JP5731496B2 - 環状トリアゾナトリウムチャネル遮断薬 - Google Patents

Description

本発明は、ナトリウムチャネル遮断特性を有するトリアジン化合物、および、当該化合物の、関連障害の治療のための医薬の調製のための使用、に関する。

米国特許第４，６４９，１３９号では、式（Ａ）：

の化合物が開示されており、式中、Ｒ^１は、Ｃ_１‐１０アルキル、Ｃ_２‐１０アルケニル、Ｃ_２‐１０アルキニルもしくはＣ_３‐１０シクロアルキルであり、そのうちのいずれかは所望により置換されていてもよく、かつ、Ｒ^２〜Ｒ^６は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１‐６アルキル、アルケニル、アルキニルもしくはアルコキシ（これらはすべて、所望により、ハロゲン、ヒドロキシおよびアリールの１つ以上により置換されていてもよい）、アミノ、モノ‐もしくはジ‐置換されたアミノ、アルケニルオキシ、アシル、アシルオキシ、シアノ、ニトロ、アリールおよびアルキルチオ基から選択されるか、または、Ｒ^２〜Ｒ^６のうちの任意の隣接する２つは連結して、（‐ＣＨ＝ＣＨ‐ＣＨ＝ＣＨ‐）基を形成する。これらの化合物は心障害の治療において活性があり、また、不整脈の治療に特に有用である、とのことが開示されている。

我々の先の特許出願ＷＯ２００８／００７１４９では、式（Ｂ）：

の化合物であって、式中、Ｒ^１は、水素（および＝ＮＨはＮＨ_２）であるか、または、カルボキサミド、Ｃ_１‐１０アルキル、Ｃ_２‐１０アルケニル、Ｃ_１‐３アルキル‐アリール、Ｃ_１‐３アルキル‐ヘテロシクリル、もしくはＣ_３‐１０シクロアルキルであり、そのうちのいずれかは、ヒドロキシ、ハロゲン、カルボキサミド、ハロＣ_１‐６アルキル、Ｃ_１‐６アルキルもしくはＣ_１‐６アルコキシにより所望により置換されていてもよく、；かつ、Ｒ^２〜Ｒ^６は、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１‐６アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコキシ（これらはすべて、所望により、ハロゲン、ヒドロキシおよびアリールの１つ以上により置換されていてもよい）、アミノ、モノ‐またはジ‐置換されたアミノ、アルケニルオキシ、アシル、アシルオキシ、シアノ、ニトロ、アリールおよびアルキルチオ基から選択される化合物の、；
（ａ）哺乳類における障害および、特にヒトにおける、特にてんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症ならびに三叉神経・自律神経性頭痛、の治療のための電位依存性ナトリウムチャネル遮断薬としての、；ならびに
（ｂ）哺乳類における障害の治療のための、および、特に哺乳類の癌の治療のための、葉酸代謝拮抗薬としての、ならびに、特にヒトにおける、三日熱マラリア原虫および熱帯熱マラリア原虫によるマラリアに対する抗マラリア薬としての、
使用が開示されている。

本発明によれば、式（Ｉ）：

の化合物が提供されるが、式中、Ｚは、単結合であるか、または、所望により置換されていてもよい連結基であり、；
Ｒ１がハロ‐アルキル基であり、；かつ
Ａは、（所望により置換されていてもよい）芳香族複素環式または炭素環式環系である。

環系Ａは、任意の数の環成分を含んでいてもよい。

当該芳香族炭素環式環系は、典型的には、フェニルであり、所望により置換されていてもよいフェニルである。

当該芳香族複素環式環系は、典型的には、（ベンゾ）チエニルまたは（ベンゾ）フリルまたは（ベンゾ）ピランまたは（イソ）インドールまたは（イソ）キノリンまたはピリジンであり、所望により置換されていてもよい。

好ましくは、Ｒ１は、Ｃ_１‐１０ハロ‐アルキルである。より好ましくは、Ｒ１は、好ましくはクロロ、ブロモまたはフルオロ、などのハロゲンの１つ以上により置換された、メチル、エチル、ｉ‐プロピル、ｎ‐プロピル、ｉ‐ブチルまたはｎ‐ブチルである。最も好ましくは、Ｒ１は、ジ‐またはトリ‐ハロ（特にクロロおよび／またはフルオロ）置換されている。

適宜、Ｚは、１つまたは２つの所望により置換されていてもよいアルキルまたはフェニル基を有する、炭素原子を含む連結基である。

好ましくは、Ａは、芳香族炭素環式環系、例えばフェニル、ナフチル、アントラセニルもしくはフルオレニルなど、であり、所望により、ハロゲン、例えばクロロ、ブロモもしくはフルオロなど；または、フルオロアルキル、例えばＣＦ３など；アルコキシ、例えばメトキシもしくはエトキシなど；および／または、アリールオキシ、例えばフェノキシまたはベンジルオキシなど、の１つ以上で置換されていてもよい。

１つのグループにおいては、Ａは、例えばジクロロフェニルもしくはトリクロロフェニル、例えば２，３‐、２，６‐および３，５‐ジクロロ‐、ならびに２，３，５‐トリクロロフェニルなどの、クロロフェニル；例えば２‐ブロモ‐および３‐ブロモフェニルなどの、ブロモフェニル；例えばジ‐トリフルオロメチル、例えば３，５‐トリフルオロメチルなどの、トリフルオロメチルフェニル；例えばジ（メ）エトキシ‐およびトリ（メ）エトキシ‐フェニル、例えば４，５ジメトキシフェニル、３，４，５トリメトキシフェニルなどの、（メ）エトキシフェニル；例えばジ（フルオロ（メ）エトキシ）フェニル、例えば２‐フルオロ（メ）エトキシ、４‐フルオロ（メ）エトキシおよび２，４‐ジ（フルオロ（メ）エトキシフェニルなどの、フルオロ（メ）エトキシフェニル、から選択される。

さらなる１つのグループにおいては、Ａは二環式基である。適宜、当該二環式基は、例えば１‐ナフチルおよび２‐ナフチルもしくはテトラヒドロナフチルなどの、ナフチル；または（メ）エチレンジオキシフェニルもしくはベンゾジオキソロなどの、アルキレンジオクスフェニル（ａｌｋｙｌｅｎｅｄｉｏｘｐｈｅｎｙｌ）、から選択される。この基は、例えば６‐ブロモナフチルなどの、ブロモなど；または、例えば２，２‐ジフルオロベンゾジオキソロなどのフルオロなど、のハロゲンの１つ以上により、；または２‐もしくは３‐（メ）エトキシナフチルまたは１，４‐、２，５‐もしくは３，７‐ジ（メ）エトキシナフチルなどの、（メ）エトキシなどのアルコキシ基の１つ以上により、置換されていてもよい。

さらにさらなる１つのグループにおいては、Ａは三環式基である。当該三環式基は、適宜、例えばアントラセニルもしくはフルオレニルなどの、１つ以上の芳香環を含有する縮合環系；または、例えばアダマンチルなどの、非芳香環であり、所望により、上述のように置換されていてもよい。

さらなる１つのグループにおいては、Ａは、上述の環系のいずれかの環状置換基を２つ含むビス環状（ｂｉｓ‐ｃｙｃｌｉｃ）基である。

式（Ｉ）の化合物の一分類においては、当該Ａ環上の置換基としては、フェニルおよびフェノキシ、ベンジルおよびベンジルオキシが挙げられ、所望により、そのフェニル環が、ハロゲンもしくはアルコキシまたは上述のような他の置換基で置換されていてもよい。

化合物のさらなる一分類においては、Ａは、所望により置換されていてもよい複素環式環系；例えば、酸素または硫黄または窒素原子の１つ以上を有する、単環式または二環式の複素環式基；特に、芳香族複素環式環系、である。

適宜、Ａが複素環式基である式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：

の化合物であり、式中、Ｗは硫黄、酸素または窒素であり、かつ、ｎは１、２または３であり、かつ、Ｒ３は１つ以上の置換基である。

適宜、当該複素環式基は、（ｉ）チエニルおよびベンゾチエニル基から選択される硫黄含有複素環；（ｉｉ）フリル、フェニルフリルおよびベンゾピラニルから選択される酸素含有複素環；または、ピリジル、インドリル、キノリルおよびイソキノリルから選択される窒素含有複素環、である。有利には、上述の構造に関しては；炭素環式Ａ環については、例えばハロゲン、アルキルまたはアルコキシにより、特に、１、２または３個の塩素または臭素原子により、置換される。窒素含有複素環は、所望により、例えばメチルなどのアルキルによりＮ‐置換されていてもよく、または、フェノキシもしくはフェニルチオにより置換されていてもよく、当該フェニルは、所望により、例えばクロロなどのハロゲンにより置換されていてもよい。

所望により、複素環式環Ａは、ビス複素環式化合物である。

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下式（ＩＩＩ）の化合物である：

この実施形態には、２つの式（Ｉ）の化合物が、共通のＡ環を共有している化合物；および、ビス環構造の化合物、が包含される。

本発明は、上記化合物のうちのいずれかの塩も提供する。好ましい塩は、薬剤的に許容できる酸付加塩である。適切な、薬剤的に許容できる酸付加塩としては、例えば塩酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、リン酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、マロン酸、コハク酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、オキサロ酢酸、メタンスルホン酸、ｐ‐トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、グルタミン酸、ナフトエ酸、およびイセチオン酸からなどの、有機酸および無機酸の両方で形成されているもの、が挙げられる。エタンスルホン酸塩、リンゴ酸塩、マンダル酸（ｍａｎｄａｌａｔｅ）塩、安息香酸塩、およびサリチル酸塩も適している。

本発明は、式（Ｉ）の化合物のうちのいずれかまたはその塩の溶媒和物も提供する。当該化合物またはその塩は、当該化合物の調製において、反応溶媒もしくは結晶化溶媒の溶媒和物、またはその成分、として得てもよい。適切な、薬剤的に許容できる溶媒和物としては、水和物が挙げられる。

式（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有していてもよく、また、ラセミ体、ラセミ混合物として、および、個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして、生じてもよい。このような異性体型はすべて、本発明の範囲内に含まれる。式（Ｉ）の化合物のすべての幾何異性体も、個々の異性体としてか、それらの混合物としてかを問わず、本発明の範囲内に含まれる。よって、互変異性型およびその混合物ならびに多形結晶形状であるので；トランス‐およびシス‐配置の式（Ｉ）の化合物は本発明により包含される。

式（Ｉ）の特定の化合物は、上記米国特許第４，６４９，１３９号において開示されている手順により調製してもよく、当該文献の全開示事項は、参照により本明細書に組み入れられるものとし、また、当該文献に対し、さらなる参照がなされるべきものとする。式（Ｉ）の特定の化合物は、また、ＥＰ ０ ０２１ １２１ Ａにおいて開示されている方法により調製してもよく、当該文献の全開示事項は、参照により本明細書に組み入れられるものとし、また、当該文献に対し、さらなる参照がなされるべきものとする。

上記で言及した特定の化合物の調製は、本明細書において、後ほど説明する。本発明の範囲内の関連化合物は、式（Ｉ）の範囲内の化合物の所望の置換基および部分を導入するために、適切な出発物質を用いて、開示されているプロセスの自明のまたはお決まりの変形により調製してもよい。

式（Ｉ）の化合物の塩は、当該調製プロセスに残留酸を存在させることにより得てもよい。あるいは、塩は、遊離塩基としての式（Ｉ）の化合物を、薬剤的に許容できる酸と、適切な溶媒中で混合し、その溶媒を除去して塩を回収するか、または、その溶媒から塩を結晶化させることにより調製してもよい。

さらなる一態様では、本発明は、薬剤的に許容できる担体との混和物中に、式（Ｉ）の化合物またはその薬剤的に許容できる塩または溶媒和物を含む医薬組成物を提供する。当該化合物は、例えばてんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症ならびに三叉神経・自律神経性頭痛、などの、障害の治療；哺乳類の癌の治療；ならびに、マラリアの治療、に適している。

式（Ｉ）の化合物は、本発明の組成物中に、効果的な単位剤形で、すなわち、ｉｎ ｖｉｖｏでこれらの障害に対して効果的であるのに十分な量で、存在する。

本発明の組成物中に存在する薬剤的に許容できる担体は、医薬を投与する目的で従来から用いられている物質であってもよい。これらは、液体または固体物質であってもよく、そうでなければ不活性であるかまたは医学的に許容できるものであり、かつ、活性成分に適合性のものである。

これらの医薬組成物は、経口的にまたは非経口的に、例えば、坐剤、軟膏剤、クリーム剤、粉剤または経皮パッチとして、与えられてもよい。しかしながら、当該組成物の経口投与および静脈内注射が好ましい。

経口投与用には、微粉末または顆粒は、希釈剤、分散剤および／または界面活性剤を含有することとなり、また、頓服水剤中、水中もしくはシロップ中に、乾燥状態のカプセル剤もしくはサッシェ剤中に、または、懸濁化剤が含まれていてもよい非水性懸濁剤中に、または、水もしくはシロップ中の懸濁剤中に、提供されてもよい。望ましいかまたは必要な場合には、香味剤、保存剤、懸濁化剤、または増粘剤を含めることができる。乾燥粉末または顆粒は、圧縮して錠剤を形成させてもよく、または、カプセル剤中に含有させてもよい。

注射用には、当該化合物は、抗酸化剤または緩衝剤を含有していてもよい無菌の水性注射剤中に提供されてもよい。

当該遊離塩基またはその塩または溶媒和物は、また、他の添加剤を伴わないそれの純粋な形で投与されてもよく、その場合には、カプセル剤またはサッシェ剤が好ましい担体である。

あるいは、当該活性化合物は、効果的な単位投与量で純粋な形で提供され、例えば、錠剤等として圧縮される。

含まれていてもよい他の化合物は、例えば、医学的に不活性な成分、例えば、錠剤またはカプセル剤については、例えばラクトース、デンプン、またはリン酸カルシウムなどの、固体および液体の希釈剤；軟カプセル剤については、オリーブ油またはオレイン酸エチル；ならびに、懸濁剤または乳剤については、水または植物油；例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；例えばコロイド粘土などのゲル化剤；例えばガムトラガカントまたはアルギン酸ナトリウムなどの増粘剤；ならびに、こうした製剤における担体として有用な、例えば湿潤剤、防腐剤、緩衝剤、および抗酸化剤などの、他の、治療上許容できる副成分、である。

個々の単位として提供される錠剤または他の表現型は、そうした投与量においてまたはその倍数として効果的である、例えば５ｍｇ〜５００ｍｇ、通常は１０ｍｇ〜２５０ｍｇ前後を含有する単位などの、量の、式Ｉの化合物を都合よく含有していてもよい。

本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物の、薬剤的に許容できる担体との混和物により調製してもよい。必要に応じて、従来の医薬賦形剤を混和してもよい。適切な製剤の例は、上述した米国特許第４，６４９，１３９号中に提示されている。

本発明は、毒性のない効果的な量の、式（Ｉ）の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または、本明細書において上記で定義されているような組成物、の投与による治療の方法を提供する。当該方法は、ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における障害、ならびに、特に、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症ならびに三叉神経・自律神経性頭痛、のような障害、の治療；哺乳類の癌の治療；ならびに、マラリアの治療、に特に適している。

本発明は、医薬、のための、または、その調製のための、式（Ｉ）の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または、本明細書において上記で定義されているような組成物も提供する。当該医薬は、ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における障害、ならびに、特に、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症ならびに三叉神経・自律神経性頭痛、のような障害、の治療；哺乳類の癌の治療；ならびに、マラリアの治療、に特に適している。

上記で示したように、式（Ｉ）の化合物は、そうした障害の、経口投与または静脈内注射による治療において、一般に有用である。

式（Ｉ）の化合物は、通常、１日当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１日当たり０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ、の用量で投与される。

構造的に類似した化合物、例えばラモトリギン、および式（Ｉ）の範囲内の他の（ｏｈｅｒ）公知化合物、の、ヒトにおける公知の使用に鑑みて、式（Ｉ）の化合物の使用において、主だった毒性に関する問題は予期されない。しかしながら、臨床使用の前に、適切な試験手順が行なわれるべきである。

以下、本発明の上記のおよび他の態様を、さらに詳細に、付随する例を参照して、説明する。

試験において用いた例示の式（Ｉ）の化合物および他の化合物の調製のための方法論を以下に報告する。これを適合させて、本明細書において言及されている追加のまたは代替の置換基または部分を有する類似化合物を調製してもよい。

以下手順では、融点はすべて℃で表されている。

３，５‐ジアミノ‐６‐アリール‐１，２，４‐トリアジン化合物

３，４‐ジメトキシベンゾイルシアニド（３；Ａｒ＝３，４‐ジメトキシフェニル）
３，４‐ジメトキシベンゾイルクロリド［ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ］（１４．０５ｇ；０．０７０ｍｏｌ）、乾燥トルエン（３２ｃｍ^３）、乾燥アセトニトリル（８．０ｃｍ^３）、シアン化銅Ｉ（８．５；０．０９５ｍｏｌ）およびセライト（５ｇ）の、よく撹拌した混合物［パドルスターラー］を、還流下で、酸塩化物が残らなくなるまで（およそ１．５時間）、加熱した。この暗反応混合物を、およそ７０°に冷却し、トルエン（１５０ｃｍ^３）で希釈した。さらにおよそ３０分間撹拌した後、その結果として生じたスラリーを、クロマトグラフィー用シリカゲル床（およそ２．５ｃｍ）に通して濾過し、その淡黄色の濾液を、真空中で一定重量まで蒸発させて、表題化合物を、レモンイエローの固体として得た。収量（収率）＝１１．４１ｇ（８５．３％）、Ｍｐｔ＝１４３〜１４５℃。この生成物は、すぐに、次の段階で使用した。

アミノグアニジンビスメシレート４
４０°の、メタノール（７２０ｃｍ^３）中、９９．５％メタンスルホン酸［アルドリッチ］（４２２ｇ；４．４０ｍｏｌ）の、撹拌した溶液に、重炭酸アミノグアニジン［アルドリッチ］（２７２．０ｇ；２．００ｍｏｌ）を３０分かけて少しずつ添加した。この添加が完了したときに、当該溶液を、温度がおよそ４０°に下がるまで撹拌し、次いで、冷エーテル（５００ｃｍ^３）でゆっくり処理した。この添加の間、無色の針状結晶（ｎｅｅｄｌｅｓ）が析出し始めた。その結果として生じたスラリーを、０°で４時間静置し、濾過し、その生成物を、冷エーテルで洗浄し、真空中で５０°にて一晩乾燥させた。収量（収率）＝５２８ｇ（９９．２５％）、ｍｐｔ＝１４９〜１５０°（文献：ＷＯ／２００４／０２６８４５；１４７．５°）

シッフ塩基、シアノヒドラゾン（５、Ａｒ＝３，４‐ジメトキシフェニル）
６５〜７０°の、９９．５％メタンスルホン酸（２２ｇ）中、アミノグアニジンビスメシレート（１４．０ｇ；０．０５３ｍｏｌ）の、撹拌した溶液に、アセトニトリル（３０ｃｍ^３）中３，４‐ジメトキシベンゾイルシアニド（５．７ｇ；０．０３０ｍｏｌ）の温溶液を、およそ２５分かけて滴加した。次いで、この混合物を、６８°で、水中で試料が澄んだ溶液を生ずるまで（およそ２．５時間）、撹拌し、次いで、砕氷／水（１２５ｇ）上に注ぎ、淡黄色の沈殿物を生じさせた。この撹拌した混合物を、４８％水酸化ナトリウム（１９．０ｃｍ^３）で中和し（ｐＨ８〜９）、鮮黄色の沈殿物を生じさせた。この生成物を濾過し、冷水で洗浄し、真空中で４５°にて乾燥させた。収量（収率）＝６．２１ｇ（８３．８％）、Ｍｐｔ＝９８〜１００℃、ＴＬＣ［ＳｉＯ_２プレート、クロロホルム中１０％メタノール］、Ｒ_ｆ＝０．５２。この生成物は、すぐに、次の段階で使用した。

６‐アルキル／アラルキル‐３，５‐ジアミノ‐１，２，４‐トリアジン化合物

トリフェニルアセチルクロリド［３；Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｐｈ］
乾燥ジクロロメタン（１００ｃｍ^３）中、トリフェニル酢酸（２１．７ｇ；０．０７５ｍｏｌ）および乾燥ジメチルホルムアミド（２滴）の、撹拌した混合物を、塩化オキサリル（１４ｇ；０．１１ｍｏｌ）で処理したが、これは、ほぼ４等分に分けておよそ２５分にわたり添加した。この混合物を、３５°で、塩化水素の発生が止むまで（およそ４時間）、撹拌した。その結果として生じた無色の溶液を、真空中で４０°にて一定重量まで蒸発させて、表題化合物を、無色の結晶性固体として得た。収量（収率）＝２３．２４ｇ（１００．０％）。この生成物は、すぐに、次の段階で使用した。

同様に、以下を調製した：

トリフェニルアセチルシアニド［４；Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｐｈ］
トリフェニルアセチルシアニド（２３．２４ｇ；０．０７５ｍｏｌ）、乾燥トルエン（４０ｃｍ^３）、乾燥アセトニトリル（１０ｃｍ^３）、シアン化銅Ｉ（９．２０ｇ；０．１０３ｍｏｌ）、セライト（３．５ｇ）および微粉状ヨウ化カリウム（２ｇ）の、よく撹拌した混合物［パドルスターラー］を、還流下で、酸塩化物が残らなくなるまで（およそ１８時間）、加熱した。この暗反応混合物を、およそ７５°に冷却し、トルエン（１５０ｃｍ^３）で希釈した。さらにおよそ３０分間撹拌した後、その結果として生じたスラリーを、クロマトグラフィー用シリカゲル床（およそ２．５ｃｍ）に通して濾過し、その無色の濾液を、真空中で一定重量まで蒸発させて、表題化合物を、無色の固体として得た。収量（収率）＝２１．９７ｇ（９８．７％）、Ｍｐｔ＝６７〜６９°。この生成物は、すぐに、次の段階で使用した。

シッフ塩基、シアノヒドラゾン、（４；Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｐｈ］
６５〜７０°の、９９．５％メタンスルホン酸（２２．５ｇ）中、アミノグアニジンビスメシレート（１５．００ｇ；０．０５６４ｍｏｌ）の、撹拌した溶液に、アセトニトリル（２５ｃｍ^３）中トリフェニルアセチルシアニド（８．９１ｇ；０．０３０ｍｏｌ）溶液を、およそ２５分かけて滴加した。次いで、この混合物を、６８°で、水中で試料が澄んだ溶液を生ずるまで（およそ２８時間）、撹拌し、次いで、砕氷／水（１５０ｇ）上に注ぎ、半固体状の無色の沈殿物を生じさせた。この混合物を、４８％水酸化ナトリウム（１７．５ｃｍ^３）で中和し（ｐＨ８〜９）、表題化合物を、クリーム色の粒状固体として生じさせた。この生成物を濾別し、水で洗浄し、真空中で４５°にて乾燥させた。収量（収率）＝８．４７ｇ（８０．０％）、Ｍｐｔ＝１１２〜１１４°、ＴＬＣ［ＳｉＯ_２プレート、クロロホルム中１０％メタノール］、Ｒ_ｆ＝０．６８。この生成物は、すぐに、次の段階で使用した。

トリアジン化合物

５（３）‐アミノ‐６‐（２，３‐ジクロロフェニル）‐２，３（２，５）‐ジヒドロ‐３（５）‐イミノ‐２‐（２，２，２‐トリクロロエチル）‐１，２，４‐トリアジントリフルオロメタンスルホネート［ＣＥＮ‐２１６］：

３，５‐ジアミノ‐６‐（２，３‐ジクロロフェニル）‐１，２，４‐トリアジン（ラモトリギン）（０．９ｇ；３．５０ミリモル）、２，２，２‐トリクロロエチルトリフラート（１．０ｇ；３．５５ミリモル）、ブタン‐２‐オン（１０ｃｍ^３）およびジメチルホルムアミド（５滴）を、窒素下で、還流させながら２５時間撹拌した。

その溶液を蒸発乾固させ、黄褐色の残渣をアセトンから結晶化させ、淡黄褐色の微結晶性粉末を得た。収量（収率）＝５１０ｍｇ。Ｍｐｔ―２３６〜２３８、ｔｌｃ（１０％メタノール‐クロロホルム）、Ｒｆ＝０．３８。

２，２，２‐トリクロロエチルトリフラート
２，２，２‐トリクロロエタノール（７．５ｇ；０．０５モル）およびトリフリック無水物（１４．１ｇ；０．０５モル）の混合物を、８０℃で６０分間加熱した。

室温に冷却した後、この反応混合物を、エーテル（１００ｃｍ^３）で希釈し、氷冷５％炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｃｍ^３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で２０℃未満にて蒸発乾固させた。無色の油が結果として生じた。これを、４℃で静置しながら、無色の柱状結晶（ｐｒｉｓｍｓ）へと凝固させた。収量（収率）＝１０．９１ｇ（７７．８％） 融点 ２８〜３０℃。この生成物は、さらなる精製を行うことなく、すぐに使用する。

２，２，‐ジクロロエチルトリフラート
２，２‐ジクロロエタノール（５．７５ｇ；０．０５モル）およびトリフリック無水物（１４．１ｇ；０．０５モル）の混合物を、８０℃で６０分間加熱した。

室温に冷却した後、この反応混合物を、エーテル（１００ｃｍ^３）で希釈し、氷冷５％炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｃｍ^３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で２０℃未満にて蒸発乾固させた。無色の油が結果として生じた。この生成物は、さらなる精製を行うことなく、すぐに使用する。

２，２，２‐ブロモロエチルトリフラート
２，２，２‐トリクロロエタノール（１４．１５ｇ；０．０５モル）およびトリフリック無水物（１４．１ｇ；０．０５モル）の混合物を、８０℃で１２０分間加熱した。

室温に冷却した後、この反応混合物を、エーテル（１００ｃｍ^３）で希釈し、氷冷５％炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｃｍ^３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で２０℃未満にて蒸発乾固させた。無色の固体が結果として生じた。融点 ４１〜４３℃。この生成物は、さらなる精製を行うことなく、すぐに使用する。

生物学的試験
式（Ｉ）の化合物を、種々の活性について、以下のようにして試験した：

スクリーニング戦略
適切なナトリウムチャネル遮断活性を有し、かつ、副作用の起こりやすさ（ｓｉｄｅ ｅｆｆｅｃｔ ｌｉａｂｉｌｉｔｙ）が低い化合物を選択するためにスクリーニング戦略を設計する。この目的のために、すべての化合物を、一次ナトリウムチャネルアッセイ（ラット前脳シナプトソームへの［^１４Ｃ］グアニジンのベラトリン誘発性取り込み）により処理し、ＩＣ_５０値を、作成した濃度‐効果曲線から算出する。このデータを補完するべく、選択した化合物についての［^３Ｈ］ＢＴＸ‐Ｂの結合を阻害するＩＣ_５０値も測定する。

先の研究では、置換トリアジンが、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤｉＨｙｄｒｏＦｏｌａｔｅ Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ；ＤＨＦＲ）活性の潜在的な阻害剤である、とのことが示されてきた（ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ ａｎｄ Ｂｅｒｔｉｎｏ １９７１、Ｃａｓｈｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ，１９７５、Ｂｏｏｔｈ ｅｔ ａｌ，１９８７）およびＳａｐｓｅ ｅｔ ａｌ，１９９４）。ＤＨＦＲの阻害剤（例えばメトトレキサートなど）は、様々な癌の治療に用いられており（Ｓｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ，１９７８およびＮｉｃｕｌｅｓｃｕ‐Ｄｕｖａｚ ｅｔ ａｌ，１９８２）、これは、この酵素の阻害により細胞増殖が妨げられるためであるが、この（細胞増殖に対する）効果ゆえに、ＤＨＦＲの阻害剤は催奇形性であることもある（Ｓｋａｌｋｏ ａｎｄ Ｇｏｌｄ，１９７４、Ｆｅｌｄｃａｍｐ ａｎｄ Ｃａｒｅｙ，１９９３およびＢｕｃｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ，１９９７）。もし万一ＤＨＦＲの強力な阻害剤である化合物を見い出せば、かかる化合物は、それら自身、抗癌剤としての潜在性を有する可能性がある。ＤＨＦＲ活性の阻害の測定には、いくつかの方法が利用可能であり、また、この研究のために、我々は、化合物の、［^３Ｈ］メトトレキサートの結合を阻害する効果を調べてきた（Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａ１，１９７５およびＲｏｔｈｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，１９７７）。

もう１つの一般的な副作用マーカーは、ヒトＥｔｈｅｒ‐ａ‐ｇｏ‐ｇｏ関連遺伝子カリウム（ｈｕｍａｎ Ｅｔｈｅｒ‐ａ‐ｇｏ‐ｇｏ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅ；ｈＥＲＧ）カリウムチャネル（内向き整流（Ｉｎｗａｒｄ ｒｅｃｔｉｆｙｉｎｇ）、Ｉ_Ｋｒ）活性の阻害であり、これは、ＱＴ延長症候群の発症により引き起こされる心不全に起因して致死となり得る。このチャネルに影響を及ぼす潜在性を評価するための、有用な予備スクリーニングは、ｈＥＲＧを発現する細胞膜への［３Ｈ］アステミゾールの結合の阻害の測定により評価する。選択した化合物は、１０μＭにおける阻害の測定により、この活性について試験する。阻害値が１０％〜９０％の間にあると仮定すると、各化合物について、外挿ＩＣ_５０を算出することが可能である。

上記スクリーニングカスケードにより、上述の副作用の起こりやすさの傾向が（より）低い、適切なナトリウムチャネル遮断活性を有する化合物が同定される。これらの化合物をさらに開発するためには、それらの薬力学的特性に関するある程度の知識が必要である。

ラットにおける中大脳動脈閉塞後の神経学的欠陥および梗塞部体積を共に減少させる（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ，１９９７）、例えばシパトリジン（Ｓｉｐａｔｒｉｇｉｎｅ）などのナトリウムチャネル遮断薬、ならびに、フェニトイン（これは、緑内障の実験モデルにおける網膜神経節細胞死を防ぐ（Ｈａｉｎｓ ａｎｄ Ｗａｘｍａｎ，２００５）は、神経変性モデルの範囲において、神経保護効果を示す。酸素供給不全により解糖と酸化的リン酸化との両方が損なわれるため、虚血性の損傷は、最終的には、電気的不全（神経シグナル伝達）およびポンプ不全（細胞膜電位の回復）につながる。これらの（電気およびイオンポンプ活性の）不全は、ＡＴＰの局所濃度の低下に関連している（Ａｓｔｒｕｐ ｅｔ ａｌ １９８１）。よって、重度の代謝障害（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｉｎｓｕｌｔ）後のラット海馬の０．４ｍｍ切片における、化合物の、ＡＴＰの濃度を維持する効果を用いた。

実験手順
ラット前脳シナプトソームおよびホモジネートの調製
重さが１７５〜２５０ｇであるオスのＷｉｓｔａｒ系ラットからの前脳（全脳から小脳／髄質を除いたもの）を用いて実験を行なった。使用する動物数を少なくするためにあらゆる努力をし、かつ、すべての実験は、１９８６年の英国動物（科学的処置）法（ＵＫ Ａｎｉｍａｌｓ （Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ） Ａｃｔ）および１９８６年１１月２４日の欧州共同体理事会指令（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｃｏｕｎｃｉｌ Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）（８６／６０９／ＥＥＣ）に従って行なった。スタンニングおよび断頭によって動物を屠殺した後、前脳（全脳から小脳／髄質を除いたもの）を速やかに解剖し、氷冷０．２５Ｍスクロースを含有する、重さを計ったチューブに移した。

シナプトソーム（シナプトソームを含有する重および軽ミトコンドリア分画）は、当該（既知の湿重量の）前脳を、９倍容量の氷冷０．２５Ｍスクロースを入れたガラス製Ｐｏｔｔｅｒ容器に移し、テフロン（登録商標）内筒を用いて、９００ｒｐｍに設定したＢｒａｕｎ Ｐｏｔｔｅｒ Ｓモーター駆動ホモジナイザーの８回の「上下ストローク（ｕｐ ａｎｄ ｄｏｗｎ ｓｔｒｏｋｅ）」によりホモジナイズすることにより調製した。その結果として生じたホモジネートを、１０３６×ｇで４°にて１０分間遠心し、上清を回収した。残ったペレットを、上記のようにして、新しい氷冷０．２５Ｍスクロース中に再懸濁し、遠心分離工程を繰り返した。この上清分画をプールし、４０，０００×ｇ（平均）で４°にて１５分間遠心し、また、その結果として生じたペレットを、適切なアッセイ緩衝液１ｍｌ当たり２０〜２５ｍｇ湿重量という濃度で、適切なアッセイ緩衝液中に再懸濁した。

ホモジネートは、既知重量の前脳を、９倍容量の氷冷５０ｍＭ ｐＨ７．４ ＨＥＰＥＳ緩衝液を含有する冷却したチューブに移すことにより調製した。この混合物を、最高速度に設定したＵｌｔｒａ‐Ｔｕｒｒａｘ（商標）ホモジナイザーの、３×５秒のバーストにより、４°でホモジナイズした。その結果として生じたホモジネートを、４０，０００×ｇ（平均）で４°にて１５分間遠心し、上清を破棄した。その結果として生じたペレットを、（上記のようにして）９倍容量の新しい氷冷ｐＨ７．４緩衝液中に再懸濁し、遠心分離工程を繰り返し、また、その結果として生じたペレットを、アッセイ緩衝液１ｍｌ当たり２０〜２５ｍｇ湿重量という濃度で、［^３Ｈ］ＢＴＸ‐Ｂ結合緩衝液中に再懸濁した。

［^１４Ｃ］グアニジンフラックスおよび［^３Ｈ］ＢＴＸ‐Ｂの結合
両アッセイとも、ある範囲の濃度の試験に供する化合物を添加した１４ｍｌポリプロピレン製テストチューブを用いて行なった。試験化合物は、ＤＭＳＯ中に溶解させ、ＤＭＳＯの最大濃度が２％ｖ／ｖを超えないよう、アッセイに加えた。

［^１４Ｃ］グアニジンフラックス：
［^１４Ｃ］グアニジニン（ｇｕａｎｉｄｉｎｉｎｅ）フラックスアッセイは、Ｐａｕｗｅｌｓ ＰＪ ｅｔ ａｌ（１９８６）の方法を用いて測定したが、３０°で、２と１／２分間行なった。
参考文献：
Ｐａｕｗｅｌｓ ＰＪ， Ｌｅｙｓｅｎ ＪＥ， Ｌａｄｕｒｏｎ ＰＭ． ［^３Ｈ］Ｂａｔｒａｃｈｏｔｏｘｉｎｉｎ Ａ ２０‐ａｌｐｈａ‐ｂｅｎｚｏａｔｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｒａｔ ｂｒａｉｎ： ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ． Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １９８６ Ｍａｙ ２７；１２４（３）：２９１‐８。

［^３Ｈ］ＢＴＸ‐Ｂの結合
［^３Ｈ］ＢＴＸ‐Ｂ結合は、ウシ血清アルブミンとＴＴＸの両方をインキュベーションメディウムから除外した以外は、Ｃａｔｔｅｒａｌｌ ｅｔ ａｌ（１９８１）により記述された方法を用いて行なった。
参考文献：
Ｃａｔｔｅｒａｌｌ ＷＡ， Ｍｏｒｒｏｗ ＣＳ， Ｄａｌｙ ＪＷ， Ｂｒｏｗｎ ＧＢ． Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｂａｔｒａｃｈｏｔｏｘｉｎｉｎ Ａ ２０‐ａｌｐｈａｂｅｎｚｏａｔｅ ｔｏ ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｔｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｅｎｄｉｎｇ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ． Ｊ Ｂｉｏ． Ｃｈｅｍ． １９８１ Ｓｅｐ．１０；２５６（１７）：８９２２‐７。

［^３Ｈ］メトトレキサートの結合
すべての工程は、４°（または氷上）で行なった。新たな解剖ラット肝臓を、解剖して、０．２５Ｍ氷冷スクロース中に入れ、その後、１５ｍＭジチオスレイトールを含有する５０ｍＭ ｐＨ６．０リン酸緩衝液（１０ｍｌ／ｇ組織）中でホモジナイズ（Ｕ‐ｔｕｒｒａｘ）した。その結果として生じたホモジネートを、４７，５００×ｇで２０分間遠心し、上清を、（生綿に通して濾過して脂肪塊を除去し、）使用前に−８０°で保存した（Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ）。
ラット肝臓ホモジネート上清分画への［^３Ｈ］メトトレキサートの結合の阻害は、基本的には、Ａｒｏｎｓ ｅｔ ａｌ，１９７５により記述されているようにして行なった。結果は、濃度‐効果曲線から導き出されるＩＣ_５０値（以下参照）としてか、または、対照および冷メトトレキサート（１０μＭ終濃度）の結合値との比較により決定されるパーセンテージ阻害値としてか、のいずれかで計算した。
参考文献：
Ｅｌｌｉｏｔ Ａｒｏｎｓ， Ｓｈｅｌｄｏｎ Ｐ． Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ， Ｍａｒｉａ ｄａ Ｃｏｓｔａ， Ｃｒａｉｇ Ｆｉｓｃｈｅｒ ａｎｄ Ｍ． Ｐｅｒｗａｉｚ Ｉｑｂａｌ； Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３５， Ａｕｇｕｓｔ １，１９７５，２０３３‐２０３８，

ＩＣ_５０値の算出
データは、括弧内に示す実験数の、平均±標準誤差、として提示する。ＩＣ_５０値は、放射性リガンド置換、または、以下の等式に従って、結合リガンド／グアニジン取り込みに対してｌｏｇ_１０濃度をプロットすることによるグアニジンフラックス阻害曲線、から得た：‐
ｙ＝Ｒｍｉｎ＋Ｒｓｐ／｛１＋ｅｘｐ［−ｎ（ｘ−Ｃ）］｝
式中、 ｙ ＝結合（ｄｐｍ）
ｘ ＝ｌｏｇ_１０化合物濃度
Ｒｍｉｎ＝下側漸近線 （すなわち、１００％阻害）
Ｒｓｐ ＝上側漸近線−Ｒｍｉｎ （すなわち、特異的結合）
ｎ ＝傾き（ｌｏｇ_ｅ）
および Ｃ ＝ＩＣ_５０（すなわち、特異的結合の５０％を阻害するのに必要な濃度

海馬切片アッセイ
神経保護効果は、ヨード酢酸（４００μＭ）^２を代謝障害（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｉｎｓｕｌｔ）として用いた以外は、Ｆｏｗｌｅｒ ａｎｄ Ｌｉ（１９９８）^１により記述された方法を用いてラット海馬の０．４ｍｍ切片において測定した。化合物（通常３０μＭ）は、解糖の阻害後のＡＴＰの切片濃度を維持する能力について、いつも、テトロドトキシン（１μＭ）^３と直接比較した。
参考文献：
１． Ｆｏｗｌｅｒ Ｊ Ｃ， Ｌｉ Ｙ． Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｎａ^＋ ｆｌｕｘ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｏｘｉｃ ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ５’‐ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉｃ／ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃ ｒａｔ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅｓ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １９９８， ８３， ７１７‐７２２。
２． Ｒｅｉｎｅｒ ＰＢ， Ｌａｙｃｏｃｋ ＡＧ， Ｄｏｌｌ ＣＪ． Ａ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ １９９０；１１９：１７５‐８
３． Ｂｏｅｎｉｎｇ ＪＡ， Ｋａｓｓ ＩＳ， Ｃｏｔｔｒｅｌｌ ＪＥ， Ｃｈａｍｂｅｒｓ Ｇ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｓｏｄｉｕｍ ｉｎｆｌｕｘ ｏｎ ａｎｏｘｉｃ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ． １９８９． ｖｏｌ ３３（２），２６３‐２６８。

ＡＴＰおよびタンパク質の測定
個々の切片を超音波処理により粉砕し、その結果として生じたホモジネートを、１００００×ｇで５分間、４°にて遠心した。上清を新しいチューブの中へデカントし、残ったあらゆる上清を真空吸引により除去した。このペレットを、超音波処理により、０．５ｍｌの０．１Ｍ ＫＯＨ中に再懸濁し、また、その結果として生じた懸濁液を、穏やかに撹拌しながら３７°で３０分間温めた。

ＡＴＰの濃度は、６μｌの上清を用いて、ルシフェラーゼ試薬（パーキンエルマー社からのＡＴＰＬｉｔｅ）と混合し、９６ウェルプレートカウンターにてその後の発光を測定することにより測定した。

タンパク質濃度は、参照標準としてのウシ血清アルブミンと共にＢＣＡ（商標）タンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ社）を用いて測定した。

ＡＴＰ濃度は、ナノモル／ｍｇタンパク質、で表し、また、神経保護の指標（％保護）は、１μＭ ＴＴＸの効果との直接比較により計算した。

ｈＥＲＧ：
ヒト組換えｈＥＲＧを発現するＨＥＫ‐２９３細胞への［^３Ｈ］アステミゾールの結合の、１０μＭ濃度における阻害の測定のために、化合物をＭＤＳファーマに送った。結合の傾きが１．０であろうと仮定して、結合の５％〜９５％阻害を呈する化合物について、ＩＣ_５０値を計算することができた（上記参照）。

Ｌ型カルシウムチャネル
ラット大脳皮質膜への［^３Ｈ］ニトレンジピンの結合の、１０μＭ濃度における阻害の測定のために、化合物をＭＤＳファーマに送った。結合の傾きが１．０であろうと仮定して、結合の５％〜９５％阻害を呈する化合物について、ＩＣ_５０値を計算することができた（上記参照）。

ラットミクロソーム安定性
ラット肝ミクロソームとともに３７°で４０分間インキュベーションした後の、１μＭ濃度における安定性の測定のために、化合物をＢｉｏＦｏｃｕｓに送った。

ＭＥＳ方法論（最大電気ショック；Ｍａｘｉｍａｌ ＥｌｅｃｔｒｏＳｈｏｃｋ）
（チャールズ・リバー・ラボラトリーズの技術ライセンシー下の）ＢｉｏＬａｓｃｏ Ｔａｉｗａｎ社により提供されたオスのＷｉｓｔａｒ系ラットを用いた。５匹の動物に対するスペースの割り当ては４５×２３×２１ｃｍであった。動物は、動物ケージ中に収容し、制御された温度（２１〜２３℃）および湿度（５０％〜７０％）環境にて、１２時間の明／暗サイクルで、ＭＤＳファーマサービス―台湾研究所にて使用前に少なくとも３日間維持した。ラット用の標準実験用飼料［ＭＦ‐１８（オリエンタル酵母工業株式会社、日本）］と逆浸透（ＲＯ）水とへの自由なアクセスを無制限に（ａｄ ｌｉｂｉｔｕｍ）与えた。動物の収容、実験法および処分を含むこの作業のすべての態様は、実験動物の管理と使用に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）（ナショナル・アカデミー・プレス、ワシントンＤ．Ｃ．、１９９６年）に全般的に従って行なった。

試験化合物は、２％Ｔｗｅｅｎ８０中に懸濁／溶解し、また、最大電気ショック（ＭＥＳ、６０Ｈｚ正弦波、１５０ｍＡ、２００ミリ秒の持続時間）を角膜電極を通して適用する１時間前に、１０ｍｌ／Ｋｇの投与体積で、重さが１８０＋／−２０ｇである５匹のＷｉｓｔａｒ系のオスのラットの各グループに経口投与した。最大電気ショックにより誘導される強直性痙攣の出現（ＭＥＳ）を、各動物について判定した。試験物質による強直性痙攣の５０パーセント以上の（５０％）阻害は、有意な抗痙攣活性を指し示す。

機器／化学薬品：

動物ケージ（アレンタウン社、米国）、電気ショック発生装置（組織内（Ｉｎ‐ｈｏｕｓｅ）、Ｒ．Ｏ．Ｃ．）、経口投与用の針（夏目、日本）、および、ラットの秤（５００ｇ、大和、日本）。ジフェニルヒダントインナトリウム塩（シグマ社、米国）、および、Ｔｗｅｅｎ８０（シグマ社、米国）。

１４、４２または１００ｍｇ／ｋｇでの試験物質（ＣＥＮ‐２１６、ＣＥＮ‐１４５、ＣＥＮ‐１４８、ＣＥＮ‐１５２およびＣＥＮ‐１５４）を、重さが１８０±２０ｇである５匹のＷｉｓｔａｒ系由来のオスのラットの各グループに経口投与した。

結果

種々の試験手順からのデータを以下表に記載する：

^＊ ９９μＭ
^＊＊ １９８μＭ
^＊＊＊ 上清の新たなバッチを使用
ラット（ｗｉｓｔａｒ系）の脳に結合する［３Ｈ］バトラコトキシニンの結合の阻害
データは、１０μＭにおける％阻害および外挿ＩＣ_５０（傾き＝１と仮定）、として提示する。
＜５％阻害を与える化合物は、＞２００μＭのＩＣ_５０に帰する
＞９５％阻害を与える化合物は、＜０．５μＭのＩＣ_５０に帰する

［３Ｈ］ＢＴＸ‐Ｂの結合の阻害

［３Ｈ］バトラコトキシニン結合方法の概要―２７９５１０ナトリウムチャネル、部位２
試料源：Ｗｉｓｔａｒ系ラット脳
リガンド：５ｎＭ［．Ｈ］バトラコトキシン
媒体：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３７．Ｃにて６０分
インキュベーションバッファー：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ‐ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１３０ｍＭ 塩化コリン、５．４ｍＭ ＫＣｌ、０．８ｍＭ ＭｇＣｌ．、５．５ｍＭ グルコース、４０μｇ／ｍｌ ＬｑＴｘ
Ｋ_Ｄ：０．０５２μＭ ^＊
非特異的リガンド：１００μＭ ベラトリジン
Ｂｍａｘ：０．７ピコモル／ｍｇタンパク質 ^＊
特異的結合：７７％
定量方法：放射性リガンド結合
有意性判定基準：最大刺激または阻害の、＞／＝５０％

海馬切片データ

Ｎ‐アルキル置換トリアジンについてのＭＥＳの結果

「ショック」の１時間前に化合物を経口投与した、てんかんのラットモデル（最大電気ショック―ＭＥＳ）において、ＣＥＮ‐２１６についてのＥＤ５０（５０％のラットを、四肢の伸展等から保護するための有効量）は、およそ９ｍｇ／ｋｇ遊離塩基である。

上記ＭＥＳ試験における１００ｍｇ／ｋｇ遊離塩基では、ＣＥＮ‐２１７および２１８は、それぞれ、６０％および４０％保護、すなわち、それぞれ、（ごく概算で）８０および１２０ｍｇ／ｋｇ遊離塩基の化合物についてのＥＤ５０、を示した。

てんかんのマウスモデル（ＭＥＳ）において、化合物ＣＥＮ‐０７９およびＣＥＮ‐２１６を、「ショック）の１時間、６時間および２４時間前において、経口投与した（それぞれ、１００および７２ｍｇ／ｋｇ遊離塩基）。両化合物とも、２４時間におけるＣＥＮ‐０７９保護効果は４０％保護まで低下していた以外は、すべての時点において１００％保護が見られたことから、すべての時点において有意な保護を示した。

本発明の代表的な化合物に関して得られたスクリーニングデータは、一般式（Ｉ））の化合物が、ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における障害、ならびに、特に、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症ならびに三叉神経・自律神経性頭痛、のような障害、の治療；哺乳類の癌の治療；ならびに、マラリアの治療、に適切であること、を示している。
以下に本発明の例示的態様を例挙する。
＜１＞下記式Ｉの化合物、またはその塩。

（式I中、ｚは、単結合であるか、もしくは、所望により置換されていてもよい連結基であり、Ｒ１はハロ‐アルキル基であり、かつ、Ａは、所望により置換されていてもよい芳香族複素環式もしくは炭素環式環系を表す。）
＜２＞ｚが、連結基であり、かつ、１つまたは２つの所望により置換されていてもよいアルキルまたはフェニル基を有する炭素原子である、＜１＞に記載の化合物。
＜３＞Ｒ１が、Ｃ１‐１０ハロ‐アルキルである、＜１＞または＜２＞に記載の化合物。
＜４＞Ｒ１が、ハロ‐メチル、エチル、ｉ‐プロピル、ｎ‐プロピル、ｉ‐ブチルまたはｎ‐ブチル基である、＜３＞に記載の化合物。
＜５＞Ｒ１が、ジ‐またはトリ‐ハロ‐置換された基である、＜１＞〜＜４＞のいずれか一項に記載の化合物。
＜６＞Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ 、‐ＣＨ _２ ＣＢｒ _３ 、‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ 、‐ＣＨ _２ ＣＨＢｒ _２ 、‐ＣＨ _２ ＣＦ _３ 、‐ＣＨ _２ ＣＨＣＦ _２ 、‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＦ _３ または‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＨＦ _２ である、＜１＞に記載の化合物。
＜７＞Ａが、フェニル、フェノキシ、ベンジル、ベンジルオキシ、（ベンゾ）チエニル、（ベンゾ）フリル、フェニルフリル、（ベンゾ）ピラニル、（イソ）インドール、（イソ）キノリンまたはピリジンであり、所望により置換されていてもよい、＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の化合物。
＜８＞Ａが、フェニル、ナフチル、アントラセニルおよびフルオレニルからなる群から選択される芳香族炭素環式環系であり、所望により、クロロ、ブロモ又はフルオロであるハロゲン、ＣＦ３、ＯＭｅ又はＯＥｔであるアルコキシ、および、フェノキシ又はベンジルオキシであるアリールオキシからなる群から選択される１つ以上で置換されている、＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の化合物。
＜９＞Ａが、２，３‐ジクロロフェニル、２，６‐ジクロロフェニル及び３，５‐ジクロロフェニルからなる群から選択されるジクロロフェニル；２，３，５‐トリクロロフェニル；２‐ブロモフェニルまたは３‐ブロモフェニルであるブロモフェニル；３，５‐トリフルオロメチル‐フェニル；４，５ジメトキシ‐フェニルまたは３，４，５トリメトキシ‐フェニルであるメトキシ‐フェニル；及び、２‐フルオロエトキシ‐フェニル、２‐フルオロメトキシ‐フェニル、４‐フルオロエトキシ‐フェニル、４‐フルオロメトキシ‐フェニル、２，４‐ジ（フルオロエトキシ）‐フェニル、および、２，４‐ジ（フルオロメトキシ）‐フェニルからなる群から選択されるフルオロエトキシ‐フェニル、または、フルオロメトキシ‐フェニル；からなる群から選択される、＜８＞に記載の化合物。
＜１０＞Ａが、１‐ナフチル、２‐ナフチル及びテトラヒドロナフチルからなる群から選択されるナフチル；エチレンジオキシフェニル; メチレンジオキシフェニル；及びベンゾジオキソロからなる群から選択される二環式置換基であり、所望により、ブロモまたはフルオロであるハロゲン、及びアルコキシ基からなる群から選択される１つ以上により、置換されていてもよい、＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の化合物。
＜１１＞Ａが、６‐ブロモナフチル、２，２‐ジフルオロベンゾジオキソロ、２‐エトキシナフチル、２‐メトキシナフチル、３‐エトキシナフチル、３‐メトキシナフチル、１，４‐ジエトキシナフチル、１，４‐ジメトキシナフチル、２，５‐ジエトキシナフチル、２，５‐ジメトキシナフチル、３，７‐ジエトキシナフチル、および、３，７‐ジメトキシナフチルからなる群から選択される基の１つ以上により置換される、＜１０＞に記載の化合物。
＜１２＞Ａが、アントラセニル及びフルオレニルから選択される、１つ以上の芳香環を含有する縮合環系、及び、アダマンチル、からなる群から選択される三環式置換基であって、所望により、ハロゲンまたはアルコキシ基の１つ以上により置換されている、＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の化合物。
＜１３＞前記Ａ環が、環状置換基を２つ含むビス型を有する、＜１＞〜＜６＞のいずれか一項に記載の化合物。
＜１４＞ｚが単結合であり、かつ、
ｉ） Ａが２，３‐ジクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＦ _３ もしくはＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＨＦ _２ であるか、
ｉｉ） Ａが２，３，５‐トリクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくはＣＨ _２ ＣＢｒ _３ であるか、
ｉｉｉ） Ａが３，５，‐ビストリフルオロメチルフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくはＣＨ _２ ＣＢｒ _３ であるか、
ｉｖ） Ａがビスフェニルメチルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくはＣＨ _２ ＣＢｒ _３ であるか、または
ｖ） Ａが２‐（３，４，５，‐トリクロロ‐ビス‐フェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくはＣＨ _２ ＣＢｒ _３ である、
＜１＞に記載の化合物。
＜１５＞下記式（ＩＩ）で表される、請求項１に記載の化合物。

（式II中、Ｗは硫黄、酸素または窒素であり、ｎは１、２または３であり、Ｒ１はハロ‐アルキル基であり、Ｒ２は１つ以上の置換基である。）
＜１６＞Ｒ２がＮＨ _２ である、＜１５＞に記載の化合物。
＜１７＞下記式（ＩＩＩ）で表される、請求項１に記載の化合物。

（式III中、Ａ、ｚおよびＲ１は、請求項１〜請求項１４のいずれか一項において定義されている。）
＜１８＞Ａが、所望により置換されたフェニルまたはナフチルであり、かつ、ｚが、メチレンまたはエーテル架橋である、＜１７＞に記載の化合物。
＜１９＞薬剤的に許容できる担体との混和物中に、＜１＞〜＜１８＞のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤的に許容できる塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
＜２０＞ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症ならびに三叉神経・自律神経性頭痛、からなる群から選択される障害の治療；哺乳類の癌の治療；または、マラリアの治療、のための、＜１９＞に記載の医薬組成物。
＜２１＞ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症または三叉神経・自律神経性頭痛の障害の治療；哺乳類の癌の治療；または、マラリアの治療、のための、または、それらのための医薬の調製のための、＜１＞〜＜１８＞のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物。
＜２２＞ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症または三叉神経・自律神経性頭痛の障害の治療；哺乳類の癌の治療；または、マラリアの治療、のための、または、それらのための医薬の調製のための、＜１＞〜＜１８＞のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または、＜１９＞もしくは＜２０＞に記載の組成物、の使用。

Claims (10)

1. 下記式Ｉの化合物、またはその塩。
   
   （式I中、ｚは、単結合であり、かつ、
   ｉ） Ａが２，３‐ジクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＦ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＨＦ _２ であるか、
   ｉｉ） Ａが２，３，５‐トリクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＢｒ _３ であるか、
   ｉｉｉ） Ａが３，５‐ビストリフルオロメチルフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＢｒ _３ であるか、
   ｉｖ） Ａがビスフェニルメチルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＢｒ _３ であるか、または
   ｖ） Ａが２‐（３，４，５‐トリクロロ）‐ビス‐フェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＨＣｌ _２ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＢｒ _３ である。）
2. Ａが２，３‐ジクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＦ _３ もしくは‐ＣＨ _２ ＣＦ _２ ＣＨＦ _２ であるか、
   Ａが２，３，５‐トリクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ である、
   請求項１に記載の化合物、またはその塩。
3. Ａが２，３‐ジクロロフェニルであり、かつ、Ｒ１が、‐ＣＨ _２ ＣＣｌ _３ である、
   請求項２に記載の化合物、またはその塩。
4. 薬剤的に許容できる担体との混和物中に、請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤的に許容できる塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
5. ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症、三叉神経・自律神経性頭痛、哺乳類の癌および、マラリアからなる群から選択される障害の治療のための、請求項４に記載の医薬組成物。
6. ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症、三叉神経・自律神経性頭痛、哺乳類の癌および、マラリアからなる群から選択される障害の治療のための、請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物。
7. ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症、三叉神経・自律神経性頭痛、哺乳類の癌および、マラリアからなる群から選択される障害の治療のための医薬の調製のための、請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物、の使用。
8. ナトリウムチャネル遮断薬および葉酸代謝拮抗薬に感受性である哺乳類における、てんかん、多発性硬化症、緑内障およびブドウ膜炎、脳外傷および脳虚血、脳卒中発作、頭部損傷、脊髄損傷、外科的外傷、神経変性疾患、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、慢性炎症性疼痛、神経因性疼痛、片頭痛、双極性障害、気分、不安および認知障害、統合失調症、三叉神経・自律神経性頭痛、哺乳類の癌および、マラリアからなる群から選択される障害の治療のための医薬の調製のための、請求項４に記載の医薬組成物、の使用。
9. てんかん、多発性硬化症、運動ニューロン疾患及び神経因性疼痛からなる群から選択される障害の治療のための、請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬剤的に許容できる塩もしくは溶媒和物。
10. てんかん、多発性硬化症、運動ニューロン疾患及び神経因性疼痛からなる群から選択される障害の治療のための、請求項４に記載の医薬組成物。