及びpMIG^Bcl-2.で形質導入された105 HCSで移植される。移植後1週間経過してから、マウスは、一定の4OHTを1週間ごとに注入される。曲線は、4OHT注入が開始されてから(グラフにおける0日)、時間内の一定の時点で、生存するマウスの比率を示す。マウスの全てAMLのような白血病で一様に死亡した。本明細書に示されるデータは、4の独立した実験の1つの代表的実験からである。図1Dは、骨髄性白血病のマウスから回復後すぐにおけるctlt−造血幹細胞のFACS分析を示す。条件的に不死化された造血幹細胞株を確立する方法の初期段階において、細胞は、GFPの高レベルで均一的に発現し、c-kit及びSca-1を高レベルで優先的に発現し、そして、Flk-2、CD34又は細胞系マーカを発現しない。ここで細胞系マーカは、CD19、B220(図示せず)、又はThy1.2、Mac-1、Gr-1、Ter-119である。図1Eは、確立された、条件的に不死化された造血幹細胞株のFACS分析をしめす。条件的に不死化された造血幹細胞が膨張され、凍結保存されると、パネルBに示される安定した表面のフェノタイプが維持される。これらの細胞は、高レベルのSca-1を発現するが、c-Kitの表面レベルを減少させ、Flk-2、CD34、B220、CD19又は他の細胞系マーカ(thy1.2、Gr-1、Mac-1、Ter-119:図示せず)のネガティブは維持される。HSC様のフェノタイプを維持するためにG-CSFを必要とするため、表面からc-kitレベルの減少は、継続的なシグナリングの結果、生じる。図1Fは、野生型のC57/BL6マウスの骨髄から得られる標準的な操作の行われていない造血幹細胞の幹細胞マーカのFACS分析を示す。骨髄幹細胞は、野生型、操作の行われていないC57/BL6マウスから獲得される。標準的なHSCによりマーカータンパク質の発現レベルと、ctlt-造血幹細胞株におけるマーカータンパク質の発現レベルを比較するために、細胞はc-kit、sca-1、Flk-2及びCD34に対する抗体で染色される。
図2は、レトロウイルスの挿入されたPCR増幅による、条件的に不死化された造血幹細胞株のクローン分析を示す。我々は、ゲノムDNAを、C57/BL6マウスから獲得された標準的な骨髄細胞、もしくは2つの親細胞株、又は親細胞株の単細胞クローン由来の7つの細胞株から分離する。組み込まれたレトロウイルス挿入物は、ネスティッド2段階PCR法で増幅される。レーン1は、標準的なC57/BL6細胞のパターンを示す。レーン2及びレーン3は、多細胞株におけるレトロウイルスの組み込みのパターンを示す。レーン4から10は、いずれかの親細胞株の単細胞のクローンから元来由来する細胞株におけるレトロウイルスの挿入物のパターンを示す。親株のように、クローンの集団は、致死的な放射線照射からマウスを救出し、造血系細胞が生じる。
図3は、ctlt-造血幹細胞の移植後に生じる成熟免疫細胞の特徴を示す。図3Aは、移植後にリンパ組織におけるctlt-造血幹細胞由来の細胞の分布を示す。C57/BL6マウスのコホートは、致死的に放射線照射され、Rag-1-/-マウス由来の103 ctlt-造血幹細胞及び骨髄細胞全体における3×105の担体からなる移植片が提供される。条件的に不死化された造血幹細胞から成長した細胞は、レトロウイルスにコードされたレポーター遺伝子であるGFPにより、インビボで追跡される。キメラマウスの骨髄、胸腺、脾臓及びリンパ節においてGFPを発現する造血細胞の分布は、パネルAで示される。これらのヒストグラムは、5のコホート内における、例となるそれぞれ1のマウス臓器由来である。図3Bは、骨髄におけるGFP+骨髄系細胞の検知を示す。我々は骨髄細胞をMac-1及びGr-1の染色を行った。キメラマウスの骨髄で見出される骨髄細胞の全てがレトロウイルスにコードされたレポーター遺伝子を発現しないが、重要な部分はGFP+であり、従ってctlt-造血幹細胞由来であることを、パネルBは示す。図3Cは、脾臓における末梢成熟リンパ球の分析を示す。キメラマウスの脾臓は、成熟T細胞及びB細胞のフローサイトメトリにより分析された。パネルCは、CD4又はCD8のいずれかのシングルポジティブであるTCRαβのT細胞の存在を示す。さらに、パネルCは、表面上にIgM及びIgDを発現するCD19+B細胞の検知を示す。脾臓における成熟T細胞の分布が野生型の操作されていないC57/BL6マウスで見出される分布に相当するので、B細胞の成長が遅延される。図3Dは、条件的に不死化された幹細胞の第2の連続継代性の後の、移植レシピエントマウスにおける末梢成熟リンパ球の分析を示す。脾臓は、キメラマウスから収集され、単細胞懸濁液は、FACS分析のために作成及び使用される。移植レシピエントマウス及び野生型C57/BL6マウスにおいて見出される成熟T細胞及びB細胞の分布が比較される。正常なマウスと類似する分布で、成熟したCD4又はCD8のシングルポジティブであるTCRαβのT細胞の脾臓における存在をパネルDが示す。例えば、正常なマウスよりも低い分布であったとしても、CD19+IgM+及びIgD+B細胞は存在する。
実施例4は、ctlt−造血幹細胞による致死的放射線照射から長期間の救出を示す。条件的に不死化された造血幹細胞のみの移植では、赤血球の損失により危機を超えて誘導された放射線保護を提供しない。図4は致死的放射線照射され、103又は105の細胞からなる移植片を与えられたマウスのコホルトにおけるKaplan/Mayer生存曲線を示し、該移植片は、2の異なる条件的に不死化された造血幹細胞株由来の細胞で合成される。(条件的に不死化された造血幹細胞又は条件的に不死化された造血幹細胞2)。10のマウス及びこれらの動物からなるコホルトの全ては、均一的に重篤な貧血により死亡した。我々は、マウスの2のコホルトの死亡曲線を示し、該マウスは、致死量の放射線を照射されるとともに、いずれかの細胞株から103の条件的に不死化された造血幹細胞とともにRag-1-/-マウス由来の3×105担体全体の骨髄細胞が提供される。コホルトは、それぞれ3−4のマウスからなり、移植後6ヶ月まで動物は生き残り、健康であった。
健康なマウスの2のコホルトに対して、亜致死量の放射線照射を行い、貧血を誘導させる。貧血マウスの第1グループは、適切な担体における赤血球(本明細書に開示されるように生成された)を投与する。マウス(対照となるマウス)の第2グループは、適切な担体のみが投与された。2のグループのマウスの死亡率が比較されることで、貧血からマウスを救出するための、本明細書に開示される赤血球の投与の効果を決定する。
貧血は、文献で報告されているように、腎不全マウスモデルにおいて誘導される。Hamamori, et al. J. Clin. Invest. (1995), 95:1808-1813 簡潔に述べると、2段階の腎摘除が7−8週のオスのヌードマウスに対して実行される。マウスにおける貧血が、ヘマトクリットレベルを測定する。本明細書に開示される方法により生成された赤血球の投与を受けたマウスの死亡率が、細胞の担体のみを受けたマウスの死亡率と比較され、腎不全を原因とする貧血の処置に本明細書に開示される赤血球の投与の効果を決定する。
Claims (18)
- 複数の無核細胞を作成する方法であって、該方法は、
赤血球への分化を誘導する剤IL-3およびエリスロポエチン(EPO)の存在下で条件的に不死化された幹細胞を培養する工程を備え、
前記条件的に不死化された幹細胞は、
a. 複数の幹細胞を、MYC分子をコードする塩基配列を備える第1ベクターで形質導入すること、
b. 幹細胞を、Bcl−2、Bcl−X又はこれらの組合せをコードする塩基配列を備える第2レトロウイルスベクターで形質導入することにより、生成され、
活性化されたMyc分子の活性は、分化前に抑制されていることを特徴とする、複数の無核細胞を作成する方法。 - 前記第1ベクターは、さらにヒトエストロゲン受容体のホルモン結合ドメインを備えることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- さらに、前記Myc分子が核への転位を誘導する工程を備えることを特徴とする、請求項1または2に記載の方法。
- 前記第1ベクター、第2ベクター、又は前記第1ベクターと第2ベクターの両方は、マウス幹細胞ウイルス(MSCV)又はこれらの類縁体であり、随意にMSCV−(IRES)−GFP、又はこれらの誘導体であり、随意にMSCV−(IRES)−GFPであり、さらに、ウッドチャックB型肝炎ウイルスRNA調節エレメント(WRE)を含むことを特徴とする、請求項1乃至3のいずれかに記載の方法。
- 複数の無核細胞を作成する方法であって、該方法は、
赤血球への分化を誘導する剤IL-3およびエリスロポエチン(EPO)の存在下で条件的に不死化された幹細胞を培養する工程を備え、
前記条件的に不死化された幹細胞は、
a. 複数の幹細胞を、核に転位させるMYC分子を備える外因的に合成された第1ペプチドと接触させること、
b. 前記幹細胞を、Bcl−2、BCL−X又はこれらの組合せを備える外因的に合成された第2ペプチドと接触させることにより、生成され、
前記第1ペプチドは、分化前に前記条件的に不死化された幹細胞との接触から除かれることを特徴とする、複数の無核細胞を作成する方法。 - 前記第1ペプチド、第2ペプチド又は前記第1ペプチド及び第2ペプチドの両方は、タンパク質導入ドメイン配列を備えることを特徴とする、請求項5に記載の方法。
- 第1タンパク質、第2タンパク質又は第1タンパク質及び第2タンパク質の両方は、TATタンパク質導入ドメイン配列を備えることを特徴とする、請求項5又は6に記載の方法。
- 前記MYC分子は、c−Myc、l−Myc、n−Myc、s−Myc、又は、これらの組合せであることを特徴とする、請求項1乃至7のいずれかに記載の方法。
- 前記複数の幹細胞を、エストラジオール(E2)、4−ヒドロキシタモキシフェン(4−OHT)又はこれらの両方と接触させる工程をさらに備えることを特徴とする、請求項1乃至4のいずれかに記載の方法。
- 無核細胞を作成する方法であって、該方法は、赤血球への分化を誘導する剤の存在下で条件的に不死化された造血幹細胞を培養する工程を備え、
ここで前記剤はIL−3及びエリスロポエチン(EPO)であり、
前記剤は赤血球を成熟させるために前記条件的に不死化された幹細胞の分化を誘導してその結果無核細胞を生成し、
前記条件的に不死化された造血幹細胞は、以下の工程a.乃至c.によって生成され、
a. 前記条件的に不死化された造血幹細胞に、
(i)腫瘍−ペプチドをコードする核酸配列を含む第1ベクター、
(ii)外因的に合成された腫瘍−ペプチド、
を1つ以上導入する工程であって、
ここで前記腫瘍−ペプチドはMyc、n−Myc、c−Myc、l−Myc、v−Myc、s−Myc、IcN−1又はその組み合わせである工程、
b. 前記条件的に不死化された造血幹細胞に、
(i)抗アポトーシスポリペプチドをコードする核酸配列を含む第2ベクター、
(ii)外因的に合成された抗アポトーシスポリペプチド、
を1つ以上導入する工程であって、
ここで前記抗アポトーシスポリペプチドは抗アポトーシス活性を有するBcl−2ホモロジドメインを1つ以上含む工程、
c. 前記条件的に不死化された造血幹細胞をIL−3、IL−6、幹細胞因子、トロンボポイエチン、Flt3リガンド又はこれらの組合せとともに培養する工程、
ここで前記腫瘍−ペプチドの活性は分化前に抑制されている、無核細胞を作成する方法。 - 前記腫瘍−ペプチドがMycであることを特徴とする、請求項10に記載の方法。
- 前記抗アポトーシスポリペプチドが、BH1、BH2、BH3及びBH4からなる群から選択される1つ以上のBcl−2ホモロジドメインを含むことを特徴とする、請求項10又は11に記載の方法。
- 前記腫瘍−ペプチドを核に転位させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項10乃至12のいずれかに記載の方法。
- 前記第1ペプチド、前記第2ペプチド又は第1ペプチド及び第2ペプチドの両方がタンパク質導入ドメインを含み、該タンパク質導入ドメインは細胞の核へペプチドを輸送することが可能であることを特徴とする、請求項10に記載の方法。
- 前記第1ペプチド、前記第2ペプチド又は第1ペプチド及び第2ペプチドの両方が、TATタンパク質導入ドメイン配列又はVPRタンパク質導入ドメイン配列を含むことを特徴とする、請求項10又は14に記載の方法。
- 前記腫瘍−ペプチドがヒトエストロゲン受容体のホルモン結合ドメインをさらに含むことを特徴とする、請求項10乃至13のいずれかに記載の方法。
- 前記造血幹細胞をエストラジオール(E2)、4−ヒドロキシタモキシフェン(4−OHT)又はこれらの両方と接触させる工程をさらに含むことを特徴とする、請求項10乃至13、16のいずれかに記載の方法。
- 分化前の前記腫瘍−ペプチドの活性の抑制が、前記造血幹細胞との接触から前記腫瘍−ペプチドを除去する工程を含むことを特徴とする、請求項10記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US8241008P | 2008-07-21 | 2008-07-21 | |
US61/082,410 | 2008-07-21 | ||
PCT/US2009/051242 WO2010011644A2 (en) | 2008-07-21 | 2009-07-21 | Differentiated anucleated cells and method for preparing the same |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011528567A JP2011528567A (ja) | 2011-11-24 |
JP2011528567A5 JP2011528567A5 (ja) | 2012-09-06 |
JP5762286B2 true JP5762286B2 (ja) | 2015-08-12 |
Family
ID=41570826
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011520133A Active JP5762286B2 (ja) | 2008-07-21 | 2009-07-21 | 分化無核細胞、及び該無核細胞の作成方法 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9169462B2 (ja) |
EP (2) | EP2746387A1 (ja) |
JP (1) | JP5762286B2 (ja) |
CN (2) | CN103937749B (ja) |
AU (1) | AU2009274172B2 (ja) |
CA (1) | CA2731767C (ja) |
DK (1) | DK2313496T3 (ja) |
ES (1) | ES2525411T3 (ja) |
IL (1) | IL209343A (ja) |
SG (1) | SG193145A1 (ja) |
WO (1) | WO2010011644A2 (ja) |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3065947C (en) | 2005-10-18 | 2023-03-07 | National Jewish Health | Conditionally immortalized long-term stem cells and methods of making and using such cells |
WO2008112922A2 (en) * | 2007-03-13 | 2008-09-18 | National Jewish Medical And Research Center | Methods for generation of antibodies |
WO2009139930A2 (en) | 2008-05-16 | 2009-11-19 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Antibodies and processes for preparing the same |
US9169462B2 (en) | 2008-07-21 | 2015-10-27 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing mature erythrocytes from conditionally immortalized hematopoietic stem cells |
US8784825B2 (en) | 2008-08-28 | 2014-07-22 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Modulators of MYC, methods of using the same, and methods of identifying agents that modulate MYC |
JP5861191B2 (ja) * | 2010-09-30 | 2016-02-16 | 国立大学法人 熊本大学 | ミエロイド系血液細胞の製造方法 |
SG11201401188QA (en) * | 2011-10-03 | 2014-09-26 | Nissan Chemical Ind Ltd | Method for producing megakaryocytes and/or platelets from pluripotent stem cells |
AU2013292330B2 (en) * | 2012-07-20 | 2018-07-12 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Enhanced reconstitution and autoreconstitution of the hematopoietic compartment |
US9365825B2 (en) * | 2013-03-11 | 2016-06-14 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Expansion of adult stem cells in vitro |
US10272115B2 (en) * | 2013-03-11 | 2019-04-30 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Production and use of red blood cells |
EP2997135B1 (en) * | 2013-05-15 | 2020-04-29 | University Of Rochester | Human extensively self-renewing erythroblasts (esre) |
WO2015035235A1 (en) | 2013-09-06 | 2015-03-12 | Consejo Nacional De Investigaciones Cientificas Y Tecnicas (Conicet) | Compositions and methods for increasing mesenchymal stromal cell migration to tumors |
US10191055B2 (en) * | 2014-11-26 | 2019-01-29 | Oxford University Innovation Limited | Detection of acute myeloid leukaemia (AML) leukaemic stem cells (LSC) |
US20180051253A1 (en) | 2015-03-18 | 2018-02-22 | The Regents Of The University Of California | Methods of preventing and reversing stem cell aging |
US20190185820A1 (en) * | 2016-08-26 | 2019-06-20 | The Regents Of The University Of California | Compositions and Methods for Inhibiting Stem Cell Aging |
CN113786476A (zh) | 2016-12-02 | 2021-12-14 | 泰加生物工艺学公司 | 纳米颗粒调配物 |
WO2018204762A1 (en) * | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Camp4 Therapeutics Corporation | Methods and compositions of modeling diseases with hematopoietic cell systems |
FR3068366B1 (fr) * | 2017-06-30 | 2023-11-24 | Francais Du Sang Ets | Procede de production de progeniteurs erythroides |
US10149898B2 (en) | 2017-08-03 | 2018-12-11 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for the treatment of melanoma |
WO2019084531A1 (en) | 2017-10-27 | 2019-05-02 | The Children's Hospital Of Philadelphia | MODIFIED RED GLOBES HAVING PHENOTYPES OF RARE ANTIGENS |
CN108866005A (zh) * | 2018-07-20 | 2018-11-23 | 东南大学 | 一种永生化人源神经干细胞系及其制备方法 |
CN113583965A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-11-02 | 大连干细胞与精准医学创新研究院 | 一种条件永生化人神经干细胞来源细胞膜纳米囊泡制剂及其制备方法和应用 |
WO2024010317A1 (ko) * | 2022-07-04 | 2024-01-11 | 주식회사 아트블러드 | 유전자 과발현 조합을 이용한 적혈구 분화능이 우수한 불멸화 적혈구전구세포주 확립, 이의 제조방법 및 용도 |
Family Cites Families (52)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4963489A (en) | 1987-04-14 | 1990-10-16 | Marrow-Tech, Inc. | Three-dimensional cell and tissue culture system |
US5476996A (en) | 1988-06-14 | 1995-12-19 | Lidak Pharmaceuticals | Human immune system in non-human animal |
US5849288A (en) | 1990-01-15 | 1998-12-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method for production of monoclonal antibodies in chimeric mice or rats having xenogeneic antibody-producing cells |
US6255458B1 (en) | 1990-08-29 | 2001-07-03 | Genpharm International | High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin |
EP0656950B1 (en) | 1992-08-21 | 1998-11-04 | Biogen, Inc. | Tat-derived transport polypeptides |
US5580760A (en) | 1993-02-22 | 1996-12-03 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | FUSE binding protein and cDNA therefor |
EP0710283A4 (en) | 1993-07-22 | 1997-07-02 | Merck & Co Inc | THE EXPRESSION OF HUMAN INTERLEUKIN-1-g (b) IN A TRANSGENIC ANIMAL |
US5599705A (en) | 1993-11-16 | 1997-02-04 | Cameron; Robert B. | In vitro method for producing differentiated universally compatible mature human blood cells |
US6713247B1 (en) | 1996-09-03 | 2004-03-30 | Signal Pharmaceuticials, Inc. | Human CNS cell lines and methods of use therefor |
EP0893493A3 (de) | 1997-07-21 | 2002-12-04 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Genetisch veränderte Zellen und deren Verwendung in der Prophylaxe oder Therapie von Erkrankungen |
GB9720585D0 (en) | 1997-09-26 | 1997-11-26 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
US6861257B1 (en) | 1998-04-08 | 2005-03-01 | Shionogi & Co., Ltd. | Methods for isolation of osteoclast precursor cells and inducing their differentiation into osteoclasts |
US6835567B1 (en) | 1998-04-14 | 2004-12-28 | Signal Pharmaceuticals, Inc. | PNS cell lines and methods of use therefor |
US6451558B1 (en) | 1998-08-03 | 2002-09-17 | Novartis Ag | Genes in the control of hematopoiesis |
US6913925B1 (en) | 1998-08-12 | 2005-07-05 | Signal Pharmaceuticals Llc | Human mesencephalon cell lines and methods of use therefor |
JP2003514765A (ja) | 1999-02-28 | 2003-04-22 | ワシントン ユニバーシティー | 新規形質導入分子およびその使用方法 |
WO2000059540A1 (en) | 1999-04-05 | 2000-10-12 | Biocrystal Ltd. | Assay kits and methods for immune complex-mediated activation involving shed antigens |
US7135287B1 (en) | 1999-10-02 | 2006-11-14 | Biosite, Inc. | Human antibodies |
US7311920B1 (en) | 1999-10-08 | 2007-12-25 | University Of Maryland Biotechnology Institute | Virus coat protein/receptor chimeras and methods of use |
EP1103615A1 (en) | 1999-11-25 | 2001-05-30 | Universite De Geneve | Vectors capable of immortalizing non-dividing cells and cells immortalized with said vectors |
US20010049393A1 (en) | 1999-12-07 | 2001-12-06 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for defining MYC target genes and uses thereof |
WO2001087058A1 (fr) | 2000-05-15 | 2001-11-22 | Sonoko Habu | Souris chimerique ayant une immunite creee par utilisation de cellules positives cd34 humaines et utilisation de cette souris |
US20020155127A1 (en) | 2000-06-02 | 2002-10-24 | Danher Wang | Genetic vaccine against human immunodeficiency virus |
US20030072794A1 (en) | 2000-06-09 | 2003-04-17 | Teni Boulikas | Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes |
US20070248618A1 (en) | 2004-03-16 | 2007-10-25 | Cohen David I | Tat-Based vaccine Compositions and Methods of Making and Using Same |
ATE428790T1 (de) * | 2000-09-25 | 2009-05-15 | Genetronics Inc | Verbessertes system zur regulation der transgenexpression |
US7145055B2 (en) | 2000-12-01 | 2006-12-05 | Central Institute For Experimental Animals | Method of producing a mouse suitable for the engraftment, differentiation and proliferation of heterologous cells, mouse produced by this method and use of the mouse |
WO2002057436A2 (en) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Gendel Limited | Red blood cell from a transgenic animal as vehicle for polypeptide delivery |
CN1240439C (zh) | 2002-03-28 | 2006-02-08 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 肿瘤基因开关药物 |
AU2003228517B2 (en) | 2002-04-16 | 2007-06-21 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Cancer models |
GB2387599B (en) | 2002-04-17 | 2005-08-10 | Jason Peter Brown | Methods for producing antibodies |
PT1652857E (pt) | 2002-05-16 | 2008-12-12 | Bavarian Nordic As | Proteína de fusão de proteínas reguladoras/acessórias do hiv |
EP1408114B1 (de) | 2002-10-11 | 2007-01-03 | Imvision GmbH | Moduläre Antigen-Transporter Moleküle (MAT-Moleküle) zur Modulierung von Immunreaktionen, zugehörige Konstrukte, Verfahren und Verwendungen |
WO2004035535A2 (en) * | 2002-10-15 | 2004-04-29 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Erythrocyte differentiation factor, gene encoding same, and methods of use thereof |
WO2005014785A2 (en) * | 2003-06-18 | 2005-02-17 | The George Washington University | Conditionally-immortalized hematopoietic progenitor cell lines |
CA2529752A1 (en) | 2003-06-20 | 2005-09-15 | The Regents Of The University Of California | Polypeptide transduction and fusogenic peptides |
US7705049B2 (en) | 2004-01-21 | 2010-04-27 | New York University | Methods for treating non-melanoma cancers with PABA |
GB0420963D0 (en) | 2004-09-21 | 2004-10-20 | Reneuron Ltd | Hepatocyte |
WO2006045064A2 (en) | 2004-10-20 | 2006-04-27 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Cultured hematopoietic stem cells and method for expansion and analysis thereof |
WO2007067183A1 (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-14 | The Regents Of The University Of California | Derivation of unlimited quantities of neutrophils or monocyte/dendritic cells |
US20060156422A1 (en) | 2005-01-10 | 2006-07-13 | Medical Research Council | Methods and compositions for the generation of antibodies |
WO2006116512A1 (en) | 2005-04-26 | 2006-11-02 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois, Urbana, Il | Nucleoside compounds and methods of use thereof |
WO2007025286A2 (en) | 2005-08-26 | 2007-03-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Therapy procedure for drug delivery for trigeminal pain |
CA3065947C (en) * | 2005-10-18 | 2023-03-07 | National Jewish Health | Conditionally immortalized long-term stem cells and methods of making and using such cells |
CA2626584A1 (en) | 2005-11-04 | 2007-05-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of nav1.8 gene |
EP1792627A1 (en) | 2005-12-05 | 2007-06-06 | ImVisioN AG | Modulation of the immune response by administration of intralymphatic transduction allergen (ITAG-)-molecules |
WO2008112922A2 (en) | 2007-03-13 | 2008-09-18 | National Jewish Medical And Research Center | Methods for generation of antibodies |
WO2009059304A2 (en) | 2007-11-02 | 2009-05-07 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Compounds for treating abnormal cellular proliferation |
MX2010010165A (es) | 2008-03-17 | 2010-11-25 | Scripps Research Inst | Procedimientos quimicos y geneticos combinados para generacion de celulas madre pluripotentes inducidas. |
WO2009139930A2 (en) | 2008-05-16 | 2009-11-19 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Antibodies and processes for preparing the same |
US9169462B2 (en) | 2008-07-21 | 2015-10-27 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing mature erythrocytes from conditionally immortalized hematopoietic stem cells |
US8784825B2 (en) | 2008-08-28 | 2014-07-22 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Modulators of MYC, methods of using the same, and methods of identifying agents that modulate MYC |
-
2009
- 2009-07-21 US US12/506,894 patent/US9169462B2/en active Active
- 2009-07-21 ES ES09800871.7T patent/ES2525411T3/es active Active
- 2009-07-21 SG SG2013055454A patent/SG193145A1/en unknown
- 2009-07-21 CA CA2731767A patent/CA2731767C/en active Active
- 2009-07-21 DK DK09800871.7T patent/DK2313496T3/en active
- 2009-07-21 EP EP13188850.5A patent/EP2746387A1/en not_active Withdrawn
- 2009-07-21 EP EP09800871.7A patent/EP2313496B1/en active Active
- 2009-07-21 AU AU2009274172A patent/AU2009274172B2/en active Active
- 2009-07-21 JP JP2011520133A patent/JP5762286B2/ja active Active
- 2009-07-21 WO PCT/US2009/051242 patent/WO2010011644A2/en active Application Filing
- 2009-07-21 CN CN201410168106.2A patent/CN103937749B/zh active Active
- 2009-07-21 CN CN200980126312.4A patent/CN102083970B/zh active Active
-
2010
- 2010-11-16 IL IL209343A patent/IL209343A/en active IP Right Grant
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL209343A0 (en) | 2011-01-31 |
CN103937749B (zh) | 2018-04-17 |
WO2010011644A2 (en) | 2010-01-28 |
JP2011528567A (ja) | 2011-11-24 |
CA2731767A1 (en) | 2010-01-28 |
SG193145A1 (en) | 2013-09-30 |
EP2313496B1 (en) | 2014-10-08 |
IL209343A (en) | 2015-02-26 |
DK2313496T3 (en) | 2014-12-15 |
EP2746387A1 (en) | 2014-06-25 |
CN103937749A (zh) | 2014-07-23 |
EP2313496A2 (en) | 2011-04-27 |
CN102083970A (zh) | 2011-06-01 |
CN102083970B (zh) | 2014-10-22 |
AU2009274172A1 (en) | 2010-01-28 |
EP2313496A4 (en) | 2011-07-27 |
WO2010011644A3 (en) | 2010-04-08 |
US20100047217A1 (en) | 2010-02-25 |
CA2731767C (en) | 2016-12-06 |
ES2525411T3 (es) | 2014-12-22 |
AU2009274172B2 (en) | 2015-08-13 |
US9169462B2 (en) | 2015-10-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5762286B2 (ja) | 分化無核細胞、及び該無核細胞の作成方法 | |
AU2020202254B2 (en) | The production and use of red blood cells | |
AU2019240684A1 (en) | Improved methods of cell culture for adoptive cell therapy | |
KR100219258B1 (ko) | 항원-특이적 세포독성 t 세포의 선별적 전달에 의한 면역 조정 방법 | |
Russell et al. | Tumour‐induced host stromal‐cell transformation: Induction of mouse spindle‐cell fibrosarcoma not mediated by gene transfer | |
WO2023082640A1 (zh) | 增强免疫细胞持久性的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120717 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120719 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140205 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140507 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20141126 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150324 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20150324 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20150416 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150518 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150518 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150608 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150609 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5762286 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |