JP5716257B2 - 胆管癌特異的糖鎖エピトープを認識するモノクローナル抗体 - Google Patents
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Description
(1) 胆管癌細胞におけるムチンMUC5ACの胆管癌特異的糖鎖エピトープを認識するモノクローナル抗体。
(2) 胆管癌患者の血清中のムチンMUC5ACを認識するが、健常者、胃癌患者、膵臓癌患者、結腸癌患者及び肺癌患者の血清中のムチンMUC5ACを認識しない、(1)に記載のモノクローナル抗体。
(3) 胆管癌細胞の増殖阻害作用を有する、(1)又は(2)に記載のモノクローナル抗体。
(5) 受領番号FERM AP−21750(受託番号FERM P−21750)又は受領番号FERM AP−21751(受託番号FERM P−21751)を有するハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体。
(7) 胆管癌の腫瘍組織の抽出物を投与したGANP遺伝子導入トランスジェニック非ヒト哺乳動物から抗体産生細胞を回収し、胆管癌の腫瘍組織と反応性を有する抗体を産生する抗体産生細胞を選別し、選別された抗体産生細胞に抗体を産生させることを含む、(1)から(5)の何れかに記載のモノクローナル抗体の製造方法。
(9) (1)から(5)の何れかに記載のモノクローナル抗体を含む、胆管癌を抑制及び/又は治療するための医薬。
(11) 被験者由来の試料が血清又は血漿である、(10)に記載の胆管癌の検出方法。
本発明においては、T細胞依存性抗原(TD-Ag)に対する高親和性モノクローナル抗体を産生するganp遺伝子トランスジェニックマウス(GANPTG mice: PCT/JP2003/014221(WO2004/040971号公報))を用いて、胆管癌における糖タンパク質の糖鎖成分上の癌特異的エピトープを認識するモノクローナル抗体を樹立することに成功した。外科的に切除したCCA試料の抽出物をGANPTGマウスに免疫し、脾臓細胞をポリエチレングリコールを用いてX63ミエローマ細胞と融合し、96ウエル培養プレートでIL−6の存在下で胸腺フィーダー細胞と一緒に培地中でインキュベートした。IMDM培地のHAT(ヒポキサンチン/アミノプテリン/チミジン)による選択後、増殖するクローンの上清をCCA抽出物を用いてELISAによりスクリーニングした。陽性クローンは、細胞株上での免疫染色により更にスクリーニングした。再度クローニングした後、AS1及びAS2と命名したモノクローナル抗体を、CCA細胞に対する特異的モノクローナル抗体として選択した。臨床CCA腫瘍試料上で免疫組織化学染色により、モノクローナル抗体の特異性を更に調べた。モノクローナル抗体AS1は腫瘍細胞の全体を特異的かつ強く染色し、モノクローナル抗体AS2は腫瘍細胞の先端領域を選択的に染色した。両抗体とも、周囲の非腫瘍細胞や、試験したCCA患者の組織は染色しなかった。糖タンパク質を捕捉するプレートを用いたELISAでは、モノクローナル抗体AS1及びAS2は、CCA患者のプールした血清中の抗原を認識したが、健常者、胃癌、膵臓癌、結腸癌及び肺癌のプールした血清中の抗原は認識しなかった。AS1抗原はCCA症例の約54%で陽性であり、AS2抗原はCCA症例の約27%で陽性であるが、他の悪性腫瘍や健常者の症例では陽性率は非常に低い。CCA患者の血清を用いたウエスタンブロット分析により、モノクローナル抗体AS1及びAS2は共に約220-kDaのブロードバンドを認識することが分かった。プロテオミクス分析により、MUC5AC のペプチド骨格を含む標的分子を決定した。複数の糖鎖切断酵素での処理により更に分析した結果、モノクローナル抗体AS1及びAS2はCCA細胞から分泌されるMUC5ACの糖鎖の異なる部分を認識することが分かった。CCA細胞株の増殖に及ぼすモノクローナル抗体AS1及びAS2の影響をインビトロで調べた結果、両方のモノクローナル抗体は、MUC5AC上にAS1及びAS2エピトープを発現するCCA細胞株の細胞増殖を阻害することを見出した。これらの知見は、CCA細胞ではMUC5ACの糖鎖成分に腫瘍特異的な修飾が生じ、本発明の2種のモノクローナル抗体AS1及びAS2はこれらのエピトープを認識することを示している。本発明の腫瘍特異的モノクローナル抗体は、腫瘍特異的抗原エピトープの解明及び抗体医薬として癌治療の応用に有用である。
本発明のモノクローナル抗体を作成するための抗原としては、胆管癌の腫瘍組織又はその抽出物を用いる。胆管癌の腫瘍組織は、胆管癌患者から外科的に切除した組織を用いることができ、抽出物としては、例えば、採取した腫瘍組織をPBSなどの緩衝液中でホモジネートして得られた上清を用いることができる。
本発明のモノクローナル抗体は、胆管癌の診断薬、並びに胆管癌を抑制及び/又は治療するための医薬として使用することができる。
本発明によれば、胆管癌細胞におけるムチンMUC5ACの胆管癌特異的糖鎖エピトープを認識する本発明のモノクローナル抗体と被験者由来の試料とを接触させて、該試料中におけるムチンMUC5ACの胆管癌特異的糖鎖エピトープの存在の有無を検出することによって、胆管癌を検出することができる。
標識免疫測定法による、本発明の抗体を検出する測定系は、非競合反応系あるいは競合反応系を用いて構築することができる。非競合反応系においては、固相が必要である(固相法)。競合反応系においては、必ずしも固相を必要としない(液相法)が、固相を用いた方が、測定操作が簡便になるため好ましい。固相の材質としては、例えば、ポリスチレン、ナイロン、ガラス、シリコンラバー、セルロース等が挙げられ、固相の形状としては、球状、ウェル状、チューブ状、シート状等が挙げられるが、これらに限定されず、標識免疫測定法に用いられる公知のものを任意に用いることができる。
前記標識免疫測定法の好適な例として、酵素を標識とした免疫測定法、ELISA法を挙げることができる。ELISA法は、例えば、96穴プレートに検体またはその希釈液を入れて、4℃〜室温で一晩、または37℃で1〜3時間程度静置して検出すべき試料を吸着させて固相化する。次に、本発明の抗体を反応させ、次いであらかじめ酵素を結合させた抗免疫グロブリン抗体(二次抗体)を反応させる。最後に酵素と反応する適当な発色性の基質(例えば、酵素がホスファターゼならp−ニトロフェニルリン酸等)を加え、この発色によって抗体を検出することができる。
(1)胆管癌(CCA)試料
外科的に切除した試料を、タイのKhon Kaen大学のSrinagarind病院で承認された肝内CCAを有する100人の患者から得た。インフォームド・コンセントは、Khon Kaen大学のヒト研究倫理委員会で承認されたプロジェクトに参加した全患者から得た。年齢、性別、組織学的等級、及びリンパ節、血管及びペリニューロンの関与を含むデータを、Khon Kaen大学の肝臓ジストマ症及び胆管癌研究センターの医療記録及び病理記録に基づいて過去に遡って調べた。
ヒトCCA細胞株(M213A, M055及びKKU-100) は、10%熱不活化ウシ胎児血清(FCS; Sigma, St. Louis, MO)、2 mM L-グルタミン(Cambrex, Baltimore, MD)、100μg/ml ストレプトマイシン、100 U/ml ペニシリン及び50 μM 2-メルカプトエタノールを補充したHam-F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA) で培養した。不死化したヒト胆管細胞MMNK-1 (Maruyama, M., Kobayashi, N., Westerman, K.A., Sakaguchi, M., Allain, J.E., Totsugawa, T., Okitsu, T., Fukazawa, T., Weber, A., Stolz, D.B., Leboulch, P. & Tanaka, N. Establishment of a highly differentiated immortalized human cholangiocyte cell line with SV40T and hTERT. Transplantation 77(3):446-451, 2004)は、補充したダルベッコ改変イーグル培地で37 oCで5% CO2で培養した。乳癌細胞株MCF7はRPMI-1640で維持した。
各種のCCA (n=5)からの腫瘍組織をPBS中でホモジネートし、得られた上清をBalb/c-GANPTGマウスに腹腔内注入した。抗原投与は、完全フロイントアジュバンド(CFA)を用いて一次免疫として行い、不完全フロイントアジュバンド(IFA)を用いて追加免疫を行った(Kuwahara, K., Yoshida, M., Kondo, E., Sakata, A., Watanabe, Y., Abe, E., Kouno, Y., Tomiyasu, S., Fujimura, S., Tokuhisa, T., Kimura, H., Ezaki, T. & Sakaguchi, N. A novel nuclear phosphoprotein, GANP, is up-regulated in centrocytes of the germinal center and associated with MCM3, a protein essential for DNA replication. Blood 95(7):2321-2328, 2000)。より高い抗体価を有するマウスを更に免疫し、3日後、脾臓細胞を採取し、標準手法のポリエチレングリコール法によりマウスミエローマ細胞株X63と細胞融合させた(Kuwahara, K., Tomiyasu, S., Fujimura, S., Nomura, K., Xing, Y., Nishiyama, N., Ogawa, M., Imajoh-Ohmi, S., Izuta, S. & Sakaguchi, N. Germinal center-associated nuclear protein (GANP) has a phosphorylation-dependent DNA-primase activity that is up-regulated in germinal center regions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98(18):10279-10283, 2001)。融合細胞は、IL-6 (5 units/ml)の存在下で2 x 104 細胞/ウエルの濃度でマイクロ培養プレート上でHAT培地により選択した。スクリーニングは、間接EISAと免疫組織化学の組み合わせで行った。最終的に、モノクローナル抗体AS1及びAS2を樹立した。
96ウエル平底プレートを、炭酸バッファーpH9.6 (0.15 M Na2CO3 and 0.35 M NaHCO3)中で4℃で40 μg/mlの大豆アグルチニン(SBA; Sigma, St. Louis, MO)で被覆した。プレートは、0.9% NaCl中の0.05% Tween-20(NSST)で5回洗浄した。ブロッキングは、PBS/0.05% Tween-20 (PBS-T)中の2% BSAを用いて行った。NSSTで5回洗浄した後、患者の血清の適当な希釈物50μlを各ウエルに添加し、プレートを37℃で1時間インキュベートした。プレートをNSSTで5回洗浄した。樹立したモノクローナル抗体の適当な希釈物50μlを各ウエルに添加した。37℃で1時間インキュベートし、NSSTで洗浄した後、プレートを、西洋サワビペルオキシダーゼ(HRP)結合ヤギ抗マウス(Southern Biotechnology Associates, Birmingham, AL)とともに37℃で1時間さらにインキュベートした。3,3',5,5'-テトラメチル−ベンジジン (TMB)基質の添加によって発色させた。1N H2SO4 (50 μl)を各ウエルに添加して、反応を停止させた。ELISAリーダーで450nmでプレートを測定した。間接ELISAでは、5μg/mのCCA抽出物を96ウエルに被覆した。CCAに対する樹立したモノクローナル抗体及びHRP結合ヤギ抗マウスIgMをそれぞれ、一次抗体及び二次抗体としてそれぞれ使用した。
パラフィン切片 (4μm) をキシレンで脱パラフィン化し、続いて、再水和し、クエン酸バッファー(pH 6.0)中でマイクロ波で処理した。0.3% H2O2で内因性のペルオキシダーゼをブロックし、スライドを5%正常ウマ血清で予めインキュベートした後、モノクローナル抗体で4℃で一晩インキュベートし、次いで、ビオチン化抗マウスIg抗体とベクタスタチン(Vectastain) ABC 複合体(Vector Laboratories, Burlingame, CA)で増幅し、シグナルを3,3'-ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド(Sigma)で可視化した。
選択したハイブリドーマ(AS1及びAS2)をPBSで3回洗浄し、血清を含まない培地中で7日間培養した。培養上清をローディングバッファー(0.05 M リン酸ナトリウム, pH7.0)に対して透析した。KAPTIV-M樹脂(Tecnogen S.C.p.A., Piana di Monte Verna, Italy)を5ベッド体積のローディングバッファーで平衡化した後、透析した上清を樹脂を含むカラムに適用し、ローディングバッファーで十分に洗浄した。保持されたタンパク質を溶出バッファー(0.1 M 酢酸)で溶出し、回収した画分を1 M Tris-HCl (pH9.0)で直ちに中和し、pHを7.0付近にした。
精製したモノクローナル抗体AS1及びAS2は、CNBrで活性化したセファロース(GE Healthcare, Buckinghamshire, UK) に取扱説明書に従って結合した。抗原抗体複合体をセファロース上に捕捉し、SDS-PAGEで分離し、ウエスタンブロット及び免疫検出によって検出した。
培養デッィシュ中のCCA細胞株はPBSで洗浄し、150 mM NaCl、50 mM Tris-HCl (pH7.4)、1% Tween-20、1%デオキシコール酸ナトリウム、0.1% SDS 及び1x プロテアーゼ・インヒビター・カクテル(Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Germany)を含む溶解バッファーで溶解した。細胞溶解物を10,000 x gで30分間4℃で遠心した。上清のタンパク質濃度をLowry法を用いて測定した。タンパク質をマイクロスラブSDS-PAGEで分離した後、ゲルをトランスファーバッファー[40 mM Tris-HCl (pH7.4), 20 mM 酢酸ナトリウム, 2 mM EDTA, 20% (v/v) メタノール及び0.05% SDS]中で15分間予め平衡化してから、ゲル中のタンパク質をニトロセルロース膜に電気トランスファーした。膜は、1% (w/v) 非脂肪ドライミルク(PBS-T )で4℃で一晩ブロッキングした。ブロットは、一次抗体(樹立したモノクローナル抗体)と一緒に室温で1時間インキュベートした。HRP結合ヤギ抗マウスIgMを二次抗体として使用した。タンパク質の発現は、Enhanced ChemiLuminescenceキット (GE Healthcare)で検出した。
CCA患者又は正常ボランティアからのアルブミン/IgG-枯渇血清を、モノクローナル抗体AS1又はAS2を結合させたセファロースを用いた免疫アフィニティーカラムに適用した。溶出した試料はSDS-PAGEで分離し、ゲルを深紫色で染色するか、又は免疫検出した。免疫反応性を有するスポットをゲルから切り出し、マイクロチューブに別々に移した。ゲル粒子を乾燥した後、還元及びアルキル化を行った。ゲル内消化を標準的な手法で行った簡単に言うと、ゲル内のタンパク質をトリプシンで一晩消化した。分解したペプチドを乾燥し、2%アセトニトリル/0.1%トリフルオロ酢酸で分割し、ZipTip (Millipore, Billerica, MA)で脱塩した。試料は繰り返し乾燥し、2%アセトニトリル/0.1%トリフルオロ酢酸で分割し、液体クロマトグラフィー・タンデムマススペクトロメトリー(LC/MS/MS)に供した。 ケラチンなどの既知のコンタミネーションピーク、自己光分解ピークは除去した。LC/MS/MS の結果を、NCBI データベースと比較した。
標的糖タンパク質のグリコシル化を評価するために、Glyko enzymatic deglycosylationキット(Glyko, Inc., Novato, CA)を用いた。M213A 細胞は、各種の酵素の組み合わせの存在下において血清を含まない培地中で37℃で一晩培養した。培養上清を回収し、Centricon (Millipore)を用いて濃縮した。幾つかの実験では、CCA血清は、 デグリコシダーゼで処理した。酵素消化後の試料は、上記の通り、SDS-PAGE及びイムノブロットに用いた。
CCA細胞株は、コラーゲンI型で被覆したプレート(和光純薬工業、大阪、日本)上で培養した。FCSを含む培地で洗浄した後、モノクローナル抗AS1又はAS2、又は対照IgMを最終濃度1 μg/mlで培地に添加した。画像は、経時的顕微鏡(IX81; オリンパス、東京、日本)を用いて10分毎に48時間取得した。
(1)CCA細胞に対するモノクローナル抗体の樹立
GANPTG マウスに、ヒトCCA組織のプールした細胞溶解物をCFAと一緒に免疫し、IFA中の溶解物で追加免疫した。脾臓細胞を単離し、既報の標準法で(Kuwahara, K., Tomiyasu, S., Fujimura, S., Nomura, K., Xing, Y., Nishiyama, N., Ogawa, M., Imajoh-Ohmi, S., Izuta, S. & Sakaguchi, N. Germinal center-associated nuclear protein (GANP) has a phosphorylation-dependent DNA-primase activity that is up-regulated in germinal center regions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98(18):10279-10283, 2001)でポリエチレングリコールを用いてミエローマ細胞株X63と融合した。HAT培地での選択後、CCA細胞に対するモノクローナル抗体を、CCA抽出物で予め処理した96ウエルのマイクロ培養プレートを用いた間接ELISAによって先ず選択した(図1)。ミエローマ細胞株による3回の独立した融合により、患者血清を用いたELISAと組織切片における免疫組織化学分析によりさらにスクリーニングを行い、図2に示す戦略により、癌に特異的又は選択的なモノクローナル抗体を見出した。特異性は、肝癌、膵臓癌及び胃癌のような他の癌細胞を用いて確認した。図3に示す典型的スクリーニングにおいて、細胞ELISAでCCA細胞を選択的に認識する複数のモノクローナル抗体を得た。代表的モノクローナル抗体は2群に分類され、モノクローナル抗体AS1及びAS2と命名した。何れのモノクローナル抗体ともIgM/κであった。モノクローナル抗体AS1及びAS2を産生するハイブリドーマAS1(識別のための表示:Mouse-mouse hybridomas AS1)及びハイブリドーマAS2(識別のための表示:Mouse-mouse hybridomas AS2)はそれぞれ、受領番号FERM AP−21750(受託番号FERM P−21750)及び受領番号FERM AP−21751(受託番号FERM P−21751)として、2008年(平成20年)12月17日付けで独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター(日本国茨城県つくば市東一丁目1番地1 中央第6(郵便番号305−8566))に寄託されている。
CCA患者のプールした血清中のAS1及びAS2抗原の分子の大きさを、通常血清と比較して調べた(図10)。幅広いバンドがプールしたCCA血清中でのみ見られ、正常血清では見られなかった。抗原構造を決定するために、アルブミン/IgG除去可能カラムにプールした血清を通し、Microcon YM-30で濃縮して標的糖タンパク質を濃縮した(図11)。モノクローナル抗体AS1及びAS2で検出された抗原は、SDS-PAGE上で推定~220-kDaのブロードなバンドであった。CCA血清中に存在する220-kDa近傍の大きなタンパク質をQstar (LC/MS/MS)を用いたMass分析により直接解析したところ、α2-マクログロブリンが同定された。しかし、AS1とAS2の発現パターンはα2-マクログロブリンとは明らかに相関しないため、この方法では目的の分子を同定することは困難であると判断した。そこでモノクローナル抗体AS1及びAS2を無血清培地から精製し、IgM精製キットで濃縮した。精製したモノクローナル抗体はセファロースビーズと結合させ、それを用いた免疫沈降法とウェスタンブロット解析により、AS1とAS2は~220-kDaのブロードなバンドを特異的に検出した(図12)。次にAS1及びAS2結合セファロースビーズを用いてアフィニティークロマトグラフィーカラムを作成した。CCA患者血清中のAS1及びAS2抗原を2段階で精製した後、抗原を質量分析に供した(図13)。AS1はMUC5AC糖タンパク質のペプチド配列とヒットした(図14及び15)。AS2はMUC5ACのペプチド配列と複数のペプチド配列と高いスコアでヒットした(図16、17及び18)。これらの結果は、AS1及びAS2が220-kDaの大きな分子サイズの糖タンパク質の異なるエピトープを認識することを示す。この糖タンパク質は、質量分析によりMUC5AC及びMUC6と決定された(図19)。
免疫沈降及びウエスタンブロット解析によりMUC5ACに対するモノクローナル抗体AS1及びAS2の反応性を調べた(図20)。モノクローナル抗体AS1 (IgM,κ)は、ウエスタンブロット解析では220-kDaのバンドと強く反応した。モノクローナル抗体AS1及びAS2は、大きなサイズの糖タンパク質を免疫沈降させた(図21)。モノクローナル抗体AS1は、M213A CCA細胞株における糖タンパク質を認識したが、正常胆管細胞株MNNK1及び乳癌細胞株MCF7における糖タンパク質は認識しなかった。M213Aの培養上清は、モノクローナル抗体AS1に対する反応性が低かった。これは、M213A細胞の免疫沈降及びウエスタンブロット解析により確認された。モノクローナル抗体AS1は、M213 CCA腫瘍細胞に特異的であった。モノクローナル抗体AS2は、モノクローナル抗体AS1と反応させた場合と同様のウエスタンブロットプロフィールを示したことにより、モノクローナル抗体AS1は、AS2抗原、即ちMUC5ACの異なるエピトープを認識することが示された。市販の抗MUC5AC抗体を用いて同様の実験を試みた。市販の抗MUC5AC抗体の多くは、モノクローナル抗体AS1及びAS2と比べて、ウエスタンブロット分析において反応性が比較的弱かったことから、本発明の2種類のモノクローナル抗体は、免疫沈降、ウエスタンブロット分析及びELISAにおいてMUC5AC抗原に対する反応性が強いことが示された。
AS1及びAS2エピトープが大きなサイズの糖タンパク質の糖成分上に存在するかどうかを調べてみることにした(図22)。CCAのプールした血清を、シアリダーゼ(2)、O-グリカナーゼ(3)、シアリダーゼ + O-グリカナーゼ(4)、N-グリカナーゼ(5)、N-グリカナーゼ + シアリダーゼ(6)、シアリダーゼ + O-グリカナーゼ+ シアリダーゼ (7)、及び0.1 M NaOHで処理した。AS1は、シアリダーゼによる処理後に、鋭いより高い分子サイズのバンドに移動し、NaOH処理によりウエスタンブロット上のシグナルを消失さえた。これらの結果は、AS1の抗原エピトープはシアル酸で僅かにマスクされており、シアリダーゼ処理後に鋭いバンドになることを示している。O-結合型糖成分は、0.1 M NaOH処理に感受性である。即ち、AS1エピトープは、MUC5AC糖タンパク質 の糖成分上にある(図23)。M213A細胞を無血清培地で培養した上清を用いたAS1エピトープの解析結果は、CCAのプール血清を用いた場合と同様であった(図24)。糖タンパク質の酵素によるデグリコシレーションにより、シアリダーゼの処理によりAS1の反応性が増大することが判明したが、これは、シアル酸が抗原エピトープを被覆していることを示唆している。β-ガラクトシダーゼ、N-アセチルグルコサミダーゼ及びO-グリカナーゼによる処理により、AS1の反応性は減少した。N-グリカナーゼの処理は、AS1反応性に影響しない。これを考慮すると、AS1の抗原エピトープは、シアル酸により被覆されている糖構造であり、この糖構造の一部はβ-ガラクトシダーゼ、N-アセチルグルコサミダーゼ、及びO-グリカナーゼで切断できる(図25)。AS1の抗原エピトープは糖領域であり、そのうちの一部はGal β(1-4)結合に連結している。GlcNAcβ(1-6)は、O−結合によって高分子量糖タンパク質(MUC5AC)のタンパク質中心に連結している前者を有する(図27を参照)。同様に、AS2の抗原エピトープは、糖成分にあると推定され、その大部分はGalβ(1-4)結合に連結し、これは高分子量糖タンパク質(MUC5AC)のポリペプチド骨格にO−結合によって連結している(図26、図27)。
AS1及びAS2エピトープはCCA細胞で発現しているので、本発明のモノクローナル抗体がCCA細胞株の増殖に影響を及ぼすかどうかを調べた。モノクローナル抗体AS1及びAS2は、複数のCCA細胞株を阻害した。図28では、M055細胞は、AS1 (1μg/ml), AS2 (1μg/ml), 対照IgM (1μg/ml), 又は未処理の培地の存在下で培養した。経時的顕微鏡観察により、DNAの染色によって確認される通り、モノクローナル抗体AS1及びAS2の存在下で細胞増殖の阻害が示された(図29)。この実験により、モノクローナル抗体AS1及びAS2が、CCA癌細胞の腫瘍特異的阻害に有用であることが示された。
上記の結果から、本発明のモノクローナル抗体で認識される癌特異的エピトープは、CCA癌細胞に分泌・発現するMUC5ACの糖タンパク質に存在することが示された。エピトープが糖鎖領域に存在することは、癌細胞ではグリコシレーションパターンの変化が生じていることを示唆している。
FERM P−21751
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- 受領番号FERM AP−21750(受託番号FERM P−21750)又は受領番号FERM AP−21751(受託番号FERM P−21751)を有するハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体。
- 受領番号FERM AP−21750(受託番号FERM P−21750)又は受領番号FERM AP−21751(受託番号FERM P−21751)を有するハイブリドーマ。
- 請求項1に記載のモノクローナル抗体を含む、胆管癌の診断薬。
- 請求項1に記載のモノクローナル抗体と被験者由来の試料とを接触させて、該試料中におけるムチンMUC5ACの胆管癌特異的糖鎖エピトープの存在の有無を検出することを含む、胆管癌細胞の検出方法。
- 被験者由来の試料が血清又は血漿である、請求項4に記載の胆管癌細胞の検出方法。
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