JP5726825B2 - ヒト乳組成物ならびにそれを製造および使用する方法 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２００６年８月３０日に提出された仮出願第６０／８４１，３７１号および２００６年１１月２９日に提出された仮出願第６０／８６７，７４８号に対する優先権を主張する、２００７年８月３０日に提出されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０７／１９２３４に対する優先権を主張する。これらの出願の内容は、それらの全体が参照によって本明細書に引用される。

本開示は、ヒト乳組成物、例えばヒト乳強化剤および規格化ヒト乳配合物、ならびにそのような組成物を製造および使用する方法に関する。

ヒト乳は、一般に、その栄養性組成および免疫学上の利点のために、早産乳児および満期出産乳児に対して選択される食物である。ヒト乳の供給源は、例えばドナーまたは乳児の母親があり得る。しかしながら、生のドナー乳または従来の方法で加工されたドナー乳の栄養価は変動するものであり、ほとんどの事例では、早産乳児のニーズに見合う上で十分とはいえない。加えて、生のドナー乳の細菌性の汚染、ウイルス性の汚染、および他の汚染の可能性が存在する。これらの理由および他の理由のために、乳児自身の母親由来の乳の使用は、現代の新生児集中治療室（ＮＩＣＵ）での好ましい栄養上のアプローチとなっている。

しかしながら、母親自身の乳でさえ、未熟乳児にとっては栄養的に十分とはいえない。様々な栄養補助食品、例えばタンパク質、付加エネルギー（カロリー）および／またはミネラルを用いて強化された乳を早産乳児に授乳することが望ましいことが多い。

本開示は、ヒト乳組成物、例えば低温殺菌ヒト乳組成物、ならびにそのような組成物を製造および使用する方法を特徴とする。組成物は、ヒト乳強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴＰＬＵＳ（商標）ヒト乳強化剤、例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）、ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）、ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）、および／またはＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標））を含み、これらは、ヒト乳から生産され、様々な濃度の栄養性構成成分、例えばタンパク質、脂肪、炭水化物、ビタミンおよび／またはミネラルを含有する。これらの強化剤は、例えば早産乳児にとって最適な栄養含有量の乳を提供するために、乳飲み児の母親の乳に添加することができる。母親自身の乳の含有量に依存して、様々な濃度の強化剤を母親の乳に添加することができる。例えば、母親の乳のタンパク質濃度は、強化剤を使用して増加させることができる。上述のように、本開示の強化剤は、ヒト乳から生成され、このようにしてヒト由来の栄養素を乳児に与えることとなる。

本開示は、規格化ヒト乳配合物（ＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）、ＮＥＯ２０（商標）、および／またはＰＲＯＬＡＣＴ２４によって例示される）も特徴とし、これらはヒト乳から製造される。そのような組成物を製造および使用する方法も本明細書に記載される。これらの規格化ヒト乳配合物は、他の強化剤または乳とそれらとを混合することなく、例えば早産乳児に授乳するために使用することができる。それらは、栄養性ヒト由来配合物を提供し、母親の乳の代わりとなることができる。ヒト乳配合物は、様々なカロリー含有量を含むことができ、例えば、ＰＲＯＬＡＣＴ２４（商標）（完全授乳の全乳製品）は、約２４カロリー／オンスまたは約８１カロリー／１００ｍＬを含有することができる。

本明細書で特徴とされる方法は、大容量のドナー乳、例えば約７５〜２，０００リットル／ロットの出発物質を加工するために用いられる。

一態様では、本開示は、約３５〜８５ｍｇ／ｍＬのヒトのタンパク質成分；約６０〜１１０ｍｇ／ｍＬのヒトの脂肪成分；および約６０〜１４０ｍｇ／ｍＬのヒトの炭水化物成分を含む低温殺菌ヒト乳組成物を特徴とする。前記炭水化物成分はラクトースを含むことができる。前記組成物は、ＩｇＡならびに／またはカルシウム、塩化物、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、リン、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛よりなる群から選択される一以上の成分をさらに含むことができる。一実施形態では、前記組成物は、栄養性組成物を提供するために生ヒト乳と混合することができ、生ヒト乳は、約８０％、約７０％、約６０％または約５０％の栄養性組成物を含む。

実施形態は、一以上の下記特徴を含み得る。

一実施形態では、前記組成物は、約５５〜６５ｍｇ／ｍＬのタンパク質成分；約８５〜９５ｍｇ／ｍＬの脂肪成分；および約７０〜１２０ｍｇ／ｍＬの炭水化物成分を含むことができる。前記炭水化物成分はラクトースを含むことができる。前記組成物は、ＩｇＡならびに／またはカルシウム（例えば約４．０〜５．５ｍｇ／ｍＬもしくは２．００〜２．９０ｍｇ／ｍＬの濃度）；塩化物（例えば約０．３５〜０．９５ｍｇ／ｍＬもしくは約０．１７５〜０．４７５ｍｇ／ｍＬの濃度）；銅（例えば約０．０００５〜０．００２１ｍｇ／ｍＬもしくは約０．０００２５〜０．００１ｍｇ／ｍＬの濃度）；鉄（例えば約０．００１〜０．００７ｍｇ／ｍＬもしくは約０．０００５〜０．００２５ｍｇ／ｍＬの濃度）；マグネシウム（例えば約０．１８０〜０．２９２ｍｇ／ｍＬもしくは約０．０９０〜０．１７０ｍｇ／ｍＬの濃度）；マンガン（例えば約０．０１０〜０．０９２ｍｃｇ／ｍＬもしくは約０．００５〜０．０４６ｍｃｇ／ｍＬの濃度）；リン（例えば約２．００〜３．０５ｍｇ／ｍＬもしくは約１．００〜２．９０ｍｇ／ｍＬ、例えば約１．００〜１．５０ｍｇ／ｍＬの濃度）；カリウム（例えば約１．９０〜２．１８ｍｇ／ｍＬもしくは約０．９５〜１．４１ｍｇ／ｍＬの濃度）；ナトリウム（例えば約０．７５〜０．９６ｍｇ／ｍＬもしくは約０．３７５〜０．６０８ｍｇ／ｍＬの濃度）；および亜鉛（例えば約０．０２００〜０．０３６９ｍｇ／ｍＬもしくは約０．０１０〜０．０１９８ｍｇ／ｍＬの濃度）よりなる群から選択される一以上の成分をさらに含むことができる。一実施形態では、前記組成物は、栄養性組成物を提供するために生ヒト乳と混合することができ、生ヒト乳は、約８０％、約７０％、約６０％または約５０％の栄養性組成物を含む。

他の態様では、本開示は、約１１〜２０ｍｇ／ｍＬ、例えば約１１〜１３ｍｇ／ｍＬのヒトのタンパク質成分；約３５〜５５ｍｇ／ｍＬのヒトの脂肪成分；および約７０〜１２０ｍｇ／ｍＬ、例えば約８０〜１０５ｍｇ／ｍＬのヒトの炭水化物成分を含む低温殺菌ヒト乳組成物を特徴とする。前記炭水化物成分はラクトースを含むことができる。前記組成物のカロリー含有量は、約０．６４〜約１．１０カロリー／ｍＬとすることができる。

実施形態は、一以上の下記特徴を含み得る。

一実施形態では、低温殺菌ヒト乳組成物は、一以上の下記構成成分をさらに含むことができる：カルシウム（例えば約０．４０〜１．５０ｍｇ／ｍＬの濃度）；塩化物（例えば約０．３０〜０．８０ｍｇ／ｍＬの濃度）；銅（例えば約０．０００５〜０．００２１ｍｇ／ｍＬの濃度）；鉄（例えば約０．００１〜０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度）；マグネシウム（例えば約０．０３〜０．１３ｍｇ／ｍＬの濃度）；マンガン（例えば約０．０１〜０．０９２ｍｃｇ／ｍＬの濃度）；リン（例えば約０．１５〜０．６３１ｍｇ／ｍＬの濃度）；カリウム（例えば約０．６０〜１．２０ｍｇ／ｍＬの濃度）；ナトリウム（例えば約０．２０〜０．６０ｍｇ／ｍＬの濃度）；および／または亜鉛（例えば約０．００２５〜０．０１２０ｍｇ／ｍＬの濃度）。

本開示は、様々なヒト乳組成物を製造する方法も特徴とする。

一態様では、本開示は、低温殺菌ヒト乳組成物を得るための方法を特徴とする。前記方法は、（ａ）一以上のウイルスについてヒト乳を遺伝子的にスクリーニングする段階；（ｂ）乳をろ過する段階；（ｃ）乳を、例えば約６３℃以上で約３０分間、熱処理する段階；（ｄ）乳を、クリームおよびスキムに分離する段階；（ｅ）クリームの一部分をスキムに添加する段階；ならびに（ｆ）低温殺菌する段階を含む。

実施形態は、一以上の下記特徴を含む。

一実施形態では、前記方法は、段階（ｄ）の後に、例えばスキムから水をろ過して取り除くために、フィルターを通してスキムをろ過する段階をさらに含むことができる。段階（ｄ）後にスキムをろ過した後、かかるろ過で使用されたフィルターは、後洗浄の溶液を得るために洗浄することができる。後洗浄の溶液はスキムに添加することができる。

段階（ａ）の遺伝子スクリーニングは、ポリメラーゼ連鎖反応とすることができ、ならびに／または一以上のウイルス、例えばＨＩＶ−１、ＨＢＶおよび／もしくはＨＣＶについてのスクリーニングを含むことができる。乳は、段階（ｂ）で、約２００ミクロンのスクリーンを通してろ過することができる。方法は、段階（ｄ）の後に、クリーム、例えば約３０〜５０％のクリームを分離器に通す段階をさらに含むことができる。後洗浄の溶液およびスキムの組成物は、約７．０〜７．２％のタンパク質を含むことができる。

前記方法は、段階（ｅ）の後に得られる組成物の一部分についてミネラル分析を実行する段階をさらに含むことができる。前記方法は、カルシウム、塩化物、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、リン、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛よりなる群から選択される一以上のミネラルを、段階（ｅ）の後に得られる組成物に添加する段階も含むことができる。一以上のミネラルを添加する段階は組成物を加熱する段階も含むことができる。

前記方法は、段階（ｆ）の後に組成物を冷却する段階も含むこともでき、段階（ｆ）の後に組成物の一部分について生物学的試験を実行する段階、および／または段階（ｆ）の後に組成物の一部分について栄養試験を実行する段階を実行することもできる。

段階（ａ）のヒト乳はプールされたヒト乳とすることができる。本明細書で特徴とされる方法は、大容量の出発物質、例えばヒト乳、例えばプールされたヒト乳を用いて実行することができる。その容量は、出発物質約７５〜２，０００リットル／ロットの範囲とすることができる。

段階（ｆ）の後に得られる組成物は、約８．５〜９．５％の脂肪、約６．３〜７．０％のタンパク質、および約８．０〜１０．５％のラクトースを含むことができる。

他の一態様では、本開示は、低温殺菌ヒト乳組成物を得るための方法を特徴とする。前記方法は、（ａ）一以上のウイルスについてヒト乳を遺伝子的にスクリーニングする段階；（ｂ）乳をろ過する段階；（ｃ）クリームを添加する段階；および（ｄ）低温殺菌する段階を含む。

実施形態は、一以上の下記特徴を含むことができる。

一実施形態では、段階（ａ）の遺伝子スクリーニングはポリメラーゼ連鎖反応とすることができる。遺伝子スクリーニングは、一以上のウイルス、例えばＨＩＶ−１、ＨＢＶおよび／またはＨＣＶについてスクリーニングする段階を含むことができる。

乳は、段階（ｂ）で、約２００ミクロンのスクリーンを通してろ過することができる。前記方法は、フィルターを通す段階（ｂ）の後に、全乳を限外ろ過する段階をさらに含むことができる。限外ろ過中に使用されるフィルターは後洗浄することができる。

組成物は、段階（ｄ）の後に冷却することができる。前記組成物についての生物学的試験および／または栄養試験は段階（ｄ）の後に実行することができる。

段階（ａ）のヒト乳はプールされたヒト乳とすることができる。本明細書で特徴とされる方法は、大容量の出発物質、例えばヒト乳、例えばプールされたヒト乳を用いて実行することができる。その容量は、出発物質約７５〜２，０００リットル／ロットの範囲とすることができる。

前記方法は、カルシウム、塩化物、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、リン、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛よりなる群から選択される一以上のミネラルを、段階（ｃ）の後に得られる組成物に添加する段階も含むことができる。一実施形態では、段階（ｄ）の後に得られる組成物は、約１１〜２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質、約３５〜５５ｍｇ／ｍＬの脂肪、および約７０〜１２０ｍｇ／ｍＬの炭水化物を含むことができる。

さらに他の態様では、本開示は、本明細書で特徴とされる低温殺菌ヒト乳組成物（例えば強化剤）ならびに前記の特徴とされる組成物を生ヒト乳と混合するための目盛付きの容器（例えばボトル、シリンジおよび缶）を含むキットを特徴とする。

他の態様では、本開示は、栄養性乳組成物を得る方法を特徴とする。前記方法は、本明細書で特徴とされる低温殺菌ヒト乳組成物（例えば強化剤）を生ヒト乳に添加し、それによって、生ヒト乳の栄養濃度を増加させる段階を含む。生ヒト乳のカロリー組成物は、約２〜１０カロリー／オンス増加させることができる。

他の態様では、本開示は、本明細書で特徴とされる組成物（強化剤）を生ヒト乳に添加して、混合物を得る段階および混合物を未熟乳児に投与する段階を含む、未熟なヒト乳児に補完的栄養素を提供する方法を特徴とする。

「未熟」乳児、「早産」乳児、および「低出生体重（ＬＢＷ）」乳児という用語は、交換可能なように使用され、在胎期間が３７週間未満で生まれた乳児、および／または出生体重２５００ｇ未満の乳児を意味する。

「全乳」とは、脂肪が除去されていない乳を意味する。

「生物汚染度」とは、乳中に存在し得る微生物汚染物質および病原菌（一般に生きている）、例えばウイルス、細菌、カビ、菌類およびその他同種のものを意味する。

本明細書で引用される特許、特許出願および参考文献はすべて、参照によってそれらの全体が引用される。

ヒト乳強化剤を製造する方法の実施形態のチャートを示す図である。 規格化ヒト乳を製造する方法の実施形態のチャートを示す図である。

本開示は、ヒト乳組成物、例えば低温殺菌ヒト乳組成物、ならびにそのような組成物を製造および使用する方法を特徴とする。前記組成物は、ヒト乳強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴＰＬＵＳ（商標）ヒト乳強化剤、例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）、ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）、ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）、および／またはＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標））を含み、これらはヒト乳から生産され、様々な濃度の栄養性構成成分、例えばビタミンおよび／またはミネラルを含む。これらの強化剤は、例えば早産乳児にとって最適な栄養含有量の乳を提供するために、乳飲み児の母親の乳に添加することができる。母親自身の乳の含有量に依存して、様々な濃度の強化剤を母親の乳に添加することができる。例えば、母親の乳のタンパク質濃度および／またはカロリー含有量は、強化剤を使用して増加させることができる。一実施形態では、前記の特徴とされる強化剤は、約３．３〜約５．５ｇのタンパク質／ｋｇ／日を、１５０ｍＬの完全な授乳および／または１２０カロリー／ｋｇ／日当たりで３．２〜４．１ｇのタンパク質を有する完全な授乳を受けている乳児に与えることができる。

本開示は、規格化ヒト乳配合物（ＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）、ＮＥＯ２０（商標）、および／またはＰＲＯＬＡＣＴ２４（商標）によって例示される）も特徴とし、これらはヒト乳から生産される。そのような組成物を製造および使用する方法も記載される。これらの規格化ヒト乳配合物は、他の強化剤または乳とそれらとを混合することなく、例えば早産乳児に授乳するために使用することができる。したがって、前記組成物は、母親の乳の代わりとなることができるヒト由来栄養性配合物を乳児に提供する。ヒト乳配合物は、様々なカロリー含有量を含むことができ、例えば、ＰＲＯＬＡＣＴ２４（完全授乳の全乳配合物）は、約２４カロリー／オンスまたは約８１カロリー／１００ｍＬを含有することができる。

本開示の組成物は、厳密な遺伝子スクリーニング、加工（例えば、強化剤組成物中の栄養素を濃縮するため、および／または生物汚染度を低減させるため）ならびに低温殺菌を行う、ヒトのドナー乳、例えばプールされた乳から生成される。乳は、様々なミネラルおよび／またはビタミンを用いて補完することができる。したがって、本開示は、ヒトのドナーから乳を得て、それを加工する方法も特徴とする。

本開示の方法は、大容量のドナー乳、例えば約７５〜２，０００リットル／ロットの出発物質を加工するために使用することができる。

未熟乳児の栄養要求
新生児、例えば早産で生まれた乳児の臨床的転帰に影響を与え得る多くの因子がある。早産乳児は、脆弱な免疫系、未成熟の消化器系を有し、総カロリー的な必要性および特定の栄養素の必要性が増大している（一般に、満期出産乳児と比較した場合）。したがって、そのような乳児に与えられる栄養は、彼らの成長および発達にとって重要な因子となる。ヒト乳は、その栄養性組成および免疫学上の利点のために、早産乳児および満期出産乳児のための理想的な食物として長い間認識されてきた。しかしながら、すべての母親が、自分の乳児を母乳で育てることができるとは限らないか、もしくはそのようにしようとするとは限らない（または、搾乳ポンプを使用して自分の乳を貯蔵することができるとは限らないか、もしくはそのようにしようとするとは限らない）。例えば、ある種の疾患、例えば活動性結核を有するか、または放射性同位元素、代謝拮抗剤もしくは化学療法剤を投与されている母親は、乳児を母乳で育てないかもしれない。加えて、母親自身の乳は、早産乳児の生命を維持するのに十分な栄養含有量を含んでいないかもしれない。ドナー乳の使用も問題となり得る。なぜなら、そのような乳は早産乳児にとって適当な栄養を含有していないかもしれないためである。

本開示は、ヒト乳組成物、ならびに乳児（例えば未熟乳児）に授乳するための、および／または彼らに授乳される乳の栄養価を増加させるためのそのような組成物を、製造および使用する方法を特徴とする。本明細書に記載される強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴＰＬＵＳ（商標））は、高いレベルの（例えば）タンパク質および／またはカロリーを、乳に、ひいては乳児に与えることができる。規格化ヒト乳配合物（例えばＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）およびＮＥＯ２０（商標））は母親自身の乳の代わりに使用することができる。前記組成物は、様々なビタミンおよび／またはミネラルを用いて補完することができる。前記組成物は、ＩｇＡ（例えば分泌型ＩｇＡ）、および本明細書に記載される様々な構成成分を含有することもできる。

認定され且つ選択されたドナーからのヒト乳の獲得
本開示の組成物は、寄付されたヒト乳から生成される。様々な手法が適当なドナーを同定し認定するために用いられる。可能性のあるドナーは、認定プロセスの一環として、彼女の医師および彼女の子供の小児科医から譲渡証書を得なければならない。これは、とりわけ、ドナーが慢性的に病気ではないこと、および彼女の子供が寄付の結果として損害を受けないであろうということを保証するのに役立つ。乳の収集および分配を認定し観察するための方法およびシステムは、例えば米国特許出願第１１／５２６，１２７号（ＵＳ２００７／００９８８６３）に記載され、その全体が参照によって本明細書に引用される。

一般に、ドナーのスクリーニングプロセスは、インタビューおよび生物学的なサンプル処理の両方を含む。いかなる血液サンプルもスクリーニングで陽性、例えばウイルス性の汚染と分かれば、ドナーは認定プロセスから排除される。

一旦ドナーが認定されて乳を送り始めると、彼女による各発送の乳は、例えばＢ．ｃｅｒｅｕｓならびに乱用薬物（例えばコカイン、アヘン剤、メタンフェタミン、ベンゾジアゼピン、アンフェタミンおよびＴＨＣ）について試験される。いかなる陽性の所見も、ドナーの保留、およびこれまで収集されたすべての乳の廃棄という結果になる。

ドナーは定期的に再認定され得る。例えば、ドナーが寄付の継続を望む場合、ドナーは、４カ月ごとに、彼女らの最初の認定に使用されたプロトコールによるスクリーニングを受けるよう義務づけられる。再認定されないかまたは認定されないドナーは、彼女らが認定される時まで保留されるか、または再認定のスクリーニングの結果によって認可されない限り、永久に保留される。後者の状況の場合、そのドナーによって提供された残存している乳はすべて在庫品から排除され、廃棄される。

認定されたドナーは、指定の機関（例えば母乳バンクオフィス）に寄付してもよいし、または典型的には、自宅で乳を搾乳する。認定されたドナーは、母乳バンクによって、または直接乳加工業者から（母乳バンクおよび加工業者は同じ事業体であっても異なる事業体であってもよい）、支給品が提供され、自宅に持ち帰ることができる。前記支給品は、典型的には、容器上にコンピューターで読み取り可能なコード（例えばバーコードラベル）を含むであろうし、また、前記支給品は搾乳ポンプをさらに含む場合もある。それから、ドナーは、自宅で乳を搾り、これを約−２０℃以下の温度で冷凍することができる。ドナーが認定された者である場合、そのドナーの乳は受理される；そのような（上記したような試験の）結果が条件を満たす場合、ドナーがセンターに乳を届けるか、またはドナーが乳を自宅から収集させるよう、約束が成される。ドナーは、母乳バンクまたは乳加工業者によって提供された断熱容器で母乳バンクセンターまたは乳加工業者に直接乳を発送することもできる。乳および容器は、それらの状態について検査され、バーコード情報はデータベースと照合される。条件を満たせば、さらなる試験および加工の準備が整うまで、そのユニットは、ドナー乳センターまたは加工センターの冷凍庫（−２０℃以下）に置かれる。

本方法の幾つかの実施形態では、乳は、ドナーによって自宅で搾乳されるが、乳バンク機関には収集されないため、乳が真に登録したドナーからのものであることを保証するために、各ドナーの乳は、遺伝子マーカー（例えばＤＮＡマーカー）用にサンプリングされる。このような主たる同定手法は、当技術分野において公知である（例えば、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００６／３６８２７号を参照のこと、当出願はその全体が参照によって本明細書に引用される）。乳は、試験結果を受けるまで、（例えば２０℃以下で）貯蔵され、隔離され得る。上記のプロセス全体に亘って、準拠しない乳標本は例外なく処分され、そのドナーは不適格とされる。血液試験データを含む、ドナーに関するすべての秘密情報へのアクセスは、注意深く管理され、医療保険の相互運用性と説明責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）の要件を具備している。

寄付されたヒト乳の加工
収集されたドナーのヒト乳は、例えばヒト乳強化剤および／または規格化ヒト乳配合物を得るために加工される。

ヒト乳強化剤を得る方法
図１は、ヒト乳強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴＰＬＵＳ（商標））を生成する実施形態を示すチャート図である。詳細な実施形態は、下記の実施例１で説明される。上述したように、ドナー乳は、同定目的のため且つ汚染を回避するために注意深く分析される。ドナー乳は冷凍され、所望の場合には解凍されてプールされる。その後、それは、例えば遺伝子的に（例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって）スクリーニングされる（図１の段階１）。遺伝子スクリーニングは、あらゆる汚染物質、例えばウイルス（例えばＨＩＶ−１、ＨＢＶおよび／またはＨＣＶ）を同定するために行われる。その後、乳は、例えば約２００ミクロンのフィルターを通してろ過を行い（段階２）、そして熱処理（段階３）を行う。例えば、（乳の）組成物は、約６３℃以上で約３０分間以上、処理することができる。段階４では、乳は、分離器、例えば遠心分離機に移されて、スキムからクリームを分離する。スキムは、第２の処理タンクの中に移すことができ、ここでスキムはろ過段階（段階５）まで約２〜８℃に保たれる。

任意に、段階４でスキムから分離されたクリームは、再び分離を行い、より多くのスキムを得ることができる。

クリームおよびスキムの分離（段階４）の後に、所望の量のクリームがスキムに添加され、組成物は、さらにろ過（段階５）、例えば限外ろ過を行う。このプロセスは、水をろ過して取り除くことによってスキムミルク中の栄養素を濃縮する。濃縮中に得られた水は透過液と呼ばれる。限外ろ過に使用されたフィルターは後洗浄することができ、得られた溶液はスキムに添加されて、得られる栄養素の量を最大にすることができる（例えば、約７〜７．２％のタンパク質濃度）。その後、スキムは、クリームと混ぜ合わせ（段階６）、サンプルが分析のために採取される。本プロセスの間のこの時点で、（乳の）組成物は一般に、約８．５〜９．５％の脂肪；約６．３〜７．０％のタンパク質；および約８〜１０．５％の炭水化物、例えばラクトースを含有する。

段階４でのクリームおよびスキムの分離の後、クリームは、一時保存用のタンク、例えばステンレス鋼容器の中に流される。クリームは、そのカロリー、タンパク質および脂肪の含有量について分析することができる。クリームの栄養含有量が分かれば、クリームの一部分を、ろ過、例えば限外ろ過（段階５）を行ったスキムミルクに添加して、製造されている特定の製品に必要とされるカロリー、タンパク質および脂肪の含有量を達成することができる。ミネラルは、低温殺菌の前に乳に添加することができる。

この時点で、一実施形態では、加工された組成物はミネラルの添加前に冷凍し、さらなる加工のために後の時点で解凍することができる。使用されなかったいかなる余剰のクリームもまた、貯蔵する（例えば冷凍する）ことができる。任意に、加工された組成物が冷凍される前に、サンプルがミネラル分析のために採取される。加工された乳のミネラル含有量が分かると、組成物は解凍され（組成物が冷凍された場合）、所望の量のミネラルを添加して目標値を達成することができる。

段階６、ならびに／または任意の冷凍および／もしくはミネラル添加の後に、組成物を低温殺菌する（段階７）。例えば、組成物は、プラチナ加硫サイラスティックチューブを介して高温短時間（ＨＴＳＴ）低温殺菌器に接続された処理タンク中に置いておくことができる。低温殺菌の後に、乳は、第２の処理タンクの中に収集され、冷却することができる。当技術分野で知られている他の低温殺菌の方法を利用することができる。例えば、バットでの低温殺菌においては、タンク中の乳は最低６３℃まで加熱し、最低３０分間その温度で保持する。乳上の空気が乳の温度よりも少なくとも摂氏３度高い温度となる条件下で、スチーム加熱される。一実施形態では、製品温度は約６６℃以上であり、製品上の気温は約６９℃以上であり、製品は約３０分以上の間、低温殺菌する。他の実施形態では、ＨＴＳＴ低温殺菌およびバットでの低温殺菌の両方が行われる。

得られた強化剤組成物は一般に無菌的に加工される。約２〜８℃まで冷却した後に、製品は、所望の容量の容器中に充填し、強化剤の様々なサンプルを、栄養分析および生物汚染度分析のために採取する。栄養分析により、組成物の適切な含有量を確実なものとする。栄養分析を反映するラベルは容器ごとに作られる。生物汚染度分析は、汚染物質の存在について試験する（例えば、Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、大腸菌（Coliform）、シュードモナス、サルモネラ菌、ブドウ球菌、酵母菌および／またはカビの総好気性数（Total Aerobic Count））。生物汚染度試験は遺伝子試験とすることができる。分析が完了し、所望の結果が得られれば、製品をパッケージ化し、発送する。

規格化ヒト乳配合物を得る方法
下記の図２ならびに実施例３および４は、規格化ヒト乳配合物（例えばＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）ならびにＮＥＯ２０（商標））を得るための方法についての幾つかの実施形態を示す。

上述したように、ドナー乳は、ドナーの同一性を確実にし、且つ汚染の可能性を低減させるためにスクリーニングされる。ドナー乳はプールされ、さらにスクリーニングされる（図２の段階１）、例えば遺伝子的にスクリーニングされる（例えばＰＣＲによって）。スクリーニングは、例えばウイルス（例えばＨＩＶ−１、ＨＢＶおよび／またはＨＣＶ）を同定することができる。試験して陽性となった乳は処分する。スクリーニングの後に、（乳の）組成物をろ過する（段階２）。乳は、約２００ミクロンのスクリーンを通してろ過し、次いで、限外ろ過する。限外ろ過中に、水は乳からろ過されて取り除かれ（この水は透過液と呼ばれる）、フィルターは透過液を用いて後洗浄される。後洗浄の溶液は、あらゆる失われていったタンパク質を回収し、且つタンパク質の濃度を例えば約１．２〜約１．５％まで増加させるために乳に添加される。図２を参照すると、他のロットからのクリーム（例えば上述の強化剤ロットに由来する余剰クリーム）は、カロリー含有量を増加させるために段階３で添加する。プロセス中のこの段階で、組成物は一般に、約３．５〜５．５％の脂肪；約１．１〜１．３％のタンパク質；および約８〜１０．５％の炭水化物、例えばラクトースを含有する。

この段階で、組成物は冷凍し、後のさらなる処理のために解凍することができる。

任意に、ヒト乳配合物がミネラルを用いて強化されることとなる場合、組成物のミネラル分析は段階３の後に行われる。ミネラルの含有量が分かると、所望の量のミネラルを、目標値を達成するために添加することができる。

段階４で、組成物を低温殺菌する。低温殺菌方法は当技術分野で公知である。例えば、製品は、ジャケットをかぶせたタンク中で低温殺菌することができる。熱いグリコール（hot glycol）は、タンクを加熱するために使用することができる。製品温度は約６３℃以上とすることができ、製品上の気温は約６６℃以上とすることができる。製品は、最低でも約３０分間、低温殺菌する。他の低温殺菌手法は当技術分野で公知である。

約２〜８℃まで冷却した後に、製品は、所望の容量の容器中に充填し、ヒト乳配合物の様々なサンプルを、栄養分析および生物汚染度分析のために採取する。栄養分析により、組成物の適切な含有量を確実なものとする。容器ごとに作られたラベルは栄養分析を反映するものである。生物汚染度分析は、汚染物質の存在について試験する（例えばＢ．ｃｅｒｅｕｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、大腸菌、シュードモナス、サルモネラ菌、ブドウ球菌、酵母菌および／またはカビの総好気性数）。分析が完了して所望の結果が達成されれば、製品をパッケージ化し、発送する。

ヒト乳の構成成分および生物汚染度に対する、特徴とされる方法の効果
ヒト乳は、約１００，０００種の異なる分子の構成要素、すなわちタンパク質、脂質、炭水化物、ビタミンおよび微量ミネラルを含む。一部の特定の構成成分は、単量体の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）および二量体の分泌型ＩｇＡ（ｓ［ＩｇＡ］_２）、リゾチームおよびラクトフェリンを含む。したがって、本明細書で特徴とされる方法（低温殺菌を含む）は、乳製品の安全性を確実にするために役立つが、潜在的に熱不安定性である上記の構成成分の適当な量を維持しておくべきでもある。下記の実施例５および表３に記載されるように、本明細書で特徴とされる低温殺菌方法は、加工された乳中の多量のＩｇＡ、リゾチームおよびビタミンＢ６を維持することができる。下記の実施例５および表２に記載されるように、前記の特徴とされる方法は、ヒト乳のあらゆる生物汚染度をも低減させることができる。

ヒト乳組成物
本明細書で特徴とされる組成物は、様々な量の栄養素、例えばタンパク質、炭水化物、脂肪、ビタミンおよびミネラルならびにＩｇＡおよびリゾチームなどのような他の乳構成成分を含有する。ヒト乳強化剤は、例えば母親の乳に添加することができる、高濃度の栄養素およびカロリーをもたらす。規格化ヒト乳配合物は、所望の場合、ビタミンおよび／またはミネラルを用いて補完することができ、また、乳児、例えば未熟乳児に直接授乳することができる。これらの組成物を生成する方法は、組成物中の栄養素およびカロリーの量を最適化するように設計される。例えば、本明細書で特徴とされる組成物は、１２０カロリー／ｋｇ／日を受けている乳児への、１日当たり１５０ｍＬの完全な授乳および／または３．２〜４．１グラムのタンパク質／ｋｇ／日を有する完全な授乳を受けている乳児に、約３．３〜約５．５グラムのタンパク質／ｋｇ／日を与えることができる。

ヒト乳強化剤
本明細書で特徴とされるヒト乳強化剤は、高濃度の栄養素を含有する。一実施形態では、かかる強化剤は、約３５〜８５ｍｇ／ｍＬのヒトのタンパク質成分；約６０〜１１０ｍｇ／ｍＬのヒトの脂肪成分；および約６０〜１４０ｍｇ／ｍＬのヒトの炭水化物成分を含有することができる。前記強化剤の総カロリー含有量は、例えば約０．９２〜約１．８９カロリー／ｍＬとすることができる。特に、一実施形態は、約５５〜６５ｍｇ／ｍＬのタンパク質成分；約８５〜９５ｍｇ／ｍＬの脂肪成分；および約７０〜１２０ｍｇ／ｍＬの炭水化物成分を含むことができる。

強化剤は、所望の場合、ミネラルを用いて補完することができる。一実施形態では、ミネラルは、約４．０〜５．５ｍｇ／ｍＬのカルシウム濃度；約０．３５〜０．９５ｍｇ／ｍＬの塩化物濃度；約０．０００５〜０．００２１ｍｇ／ｍＬの銅濃度；約０．００１〜０．７００ｍｇ／ｍＬの鉄濃度；約０．１８０〜０．２９２ｍｇ／ｍＬのマグネシウム濃度；約０．０１０〜０．０９２マイクログラム／ｍＬのマンガン濃度；約２．００〜３．０５ｍｇ／ｍＬのリン濃度；約１．９０〜２．１８ｍｇ／ｍＬのカリウム濃度；約０．７５〜０．９６ｍｇ／ｍＬのナトリウム濃度；および約０．０２００〜０．０３９６ｍｇ／ｍＬの亜鉛濃度を含むことができる。他の実施形態では、ミネラルは、約２．００〜２．９ｍｇ／ｍＬのカルシウム濃度；約０．１７５〜０．４７５ｍｇ／ｍＬの塩化物濃度；約０．０００２５〜０．００１ｍｇ／ｍＬの銅濃度；約０．０００５〜０．００２５ｍｇ／ｍＬの鉄濃度；約０．０９０〜０．１７０ｍｇ／ｍＬのマグネシウム濃度；約０．００５〜０．０４６マイクログラム／ｍＬのマンガン濃度；約１．００〜１．５０ｍｇ／ｍＬのリン濃度；約０．９５〜１．４１ｍｇ／ｍＬのカリウム濃度；約０．３７５〜０．６０８ｍｇ／ｍＬのナトリウム濃度；および約０．０１０〜０．０１９８ｍｇ／ｍＬの亜鉛濃度を含むことができる。

例示的な強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）およびＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標））は以下の構成成分を含むことができる：ヒト乳、炭酸カルシウム、リン酸カリウム、リン酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、リン酸マグネシウム、硫酸亜鉛、硫酸銅および硫酸マンガン。例示的な強化剤は、約３４３ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ_２Ｏまでのモル浸透圧濃度（osmolarity）で、１００ｍＬ当たり以下の特徴を有することができる：約１３５〜１５５カロリー；約８．５〜９．５ｇの総脂肪；約７５〜９６ｍｇのナトリウム；約１９０〜２１８ｍｇのカリウム；約７．０〜１２．０ｇの総炭水化物；約５．５〜１０．０ｇの糖類；約５．５〜６．５ｇのタンパク質；約１０００〜５０００ＩＵのビタミンＡ；約１ｍｇ未満のビタミンＣ；約４００〜５５０ｍｇのカルシウム；約０．１〜０．５ｍｇの鉄；約２００〜３０５ｍｇのリン；約１８〜２９．２ｍｇのマグネシウム；約３５〜９５ｍｇの塩化物；約２．０〜４．０ｍｇの亜鉛；約０．０５〜０．２１ｍｃｇの銅；および約９．２ｍｃｇ未満のマンガン（２０％の強化剤に対する約８０％の生乳の比で生ヒト乳と混合した場合）。

他の成分および異なる濃度の成分を有する強化剤は本開示により包含される。

本明細書で特徴とされる強化剤は、母親の乳の栄養含有量および乳児の必要性に依存して、様々な濃度で母親の乳と混合することができる。例えば、母親の生乳は、生乳の栄養価を決定するために試験することができる。典型的な生乳は、平均で、１．１ｇのタンパク質、３．２ｇの脂肪、７．７ｇの炭水化物（主としてラクトース）を含み、１００ｍＬ当たり約６４ｋｃａｌのエネルギーを供給する。試験の後に、母親の乳は、本明細書で説明される強化剤組成物を添加することによって調整することができる。例えば、強化剤は、１２０カロリー／ｋｇ／日を受けている乳児への、１５０ｍＬ／日の完全な授乳および／または３．２〜４．１ｇのタンパク質／ｋｇ／日を有する完全な授乳を考慮する場合、約２〜約１０カロリー／オンス、および／または３．３〜５．５ｇ／タンパク質／ｋｇ／日を添加することができる。より低用量の強化剤および栄養素が必要とされる場合、混合物は、約２０％の強化剤および約８０％の生ヒト乳（栄養性組成物）を含むことができる（約４カロリー／オンスを添加）（例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）との混合物）。より高用量の栄養素が必要とされる場合、混合物は、約５０％の生ヒト乳および約５０％の強化剤を含むことができる（例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）との混合物）。約７０％の生ヒト乳に対する約３０％の強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）との混合物）および約６０％の生ヒト乳に対する約４０％の強化剤（例えばＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）との混合物）を含む（が、これらに限定されない）、混合物の他の比は本開示によって包含される。下記の実施例２および表２は、混合物およびそれらの栄養情報の幾つかの実施形態を示す。

規格化ヒト乳配合物
本明細書で特徴とされる規格化ヒト乳配合物は、乳児、例えば未熟乳児に授乳するために、母親自身の乳の代わりに使用することができる。それらは、乳児の成長および発達のための様々な栄養性構成成分を含む。

一実施形態では、規格化ヒト乳配合物は、約１１〜２０ｍｇ／ｍＬのヒトのタンパク質成分；約３５〜５５ｍｇ／ｍＬのヒトの脂肪成分；および約７０〜１２０ｍｇ／ｍＬのヒトの炭水化物成分を含むことができる。特定の実施形態では、配合物は、約１１〜１３ｍｇ／ｍＬのヒトのタンパク質成分；約３５〜５５ｍｇ／ｍＬのヒトの脂肪成分；および約８０〜１０５ｍｇ／ｍＬのヒトの炭水化物成分を含有することができる。配合物の総カロリー含有量は、例えば約０．６８〜約０．９６カロリー／ｍＬとすることができる。

乳配合物は、ビタミンおよび／またはミネラルを用いて補完することができる。一実施形態では、組成物は、約０．４０〜１．５０ｍｇ／ｍＬのカルシウム濃度；約０．３０〜０．８０ｍｇ／ｍＬの塩化物濃度；約０．０００５〜０．００２１ｍｇ／ｍＬの銅濃度；約０．００１〜０．００５ｍｇ／ｍＬの鉄濃度；約０．０３〜０．１３ｍｇ／ｍＬのマグネシウム濃度；約０．０１〜０．０９２ｍｇ／ｍＬのマンガン濃度；約０．１５〜０．６３１ｍｇ／ｍＬ（例えば約０．１５〜０．６０ｍｇ／ｍＬ）のリン濃度；約０．６０〜１．２０ｍｇ／ｍＬのカリウム濃度；約０．２０〜０．６０ｍｇ／ｍＬのナトリウム濃度；および約０．００２５〜０．０１２０ｍｇ／ｍＬの亜鉛濃度を含むことができる。

ヒト乳配合物は、様々なカロリー含有量、例えば６７ｋｃａｌ／ｄＬ（１オンス当たり２０カロリー）および８１ｋｃａｌ／ｄＬ（１オンス当たり２４カロリー）を含むことができる。例示的なヒト乳配合物（例えばＰＲＯＬＡＣＴ２４（商標））は以下の成分を含むことができる：ヒト乳、グリセロリン酸カルシウム、クエン酸カリウム、グルコン酸カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸マグネシウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅および硫酸マンガン。この例示的な組成物は、１００ｍＬ当たり以下の特徴を有することができる：約８１カロリー；約４．４ｇの総脂肪；約２０．３ｍｇのナトリウム；約６０．３ｍｇのカリウム；約８ｇの総炭水化物；約５〜９ｇの糖類；約２．３ｇのタンパク質；約１８０〜２５０ＩＵのビタミンＡ；約１．０ｍｇ未満のビタミンＣ；約４０．０〜１５０．０ｍｇのカルシウム；約１００〜１５０ｍｃｇの鉄；約１５〜５０ｍｇのリン；約３〜１０ｍｇのマグネシウム；約２５〜７５．０ｍｇの塩化物；約１．２ｍｃｇの亜鉛；約１４０〜１９０ｍｃｇの銅；約６０．２ｍｃｇ未満のマンガン；および約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ_２Ｏのモル浸透圧濃度。他の成分および異なる濃度の成分を有する乳配合物は本開示により包含される。

特徴となる組成物の特定の構成成分
本明細書で特徴とされる乳組成物および強化剤の構成成分の１つはタンパク質である。体内では、タンパク質は、成長、酵素およびホルモンの合成、ならびに皮膚、尿および糞便より失われていったタンパク質の交換に必要とされる。これらの代謝プロセスは、授乳でのタンパク質の総量および特定のアミノ酸の相対量の両方の必要性を決定する。乳児への授乳におけるタンパク質の量および種類の妥当性は、成長、窒素の吸収および保持、血漿アミノ酸、ある種の血液分析物質、ならびに代謝応答を測定することによって決定される。単に栄養上の理由以外の理由で有益な、前記の特徴とされる組成物中に存在するタンパク質の中には、ヒトＩｇＡ、リゾチームおよびラクトフェリンが含まれる。

本明細書に記載される乳組成物の他の成分は脂肪である。脂肪は、高いカロリー密度のいう理由だけではなく、溶液中での低い浸透圧活性という理由からも、一般には、ＬＢＷ乳児にとってのエネルギー源となる。したがって、任意に、本発明の乳組成物は、脂肪成分を用いて補完することができる。そのような異種脂肪成分は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸等の特定の脂肪酸を含む。

ビタミンおよびミネラルは、乳児の適切な栄養摂取および発達に重要である。未熟乳児またはＬＢＷ乳児は、成長のため、および酸塩基バランスのために、電解質、例えばナトリウム、カリウムおよび塩化物を必要とする。これらの電解質の十分な摂取は、尿および便における、ならびに皮膚からの逸失の代わりとして必要とされる。カルシウム、リンおよびマグネシウムは、適切な骨の石灰化および成長に必要とされる。

微量ミネラルは、細胞分裂、免疫機能および成長と関連する。その結果として、十分な量の微量ミネラルが乳児の成長および発達に必要とされる。重要であるいくつかの微量ミネラルは、例えば銅、マグネシウムおよび鉄（これは、例えばヘモグロビン、ミオグロビンおよび鉄含有酵素の合成に重要である）を含む。亜鉛は例えば、成長のために、多数の酵素の活性のために、ならびにＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質の合成のために必要とされる。銅は、例えばいくつかの重要な酵素の活性のために必要とされる。マンガンは、例えば骨および軟骨の発達のために必要とされ、多糖類および糖タンパク質の合成において重要である。したがって、本発明のヒト乳配合物および強化剤組成物は、本明細書に記載されるようなビタミンおよびミネラルを用いて補完することができる。

ビタミンＡは、例えば成長、細胞分化、視覚および免疫系の適切な機能に必須の脂溶性ビタミンである。ビタミンＤは、例えばカルシウムおよび（より程度は少ないが）リンの吸収に、ならびに骨の発達に重要である。ビタミンＥ（トコフェロール）は、細胞中の多価不飽和脂肪酸の過酸化を予防し、そのため組織損傷を予防する。葉酸は、例えばアミノ酸およびヌクレオチドの代謝の役割を果たす。血清の葉酸濃度は、葉酸摂取が少ないＬＢＷ乳児では２週齢後に正常未満に低下することが示された。加えて、いくつかのビタミンＢ群は早産乳中に低濃度で存在する。

上述のように、ヒト乳のビタミンおよびミネラルの濃度の変動性、ならびに早産乳児にとっての増大した必要性は、発達中の乳児が適当な量のビタミンおよびミネラルを受けとっていることを保証するために、多少の強化を要求する場合がある。本明細書で特徴とされるヒト乳組成物に添加することができるビタミンおよびミネラルの例として、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビオチン、葉酸、パントテン酸、ナイアシン、ｍ−イノシトール、カルシウム、リン、マグネシウム、亜鉛、マンガン、銅、ナトリウム、カリウム、塩化物、鉄およびセレンが含まれる。当該組成物は、クロム、モリブデン、ヨウ素、タウリン、カルニチンおよびコリンを用いて補完することもでき、これらはまた、補完の必要があるかもしれない。

本明細書で特徴とされるヒト乳強化剤および規格化乳配合物のモル浸透圧濃度は、組成物の吸着、吸収および消化に影響を与え得る。高いモル浸透圧濃度、例えば約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ_２Ｏ超は、壊死性腸炎（ＮＥＣ）、すなわち新産児に影響を与える胃腸疾患の率の増加と関連してきた（例えばＳｒｉｎｉｖａｓａｎら、Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ Ｆｅｔａｌ Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｅｄ．８９：５１４〜１７頁、２００４年を参照のこと）。本開示のヒト乳組成物および強化剤（一旦生乳と混合）のモル浸透圧濃度は、典型的には、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ_２Ｏ未満である。典型的には、モル浸透圧濃度は、約３１０〜約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ水（kg of water）とする。モル浸透圧濃度は、当技術分野において公知の方法によって調整することができる。

キット
本開示は、本明細書に記載されたヒト乳強化剤および当該強化剤を生ヒト乳と混合するための容器を含むキットも特徴とする。前記容器はボトル、例えば適切な希釈を助けるための目盛付きのボトル、シリンジ、缶、および当技術分野で公知の他の容器を含むことができる。

ＮＩＣＵでの、特徴とされる組成物の処理
例えばＮＩＣＵでの強化剤および規格化乳製品の調製は、患者の必要性および様々な病院の方針に依存して調整される。そのため、例えば強化剤を用いて調製された乳の量は、現場で決定されるであろう。

本開示の実施形態は、もちろん、本開示の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載される方法以外の方法で実行されてもよい。したがって、実施形態はすべての点で、例証的なものとみなされるのであって、限定的なものとみなされてはならない。

実施例１．ＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅヒト乳強化剤（Ｈｕｍａｎ Ｍｉｌｋ Ｆｏｒｔｉｆｉｅｒ；ＨＭＦ）の生産および組成物
ＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅヒト乳強化剤（ＨＭＦ）（ＰＲＯＬＡＣＴＰＬＵＳ（商標））は、以下の段階により生産した。加工はクラス１００，０００のクリーンルーム（ＩＳＯクラス８）で行い、充填はクラス１０，０００のクリーンルーム（ＩＳＯクラス７）で行った：
１．ドナー乳をプールした。
２．サンプルを、下記のウイルスについてのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のために採取した：
ａ．ＨＩＶ−１
ｂ．ＨＢＶ−Ｂ型肝炎
ｃ．ＨＣＶ−Ｃ型肝炎
３．ドナー乳を、２００ミクロンのスクリーンを通してろ過した。
４．ドナー乳を、６３℃以上で３０分間熱処理した。
５．乳を、スキムミルクおよびクリームに分離し、これらは以下の濃度を有していた：
ａ．スキム：０．３〜０．６９％の脂肪、０．９〜１．２％のタンパク質、６〜１０％のラクトース
ｂ．クリーム：２５〜４６％の脂肪、０．５〜２％のタンパク質、８〜１０％のラクトース
６．クリームは、所望の場合、採取し分離器に通すことができる：
ａ．スキムが多く生産される程、一層多くのＨＭＦを生産することができるので、収量を増加させる本段階はより多くのスキムミルクを生産する。
ｂ．分離器の非スキム側から出る産物は一般に廃棄物と考えられる。
７．クリームを、濃縮段階中に、より好都合な限外ろ過のためのスキムに添加した。スキム中の脂肪をタンパク質含有量の５５〜６５％とした。
８．スキムミルクを限外ろ過した。この段階により、スキムミルクから水をろ過して取り除いた。この水を透過液と呼んだ。この段階中の最終濃度を７〜１０％のタンパク質とした。
９．透過液を使用するフィルターの後洗浄を、限外ろ過プロセス中にフィルター上に捕捉されたあらゆるタンパク質を回収するために実行した。後洗浄の溶液を、タンパク質濃度が７．０〜７．２％に達するまで濃縮スキムミルクに添加した。
１０．バルク配合中、後洗浄の溶液を添加した後に、クリームを濃縮スキムミルクに添加した。この段階によりカロリーを適正な目標値まで増加させた。この時点で、製品は、
ａ．脂肪 ８．５〜９．５％；
ｂ．タンパク質 ６．３〜７．０％；および
ｃ．ラクトース ８〜１０．５％であった。
１１．バルクのサンプルをミネラル分析にまわした。最初のミネラル含有量についての本分析は、製品に添加する必要のあるミネラルの量についての後の決定を可能にした（例えば段階１４を参照のこと）。
１２．バルクを−２０℃以下で冷凍した。
１３．ミネラルの結果が研究所から戻ってきたところで、バルクを解凍した。
１４．出発物質中のミネラル濃度（上記段階１１で決定）に基づいて、どの程度のより多くのミネラルを添加する必要があるのかを計算した。最終目標値を下記に詳述する。ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）、ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）、ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）およびＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）の強化剤はヒト乳と混合して使用し、下記の実施例２でさらに説明する。
ａ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）およびＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）
ｉ．カルシウム ４００．０〜５５０．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｉ．塩化物 ３５〜９５．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｉｉ．銅 ０．０５〜０．２１ｍｇ／ｄＬ
ｉｖ．鉄 ０．１〜０．７ｍｇ／ｄＬ
ｖ．マグネシウム １８．０〜２９．２ｍｇ／ｄＬ
ｖｉ．マンガン １．０〜９．２マイクログラム／ｄＬ
ｖｉｉ．リン ２００．０〜３０５．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉｉ．カリウム １９０．０〜２１８．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｘ．ナトリウム ７５〜９６ｍｇ／ｄＬ
ｘ．亜鉛 ２．０〜３．９６ｍｇ／ｄＬ
ｂ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）およびＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）
ｉ．カルシウム ２００．０〜２９０ｍｇ／ｄＬ
ｉｉ．塩化物 １７．５〜４７．５ｍｇ／ｄＬ
ｉｉｉ．銅 ０．０２５〜０．１ｍｇ／ｄＬ
ｉｖ．鉄 ０．０５〜０．２５ｍｇ／ｄＬ
ｖ．マグネシウム ９．０〜１４．６ｍｇ／ｄＬ
ｖｉ．マンガン ０．５〜４．６マイクログラム／ｄＬ
ｖｉｉ．リン １００．０〜１５０．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉｉ．カリウム ９５．０〜１４１．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｘ．ナトリウム ３７．５〜６０．８ｍｇ／ｄＬ
ｘ．亜鉛 １．０〜１．９８ｍｇ／ｄＬ
ｃ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）はさらに、下記の配合物を用いて製造する：
ｉ．カルシウム ２５０．０〜４２５．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｉ．塩化物 １５〜７５．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｉｉ．銅 ０．０５〜０．２１ｍｇ／ｄＬ
ｉｖ．鉄 ０．１〜０．５ｍｇ／ｄＬ
ｖ．マグネシウム １０．０〜２５．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉ．マンガン １．０〜９．２マイクログラム／ｄＬ
ｖｉｉ．リン １２５．０〜２２５．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉｉ．カリウム ６０．０〜１０５．０ｍｇ／ｄＬ
ｉｘ．ナトリウム ５０．０〜９０ｍｇ／ｄＬ
ｘ．亜鉛 ２．０〜３．９６ｍｇ／ｄＬ
１５．最終バルクを５０〜５５℃に加熱し、ミネラルを最終バルク中で混合した。
１６．ミネラルを混合した後に、製品をタンク中で低温殺菌した。タンクにジャケットをかぶせ、熱グリコールをタンクを加熱するために使用した。以下のパラメーターに従った：
ａ．製品温度を６６℃以上とした；
ｂ．製品上の気温を６９℃以上とした；および
ｃ．製品を最低３０分間、低温殺菌した。
１７．製品温度を、ジャケットをかぶせたタンク中で、冷グリコール（cold glycol）を用いて、２〜８℃にした。
１８．製品を、クラス１０，０００クリーンルーム中でＷａｔｓｏｎ−Ｍａｒｌｏｗ社製充填機を使用してボトルの中に充填した。充填サイズは以下の通りとした：
ａ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）１０ｍＬ
ｂ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）２０ｍＬ
ｃ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）１００ｍＬ
ｄ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）１５ｍＬ
ｅ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）３０ｍＬ
ｆ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）２０ｍＬ
ｇ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）４０ｍＬ
ｈ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）２５ｍＬ
ｉ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）５０ｍＬ。
１９．充填が完了したら、ボトルを以下のように使用した：
ａ．生物汚染度サンプル−充填作業の始め、中間および終わりから各２本のボトル、合計６本のボトルを試験のために採取し；
ｂ．栄養サンプル−充填作業の始め、中間および終わりから各１本のボトル、合計３本のボトルを試験のために採取し；且つ
ｃ．保持サンプル− １２０ｍＬの製品を保持した。
２０．分析を、下記に対し、生物汚染度サンプルについて行った：
ａ．総好気性数 ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ；
ｂ．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ ＜１０コロニー形成単位／ｍＬ；
ｃ．Ｅ．ｃｏｌｉ ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｄ．大腸菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｅ．シュードモナス ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｆ．サルモネラ菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｇ．ブドウ球菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｈ．酵母菌 ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ；および
ｉ．カビ ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ。
２１．以下の栄養分析を進めた。
ａ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）またはＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）
ｉ．総カロリー １．３５〜１．５５カロリー／ｍＬ
ｉｉ．タンパク質 ５．５〜６．５ｇ／ｄＬ
ｉｉｉ．脂肪 ８．５〜９．５ｇ／ｄＬ
ｉｖ．ラクトース ７．０〜１２．０ｇ／ｄＬ
ｖ．カルシウム ４００．０〜５５０．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉ．塩化物 ３５〜９５．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉ．銅 ０．０５〜０．２１ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉｉ．鉄 ０．１〜０．７ｍｇ／ｄＬ
ｉｘ．マグネシウム １８．０〜２９．２ｍｇ／ｄＬ
ｘ．マンガン １．０〜９．２マイクログラム／ｄＬ
ｘｉ．リン ２００．０〜３０５．０ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｉ．カリウム １９０．０〜２１８．０ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｉｉ．ナトリウム ７５〜９６ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｖ．亜鉛 ２．０〜３．９６ｍｇ／ｄＬ
ｂ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）またはＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）
ｉ．総カロリー １．３５〜１．５５カロリー／ｍＬ
ｉｉ．タンパク質 ５．５〜６．５ｇ／ｄＬ
ｉｉｉ．脂肪 ８．５〜９．５ｇ／ｄＬ
ｉｖ．ラクトース ７．０〜１２．０ｇ／ｄＬ
ｖ．カルシウム ２００．０〜２７５ｍｇ／ｄＬ
ｖｉ．塩化物 １７．５〜４７．５ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉ．銅 ０．０２５〜０．１ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉｉ．鉄 ０．０５〜０．２５ｍｇ／ｄＬ
ｉｘ．マグネシウム ９．０〜１４．６ｍｇ／ｄＬ
ｘ．マンガン ０．５〜４．６マイクログラム／ｄＬ
ｘｉ．リン １００．０〜１５０．０ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｉ．カリウム ９５．０〜１４１．０ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｉｉ．ナトリウム ３７．５〜６０．８ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｖ．亜鉛 １．０〜１．９８ｍｇ／ｄＬ
ｃ．ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）も以下の配合物を用いて製造する：
ｉ．総カロリー １．３５〜１．５５カロリー／ｍＬ
ｉｉ．タンパク質 ５．５〜６．５ｇ／ｄＬ
ｉｉｉ．脂肪 ８．５〜９．５ｇ／ｄＬ
ｉｖ．ラクトース ７．０〜１２．０ｇ／ｄＬ
ｖ．カルシウム ２５０．０〜４２５．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉ．塩化物 ３５〜７５．０ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉ．銅 ０．０５〜０．２１ｍｇ／ｄＬ
ｖｉｉｉ．鉄 ０．１〜０．５ｍｇ／ｄＬ
ｉｘ．マグネシウム １０．０〜２５．０ｍｇ／ｄＬ
ｘ．マンガン １．０〜９．２マイクログラム／ｄＬ
ｘｉ．リン １２５．０〜２２５．０ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｉ．カリウム １９０．０〜２１８．０ｍｇ／ｄＬ
ｘｉｉｉ．ナトリウム ５０〜９０ｍｇ／ｄＬ
亜鉛 ２．０〜３．９６ｍｇ／ｄＬ
２２．栄養分析が完了したら、ラベルを、研究所からの実際の値を用いて作った。一般に、食品についての通常の手順はラベルに平均値を載せることである。しかしながら、これらのＰｒｏｌａｃｔ製品は、各ボトル中に具体的にあるものを示す。
２３．製品を、ドライアイス上の断熱クーラーで顧客に発送した。発送のために、ドライアイスの代わりに冷却台も使用することができる。

実施例２．ヒト乳強化剤をベースとする様々な種類のＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）ヒト乳製品の生産および組成物
例えば実施例１で既に記載したようにして生産したヒト乳強化剤（ＨＭＦ）を、生ヒト乳（例えば未熟乳児の母親からの乳）と様々な濃度で混合した。母親自身の乳の栄養含有量および乳児の必要性に依存して、ＨＭＦを様々な比で混合することができる。ＰＲＯＬＡＣＴ＋４（商標）は、２０％のＨＭＦに対して約８０％の生乳の比で混合することを意味する組成物である。ＰＲＯＬＡＣＴ＋６（商標）は、約７０％の生乳および３０％のＨＭＦの比で混合することを意味する組成物である。ＰＲＯＬＡＣＴ＋８（商標）は、約６０％の生乳および４０％のＨＭＦの比で混合することを意味する組成物である。ＰＲＯＬＡＣＴ＋１０（商標）は、約５０％の生乳および５０％のＨＭＦの比で混合することを意味する。混合は、ＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）の機関においてではなく顧客が行った。下記の表は、生乳中、および生乳と様々な比で混合した４種のＰＲＯＬＡＣＴＰＬＵＳ（商標）組成物中の栄養素の例示的な栄養比較を示す。

実施例３．規格化ヒト乳配合物の生産および組成物
ＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＮＥＯ２０（商標）は、以下の段階を用いて生産した規格化ヒト乳配合物である。加工はクラス１００，０００のクリーンルーム（ＩＳＯクラス８）で行い、充填はクラス１０，０００のクリーンルーム（ＩＳＯクラス７）で行った：
１．ドナー乳をプールした。
２．サンプルを、以下のウイルスの試験用のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のために採
取した：
ａ．ＨＩＶ−１
ｂ．ＨＢＶ−Ｂ型肝炎
ｃ．ＨＣＶ−Ｃ型肝炎
３．ドナー乳を、２００ミクロンのスクリーンを通してろ過した。
４．全乳を限外ろ過した。この段階により、全乳から水をろ過して取り除いた。この水を透過液と呼んだ。この段階中の最終濃度を１．２〜１．３％とした。
５．限外ろ過プロセス中にフィルター上に捕捉されたあらゆるタンパク質を回収するために、フィルターを、透過液を使用して後洗浄した。後洗浄の溶液を、タンパク質濃度が１．２〜１．５％となるまで濃縮全乳に添加した。
６．バルク配合中、カロリーを適正な目標値まで増加させるために、後洗浄の溶液を添加した後に、先の強化剤ロット由来のクリームを濃縮全乳に添加した。この時点で製品は、
ａ．脂肪 ３．５〜５．５％；
ｂ．タンパク質 １．１〜１．３％；および
ｃ．ラクトース ８〜１０．５％であった。
７．次に、製品をタンク中で低温殺菌した。タンクにジャケットをかぶせ、熱いグリコールを、タンクを加熱するために使用した。以下のパラメーターに従った：
ａ．製品温度を６３℃以上とした；
ｂ．製品上の気温を６６℃以上とした；および
ｃ．製品を最低３０分間、低温殺菌した。
８．製品温度を、ジャケットをかぶせたタンク中で、冷グリコールを用いて、２〜８℃にした。
９．製品を、クラス１０，０００クリーンルーム中でＷａｔｓｏｎ−Ｍａｒｌｏｗ社製充填機を使用してボトルの中に充填した。充填サイズは以下の通りとした：
ａ．ＮＥＯ２０（商標）３０ｍＬ；
ｂ．ＮＥＯ２０（商標）４０ｍＬ；
ｃ．ＮＥＯ２０（商標）５０ｍＬ；
ｄ．ＮＥＯ２０（商標）１４８ｍＬ；および
ｅ．ＮＥＯ２０（商標）２００ｍＬ。
１０．充填が完了したら、ボトルを以下の試験のために採取した：
ａ．生物汚染度サンプル−充填作業の始め、中間および終わりから各２本のボトル、合計６本のボトルを採取し；
ｂ．栄養サンプル−充填作業の始め、中間および終わりから各１本のボトル、合計３本のボトルを採取し；且つ
ｃ．保持サンプル− １２０ｍＬの製品を保持した。
１１．以下のパラメーターを生物汚染度サンプルで試験した：
ａ．総好気性数 ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ；
ｂ．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ ＜１０コロニー形成単位／ｍＬ；
ｃ．Ｅ．ｃｏｌｉ ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｄ．大腸菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｅ．シュードモナス ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｆ．サルモネラ菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｇ．ブドウ球菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｈ．酵母菌 ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ；および
ｉ．カビ ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ。
１２．栄養分析を、すべての充填サイズのＮＥＯ２０（商標）について進めた。濃度値を以下の範囲とした：
ｉ．総カロリー ０．６９〜０．７４カロリー／ｍＬ
ｉｉ．タンパク質 １．１〜１．３ｇ／ｄＬ；
ｉｉｉ．脂肪 ３．５〜５．５ｇ／ｄＬ；および
ｉｖ．ラクトース ８．０〜１０．５ｇ／ｄＬ。
１３．栄養分析が完了したら、ラベルを、研究所からの実際の値を用いて作った。一般に、食品についての通常の手順はラベルに平均値を載せることである。しかしながら、これらのＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）製品は、各ボトル中に具体的にあるものを示す。
１４．製品を、ドライアイス上の断熱クーラーで顧客に発送した。ドライアイスの代わりに冷却台を発送に使用することができる。

実施例４．ミネラルを用いて強化された規格化ヒト乳の生産および組成物
ＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）はミネラルを用いて強化した規格化ヒト乳製品である。それを、クラス１００，０００のクリーンルーム（ＩＳＯ８）で以下の段階を用いて生産した。充填は１０，０００のクリーンルーム（ＩＳＯ７）で行った。
１．ドナー乳をプールした。
２．サンプルを、以下のウイルスについてのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験のために採取した：
ａ．ＨＩＶ−１
ｂ．ＨＢＶ−Ｂ型肝炎
ｃ．ＨＣＶ−Ｃ型肝炎
３．ドナー乳を、２００ミクロンのスクリーンを通してろ過した。
４．全乳を限外ろ過した。この段階で、水を全乳からろ過して取り除いた。この水を透過液と呼んだ。この段階中の最終濃度を１．２〜１．３％とした。
５．限外ろ過プロセス中にフィルター上に捕捉されたあらゆるタンパク質を回収するために、フィルターを、透過液を使用して後洗浄した。後洗浄の溶液を、タンパク質が１．２〜１．５％の範囲となるまで、濃縮全乳に添加した。
６．バルク配合中、カロリーを適正な目標値まで増加させるために、後洗浄の溶液を添加した後に、先の強化剤ロットからのクリームを濃縮全乳に添加した。この時点で製品は、
ａ．脂肪 ３．５〜５．５％；
ｂ．タンパク質 １．１〜１．３％；および
ｃ．ラクトース ８〜１０．５％であった。
７．この段階で、製品を冷凍し、さらなる処理のために後で解凍することができる。
８．始めのミネラルの分析に基づいて、どの程度のより多くのミネラルを添加する必要があるのかを計算した。最終目標値は、
ａ．カルシウム ４０〜１５０ｍｇ／ｄＬ；
ｂ．塩化物 ３０〜８０ｍｇ／ｄＬ；
ｃ．銅 ０．０５〜０．２１ｍｇ／ｄＬ；
ｄ．鉄 ０．１〜０．５ｍｇ／ｄＬ；
ｅ．マグネシウム ３．０〜１３ｍｇ／ｄＬ；
ｆ．マンガン １．０〜９．２マイクログラム／ｄＬ；
ｇ．リン １５〜６０ｍｇ／ｄＬ；
ｈ．カリウム ６０〜１２０ｍｇ／ｄＬ；
ｉ．ナトリウム ２０〜６０ｍｇ／ｄＬ；および
ｊ．亜鉛 ０．２５〜１．２ｍｇ／ｄＬとした。
９．ミネラルの添加（および製品が冷凍されていた場合には解凍）の後に、製品をタンク中で低温殺菌した。タンクにジャケットをかぶせ、熱いグリコールを、タンクを加熱するために使用した。以下のパラメーターに従った：
ａ．製品温度を６３℃以上とした；
ｂ．製品上の気温を６６℃以上とした；および
ｃ．製品を最低３０分間、低温殺菌した。
１０．製品温度を、ジャケットをかぶせたタンク中で、冷グリコールを用いて、２〜８℃にした。
１１．製品を、クラス１０，０００クリーンルーム中でＷａｔｓｏｎ−Ｍａｒｌｏｗ社製充填機を使用してボトルの中に充填した。充填サイズは以下の通りとした：
ａ．ＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）３０ｍＬ
ｂ．ＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）４０ｍＬ
ｃ．ＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）５０ｍＬ
１２．充填を行ったら、ボトルを以下のために採取した：
ａ．生物汚染度サンプル−充填作業の始め、中間および終わりから各２本のボトル、合計６本のボトルを採取し；
ｂ．栄養サンプル−充填作業の始め、中間および終わりから各１本のボトル、合計３本のボトルを採取し；且つ
ｃ．保持サンプル− １２０ｍＬの製品を保持した。
１３．下記を生物汚染度サンプルで試験した：
ａ．総好気性数 ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ；
ｂ．Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ ＜１０コロニー形成単位／ｍＬ；
ｃ．Ｅ．ｃｏｌｉ ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｄ．大腸菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｅ．シュードモナス ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｆ．サルモネラ菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｇ．ブドウ球菌 ＜１コロニー形成単位／ｍＬ；
ｈ．酵母菌 ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ；および
ｉ．カビ ＜１００コロニー形成単位／ｍＬ。
１４．栄養分析を、ミネラルを添加した後に、すべての充填サイズのＰＲＯＬＡＣＴ２０（商標）について行った。範囲は、
ｉ．総カロリー ０．６９〜０．７４カロリー／ｍＬ
ｉｉ．タンパク質 １．１〜１．３ｇ／ｄＬ；
ｉｉｉ．脂肪 ３．５〜５．５ｇ／ｄＬ；
ｉｖ．ラクトース ８．０〜１０．５ｇ／ｄＬ；
ｖ．カルシウム ４０〜１５０ｍｇ／ｄＬ；
ｖｉ．塩化物 ３０〜８０ｍｇ／ｄＬ；
ｖｉｉ．銅 ０．０５〜０．２１ｍｇ／ｄＬ；
ｖｉｉｉ．鉄 ０．１〜０．５ｍｇ／ｄＬ；
ｉｘ．マグネシウム ３．０〜１３ｍｇ／ｄＬ；
ｘ．マンガン １．０〜９．２マイクログラム／ｄＬ；
ｘｉ．リン １５〜６０ｍｇ／ｄＬ；
ｘｉｉ．カリウム ６０〜１２０ｍｇ／ｄＬ；
ｘｉｉｉ．ナトリウム ２０〜６０ｍｇ／ｄＬ；および
ｘｉｖ．亜鉛 ０．２５〜１．２ｍｇ／ｄＬとした。
１５．栄養分析が完了したら、ラベルを、研究所からの実際の値を用いて作った。一般的な食品手順では、平均値をラベル上に置く。しかしながら、これらのＰＲＯＬＡＣＴＡ（商標）製品は、各ボトル中に具体的にあるものを示す。
１６．製品を、ドライアイス上の断熱クーラーで顧客に発送した。ドライアイスの代わりに冷却台も発送に使用することができる。

実施例５．低温殺菌方法の検証
本開示の方法および組成物は、記載される組成物中の重要なタンパク質およびビタミンの望ましい活性を維持し、生物汚染度を低減する（例えばＴｅｒｐｓｔｒａら、Ｂｒｅａｓｔｆｅｅｄｉｎｇ Ｍｅｄ．２（１）：２７〜３３頁、２００７年を参照）。

Ａ．生物汚染度の検証
ヒト乳の生物汚染度に対する高温短時間（ＨＴＳＴ）低温殺菌およびバットでの低温殺菌の効果の検証を実行した。検証研究で使用した試験生物は以下の細菌およびウイルスとした：Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、およびＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、ウシウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）、ならびに仮性狂犬病ウイルス（ＰＳＲ）。ＨＩＶおよびＨＡＶは、ヒト乳の潜在的な汚染物質であることが知られており、したがって、関連性のあるウイルスとして選択した。Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）も、ヒト乳の潜在的な汚染物質であることが知ら
れている。しかしながら、このウイルスは、研究所の細胞系システムで効率的に培養することができず、そのため、特定のモデルウイルスＢＶＤＶを使用する。同じ技術的な理由から、ヒト乳の公知の潜在的な汚染物質であるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）も、ＨＢＶと同様に脂質エンベロープウイルスである一般的なモデルの仮性狂犬病ウイルスに置き換えられる。本明細書で記載された方法を用いて、以下の結果を得た。

これらのウイルスの対数低減値は、本開示の方法によって達成することができる最大の低減を表すものではない。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは熱処理に対してかなりの耐性を示すが、この生物は本開示の方法で１５の対数低減を示した。

Ｂ．乳構成成分の検証
低温殺菌の後の様々なヒト乳構成成分のレベルの検証も行った。

免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）および分泌型ＩｇＡ（ｓ［ＩｇＡ_２］）はサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて、ヒト乳サンプルで定量化した。本明細書で特徴とされるＨＴＳＴプロセスを用いた低温殺菌の後で、ＩｇＡ濃度は、未処理のヒト乳サンプルの対応する値と比較して、平均で約２７％下がり（例えば約７〜約４７％の範囲）、分泌型ＩｇＡレベルは平均で１７％下がった（例えば約７〜約２７％の範囲）。

リゾチーム活性は、基質としてミクロコッカス・リソデイクティカス（Micrococcus lysodeikticus）懸濁液を用いたマイクロタイターアッセイにより決定した。低温殺菌後のヒト乳中のリゾチーム活性は約２２，０００ＩＵ／ｍＬであり、これは生ヒト乳中の初期活性（３９，０００ＩＵ／ｍＬ）の５７％（例えば約４７〜約６７％またはそれ以上の範囲）であった。

ラクトフェリン濃度をＥＬＩＳＡ法により決定した。本開示の方法を用いた低温殺菌後のヒト乳のラクトフェリン含有量は約０．０３３ｇ／１００ｍＬ、生ヒト乳中の初期濃度（０．２４ｇ／１００ｍＬ）の約１４％（例えば約４〜２４％の範囲）であった。

ビタミン分析は，有効化ＨＰＬＣ法を用いて行った。ビタミンＡ、ビタミンＣ、ならびにα−、γ−およびδ−トコフェロールのレベルは、低温殺菌後も変化がなかった。ヒト乳のビタミンＢ６含有量は、８．８μｇ／１００ｍＬの初期濃度の約８９％である約７．８μｇ／１００ｍＬと、わずかに減少した。これらの結果を表３に示す。

本明細書に記載される本発明の他の変形および実施形態は、本発明の範囲または下記の請求項の精神から逸脱することなく、当業者らにとっては明白であろう。

Claims (14)

1. （ａ）一以上のウイルス、細菌及び／又は薬物についてヒト乳をスクリーニングする段階；
   （ｂ）乳をろ過する段階；
   （ｃ）乳を熱処理する段階；
   （ｄ）乳を、クリームおよびスキムに分離する段階；
   （ｅ）クリームの一部分をスキムに添加する段階；ならびに
   （ｆ）低温殺菌する段階
   を含み、段階（ｆ）の後に得られる組成物が、３５〜８５ｍｇ／ｍＬのタンパク質、６０〜１１０ｍｇ／ｍＬの脂肪、および７０〜１２０ｍｇ／ｍＬの炭水化物を含む、低温殺菌ヒト乳組成物を得るための方法。
2. 前記熱処理する段階が、６３℃以上で３０分間、乳を処理することを含む、請求項１に記載の方法。
3. 段階（ｄ）の後にフィルターを通してスキムをろ過する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
4. 乳が、段階（ｂ）で２００ミクロンのスクリーンを通してろ過される、請求項１に記載の方法。
5. 段階（ｄ）の後に、クリームを分離器に通す段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記スキムをろ過する段階が、スキムから水をろ過して取り除くことを含む、請求項３に記載の方法。
7. フィルターを洗浄して後洗浄の溶液を得る段階をさらに含む、請求項３に記載の方法。
8. スキムに後洗浄の溶液を添加する段階をさらに含む、請求項４に記載の方法。
9. 段階（ｅ）の後に得られる組成物の一部分についてミネラル分析を実行する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
10. カルシウム、塩化物、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、リン、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛よりなる群から選択される一以上のミネラルを、段階（ｅ）の後に得られる組成物に添加する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
11. 段階（ｆ）の後に前記組成物を冷却する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
12. 段階（ｆ）の後に前記組成物の一部分について生物学的試験を実行する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
13. 段階（ｆ）の後に前記組成物の一部分について栄養試験を実行する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。
14. 段階（ａ）のヒト乳が、プールされたヒト乳を含む、請求項１に記載の方法。

Images