JP5690139B2 - 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 - Google Patents
結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5690139B2 JP5690139B2 JP2010516547A JP2010516547A JP5690139B2 JP 5690139 B2 JP5690139 B2 JP 5690139B2 JP 2010516547 A JP2010516547 A JP 2010516547A JP 2010516547 A JP2010516547 A JP 2010516547A JP 5690139 B2 JP5690139 B2 JP 5690139B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- tumor
- colorectal cancer
- ezrin
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 title claims description 175
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 title claims description 171
- 102100020903 Ezrin Human genes 0.000 title claims description 49
- 108010055671 ezrin Proteins 0.000 title claims description 49
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 25
- 238000003556 assay Methods 0.000 title description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 132
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 126
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 89
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 claims description 77
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 73
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 66
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 56
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 51
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 38
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 38
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 36
- 108010049148 plastin Proteins 0.000 claims description 34
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 claims description 31
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 29
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 claims description 26
- 102100025981 Aminoacylase-1 Human genes 0.000 claims description 25
- 101710143180 Aminoacylase-1 Proteins 0.000 claims description 25
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 claims description 25
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 claims description 25
- 102100030635 Leukocyte elastase inhibitor Human genes 0.000 claims description 23
- 102100035181 Plastin-1 Human genes 0.000 claims description 23
- 101710091916 Leukocyte elastase inhibitor Proteins 0.000 claims description 22
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 claims description 19
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 claims description 19
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 claims description 18
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 claims description 18
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 18
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 claims description 17
- 102100039558 Galectin-3 Human genes 0.000 claims description 15
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 14
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 claims description 14
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 102000009081 Apolipoprotein A-II Human genes 0.000 claims description 10
- 108010087614 Apolipoprotein A-II Proteins 0.000 claims description 10
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 claims description 10
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 claims description 10
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 9
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 claims description 9
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 claims description 9
- 102100032700 Keratin, type I cytoskeletal 20 Human genes 0.000 claims description 8
- 239000003591 leukocyte elastase inhibitor Substances 0.000 claims description 8
- 102100024580 L-lactate dehydrogenase B chain Human genes 0.000 claims description 7
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 claims description 7
- 102000018472 Type I Keratins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010091525 Type I Keratins Proteins 0.000 claims description 7
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims description 7
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 6
- 108010066370 Keratin-20 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010031374 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 claims description 6
- 101710133532 L-lactate dehydrogenase B chain Proteins 0.000 claims description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101000835745 Homo sapiens Teratocarcinoma-derived growth factor 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100026404 Teratocarcinoma-derived growth factor 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 4
- 108090000195 villin Proteins 0.000 claims description 4
- 102100029968 Calreticulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010089374 Type II Keratins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000007962 Type II Keratins Human genes 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 10
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 claims 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 claims 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 94
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 71
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 51
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 41
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 40
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 31
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 24
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 21
- 102100026745 Fatty acid-binding protein, liver Human genes 0.000 description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 20
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 20
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 20
- 101710188974 Fatty acid-binding protein, liver Proteins 0.000 description 19
- 101710189565 Fatty acid-binding protein, liver-type Proteins 0.000 description 19
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 19
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 description 18
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 17
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 16
- 102100026748 Fatty acid-binding protein, intestinal Human genes 0.000 description 16
- 108050008832 Fatty acid-binding protein, intestinal Proteins 0.000 description 15
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 14
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 14
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 13
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 13
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 102000004082 Calreticulin Human genes 0.000 description 11
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 11
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 11
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 11
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 10
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 10
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 8
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 8
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 8
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 8
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 7
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 7
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 7
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 7
- 108010003977 aminoacylase I Proteins 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 6
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 6
- 102100033420 Keratin, type I cytoskeletal 19 Human genes 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 6
- 108050002584 Septin 9 Proteins 0.000 description 6
- 102100029887 Translationally-controlled tumor protein Human genes 0.000 description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 229930192033 plastin Natural products 0.000 description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 6
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 6
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 7-[(6,8-dichloro-1,2,3,4-tetrahydroacridin-9-yl)amino]-n-[2-(1h-indol-3-yl)ethyl]heptanamide Chemical compound C1CCCC2=NC3=CC(Cl)=CC(Cl)=C3C(NCCCCCCC(=O)NCCC=3C4=CC=CC=C4NC=3)=C21 ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 description 5
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 108010036226 antigen CYFRA21.1 Proteins 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002052 colonoscopy Methods 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 108010030690 tissue polypeptide specific antigen Proteins 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 4
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 4
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 4
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 101001050473 Homo sapiens Intelectin-1 Proteins 0.000 description 4
- 102100023353 Intelectin-1 Human genes 0.000 description 4
- 102100033421 Keratin, type I cytoskeletal 18 Human genes 0.000 description 4
- 102100023972 Keratin, type II cytoskeletal 8 Human genes 0.000 description 4
- 108010066302 Keratin-19 Proteins 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 102100035182 Plastin-2 Human genes 0.000 description 4
- 102100035220 Plastin-3 Human genes 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 102100027336 Regenerating islet-derived protein 3-alpha Human genes 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 241000486679 Antitype Species 0.000 description 3
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 108010066327 Keratin-18 Proteins 0.000 description 3
- 108010070511 Keratin-8 Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 102100034671 L-lactate dehydrogenase A chain Human genes 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 3
- 102100036352 Protein disulfide-isomerase Human genes 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 101710157927 Translationally-controlled tumor protein Proteins 0.000 description 3
- 101710175870 Translationally-controlled tumor protein homolog Proteins 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150033839 4 gene Proteins 0.000 description 2
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000000541 Defensins Human genes 0.000 description 2
- 108010002069 Defensins Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000911317 Homo sapiens Fatty acid-binding protein, liver Proteins 0.000 description 2
- 101000608757 Homo sapiens Galectin-3 Proteins 0.000 description 2
- 101000653679 Homo sapiens Translationally-controlled tumor protein Proteins 0.000 description 2
- 101710183399 Keratin, type I cytoskeletal 19 Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108010088350 Lactate Dehydrogenase 5 Proteins 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 101001050478 Mus musculus Intelectin-1a Proteins 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 101710175687 Regenerating islet-derived protein 3-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000012060 Septin 9 Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000003040 circulating cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical group [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 2
- 108010087599 lactate dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007855 methylation-specific PCR Methods 0.000 description 2
- UAEPNZWRGJTJPN-UHFFFAOYSA-N methylcyclohexane Chemical compound CC1CCCCC1 UAEPNZWRGJTJPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 108040000983 polyphosphate:AMP phosphotransferase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002366 time-of-flight method Methods 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 2
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KFEUJDWYNGMDBV-UHFFFAOYSA-N (N-Acetyl)-glucosamin-4-beta-galaktosid Natural products OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 KFEUJDWYNGMDBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZXXZHONLFRKGG-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrachlorothiophene Chemical compound ClC=1SC(Cl)=C(Cl)C=1Cl WZXXZHONLFRKGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710128979 23 kDa piroplasm membrane protein Proteins 0.000 description 1
- FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- LKDMKWNDBAVNQZ-UHFFFAOYSA-N 4-[[1-[[1-[2-[[1-(4-nitroanilino)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 LKDMKWNDBAVNQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- MPVDXIMFBOLMNW-ISLYRVAYSA-N 7-hydroxy-8-[(E)-phenyldiazenyl]naphthalene-1,3-disulfonic acid Chemical compound OC1=CC=C2C=C(S(O)(=O)=O)C=C(S(O)(=O)=O)C2=C1\N=N\C1=CC=CC=C1 MPVDXIMFBOLMNW-ISLYRVAYSA-N 0.000 description 1
- 101710191936 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 101150054887 ALX4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700001666 APC Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024321 Alkaline phosphatase, placental type Human genes 0.000 description 1
- 102000018619 Apolipoproteins A Human genes 0.000 description 1
- 108010027004 Apolipoproteins A Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAKHGXRMXWHBX-ONEGZZNKSA-N Azoxymethane Chemical compound C\N=[N+](/C)[O-] DGAKHGXRMXWHBX-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000008638 COLARIS Methods 0.000 description 1
- 102100025805 Cadherin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 108090000617 Cathepsin G Proteins 0.000 description 1
- 102000004173 Cathepsin G Human genes 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 206010048832 Colon adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 102100034157 DNA mismatch repair protein Msh2 Human genes 0.000 description 1
- 230000009946 DNA mutation Effects 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241001269524 Dura Species 0.000 description 1
- 238000011891 EIA kit Methods 0.000 description 1
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 1
- 101710147220 Ent-copalyl diphosphate synthase, chloroplastic Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 102100028146 F-box/WD repeat-containing protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 101150024311 FABP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 1
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 1
- 102100040510 Galectin-3-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 101710197901 Galectin-3-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101100226596 Gallus gallus FABP gene Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101150107753 HHP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 238000012752 Hepatectomy Methods 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000793651 Homo sapiens Calreticulin Proteins 0.000 description 1
- 101001134036 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh2 Proteins 0.000 description 1
- 101001060245 Homo sapiens F-box/WD repeat-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101100066148 Homo sapiens FABP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000911337 Homo sapiens Fatty acid-binding protein, intestinal Proteins 0.000 description 1
- 101000994460 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 20 Proteins 0.000 description 1
- 101000975496 Homo sapiens Keratin, type II cytoskeletal 8 Proteins 0.000 description 1
- 101001010513 Homo sapiens Leukocyte elastase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 101001133081 Homo sapiens Mucin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000834948 Homo sapiens Tomoregulin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 206010022680 Intestinal ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 101710183663 Keratin, type I cytoskeletal 20 Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 101710115390 L-lactate dehydrogenase A chain Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- 206010023804 Large intestine perforation Diseases 0.000 description 1
- 108010028275 Leukocyte Elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000800524 Loxosceles intermedia Translationally-controlled tumor protein homolog Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010009254 Lysosomal-Associated Membrane Protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010009491 Lysosomal-Associated Membrane Protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038225 Lysosome-associated membrane glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 101001049056 Manduca sexta Fatty acid-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 208000032818 Microsatellite Instability Diseases 0.000 description 1
- 102100034263 Mucin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 101000851936 Mus musculus Endothelial PAS domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000972289 Mus musculus Mucin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100034681 Myeloblastin Human genes 0.000 description 1
- 108090000973 Myeloblastin Proteins 0.000 description 1
- KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N N-acetyllactosamine Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N 0.000 description 1
- HESSGHHCXGBPAJ-UHFFFAOYSA-N N-acetyllactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HESSGHHCXGBPAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 102100033174 Neutrophil elastase Human genes 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108050001581 Plastin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710197567 Protein LIFEGUARD 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100024094 Protein lifeguard 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101710094326 Ras-related protein R-Ras Proteins 0.000 description 1
- 206010038019 Rectal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010048829 Rectal adenoma Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical compound [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 108010079337 Tissue Polypeptide Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100026160 Tomoregulin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010005705 Ubiquitinated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 101001120215 Vipera ammodytes ammodytes Basic phospholipase A2 homolog ammodytin L Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-BJUDXGSMSA-N ac1l2y5h Chemical compound [18FH] KRHYYFGTRYWZRS-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002494 anti-cea effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001369 bisulfite sequencing Methods 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003167 cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 201000011047 colon mucinous adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021310 complex sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002322 conducting polymer Substances 0.000 description 1
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002484 cyclic voltammetry Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 229960001776 edrecolomab Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 102000055695 human FABP1 Human genes 0.000 description 1
- 102000047019 human FABP2 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006607 hypermethylation Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000003312 immunocapture Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 210000003963 intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010039 intracellular degradation Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000007654 ischemic lesion Effects 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 229940116871 l-lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical class [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- GYNNXHKOJHMOHS-UHFFFAOYSA-N methyl-cycloheptane Natural products CC1CCCCCC1 GYNNXHKOJHMOHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004650 oncogenic pathway Effects 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 201000004228 ovarian endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 108010031345 placental alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000512 proximal kidney tubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000007859 qualitative PCR Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 108700042226 ras Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 201000001281 rectum adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000003780 rectum adenoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012557 regeneration buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 210000001625 seminal vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical class [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- GEUFMGZEFYJAEJ-UHFFFAOYSA-N tris(2-methylpropyl)silicon Chemical compound CC(C)C[Si](CC(C)C)CC(C)C GEUFMGZEFYJAEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57419—Specifically defined cancers of colon
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/02—Preparation of hybrid cells by fusion of two or more cells, e.g. protoplast fusion
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
・このテストの主な欠点は、あまり良くない感受性であり、それは最もアデノーマ(前癌の形成異常病変)で顕著であり、そのサイズが大きい場合は、10のうち1の場合で癌の進行に結果としてなる。
・また、このテストはあまり特異的でない。糞便中の血液の出現は、潰瘍性大腸炎、痔核、瘻などの非腫瘍症状に関連する可能性がある。この場合、結腸鏡検査法による検査を行わなければならないが、以下に記載されている欠点を伴う。
・最後に、Hemoccult(登録商標)テストは解釈するのが困難である;従って、それらは資格のある適格なスタッフによって、専門施設で調べられなければならない。
CEAはフォローアップのために使われている。それは、感受性と特異性が不十分であるので、結腸直腸癌のスクリーニングに、又は早期診断のために使用できない。これは、このマーカーが他の種類の癌によって及び良性病変において発現されるためである。いろいろあるけれども、CEAと他の腫瘍マーカー(例えばCA19-9またはCA72-4)を組合わせることによって、特異性を失うことなしに感受性を増すことが可能である。
・Colopath(登録商標)/ColorectAlertMD(Ambriliaによって市販されている)は、CRCのための迅速で、比較的非侵襲的スクリーニングテストである。Colopath(登録商標)は結腸直腸の病的状態をもつ個体の直腸の粘液のプラスマローゲン(リン脂質の部分である複合脂質のクラス)を検出し、ColorectAlertMDは直腸の粘液のT抗原、複合糖類を検出する。Colopath(登録商標)/ColorectAlertMDテストは試験片に直腸の粘液の塗布することを含み、陽性または陰性の結果はシッフ反応に基づく。Ambriliaは1787個体を研究して、Colopath(登録商標)/ColorectAlertMDは早期ステージ結腸直腸癌の54%のケース及び全ステージを合わせて49%を検出することを証明した。
・COLARIS(Myriad Geneticsによって市販されている)は、血液で、遺伝性非腺腫性大腸癌(HNPCC症候群)をスクリーニングするためにMLH1及びMSH2遺伝子の突然変異を検出するテストである。試験の結果は3週で入手できる。Myriadは現在利用可能な最も感受性があり及び最も特異的なシークエンシング技術を使用する。当該テストは、高価である。
・DR-70(登録商標)(AMDLによって市販されている)は、様々な種類の癌(肺、結腸、胸部、肝臓、胃、その他)を検査するテストである。従って、CRCに特異的でない。当該テストの原理は、二重サンドイッチELISA技術(DR-70抗原の分析)に基づく。検出は、酵素反応(ビオチンとストレプトアビジンに結合する抗体)によって実施される。着色した反応は、癌の存在を示す。
したがって、本発明の第1の目的は、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4+配列番号5、配列番号6+配列番号7および配列番号8の配列のエピトープから選択されるエズリンエピトープに対する少なくとも1つの抗-エズリンモノクローナル抗体の使用して、結腸直腸癌を有することが疑われる患者から採取された生物試料、好ましくは腫瘍から離れた生物試料のエズリンの存在を決定することによる結腸直腸癌のインビトロ診断のための方法である。
また、本発明は、結腸直腸癌に関する早期診断、スクリーニング、フォローアップ治療と予後診断、及び再発診断の両方のための当該方法の使用に関する。
「エピトープ」なる用語は、少なくとも配列番号1から8に記載の配列、および考慮の配列の両側に、均一又は不均一に、あるいはただ一方に分配された多くとも10、8、6又は4つの付加アミノ酸を有するペプチド、更にそのアナログ及びホモログを意味することを目的とする。
通常は、「アナログ」なる用語は、修飾が抗原反応性を破壊されない限り、天然分子と比較して一つ以上のアミノ酸付加、置換(通常、性質に関して保存的)および/または欠失を呈する配列及び天然ポリペプチド構造を有するペプチドを指す。
特に好ましいアナログは、性質において保存的な置換、すなわちアミノ酸ファミリーにおいて起こる置換を含む。具体的には、アミノ酸は、通常4ファミリーに分けられる、すなわち、(1)アスパラギン酸及びグルタミン酸のような酸性アミノ酸、(2)リジン、アルギニン及びヒスチジンのような塩基性アミノ酸、(3)アラニン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン及びトリプトファンのような非極性アミノ酸、及び(4)グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン及びチロシンのような非荷電極性アミノ酸である。フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンは芳香族アミノ酸に分類される場合もある。例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンによる置換、アスパラギン酸のグルタミン酸による置換、又はスレオニンのセリンによる類似の保存的置換、あるいはあるアミノ酸の構造的に関連する他のアミノ酸による置換は、生物学的活性度に主要な影響を及ぼさないと合理的に予測されうる。当業者は、公知技術であるHopp/Woods及びKyte−Doolittleプロットを参考にして、変化を許容することができる興味のペプチド分子の領域を容易に決定する。
「相同性」なる用語は、2つのペプチド分子間のパーセンテージ同一性を意味することを目的とする。少なくとも60%、好ましくは少なくとも75%、より好ましくは80−85%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95−98%、あるいはペプチド分子の定義済みの長さ以上の配列同一性を呈する場合、2つのアミノ酸配列は互いに「実質的に相同」である。
「配列番号X+配列番号Yのエピトープ」なる表現は、エピトープが由来するタンパク質の2つの異なった部分から構成されるエピトープであって、このエピトープを認識する抗体はこれら2つの部分を認識しなければならないことを意味することを目的とする。この認識は、タンパク質の三次元構造で近接する配列に連結される可能性が高い。
「本発明の方法が実施される生物試料」なる表現は、興味がある腫瘍マーカーを含む可能性がある任意の生物試料を意味することを目的とする。腫瘍から離れていない生物試料の例として、腫瘍、この腫瘍の生検、リンパ節または患者の転移ガンに由来する組織のような固体試料、及びこれらの固体試料から精製された細胞を挙げることができる。腫瘍から離れた生物試料の例として、全血またはその派生物(例えば、血清または血漿、尿、唾液と滲出液、骨髄と糞便)のような体液及びこれらの体液から精製された細胞を挙げることができる。血液またはその派生物、更には糞便、滲出液及びこれらの液体試料から精製された細胞が好ましい。
− グループA:白血球エラスターゼ・インヒビター、アミノアシラーゼ1、肝臓脂肪酸結合タンパク質、腸脂肪酸結合タンパク質、アポリポタンパク質AI、アポリポタンパク質AII及びI-プラスチン、これらのマーカーのいくつかは新規マーカーであることが本出願人によって同定されている、
− グループB:付加的な診断の興味を有するマーカー、すなわち:β2-ミクログロブリン、プロテアソーム20S、ガレクチン-3、L-乳酸脱水素酵素B鎖、カルレティキュリン、再生膵島由来タンパク質3α、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー1、II型ケラチンCytoskeletal8、I型ケラチンCytoskeletal18、I型ケラチンCytoskeletal19、上皮カドヘリン、CEA、ビリン、CA19-9、CA242、CA50、CA72-2、テストステロン、TIMP-1、Cripto-1、インテレクチン-1、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、サイトケラチン20、翻訳的に制御された腫瘍タンパク質、(プロ)デフェンシン-A5、メチル化プロフィールについて特異的な修正を有する血液のDNA断片の検出、例えばAXL4遺伝子のメチル化DNA(aristaless様ホメオボックス4遺伝子メチル化)またはセプチン-9遺伝子のメチル化DNA、糞便DNA断片の特異的な修正の検出、例えば糞便DNAの特異的な変異、糞便DNAのメチル化プロフィールの特異的な修正、ヒト糞便のヘモグロビンの検出。
ビリンは、特許出願FR2581456において、結腸直腸癌の診断のための血液マーカーとして記載された。
正常な患者で決定される基準値と比較して、グループBから選択される腫瘍マーカーの濃度は、考慮されるマーカーに応じて、本発明の方法が実施される生物試料において増減される。
好ましくは、グループBの腫瘍マーカーは、マーカー:β2-ミクログロブリン、プロテアソーム20S、ガレクチン-3、L-乳酸脱水素酵素B鎖、カルレティキュリン、再生膵島由来タンパク質3α、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー1、上皮カドヘリン、CEA、CA19-9、テストステロン、TIMP-1、インテレクチン-1、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、サイトケラチン20、翻訳的に制御された腫瘍タンパク質、(プロ)デフェンシン-A5、及びヒト糞便のヘモグロビンの検出から選択される。
エズリンが常にタンパク質の形態で検出されることとは対照的に、エズリン以外の興味がある腫瘍マーカーは、タンパク質の形態で、またはメッセンジャーRNAの形態で、または対応するDNAの修正(突然変異またはメチル化の修飾)によって検出される。
生物試料において、興味がある「タンパク質」腫瘍マーカーの存在の決定は、当業者に知られている試料におけるタンパク質の存在を決定する任意の方法、例えばイムノアッセイを含む生化学検査によって、または質量分析法によって行われることができる。
生化学検査は、分子相互作用、すなわち前記腫瘍マーカーと前記腫瘍マーカーに特異的あるいは非特異的な一つ以上の結合性パートナーとの間の反応を含む当該分野の当業者に知られている任意のテストであってもよい。
好ましくは、生化学検査は、当業者に知られているイムノアッセイであり、腫瘍マーカー間の免疫反応を含み、それは抗原と一つ以上の特異的な結合性パートナー、すなわち、この抗原に向かう抗体である。
第1に、動物(通常はマウス)は興味がある腫瘍マーカーによって免疫化され、それにより前記動物のBリンパ球は前記抗原に対して抗体を生じることができる。続いて、これらの抗体産生リンパ球を、「不死の」ミエローマ(例えばマウス)と融合させ、それによりハイブリドーマを産生する。
次に、このように得られる細胞の異種混合物を使用して、特定の抗体を産生し、際限なく増殖することができる細胞の選抜を実施する。各々のハイブリドーマは、クローンの形で繁殖し、例えばELISAによって、一次元あるいは二次元のウエスタンブロットによって、免疫蛍光法によって、またはバイオセンサーによって、前記腫瘍マーカーに関する認識特性が試験されてもよいモノクローナル抗体の産生に結果としてなる。
特に、上で記載されているアフィニティークロマトグラフィ技術によれば、このように選択されたモノクローナル抗体は続いて精製される。
また、モノクローナル抗体は、当業者によく知られている技術によって、遺伝子工学によって得られた組換え抗体であってもよい。
抗-アミノアシラーゼ1抗体の例は知られており、特にAbnovaカタログの抗-アミノアシラーゼ1モノクローナル抗体のクローン4F1-B7(Cat.No.H00000095-M01)及びAbcamカタログのチキン抗-アミノアシラーゼ1ポリクローナル抗体(Cat.No.Ab26173)が入手できる。
抗-肝臓脂肪酸結合タンパク質抗体の例は知られており、特にAbcamカタログの抗-L-FABPモノクローナル抗体のクローン6B6(Cat.No.Ab10059)及びウサギ抗-L-FABPポリクローナル抗体(Cat.No.Ab7807)が入手できる。
抗-腸脂肪酸結合タンパク質抗体の例は知られており、特にR&Dシステムカタログの抗-I-FABPモノクローナル抗体のクローン323701(Cat.No.MAB3078)及びAbcamカタログのウサギ抗-I-FABPポリクローナル抗体(Cat.No.Ab7805)が入手できる。
抗-アポリポタンパク質AI抗体の例は知られており、特にBiodesign Meridian Life Sciencesカタログの抗-Apo AIモノクローナル抗体のクローン4A90(Cat.No.H45402M)及びヤギ抗-Apo AIポリクローナル抗体(Cat.No.K45252P)が入手できる。
抗-アポリポタンパクAII抗体の例は知られており、特にUS Biologicalカタログの抗-Apo AIIモノクローナル抗体のクローン1402(Cat.No.A2299-31C)及び特にBiodesign Meridian Life Sciencesカタログのヤギ抗-Apo AIIポリクローナル抗体(Cat.No.K74001P)が入手できる。
抗I-プラスチン・ポリクローナル抗体の例は知られており、特にサンタクルスバイオテクノロジーカタログにおいて入手できる。ウサギ・ポリクローナル抗体H 300(Cat.No.sc-28531)はI-プラスチン、L-プラスチン及びT-プラスチンと反応する。本出願人はI-プラスチンに対するモノクローナル抗体を開発した。
抗-β2ミクログロブリン抗体、抗-CEA抗体、抗-CA19-9抗体及び抗テストステロン抗体の例が知られており、特に出願人のアッセイキット、それぞれVidas(登録商標)β2-ミクログロブリン、Vidas(登録商標)CEA、Vidas(登録商標)CA19-9TM及びVidas(登録商標)テストステロンが使用される。
抗プロテアソーム20Sの抗体の例は知られており、親和性研究用製品カタログにおいて特に入手できる。
抗-ガレクチン-3抗体、抗-L-乳酸脱水素酵素B鎖抗体、抗-カルレティキュリン抗体、抗腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー1抗体、抗-II型ケラチンCytoskeletal8抗体、抗-I型ケラチンCytoskeletal18抗体、抗-I型ケラチンCytoskeletal19抗体、抗-上皮カドヘリン抗体、抗-ビリン抗体及び抗-TIMP-1抗体は知られており、特にAbcamカタログにおいて入手できる。
抗-再生膵島由来タンパク質3α抗体の例は知られており、特にDynabioアッセイキット(La Gaude、フランス)が使われる。
抗-CA242抗体、抗-CA50抗体及び抗-CA72-4抗体の例が知られており、特にFujirebioカタログにおいて入手できる。
抗-インテレクチン-1抗体の例は知られており、アレクシス・バイオケミカルズ・カタログの抗-インテレクチン-1モノクローナル抗体のクローンSaly-1(Cat.No.ALX-804-850-C100)及びウサギ抗-インテレクチン-1ポリクローナル抗体(Cat.No.ALX-210-941)が入手できる。
抗タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ抗体の例は知られており、特にAbcamカタログの抗-PDIモノクローナル抗体のクローンRL77(Cat.No.Ab5484)及びウサギ抗-PDIポリクローナル抗体(Cat.No.Ab3672)が入手できる。
抗-サイトケラチン20抗体の例は知られており、特にAbcamカタログにおいて、抗-サイトケラチン20モノクローナル抗体のクローンKs20.8(Cat.No.Ab962)及びウサギ抗-サイトケラチン20ポリクローナル抗体(Cat.No.Ab36756)が入手できる。
抗-TCTP抗体の例は知られており、特にAbnovaカタログにおいて、抗-TCTPモノクローナル抗体のクローン3C7(No.157H00007178-M01)及び抗-TCTPポリクローナル抗体(Cat.No.157H00007178-A01)が入手できる。
抗-デフェンシン-A5抗体の例は知られており、特にサンタクルス生物工学カタログにおいて、抗-デフェンシン-A5モノクローナル抗体のクローン8C8(Cat.No.sc-53997)及びAlpha Diagnosis International 社カタログのウサギ抗-デフェンシン-A5ポリクローナル抗体(Cat.No.HDEFA51-A)が入手できる。
免疫反応、すなわち腫瘍マーカー/結合性パートナー結合の視覚化は、検出(例えば直接的または間接的な方法)の任意の方法によって実施されてもよい。
直接的検出、すなわち標識の包含なしの場合、免疫反応は、例えば表面プラスモン共鳴によって、または導電性ポリマーを有する電極上のサイクリックボルタンメトリーによって観察される。
間接的検出は、関心のある腫瘍マーカー自身の又は「検出試薬」結合パートナーのどちらかの標識によって実施される。後者の場合は、これは競合方法として記載されている。
「標識化」なる表現は、直接的または間接的に検出可能なシグナルを生じることができる標識試薬の付加を意味することを目的とする。
・比色法、蛍光または発光によって検出可能なシグナルを生じる酵素、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β‐ガラクトシダーゼまたはグルコース‐6‐リン酸デヒドロゲナーゼ;
・蛍光または発光化合物、染料のような発色団;
・32P、35Sまたは125Iのような放射性分子、及び
・アレクサまたはフィコシアニンのような蛍光分子
を含む。
これらの間接的な検出システムは、特定の条件下でシグナルの増幅を生じることができる。このシグナル増幅技術は当業者にとって周知であり、本出願人により先の特許出願FR98/10084またはWO-A-95/08000又はChevalier等(文献59)の論文を参照することができる。
使用する標識の種類に応じて、当業者は、標識を視覚化することを可能にする試薬を添加する。
また、質量分析法が、体液において、本発明の方法で求められる腫瘍マーカーを検出するために使用されてもよい。スペクトロメトリーの原理は、当業者に広く知られており、例えばPatterson,S(文献60)に記載されている。
これを行うため、生物試料(前処理されていても、いなくでもよい)は質量分析計に通され、得られたスペクトルは本発明の方法で求められる腫瘍マーカーのそれと比較される。試料の前処理の例は、それを本発明の方法で求められる腫瘍マーカーのための結合パートナーのうちの一つ、例えば本発明の方法で求められる腫瘍マーカーに向かう抗体、を含む免疫捕捉支持体の上に通すことを含む。試料の前処理の他の例は、試料のタンパク質類を互いに分離するための、生物試料の前分画であってもよい。当業者によく知られている技術において、試料中の優勢なタンパク質は、例えば、まず第一に除去されてもよい。
抗-エズリン抗体の例は知られており、例えばAbcamカタログのウサギ抗-エズリンポリクローナル抗体、Cat.No. b47418で、特に入手できる。
本発明の一実施形態によれば、本発明の方法は2つのモノクローナル抗体を使用し、好ましくは配列番号1の配列のエピトープに対する少なくとも1つの抗-エズリンモノクローナル抗体、及び配列番号2、配列番号4+配列番号5及び配列番号6+配列番号7の配列のエピトープから選択されるエズリンエピトープに対する少なくとも1つの他のモノクローナル抗体である。より好ましくは、本発明の方法は、配列番号1の配列のエピトープに対する少なくとも1つの抗-エズリン抗体及び配列番号4+配列番号5の配列のエピトープに対する少なくとも1つの他の抗体である。
さらに、本発明の方法が免疫組織化学である場合、配列番号2の配列のエピトープに対する少なくとも1つの抗-エズリンモノクローナル抗体を使用することが好ましい。これは本発明の特定の実施態様を構成する。
生物試料において、興味がある「mRNA」腫瘍マーカーの存在の決定は、試料中のmRNAの存在を決定する任意の方法、すなわちmRNAの直接的検出またはmRNAの間接的検出、または試料中のmRNAの存在を決定する任意の方法であって当業者に知られている方法によって、実施されてもよい。
「mRNAの直接的検出」なる表現は、生物試料においてmRNA自体を証明することを意味することを目的とする。
生物試料のmRNAの直接的検出は、例えば好ましくはPCRまたはNASBA技術によって増幅後、mRNAに特異的な結合パートナーとのハイブリダイゼーションによって、当業者に知られている任意手段によって実施されてもよい。
この増幅反応は当業者にとって周知であり、以下の技術を特に挙げることができる:
−US特許第4683195号、US4683202、及びUS4800159に記載されている、PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)
−特許出願WO91/02818の、NASBA(核酸配列に基づいた増幅)、及び
−US特許第5399491号の、TMA(転写媒介増幅)。
特に、多数のプローブを固定することができるバイオチップを、支持体として使用してもよい。支持体へのプローブの固定もまた当業者に知られており、直接移動、マイクロ蒸着、インサイツ合成及びフォトリソグラフィーによるプローブの配置を挙げることができる。
生物試料において、興味がある腫瘍マーカーをコードする遺伝子における、DNA修飾又は変異の証明は、試料中におけるDNA修正を決定する任意の方法、すなわち突然変異の直接的検出、又は興味のある遺伝子座のメチル化プロフィールの修正の証明、又は試料中のDNA修正を決定するための、当業者に知られている他の任意の方法によって実施されてもよい。
突然変異を証明するためのストラテジーは、分子生物学的技術に基づいており、DNA抽出、PCR又は他の増幅技術による増幅、ハイブリダイゼーションおよび/またはシークエンシング工程を含む。結腸直腸癌の場合、以下の方法は、糞便DNAの突然変異を検出するために成功裏に使用される:沈殿によるDNA濃縮、磁気ビーズ上の捕捉オリゴヌクレオチドを使用した標的の濃縮、興味がある遺伝子のPCR増幅、点突然変異を同定するための固相シークエンシング(文献64)。欠失は、予想される基準断片と変異した断片のサイズの違いに関して同定された。Imperiale等(文献64)は、K-ras、APCとp53遺伝子に位置する21突然変異のパネルを記載しており、それは浸潤性の癌の16/31を検出することを可能にする。
前述のように、DNA修正は、また、興味がある腫瘍マーカーに対応する遺伝子のメチル化プロフィールの修飾に相当してもよい。メチル化プロフィールの修飾は、低メチル化(メチル化の数が減少する)にまたはハイパー・メチル化(メチル化の数が増加する)に相当してもよい。修正された部分は、興味のある腫瘍マーカーの遺伝子のコード部分に、又は転写プロモーター領域又は転写終止領域のような5’及び3’非コード部分に位置していてもよい。
本発明の方法において、少なくとも2つのマーカーを検出する場合、それらは、例えば異なるイムノアッセイ測定を使用して別々に、あるいはマルチプレックスアッセイにおいて同時に証明されてもよい。
本発明の方法において、異なる性質の2つのマーカー、例えばタンパク質マーカー及びmRNAマーカーが検出される場合、上記の方法から選択される2つの異なる検出方法が使用されてもよい。特許出願WO03/104490に記載したように、それらは同じ検出媒質で、同じ反応条件下で、同時に検出されてもよい。この特許出願に記載されている検出方法の工程は、少なくとも1つの核酸および少なくとも1つの異なる性質の他のリガンドからなる標的分析物を含む試料中のハイブリダイゼーションと免疫反応を同時に検出することを含んでなり:
(i)反応バッファーで希釈された試料の既知の体積量を、前記標的分析物についての捕捉パートナーであって、少なくとも一つの核酸プローブ及び少なくとも1つの抗リガンドを含む前記捕捉パートナーでプレコートした捕捉表面上に置くこと、
(ii)15℃と60℃との間の温度で反応させること、および
(iii)このようにして得られたハイブリダイゼーションと免疫反応を明視化することを含む。
生物試料は、特別な処理を必要としてもよい。なぜなら、それは、本発明の方法で求められる腫瘍マーカーを含んでいるか、あるいは本発明の方法で求められるマーカーを含む循環腫瘍細胞および/または本発明の方法で求められるマーカーを分泌することができる循環腫瘍細胞を含んでいる可能性があるためである。
したがって、本発明のある実施形態によれば、生物試料は、前記液体に含まれる循環腫瘍細胞を分離するために前処理される。
「循環腫瘍細胞を分離する」なる表現は、循環腫瘍細胞が濃縮された細胞分画を得ることを意味することを目的とする。
循環腫瘍細胞を分離するための生物試料の処理は、フロー・サイトメーターの細胞選別によって、フィコール上の濃縮によって、特異的抗体で覆われた磁気ビーズによる濃縮によって、または当業者に知られている特異的な濃縮法の任意の方法によって実行されうる。
本発明の方法で求められる腫瘍マーカーの検出は、次にサイトスピンによってスライド上に循環腫瘍細胞を付着させた後に、例えば本発明の方法で求められる腫瘍マーカーに対する抗体により、これらの細胞の免疫細胞化学的な標識化することによって、生物試料から分離される循環腫瘍細胞を使用して直接的に行うことができる。本発明の方法で求められる腫瘍マーカーの検出は、また、Metezeau等(文献69)に記載されているフローサイトメトリー法を使用して、循環腫瘍細胞において、直接的に実施されてもよい。
これらの条件下では、前記循環細胞は、本発明の方法で求められる腫瘍マーカーを前記細胞内部で遮断することを可能にする条件で処理されることができる。このような処理は、Mathieu等(文献70)によって記載されている。
本発明の方法で求められる腫瘍マーカーの検出は、本発明の方法で求められるマーカーのための結合パートナー特異的な侵入を可能にするために細胞膜を透過可能にようにした後に行われる。
(i)前記細胞の量を前記腫瘍マーカーに特異的な少なくとも一つの結合性パートナーが取り付けられた培養表面の底に置くこと、
(ii)前記腫瘍マーカーが放出又は分泌されるような条件下で前記細胞を培養し、培養表面の底に免疫的に捕捉すること、
(iii)洗浄によって細胞を取り除くこと、
(iv)前記腫瘍マーカーに特異的な少なくとも一つの標識されたコンジュゲートを加えること、および
(v)このように得られた標識を明視化すること
を含む。
腫瘍マーカーの放出または発現のための培養条件は、37℃、湿潤雰囲気下及び5%CO2のような通常の条件である。
また、生物試料が固体試料である場合、腫瘍マーカーの存在は、腫瘍のインビボ、インサイツで証明されてもよい。
インビボの腫瘍において腫瘍マーカーの存在を示すために、当業者に知られている任意のイメージング方法が使用されてもよい。このために、前記腫瘍マーカーの結合パートナーは、イメージング・トレーサーに結合されてもよい。
「結合パートナーをイメージング・トレーサーに結合させる」なる用語は、当業者に知られている任意のイメージング方法によって検出され、直接的または間接的に検出可能なシグナルを生じることができるトレーサーの付加を意味することを目的とする。したがって、トレーサーは、テクネチウム-99のような放射性トレーサーであってもよい。この場合、原発癌または転移癌を有する器官は、腫瘍マーカーとそのトレーサーを結合する。器官によって放出される放射線は、特別なカメラ(例えばガンマ線カメラ)で撮影されうる。計測器は、放射性物質によって生成されるシンチレーションを収集して、これにより器官を視覚化することを可能にする。
本発明の他の方法において、トレーサーは、ポジトロンを放出する放射性物質(フッ素18)を含んでもよい。画像は、それからポジトロンエミッショントモグラフィーシステムによって得られる。
インビボで腫瘍マーカーの検出を可能にする本発明の方法によって、腫瘍マーカー、癌、特に結腸直腸癌を生じている腫瘍マーカーに結合パートナーの結合があった体の部位、更にはそれらの遠隔転移癌と関連しているリンパ節の局在は、視覚化されることができる。
癌細胞だけがエズリンを分泌し、この産生は癌の悪性度に依存するので、本発明の方法が早期診断だけでなく、結腸直腸癌に関するスクリーニング、フォローアップ治療、予後診断及び再発診断のためにも用いられることができる。それは本発明の別の課題を構成する。
更に、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4+配列番号5、配列番号6+配列番号7又は配列番号8の配列を有する本出願に記載されているエピトープは、新規であり、本発明の中で他の課題を形成する。
1. cDNA増幅とクローニング
FCS(ウシ胎仔血清)なしに、Caco-2結腸直腸癌株を、2mMのL-グルタミンを含むDMEM培地中で培養した(全てギブコ)。
LEI、L-FABP及びGal-3遺伝子のクローニングの場合、メッセンジャーRNAを、インビトロゲンFastTrack2.0キット(Cat.No.45-0019)を使用して、108のCaco-2細胞のペレットから、製造業者によって供給されたプロトコルに従って抽出した。逆転写とPCR工程は、プラチナTaq DNAポリメラーゼ酵素を使用しているスーパースクリプトIII ワンステップRT-PCRシステム・キット(インビトロゲン Cat.No.12574-018)で、製造業者によって供給されるプロトコルに従って、450ngのCaco-2 mRNAを使用する一工程で実施した。遺伝子増幅のために使用するPCRプライマーを、表1に示す。
表1
得られたDNA断片は、Bsm BI及びXbaIで消化後、TAクローニング・キット(インビトロゲンCat.No.K4520-01)のベクターpCR2.1 TOPO(LEI及びGal-3)又はOrigene社のベクターpCMV6-XL4(L-FABP)にクローニングした。プラスミドは、cDNAが実際に期待される配列に合うことを確認するために配列決定された。
アミノアシラーゼ1をコードする遺伝子のクローニングの場合は、キアゲンのRNA Easy Miniキットを使用して、製造業者によって供給されるプロトコルに従って、108のCaco-2細胞のペレットから抽出した。逆転写は、スーパースクリプトII酵素(インビトロゲン)で、製造業者によって供給されるプロトコルに従って、10ngのCaco-2 RNAを使用して実施した。逆転写プライマーは、オリゴ(dT)である。
この反応由来のcDNAは、AccuPrime Pfxキット(インビトロゲン Cat.No.12344-024)を使用して、製造業者によって供給されたプロトコルに従って、PCR反応のテンプレートとして使用した。PCRプライマーは、次の通りであるACY-1 Fwd2(配列番号15:5’−GCGAATTCTTTAAGAAGGAGATATACATATGACGAGCAAAGGTCCGGAAGAGGAGCACCCATCG−3’)および、ACY-1 Rev(配列番号16:5’−GCAAGCTTCAGCTGTCACTGGGCAGGGC−3’)。
これらの条件下では、Zero Blunt TOPO PCRクローニング・キット・タイプのクローニングベクターにクローニングされた1.3kbの断片を増幅することが可能である(インビトロゲン Cat.No.K2820-20)。このプラスミドは、cDNAが実際に期待される配列にあっていることを確認するために配列決定された。
I-FABP翻訳領域を含む以下のDNA断片(配列番号17)を、Geneart社によって実施された化学合成によって得た。
配列番号17:
GGTACCGAATTCCGCGTTTGACAGCACTTGGAAGGTAGACCGGAGTGAAAACTATGACAAGTTCATGGAAAAAATGGGTGTTAATATAGTGAAAAGGAAGCTTGCAGCTCATGACAATTTGAAGCTGACAATTACACAAGAAGGAAATAAATTCACAGTCAAAGAATCAAGCGCTTTTCGAAACATTGAAGTTGTTTTTGAACTTGGTGTCACCTTTAATTACAACCTAGCAGACGGAACTGAACTCAGGGGGACCTGGAGCCTTGAGGGAAATAAACTTATTGGAAAATTCAAACGGACAGACAATGGAAACGAACTGAATACTGTCCGAGAAATTATAGGTGATGAACTAGTCCAGACTTATGTGTATGAAGGAGTAGAAGCCAAAAGGATCTTTAAAAAGGATTCTAGAGTCGACGAGCTC.
LEIおよびガレクチン-3をコードする遺伝子は原核生物の発現ベクターpMR78(文献71)にサブクローニングし、L-FABP遺伝子はベクターpET3d(New England Biolabs)にクローニングした。クローニングのために必要な制限サイトは、テンプレートとして、プラスミドpCR2.1 TOPO-LEI、pCR2.1 TOPO-Gal-3およびpCMV6-LFABPを使用して導入された。PCR酵素はプロメガPfu DNAポリメラーゼであり、PCR反応は製造業者の指示により、表2に示されるプライマーで実施した。
表2
LEIまたはガレクチン-3をコードする翻訳領域を含むPCR産物は、EcoRIおよびHindIII制限酵素で消化した。断片は、同じ酵素(プラスミドpMR-LEIおよびpMR-Gal-3)によって制限されたベクターpMR78に導入された。ベクターpMR78はタンパク質が発現されるフレームで6-ヒスチジン配列を含み、それは金属キレート・アフィニティークロマトグラフィーによって精製されることができる。L-FABP PCR産物は、ベクターpET3dに、NcoIおよびBamHI制限サイトで、クローニングした。
アミノアシラーゼ1の場合、TOPOクローニングベクターはacy1翻訳領域を含む1.3kb断片をつくるためにEcoRIおよびHindIIIによって直接消化され、ベクターpStaby1(Eurogentec)に導入された。組換えプラスミドは、pStaby1-ACYと呼ばれている。
I-FABPの場合、Geneart社によって提供されるクローニングベクターはコード配列を含むほぼ400bpの断片を生成するためにEcoRIおよびSalI制限酵素によって消化され、それはベクターpMRCH79(ビオメリューのベクターpMR78に由来する)に導入された。組換えプラスミドは、pMRCH-IFABPと呼ばれている。
GST(グルタチオンSトランスフェラーゼ)と融合されたエズリンおよびI-プラスチンをそれぞれ発現することができるプラスミドpGEX-エズリンおよびpGEX-I-プラスチンはキュリー研究所から提供された。
組換え腫瘍マーカーを産生するための発現プラスミドは、大腸菌BL21バクテリアと派生株(ストラタジーン)に導入される。培養は、振盪により周囲温度で実行される。各々のタンパク質のための正確な培養条件を表3に示す。IPTGは、イソプロピル-β-D-1-チオガラクトシダーゼである。
バクテリアのペレットは、2×PBS(リン酸緩衝生理食塩水)バッファーに溶解され、1.5kbarで、細胞分離器にかけた(コンスタントシステム)。溶菌液は、3000g、4℃で30分間遠心分離される。上澄は可溶性タンパク質を含む。ペレットは、封入体を含む。封入体を可溶化するためのバッファーは、タンパク質によって決まる。
LEIの場合、精製は、5mLのNi-NTA-セファロース樹脂(キアゲン)を含むカラムにより、可溶性分画を使用して実行され、タンパク質は450mMのイミダゾール(pH7.5)を含む2×PBSによって溶出した。
ガレクチン-3の場合、封入体は1Mの尿素を含む2×PBSに溶解されて、5mLのNi-NTA-セファロース樹脂(キアゲン)に通され、Gal-3タンパク質は450mMのイミダゾールと1Mの尿素を含む2×PBS(pH7.5)によって溶出した。
L-FABPの場合、精製は、Macherey-NagelのNi IDAキットで、可溶性分画を使用して実行される。
表3
GST-エズリンの場合、精製は、GSTアフィニティークロマトグラフィーによって、8Mの尿素と10mMのDTTを含む100mMのトリスバッファーに溶解された封入体を使用して実行される。5mlのグルタチオン・セファロース4ファストフローゲル(アマシャム)を含むカラムが用いられる。平衡化と洗浄バッファーは、0.05%トゥイーン20含有2xPBSである。溶出バッファーは、20mMの還元グルタチオン(pH8)を含む50mMのTris-HClである。
アミノアシラーゼ1の場合、培養の可溶性分画はアマシャムHiTrap Q FFカラムに通され、ACY-1タンパク質は0.3MのNaCl(pH7.5)によって溶出した。いくつかの他のタンパク質がこれらの条件下で共に溶出されたので、疎水性相互作用カラム(HIC Phenyl HP、アマシャム)における精製を行った。ACY-1タンパク質は、0.5MのNaCl(pH7)によって溶出した。
組換えGST-I-プラスチン・タンパク質は、精製された形態でキュリー研究所によって提供された。組換えカルレティキュリン・タンパク質は、工業用プロテウスサービス社(ディジョン、フランス)から提供された。カルレティキュリンをコードしている配列は、化学合成によって得られた。
1. 動物モデル
免疫化実験は、最初の免疫化時に6〜8週であった雌のBALB/c(H-2d)マウスで行った。
2. 免疫原および免疫化
マウスで得られた免疫反応を増強して、モノクローナル抗体を生成することを可能にするために、腫瘍マーカーは実施例1に記載されている手順に従って、組換えタンパク質の形態で産生された。LDHタンパク質は、SciPac社(Cat.No.103-133)から得られた。これらのタンパク質は、良好な免疫原性の能力を有することが知られている油中水型乳剤の形で調製されたフロイントアジュバント(シグマ)と、同体積により混合された。3匹のマウスは、各々の腫瘍マーカーで免疫化された。マウスは、10μgの免疫原を、0、2および4週に3回連続して投与された。全ての注射は、皮下に行われた。最初の注射は完全フロイントアジュバントとの混合物として与えられ、次の2回は不完全フロインドアジュバントとの混合物として与えられる。最初の注射後D50とD70との間に、100μgの組換えタンパク質の静注によって、体液性応答は再刺激された。
抗体の出現を監視するために、血液サンプルは定期的にマウスから採取される。抗腫瘍マーカー抗体の存在は、ELISAを使用して試験される。興味があるタンパク質が、捕捉(1μg/ウェル)のために用いられる;飽和の後に、抗原は、テスト血清のさまざまな希釈物と反応させられる(37℃で1時間のインキュベーション)。血清に存在する特異的抗体は、アルカリホスファターゼ(H+L、ジャクソンイムノリサーチ、Cat no.115-055-146)にコンジュゲートされており、求める抗体と結合するAffiniPureヤギ抗マウスIgG抗体によって検出される(0.1μg/ウェル)。
最後の注射の3日後に、各腫瘍マーカーごとに、免疫マウスのうちの1匹を解剖した。血液および脾臓が取り出された。KohlerおよびMilstein(文献72、73)によって記載されたプロトコルに従って、脾臓から得られた脾細胞は、バラバラにされ、不死化するために、Sp2/0-Ag14ミエローマ細胞によって培養された。
12−14日のインキュベーション期間の後に、得られたハイブリドーマの上澄は、この実施例のポイント3に記載されたELISAアッセイを使用して、抗-腫瘍マーカー抗体の存在を決定するためにスクリーニングされた。免疫原としてGST融合タンパクが使われた場合、GSTに向かうクローンは、捕捉のために、連結していないGSTを有するELISAスクリーニングを実行することによって除去される。陽性のハイブリドーマ・コロニーは、当業者にとって周知である限界希釈法技術に従って、二回サブクローンをつくった。
さまざまな腫瘍マーカーに対して得られたモノクローナル抗体のリストを表4に示す。これらのモノクローナル抗体は、ウェスタン・ブロット法によって分析された。
Caco-2およびHT-29株の細胞培養抽出物は、8.3Mの尿素と2Mのチオ尿素と4%の3-[(3-コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]-1-プロパンスルホナート (CHAPS)と100mMのDTTと2%のセルバライト 4-9(Serva、ハイデルベルク、ドイツ)と0.1g/lのオレンジGの水溶液の600μlで直接溶解し、次にNuPAGE Novexゲル試料調整プロトコル(インビトロゲン)に従って処理した。
組織の抽出物を得るために、患者GHBD001、GHBD004およびCLSP109の腫瘍と粘膜生検をメスで切り出し、次に2.5mMのEDTAとプロテアーゼインヒビター(錠剤、ロシュ)を含む1mlのPBSバッファーで50-μm Mediconsを使用するMedimachineシステム(ベクトン・ディキンソン)において、10サイクルの抽出にかけた。これらの細胞懸濁液の10mlをプールし、25mlにし、次に600gで15分間遠心分離した。上澄が、NuPAGE Novexゲル試料調整プロトコルに従って処理された組織抽出物に該当する。最終全タンパク質濃度0.4mg/mlに濃縮された試料が使用される。デポジット体積は、MOPS泳動バッファーのNuPAGE Novexビス‐トリス4−12%ゲル上にウェルごとに20μlである。泳動(200V、1時間)およびPVDF膜(400mA、45分間)上への移動後、移動の質はアミドブラックによる染色法によって評価される。
膜は、1時間の周囲温度で、TNT(15mMのトリス、0.14MのNaCl、0.5%トゥイーン20、pH8)の溶液において5%脱脂乳(Regilait)で飽和する。飽和後、膜は、飽和溶液で10μg/mlに希釈されたさまざまなテスト抗体で1時間インキュベートされる。TNTでリンスした後、膜は、飽和溶液で1:5000まで希釈された抗-マウス-西洋わさびペルオキシダーゼ(Cat No.115-035-062,ジャクソンイムノリサーチ)のコンジュゲートと共に、周囲温度で1時間インキュベートされる。リンス後、発現は、Substrate Supersignal West Dura Extendedキット(Cat No.34076,Pierce)により、使用に推奨された情報に従って実施する。
膜上の化学発光シグナルは、Biorad社のVersaDocイメージングシステムによって測定された。ウエスタンブロットのイメージに基づいて、さまざまな腫瘍マーカーに該当するバンドの体積は、QuantityOneソフトウェア(バイオラド)によって数値を求められた。体積は、バンドの表面積によって増大する化学発光シグナルの強度に該当する。
ウェスタンブロッティング結果は表5に示す。それは、試験されるさまざまな試料に関して、ウェスタン・ブロット解析における、興味がある腫瘍マーカーに対応するバンドの体積を与える。これらの結果は、試験される腫瘍マーカーがCaco-2およびHT-29大腸癌株で実際に発現していること、および患者から得られた腫瘍および粘膜の抽出物で示されるように組織においても実際に発現していることを示す。試料上の抗体によって得られたシグナルの強度は、他の試料および同じ抗体によって得られたシグナルと比較することができる。使用する技術は、組織(非遠隔試料)中のマーカーの有無、およびマーカーについての抗体の特異性を確認することを可能にする。この技術は、遠隔試料のこの実施例においては使用されなかった。
遠隔試料中の腫瘍マーカーの有無に関して結論を出すことができず、また前記腫瘍マーカーの濃度が前記試料において増減するかどうかについても決定できないためである。さらに、使用する実験スキームは、1つの抗体の反応性をもう一方と比較することを可能にするものではない。
患者GHBD004において、8C8C5抗体は、I-プラスチンに相当するバンドを光らせないか、又は非常に弱く光らせた。これらの試料のI-プラスチンの存在は、例えば、ブロッティングのI-プラスチンに対してより良い親和性を有する8G2D2抗体を使用して証明されてもよい。
I-プラスチンが70%以上の相同性を有する2つの他のイソフォーム(L-プラスチンとT-プラスチン)を含むタンパク質のファミリーのメンバーであるので、GST-プラスチン-LとGST-プラスチン-Tタンパク質(キュリー研究所によって提供された)に関するそれらの反応性について、得られたモノクローナル抗体の全てのクローンを試験した。このスクリーニング終了後、ファミリーの他のメンバーと交差反応性を何ら呈しないクローン3D11D10、8C8C5、3A3H2および8G2D2を選択した。これらの抗体は、I-プラスチン・イソフォームに実際に特異的である。
6.1.方法論
Frank及びDoring(文献73)に従って適用されるSpotscan技術は、セルロース膜に付着した多数のペプチドを同時に合成することを可能にする。これらのペプチドは、1から4残基がオーバーラップした8から12つのアミノ酸のペプチドの形態において標的抗原の配列を再生産する。次に、これらのペプチドは、ブロットタイプの比色テストにおいて、研究される抗体と接触させられ、免疫反応性ペプチドの同定は抗体エピトープの最小限の配列を導き出して、抗原上にそれを正確に置くことを可能にする。
合成は、鎖の末端にNH2官能基を有する長さの8から10単位のポリエチレングリコール(PEG)のアームを均一に担持するセルロース膜の上で実施される。ペプチドのC末端エンドからN端子エンドまで起こる。アミノ酸のアミノ官能基はFmoc(9−フルオレニルメチルオキシカルボニル)基によって保護されており、さらに合成の間に反応することができる前記アミノ酸の側鎖はトリチル、t−ブチルまたはt−ブチル・エーテル基によって保護されている。アミノ酸ストック液は、0.5MのHOBt(ヒドロキシベンゾトリアゾール)を含むNMP(N−メチルピロリドン)中に0.33Mの濃度で調製される。アミノ酸はAsp222が自動化装置(Abimed、Langenfeld、ドイツ)を使用してデポジットされ、AutoSpot XLソフトウェアによって制御される。この自動化装置の使用は、96スポットの膜を4枚まで、すなわち384ペプチドを同時に生産することを可能にする。
1回のアミノ酸カップリングサイクルの場合、自動化装置は、0.7μlの即座に活性化されたアミノ酸を膜上にデポジットすることができる(アミノ酸ストック液の3体積につき、NMPに希釈された1.1Mのジイソプロピルカルボジイミド溶液を1体積)。このデポジットが二回繰り返され、次に膜はDMF(N,N−ジメチルホルムアミド)でリンスされる。次に、不全の又は切断されたペプチドの出現を妨げるために、反応しなかったNH2基は10%無水酢酸のDMF溶液で10分間、4から6回インキュベーションによってアセチル化される。DMFで2分間3回洗った後に、20%ピペリジンのDMF溶液で5分間インキュベートによって、アミノ酸のアミノ官能基を保護しているFmoc基を切断する。DMFで4回洗った後に、スポットはDMFのブロムフェノールブルーの1%溶液を使用して着色し、次に膜はメタノールで3回リンスし、次のカップリングサイクルの前に外気中で乾燥する。
プロトコルは、各々の新規なアミノ酸の追加のために繰り返される。最後のアミノ酸をカップリング後に、ペプチドは全ての遊離NH2基をブロックし、したがって他のアミノ酸の追加を妨げるために、アセチル化される。次に全てのペプチドの側鎖は、1時間のトリフルオロ酢酸/ジクロロメタン/トリイソブチルシラン(5:5:0.3)の漕において膜をインキュベーションすることによって、脱保護される。次に、ジクロロメタンで4回、DMFで3回及びメタノールで3回リンスし、外気で乾燥させ、免疫検出まで−20℃で保管される。
再生により、抗体を除去することができ、コンジュゲートはペプチドと結合することができる。したがって他の抗体について免疫反応性の更なるテストを実施することが可能となる。膜は、各々10分間の連続した洗浄を受ける:蒸留水による1回の洗浄、DMFの6回の洗浄、バッファーA(8Mの尿素、35mMのSDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、0.1%のβ-メルカプトエタノール)による3回の洗浄、再生バッファーB(4:5:1の蒸留水/エタノール/酢酸)による3回の洗浄、次にメタノールによる2回の洗浄。膜は外気でそれで、20°Cで保存される前に、戸外において乾燥する。
表6に、Spotscan技術を使用して研究された8つの抗体によって認可されるエピトープを示す。
8つの抗−エズリン・モノクローナル抗体は、タンパク質の6つのエピトープを認識する。それに1から6までの番号がつけられた(表6)。4A7A6C1と4G11B5抗体は、同じエピトープ(エピトープ番号1)を有する。4D9B9H6と5G2D12抗体も、同じエピトープ(エピトープ番号2)を有する。8A8G6と9D2A11抗体は、部分的に重なり合うが、完全に同一でないエピトープを有する。
7.1.方法論
エズリンは、例えば、Vidas(登録商標)自動化装置(ビオメリュー)を使用して、サンドイッチ・イムノアッセイによって検出された。これを行うため、ELISA分析は、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キット(ビオメリュー、Cat.No.30315)の試薬を使用して構築された。試薬は、対応する情報シート(ref.11728 D FR 2005/05)に説明されている通りに使用したが、以下のように変更した:
1.コーンは、30μg/mlの濃度で、試験される捕捉抗体(4A9H5,5G2D12、8A8G6)と感作させた。
2.HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルの内容物を、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットの第2ウェルのバッファー(アジ化ナトリウムのバッファー)に1μg/mlにまで希釈された、ビオチンに結合した300μlの試験される検出用抗体(4A7A6C1及び4G11B5)に置き換えた。
3.PBS(50μl)中で細胞ペレットを超音波で破壊して調製したCaco2溶菌液(エズリンを天然型で含む)は、HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルのバッファーに直接希釈された。
4.ELISA反応は、Vidas(登録商標)自動化装置及びHBs Agウルトラ・キットのプロトコルを使用して実施された。捕捉および検出抗体と共に試料をインキュベートする工程は、100サイクルである。
5.結果は、バックグラウンド・ノイズ(反応前の基質の読取値)の減算の後、粗分析の値の形で得られた。シグナルは、RFV(相対蛍光値)で表わす。
表7は、Caco2溶菌液の1/50希釈における抗体のさまざまな組合せの反応性を示す。エピトープ番号1、4A7A6C1と4G11B5に結合する2つの抗体は、同一のシグナル・プロフィールを生成する。エピトープ番号1及び4、又はエピトープ番号1及び2、あるいはエピトープ番号1及び5の組合せを使用して、エズリンを検出することが可能である。腫瘍マーカーによる反応性がない場合、観察されるシグナルは非常に低く2.5から3RFVのオーダーである。エピトープ番号1及び4の組合せは、最も高いシグナルを得ることができた。
1. 患者および標本
血液サンプルは、2つのHuriet法規約の背景において、フランスに分布する8つの臨床センターのネットワークから収集される。血清を得るために、血液サンプルは、乾燥管に採取される。血漿を得るために、血液サンプルは、EDTA管に採取される。凝固の後、管は1000gで10分間遠心分離され、血清が除去され、等分されて、−80℃で保存される。血漿の管は、1000gで10分間直接遠心分離され、血漿は除去され、等分され、−80℃で保存される。試料は、患者の病歴について完全に文書化される。
LEIタンパク質は、実施例2に記載された抗体およびVidas(登録商標)自動化装置(ビオメリュー)を使用するELISAアッセイを使用して分析された。これを行うために、ELISAアッセイは、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットの試薬を使用して構成された(ビオメリュー、Cat.No.30315)。試薬は、付随の情報シートの記載(ref.11728D-FR-2005/05)に従い、以下の変更を加えて使用した:
1.コーンは、10μg/mlの濃度で、捕捉抗体10E1H1と感作させた。
2.HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルの内容物を、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラキットの第2ウェルのバッファー(ヤギ血清及び1g/lのアジ化ナトリウムのバッファー)で1μg/mlにまで希釈された、ビオチン結合検出用抗体21B10A5の300μlに置き換えた。
3.血清、血漿または糞便試料(50μl)は、HBs Agウルトラキットの第2ウェルのバッファー(ヤギ血清及び1g/lのアジ化ナトリウムのバッファー)に1/20まで前もって希釈した後に、あるいはそのまま、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルのバッファーに直接希釈された。
4.ELISA反応は、Vidas(登録商標)自動化装置及びHBs Agウルトラ・キットのプロトコルを使用して実施された。
5.結果は、バックグラウンド・ノイズ(反応前の基質の読取値)の減算の後、粗分析の値の形で得られた。
分析された患者で得られた量は、図1に報告される。この図において、ステージIVの結腸大腸癌を有する患者の3つの血清及びステージIIIの結腸大腸癌を有する患者の1つの血清は、血清LEIの量においてはっきりした増加を示す。
エズリン・タンパク質は、実施例2に詳細に記載された抗体及びVidas(登録商標)自動化装置(ビオメリュー)を使用したELISAアッセイを使用して分析した。これを行うため、ELISAアッセイは、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットの試薬を使用して構築された(ビオメリュー、Cat.No.30315)。試薬は、付随の情報シートに記載(ref.11728D-FR-2005/05)に従い、以下の変更を加えて使用した:
1.コーンは、30μg/mlの濃度で、捕捉抗体4A9H5と反応させた。
2.HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルの内容物を、ビオチンに結合した、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラキットの第2ウェルのバッファー(ヤギ血清及び1g/lのアジ化ナトリウムのバッファー)で1μg/mlにまで希釈された300μlの検出用抗体4A7A6C1に置き換えた。
3.血清、血漿または糞便試料(50μl)は、HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルのバッファーに直接希釈された。
4.ELISA反応は、試料を捕獲及び検出抗体とインキュベートする工程を100サイクル行うVidas自動化装置及びVidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットのプロトコルを使用して実施された。
5.結果は、バックグラウンド・ノイズ(反応の前の基質の読取値)の減算の後、粗分析の値の形で得られた。
分析される体液(血液、血清、血漿、糞便)に存在する腫瘍マーカーの濃度は、LEIを分析することに関するパラグラフ2に記載されている手順に従って算出された。
表8のつづき
分析された患者で得られた量は、図2に報告されている。この図において、ステージIVの結腸大腸癌を有する患者の3つの血清は、血清エズリンの量においてはっきりした増加を示すことに注目されたい。
アミノアシラーゼ1タンパク質は、実施例2に記載されている抗体及びVidas(登録商標)自動化装置(ビオメリュー)を使用したELISAアッセイを使用して分析された。これを行うため、ELISAアッセイは、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットの試薬を使用して構築された(ビオメリュー、Cat.No.30315)。試薬は、付随の情報シートに記載(ref.11728D-FR-2005/05)に従い、以下の修飾を加えて使用した:
1.コーンは、20μg/mlの濃度で、捕捉抗体2A7F6と反応させた。
2.HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルの内容物を、ビオチンに結合した、HBs Agウルトラキットの第2ウェルのバッファー(ヤギ血清及び1g/lのアジ化ナトリウムのバッファー)で1μg/mlにまで希釈された300μlの検出用抗体11H7D9に置き換えた。
3.血清、血漿または糞便試料(100μl)は、HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルのバッファーに直接希釈された。
4. ELISA反応は、試料を捕獲及び検出抗体とインキュベートする工程を100サイクル行うVidas自動化装置及びVidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットのプロトコルを使用して実施された。
5.結果は、バックグラウンド・ノイズ(反応の前の基質の読取値)の減算の後、粗分析の値の形で得られた。
分析された患者で得られた値は、図3に報告する。この図において、ステージIIの結腸大腸癌を有する患者の1つの血清、ステージIIIの結腸大腸癌を有する患者の1つの血清、及びステージIVの結腸大腸癌を有する患者の2つの結成は血清アミノアシラーゼ1の量がはっきりと増加していることに注目されたい。
我々は、ヒトL-FABPタンパク質を分析するために、Hycult Biotechnology社から市販されているELISAキット(Cat.No.HK404)を使用した。このキットは、肝臓の病変の存在を決定するために、細胞培養上清のまたは血清、血漿または尿のL-FABPタンパク質を定量化することを可能にする。我々は、製造業者によって推奨される手順に従ったが、2つの変更を加えた:インキュベーションは周囲温度でなく、37℃で実施し、血清は分析の前に1/10に希釈した。L-FABPタンパク質の分析は、当業者に周知の代替技術によって実施されてもよい。
図4に、この分析の結果を示す。我々が試験した血清パネルにおいて、結腸直腸癌を有する141人中の41人の患者は17ng/mlを超える血清L-FABP濃度を有するが、対照群ではこの値を上回る個体はなかった。これらの41人の患者は、ステージIの結腸直腸癌をもつ8人、ステージIIの結腸直腸癌を有する8人、ステージIIIの結腸直腸癌を有する13人およびステージIVの結腸直腸癌を有する12人の患者である。141人の結腸直腸癌患者で観察される平均血清L-FABP濃度は、16.6±1.3ng/mlであった。112人の正常な個体(ネガティブ・コントロール)の平均値は、6.6±0.2ng/mlである。この違いは、統計学的に有意である(P<0.0001、不等分散のためのウェルチの修正による片側t検定)。
我々は、ヒトI-FABPタンパク質を分析するために、Hycult Biotechnology社から市販されているELISAキット(Cat.No.HK406)を使用した。このキットは、小腸の虚血性の病変の存在を決定するために、細胞培養上清のまたは血清、血漿または尿のI-FABPタンパク質を定量化することを可能にする。製造業者によって推奨される手順に従った。I-FABPタンパク質の分析は、当業者に周知の代替技術によって実施されてもよい。
図5に、この分析の結果を示す。我々が試験した血清パネルにおいて、結腸直腸癌を有する40人中の15人の患者は40pg/mlを超える血清I-FABP濃度を有するが、対照群ではこの値を上回ったのは24個体中2個体だけだった。より明らかには、ステージIの結腸直腸癌を有する患者の3つの血清、ステージIIIの結腸直腸癌を有する患者の2つの血清およびステージIVの結腸直腸癌を有する患者の1つの血清が、100pg/mlを超える血清I-FABP濃度を有する。この値より上の濃度は、CRC−対照群では見られなかった。
血清アポリポタンパクAIの分析は、2つの異なるイムノアッセイ技術によって実施された。まず、マイクロプレート・サンドイッチELISAを使用した。96ウェル・プレートは、抗-Apo AIモノクローナル抗体のクローン1404(Biodesign Cat.No.H45404)により、ウェルにつき1μgで被覆された。PBS-0.05%トゥイーン20(PBS−T)によって3回洗浄した後、PBS−T中の10%ミルクにより、37℃で1時間飽和させた。プレートはPBS−Tで更に3回洗浄され、試験血清試料の1/100000希釈液の100μl又は基準範囲の希釈の100μlがプレート上へ置かれて、そのプレートは37℃で2時間インキュベートされた。基準範囲は、Apo AIタンパク質(Biodesign Cat.No.A50620H)をPBS−T(BSA1%)(1.6〜100ng/ml)に希釈することによって調製された。PBS−Tによる3回の洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ(Biodesign Cat.No.K45452P)に結合するポリクローナル検出抗体をウェルにつき0.1μg加えて、そのプレートを37℃で2時間インキュベートした。更に3回のPBS−Tによる洗浄後、OptEIA基質(BD)を100μl/ウェルで加えた。20分後に、発色が起こった時に、反応を2Nの硫酸で停止して、450nMの吸光度を測定した。
図6Bは、この分析の結果を示す。CRCを有する患者のApo AIの血清濃度の減少は、この第2の技術によって確認される。ステージIからIVのCRCを有する34個体のApo AIの平均濃度は768±30μg/mlであるが、正常な17個体においてはこれより非常に高い:1194±51μg/ml。この違いは、統計学的に非常に有意である(P<0.0001、片側t検定)。
血清アポリポタンパクAIIの分析は、Lincoマルチプレックス・キットにより実施した。図7は、この分析の結果を示す。我々は、結腸直腸癌を有する個体のApo AIIの血清濃度の減少を証明した。ステージIからIVのCRCを有する34個体におけるApo AIIの平均濃度は170±11μg/mlであるが、正常な17個体(対照)ではこれより非常に高い277±16μg/ml。この相違は、統計学的に非常に有意である(P<0.0001、片側t検定)。
I-プラスチン・タンパク質は、実施例2に記載の抗体およびVidas(登録商標)自動化装置(ビオメリュー)を使用して分析された。これを行うために、ELISA分析は、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラ・キットの試薬を使用して構成された(ビオメリュー、Cat.No.30315)。試薬は、付随の情報シートの記載(ref.11728D-FR-2005/05)に従い、以下の修飾を加えて使用した:
1.コーンは、15μg/mlの濃度で、捕捉抗体3D11D10と感作させた。
2.HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルの内容物を、Vidas(登録商標)HBs Agウルトラキットの第2ウェルのバッファー(ヤギ血清及び1g/lのアジ化ナトリウムのバッファー)で1μg/mlにまで希釈されたビオチン結合した検出用抗体8C8C5の300μlに置き換えた。
3.血清、血漿または糞便試料(100μl)は、HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルのバッファーに直接希釈された。
4.ELISA反応は、Vidas(登録商標)自動化装置及びHBs Agウルトラ・キットのプロトコルを使用して実施された。
5.結果は、バックグラウンド・ノイズ(反応前の基質の読取値)の減算の後、粗分析の値の形で得られた。
分析される体液(血液、血清、血漿、糞便)に存在する腫瘍マーカーの濃度は、LEIを分析することに関してパラグラフ2に記載されている手順に従って算出された。
分析された患者で得られた量を図8に示す。試験された結腸直腸癌を有する患者の2つの血清は、血清I-プラスチン量のはっきりした増加を示す。
β2-ミクログロブリン、CEA、CA19-9およびテストステロン腫瘍マーカーを、出願人のアッセイキット、それぞれVidas(登録商標)β2-ミクログロブリン, Vidas(登録商標)CEA, Vidas(登録商標)CA19-9TMおよびVidas(登録商標)テストステロンを使用して、各々のキットに特有の手順に従って分析した。
E-カドヘリン・タンパク質は、キットの手順に従ってE-カドヘリンEIAキット(タカラ・バイオケミカルズ、東京、日本)を使用して分析された。
再生膵島由来タンパク質3αタンパク質、別名膵臓炎関連タンパク質(PAP1)は、PANCREPAP ELISAキット(DynaBio、マルセーユ、フランス)を使用して、キットの手順に従って分析した。
1.コーンは、5から30μg/mlの間の濃度で、捕捉抗体と感作させた。
2.HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルの内容物を、ヤギ血清と1g/lのアジ化ナトリウムのバッファーに1μg/mlにまで希釈された、ビオチンに結合した300μlの検出用抗体に置き換えた。
3.血清、血漿または糞便試料は、HBs Agウルトラ・カートリッジの第2ウェルのバッファーに直接希釈された。
4. ELISA反応は、Vidas(登録商標)自動化装置及びHBs Agウルトラ・キットのプロトコルを使用して実施された。捕捉および検出抗体と共に試料をインキュベートする工程は、14と100サイクルとの間である。
5.結果は、バックグラウンド・ノイズ(反応前の基質の読取値)の減算の後、粗分析の値の形で得られた。
分析される体液(血液、血清、血漿、糞便)に存在する腫瘍マーカーの濃度は、LEIを分析することに関してパラグラフ2に記載されている手順に従って算出された。さまざまな腫瘍マーカーのためのアッセイ条件を表7に記載する。
表9
結腸直腸癌を有する患者の3つの血清は、血清β2-ミクログロブリンの量の増加を示す。結腸直腸癌を有する患者の10の血清は、血清CEAの量の増加を示す。より明確には、ステージIIIの結腸直腸癌を有する患者の1つの血清およびステージIVの結腸直腸癌を有する患者の7つの血清が、血清CEA量の相当な増加を示す。
結腸直腸癌を有する患者の9つの血清は、血清CA19-9の量の増加を示す。より明確には、ステージIIIの結腸直腸癌を有する患者の1つの血清およびステージIVの結腸直腸癌を有する患者の7つの血清が、血清CA19-9量の相当な増加を示す。
結腸直腸癌を有する患者の10の血清は、血清テストステロンの量の減少を示す。より明らかには、ステージIIの結腸直腸癌を有する患者の1つの血清、ステージIIIの結腸直腸癌を有する患者の1つの血清およびステージIVの結腸直腸癌を有する患者の2つの血清が、血清テストステロン量の下落を示す。
結腸直腸癌を有する患者の2つの血清は、血清再生膵島由来タンパク質3αの量の増加を示す。
ステージIVの結腸直腸癌を有する患者の4つの血清、ステージIIIの結腸直腸癌を有する患者の2つの血清およびステージIIの結腸直腸癌を有する患者の1つの血清は、血清ガレクチン-3の量の明確な増加を示す。
出願人は、結腸直腸癌を有する特定の患者の血流において、腫瘍マーカーの異常に上昇した量または異常に減少した量が観察されことを実施例3で示した。驚くべきことに、血液において、2つの所与のマーカー量の増加または減少は、同じ患者において体系的に観察されない。その結果、いくつかの腫瘍マーカーの組合せは、結腸直腸癌を有すると同定される患者数を増加させることが可能である。したがって、患者Aは一つ以上の腫瘍マーカー(グループX)の減少又は増加を示すが、患者BではグループXの前記マーカーで正常である場合がある;この同じ患者Bで、一つ以上の他の腫瘍マーカー(グループY)は、上昇または減少する場合があり、患者AではグループYの前記マーカーで正常である場合がある。出願人によって分析されるさまざまな腫瘍マーカーは、したがって、当業者によく知られているさまざまな数学的アルゴリズムによって結合されることができる。網羅的な例ではないが、具体的には、以下の方法が実施された:
1.各々の腫瘍マーカーについて、限界値が設定された。
2.結腸直腸癌のケースで血液中の腫瘍マーカーの量が増加した場合、所与の患者で得られた血液の量はその限界値によって分割された。結腸直腸癌のケースで血液中の腫瘍マーカーの量が減少した場合、所与の患者で得られた血液の量は逆数にされて、その限界値をかけられた。
3.「限界値によって分割された血液中の量」の比率が1より大きい場合、比率は係数(例えば10)をかけられた。したがって得られる値は、研究される患者について、考慮中の腫瘍マーカーのための「スコア」と呼ばれた。
4.さまざまな腫瘍マーカーで得られたスコアは、各々のマーカーに特異的な係数によって重み付けされて加えられた。下記の実施例の場合、全ての重み付けの係数は1にセットした。
5.スコアの合計は加えられるスコアの総数によって分割され、こうして得られる値に「トータルスコア」という名前をつけた。
6.彼または彼女のトータルスコアが限界値スコアに比例して増加している場合、患者は結腸直腸癌を有すると診断される。
エズリンを含む2、4および8つのマーカーの選択のトータルスコアを表10に示す。
エズリンとアミノアシラーゼ1の腫瘍マーカーの組合せは、19人の患者の同じ群について、結腸直腸癌を有する6人の患者でトータルスコア「2」をえられる一方で、アミノエズリン又はアシラーゼ−1単独の分析ではそれぞれ3人および4人の患者のみでの増加が示された。
エズリン、β2−ミクログロブリン、アミノアシラーゼ1およびCEA腫瘍マーカーの組合せは、19人の患者の同じ群について、結腸直腸癌を有する15人の患者でトータルスコア「4」をえられる一方で、エズリン、β2−ミクログロブリン、アミノアシラーゼ1又はCEA単独の分析ではそれぞれ3人、4人、3人および9人の患者のみでの増加が示された。
エズリン、β2−ミクログロブリン、アミノアシラーゼ1、プロテアソーム20、L−FABP、PAP、E−カドヘリンおよびCEA腫瘍マーカーの組合せは、19人の患者の同じ群について、結腸直腸癌を有する17人の患者で増加したトータルスコア「8」をえられる一方で、エズリン、β2−ミクログロブリン、アミノアシラーゼ1、プロテアソーム20、L−FABP、PAP、E−カドヘリン又はCEA単独の分析ではそれぞれ3人、4人、3人、6人、5人、3人、1人及び9人の患者のみでの増加が示された。
表10のつづき
糞便は重さ約1gの破片を使用して抽出され、それは1g/lアジ化合物を含む100mMのリン酸ナトリウム・バッファー(pH7.2)の10mlに加えられる。混合物は、1分間のボルテックスで均質にされる。次に、試料を氷上で7秒間4サイクルの超音波にかける。不溶性分画は4℃で10分間、2000gで遠心分離により取り除かれる。上澄は分析されるまで−30℃で保存される。実施例3に記載のELISAアッセイが、必要に応じて、HBs Agウルトラ・カートリッジの第1ウェルのバッファーに糞便を適切に希釈した後に糞便の腫瘍マーカーを分析するために使用された。
アミノアシラーゼ1、ガレクチン-3およびプロテアソーム20Sによる試験の分析定量は、それぞれ図18から20に表わされる。アミノアシラーゼ1、ガレクチン-3およびプロテアソーム20Sの量の増加が、それぞれ結腸直腸癌を有する患者の10、14、および8つの糞便で観察された。
1. 細胞培養
LnCAP前立腺癌株は、2mMのL-グルタミンと10mMのHEPESと1mMピルビン酸ナトリウムと10%FCSを添加したRPMI1640培地で培養される(全てギブコ)。細胞はネガティブコントロールとして使用される。
Caco-2結腸大腸癌株は、FCSを含まず2mMのL-グルタミンを含むDMEM培地で培養される(全てギブコ)。
HT-29結腸直腸癌株は、10%FCSおよび2mMのL-グルタミンを含むDMEM培地で培養される(全てギブコ)。
HT-29/B6結腸直腸癌株は、FCSを含まず4mMのL-グルタミンを含むDMEM培地で培養される(全てギブコ)。
細胞は、5%のCO2を有するインキュベーターで37℃に保たれる。
この手順は、タンパク質を分泌している細胞数を決定することを可能にする。PVDF膜(マルチスクリーンIP、ミリポア)を有する96ウェルELISPOTプレートは、10μg/mlでマウス抗-腫瘍マーカー・モノクローナル抗体(捕捉抗体、ELISPOTで使用した抗体を示す下の表11を参照されたい)で、ウェルにつき100μlで、滅菌PBS中で、+4℃で一晩、被覆する。次にプレートはPBSによって洗われて、10%FCSを含む培地で飽和する。平行して、細胞は、トリプシン処理され、計数されて、次に105細胞/mlまで希釈した。この保存溶液のカスケード希釈として、この細胞懸濁液の200μlはウェルに分配された。次に、プレートは5%CO2の湿性雰囲気において37℃で20時間インキュベートされ、次に0.05%のTween-20含有PBSによって洗浄した。次に残りの細胞は10分間の氷冷水による処理によって溶解され、次にプレートは再び洗われる。検出抗体(分析される腫瘍マーカーに向かうビオチン化モノクローナル(表11))は、0.1μg/ウェルで加えられる(周囲温度で2時間インキュベート)。スポットは、extravidin-アルカリホスファターゼ(シグマ)と基質5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル・ホスフェート/ニトロ・ブルーテトラゾリウム(BCIP/NBT、Biorad)を加えることによって検出される。バックグラウンド・ノイズは、LnCapウェルで測定されるスポット数に相当し、使用した読み取り条件下では0から8スポットの間で変化する。非特異的なスポットの平均数は、特異的なシグナルから減算された。
表11
インキュベートされた細胞100万に対する、興味がある腫瘍マーカーを分泌しているCaco-2、HT-29およびHT-29/B6細胞の数を、図21に示す。ELISPOT技術は、大腸癌株による腫瘍マーカーの放出または分泌を確認することを可能にする。出願人による特許出願WO03/076942の方法に従い、この技術を使用して患者の循環腫瘍細胞について調査を実施することが可能であろう。
1. 方法論
第1に、組織マイクロアレイ・スライドは、脱パラフィンされる。このために、それらは次の溶液バットにおいて、10分間、連続的にインキュベートされる:メチルシクロヘキサン(2回)、100%エタノール、95%エタノール、70%エタノールおよび水。次にスライドは、0.1%のトゥイーン20を含むTBSで、10分間、撹拌しながら、リンスした。抗原は、10mMのクエン酸バッファー中で、40分間、90℃まで加熱することによって再活性化し、次に30分間、周囲温度まで冷却させた。内因性ペルオキシダーゼは3%のH2O2を含むTBS−T中でのインキュベートによって阻害される。次に、スライドは37℃で1時間、湿潤なチャンバーにおいて、3%BSAのTBS−Tで飽和する。
次に、スライドは、3%BSA含有TBS−Tに10μg/mlに希釈した抗-白血球エラスターゼ・インヒビター(クローン3D9C2)または抗-I-プラスチン(クローン8D6A3)一次抗体と共に2時間インキュベートする。TBS−T中で10分間3回洗浄後、スライドは、飽和溶液で1/400に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させた抗-マウス二次抗体(Cat.No.115-035-003 Jackson Immunoresearch)と共に、湿潤チャンバーにおいて、37℃で2時間インキュベートする。スライドは、TBS−T中で10分間3回洗浄され、次にPBS中で10分間3回洗浄する。スライドは、シグマFast substrate(Cat.No.D-4168,シグマアルドリッチ)によって5分間、発現させる。染色は、PBSでの洗浄によって停止させる。ハリス・ヘマトキシリン(Cat.No.MHS16、シグマアルドリッチ)による対比染色は、30秒間実施する。水およびPBSによる洗浄後、スライドは顕微鏡下に観察のために置かれる。
免疫組織化学の標識化のために使用する抗体は、特に本出願のために、ELISAでの又はウエスタンブロッティングでのそれらの反応性に独立に選択された。
組織マイクロアレイスライドは、多数の試料をスクリーニングするために用いた。これらの試料は、スライド上へ配置される結腸組織である。患者の特徴(結腸直腸癌の組織マイクロアレイに存在する結腸組織スポットの特徴)、更には抗-白血球エラスターゼ・インヒビター抗体による免疫標識の結果を、表12に示す。
表12
表の結果は正常な結腸粘膜生検において、標識化されたものがないことを示す(10の陰性)。標識は、また、腺腫においても陰性である(1/1)。標識は、結腸腺癌の上皮細胞において陽性である(8/11の患者で+)。間質では標識されたものがない。
組織マイクロアレイ・スライドは、多数の試料をスクリーニングするために使用した。これらの試料は、スライド上へ配置される結腸組織である。結腸腺癌を有する各患者について、3つの試料は腫瘍の中央から採取され、3つの試料は浸潤前面から採取され、3つの試料は正常な組織から採取された。表13は、抗-エズリン抗体による免疫標識の結果を示す;示した標識のレベルは、分析した3つの試料についての最大強度である。
表13
30人の患者の試料において、25試料は隣接した正常な組織と比較して、腫瘍(腫瘍中心または浸潤前面)においてエズリンの過剰発現を示す。
組織マイクロアレイスライドは、多数の試料をスクリーニングするために用いた。これらの試料は、スライド上へ配置される結腸組織である。結腸腺癌を有する各患者について、3つの試料は腫瘍中央から採取され、3つの試料は浸潤前面から採取され、3つの試料は正常な組織から採取された。表14は、抗-アミノアシラーゼ抗体による免疫標識の結果を示す;示した標識のレベルは、分析した3つの試料についての最大強度である。
表14
30人の患者の試料において、21試料は隣接した正常な組織と比較して、腫瘍(腫瘍中心または浸潤前面)においてアミノアシラーゼの過剰発現を示す。
組織マイクロアレイ・スライドを、多数の試料をスクリーニングするために用いた。これらの試料は、スライド上へ配置された結腸と直腸の組織である。患者の特徴(結腸直腸癌の組織マイクロアレイに存在する結腸組織スポットの特徴)、更には抗-I-プラスチン抗体による免疫標識の結果を、表15に示す。
表15
表15のつづき
表の結果は:
正常な結腸粘膜生検において、8試料(+)において標識は弱く、2試料は++である。また、標識は結腸腺腫(1/1)において弱い(+)。標識は、結腸腺癌の上皮細胞において強い陽性++である(結腸コロイド腺癌を含めて、6/9の患者で++であり、3人の患者で弱い+)。間質では標識されたものがない。
正常な直腸粘膜生検において、標識は、非特異的に表面上皮に(3/4)および1試料で++レベルで存在する。標識は、直腸腺腫で強い陽性++(5/9)または弱い+(4/9)である。さらに、標識は、直腸腺癌の上皮細胞で強い++である(3/4患者において++、1患者で弱い+)。間質では標識されたものがない。
1. J.D. Potter, J Natl Cancer Inst., 91, 916-32
2: J. Faivre, 2001, Epidemiologie et depistage du cancer colorectal [Colorectal cancer epidemiology and screening], publisher Springer
3: M. Algrain等, 1993, J. Cell. Biol., 120, 129-139
4: W.G. Jiang及びS. Hiscox, 1996, Anticancer Res., 16, 861-865
5: S. Hiscox及びW.G. Jiang, 1999, J. Cell Sci., 112, 3081-3090
6: T. Xiao等, 2005, Mol. Cell. Proteomics, 4, 1480-1486
7: E. Remold-O’Donnell等, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 563-5639
8: J. Cooley等, 2001, Biochemistry, 15762-15770
9: M. Anders及びW. Dekant, 1994, Advances in Pharmacology, 431-448
10: K. Lorentz等, 1975 , Clinica Chimica Acta, 263-269
11: K. Lorentz及びB. Flatter, 1975, Clinica Chimica Acta, 271-274
12: R.M. Cook等, 1993, J. Bio. Chem, 17010-17017
13: Y.E. Miller等, 1989, J. Clin. Invest., 2120-2124
14: S. Balabanov等, 2001, Eur. J. Biochem, 5977-5980
15: E. Chan等, 1985, J Biol Chem, 260, 2629-2632
16: R. Das等, 2001, Clin. Cancer Res., 7, 1706-1715
17: J. Stulik等, 2001, Electrophoresis, 22, 3019-3025
18: T. Yamazaki等, 1999, J Surg Oncol, 72, 83-87
19: D.A. Sweetser等, 1987, J Biol Chem, 266, 16060-16071
20: M. Pelsers等, 2003, Clin Biochem, 36, 529-535
21: R. Xiao,等, 2005, Molecular Cancer, 4, 1-17
22: E.E. Niederkofler等, 2003, J. Lipid Res., 44, 630-639
23: G.L. Hortin, 2006, Clinical Chemistry, 52(7), 1223-1237
24: J.Y. Engwegen等, 2006, World J Gastroenterol, 12(10), 1536-1544
25: Z. Zhang等, 2004, Cancer Research, 64, 5882-5890
26: H. Hachem等, 1986, J. Chem. Clin. Biochem., 24, 161-166
27: C.S. Lin,等, 1993, J. Biol. Chem., 268, 2781-92
28: V. Delanote等, 2005, Acta Pharama. Sinica, 769-779
29: A.P. Arrigo等, 1988, Nature, 331, 192-194
30: T Lavabre-Bertrand等, 2001, Cancer, 92, 2493-2500
31: S. Nakahara等, 2005, Apoptosis, 10, 267-275
32: I. Iurisci等, 2000, Clin. Can. Res., 6, 1389-1393
33: M.K. Scwartz, 2006, Clin. Chim. Acta, 1992, 77-82
34: D.J. McCool等, 1999, Biochem. J., 593-600
35: J.L. Iovanna等, 1994, Gastroenterology, 106, 728-734
36: Y. Motoo等, 1999, Dig. Dis. Sci., 44, 1142-1147
37: M. Herlyn等, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 1438-1442
38: A. Armstrong 及び S. Eck, 2003, Cancer Biol. Ther., 2, 320-325
39: D. Herlyn等, 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 4761-4765
40: H Abe等, 2002, J. Immunol. Methods., 270, 227-233
41: V. Barak等, 2004, Clin. Biochem., 37, 529-540
42: H. Kim等, 2006, Ann. Clin. Lab. Sci., 36, 294-298
43: F. Roca等, 2006, J. Surg. Oncol., 151-160
44: C.H. Damsky等, 1983, Cell, 455-466
45: M. Katayama等, 1994, Br. J. Cancer, 580-585
46: C. Willmanns等, 2004, Clin. Exp. Metastasis, 75-78
47: P. Gold 及び S. Freedman, 1965, J. Exp. Med., 467-481
48: M. Duffy, 2001, Clin. Chem., 624-630
49: Y. Kim等, 2003, An. Clin. Lab. Sci., 32-38
50: J.L. Magnani等, 1983, Cancer Research, 43, 5489-5492
51: J. Holmgren等, 1984, Br. Med. J. (Clin. Re. Ed.), 288, 1479-1482
52: T.L. Klug等, 1986, Int. J. Cancer, 38, 6661-669
53: P. Kuusela等, 1991, Br. J. Cancer, 63, 636-640
54: M. Holland等, 1993; Medicina (B. Aires), 53(2):117-23
55: F. Model等, July 2006, World Congress on Gastrointestinal Cancer, ≪ Detection of Methylated DNA in Plasma from Colorectal Cancer Patients and Controls by Real-Time PCR Analysis of Septin 9 ≫
56: M.P. Ebert等, 2006, Gastroentrology, 131(5), 1418-1430
57: C. Bianco等, 2006, Clin. Cancer Res., 12, 5158-5164
58: R. Yasumatsu等, 2006, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 291, L619-L627
59: J. Chevalier等, 1997, J Histochem Cytochem, 45, 481-491
60: S. Patterson, 2000, Mass spectrometry and proteomics. Physiological Genomics 2, 59-65
61: L. Anderson 及び C.L. Hunter, 2006, Mol Cell Proteomics, 5, 573-588.
62: L.J. Kricka等, 1999, Clinical Chemistry, 45(4), 453-458
63: S. Tyagi 及び F.R. Kramer, 1996, Nature Biotech, 14, 303-308
64: T. F. Imperiale等, 2004, N Engl J Med, 351(26), 2704-2714
65: D.A. Ahlquist等, 2000, Gastroenterology, 119, 1219-1227
66: I. H. Wong, 2006, Methods Mol Biol, 336, 33-46
67: M. P. Ebert等, 2005, Neoplasia, 7(8), 771-778
68: C. Lofton-Day等, 2007, AACR Annual Meeting 2007, Los Angeles, U.S.A., Poster no LB-165, Clinical case-control study in plasma shows that the DNA methylation biomarker, Septin-9, detects 70% of stage I-III colorectal cancer patients
69: P. Metezeau等, La cytometrie en flux pour l’etude de la cellule normale ou pathologique (Tome I), Eds Medsi-MacGrawhill
70: Mathieu J.等 2006. Fonctions cellulaires et metabolisme. In: (coordonnateurs : Ronot X.et al.). La cytometrie en flux. Tec & Doc, 255-298. ISBN 978-2-7430-0898-7
71: V. Cheynet等, 1993, Protein Expr Purif, 4(5), 367-372
72: G. Kohler 及び C. Milstein, 1975, Nature, 256, 495-497
73: G. Kohler 及び C. Milstein, 1976, Eur J Immunol, 6, 511-519
Claims (8)
- 配列番号1、配列番号2、配列番号3又は配列番号8から選択される配列を含むエピトープに対する抗エズリンモノクローナル抗体、
配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド及び配列番号5のアミノ酸配列からなるペプチドを含むエピトープに対する抗エズリンモノクローナル抗体、及び
配列番号6のアミノ酸配列からなるペプチド及び配列番号7のアミノ酸配列からなるペプチドを含むエピトープに対する抗エズリンモノクローナル抗体、
から選択されるエズリンに対する少なくとも1つの抗エズリンモノクローナル抗体を使用して、正常な個体で決定された基準値と比較して、結腸直腸癌を有することが疑われる患者から得られた生物試料におけるエズリン濃度の上昇を測定することを含む、結腸直腸癌を検出するために得られた試料のデータを基準と比較する方法。 - 生物試料が腫瘍から離れた試料であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 配列番号1の配列を含むエピトープに対する少なくとも1つの抗エズリンモノクローナル抗体と、
配列番号2の配列を含むエピトープに対する抗エズリンモノクローナル抗体、配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド及び配列番号5のアミノ酸配列からなるペプチドを含むエピトープに対する抗エズリンモノクローナル抗体、及び配列番号6のアミノ酸配列からなるペプチド及び配列番号7のアミノ酸配列からなるペプチドを含むエピトープに対する抗エズリンモノクローナル抗体から選択される少なくとも1つの他の抗エズリンモノクローナル抗体を使用することを特徴とする、請求項1又は2に記載の方法。 - 配列番号1の配列を含むエピトープに対する少なくとも1つの抗エズリンモノクローナル抗体と、
配列番号4のアミノ酸配列からなるペプチド及び配列番号5のアミノ酸配列からなるペプチドを含むエピトープに対する少なくとも1つの他の抗体を使用することを特徴とする、請求項3に記載の方法。 - 配列番号2の配列を含むエズリンエピトープに対する少なくとも1つのモノクローナル抗体を使用することを特徴とする、請求項1又は2に記載の方法。
- 白血球エラスターゼ・インヒビター、アミノアシラーゼ1、肝臓脂肪酸結合タンパク質、腸脂肪酸結合タンパク質、アポリポタンパク質AI、アポリポタンパク質AII及びI-プラスチンマーカーから選択される少なくとも一つの他の腫瘍マーカーの存在を更に決定することを特徴とする請求項1から5の何れか一項に記載の方法。
- β2-ミクログロブリン、プロテアソーム20S、ガレクチン-3、L-乳酸脱水素酵素B鎖、カルレティキュリン、再生膵島由来タンパク質3α、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー1、II型ケラチンCytoskeletal8、I型ケラチンCytoskeletal18、I型ケラチンCytoskeletal19、上皮カドヘリン、CEA、ビリン、CA19-9、CA242、CA50、CA72-2、テストステロン、TIMP-1、Cripto-1、インテレクチン-1、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ、サイトケラチン20、翻訳的に制御された腫瘍タンパク質、(プロ)デフェンシン-A5、血液中のメチル化DNA断片の検出、糞便DNA断片の特異的な修正の検出及びヒト糞便のヘモグロビンの検出から選択される少なくとも一つの他の腫瘍マーカーの存在の決定を更に含むことを特徴とする、請求項1から5の何れか一項に記載の方法。
- 結腸直腸癌に関する早期診断、スクリーニング、フォローアップ治療、予後診断及び再発診断を補助するための、請求項1から7の何れか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0705197 | 2007-07-19 | ||
FR0705197A FR2919060B1 (fr) | 2007-07-19 | 2007-07-19 | Procede de dosage de l'ezrine pour le diagnostic in vitro du cancer colorectal. |
PCT/FR2008/051289 WO2009019365A2 (fr) | 2007-07-19 | 2008-07-10 | Procede de dosage de l'ezrine pour le diagnostic in vitro du cancer colorectal |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014232815A Division JP2015096508A (ja) | 2007-07-19 | 2014-11-17 | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010533688A JP2010533688A (ja) | 2010-10-28 |
JP5690139B2 true JP5690139B2 (ja) | 2015-03-25 |
Family
ID=38736063
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010516547A Active JP5690139B2 (ja) | 2007-07-19 | 2008-07-10 | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 |
JP2014232815A Pending JP2015096508A (ja) | 2007-07-19 | 2014-11-17 | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014232815A Pending JP2015096508A (ja) | 2007-07-19 | 2014-11-17 | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8361731B2 (ja) |
EP (1) | EP2167971B1 (ja) |
JP (2) | JP5690139B2 (ja) |
CN (1) | CN101802617B (ja) |
AU (1) | AU2008285554B2 (ja) |
CA (1) | CA2693648C (ja) |
ES (1) | ES2570627T3 (ja) |
FR (1) | FR2919060B1 (ja) |
WO (1) | WO2009019365A2 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2919062B1 (fr) * | 2007-07-19 | 2009-10-02 | Biomerieux Sa | Procede de dosage de l'aminoacylase 1 pour le diagnostic in vitro du cancer colorectal. |
FR2944019B1 (fr) * | 2009-04-03 | 2011-04-22 | Biomerieux Sa | Procede de dosage de la prodefensine-a6 pour le diagnostic in vitro du cancer colorectal. |
FR2968767B1 (fr) | 2010-12-08 | 2012-12-21 | Biomerieux Sa | Procede et coffret pour le diagnostic in vitro du cancer de la prostate |
FR2991777B1 (fr) | 2012-06-07 | 2015-08-21 | Biomerieux Sa | Procede de detection et/ou de dosage de l'annexine a3 d'un mammifere dans le sang ou au moins un de ses derives |
FR3001805B1 (fr) | 2013-02-01 | 2015-02-20 | Biomerieux Sa | Procede de detection d'un cancer colorectal |
FR3001806B1 (fr) * | 2013-02-01 | 2016-05-20 | Biomerieux Sa | Procede de detection d'une lesion colorectale |
CN103214557A (zh) * | 2013-03-20 | 2013-07-24 | 苏州纽微生物技术有限公司 | 一种Ezrin抗原决定簇多肽及其磷酸化Thr566抗体制备方法和采用该抗体制备的试剂盒 |
US20160109460A1 (en) * | 2014-10-16 | 2016-04-21 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods And Compositions For Determining Fortilin Levels |
WO2017100789A1 (en) * | 2015-12-11 | 2017-06-15 | Expression Pathology, Inc. | Srm/mrm assays |
JP6080184B1 (ja) * | 2016-02-29 | 2017-02-15 | 常雄 小林 | 癌の一生を分類する際に用いるデータ採取方法 |
CN109471147B (zh) * | 2018-09-25 | 2022-10-18 | 中国辐射防护研究院 | 一种基于变权重离散的γ剂量率计算方法及系统 |
CN113321721B (zh) * | 2021-06-11 | 2022-06-03 | 中南大学湘雅二医院 | 一种细胞外Ezrin蛋白及其应用 |
Family Cites Families (62)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2920484A1 (de) | 1979-05-21 | 1980-12-04 | Bosch Gmbh Robert | Messeinrichtung mit magnetischem kreis zum messen eines gleichstroms |
US4529931A (en) * | 1983-04-07 | 1985-07-16 | Ford Motor Company | Single-coil current measuring circuit |
FR2581456B1 (fr) | 1985-05-02 | 1987-07-17 | Pasteur Institut | Villine humaine, en tant que marqueur de cellules malignes primaires originaires du tube digestif, et moyens, en particulier anticorps diriges contre la villine humaine, pour la detection desdites cellules malignes |
US5360715A (en) * | 1988-06-07 | 1994-11-01 | California Institute Of Technology | Plastin isoforms and their uses |
US5002870A (en) * | 1988-06-07 | 1991-03-26 | California Institute For Medical Research | Plastin isoforms and their use |
JP2816175B2 (ja) | 1989-04-28 | 1998-10-27 | 三菱電機株式会社 | 直流電流測定装置 |
US5223789A (en) * | 1989-06-23 | 1993-06-29 | Fuji Electric Co., Ltd. | AC/DC current detecting method |
JPH0464068A (ja) | 1990-07-02 | 1992-02-28 | Fuji Electric Co Ltd | 直流電流検出方法 |
CA2054149A1 (en) * | 1990-10-29 | 1992-04-30 | Eric Pringault | Villin gene promoter sequence and its use in vectors, transformed mammalian cell lines, transgenic animals, and cell lines derived from the animals |
US5344760A (en) | 1991-06-03 | 1994-09-06 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method of cancer detection |
US6291205B1 (en) * | 1992-06-12 | 2001-09-18 | Merck & Co., Inc. | Method of increasing production of disulfide bonded recombinant proteins by saccharomyces cerevisiae |
JPH08149981A (ja) * | 1993-12-13 | 1996-06-11 | La Jolla Inst For Allergy & Immunology | T細胞α鎖による抗原特異的免疫制御の方法 |
US6001632A (en) * | 1996-05-15 | 1999-12-14 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human protein disulfide isomerase |
DE19642472A1 (de) | 1996-10-15 | 1998-04-16 | Abb Research Ltd | Flußkompensierter Stromsensor |
US6518411B1 (en) * | 1996-11-22 | 2003-02-11 | University Of Iowa | RGS compositions and therapeutic and diagnostic uses therefor |
WO2001031019A2 (en) | 1999-10-29 | 2001-05-03 | Chiron Spa | Neisserial antigenic peptides |
DE69934139D1 (de) | 1998-12-01 | 2007-01-04 | Wrair Walter Reed Army Inst Of | Diagnose von krebsstadium oder aggressivität |
JP2002536995A (ja) | 1999-02-22 | 2002-11-05 | インサイト・ファーマスーティカルズ・インコーポレイテッド | 結腸の疾患に関連する遺伝子 |
US6451528B1 (en) * | 1999-03-16 | 2002-09-17 | Oregon Health & Sciences University | Sperm-specific AKAP protein genes and uses |
NZ515311A (en) * | 1999-04-09 | 2002-11-26 | Rigshospitalet | Mass screening and highly specific early identification of colorectal or metastatic breast cancer by measuring TIMP-1 tissue inhibitor |
JP4019208B2 (ja) * | 1999-09-01 | 2007-12-12 | 有機合成薬品工業株式会社 | 新規酵素及びその製造方法 |
EP1265582A2 (en) * | 1999-09-29 | 2002-12-18 | Human Genome Sciences, Inc. | Colon and colon cancer associated polynucleotides and polypeptides |
EP1266225A2 (en) * | 2000-03-20 | 2002-12-18 | Oxford GlycoSciences (UK) Limited | Diagnosis and treatment of breast cancer |
WO2002020731A2 (en) | 2000-09-08 | 2002-03-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Regulation of human protein disulfide isomerase-like enzyme |
JP2004528810A (ja) * | 2000-10-02 | 2004-09-24 | バイエル コーポレーション | 癌組織でディファレンシャルに発現される核酸配列 |
US20020160382A1 (en) * | 2000-10-11 | 2002-10-31 | Lasek Amy W. | Genes expressed in colon cancer |
US7691567B2 (en) * | 2000-10-30 | 2010-04-06 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions relating to fortilin, an anti-apoptotic molecule, and modulators of fortilin |
US20030082533A1 (en) * | 2001-01-26 | 2003-05-01 | Henry Yue | Intelectin |
AU2002251844A1 (en) * | 2001-02-02 | 2002-10-03 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of colon cancer |
DE10118774A1 (de) * | 2001-04-17 | 2002-10-31 | Jerini Ag | Verfahren zur Bestimmung der Substratspezifität einer enzymatischen Aktivität und Vorrichtung hierzu |
US20040018973A1 (en) | 2002-01-25 | 2004-01-29 | University Of Pittsburgh | Nuclear matrix protein alterations associated with colon cancer and colon metastasis to the liver, and uses thereof |
GB0208331D0 (en) * | 2002-04-11 | 2002-05-22 | Oxford Glycosciences Uk Ltd | Proteins |
CN1396182A (zh) * | 2002-07-31 | 2003-02-12 | 陕西超英生物医学研究开发有限公司 | 人内皮生长因子受体2蛋白全人单克隆抗体及其制备方法 |
US20040157278A1 (en) * | 2002-12-13 | 2004-08-12 | Bayer Corporation | Detection methods using TIMP 1 |
KR100595364B1 (ko) | 2003-02-20 | 2006-07-03 | 재단법인 목암생명공학연구소 | Lk8 단백질을 유효성분으로 포함하는 항암제 |
US7191068B2 (en) | 2003-03-25 | 2007-03-13 | Proteogenix, Inc. | Proteomic analysis of biological fluids |
US20040191782A1 (en) * | 2003-03-31 | 2004-09-30 | Yixin Wang | Colorectal cancer prognostics |
WO2005015218A1 (en) | 2003-07-21 | 2005-02-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Use of proteins proteinase 3 (prn3) and leukocyte elastase inhibitor (ileu) as a marker for colorectal cancer |
EP1649289B1 (en) * | 2003-07-21 | 2008-10-22 | Roche Diagnostics GmbH | Use of proteins proteinase 3 (prn3) and leukocyte elastase inhibitor (ileu) as a marker for colorectal cancer |
WO2005015226A1 (en) | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Use of protein t-plastin (plst) as a marker for colorectal cancer |
US20050187147A1 (en) * | 2003-09-22 | 2005-08-25 | Newman Michael J. | Compositions and methods for increasing drug efficiency |
CA2546837A1 (en) | 2003-12-03 | 2005-06-16 | Glycominds Ltd. | Method for diagnosing diseases based on levels of anti-glycan antibodies |
WO2005060996A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-07 | Lauras As | Method of altering the pka type i signalling pathway |
US20050181398A1 (en) | 2004-01-16 | 2005-08-18 | Fung Eric T. | Specific detection of host response protein clusters |
CN1922490B (zh) | 2004-02-19 | 2012-07-04 | 耶鲁大学 | 使用蛋白质组学技术鉴定癌症蛋白生物标志物的方法 |
CA2569079A1 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | The Johns Hopkins University | Methods of screening for cell proliferation or neoplastic disorders |
US20090297523A1 (en) * | 2004-07-27 | 2009-12-03 | Yale University | Erm family binding agents and their use in diagnosis and treatment of proliferative conditions |
AT500719B1 (de) | 2004-09-08 | 2010-06-15 | Red Bull Gmbh | Chaperone als tumormarker |
US20090239794A1 (en) * | 2004-11-18 | 2009-09-24 | Valorisation Hsj, Societe En Commandite | Hcv f protein and uses thereof |
ATE501267T1 (de) | 2005-01-06 | 2011-03-15 | Eastern Virginia Med School | Apolipoprotein-a-ii-isoform als biomarker für prostatakrebs |
US20060192550A1 (en) | 2005-02-25 | 2006-08-31 | Sandquist David A | Current sensor with magnetic toroid single frequency detection scheme |
EP1724586A3 (en) * | 2005-05-21 | 2007-07-04 | ProteoSys AG | Annexin for cancer risk assessment |
WO2007002535A2 (en) | 2005-06-24 | 2007-01-04 | Ciphergen Biosystems, Inc. | Biomarkers for ovarian cancer |
WO2007020522A2 (en) | 2005-08-18 | 2007-02-22 | Zadec Aps | Protein markers for diagnosing of colorectal cancer and use of said markers as drug targets for the treatment of said cancer type |
EP1775590A1 (en) | 2005-10-11 | 2007-04-18 | Laboratorios S.A.L.V.A.T., S.A. | Non-invasive in vitro method to detect transitional cell carcinoma of the bladder |
CN1967246A (zh) | 2005-11-18 | 2007-05-23 | 上海中科新生命生物科技有限公司 | 酰化氨基酸水解酶1及其抗体检测肝癌的应用 |
CA2633255A1 (en) | 2005-12-16 | 2007-06-21 | Electrophoretics Limited | Diagnosis and prognosis of colorectal cancer |
WO2007140352A2 (en) | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Invitrogen Corporation | Plasma membrane and secreted cancer biomarkers |
AU2007284651B2 (en) | 2006-08-09 | 2014-03-20 | Institute For Systems Biology | Organ-specific proteins and methods of their use |
EP2084531B1 (en) | 2006-09-08 | 2013-11-06 | Institut Gustave Roussy | Compounds regulating calreticulin or kdel receptor cell surface exposure and uses thereof to evaluate the efficiency of a cancer treatment |
EP2083857A4 (en) | 2006-09-22 | 2010-03-24 | Dana Farber Cancer Res Inc | METHOD FOR TREATING INTERFERENCE IN CONNECTION WITH MICA |
FR2933773B1 (fr) * | 2008-07-10 | 2013-02-15 | Biomerieux Sa | Procede de dosage de la proteine disulfide isomerase pour le diagnostic in vitro du cancer colorectal |
-
2007
- 2007-07-19 FR FR0705197A patent/FR2919060B1/fr active Active
-
2008
- 2008-07-10 CN CN200880025258.XA patent/CN101802617B/zh active Active
- 2008-07-10 ES ES08827062T patent/ES2570627T3/es active Active
- 2008-07-10 US US12/452,038 patent/US8361731B2/en active Active
- 2008-07-10 CA CA2693648A patent/CA2693648C/fr active Active
- 2008-07-10 AU AU2008285554A patent/AU2008285554B2/en active Active
- 2008-07-10 WO PCT/FR2008/051289 patent/WO2009019365A2/fr active Application Filing
- 2008-07-10 JP JP2010516547A patent/JP5690139B2/ja active Active
- 2008-07-10 EP EP08827062.4A patent/EP2167971B1/fr active Active
-
2012
- 2012-12-12 US US13/712,340 patent/US9890196B2/en active Active
-
2014
- 2014-11-17 JP JP2014232815A patent/JP2015096508A/ja active Pending
-
2015
- 2015-04-30 US US14/701,002 patent/US20150233933A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20100136539A1 (en) | 2010-06-03 |
EP2167971B1 (fr) | 2016-02-17 |
FR2919060A1 (fr) | 2009-01-23 |
AU2008285554A8 (en) | 2010-07-29 |
US20130102758A1 (en) | 2013-04-25 |
WO2009019365A3 (fr) | 2009-04-09 |
ES2570627T3 (es) | 2016-05-19 |
WO2009019365A2 (fr) | 2009-02-12 |
AU2008285554B2 (en) | 2014-06-26 |
CA2693648C (fr) | 2017-04-18 |
AU2008285554A1 (en) | 2009-02-12 |
EP2167971A2 (fr) | 2010-03-31 |
CA2693648A1 (fr) | 2009-02-12 |
US8361731B2 (en) | 2013-01-29 |
FR2919060B1 (fr) | 2012-11-30 |
JP2010533688A (ja) | 2010-10-28 |
US9890196B2 (en) | 2018-02-13 |
CN101802617A (zh) | 2010-08-11 |
US20150233933A1 (en) | 2015-08-20 |
CN101802617B (zh) | 2014-07-09 |
JP2015096508A (ja) | 2015-05-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6125588B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのプロテインジスルフィドイソメラーゼ・アッセイ方法 | |
JP5572548B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のための白血球エラスターゼインヒビター・アッセイ方法 | |
JP5715817B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のための肝臓脂肪酸結合タンパク質、ceaおよびca19−9のアッセイのための方法 | |
JP5690139B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのエズリン・アッセイ方法 | |
JP5964544B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのアポリポタンパク質ai・アッセイ方法 | |
JP5662412B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのプロディフェンシン−a6・アッセイ方法 | |
JP5587773B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのアポリポタンパク質aii・アッセイ方法 | |
JP5417327B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのi−プラスチン・アッセイ方法 | |
JP5559050B2 (ja) | 結腸直腸癌のインビトロ診断のためのアミノアシラーゼ1・アッセイ方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110705 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130702 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130930 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131007 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131226 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140106 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140715 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20141015 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20141022 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141117 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150106 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150130 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5690139 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |