JP5726535B2 - A glucosinolate-containing juice composition derived from a cruciferous plant and a method for producing the same - Google Patents

A glucosinolate-containing juice composition derived from a cruciferous plant and a method for producing the same Download PDF

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    • A23L2/02Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation containing fruit or vegetable juices

Description

本発明は、アブラナ科植物由来のグルコシノレート含有搾汁組成物とその製造方法に関する。   The present invention relates to a glucosinolate-containing juice composition derived from a cruciferous plant and a method for producing the same.

キャベツに代表されるアブラナ科の植物は栄養価が高いことで知られ、各種料理に使用されるほか、粉砕や搾汁などにより飲料に加工され広く食卓に供されている。よく食されているアブラナ科植物の例としては、キャベツ、ブロッコリー、ダイコン、白菜、わさびなどがあり、そのほか青汁原料として使用されているケールなどが挙げられる。またアブラナ科植物は特有の成分としてグルコシノレート類(以下GSLと略す)を含んでおり、健康機能性を有する植物として近年注目を浴びている。   Cruciferous plants represented by cabbage are known for their high nutritional value and are used in various dishes, and are processed into beverages by crushing and squeezing and are widely used on the table. Examples of cruciferous plants that are often eaten include cabbage, broccoli, radish, Chinese cabbage, wasabi, and kale used as a green juice ingredient. Brassicaceae plants contain glucosinolates (hereinafter abbreviated as GSL) as unique components, and have recently attracted attention as plants having health functions.

一般的に野菜を飲料に加工する場合の方法として、野菜をそのまま粉砕する方法が知られている。この方法は野菜を丸ごと飲料に加工できるという利点があるが、一方で食物繊維などの不溶性成分が存在するため、飲食時にざらつきを感じたり、沈殿を生じやすいなどの欠点が存在する。   In general, as a method for processing vegetables into beverages, a method of pulverizing vegetables as they are is known. This method has the advantage that whole vegetables can be processed into beverages. However, since there are insoluble components such as dietary fibers, there are drawbacks such as feeling rough and causing precipitation during eating and drinking.

この欠点を解消する方法として、野菜の不溶性の部分を取り除きながら飲料に加工する搾汁という方法がある。搾汁という方法を用いれば不溶性の繊維分などは搾汁粕として除去されるため、口当たりがよく滑らかで、沈殿を生じにくい飲料を造ることが可能である。   As a method for eliminating this disadvantage, there is a method called squeezing that is processed into a beverage while removing insoluble portions of vegetables. If the method of squeezing is used, the insoluble fiber and the like are removed as squeezed koji, so that it is possible to make a beverage that is smooth and does not easily precipitate.

しかし、植物を生のまま搾汁すると植物内の各種酵素による反応が進行し、凝集、変色、分離などが起こる他、植物に含まれている各種栄養成分の分解が起こることが知られている。例えば特許文献1には、ブランチングを行わないで搾汁した場合、植物中から放出される酵素が反応することにより引き起こされる変質、褐変、分離、凝集によって味や口当たりが悪くなることが多い旨が記載されている。特に、アブラナ科植物を搾汁した場合は、分離、凝集、変色や内在性酵素によるビタミンC、GSLの分解が生じると共に、辛味、渋味、苦味などの不快味や青臭いなどの不快臭が生じるため、生のまま搾汁することは栄養面、香味面でデメリットがある。   However, it is known that when a plant is squeezed raw, reactions by various enzymes in the plant proceed, causing aggregation, discoloration, separation, etc., and decomposition of various nutrients contained in the plant. . For example, in Patent Document 1, when squeezing without blanching, taste and mouthfeel often deteriorate due to alteration, browning, separation, and aggregation caused by the reaction of enzymes released from plants. Is described. In particular, when cruciferous plants are squeezed, separation, aggregation, discoloration and decomposition of vitamin C and GSL by endogenous enzymes occur, and unpleasant tastes such as pungent taste, astringency and bitterness, and unpleasant odors such as blue odor are produced. Therefore, squeezing raw juice has disadvantages in terms of nutrition and flavor.

植物の持つ栄養価を分解させずに食品中に多く存在させるための方法としては、搾汁前の工程でのブランチングによる加熱処理が挙げられる。例えば特許文献2では、アブラナ科の野菜を細断処理する前に、品温が90℃〜95℃の範囲に到達後、約5分〜20分間蒸し、その後、細断処理及び搾汁を行い、得られた搾汁液を、少なくとも1種以上の無機陰イオンと少なくとも1種以上の有機酸とが混在してイオン結合してなる構造を備えた陰イオン交換体を用いて接触処理することを特徴とするアブラナ科野菜の処理方法が開示されている。特許文献3では、野菜を破砕及び/又は磨砕する細断化工程と、細断化した野菜を搾汁する搾汁工程からなる野菜汁の製造方法において、細断化後又は細断化と同時に65℃〜95℃の温度で達温から5分以内、野菜を加熱処理することを特徴とする野菜汁の製造方法が開示されている。また蒸気による加熱技術としては特許文献4があり、野菜類を加熱及び/または加熱殺菌するにあたり、あらかじめ前記野菜類に、60〜90℃の蒸気を直接接触させることを特徴とする野菜類の加熱処理方法が開示されている。   As a method for causing a plant to have a large amount of nutritional value without decomposing it, heat treatment by blanching in the step before squeezing can be mentioned. For example, in patent document 2, before shredding the cruciferous vegetables, after the product temperature reaches the range of 90 ° C. to 95 ° C., steaming is performed for about 5 minutes to 20 minutes, and then the shredding treatment and squeezing are performed. The obtained juice is subjected to contact treatment using an anion exchanger having a structure in which at least one inorganic anion and at least one organic acid are mixed and ionically bonded. A characteristic method for treating cruciferous vegetables is disclosed. In patent document 3, in the manufacturing method of vegetable juice which consists of the shredding process which crushes and / or grinds vegetables, and the squeezing process which squeezes the shredded vegetables, after shredding or shredding, At the same time, a method for producing vegetable juice is disclosed, wherein the vegetables are heat-treated at a temperature of 65 ° C. to 95 ° C. within 5 minutes from the ultimate temperature. Moreover, there exists patent document 4 as a heating technique by steam, and when heating and / or heat-sterilizing vegetables, the vegetable heating characterized by making 60-90 degreeC steam contact directly to the said vegetables beforehand. A processing method is disclosed.

一方、野菜本来の色である緑色を保ったまま加工する技術に関しても開示されている。例えば特許文献5では、洗浄した緑色植物の緑葉をアルカリ性水溶液で処理して、該緑葉に搾汁液のpHが6〜9となる量のアルカリ性水溶液を付着させた後搾汁処理を行うことを特徴とする、新鮮な緑色を呈する安定で嗜好性に優れた緑色植物の緑葉青汁の製造方法が開示さている。また、特許文献6では、緑色野菜をブランチング処理した後サイクロデキストリン溶液に浸漬することを特徴とする保存中の退色を防止した緑色野菜の製造方法が開示されている。特許文献7では、緑色野菜を酢酸ナトリウム、アミノ酸及び酢酸ナトリウム以外の有機酸塩を含有し、pHが6.0〜7.0の水溶液中でブランチングする第一工程、次いで、酢酸ナトリウム及び糖類を含有し、さらに有機酸及び/または酢酸ナトリウム以外の有機酸を含有する、pHが4.5〜6.5の水溶液中に浸漬する第二工程を含む緑色野菜の加工方法が開示されている。   On the other hand, a technique for processing while maintaining green, which is the original color of vegetables, is also disclosed. For example, in Patent Document 5, the green leaf of a washed green plant is treated with an alkaline aqueous solution, and a post-squeezing treatment is performed by attaching an alkaline aqueous solution in an amount such that the pH of the juice is 6 to 9 to the green leaf. The manufacturing method of the green leaf green juice of the green plant which is excellent in the stable and excellent palatability which exhibits fresh green is disclosed. Patent Document 6 discloses a method for producing green vegetables that prevents fading during storage, characterized in that the green vegetables are blanched and then immersed in a cyclodextrin solution. In Patent Document 7, the first step of branching green vegetables in an aqueous solution containing sodium acetate, an amino acid and an organic acid salt other than sodium acetate and having a pH of 6.0 to 7.0, then sodium acetate and sugars And a green vegetable processing method including a second step of immersing in an aqueous solution having an organic acid and / or an organic acid other than sodium acetate and having a pH of 4.5 to 6.5. .

特許第3541170号Japanese Patent No. 3541170 特許第3676178号Patent No. 3676178 特開平10−76号公報JP-A-10-76 特開平11−155513号公報JP-A-11-155513 特開平11−75791号公報Japanese Patent Laid-Open No. 11-75791 特開2000−270765号公報JP 2000-270765 A 特開2006−158293号公報JP 2006-158293 A

前記したように、アブラナ科植物は特有の成分としてGSLを含有しているが、GSLは搾汁時に分解することが知られている。しかし、現在までに、搾汁時のGSLの分解を抑制したり、GSLを豊富に含む搾汁組成物を得るとの観点で開発された技術についての報告はない。そこで本発明は、GSLを含むことが知られるアブラナ科植物において、搾汁処理の際のGSLの分解を抑制することで、GSLを豊富に含み、さらにビタミンC、色調、香味などのバランスに優れた搾汁組成物を製造する方法を提供することをその課題とするものである。   As described above, cruciferous plants contain GSL as a unique component, but GSL is known to decompose during squeezing. However, to date, there has been no report on a technique developed from the viewpoint of suppressing the decomposition of GSL during squeezing or obtaining a squeezed composition containing abundant GSL. Therefore, the present invention is a cruciferous plant known to contain GSL. By suppressing the degradation of GSL during squeezing treatment, the present invention contains abundant GSL and is excellent in balance of vitamin C, color tone, flavor and the like. It is an object of the present invention to provide a method for producing a squeezed juice composition.

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、アブラナ科植物を一定条件下で加熱処理をすることで搾汁処理の際のGSLの分解を防ぐことができると共に、そのような加熱処理後のアブラナ科植物から得られる搾汁液が、色調、香味に優れ、意外なことにビタミンC含量も高いことを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors can prevent the degradation of GSL during squeezing treatment by heat-treating cruciferous plants under a certain condition, The juice obtained from such a cruciferous plant after heat treatment was found to be excellent in color and flavor, and surprisingly high in vitamin C content, and the present invention was completed.

すなわち、本願発明は以下の発明を包含するものである。
(1)以下のステップ(a)および(b):
(a)アブラナ科植物を、常圧下、下記式(1)又は(2)
[数1]
1≦t<3のとき、−5t+85≦T<100 ……式(1)
[式中、Tは加熱温度(℃)であり、tは加熱時間(分)である]
[数2]
3≦t≦10のとき、70≦T<100 ……式(2)
[式中、Tは加熱温度(℃)であり、tは加熱時間(分)である]
を満たす加熱条件にて加熱処理するステップ、
(b)加熱処理したアブラナ科植物を搾汁処理して搾汁液を得るステッ

を含むことを特徴とするグルコシノレートを含有する搾汁組成物の製造
方法。
That is, the present invention includes the following inventions.
(1) The following steps (a) and (b):
(A) A cruciferous plant is represented by the following formula (1) or (2) under normal pressure:
[Equation 1]
When 1 ≦ t <3, −5t + 85 ≦ T <100 Equation (1)
[Wherein T is the heating temperature (° C.) and t is the heating time (minutes)]
[Equation 2]
When 3 ≦ t ≦ 10, 70 ≦ T <100 (2)
[Wherein T is the heating temperature (° C.) and t is the heating time (minutes)]
Heat-treating under heating conditions that satisfy
(B) Step for obtaining a juice by squeezing a heat-treated cruciferous plant
A method for producing a juice composition containing glucosinolate, comprising:

(2)加熱時間は1分以上5分以下である(1)記載の方法。
(3)加熱処理を水中で行う(1)または(2)記載の方法。
(4)加熱処理をpH6〜8の環境下で行う(1)〜(3)のいずれか1
記載の方法。
(2) The method according to (1), wherein the heating time is from 1 minute to 5 minutes.
(3) The method according to (1) or (2), wherein the heat treatment is performed in water.
(4) Any one of (1) to (3) is performed in an environment of pH 6-8.
The method described.

(5)更に、次のステップ:
(c)ステップ(b)で得た搾汁液を乾燥処理するステップ
を含む(1)〜(4)のいずれか1記載の方法。
(6)乾燥処理が噴霧乾燥である(5)記載の方法。
(7)アブラナ科植物が播種後55日以上経過したケールである(1)〜
(6)のいずれか1記載の方法。
(5) Further next steps:
(C) The method of any one of (1)-(4) including the step of drying the juice obtained in step (b).
(6) The method according to (5), wherein the drying treatment is spray drying.
(7) It is a kale that has passed more than 55 days after sowing.
The method according to any one of (6).

(8)アブラナ科植物が播種後75日以上経過したケールである(1)〜
(6)のいずれか1記載の方法。
(9)ケールが春蒔きケールである(7)又は(8)の方法。
(10)(1)〜(9)のいずれか1記載の方法により製造される搾汁組
成物。
(8) The cruciferous plant is a kale that has passed 75 days or more after sowing (1) to
The method according to any one of (6).
(9) The method according to (7) or (8), wherein the kale is a spring-fired kale.
(10) A squeeze composition produced by the method according to any one of (1) to (9).

(11)グルコシノレートを15μg/100mg以上含有する(10)
記載の搾汁組成物。
(12)ビタミンCを9mg/g以上含有する(10)の搾汁組成物。
(11) Containing at least 15 μg / 100 mg of glucosinolate (10)
The juice composition described.
(12) The squeezed composition of (10) containing 9 mg / g or more of vitamin C.

(13)アブラナ科植物を、常圧下、下記式(1)又は(2)
[数3]
1≦t<3のとき、−5t+85≦T<100 ……式(1)
[式中、Tは加熱温度(℃)であり、tは加熱時間(分)である]
[数4]
3≦t≦10のとき、70≦T<100 ……式(2)
[式中、Tは加熱温度(℃)であり、tは加熱時間(分)である]
を満たす加熱条件にて加熱処理することを特徴とする、搾汁処理の際の
アブラナ科植物中のグルコシノレートの分解を抑制する方法。
(13) The Brassicaceae plant is expressed under the following formula (1) or (2) under normal pressure:
[Equation 3]
When 1 ≦ t <3, −5t + 85 ≦ T <100 Equation (1)
[Wherein T is the heating temperature (° C.) and t is the heating time (minutes)]
[Equation 4]
When 3 ≦ t ≦ 10, 70 ≦ T <100 (2)
[Wherein T is the heating temperature (° C.) and t is the heating time (minutes)]
A method for suppressing the decomposition of glucosinolate in a cruciferous plant during squeezing treatment, wherein the heat treatment is performed under a heating condition that satisfies the conditions.

(14)加熱時間は1分以上5分以下である(13)の方法。
(15)加熱処理を水中で行う(13)又は(14)の方法。
(14) The method according to (13), wherein the heating time is from 1 minute to 5 minutes.
(15) The method according to (13) or (14), wherein the heat treatment is performed in water.

本発明によれば、アブラナ科植物からGSLを豊富に含む搾汁組成物を製造する方法を提供することができる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the method of manufacturing the squeeze composition which contains GSL abundantly from a cruciferous plant can be provided.

本発明により製造される搾汁組成物は、GSLを豊富に含む他、例えばビタミンCを豊富に含み、色調、香味などにも優れているという利点を有する。   The juice composition produced according to the present invention is advantageous in that it contains not only abundant GSL but also abundant vitamin C, for example, and is excellent in color tone, flavor and the like.

本発明の方法により製造した青汁中のGSL類のそれぞれを定量した結果を示す図面。なお、図中の略記はそれぞれ以下の通りである。1mGB 1−メトキシグルコブラシキン;4mGB 4−メトキシグルコブラシキン;GB グルコブラシキン;GN グルコナピン;GR グルコラファニン;SG シニグリン;PG プロゴイトリン;GI グルコイベリン。Drawing which shows the result of having quantified each of GSLs in the green juice manufactured by the method of this invention. The abbreviations in the figure are as follows. 1 mGB 1-methoxyglucobrushkin; 4 mGB 4-methoxyglucobrushkin; GB glucobrushkin; GN gluconapine; GR glucoraphanin; SG sinigrin; PG progoitrin; GI glucoivelin. 青汁の不快味に及ぼす加熱温度及び加熱時間の影響を示す図面。Drawing which shows the influence of the heating temperature and heating time which have on the unpleasant taste of green juice. 青汁中の総GSL量に及ぼす加熱処理時のpHの影響を示す図面。Drawing which shows the influence of pH at the time of heat processing which affects the total amount of GSL in green juice. 青汁中のビタミンC量に及ぼす加熱処理時のpHの影響を示す図面。Drawing which shows the influence of pH at the time of heat processing which affects the amount of vitamin C in green juice. 青汁の色調に及ぼす加熱処理時のpHの影響を示す図面。Drawing which shows the influence of pH at the time of heat processing which affects the color tone of green juice. 青汁の渋味に及ぼす加熱処理時のpHの影響を示す図面。Drawing which shows the influence of pH at the time of heat processing which acts on the astringency of green juice. 青汁の不快味に及ぼす加熱処理時のpHの影響を示す図面。Drawing which shows the influence of pH at the time of heat processing which has on the unpleasant taste of green juice. ケール播種後日数とGSL含量の関係を示す。なお、図中の略記は、HCが播種後日数、mGB1が1−メトキシグルコブラシキンを示す以外は、図1と同じである。The relationship between the number of days after kale sowing and the GSL content is shown. The abbreviations in the figure are the same as those in FIG. 1 except that HC represents the number of days after sowing and mGB1 represents 1-methoxyglucobraskin.

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明は、アブラナ科植物からGSLを含む搾汁組成物を製造する方法(以下、単に本発明の製造方法ともいう)である。本発明の製造方法は、下記で詳述するように、搾汁処理の際のアブラナ科植物中のグルコシノレートの分解を抑制するための処理を含んでいる。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The present invention is a method for producing a juice composition containing GSL from a cruciferous plant (hereinafter also simply referred to as the production method of the present invention). As described in detail below, the production method of the present invention includes a treatment for suppressing the decomposition of glucosinolate in the cruciferous plant during the squeeze treatment.

具体的に、本発明の製造方法は、(a)アブラナ科植物を、常圧下、上記式(1)又は(2)を満たす加熱条件にて加熱処理するステップと、(b)加熱処理したアブラナ科植物を搾汁処理して搾汁液を得るステップとを含んでいる。   Specifically, the production method of the present invention includes (a) a step of heat-treating a Brassicaceae plant under normal pressure under a heating condition that satisfies the above formula (1) or (2), and (b) a heat-treated rapeseed. And squeezing a family plant to obtain a juice.

本発明において、出発原料として使用することができるアブラナ科植物としては、GSLを含むことが知られ、かつ一般に食されるものであれば特に制限はなく、例えば、ダイコン、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ、メキャベツ、白菜、かぶ、わさび、タイサイ、ミズナ、スグキナ、小松菜、からし菜、ケールなどが挙げられる。これらのアブラナ科植物は1種のみを用いてもよいし、複数種を組合せて用いてもよい。   In the present invention, the cruciferous plant that can be used as a starting material is not particularly limited as long as it is known to contain GSL and is generally eaten. For example, radish, broccoli, cauliflower, cabbage, Examples include me cabbage, Chinese cabbage, turnip, wasabi, Taisai, Mizuna, Sugkina, Komatsuna, mustard greens, and kale. These cruciferous plants may be used alone or in combination of two or more.

上記アブラナ科植物は、その植物体全体を原料として使用してもよいし、その一部分、例えば葉、茎、根、花蕾などを使用してもよい。   The cruciferous plant may use the whole plant as a raw material, or a part thereof, for example, a leaf, a stem, a root, or a flower bud.

本発明の製造方法において、アブラナ科植物としてケールを使用することが好ましい。ケールは、品種に応じてGSL含量が異なるが、一般的には種子の状態でGSL含量が最も多く、発芽に伴ってGSL含量が減少する。驚くべきことに、本発明者らは今回、播種後55日を経過するとGSL含量が安定し、播種後75日を経過するとGSL含量はさらに増加することを見出した。したがって、GSL含量が豊富になる播種後55日以上、より好ましくは播種後75日以上経過したケールを使用することが特に好ましい。   In the production method of the present invention, kale is preferably used as a cruciferous plant. Kale has a different GSL content depending on the variety, but generally has the highest GSL content in the seed state, and the GSL content decreases with germination. Surprisingly, the present inventors have now found that the GSL content is stabilized 55 days after sowing, and further increased 75 days after sowing. Therefore, it is particularly preferable to use a kale that has become rich in GSL content for 55 days or more after sowing, more preferably 75 days or more after sowing.

ケールはまた、その播種時期により春蒔きと秋蒔きに区別することができる。播種する時期はその土地の気候に左右されるが、春蒔きケールとは1〜2月にかけて播種され5月〜7月にかけて収穫されるケールをいい、秋蒔きケールとは9〜10月にかけて播種され12〜3月に収穫されるケールをいう。春蒔きケールは収穫量が多いという特徴を有し、秋蒔きケールは糖度がより高いというという特徴を有している。これに加え、本発明者らは今回、春蒔きケールは秋蒔きケールよりGSL含量が高いことを見出した。したがって、本発明において春蒔きケールを使用することが特に好ましい。   Kale can also be differentiated between spring and autumn sowing according to the sowing time. The time of sowing depends on the climate of the land, but spring-fired kale refers to kale that is sown from January to February and harvested from May to July, and autumn-fired kale is sown from September to October. The kale is harvested from December to March. Spring-fired kale is characterized by a high yield, and autumn-fired kale is characterized by a higher sugar content. In addition to this, the present inventors have now found that spring-fired kale has a higher GSL content than autumn-fired kale. Therefore, it is particularly preferable to use spring-fired kale in the present invention.

本発明の製造方法は、アブラナ科植物として上記のケールを使用する場合、ステップ(a)の加熱処理に先立ち、ケールを準備するステップを含んでもよい。具体的に前記ステップは、ケールの種子を(例えば1〜2月の間に)ケールの栽培に適した土壌に播種し、少なくとも45日、好ましくは少なくとも55日間栽培して、ケールを収穫することを含むことができる。   When using said kale as a cruciferous plant, the manufacturing method of this invention may also include the step which prepares a kale prior to the heat processing of a step (a). Specifically, the step comprises sowing the kale seeds (e.g. between 1 and 2 months) in soil suitable for kale cultivation and cultivating the kale for at least 45 days, preferably at least 55 days. Can be included.

本発明の製造方法において、ステップ(a)の加熱処理は、主に、アブラナ科植物中のミロシナーゼを失活させることを目的とする処理である。このミロシナーゼはGSLの加水分解を触媒する酵素であるため、ミロシナーゼを失活させることによってGSL分解を抑制することができる。またGSLはミロシナーゼにより加水分解されて、最終的に、香味的に好ましくないイソチオシアン酸が生成するため、ミロシナーゼの失活は目的産物である搾汁組成物の香味を改善することができるという利点もある。   In the production method of the present invention, the heat treatment in step (a) is a treatment mainly intended to inactivate myrosinase in the cruciferous plant. Since this myrosinase is an enzyme that catalyzes the hydrolysis of GSL, it is possible to suppress GSL degradation by deactivating myrosinase. In addition, GSL is hydrolyzed by myrosinase, and finally, isothiocyanic acid which is unfavorably flavored is produced. Therefore, deactivation of myrosinase has the advantage that the flavor of the juice composition which is the target product can be improved. is there.

上記ステップ(a)の加熱処理は、常圧下、上記式(1)又は(2)を満たす加熱条件で加熱処理することにより行われる。式(1)又は(2)で表される加熱条件は、本発明者によって、GSLの分解を低減すると共に、色調、香味に優れた搾汁組成物を生じさせるための加熱条件として規定されたものである。   The heat treatment in the step (a) is performed by performing a heat treatment under normal pressure and a heating condition that satisfies the above formula (1) or (2). The heating condition represented by the formula (1) or (2) was defined by the present inventor as a heating condition for reducing the decomposition of GSL and producing a juice composition excellent in color and flavor. Is.

上記加熱条件を満たす加熱条件の例示として、95℃ 1分、90℃ 1分、90℃ 2分、85℃ 2分などが挙げられる。   Examples of heating conditions that satisfy the above heating conditions include 95 ° C. for 1 minute, 90 ° C. for 1 minute, 90 ° C. for 2 minutes, 85 ° C. for 2 minutes, and the like.

また本発明者らは、驚くべきことに、GSLの分解を十分に抑制することができる条件として規定した上記条件で加熱処理したアブラナ科植物から得られる搾汁組成物が、ビタミンCを高含量で含んでいることを見出した(下記実施例参照)。これは、上記加熱条件が、ビタミンCの分解に関与する酵素を失活する一方で、加熱によるビタミンCの破壊が生じないような加熱温度、加熱時間であるように適切に選択されていることを示唆している。   In addition, the present inventors surprisingly found that a squeezed composition obtained from a cruciferous plant heat-treated under the above-mentioned conditions defined as conditions under which GSL decomposition can be sufficiently suppressed has a high content of vitamin C. (See the following examples). The heating conditions are appropriately selected so that the heating temperature and the heating time are such that the enzymes involved in the decomposition of vitamin C are inactivated while vitamin C is not destroyed by heating. It suggests.

本発明において、ステップ(a)の加熱処理を行う時間は1〜10分であれば特に制限されないが1〜5分であることが好ましい。加熱時間が1分未満である場合は、ミロシナーゼによるGSL分解を十分に抑制することができず、また加熱時間が5分を超える場合は加熱によるビタミンCの破壊が生じるからである。   In the present invention, the time for performing the heat treatment in step (a) is not particularly limited as long as it is 1 to 10 minutes, but is preferably 1 to 5 minutes. This is because when the heating time is less than 1 minute, GSL degradation by myrosinase cannot be sufficiently suppressed, and when the heating time exceeds 5 minutes, vitamin C is destroyed by heating.

本発明の製造方法において、加熱処理方法としてはアブラナ科植物を均一に加熱できる方法であればどのような方法でもよいが、水中での加熱処理(茹で処理)が好ましい。例えば蒸し処理の場合、大きな間隙に蒸気が集中する傾向があるため蒸気の当たり具合にばらつきが生じやすく、いわゆる「蒸しムラ」ができるため均一な処理が難しい。一方、水中での加熱処理(茹で処理)はアブラナ科植物全体をお湯に浸すことで均一に加熱することができるため、加熱しすぎを防ぎつつ酵素失活させるのに適している。   In the production method of the present invention, the heat treatment method may be any method as long as it can heat the cruciferous plants uniformly, but heat treatment in water (boil treatment) is preferred. For example, in the steaming process, steam tends to concentrate in a large gap, so that the degree of contact with steam is likely to vary, and so-called “steaming unevenness” is generated, and uniform processing is difficult. On the other hand, heat treatment in water (boiled treatment) can be heated uniformly by immersing the cruciferous plant in hot water, and is therefore suitable for inactivating the enzyme while preventing overheating.

アブラナ科植物を水中で加熱する場合、水の重量に対するアブラナ科植物の投入量については特に制限はなく、均一に加熱できる条件であればどのような割合でもよい。   When the cruciferous plant is heated in water, the amount of cruciferous plant input relative to the weight of water is not particularly limited, and any ratio may be used as long as it can be uniformly heated.

アブラナ科植物を水中で加熱する場合、pHは特に問わないが、酸性条件下ではクロロフィルの分解が促進されることから、pH6〜8の範囲であることがより好ましい。pHの調整は、食品加工の場で使用されかつ当業者に一般的に使用されるアルカリ製剤の添加により行えばよく、アルカリ製剤として、これに限定されるものではないがクエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウムなどを挙げることができる。   When the cruciferous plant is heated in water, the pH is not particularly limited, but the decomposition of chlorophyll is promoted under acidic conditions. The pH may be adjusted by adding an alkaline preparation used in the field of food processing and commonly used by those skilled in the art. Examples of the alkaline preparation include, but are not limited to, sodium citrate and ascorbic acid. Examples thereof include sodium, sodium lactate, calcium hydroxide, sodium hydroxide, sodium carbonate and the like.

このようにして加熱処理(ステップ(a))が行われたアブラナ科植物は、加熱処理の熱によってその緑色は徐々に退色するので、加熱処理した後は速やかに冷却することが好ましい。したがって、本発明の製造方法には、ステップ(a)の加熱処理後に、アブラナ科植物を速やかに冷却する任意のステップを含んでもよい。この冷却ステップにおける冷却方法としては、そのまま自然放冷する方法、風や冷風をあてて冷却する方法、水などの冷媒に浸して冷却する方法などの方法を利用することができ、いずれの方法を用いても構わない。   The cruciferous plants that have been heat-treated in this way (step (a)) gradually fade in color due to the heat of the heat treatment, and therefore it is preferable to cool them quickly after the heat treatment. Therefore, the production method of the present invention may include an optional step of quickly cooling the cruciferous plant after the heat treatment in step (a). As a cooling method in this cooling step, there can be used a method such as natural cooling, a method of cooling by applying wind or cold air, a method of cooling by immersing in a coolant such as water, and any of these methods can be used. You may use.

本発明の製造方法はまた、ステップ(b)の前に、細断及び/又は粉砕処理を含んでもよい。かかる処理により、搾汁処理を容易にすることができる。また、搾汁処理前の細断及び/又は粉砕処理は、搾汁処理によって得られる搾汁液のざらつき、分散性、クロロフィル含有量、β−カロテン含有量、カルシウム含有量などを改善することが期待される。   The production method of the present invention may also include a shredding and / or grinding process prior to step (b). Such a process can facilitate the squeeze process. In addition, shredding and / or pulverization before squeezing treatment is expected to improve the roughness, dispersibility, chlorophyll content, β-carotene content, calcium content, etc. of the squeezed juice obtained by squeezing treatment. Is done.

なお、クロロフィル、β−カロテン、及びカルシウムの含有量が高い搾汁液を得る場合は、細断及び/又は粉砕処理によるアブラナ科植物の粒度の他、ステップ(a)の加熱条件をも適切なものとするよう考慮すべき点に留意が必要である。   In addition, when obtaining a squeezed liquid with high content of chlorophyll, β-carotene, and calcium, in addition to the grain size of the cruciferous plant by shredding and / or grinding treatment, the heating conditions in step (a) are also appropriate. It is necessary to pay attention to the points that should be considered.

次いで加熱処理(ステップ(a))が行われたアブラナ科植物は、搾汁処理(ステップ(b))に供される。この工程での搾汁方法としては、加熱処理されたアブラナ科植物をそのまま丸ごと搾汁する方法、液と搾汁粕に分離する搾汁方法など、常法によって行えばよく、特別な方法を用いる必要はない。搾汁機としては、パルパー、スクリュープレス、フィルタープレス、デカンターなど、飲食品分野で搾汁に通常用いられるものを適宜組合せて使用することができる。   Next, the cruciferous plant that has been subjected to the heat treatment (step (a)) is subjected to a juice treatment (step (b)). As a squeezing method in this step, it may be carried out by a conventional method such as a method of squeezing the heat-treated Brassicaceae plant as it is, a method of squeezing into a liquid and a squeezed lees, and a special method is used. There is no need. As the squeezer, those normally used for squeezing such as a pulper, a screw press, a filter press, and a decanter can be used in appropriate combination.

上記のようにして搾汁された搾汁液は、本発明の搾汁組成物としてそのまま飲用に供しても問題ないが、保存性の向上のために適宜、冷凍、乾燥などの処理を行ってもよい。乾燥方法としては熱風乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥など当業者が通常用いる任意の方法を用いることができる。特に噴霧乾燥は、熱による変質が熱風乾燥に比べて小さく、また凍結乾燥に比べて乾燥処理時間が短いため、上記のように搾汁された搾汁液の乾燥方法として好ましい。   The squeezed juice squeezed as described above may be used for drinking as it is as the squeezed composition of the present invention, but may be subjected to treatment such as freezing and drying as appropriate for improving the storage stability. Good. As a drying method, any method commonly used by those skilled in the art, such as hot air drying, freeze drying, and spray drying, can be used. In particular, spray drying is preferable as a method for drying a squeezed juice squeezed as described above, because alteration due to heat is smaller than that of hot air drying and drying time is shorter than that of freeze drying.

また、乾燥前若しくは乾燥後に殺菌処理を行ってもよい。この殺菌処理としては、例えば加熱殺菌、高圧殺菌、気流式殺菌など、当業者が通常用いる任意の方法を用いることができる。   Moreover, you may sterilize before drying or after drying. As this sterilization treatment, any method commonly used by those skilled in the art, such as heat sterilization, high-pressure sterilization, and airflow sterilization, can be used.

上記のようにして製造された搾汁組成物(以下、単に本発明の組成物ともいう)は、GSLを高含量で含み、さらに香味、色調に優れ、ビタミンCをも高含量で含むものである。   The juice composition produced as described above (hereinafter also simply referred to as the composition of the present invention) contains GSL in a high content, is excellent in flavor and color, and also contains vitamin C in a high content.

以上のようにして得られる本発明の搾汁組成物には、GSLを乾燥重量で15μg/100mg以上、好ましくは100μg/100mg以上含有するものが含まれる。なお、本発明の搾汁組成物中のGSL含量は、例えばミロシナーゼ分解法、HPLCなどによって測定することができる。例えば、ミロシナーゼ分解法によってGSLを測定する場合には、試料中のGSLをミロシナーゼで完全に加水分化し、遊離したグルコースを定量することにより測定することができる。グルコース測定には市販の測定キット(例えば、グルコースCII−テストワコー(和光純薬工業(株))など)を使用することができる。   The juice composition of the present invention obtained as described above includes those containing GSL in a dry weight of 15 μg / 100 mg or more, preferably 100 μg / 100 mg or more. In addition, the GSL content in the juice composition of the present invention can be measured by, for example, a myrosinase decomposition method, HPLC, or the like. For example, when GSL is measured by the myrosinase decomposition method, it can be measured by completely hydrolyzing GSL in the sample with myrosinase and quantifying the released glucose. A commercially available measurement kit (for example, glucose CII-Test Wako (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) etc.) can be used for glucose measurement.

また、本発明の搾汁組成物には、ビタミンCを乾燥重量で9mg/g以上、好ましくは10mg/g以上含有するものが含まれる。本発明の搾汁組成物中のビタミンC含量は、食品中のビタミンC含量を測定するために標準化されている測定方法、例えばヒドラジン比色法、インドフェノール滴定法、HPLCによる手法など、当業者に周知の測定方法によって測定することができる。   In addition, the juice composition of the present invention includes those containing vitamin C in a dry weight of 9 mg / g or more, preferably 10 mg / g or more. Vitamin C content in the juice composition of the present invention can be determined by those skilled in the art such as standardized measurement methods for measuring vitamin C content in foods, such as hydrazine colorimetric method, indophenol titration method, and HPLC method. It can be measured by a well-known measurement method.

本発明の組成物にはまた、任意の分光側色計で測定した際のa値が−12より小さいものであるものが含まれる。   The composition of the present invention also includes a composition having an a value smaller than −12 when measured with an optional spectrocolorimeter.

以下、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例等に限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated concretely using an Example, this invention is not limited to these Examples.

なお、本実施例における評価方法は、以下に示す方法により行った。   In addition, the evaluation method in a present Example was performed by the method shown below.

[ 評価方法 ]
1)総GSLの測定
GSLの測定方法としては、ミロシナーゼ分解法やHPLCによる手法などがあるが、本発明においては、LC−MSによる測定を行った。具体的な方法は次の通りである。サンプル100mgを正確に測り取り、エッペンドルフ(2ml)に分取する。ジルコニアビーズ(Φ5mm)をエッペンドルフに1個ずつ入れ、これに0.1%ギ酸溶液(ギ酸0.1gを80%メタノール水溶液100mlに溶解したもの)1mlを加え、ミキサーミル(MM 301、株式会社レッチェ)により懸濁(25times/sec、5分処理)する。
[ Evaluation method ]
( 1) Measurement of total GSL As a method of measuring GSL, there are a myrosinase decomposition method and a method using HPLC. In the present invention, measurement was performed by LC-MS. The specific method is as follows. Weigh accurately 100 mg of sample and dispense into Eppendorf (2 ml). Add zirconia beads (Φ5mm) one by one in Eppendorf, add 1ml of 0.1% formic acid solution (0.1g of formic acid dissolved in 100ml of 80% methanol aqueous solution), mixer mill (MM 301, Lecce Co., Ltd.) ) (25 times / sec, treated for 5 minutes).

懸濁処理物を遠心分離処理(15,000g、10分、4℃)し、上清を800μl分取する。カラム(Sep−Pack Vac NH cartridge 3cc/500mg、日本ウォーターズ株式会社)を0.1%ギ酸溶液1mlで平衡化し、上清100μlを吸着させた後、0.1%ギ酸溶液1ml、次いでメタノール1mlでカラム洗浄を行う。The suspension treatment is centrifuged (15,000 g, 10 minutes, 4 ° C.), and 800 μl of the supernatant is collected. A column (Sep-Pack Vac NH 2 cartridge 3 cc / 500 mg, Nippon Waters Co., Ltd.) was equilibrated with 1 ml of 0.1% formic acid solution and adsorbed with 100 μl of supernatant, then 1 ml of 0.1% formic acid solution and then 1 ml of methanol. Wash the column with.

カラムに吸着している画分を5%アンモニア溶液(28%アンモニア水をメタノールで5倍希釈したもの)900μlで溶出させ、1晩減圧乾燥させる。乾燥物に0.1%ギ酸溶液200μlを加え再溶解後、ろ過(ウルトラフリー−MC、孔径0.22μm、日本ミリポア株式会社)して分析用サンプルとする。分析は、LCMS−2010EV(株式会社島津製作所)を用い、以下の条件で分析を行う。なお、GSL類の含量比較は、得られた分析データのGSLの全てのピークの合計エリア面積で行なった。また、各GSLの構成成分量が併せて必要なときは、対応する各GSLピークを求め、これを積み重ねて全ピーク量を示した。   The fraction adsorbed on the column is eluted with 900 μl of 5% ammonia solution (28% aqueous ammonia diluted 5-fold with methanol) and dried overnight under reduced pressure. 200 μl of 0.1% formic acid solution is added to the dried product and redissolved, followed by filtration (Ultrafree-MC, pore size 0.22 μm, Nihon Millipore Corporation) to obtain an analytical sample. The analysis is performed under the following conditions using LCMS-2010EV (Shimadzu Corporation). In addition, content comparison of GSLs was performed by the total area area of all the peaks of GSL of the obtained analysis data. Moreover, when the component amount of each GSL was needed together, each corresponding GSL peak was calculated | required and this was piled up and the total peak amount was shown.

<分析条件>
カラム : Develosil RPAQUEOUS AR−5
No.RPAR520150W(Φ2×150mm)
移動相A: 10mMギ酸アンモニウム水(pH3.75)
移動相B: 50%(v/v)アセトニトリル中、10mMギ酸アンモニ
ウム水 (pH3.75)
流 速 : 0.2ml/分、カラムオーブン40℃
グラジエント: min A B
0 100 0
5 100 100
30 0 100
40 0 100
60 0 100
M S : LCMS−2010EV(株式会社島津製作所)
イオン化法 : ESI
分析タイプ : スキャン/SIM
分析モード : スキャン(ネガティブ)
イベント時間 : 1秒
検出器電圧 : 1.5kV
測定開始(m/z) : 300
測定終了(m/z) : 500
測定時間 : 60分
<Analysis conditions>
Column: Develosil RPAQUEOUS AR-5
No. RPAR520150W (Φ2 × 150mm)
Mobile phase A: 10 mM ammonium formate water (pH 3.75)
Mobile phase B: 10 mM ammonium formate in 50% (v / v) acetonitrile.
Umm water (pH 3.75)
Flow rate: 0.2 ml / min, column oven 40 ° C
Gradient: min A B
0 100 0
5 100 100
30 0 100
40 0 100
60 0 100
MS: LCMS-2010EV (Shimadzu Corporation)
Ionization method: ESI
Analysis type: Scan / SIM
Analysis mode: Scan (negative)
Event time: 1 second Detector voltage: 1.5 kV
Measurement start (m / z): 300
End of measurement (m / z): 500
Measurement time: 60 minutes

(2)各GSLの定量
GSLの定量は、具体的には以下のとおり行った。サンプル(100mg前後)を正確に量り、エッペンドルフチューブ(2mL容)に分取する。ジルコニアビーズ(Φ5mm)をエッペンドルフチューブに1個ずつ入れ、0.1%ギ酸溶液(ギ酸1mLを80%メタノール水溶液1Lに混和したもの)1mLを加え、ミキサーミル(MM301、株式会社レッチェ)により懸濁(25times/sec、5分処理)する。懸濁処理物を遠心分離して(15,000g、5分、RT)試料を得た。
(2) Quantification of each GSL GSL was specifically quantified as follows. A sample (around 100 mg) is accurately weighed and dispensed into an Eppendorf tube (2 mL volume). Place zirconia beads (Φ5mm) one by one in an Eppendorf tube, add 1mL of 0.1% formic acid solution (1mL of formic acid mixed with 1L of 80% methanol aqueous solution), and suspend with mixer mill (MM301, Lecce, Inc.) (25 times / sec, 5 minutes processing). The suspension was centrifuged (15,000 g, 5 minutes, RT) to obtain a sample.

固相抽出カラム(ディープウェル仕様;Oasis WAX 96−Well Plate 30μm (30mg)、日本ウォーターズ株式会社)を0.1%ギ酸水溶液1mLで平衡化し、先に調製した試料(上清100μL)を吸着させた後、0.1%ギ酸水溶液1mL、次いでメタノール1mLでカラム洗浄を行う。カラムに吸着している画分を5%アンモニア/含水メタノール溶液(25%アンモニア水をメタノールで5倍希釈したもの)900μLで溶出させ、1−プロパノールを1ウェルあたり3滴添加し、40℃下で乾固させる。乾固物に0.1%ギ酸水溶液500μLを加えて再溶解し、分析用サンプルとする。   A solid phase extraction column (deep well specification; Oasis WAX 96-Well Plate 30 μm (30 mg), Nihon Waters Co., Ltd.) was equilibrated with 1 mL of 0.1% formic acid aqueous solution to adsorb the previously prepared sample (100 μL of supernatant). After that, the column is washed with 1 mL of 0.1% formic acid aqueous solution and then with 1 mL of methanol. The fraction adsorbed on the column was eluted with 900 μL of a 5% ammonia / water-containing methanol solution (25% aqueous ammonia diluted 5-fold with methanol), 3 drops of 1-propanol were added per well, and the temperature was lowered to 40 ° C. To dry. Add 500 μL of 0.1% aqueous formic acid solution to the dried product and redissolve it to make a sample for analysis.

分析は、LCMS−2010EV(株式会社島津製作所)を用い、以下の条件で分析を行う。インジェクト量は20μLである。   The analysis is performed under the following conditions using LCMS-2010EV (Shimadzu Corporation). The injection amount is 20 μL.

<分析条件>
カラム : Develosil RPAQUEOUS−AR−3
(野村化学、Φ2×150mm)
移動相A: 10mMギ酸アンモニウム水(pH3.75)
移動相B: 10mMギ酸アンモニウム in 50%(v/v)含水アセト
ニトリル (pH3.75)
流 速 : 0.2ml/分、カラムオーブン40℃
移動相グラジエント: min A B
0 100 0
10 40 60
15 0 100
15.1 100 0
25 100 0
M S : イオン化法:ESI
分析タイプ : スキャン/SIM
分析モード : スキャン(ネガティブ)
イベント時間 : 1秒
検出器電圧 : 1.5kV
測定開始(m/z): 300
測定終了(m/z): 500
スキャンスピード : 250emu/sec
測定時間 : 25分
<Analysis conditions>
Column: Develosil RPAQUEOUS-AR-3
(Nomura Chemical, Φ2 × 150mm)
Mobile phase A: 10 mM ammonium formate water (pH 3.75)
Mobile phase B: 10 mM ammonium formate in 50% (v / v) hydrous aceto
Nitrile (pH 3.75)
Flow rate: 0.2 ml / min, column oven 40 ° C
Mobile phase gradient: min AB
0 100 0
10 40 60
15 0 100
15.1 100 0
25 100 0
M S: Ionization method: ESI
Analysis type: Scan / SIM
Analysis mode: Scan (negative)
Event time: 1 second Detector voltage: 1.5 kV
Measurement start (m / z): 300
End of measurement (m / z): 500
Scanning speed: 250emu / sec
Measurement time: 25 minutes

なお、各GSLの定量は、分析データの各GSLに対応するピークエリア面積を、各標品GSLのピークエリア面積と比較し、行った。   In addition, fixed_quantity | quantitative_assay of each GSL was performed by comparing the peak area area corresponding to each GSL of analysis data with the peak area area of each preparation GSL.

(3)ビタミンCの測定
ビタミンCの測定方法としては、ヒドラジン比色法、インドフェノール滴定法、HPLCによる手法などがあるが、本発明においてはヒドラジン比色法を用いた。具体的な方法は次の通りである。サンプル1gを正確に測り取り、5%メタリン酸溶液(メタリン酸5gを100mlの水に溶解させたもの)100mlに懸濁させた後、懸濁液をろ紙(Whatman No.2)でろ過し、このろ液を試験管に1mlずつ分注する(一方が本試験区、他方が空試験区)。また、VC標準液として、ビタミンCを5mg/100ml含有する溶液を調製し、これも試験管に1mlづつ分注する(標準液本試験区および標準液空試験区)。
(3) Vitamin C measurement As a method for measuring vitamin C, there are a hydrazine colorimetric method, an indophenol titration method, a HPLC method, and the like. In the present invention, a hydrazine colorimetric method was used. The specific method is as follows. After accurately measuring 1 g of a sample and suspending it in 100 ml of a 5% metaphosphoric acid solution (5 g of metaphosphoric acid dissolved in 100 ml of water), the suspension was filtered with a filter paper (Whatman No. 2). Dispense 1 ml of this filtrate into each test tube (one is the main test zone and the other is the empty test zone). In addition, a solution containing 5 mg / 100 ml of vitamin C is prepared as a VC standard solution, and this is also dispensed into a test tube by 1 ml (standard solution main test group and standard solution empty test group).

4本の試験管中に、インドフェノール溶液(2,6−ジクロロインドフェノールナトリウム30mgを100mlの温水に溶解し、ろ過したもの)0.5ml、チオ尿素溶液(チオ尿素2gを100mlの5%メタリン酸溶液に溶解させたもの)1mlを加える。   In 4 test tubes, 0.5 ml of indophenol solution (30 mg of 2,6-dichloroindophenol sodium dissolved in 100 ml of warm water and filtered), thiourea solution (2 g of thiourea and 100 ml of 5% metalin) 1 ml of acid solution) is added.

次いで、本試験区の試験管にのみさらにヒドラジン溶液(2gの2,4−ジニトロフェニルヒドラジンを9N硫酸溶液(濃硫酸1容と水3容を混和したもの)100mlに溶解したもの)0.5mlを加え、37℃で3時間反応させる。反応終了後氷浴中で冷却し、85%硫酸溶液(濃硫酸9容と水1容を混和したもの)を2.5ml加え、室温で30分間反応後、それぞれの520nmの吸光度を測定する(標準液本試験区のものをE、本試験区のものを、Eとする)。Next, only in the test tube of this test section, hydrazine solution (2 g of 2,4-dinitrophenylhydrazine dissolved in 100 ml of 9N sulfuric acid solution (mixed 1 volume of concentrated sulfuric acid and 3 volumes of water) 0.5 ml) And react at 37 ° C. for 3 hours. After completion of the reaction, the reaction mixture was cooled in an ice bath, 2.5 ml of 85% sulfuric acid solution (mixed of 9 volumes of concentrated sulfuric acid and 1 volume of water) was added, reacted at room temperature for 30 minutes, and then the absorbance at 520 nm was measured ( The standard solution in this test group is designated as E S , and the one in this test group is designated as E T ).

一方、空試験区の試験管は、そのまま37℃で3時間反応させた後、氷浴中で冷却し、85%硫酸溶液を2.5ml加え、更に前述のヒドラジン溶液0.5mlを加え、室温で30分間静置後、それぞれの520nmの吸光度を測定する(標準空試験区のものをESO、空試験区のものをETOとする)。On the other hand, the test tube in the blank test zone was allowed to react at 37 ° C. for 3 hours as it was, then cooled in an ice bath, added with 2.5 ml of 85% sulfuric acid solution, and further added with 0.5 ml of the hydrazine solution described above. in 30 minutes after standing, measuring the absorbance of each 520 nm (E SO with a standard blank test ku, those empty test group and E tO).

ビタミンC量は、吸光度あたりのアスコルビン酸のmg数fを、5/(Es−Eso)としたとき、下式が成立するので、この式によりビタミンC量を算出する。   As for the amount of vitamin C, when the mg number f of ascorbic acid per absorbance is 5 / (Es-Eso), the following equation is established. Therefore, the amount of vitamin C is calculated from this equation.

ビタミンC量(mg/100ml) = G × f × (E−ET0
但し、
G; サンプル希釈倍数
S0; ビタミンC標準液の空試験区の吸光度
; ビタミンC標準液の本試験区の吸光度
T0; サンプル液の空試験区の吸光度
; サンプル液の本試験区の吸光度
Vitamin C content (mg / 100ml) = G × f × (E T -E T0)
However,
G: Sample dilution factor
E S0 ; Absorbance of empty test section of vitamin C standard solution
E S ; Absorbance of vitamin C standard solution in this test section
E T0 ; Absorbance of the sample solution in the blank test section
E T ; Absorbance of the sample liquid in this test section

色調の測定
色調の測定方法としては、色彩計による測定や分光測色計による測定などがあるが、本発明においては分光式の測定器(Spectrophotometer SE2000、日本電色工業株式会社)を用いた。なお測定は粉体のまま行った。測定値(a値)は小さいほど緑色が強いことを示す。
Color tone measurement As a color tone measurement method, there are a colorimeter measurement and a spectrocolorimeter measurement. In the present invention, a spectroscopic measuring instrument (Spectrophotometer SE2000, Nippon Denshoku Industries Co., Ltd.) was used. In addition, the measurement was performed with powder. The smaller the measured value (a value), the stronger the green color.

香味の測定
香味の測定方法としては、パネラーによる官能評価及び味認識装置による分析を実施した。具体的にはサンプル4gを分取し、水100mlに溶解したサンプルを用い、評価を行った。官能評価は優秀なパネラー5名で行い、各パネラーが比較品(表1、3、5及び10中、加熱時間0秒;0点)と比べた各サンプルの評価を下記基準で点数をつけ、5人の点数の平均値を官能評価の評価点とした。
Flavor Measurement As a flavor measurement method, sensory evaluation by a paneler and analysis by a taste recognition apparatus were performed. Specifically, 4 g of a sample was taken and evaluated using a sample dissolved in 100 ml of water. The sensory evaluation was performed by five excellent panelists, and each panel was scored based on the following criteria for the evaluation of each sample compared with the comparative product (Tables 1, 3, 5 and 10, heating time 0 seconds; 0 points) The average of the scores of the five people was used as the evaluation score for sensory evaluation.

<評価基準>
比較例と比べて、不快味が非常に強い 3点
比較品と比べて不快味が強い 2点
比較品と比べ不快味がやや強い 1点
比較品と同じ 0点
比較品に比べて不快味がやや弱い −1点
比較品と比べて不快味が弱い −2点
比較品と比べて不快味が非常に弱い −3点
<Evaluation criteria>
Uncomfortable taste is very strong compared to the comparative example 3 points Unpleasant taste is strong compared to the comparative product 2 points Unpleasant taste is slightly stronger than the comparative product 1 point Same as the comparative product 0 points Unpleasant taste compared to the comparative product Slightly weaker -1 point Uncomfortable taste is weaker than the comparative product -2 points Unpleasant taste is very weaker than the comparative product -3 points

また、味認識装置としては、SA402B(株式会社インテリジェントセンサーテクノロジー)を用い、アブラナ科特有の不快味と相関の高い渋味をパラメーターとして選択し、比較を行った。渋味の数値は低いほどアブラナ科特有の不快味が少ないことを示す。   In addition, as a taste recognition device, SA402B (Intelligent Sensor Technology Co., Ltd.) was used, and astringent taste highly correlated with the cruciferous family-specific unpleasant taste was selected as a parameter for comparison. The lower the astringency, the less unpleasant taste peculiar to Brassicaceae.

実 施 例 1
加熱温度、時間の検討:
ケール(2月播種、5月及び7月収穫)の生の葉を水で洗浄し、pH7〜8の、温度70℃〜95℃の湯浴中で、30秒〜10分加熱処理後、水浴中にて冷却した。冷却したケール葉を手で裂き、その後搾汁機(名称「PERSEE青汁さん」、型番FD−1800、フカダック株式会社)を用いて搾汁液を得た。この搾汁液を噴霧乾燥し、青汁粉末を得た。得られた青汁粉末について、上記の方法によりそのGSL量(各GSLの定量および総GSL量)およびビタミンC量の測定、色調(a値)の測定並びに香味評価を行った。その結果を図1及び2、並びに表1〜11に示す。
Example 1
Examination of heating temperature and time:
Fresh leaves of kale (Feed in February, harvested in May and July) were washed with water, heated in a hot water bath of pH 7-8 at a temperature of 70 ° C. to 95 ° C. for 30 seconds to 10 minutes, and then a water bath Cooled in. The cooled kale leaf was torn by hand, and then a squeezed liquid was obtained using a squeezing machine (named “PERSEE Aojiru-san”, model number FD-1800, Fukadak Co., Ltd.). This juice was spray-dried to obtain a green juice powder. About the obtained green juice powder, the amount of GSL (quantification of each GSL and the amount of total GSL) and the amount of vitamin C, the measurement of a color tone (a value), and flavor evaluation were performed by said method. The results are shown in FIGS. 1 and 2 and Tables 1-11.

実 施 例 2
茹で湯pHの検討:
ケールの生の葉を水で洗浄し、pH4〜9に設定した、温度90〜95℃の湯浴中で、1分〜2分加熱処理後、水浴中にて冷却した。冷却したケール葉を手で裂き、その後搾汁機(名称「PERSEE青汁さん」、型番FD−1800、フカダック株式会社)を用いて搾汁液を得た。搾汁液を噴霧乾燥し、青汁粉末を得た。得られた青汁粉末について、前記の方法によりそのGSL量およびビタミンC量の測定、色調(a値)の測定並びに香味評価を行った。その結果を表12〜18及び図3〜7に示す。
Example 2
Examination of boiled water pH:
The raw leaves of kale were washed with water, heated for 1 minute to 2 minutes in a hot water bath set at pH 4-9 and having a temperature of 90-95 ° C., and then cooled in a water bath. The cooled kale leaf was torn by hand, and then a squeezed liquid was obtained using a squeezing machine (named “PERSEE Aojiru-san”, model number FD-1800, Fukadak Co., Ltd.). The juice was spray-dried to obtain a green juice powder. About the obtained green juice powder, the measurement of the amount of GSL and vitamin C, the measurement of a color tone (a value), and flavor evaluation were performed by the above-mentioned method. The results are shown in Tables 12 to 18 and FIGS.

比 較 例
未加熱処理品の試作:
ケールの生の葉を水で洗浄後、加熱せずにそのまま手で裂き、搾汁機(名称「PERSEE青汁さん」、型番FD−1800、フカダック株式会社)を用いて搾汁液を得た。搾汁液を噴霧乾燥し、青汁粉末を得た。得られた青汁粉末について、そのGSL量およびビタミンC量の測定、色調(a値)の測定並びに香味評価を行った(表1、3、5及び10中、加熱時間0秒)。
Comparison example Prototype of unheated product:
The raw leaves of Kale were washed with water and then cleaved by hand without heating, and a juice was obtained using a juicer (named “PERSEE Aojiru-san”, model number FD-1800, Fukadak Co., Ltd.). The juice was spray-dried to obtain a green juice powder. About the obtained green juice powder, the measurement of the amount of GSL and vitamin C, the measurement of color tone (a value), and flavor evaluation were performed (in Table 1, 3, 5 and 10, heating time 0 second).

参 考 例
播種後日数とGSL含量の関係:
播種後25日、35日、45日、55日、66日、75日、87日経過したケール(3月播種)の生の葉を水で洗浄後、その100mgを正確に測り取り、エッペンドルフ(2ml)に分取し、前記の総GSL量の測定方法に従い、各GSLの割合と、全GSL量の測定を行った。その結果を図8に示す。
Reference Example Relationship between days after sowing and GSL content:
25 days, 35 days, 45 days, 55 days, 66 days, 75 days, and 87 days after sowing, the raw leaves of kale (seeded in March) were washed with water, 100 mg was accurately measured, and Eppendorf ( 2 ml), and according to the method for measuring the total GSL amount, the ratio of each GSL and the total GSL amount were measured. The result is shown in FIG.

本発明によれば、アブラナ科植物からGSLを豊富に含む搾汁組成物を製造することができる。そして、得られた搾汁組成物は、GSLを豊富に含む他、例えばビタミンCを豊富に含み、色調、香味などにも優れているという利点を有する。   According to the present invention, a juice composition containing abundant GSL can be produced from a cruciferous plant. The obtained squeezed composition has an advantage that it contains not only GSL but also vitamin C, for example, and is excellent in color tone and flavor.

従って、本発明により得られた搾汁組成物は、それ自体、飲みやすく栄養分の豊富な、いわゆる青汁飲料として、また、他の栄養食品等の配合成分として有利に使用することができるものである。   Therefore, the juice composition obtained according to the present invention can be advantageously used as a so-called green juice drink that is easy to drink and rich in nutrients, and as a blended component of other nutritional foods. is there.

Claims (9)

以下のステップ(a)及び(b):
(a)播種後55日以上経過したケールを、常圧下、下記式(1)
[数1]
1≦t<3のとき、−5t+85≦T<100 ……式(1)
[式中、Tは加熱温度(℃)であり、tは加熱時間(分)である]
を満たす加熱条件にて加熱処理するステップ、
(b)加熱処理したケールを搾汁処理して搾汁液を得る
ステップ
を含むことを特徴とするグルコシノレートを乾燥重量で15μg/100mg以上含有する搾汁組成物の製造方法。
The following steps (a) and (b):
(A) The kale that has passed for more than 55 days after sowing is subjected to the following formula (1) under normal pressure:
[Equation 1]
When 1 ≦ t <3, −5t + 85 ≦ T <100 Equation (1)
[Wherein T is the heating temperature (° C.) and t is the heating time (minutes)]
Heat-treating under heating conditions that satisfy
(B) A method for producing a squeezed composition containing 15 μg / 100 mg or more of glucosinolate by dry weight, comprising the step of squeezing the heat-treated kale to obtain a squeezed liquid.
加熱処理を水中で行う請求項1記載の方法。   The method according to claim 1, wherein the heat treatment is performed in water. 加熱処理をpH6〜8の環境下で行う請求項1又は2記載の方法。 The method according to claim 1 or 2 , wherein the heat treatment is performed in an environment of pH 6-8. 更に、次のステップ(c):
(c)ステップ(b)で得た搾汁液を乾燥処理するステップ
を含む請求項1〜のいずれか1項記載の方法。
Furthermore, the next step (c):
(C) The method of any one of Claims 1-3 including the step which dry-processes the squeezed liquid obtained at step (b).
乾燥処理が噴霧乾燥である請求項記載の方法。 The method according to claim 4 , wherein the drying treatment is spray drying. ケールが播種後75日以上経過したケールである請求項1〜のいずれか1項記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 5 , wherein the kale is a kale that has passed 75 days or more after sowing. ケールが春蒔きケールである請求項1〜のいずれか1項記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 6 , wherein the kale is spring-fired kale. 播種後55日以上経過したケールを、常圧下、下記式(1)
[数3]
1≦t<3のとき、−5t+85≦T<100 ……式(1)
[式中、Tは加熱温度(℃)であり、tは加熱時間(分)である]
を満たす加熱条件にて加熱処理することを特徴とする、搾汁処理の際のケール中のグルコシノレートの分解を抑制する方法。
The kale that has passed for more than 55 days after sowing, under normal pressure, the following formula (1)
[Equation 3]
When 1 ≦ t <3, −5t + 85 ≦ T <100 Equation (1)
[Wherein T is the heating temperature (° C.) and t is the heating time (minutes)]
A method for suppressing the decomposition of glucosinolate in kale during squeezing treatment, wherein the heat treatment is performed under a heating condition that satisfies the conditions.
加熱処理を水中で行う請求項記載の方法。 The method according to claim 8 , wherein the heat treatment is performed in water.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020162459A (en) * 2019-03-28 2020-10-08 カゴメ株式会社 Method for producing cruciferous vegetable, method for manufacturing food and drink, and food and drink

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2382299B1 (en) * 2010-11-11 2013-05-07 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) VEGETABLE POWDER FOR FOOD AND VEGETABLE PROTECTION AND PREPARATION METHODS.
SG11201608692TA (en) * 2014-04-25 2016-11-29 Yakult Health Foods Co Ltd Processed kale product
WO2015163443A1 (en) * 2014-04-25 2015-10-29 ヤクルトヘルスフーズ株式会社 Agent for delaying appearance of physical symptoms associated with aging
JP6738469B2 (en) * 2018-07-31 2020-08-12 株式会社 伊藤園 Method for producing young barley juice
JP6671073B2 (en) * 2019-06-07 2020-03-25 株式会社 伊藤園 Production method of barley young leaf juice
JP7211991B2 (en) * 2020-02-28 2023-01-24 株式会社 伊藤園 Method for producing green barley juice

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001136929A (en) * 1999-09-02 2001-05-22 Toyo Shinyaku:Kk Food produced by using brassicaceous plant rich in gamma-aminobutyric acid
JP2002112729A (en) * 2000-10-10 2002-04-16 Toyo Shinyaku:Kk Method for producing dried kale powder
JP2002191311A (en) * 2000-12-28 2002-07-09 Toyo Shinyaku:Kk Method for processing kale and kale processed food
US20070033675A1 (en) * 2003-04-14 2007-02-08 Piet Barten Brassica plants with high levels of anticarcinogenic glucosinolates

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001136929A (en) * 1999-09-02 2001-05-22 Toyo Shinyaku:Kk Food produced by using brassicaceous plant rich in gamma-aminobutyric acid
JP2002112729A (en) * 2000-10-10 2002-04-16 Toyo Shinyaku:Kk Method for producing dried kale powder
JP2002191311A (en) * 2000-12-28 2002-07-09 Toyo Shinyaku:Kk Method for processing kale and kale processed food
US20070033675A1 (en) * 2003-04-14 2007-02-08 Piet Barten Brassica plants with high levels of anticarcinogenic glucosinolates

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6009067193; Food Chem.,2007,Vol.105,p.976-981 *
JPN6009067194; Br.J.Nutr.,2003,Vol.90,p.687-697 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020162459A (en) * 2019-03-28 2020-10-08 カゴメ株式会社 Method for producing cruciferous vegetable, method for manufacturing food and drink, and food and drink
JP7112365B2 (en) 2019-03-28 2022-08-03 カゴメ株式会社 Method for producing cruciferous vegetables, method for producing food and drink, and food and drink

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