JP5616892B2 - 前立腺癌バイオマーカー - Google Patents
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Description
また、本発明の態様は以下を含む:特定の治療(例えば根治的前立腺切除術または非侵襲性治療的処置)のための対象を選択する方法であって、前記選択は前記対象から採取された前立腺の試料のビリンの発現レベルをインビトロで免疫化学的に決定することに基づく方法。
本願明細書において使用する「対象」は、健康、すなわち正常なヒトの雄個体であっても、又は病気の雄個体、すなわち患者であってもよい。
前立腺癌の前駆体は、前立腺の上皮細胞間の新形成として知られており、更に、これは前立腺内の多数の異なる場所において見いだされる。多数の異なる種類の前立腺癌があるにもかかわらず、膨大な大多数(約95%)は腺癌として知られている種類のものである。
これが最も多く広まったため、腺癌が前立腺癌と同義になっている。したがって、ある実施態様において、本発明は、対象の前立腺腺癌の存在を決定することに関する。
抗体をコードする核酸は、cDNAライブラリーからの分離されてもよい。抗体をコードする核酸は、ファージ・ライブラリーから単離されてもよい(参照、例えば McCafferty et al. 1990, Nature 348:552, Kang et al. 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:4363; EP0589877B1)。抗体をコードする核酸は、公知配列の遺伝子シャフリングによって得ることができる (Mark et al. 1992, Bio/Technol. 10:779)。抗体をコードする核酸は、インビボの組換えによって単離することができる (Waterhouse et al. 1993, Nucl. Acid Res. 21: 2265)。
例示的な支持体には、顕微鏡用スライド(例えば、ガラスの顕微鏡用スライドまたはプラスチックの顕微鏡用スライド)、カバーグラス(例えば、ガラス・カバーグラスまたはプラスチック・カバーグラス)、組織培養用のシャーレ、マルチ・ウェルプレート、メンブレン(例えば、ニトロセルロースまたはポリフッ化ビニリデン(PVDF))またはBIACORE(登録商標)チップが含まれる。
ビリンの発現レベルに関する情報(例えば前立腺試料のビリンの欠如または存在)は、腫瘍のタイプが、例えばそこのものか転移癌であるか、癌のタイプ、疾患の段階を同定することの助けになり、したがって対象を治療する方法を決定することの助けとなる。
1. 抗体−ビリン、CDX−2、PSA、クロモグラニン−A、CK7、CK20、CK5/6、HMWCK(34βE12)及びP504s(全てダコ製);ビリン(クローンCWWB1、Vector Laboratoies, Inc., CA)。
2. 抗原回復液(ダコ、Cat. No. S2367);抗体希釈剤(ダコ、Cat. No. S0809)、ペルオキシダーゼ阻害試薬(ダコ、Cat. No. S2001);二重内因性酵素ブロック(ダコ、Cat. No.2009)。
- PTモジュールにおける抗原回復
- 65から97℃で15分(暖める時間)
- 97℃で20分
- 82℃に20分冷却
- 65℃に15分冷却
- オートステイナー・プラスのプロトコル:
- ペルオキシダーゼ・ブロック5分
- 一次抗体20分
- 視覚化システム- フレックス 20分
- クロモゲンDAB+ 10分
-ヘマトキシリン 5分
前立腺腺癌の14症例と良性前立腺過形成(BPH)の8症例の試料は、ダコ内部の組織バンクから選択された。組織切片はPTリンク・モジュールにおいて97℃でダコの標的回収溶液に供して、IHC解析はダコ・オートステイナー・プラス機器においてダコRTUと混合した抗体を使用して実施した。ビリン、クロモグラニンA、及び34βE12とCK5/6とP504S抗体との混合を使用した免疫組織化学テストを、全22症例で実施した。
全てのビリンが陽性のケースでは、PSA、CDX−2、CK7及びCK20からなるバイオマーカーのディファレンシャル・パネルを、次に新生細胞が転移性結腸腺癌のものか、前立腺起源かを決定するために使用した。
陽性のビリン染色(クローン1D2 C3、ダコ 、Cat. No.3637)は、前立腺腺癌由来の全ての腫瘍細胞において観察された。また、これらの腫瘍細胞もPSAとP504Sのための陽性の免疫染色を示したが、それらはCDX−2、CK7、CK20、34βE12、CK5/6とクロモグラニンAが陰性だった。また、少数の陽性のビリン細胞は、(8症例の)3症例のBPHで正常及び過形成腺域において観察された。
ビリンは、前立腺腺癌で発現する。ビリンが着色された細胞における陽性PSA染色は、ビリンが染色された腫瘍細胞の前立腺起源を確認するものであり、その細胞が転移性結腸癌起源であることを除外する;これはCDX-2とCK20の陰性染色によっても確認される。前立腺癌におけるビリンの発現の状態は、診断上の目的又は治療的な目的のために、前立腺癌の対象をビリン陽性群及び陰性群に分類してもよい。
Claims (13)
- 対象から採取された固体組織または腫瘍組織の試料における前立腺癌細胞の有無を決定する方法であって、該方法は前記試料におけるビリンの発現のレベルを免疫化学的にインビトロで決定することを含んでなり、
前記試料におけるビリンの存在が対象に前立腺癌細胞が存在することを示唆し、前記試料におけるビリンの欠如が対象に前立腺癌細胞が存在しないことを示唆する、方法。 - 組織試料は前立腺の組織または腫瘍組織試料である、請求項1に記載の方法。
- ビリンの発現レベルは免疫組織化学によって決定される、請求項1又は2に記載の方法。
- ビリンの発現レベルはイムノブロッティングまたはELISAによって決定される、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記組織試料において、前立腺特異的抗原(PSA)、前立腺特異的酸性ホスファターゼ(PSAP)、p63、α-メチルアシル-コエンザイム−Aラセマーゼ(AMACR)、P504S、サイトケラチン5/6(CK5/6)、高分子量サイトケラチン34βE12(34bE−12)、クロモグラニン、CDX−2、サイトケラチン7(CK7)及びサイトケラチン20(CK20)のタンパク質のうちの少なくとも1つの発現レベルを決定することを更に含む、請求項1から4の何れか一項に記載の方法。
- PSA、PSAPおよび/またはAMACRの発現レベルが決定される、請求項5に記載の方法。
- CDX-2の発現レベルが更に決定される、請求項6に記載の方法。
- 対象から採取された固体組織または腫瘍組織の試料において前立腺癌細胞の有無を免疫化学的にインビトロで決定するための、ビリンを含む前立腺癌バイオマーカーのパネルの使用であって、前記試料におけるビリンの存在が対象に前立腺癌細胞が存在することを示唆し、前記試料におけるビリンの欠如が対象に前立腺癌細胞が存在しないことを示唆する、使用。
- 前記パネルがPSA、PSAPおよび/またはAMACRを更に含む、請求項8に記載の使用。
- 対象から採取された固体組織または腫瘍組織の試料において前立腺癌細胞の存在を免疫化学的に決定するための診断用キットであって、前記キットは抗ビリン抗体、及び該抗体を用いてビリンの存在を該組織において免疫化学的に検出するために役立つ少なくとも一の試薬を含んでなり、前記試料におけるビリンの存在が対象に前立腺癌細胞が存在することを示唆し、前記試料におけるビリンの欠如が対象に前立腺癌細胞が存在しないことを示唆する、キット。
- 前立腺特異的抗原(PSA)、前立腺特異的酸性ホスファターゼ(PSAP)、p63、α−メチルアシル−コエンザイム−Aラセマーゼ(AMACR)、P504S、サイトケラチン5/6(CK5/6)、高分子量サイトケラチン34βE12(34bE−12)、クロモグラニン、CDX−2、サイトケラチン7(CK7)及びサイトケラチン20(CK20)の1又は複数のタンパク質に対する1又は複数の別の一次抗体を更に含む、請求項10に記載の診断用キット。
- タンパク質がPSA、PSAPおよび/またはAMACRである、請求項11に記載の診断用キット。
- CDX-2またはCK20に対する抗体を更に含む、請求項10又は12に記載の診断用キット。
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