JP5656517B2 - 浮遊ウイルス不活化評価方法およびその装置 - Google Patents
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Description
また、本発明によれば、所定のウイルス液を噴霧して、評価室内に、所定の粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、所定の粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより評価室内のウイルス数を計測するため、評価室内のウイルス数を迅速に測定することが可能である。
まず、浮遊ウイルス不活化評価装置の具体的な構成を説明するに先立ち、浮遊ウイルス不活化評価装置における試験方法の概要について説明する。
浮遊ウイルス不活化評価装置は、外壁により外部空間と隔離された評価室内にウイルスを供給し、続いてウイルス不活化デバイスを備えた装置(例えば、空調機や、空気清浄機といった空気調和装置等)を駆動して評価室内にウイルスを不活化させる不活化粒子を供給し、ウイルスを不活化する。そして、ウイルス不活化デバイスによるウイルス不活化後の評価室内のウイルス数を計測し、ウイルス不活化デバイスによるウイルスに対する不活化能力を評価する。
以下、大腸菌ファージの作成方法について説明する。普通寒天培地で前培養した1コロニーを釣菌し、大腸菌用液体培地に植菌して、37℃18時間培養した。培養後、大腸菌液体培地の吸光度が0.1以上であることを確認し、試験に供した。50ml遠沈管に、上記で作成した大腸菌液体培地5mL(約108CFU/ml)(CFU:Colony forming unit)とファージ5mL(約106PFU/ml)(PFU: Plaque forming unit)を加えて混合し、37℃10分間静置した。この液に、45℃の軟NB寒天培地10mlを添加混合し、当日作製した角型シャーレ下層へ重層し、固定化させて倒置せずに37℃で24時間培養した。培養後、角型シャーレ上層をコンラージ棒およびピペットを用いて、フィルター付きストマッカー用袋に回収し、2分間ストマッキングした。この液を別の50ml遠沈管に移し、3500rpmで10分間遠心し、上澄みをさらに別の50ml遠沈管に移した。
ウイルスをウイルス粒子として浮遊させた場合、粒子径が大きいと、自重により自然落下してしまう。逆に、粒子径が小さいと、ウイルスを包む水分が少なくなり、乾燥によりウイルスが不活化しやすい状態となってしまう。以上のようなことから、ウイルスを不活化することなく、安定に浮遊させるためには、ウイルス粒子の噴霧粒子径は、直径0.3〜0.5μmが望ましい。
以下、噴霧方式について説明する。ウイルスは、残栄養塩濃度を、表面張力、または電気伝導度、または粘度により規定したウイルス噴霧液をジェット式ネブライザで噴霧するのがよい。大腸菌ファージ原液を噴霧する場合、原液は上記のように、寒天培地内で、感染させ、増殖させた大腸菌ファージを精製し、作成する。そのため、大腸菌ファージ原液中には、どうしても培地成分である栄養塩が残存してしまう。本報では、その残存する培地成分を、残栄養塩と定義する。具体的には、肉エキス、ペプトン、寒天、塩化ナトリウム、グルコース、酵母エキス、ブドウ糖等であるが、これらだけでなく、大腸菌ファージ、またそのホスト等、本評価において、浮遊させる微生物を培養する際に用いられる成分すべてを残栄養塩とする。
大腸菌ファージ原液を用いる場合において、ウイルス噴霧液中の残栄養塩濃度と、その液を、評価室内にジェット式ネブライザにより噴霧した際に生じる浮遊物質の粒子径分布との関係では、残栄養塩濃度とともに、噴霧粒子数が変化し、濃度が高くなるほど、全測定粒子径の噴霧粒子数量が多くなった。また、残栄養塩濃度とともに、粒子径0.3〜0.5μmの粒子数比が異なった。
なお、この各粒子径での噴霧粒子数は、大腸菌ファージの種類によらず、かつ、大腸菌ファージの全く入っていない大腸菌ファージ作成液を原液として用いた場合にも同様の結果が得られる。
図4は、大腸菌ファージ原液を用いた場合のウイルス噴霧液の残栄養塩濃度と表面張力との関係を示す図である。図4に示すように、ウイルス噴霧液中の残栄養塩濃度が高いほど、表面張力が低下している。これは、残栄養塩が界面活性剤の性質を有していることを示しており、ウイルス噴霧液中の残栄養塩が界面活性作用を有しているため、希釈率が低いほうが、ネブライザで噴霧した際の粒子中の水の蒸散が抑制され、その結果、噴霧粒子数が増加、かつ、噴霧粒子径が大きいほうにシフトする結果となったと考えられる。
図5に、大腸菌ファージ原液を用いた場合のウイルス噴霧液の残栄養塩濃度(噴霧粒子径)と電気伝導度との関係を示す。残栄養塩濃度と、電気伝導度においても相関があることがわかる。表面張力のかわりに、電気伝導度を、10〜1000μs/cm、望ましくは100μs/cmと規定したウイルス噴霧液を噴霧することにより、ウイルス粒子の粒子径分布を制御したウイルス噴霧が可能となる。また、ウイルス噴霧液の粘度を規定することによっても、ウイルス噴霧液を噴霧することにより、ウイルス粒子の粒子径分布を制御したウイルス噴霧が可能となる。
評価室内に浮遊するウイルス数を計測する場合、浮遊しているウイルスを回収液中に採取し、そのウイルス懸濁液中のウイルス数を、50% tissue culture infective dose(TCID50)法やプラーク法を用いて計測する必要がある。これらの方法は、感染細胞の細胞変性効果(Cytopathic effect, CPE)や培養細胞に生ずるプラークを指標としているため、測定方法、操作法が煩雑であり、かつ判定方法にかなりの習熟度を必要とし、さらには、判定までに1日から約一週間の日数を必要とする。
以下、ウイルス噴霧場所について説明する。評価室内の噴霧ウイルス場所は特に規定しない。図6、図7は、評価室10m3の中で、大腸菌ファージ原液を用いたウイルス噴霧液をジェット式ネブライザを用いて噴霧させる場合に、噴霧場所を変えた際の、パーティクルカウンターによる評価室中央での粒子径0.3〜0.5μmの粒子数を測定した結果を示す図である。噴霧場所に関係なく、噴霧ウイルス数が一定であり、噴霧場所が浮遊ウイルス数に影響を与えないことがわかる。ただし、ウイルス不活化評価デバイスの設置に影響を与えない場所で噴霧するのがよい。
以下、評価室内のウイルスを採取するウイルス採取手段について説明する。浮遊ウイルスの採取には、図8に示すJIS3800Kで規定されているミゼットインピンジャー(以下、インピンジャーと記載する)を用いると、ウイルス採取率が高く、有効である。具体的な採取方法としては、インピンジャーノズル先端部での流速が105m/s以下、望ましくは105m/sで、インピンジャーを直列に多段式に連結させるのがよい。特に、四連連結が望ましい。また、各インピンジャーの前に差圧計および圧力可変なオリフィスを接続させるのが望ましい。以下、その理由について順次説明する。
まず、インピンジャーノズル先端部での流速が105m/s以下である必要性に関して説明する。一般的に、芽胞菌等をインピンジャーで採取する際には、インピンジャー入口流量を12.5L/minまで増加させる。これは、インピンジャーのノズル径が入口径φ8mmから先端径φ1mmと急激に細くなることを利用して、ノズル先端での速度を265m/sと音速程度まで増大させ、採取空気が回収水に衝突する慣性力を利用して採取効率を高めるためである。音速まで速度を増大させると、ノズル径が小さくなったインピンジャー内部の空気は、圧縮系となり、その結果、熱が上昇する。芽胞形成菌等は、硬い細胞壁で覆われているため、圧力・熱に強く、上記の状態に曝されても性状が変わることはない。
M:マッハ数
ω:流速(m/s)
a:音速(340m/s)
インピンジャーを多段式に直列に連結させる理由を説明する。インピンジャー1本で捕集できる粒子数は、10〜20%弱であり、ウイルス採取時においても当てはまる。インピンジャーでの先の大腸菌ファージ原液を用い、ウイルス噴霧液を噴霧した場合のウイルス採取量は、採取空気中のウイルス数に対して17%程度であるため、2本直列で繋いだ場合の1本目、2本目でのウイルス採取量は、17%、14%となり、2本目のインピンジャーにおいても、総採取量の45%を占める。
直列に繋ぐ各インピンジャーの前に差圧計および圧力可変なオリフィスを接続することについて説明する。なお、オリフィスとは、圧力差を作るための絞りのことである。インピンジャー先端ノズル径は、インピンジャー作成のガラス管径によって決定する。一般に市販のガラス管φ1mmの公差は±10%であるため、ノズルの公差も必然的に±10%となり、その結果、ノズル先端部での速度公差は約±20%となる。
V:流速(m/s)、P:圧力(N/m2)、ρ:密度(kg/m3、0℃1atmの場合、1.293)
t℃における空気の密度ρは下記の式3で表される。
ρ=1.293×P/(1+0.00367t) ・・・式3
U×A=K・・・式4
U:流速(m/s)
A:断面積(m2)
K:定数(=流量 m3/s)
評価室には、外部空間から評価室内への空気を取り入れるための空気取入口を設ける。空気取入口には、取り入れられる空気中の埃や微生物等を採取する吸気中微小物質採取手段を設けることが望ましい。具体的な方法としては、空気取入口にHEPA等のフィルターを設ける。これにより、評価室内の微小物質による汚染を防ぐことができる。
風向き可変攪拌ファンを用い、評価室内空気を攪拌した場合、浮遊粒子測定ポイントすべてにおいて同程度の粒子が測定されるとともに、時間的経過とともに、すべてのポイントにおいて同様に推移できた。その一方で、攪拌ファンを用いない場合は、浮遊粒子測定ポイントすべてにおいて時間的にばらつきが大きく、評価室内で浮遊粒子数にばらつきがあった。
浮遊させるウイルスとしては、特に限定されるものではないが、人体に影響を与えず、かつ、乾燥に強く、浮遊時に自然減衰しにくい大腸菌ファージが望ましい。ウイルスを不活化させる不活化因子としては、オゾンガス、ラジカル粒子、イオン粒子、放射光、X線等を、また、ウイルス不活化デバイスとしては、それらの発生機能を有する空調機、空気清浄機等を用いることができる。
ここで、上記不活化因子がウイルスを不活化処理できる理由を、以下に述べる。
オゾンは、酸素、または空気を原料としての放電法、紫外線照射法、放射線照射法等により生成する。特に放電法の中でもコロナ放電においては、空気清浄機、空調機等内でのオゾンガスを生成するときに使用されている。以下に、コロナ放電に関して説明する。針状の電極が空中に配置されて高電圧がかけられた場合、その針の先端の周辺に気中放電が生じ、暗くするとその電極周辺にCorona(王冠)状の光が確認される。
以下、上記の構成を具体化してなる浮遊ウイルス不活化評価装置について説明する。
本浮遊ウイルス不活化評価装置は、外壁により外部空間と隔離された評価室1内にウイルスを供給するウイルス供給装置としての噴霧装置2と、評価室1内のウイルスを不活化する空気調和装置3と、ウイルス採取装置4と、パーティクルカウンター5aと、室内粒子数測定装置5とを有している。
図15に示すように、採取部4bは、図8のインピンジャー40を四連連結させた後、流量計41およびポンプ42を接続する。流量は5L/minで吸引する。また、各インピンジャー40の前に差圧計43および圧力可変なオリフィス44を接続させ、各インピンジャーノズル先端部(以下、ノズル先端部と略す)40aでの流速が105m/sとなるようオリフィス44を調節している。
試験開始前に、空気取入口1aおよび空気排出口1bを開けて評価室1内に塵の少ない清浄な空気が満たされるようにしておく。また、紫外線を発生する殺菌灯7により、評価室1内部の壁面等をあらかじめ一定時間照射して消毒しておき、さらに加湿器(図示せず)により、評価室1内の空気の湿度を調節しておくことが望ましい。また、例えば空気調和装置3の空調機能により、評価室1内の温度も調整しておくことが望ましい。評価室1内の消毒が終了した後、空気取入口1aおよび空気排出口1bを閉じると共に、殺菌灯7の運転を停止する。そして、パーティクルカウンター5aおよび室内粒子数測定装置5を作動させ、評価室1内の粒子数を計測する。攪拌ファン6を風向き可変をON、風速を7.8m3/分とし、後に噴霧されるウイルス粒子が空間中に拡散するように、送風を行う。
予め作成しておいたウイルス懸濁液7mlをネブライザ2aにセットし、コンプレッサー2bをONし、ウイルス溶液を評価室1内に10分間噴霧する。噴霧液は、上述したように、乾燥による不活化や、自重による自然落下を防止可能な粒子径0.3〜0.5μmとなるように、表面張力、電気伝導度または粘度の何れかが上述したように調整されたものである。よって、ウイルス粒子を評価室1内に安定して長時間浮遊させることが可能となっている。また、評価室1内には攪拌ファン6により気流が形成されているため、この点からも、噴霧されたウイルス粒子は、自然落下することなく評価室1内で安定して浮遊する。
空気調和装置3を駆動させる。空気調和装置3は、吸引した空気中のウイルスを電気集塵により、空気調和装置3内に捕集し、評価室1内の浮遊ウイルスを減少させることが可能である。
ウイルス採取装置4のポンプ42を作動させ、その後、評価室空気入り口コック1dを開き、評価室1内の空気を採取管4aにより採取し、ウイルス粒子を採取部4bのインピンジャー40で捕集する。採取部4bにおける採取流量は、ここでは上述したように、5L/min、採取流速は105m/sに調整されており、ウイルス粒子に対して圧縮、熱のかからない状態、すなわちウイルスに負荷が掛からない状態で採取できるようになっている。そして、採取された空気は、インピンジャー40、ポンプ42および空気戻り口1eを通って、再度、評価室1内に返送される。
パーティクルカウンター5aは、評価室1内の粒子径0.3〜0.5μmのウイルス粒子数を計測し、計測結果を評価室1外に配置された室内粒子数測定装置5に出力する。室内粒子数測定装置5は、評価室1内の粒子数をウイルス数と推定し、推定結果を表示手段(図示せず)に表示する。このように、評価室1内に、ウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、0.3〜0.5μmのウイルス粒子数を計測することにより評価室内のウイルス数を計測するため、評価室1内のウイルス数を迅速に測定でき、リアルタイムにモニタリングすることができる。また、ウイルス数の測定結果は時系列に室内粒子数測定装置5内に記憶でき、ウイルス数の経時変化を確認できるものとする。
浮遊ウイルスの評価が終わったら、空気調和装置3を停止し、空気取入口1aから評価室1内に清浄空気を入れ、評価室1内の浮遊ウイルスを含む空気を空気排出口1bを通過させることで清浄化した上で、外部に排出するようにする。
空気調和装置3を運転しない状態における評価室1内のウイルス粒子の安定性試験について説明する。ここでは、ウイルス原液を滅菌した超純水で100倍希釈し、表面張力を69gyn/cmに調節したウイルス懸濁液をジェット式ネブライザで評価室1内に噴霧した。図16は、温度20℃、相対湿度60%RHに設定し、空気調和装置3を運転しない状態でのウイルス数変化を計測した結果である。図16において、横軸は時間、縦軸はウイルスを浮遊させた10m3評価室1内の浮遊ウイルス濃度をとって示したものである。図16に示すように、6hr後におけるウイルス数の減衰は、約1/10で、大きな減少はみられていない。ウイルスは、乾燥に弱いために、相対湿度60%RHほどの高い湿度環境にすると、ウイルスが死滅することなく、不活化しない状態で、長時間浮遊させることができるものと推定される。
図17は、空気調和装置3を運転した状態での評価室1内のウイルス数変化を計測した結果である。本試験結果は、空気調和装置3を運転しない場合(図16)に比較して、空気調和装置3を運転した場合には、4hr後には、約99%の浮遊ウイルスが不活化されている。本発明者らによる実験により、同条件で複数回の試験によっても、プロットの近似曲線の傾きにおいて、10%以下のばらつきレベルに制御された安定した試験を行えることが確認されている。
図18は、空気調和装置3を運転しない状態での評価室1内でのウイルス噴霧後の直径0.3μm〜0.5μmの粒子数の変化を示す図である。図18を図16と比較すると分かるように、計測された浮遊ウイルス数と粒子径0.3〜0.5μmの粒子数とがほぼ同数で測定されている。そのため、本来ウイルス数を計測しなくてはならない浮遊ウイルス不活化評価において、パーティクルカウンター5a等で粒子径0.3〜0.5μmの粒子数を測定することにより、浮遊ウイルス数をリアルタイムに推定することができる。
以上説明したように、ウイルスを浮遊させた10m3評価室1の浮遊ウイルス濃度および直径0.3〜0.5μm粒子径の粒子数をモニタリングできる。本手法では、10m3評価室1の浮遊ウイルス濃度と直径0.3〜0.5μm粒子径の粒子数はほぼ同数であるため、ウイルス数を測定することなく、直径0.3〜0.5μm粒子径の粒子を計測することにより、ウイルス数をモニタリングすることができる。
上記においては、ウイルスの自然減衰を防ぐために、温度20℃、相対湿度60%RHに設定した評価室1内にウイルスを噴霧している。温度の影響を評価するため、湿度は60%RHと一定条件とし、温度を10℃、15℃、20℃、25℃と異なる評価室1内にウイルスを噴霧させ、空気調和装置3を運転しない状態でのウイルス数変化を計測した結果を図19に示す。
実施の形態2は、実施の形態1の噴霧装置2の他の構成例(その1)について説明するものであり、噴霧装置2以外の構成は、図1に示した上記実施の形態1と同様である。以下、実施の形態2の噴霧装置20について詳細に説明する。
図21に示すように、本実施の形態2の噴霧装置20は、ネブライザ2aと、コンプレッサー2bと、噴霧液調合装置21とを備えている。噴霧液調合装置21は、図22に示すように、上記の方法で作成した大腸菌ファージφX174の原液を貯留するウイルス原液タンク22aと残栄養塩含有液タンク22bと純水タンク22cとがそれぞれポンプ23a〜23cを介してチューブにより液混合装置24に接続され、液混合装置24にて混合された液がネブライザ2aに送り込まれるように構成されている。
実施の形態3は、実施の形態1の噴霧装置2の他の構成例(その2)について説明するものであり、噴霧装置2以外の構成は、図1に示した上記実施の形態1と同様である。以下、実施の形態3の噴霧装置20Aについて詳細に説明する。
図23に示すように、本実施の形態3の噴霧装置20Aは、ネブライザ2aと、コンプレッサー2bと、噴霧液調合装置21Aとを備えている。噴霧液調合装置21Aは、図24に示すように、上記の方法で作成した大腸菌ファージφX174の原液を貯留するウイルス原液タンク22aと残栄養塩含有液タンク22bと純水タンク22cとがそれぞれポンプ23a〜23cを介してチューブにより液混合装置24に接続され、液混合装置24にて混合された液がネブライザ2aに送り込まれるように構成されている。
実施の形態4の浮遊ウイルス不活化評価装置は、実施の形態1の浮遊ウイルス不活化評価装置のウイルス採取装置4に代えてウイルス採取装置4fを備えたもので、その他の構成は実施の形態1と同様である。
図26に示すように本実施の形態4のウイルス採取装置4fは、実施の形態1のウイルス採取装置4と採取部4bの構成が異なり、実施の形態4の採取部4eは、幅φ1mm(±0.1mm)、長さ100mmの管45の後に、インピンジャー40を直列に四連連結し、更に流量計41とポンプ42とを接続した構造を有する。すなわち、上記実施の形態1のウイルス採取装置4の採取部4bにおいて各インピンジャー40の前にそれぞれ差圧計43およびオリフィス44を設けていた構成に代えて、直列に四連連結したインピンジャー40群の前に、管45を接続した構成とした点に特徴を有している。なお、空気を採取する場合には、φ1mm(±0.1mm)を通過する際の流速が105m/sとなるようポンプで吸引する。
図27は、本発明の実施の形態5に係る浮遊ウイルス不活化評価装置の概略構成図である。図27において、図1に示した実施の形態1と同一の部分には同一符号を付す。
本実施の形態5は、インピンジャー40の採取管4aの先端またはパーティクルカウンター5aに空気を誘導するチューブ(図示せず)の先端の位置、すなわち測定ポイントを遠隔操作により変更できるようにした点に特徴を有する。その他の基本的な構成は、実施の形態1と同様である。以下、実施の形態5が実施の形態1と異なる部分を中心に説明する。
Claims (47)
- 隔離壁により外部空間と隔離された評価室内に、安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス含有浮遊粒子(以下、ウイルス粒子)を供給し、前記評価室内の安定浮遊した浮遊ウイルスの数を計測して評価することを特徴とする浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記評価室内にウイルス粒子を供給するにあたり、所定のウイルス液を噴霧して行い、前記所定のウイルス液は、前記所定のウイルス液を噴霧した際のウイルス粒子の粒子径が前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子が主となるように残栄養塩濃度が調整されたウイルス液であることを特徴とする請求項1記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液の残栄養塩濃度を、前記所定のウイルス液の表面張力により調整することを特徴とする請求項2記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液の残栄養塩濃度を、前記所定のウイルス液の電気伝導度により調整することを特徴とする請求項2記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液の残栄養塩濃度を、前記所定のウイルス液の粘度により調整することを特徴とする請求項2記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 第1計測方法として、直列に連結した複数のインピンジャーにより浮遊ウイルスを採取し、その採取されたウイルスの数を計測することを特徴とする請求項1乃至請求項5の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 各インピンジャーの前に差圧計および圧力可変なオリフィスをそれぞれ接続し、各インピンジャーのノズル先端部の空気流入流速を所定の流速に調節することを特徴とする請求項6記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記ウイルスは、大腸菌ファージφX174であり、前記空気流入流速を105m/s以下としたことを特徴とする請求項7記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記インピンジャーの数を4つとしたことを特徴とする請求項8記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記ウイルスは、大腸菌ファージφX174であり、φ1mm、長さ100mm以上の管の後に4つのインピンジャーを直列に連結し、各インピンジャーのノズル先端部の空気流入流速が105m/s以下となるように調整して浮遊ウイルスを採取することを特徴とする請求項6記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液は、噴霧された際に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を前記評価室内に確立するように調整された液であり、このウイルス液を噴霧することにより、前記評価室内に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、
第2計測方法として、前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測することを特徴とする請求項1乃至請求項5の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。 - 前記所定のウイルス液は、大腸菌ファージφX174の原液を希釈して表面張力が60〜70(×10−3N/m)となる範囲に調節された液であり、このウイルス液を噴霧することにより、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を前記評価室内に確立し、
第2計測方法として、前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測することを特徴とする請求項3記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。 - 前記所定のウイルス液は、大腸菌ファージφX174の原液を希釈して電気伝導度が10〜1000μs/cmとなる範囲に調節された液であり、このウイルス液を噴霧することにより、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を前記評価室内に確立し、
第2計測方法として、前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測することを特徴とする請求項4記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。 - 前記安定浮遊可能な粒子径範囲が0.3〜0.5μmであることを特徴とする請求項12または請求項13記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記ウイルス粒子数をパーティクルカウンターにより計測することを特徴とする請求項11乃至請求項14の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液は、噴霧された際に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を前記評価室内に確立するように調整された液であり、このウイルス液を噴霧することにより、前記評価室内に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、
直列に連結した複数のインピンジャーにより浮遊ウイルスを採取し、その採取されたウイルスを計測する第1計測方法と、前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測する第2計測方法とを併用してウイルス数を計測することを特徴とする請求項2記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。 - 隔離壁により外部空間と隔離された評価室内に所定のウイルス液を噴霧することにより、前記評価室内に、所定の粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、
前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記所定の粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測して評価することを特徴とする浮遊ウイルス不活化評価方法。 - 前記所定のウイルス液は、大腸菌ファージφX174の原液を希釈して表面張力が60〜70(×10−3N/m)となる範囲に調節したものであることを特徴とする請求項17記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液は、大腸菌ファージφX174の原液を希釈して電気伝導度が10〜1000μs/cmとなる範囲に調節したものであることを特徴とする請求項17記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定の粒子径範囲は0.3〜0.5μmであることを特徴とする請求項18または請求項19記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記ウイルス粒子数をパーティクルカウンターにより計測することを特徴とする請求項17乃至請求項20の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 前記所定のウイルス液をジェット式ネブライザで噴霧することを特徴とする請求項1乃至請求項21の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価方法。
- 隔離壁により外部空間と隔離された評価室内に、安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子を供給するウイルス供給装置と、
前記評価室内の安定浮遊した浮遊ウイルスの数を計測して評価するウイルス計測評価装置と
を有することを特徴とする浮遊ウイルス不活化評価装置。 - 前記ウイルス供給装置は、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子が主となるように残栄養塩濃度を調整した所定のウイルス液を噴霧して前記評価室内にウイルス粒子を供給することを特徴とする請求項23記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス供給装置は、ウイルス原液タンクと、残栄養塩含有液タンクと、純水タンクと、液混合装置と、前記各タンクの液をそれぞれ独立して前記液混合装置に供給するポンプ装置と、前記液混合装置で混合された混合液の表面張力を測定する表面張力測定装置と、前記表面張力測定装置の測定結果が所定の表面張力範囲内となるように前記ポンプ装置を制御する制御装置とを備え、前記ウイルス供給装置は、前記所定の表面張力範囲内となるように調整された混合液を、残栄養塩濃度を調整した前記所定のウイルス液として前記評価室内に噴霧することを特徴とする請求項24記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス供給装置は、ウイルス原液タンクと、残栄養塩含有液タンクと、純水タンクと、液混合装置と、前記各タンクの液をそれぞれ独立して前記液混合装置に供給するポンプ装置と、前記液混合装置で混合された混合液の電気伝導度を測定する電気伝導度測定装置と、前記電気伝導度測定装置の測定結果が所定の電気伝導度範囲内となるように前記ポンプ装置を制御する制御装置とを備え、所定の電気伝導度範囲内となるように調整された混合液を、残栄養塩濃度を調整した前記所定のウイルス液として前記評価室内に噴霧することを特徴とする請求項24記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス供給装置は、ウイルス原液タンクと、残栄養塩含有液タンクと、純水タンクと、液混合装置と、前記各タンクの液をそれぞれ独立して前記液混合装置に供給するポンプ装置と、前記液混合装置で混合された混合液の粘度を測定する粘度測定装置と、前記粘度測定装置の測定結果が所定の粘度範囲内となるように前記ポンプ装置を制御する制御装置とを備え、所定の粘度範囲内となるように調整された混合液を、残栄養塩濃度を調整した前記所定のウイルス液として前記評価室内に噴霧することを特徴とする請求項24記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記各タンク、前記液混合装置および前記ポンプ装置を、温度調整可能な冷蔵庫内に配置したことを特徴とする請求項25乃至請求項27の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス計測評価装置は、直列に連結した複数のインピンジャーにより浮遊ウイルスを採取し、その採取されたウイルスの数を計測する第1ウイルス計測装置を有することを特徴とする請求項23乃至請求項28の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記第1ウイルス計測装置は、各インピンジャーの前に差圧計および圧力可変なオリフィスをそれぞれ接続した構成を有し、前記差圧計および前記オリフィスにより各ノズル先端部の空気流入流速が所定の流速に調節されてなることを特徴とする請求項29記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルスは、大腸菌ファージφX174であり、前記空気流入流速を105m/s以下としたことを特徴とする請求項30記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記インピンジャーの数を4つとしたことを特徴とする請求項31記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルスは、大腸菌ファージφX174であり、前記第1ウイルス計測装置は、φ1mm、長さ100mm以上の管の後に、4つのインピンジャーを直列に連結し、各インピンジャーのノズル先端部の空気流入流速が105m/s以下となるように調整して浮遊ウイルスを採取することを特徴とする請求項29記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記所定のウイルス液は、噴霧された際に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を前記評価室内に確立するように調整された液であり、このウイルス液を噴霧することにより、前記評価室内に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、
前記ウイルス計測評価装置は、前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測する第2ウイルス計測装置を有することを特徴とする請求項24乃至請求項28の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。 - 前記所定のウイルス液は、大腸菌ファージφX174の原液を希釈して表面張力が60〜70(×10−3N/m)となる範囲に調節したものであることを特徴とする請求項34記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記所定のウイルス液は、大腸菌ファージφX174の原液を希釈して電気伝導度が10〜1000μs/cmとなる範囲に調節したものであることを特徴とする請求項34記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記所定の粒子径範囲が0.3〜0.5μmであることを特徴とする請求項35または請求項36記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記第2ウイルス計測装置は、前記ウイルス粒子数をパーティクルカウンターにより計測することを特徴とする請求項34乃至請求項37の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記所定のウイルス液は、噴霧された際に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を前記評価室内に確立するように調整された液であり、前記ウイルス供給装置は、この所定のウイルス液を噴霧することにより、前記評価室内に、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立し、
前記ウイルス計測評価装置は、直列に連結した複数のインピンジャーにより浮遊ウイルスを採取し、その採取されたウイルスの数を計測する第1ウイルス計測装置と、前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記安定浮遊可能な粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測する第2ウイルス計測装置とを併用してウイルス数を計測することを特徴とする請求項24記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。 - 隔離壁により外部空間と隔離された評価室内に所定のウイルス液を噴霧することにより、前記評価室内に、所定の粒子径範囲のウイルス粒子一つに対してウイルスが一つ存在する系を確立するウイルス供給装置と、
前記評価室内を浮遊するウイルス粒子のうち、前記所定の粒子径範囲のウイルス粒子数を計測することにより前記評価室内のウイルス数を計測して評価するウイルス計測評価装置とを備えたことを特徴とする浮遊ウイルス不活化評価装置。 - 前記ウイルス供給装置は、大腸菌ファージφX174の原液を貯留するウイルス原液タンクと、残栄養塩含有液タンクと、純水タンクと、液混合装置と、前記各タンクの液をそれぞれ独立して前記液混合装置に供給するポンプ装置と、前記液混合装置で混合された混合液の表面張力を測定する表面張力測定装置と、前記表面張力測定装置の測定結果が60〜70(×10−3N/m)となるように前記ポンプ装置を制御する制御装置とを備え、前記ウイルス供給装置は、表面張力が60〜70(×10−3N/m)となるように調整された混合液を、残栄養塩濃度を調整した前記所定のウイルス液として前記評価室内に噴霧することを特徴とする請求項40記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス供給装置は、大腸菌ファージφX174の原液を貯留するウイルス原液タンクと、残栄養塩含有液タンクと、純水タンクと、液混合装置と、前記各タンクの液をそれぞれ独立して前記液混合装置に供給するポンプ装置と、前記液混合装置で混合された混合液の電気伝導度を測定する電気伝導度測定装置と、前記電気伝導度測定装置の測定結果が10〜1000μs/cmの電気伝導度となるように前記ポンプ装置を制御する制御装置とを備え、前記ウイルス供給装置は、電気伝導度が10〜1000μs/cmとなるように調整された混合液を、残栄養塩濃度を調整した前記所定のウイルス液として前記評価室内に噴霧することを特徴とする請求項40記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記所定の粒子径範囲が0.3〜0.5μmであることを特徴とする請求項41または請求項42記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス計測評価装置は、前記ウイルス粒子数をパーティクルカウンターにより計測することを特徴とする請求項40乃至請求項43の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記ウイルス供給装置は、前記所定のウイルス液をジェット式ネブライザで噴霧することを特徴とする請求項40乃至請求項44の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記各タンク、前記液混合装置および前記ポンプ装置を、温度調整可能な冷蔵庫内に配置したことを特徴とする請求項41乃至請求項45の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
- 前記評価室内に、外部から位置制御可能で前記ウイルス計測評価装置による計測ポイントを移動可能な移動装置を設けたことを特徴とする請求項24乃至請求項46の何れか1項に記載の浮遊ウイルス不活化評価装置。
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JP2012044957A (ja) | 2012-03-08 |
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