JP5656091B2 - Ｌｂｃ用細胞保存容器及びこれを用いるｌｂｃ標本作成方法 - Google Patents

Description

本発明は、ＬＢＣ用細胞保存容器、及びこのＬＢＣ用細胞保存容器を用いてスライドガラスに細胞を付着、捕捉させるＬＢＣ標本作成方法に関する。

ＬＢＣ（液状化細胞診：Ｌｉｑｕｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｃｙｔｏｌｏｇｙ）用標本を作製する際、細胞を確実にかつ簡便にスライドガラス上に付着、捕捉することが要求される。そのため従来から専用機器を用いた、吸引転写法、密度勾配遠心法などが提案されているが、設備が高価などのコスト問題、スライドガラスへの付着のための試料作成の手間がかかるなどの問題点がある（例えば、非特許文献１）。

また、フィルターに試料液中の有形試料を吸引濾過させて捕集する試料作成装置（標本作成装置）（例えば、特許文献１）、フィルター付プレパラートを用いる検体試料作成装置（標本作成装置）(例えば、特許文献２)が開示されている。

特開２００５−２４１４２３号公報（要約、図１） 特開平１０−２２１２２６号公報（要約、図１）

非特許文献１：池本理恵 （株）エスアールエル福岡ラボラトリー. 講演資料「各ＬＢＣの原理と応用.」第5回九州ＬＢＣ研究会.[平成２２年４月１日検索]、 インターネット＜http://www.9shuＬＢＣ.com/5th_ＬＢＣ_3.pdf＞ （各ＬＢＣの原理の頁、および、最終頁）

しかしながら、従来のいずれの装置と方法も、細胞保存容器および標本作製機器を別途必要とし、ＬＢＣ用の標本作成に、設備コスト、ランニングコストがかかり、またＬＢＣ標本の作成手順が煩雑になる。

そこで、本発明の課題は、上記従来技術の設備の欠点を克服し、スライドガラスへの簡便な細胞の付着捕捉を可能としてＬＢＣ標本の作成をするＬＢＣ用細胞保存容器およびＬＢＣ標本作製方法を提供することにある。

上記の課題を解決するため、請求項１の発明は、筒状本体と、この本体を密封可能な蓋部を有し、前記本体又は蓋部のいずれかに細胞を付着可能なスライドガラスを装置可能とするスリットを設けたＬＢＣ用細胞保存容器とする。これによって、筒状本体または蓋部の一部分にスライドガラスを固定できるスリットを設けることにより、細胞保存とスライドガラスへの細胞付着が可能な、ＬＢＣ用細胞保存容器を提供することができる。

また、請求項２のように、前記スリットが、前記筒状本体に該筒状本体の長手方向と交差し貫通して設けられることとすれば、簡便に、スライドガラスへの細胞付着が確実に可能なＬＢＣ用細胞保存容器を提供できる。

また、請求項３のように、前記スリットが、前記筒状本体の長手方向と交差する方向に、前記蓋部を貫通して設けられたＬＢＣ用細胞保存容器とすれば、簡便で、スライドガラスへの細胞付着が確実に可能なＬＢＣ用細胞保存容器を提供できる。

また、請求項４のように、前記スリットに近い側の前記筒状本体の端部に密封用のＯリングを設けたＬＢＣ用細胞保存容器とすれば、保存液の漏れを、より確実に防止できる。

また、請求項５のように、前記筒状本体又は前記蓋部のいずれかに採取細胞がたまる窪みを設けたＬＢＣ用細胞保存容器とすれば、細胞の収集をより確実とできる。

また、請求項６のように、前記スリットが、前記蓋部の頭部内面に接して設けられるＬＢＣ用細胞保存容器とすれば、スライドガラスのスリットへの装着が容易確実で、スライドガラスの割れが生じにくい。

また、請求項７のように、前記請求項１乃至５のいずれかのＬＢＣ用細胞保存容器を用いて、前記スライドガラスを前記スリットに装置して、前記スライドガラス上に細胞を付着するＬＢＣ標本作成方法によって、簡便で、効率的なＬＢＣ用標本の作成を可能と出来る。

上記の通り本発明によるＬＢＣ用細胞保存容器は、細胞保存、および細胞をスライドガラスへ簡便にかつ効率よく付着捕捉できることを可能とするものである。また本発明のＬＢＣ用細胞保存容器を使用してのＬＢＣ標本作成方法によれば、高価な設備・機械を導入するまでもなく、安価にＬＢＣ標本の作成を可能とできる。

本発明によるＬＢＣ用細胞保存容器の実施例１の全体を示す縦断面図である。 図１に示すＬＢＣ用細胞保存容器の筒状本体の縦断面図である。 図１に示すＬＢＣ用細胞保存容器の蓋部１３の縦断面図である。 本発明によるＬＢＣ用細胞保存容器の実施例２の全体を示す縦断面図である。 図４に示すＬＢＣ用細胞保存容器の筒状本体の縦断面図である。 図４に示すＬＢＣ用細胞保存容器の蓋部２２の縦断面図である。 本発明によるＬＢＣ用細胞保存容器の実施例３の全体を示す縦断面図である。 図７に示すＬＢＣ用細胞保存容器の筒状本体の縦断面図である。 図７に示すＬＢＣ用細胞保存容器の蓋部３２の縦断面図である。

本発明における実施の形態に付き、図示例を伴う実施例１と実施例２、さらに、実施例３の具体的内容を入れて、説明する。

実施例１を図１〜図３に基づき説明する。この実施例１では、ＬＢＣ用細胞保存容器１は、筒状本体１１と、この筒状本体１１を密封可能とする、例えば、ねじ込み式で結合する、蓋部１２，蓋部１３を有し、筒状本体１１の下部には細胞を付着可能なスライドガラスを装着可能とするスリット１１Ｓを設ける。ここでの筒状本体１１は、円筒形をしているが、スリット形成の強度保持のため、外形の一部角柱形とするなどしても良い。なお、このスリットは、実施例２でも説明するが、蓋部１２または蓋部１３のいずれかに設けることもまた、可能である。スリット１１Ｓが、筒状本体１１に該筒状本体１１の長手方向と交差して貫通して設けられる。スリット１１Ｓに近い側の筒状本体１１の端部１１Ｅに密封用のＯリング１１Ｒを設け、スライドガラス（ここでは、図示しない。通常一般に使用される長方形の薄いガラス板を想定している。）が、Ｏリング１１Ｒを介して蓋部１３で固定されて液漏れのないようにすることを可能とする。蓋部１３には、採取細胞がたまる窪み１３Ｖ、ここでは円錐型の窪みを例示する、を設けて、遠心分離した際に採取した細胞が窪み１３Ｖにたまる構造としている。

筒状本体１１、蓋部１２、蓋部１３は、いずれもポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、アクリルスチレンなどの合成樹脂材を用いて、射出成形で成形されるか、一部機械加工されて、作成される。Ｏリング１１Ｒは、ＫＰＦ（パーフルオロゴム）などからなる樹脂材から、作成される。上記の材質は、例示であって、必要に応じ適宜他の材質を選定することも可能である。

また、筒状本体１１の外径は、３０ｍｍ程度、内径は大きなところで２６ｍｍ程度が、取り扱い上また強度上から望ましい。

ここで、図２と図３に示した、各部の寸法の一例を、下記しておく、即ち、Ａ：３０ｍｍ、Ｂ：４０ｍｍ、Ｃ：４５ｍｍ、Ｄ：８５ｍｍ、Ｅ：９０ｍｍ、Ｆ：１００ｍｍ、Ｇ：１８ｍｍ、Ｈ：２０ｍｍ、Ｉ：５ｍｍ、Ｊ：１５ｍｍ、Ｋ：２５ｍｍ、Ｌ：３０ｍｍ、Ｍ：２４ｍｍ、である。ここで、Ｇ：ガラスへの細胞接着範囲の内径（直径）（鏡検範囲）、Ｈ：Ｏリングの内径（直径）である。これらの寸法は、必要に応じ本願発明の目的を果たす範囲での適宜変更が可能である。

（実施例１の容器を用いた試料作製方法）
実施例１の容器を用いた試料作製方法を以下に説明する。
実際の使用に際しては、以下の工程（手順）で細胞をスライドガラスに付着捕捉する。
工程１：図１のＬＢＣ用細胞保存容器１下部の蓋部１３を閉め、液が漏れださないようにする。
工程２：前工程１で蓋部１３を閉めた図１の筒状本体（シリンダーとも呼ぶ）１１（内に２０ｍｌ（ミリリットル）程度の量の細胞保存液を入れる。
工程３：ブラシ等に採取した細胞を上記細胞保存液の中に分散する。
工程４：遠心分離操作により細胞を筒状本体（シリンダー）１１下部の蓋部１３の円錐型の窪み１３Ｖに細胞を沈降させる。
工程５：デカンテーション操作により筒状本体（シリンダー）１１中の保存液を排出し、細胞のみを蓋部１３の円錐型の窪み１３Ｖに集める。
工程６：１ｍｌ〜１０ｍｌ（ミリリットル） 程度の量の蒸留水を加え、蓋部１２を閉める。
工程７：図１のＬＢＣ用細胞保存容器１を反転し、蒸留水に浮遊させた細胞を蓋部１２側に移行させる。
工程８：蓋部１３を緩め、細胞を付着させるスライドガラス（図示せず）をスリット１１Ｓに差し込む。このときスライドガラスの表面が蒸留水に浮遊させた細胞側を向くようにセットする。
工程９：図１のＬＢＣ用容器を再度反転し、円錐型の窪み１３Ｖのある蓋部１３が再度下に来るようにする。
工程１０：そのまま所定時間静止し、スライドガラス表面に細胞を付着捕捉する。
工程１１：所定時間後、図１のＬＢＣ用容器をもう一度反転し、蓋部１３が上になるようにしてからねじを緩め、スリットからスライドガラスを抜き取る。

以上により、取り出したスライドガラス上には必要十分な量の細胞が付着捕捉されており、ＬＢＣ用のスライドガラスの標本が作成できる。

実施例２を図４〜図６に基づき説明する。この実施例２では、ＬＢＣ用細胞保存容器２は、筒状本体２１と、この筒状本体２１を密封可能な、例えば、ねじ込み式で結合する、蓋部２２を有し、蓋部２２の上下方向の中央付近には細胞を付着可能なスライドガラス（図示せず。）を装着可能とするスリット２２Ｓを設ける。しかし、スリット２２Ｓの位置は、蓋部２２の内筒上端部に設けることも、スライドガラス割れの防止などから望ましい。ここでの蓋部２２は、円筒形をしているが、スリット形成の強度保持のため、あるいは取り扱い容易とするため一部角柱形としても良い。なお、このスリットは、実施例１でも説明したが、筒状本体２１に設けることもまた可能である。スリット２２Ｓが、蓋部２２（または筒状本体２１）の長手方向と交差して貫通して設けられる。蓋部２２（またはスリット２２Ｓ）に近い側の筒状本体２１の端部２１Ｅに密封用のＯリング２１Ｒを設け、スライドガラス（ここでは、図示しないが、通常一般に使用される長方形の薄いガラス板を想定している。）が、Ｏリング２１Ｒを介して蓋部２２で固定されて液漏れのないようにすることを可能とする。蓋部２２が取り付けられると反対の筒状本体２１の底部には、採取細胞がたまる窪み２１Ｖ、ここでは円錐型の窪みを例示する、を設けて、遠心分離した際に採取した細胞が窪み２１Ｖにたまる構造としている。

筒状本体２１、蓋部２２は、いずれもポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、アクリルスチレンなどの合成樹脂材を用いて、射出成形で形成されるか、機械加工されて、作成される。Ｏリング２１Ｒは、ＫＰＦ（パーフルオロゴム）などからなる樹脂材から、作成される。上記の材質は、例示であって、必要に応じ適宜他の材質を選定することも可能である。

また、蓋部２２の外径は、３０ｍｍ程度、内径は、２６ｍｍ程度が、取り扱い上また強度上から望ましい。

ここで、図５と図６に示した、各部の寸法の一例を、下記しておく、即ち、Ａ：２６ｍｍ、Ｂ：１８ｍｍ、Ｃ：９５ｍｍ、Ｄ：７５ｍｍ、Ｅ：３５ｍｍ、Ｆ：３０ｍｍ、Ｇ：３０ｍｍ、Ｈ：３４ｍｍ、Ｉ：２６ｍｍ、Ｊ：２８ｍｍ、Ｋ：３０ｍｍ、Ｌ：１８ｍｍ、Ｍ：１３ｍｍ、である。ここで、Ａ：スライドガラスの幅、Ｂ：ガラスへの細胞接着範囲の内径（直径）（鏡検範囲）、である。これらの寸法は、必要に応じ本願発明の目的を果たす範囲での適宜変更が可能である。

（実施例２の容器を用いた試料作製方法）
実施例２の容器を用いた試料作製方法を以下に説明する。
実際の使用に際しては、以下の工程（手順）で細胞をスライドガラス上に付着、捕集する。
工程１：図４のＬＢＣ用細胞保存容器２上部の蓋部２２を開ける。
工程２：筒状本体２１内に２０ｍｌ程度の量の細胞保存液を入れる。
工程３：ブラシ等に採取した細胞を上記細胞保存液の中に分散する。
工程４：遠心分離操作により細胞を筒状本体２１下部の窪み２１Ｖに細胞を沈降させる。
工程５：デカンテーション操作により筒状本体２１中の細胞保存液を排出し、細胞のみを窪み２１Ｖに集める。
工程６：１ｍｌ〜１０ｍｌ程度の量の蒸留水を加え、蓋部２２を軽く閉め、細胞を付着させるスライドガラス（図示せず。）をスリット２２Ｓに差し込む。次に蓋部２２のねじをしっかり締め、液が漏れださないようにする。このときスライドガラスの表面が蒸留水に浮遊させた細胞側を向くようにセットする。
工程７：図４のＬＢＣ用細胞保存容器２を反転し、下部の窪み２１Ｖが上部に、蓋部２２が下に来るようにする。
工程８：そのまま所定時間静止し、スライドガラス表面に細胞を付着捕捉する。
工程９：所定時間後図４のＬＢＣ用細胞保存容器をもう一度反転し、蓋部２２が上になるようにしてから蓋部２２を緩め、スリット２２Ｓからスライドガラスを抜き取る。
取り出したスライドガラス上には実施例１の容器を使用したときと同様の必要十分な量の細胞が付着、捕捉されており、ＬＢＣ標本が作成できる。

実施例３を図７〜図９に基づき説明する。この実施例３では、ＬＢＣ用細胞保存容器３は、筒状本体３１と、この筒状本体３１を密封可能な、例えば、ねじ込み式で結合する、蓋部３２を有し、この例では、蓋部３２の内筒上端部、すなわち、頭部内面に接して、細胞を付着可能なスライドガラス（図示せず。）を装着可能とするスリット３２Ｓを、蓋部３２（または筒状本体３１）の長手方向と交差し貫通して設ける。これは、スライドガラス割れの防止などに効果がある。ここでの蓋部３２は、円筒形をしているが、スリット形成の強度保持のため、あるいは取り扱い容易とするため一部角柱形としても良い。この蓋部３２には、回転操作がし易いよう外周に滑り止め部３２Ｔを設ける。この滑り止め部３２Ｔは、例えば、筒状本体３１の長手方向と同じ方向の溝或いは山とできる。

蓋部Ｅ３２（またはスリット３２Ｓ）に近い側の筒状本体３１の端部３１Ｅに密封用のＯリング３１Ｒを設け、スライドガラス（ここでは、図示しないが、通常一般に使用される長方形の薄いガラス板を想定している。）が、Ｏリング３１Ｒを介して蓋部Ｅ３２で固定されて液漏れのないようにすることを可能とする。蓋部Ｅ３２が取り付けられると反対の筒状本体３１の底部には、採取細胞がたまる窪み３１Ｖ、ここでは円錐型の窪みを例示する、を設けて、遠心分離した際に採取した細胞が窪み３１Ｖにたまる構造としている。

筒状本体３１、蓋部Ｅ３２は、いずれもポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、アクリルスチレンなどの合成樹脂材を用いて、射出成形で形成されるか、機械加工されて、作成される。Ｏリング３１Ｒは、ＫＰＦ（パーフルオロゴム）などからなる樹脂材から、作成される。上記の材質は、例示であって、必要に応じ適宜他の材質を選定することも可能である。

また、蓋部３２の外径は、３０ｍｍ程度、内径は、２６ｍｍ程度が、取り扱い上また強度上から望ましい。

ここで、図８と図９に示した、各部の寸法の一例を、下記しておく、即ち、Ａ：２６ｍｍ、Ｂ：１８ｍｍ、Ｃ：９５ｍｍ、Ｄ：７５ｍｍ、Ｆ：３０ｍｍ、Ｇ：３０ｍｍ、Ｈ：３４ｍｍ、Ｉ：２６ｍｍ、Ｊ：２８ｍｍ、Ｋ：３０ｍｍ、Ｌ：１８ｍｍ、Ｍ：１３ｍｍ、である。ここで、Ａ：スライドガラスの幅、Ｂ：ガラスへの細胞接着範囲の内径（直径）（鏡検範囲）、である。これらの寸法は、必要に応じ本願発明の目的を果たす範囲での適宜変更が可能である。

（実施例３の容器を用いた試料作製方法）
実施例３の容器を用いた試料作製方法を以下に説明する。
実際の使用に際しては、以下の工程（手順）で細胞をスライドガラス上に付着、捕集する。
工程１：図７のＬＢＣ用細胞保存容器３上部の蓋部３２を開ける。
工程２：筒状本体３１内に２０ｍｌ程度の量の細胞保存液を入れる。
工程３：ブラシ等に採取した細胞を上記細胞保存液の中に分散する。
工程４：遠心分離操作により細胞を筒状本体３１下部の窪み３１Ｖに細胞を沈降させる。
工程５：デカンテーション操作により筒状本体３１中の細胞保存液を排出し、細胞のみを窪み３１Ｖに集める。
工程６：１ｍｌ〜１０ｍｌ程度の量の蒸留水を加え、蓋部３２を軽く閉め、細胞を付着させるスライドガラス（図示せず。）をスリット３２Ｓに差し込む。次に蓋部３２のねじをしっかり締め、液が漏れださないようにする。このときスライドガラスの表面が蒸留水に浮遊させた細胞側を向くようにセットする。
工程７：図７のＬＢＣ用細胞保存容器３を反転し、下部の窪み３１Ｖが上部に、蓋部３２が下に来るようにする。
工程８：そのまま所定時間静止し、スライドガラス表面に細胞を付着捕捉する。
工程９：所定時間後図７のＬＢＣ用細胞保存容器をもう一度反転し、蓋部３２が上になるようにしてから蓋部３２を緩め、スリット３２Ｓからスライドガラスを抜き取る。

取り出したスライドガラス上には実施例１または２の容器を使用したときと同様の必要十分な量の細胞が付着、捕捉されており、ＬＢＣ標本が作成できる。

以上のように、本発明のＬＢＣ用細胞保存容器を使用することで、細胞を簡便にかつ効率的に、スライドガラスに付着捕捉できる。また本発明のＬＢＣ用細胞保存容器を使用することで高価な設備・機械を導入することなく、ＬＢＣ用のスライドガラスの標本が作成できる。なお、上記の各実施例で、蓋部を、説明上、蓋部１２，蓋部１３、蓋部２２，蓋部３２と区別した。

上記のように、本発明のＬＢＣ用細胞保存容器を使用することで、細胞を簡便にかつ効率的にスライドガラス上に付着捕捉できる。また本発明のＬＢＣ用細胞保存容器を使用することで高価な設備・機械を導入することなく、多数の検体を処理することができ、本発明は極めて有用であり、ＬＢＣ用に産業上広く利用できる。

Claims (7)

1. 筒状本体と、該筒状本体を密封可能な、ねじ込み式で該筒状本体と結合する蓋部と、を有し、
   前記蓋部に、細胞を付着可能なスライドガラスを装着可能とするスリットが設けられ、
   前記スリットは、前記筒状本体の長手方向と交差して、前記蓋部を貫通して設けられ、
   前記スライドガラスを前記スリットに装着した状態で前記蓋部をねじ込んで、該スライドガラスの一方の面と該一方の面に当接する該筒状本体の一の端面とを当接させると、該スリットに装着された該スライドガラスが、該蓋部で固定されることを特徴とするＬＢＣ用細胞保存容器。
2. 筒状本体と、該筒状本体を密封可能な、ねじ込み式で該筒状本体と結合する蓋部と、を有し、
   前記筒状本体に、細胞を付着可能なスライドガラスを装着可能とするスリットが設けられ、
   前記スリットは、前記筒状本体の長手方向と交差して、前記筒状本体を貫通して設けられ、
   前記スライドガラスを前記スリットに装着した状態で前記蓋部をねじ込んで、該スライドガラスの一方の面と該一方の面に当接する該蓋部の一の端面とを当接させると、該スリットに装着された該スライドガラスが、該蓋部で固定されることを特徴とするＬＢＣ用細胞保存容器。
3. 前記筒状本体は、前記蓋部が結合する一の端部と対向する他の端部に底部を有し、
   前記筒状本体の底部に、採取細胞をためるための窪みを設けたことを特徴とする請求項１に記載のＬＢＣ用細胞保存容器。
4. 前記スリットが、前記蓋部の頭部内面に接して設けられることを特徴とする請求項１又は３に記載のＬＢＣ用細胞保存容器。
5. 前記蓋部に、採取細胞をためるための窪みを設けたことを特徴とする請求項２に記載のＬＢＣ用細胞保存容器。
6. 前記蓋部をねじ込んで前記スリットに装着された前記スライドガラスが固定されるときに該スライドガラスに当接する前記筒状本体の当接面に密封用のＯリングを設けたことを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＬＢＣ用細胞保存容器。
7. 前記請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＬＢＣ用細胞保存容器を用いて、前記スライドガラスを前記スリットに装着して、前記スライドガラス上に細胞を付着することを特徴とするＬＢＣ標本作成方法。

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