JP5616571B2 - Δ6−デサチュラーゼ遺伝子およびこれの使用 - Google Patents
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Description
上記のように、本発明のΔ6−デサチュラーゼ遺伝子によりコードされる酵素は、多価不飽和脂肪酸の生成において必須である。図2に、デラクロイキシア・コロナツスからの推定Δ6−デサチュラーゼのコンセンサスヌクレオチド配列(配列番号1)を示してあり、図3には、デラクロイキシア・コロナツスからの推定Δ6−デサチュラーゼのコンセンサスアミノ酸配列(配列番号2)を示してある。形成されるプラスミドに基づいて異なっていた単離デラクロイキシア・コロナツスΔ6−デサチュラーゼ遺伝子のヌクレオチド配列(実施例II参照)を、図6(配列番号3)、図8(配列番号5)および図10(配列番号7)に示してあり、相当する精製タンパク質のアミノ酸配列を、図7(配列番号4)、図9(配列番号6)および図11(配列番号8)にそれぞれ示してある。
Δ6−デサチュラーゼ酵素をコードする遺伝子が単離されたら、その遺伝子はベクターまたは構築物を用いて原核または真核宿主細胞に導入することができる。ベクター(例えば、バクテリオファージ、コスミドまたはプラスミド)は、Δ6−デサチュラーゼ酵素をコードするヌクレオチド配列、および宿主細胞において機能し、前記ヌクレオチド配列によりコードされるデサチュラーゼの発現を誘発することができる調節配列(例えば、プロモーター)を含むことができる。調節配列(例えば、プロモーター)は、前記ヌクレオチド配列に作動可能に組み合わされているか、または作動的に結合している。プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼすならば、プロモーターはコード配列に作動的に結合していると言われる。好適なプロモーターの例には、アルコールデヒドロゲナーゼ、グリセロアルデヒド−3−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ホスホグルコイソメラーゼ、ホスホグリセレートキナーゼ、酸ホスファターゼ、T7、TPI、ラクターゼ、メタロチオネイン、最初期サイトメガロウイルス、ホエー酸性タンパク質、グルコアミラーゼをコードする遺伝子由来のもの、およびガラクトース(例えば、GAL1およびGAL10)の存在下で活性化されるプロモーターが含まれる。他のタンパク質、オリゴサッカライド、脂質等をコードするヌクレオチド配列もベクターおよび他の調節配列、例えばSV−40T−抗原、卵白アルブミンまたはウシ成長ホルモンのポリ−A−シグナルのようなポリアデニル化シグナルの中に含まれ得る。構築物中に存在させる配列の選択は、所望の発現産物および宿主細胞の種類によって決まる。例えば、ベクターに本発明のΔ6−デサチュラーゼ遺伝子配列、エロンガーゼ遺伝子配列およびΔ5−デサチュラーゼ遺伝子配列を含めることで、コードされたΔ6−デサチュラーゼ、コードされたエロンガーゼ、ならびにコードされたΔ5−デサチュラーゼをそれぞれ同時に発現して、例えば、LAをARAに、そしてALAをEPAに変換することができる。
上記のように、単離したデサチュラーゼ 遺伝子および該遺伝子によりコードされるデサチュラーゼ酵素は多くの用途を有する。例えば、前記遺伝子および対応の酵素は多価不飽和脂肪酸の生産において直接的および間接的に使用可能である。例えば、Δ6−デサチュラーゼは、γ−リノレン酸またはステアリドン酸の製造において使用可能である。「直接的」は、酵素がある酸を組成物中に使用される別の酸に直接変換する(例えば、リノール酸からγ−リノレン酸への変換)状況を包含することを意味する。「間接的」は、デサチュラーゼにより、ある酸(例:リノレン酸)を他の酸(すなわち、ステアリドン酸などの経路の中間体)に変換し、その後後者の酸をデサチュラーゼまたは非デサチュラーゼ酵素を用いて他の酸へ変換する(例えば、エロンガーゼによって、ステアリドン酸をエイコサテトラエン酸に変換)状況を包含することを意味する。また、本発明は、PUFAを非−64−デサチュラーゼ酵素(例えば、エロンガーゼまたは別のデサチュラーゼ )により他の多価不飽和脂肪酸に変換し、その後Δ6−デサチュラーゼを用いて最終生成物に変換する「間接的」状況をも含む。例えば、リノール酸をデサチュラーゼ(すなわち、Δ15−デサチュラーゼ)によってα−リノレン酸に変換し、次にΔ6−デサチュラーゼによってステアリドン酸に変換することができる。これらの多価不飽和脂肪酸(すなわち、Δ6−デサチュラーゼ酵素の活性により直接または間接的に生成されるもの)は、例えば栄養組成物、医薬組成物、化粧品および動物飼料に添加することができ、これらはすべて本発明に包含される。これらの使用を以下に詳細に説明する。
本発明は栄養組成物を包含する。本発明において、前記組成物には経腸または非経口消費を含めてヒトが消費する食品または製剤が含まれ、これらは体内に取り込まれたとき(a)栄養を与えたり、組織を構築したり、エネルギーを補給するように機能するおよび/または(b)適正な栄養状態または代謝機能を維持、回復または支持する。
本発明はまた、本明細書に記載されている方法に従ってデサチュラーゼを用いて得られる酸および/または油の1以上を含む医薬組成物を包含する。より具体的には、前記医薬組成物は、1以上の酸および/または油に加えて標準的な公知の無毒性で製薬上許容され得る担体、助剤または媒体、例えばリン酸緩衝食塩液、水、エタノール、多価アルコール、植物油、湿潤剤または乳濁液(例えば、水/油乳濁液)を含むことができる。前記組成物は液体でも固体のいずれの形態も取り得る。例えば、組成物は、錠剤、カプセル剤、摂取可能な液体もしくは粉剤、注射剤、または局所投与用軟膏またはクリームの形態を取ることができる。適切な流動性は、例えば分散液の場合には必要な粒径を維持したり、界面活性剤を使用することによって維持することができる。糖、塩化ナトリウム等の等張剤を配合することが望ましいことがある。不活性希釈剤に加えて、組成物は、助剤、例えば湿展剤、乳化剤および懸濁剤、甘味剤、香味剤および芳香剤を配合することもできる。
留意すべき点として、動物はヒトと同じニーズおよび状態を多く経験することから、上記の医薬組成物および栄養組成物を、ヒトだけでなく、動物(すなわち、家畜および家畜以外の動物)で利用することができる。例えば、本発明の油または酸は、動物飼料サプリメント、動物飼料代用品、動物ビタミンまたは動物局所軟膏に利用することができる。
詳細な説明に記載されているPUFAは、各種栄養サプリメント、乳児用製剤、栄養代用品および他の栄養溶液中に使用することができる。
A.鉄強化アイソミル(Isomil;登録商標)大豆調合乳
使用
牛乳に対してアレルギーまたは感受性を有する乳幼児および成人に対する飲料として。ラクトースが禁忌な疾患、すなわちラクターゼ欠乏、ラクトース不耐性およびガラクトース血症を有する患者に対する栄養補給。
−牛乳タンパク質アレルギーまたは感受性の症状を避けるために、大豆タンパク質単離物;
−ラクトース関連の下痢を回避するために、ラクトースを含まない製剤;
−浸透性下痢の危険を減らすために、低オスモル濃度(240mOs/kg水);
−炭水化物吸収を高め、ダメージを受けている腸の吸収能力を超える危険を減らすように設計された2成分炭水化物(コーンシロップおよびショ糖);
−鉄欠乏の予防を助けるために1.8mg/100calの鉄(硫酸第一鉄として);
−推奨レベルのビタミンおよびミネラル;
−推奨レベルの必須脂肪酸を与えるために植物油;
−乳白色でミルクに似た濃さおよび心地良い香り。
(パルヴェ)水85%、コーンシロップ4.9%、糖(ショ糖)2.6%、大豆油2.1%、大豆タンパク質単離物1.9%、ヤシ油1.4%、クエン酸カルシウム1.5%、第三リン酸カルシウム0.11%、クエン酸カリウム、第一リン酸カリウム、塩化カリウム、モノ−およびジグリセリド、大豆レシチン、カラゲナン、アスコルビン酸、L−メチオニン、塩化マグネシウム、第二リン酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化コリン、タウリン、硫酸第一鉄、m−イノシトール、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、L−カルニチン、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、葉酸、硫酸マンガン、ヨウ化カリウム、フィロキノン、ビオチン、亜セレン酸ナトリウム、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
使用
小児および幼児における下痢の食事管理のための短期間栄養補給として。
−特に下痢管理のための添加された大豆繊維由来の食物繊維を含むために、第1の幼児調合乳;
−臨床的に小児が中程度ないし重度の下痢を起こしている間のゆるい水様便の期間を短縮することが判明している;
−乳児の栄養要求量を満たすために栄養的に完全である;
−L−メチオニンを添加した大豆タンパク質単離物はすべての必須アミノ酸についての乳児の要求量を満たすかまたは超える;
−ラクトース関連下痢を避けるためにラクトース非含有製剤;
−浸透性下痢の危険を減らすために低オスモル濃度(240mOsm/kg水);
−炭水化物吸収を高め、損傷を受けている腸の吸収能力を超える危険を減らすように設計された2成分炭水化物(コーンシロップおよびショ糖);
−米国小児科学会栄養委員会が推奨し、乳児用調整乳法(Infant Formula Act)が要求しているビタミンおよびミネラルレベルを満たすかまたは超える;
−鉄欠乏予防のために、1.8mg/100calの鉄(硫酸第一鉄として);
−推奨レベルの必須脂肪酸を提供するために植物油。
(パルヴェ)水86%、コーンシロップ4.8%、糖(ショ糖)2.5%、大豆油2.1%、大豆タンパク質単離物2.0%、ヤシ油1.4%、大豆繊維0.77%、クエン酸カルシウム0.12%、第三リン酸カルシウム0.11%、クエン酸カリウム0.10%、塩化カリウム、第一リン酸カリウム、モノ−およびジグリセリド、大豆レシチン、カラゲナン、塩化マグネシウム、アスコルビン酸、L−メチオニン、第二リン酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化コリン、タウリン、硫酸第一鉄、m−イノシトール、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、L−カルニチン、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、葉酸、硫酸マンガン、ヨウ化カリウム、フィロキノン、ビオチン、亜セレン酸ナトリウム、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
使用
牛乳タンパク質に対してアレルギーまたは感受性またはショ糖に対して不耐性を有する乳幼児および成人に対する飲料として。ラクトースおよびショ糖が禁忌な疾患を有する患者に対する栄養補給。
−牛乳タンパク質アレルギーまたは感受性の症状を避けるために大豆タンパク質単離物;
−ラクトース関連下痢を避けるためにラクトースを含まない処方(炭水化物源はポリコース(Polycoase;登録商標)グルコースポリマーである);
−ショ糖を耐容できない患者のためにショ糖を含まない;
−浸透性下痢の危険を減らすために低オスモル濃度(180mOsm/kg水);
−鉄欠乏の予防のために1.8mg/100calの鉄(硫酸第一鉄として);
−推奨レベルのビタミンおよびミネラル;
−推奨レベルの必須脂肪酸を与えるために植物油;
−乳白色でミルクに似た濃さおよび心地良い臭い。
(パルヴェ)水75%、水解コーンスターチ11.8%、大豆油4.1%、大豆タンパク質単離物4.1%、ヤシ油2.8%、改質コーンスターチ1.0%、第三リン酸カルシウム0.38%、クエン酸カリウム0.17%、塩化カリウム0.13%、モノ−およびジグリセリド、大豆レシチン、塩化マグネシウム、アスコルビン酸、L−メチオニン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化コリン、カラゲナン、タウリン、硫酸第一鉄、m−イノシトール、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、L−カルニチン、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、葉酸、硫酸マンガン、ヨウ化カリウム、フィロキノン、ビオチン、亜セレン酸ナトリウム、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
使用
大豆栄養補給が所望されるとき。
(パルヴェ)水85%、コーンシロップ3.6%、糖(ショ糖)2.6%、大豆油2.1%、大豆タンパク質単離物1.9%、ヤシ油1.4%、クエン酸カルシウム0.15%、第三リン酸カルシウム0.11%、クエン酸カリウム、第一リン酸カリウム、塩化カリウム、モノ−およびジグリセリド、大豆レシチン、カラゲナン、アスコルビン酸、L−メチオニン、塩化マグネシウム、第二リン酸カリウム、塩化ナトリウム、タウリン、硫酸第一鉄、m−イノシトール、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、L−カルニチン、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、葉酸、硫酸マンガン、ヨウ化カリウム、フィロキノン、ビオチン、亜セレン酸ナトリウム、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
使用
乳児用調整乳が必要な時;1才前に母乳の断乳を決断するとき、母乳への補充が必要なとき、または母乳を与えていないときの日常的な栄養補給として。
−良好な成長のために適切な品質および量のタンパク質;ミルク関連の腸失血の危険を減らすために熱変性;
−容易に吸収される必須リノール酸を与える(二重ホモジナイズした)植物油混合物由来の脂肪;
−母乳に類似の比率のラクトースとしての炭水化物;
−発達中の臓器に対するストレスを最小限とするために腎臓溶質負荷が低い;
−粉剤、濃縮液体およびインスタント品の形態。
(−D)水、脱脂乳、ラクトース、大豆油、ヤシ油、モノ−およびジグリセリド、大豆レシチン、アスコルビン酸、カラゲナン、塩化コリン、タウリン、m−イノシトール、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、ニコチンアミド、硫酸第一鉄、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、葉酸、硫酸マンガン、フィロキノン、ビオチン、亜セレン酸ナトリウム、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
使用
未熟児の退院後の特殊栄養要求量のため。シミラック・ネオケアは、成長の取り戻しを促進し、発達を支持するために必要な追加のカロリー、タンパク質、ビタミンおよびミネラルを未熟児に与えるように開発された栄養的に完全な調製乳である。
カロリーおよびビタミン補給のための必要量を減らす。標準的調製乳(20Cal/fzoz)よりも高カロリー(22Cal/fz oz);
−未熟児の特殊な消化要求量を満たすのを助けるために中鎖トリグリセリド(MCToil)を含む高吸収脂肪の混合物;
−病院内で開始される栄養支援を延長するために100カロリーあたり高レベルのタンパク質、ビタミンおよびミネラル;
−骨石灰化を改善するためにより多くのカルシウムおよびリン。
−Dコーンシロップ固体、脱脂乳、ラクトース、ホエータンパク質濃縮物、大豆油、高オレフィン紅花油、分画化ヤシ油(中鎖トリグリセリド)、ヤシ油、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、アスコルビン酸、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、タウリン、硫酸第一鉄、m−イノシトール、塩化コリン、パルミチン酸アスコルビル、L−カルニチン、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、ニコチンアミド、混合トコフェロール、クエン酸ナトリウム、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、塩酸チアミン、パルミチン酸ビタミンA、β−カロテン、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、葉酸、硫酸マンガン、フィロキノン、ビオチン、亜セレン酸ナトリウム、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
使用
低出生時体重乳児に対して人乳と混合するかまたは人乳と一緒に供給するように設計。
−D水、脱脂乳、水解コーンスターチ、ラクトース、分画化ヤシ油(中鎖トリグリセリド)、ホエータンパク質濃縮物、大豆油、ヤシ油、第三リン酸カルシウム、クエン酸カリウム、塩化マグネシウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、炭酸カルシウム、モノ−およびジグリセリド、大豆レシチン、カラゲナン、塩化コリン、m−イノシトール、タウリン、ニコチンアミド、L−カルニチン、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、塩化カリウム、パントテン酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸第二銅、リボフラビン、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、ビオチン、葉酸、硫酸マンガン、フィロキノン、ビタミンD3、亜セレン酸ナトリウムおよびシアノコバラミン。
A.エンシュア(ENSURE;登録商標)
使用
エンシュアは、代用食品として食事と一緒または食事の間に適量使用される経口栄養サプリメントとして主に設計された低残渣液体食である。エンシュアは、ラクトースもグルテンも含まず、低コレステロール食を含めた調整食中に使用するのに適している。主として経口サプリメントであるが、経管栄養補給することもできる。
−調整食を摂っている患者;
−栄養的に危険な状態の高齢患者;
−不随意体重減少の患者;
−病気または手術からの回復期の患者;
−低残渣食を必要とする患者。
−D水、糖(ショ糖)、マルトデキストリン(コーン)、カゼイン酸カルシウムおよびナトリウム、高オレイン紅花油、大豆タンパク質単離物、大豆油、カノラ油、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、第二リン酸マグネシウム、人工香料、塩化ナトリウム、大豆レシチン、塩化コリン、アスコルビン酸、カラゲナン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、ゲランガム、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、葉酸、モリブデン酸ナトリウム、塩化クロム、ビオチン、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム(プロシュア(Prosure)も参照)。
使用
エンシュア・バーは、食間または食事と一緒に栄養補給の目的で使用される完全なバランスの取れた栄養物である。他のスナックに対する、美味で高栄養分の代用品である。エンシュア・バーは、<1g/バーのラクトースを含み、チョコレートファッジブラウニーフレバーはグルテンを含まない(ハニーグラハムクランチフレバーはグルテンを含む)。
−追加のカロリー、タンパク質、ビタミンおよびミネラルを必要とする患者;
−十分なカロリーおよび栄養分を摂取しない患者に対して特に有用;
−咀嚼および嚥下ができる患者;
−ピーナッツアレルギーやナッツに対してアレルギーを有する患者には使用不可。
ハニーグラハムクランチ−−高フルクトースコーンシロップ、大豆タンパク質単離物、ブラウンシュガー、蜂蜜、マルトデキストリン(コーン)、クリスプライス[(粉砕したコメ)、糖(ショ糖)、塩(塩化ナトリウム)および麦芽]、オート麦ふすま、部分水素化綿実油および大豆油、大豆多糖、グリセリン、ホエータンパク質濃縮物、ポリデキストロース、フルクトース、カゼイン酸カルシウム、ココア粉末、人工フレーバー、菜種油、高オレイン紅花油、脱脂粉乳、ホエー粉末、大豆レシチンおよびコーン油。ナッツ加工施設で製造。
第三リン酸カルシウム、第二リン酸カリウム、酸化マグネシウム、塩(塩化ナトリウム)、塩化カリウム、アスコルビン酸、o−リン酸第二鉄、α−トコフェニルアセテート、ニコチンアミド、酸化亜鉛、パントテン酸カルシウム、グルコン酸銅、硫酸マンガン、リボフラビン、β−カロテン、ピリドキシン塩酸塩、モノ硝酸チアミン、葉酸、ビオチン、塩化クロム、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
ハニーグラハムクランチ−−タンパク質源は、大豆タンパク質単離物および乳タンパク質の混合物である。
大豆タンパク質単離物:74%
乳タンパク質:26%。
ハニーグラハムクランチ−−脂肪源は、部分水素化綿実および大豆、菜種、高オレイン紅花、オイルおよび大豆レシチンの混合物である。
部分水素化綿実油および大豆油:76%
菜種油:8%
高オレイン紅花油:8%
コーン油:4%
大豆レシチン:4%。
ハニーグラハムクランチ−−炭水化物源は、高フルクトースコーンシロップ、ブラウンシュガー、マルトデキストリン、蜂蜜、クリスプライス、グリセリン、大豆多糖およびオート麦ふすまの混合物である。
高フルクトースコーンシロップ:24%
ブラウンシュガー:21%
マルトデキストリン:12%
蜂蜜:11%
クリスプライス:9%
グリセリン:9%
大豆多糖:7%
オート麦ふすま:7%。
使用
エンシュア・ハイ・プロテインは、食事にカロリー、タンパク質、ビタミンおよびミネラルを追加する必要がある患者に対して設計された濃厚な高タンパク質液体食である。代用食品として食事と一緒にまたは食事の間に適量経口栄養サプリメントとして使用することができる。エンシュア・ハイ・プロテインは、ラクトースもグルコースも含まず、通常の手術または股関節骨折からの回復期の患者および圧迫潰瘍の危険のある患者が使用するのに適している。
カロリー、タンパク質、ビタミンおよびミネラルを追加する必要がある患者、例えば通常の手術または股関節骨折からの回復期の患者;圧迫潰瘍の危険のある患者;および低コレステロール食を使用している患者。
−飽和脂肪が少ない;
−一人分あたり6gの総脂肪および<5mgのコレステロール;
−濃厚でクリーミーな味;
−タンパク質、カルシウムおよび他の必須アミノ酸およびミネラルの優れたソース;
−低コレステロール食;
−ラクトースを含まず、簡単に消化。
バニラシュプリーム:
−D水、糖(ショ糖)、マルトデキストリン(コーン)、カゼイン酸カルシウムおよびナトリウム、高オレイン紅花油、大豆タンパク質単離物、大豆油、カノラ油、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、第二リン酸マグネシウム、人工フレーバー、塩化ナトリウム、大豆レシチン、塩化コリン、アスコルビン酸、カラゲナン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、α−コフェリルアセテート、ゲランガム、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、葉酸、モリブデン酸ナトリウム、塩化クロム、ビオチン、ヨウ化カリウム、亜セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
タンパク質源は、2種の生物学的価値の高いタンパク質、すなわちカゼインおよび大豆の混合物である。
カゼイン酸ナトリウムおよびカルシウム:85%
大豆タンパク質単離物:15%。
脂肪源は、3種の油、すなわち高オレイン紅花、カノラおよび大豆の混合物である。
高オレイン紅花油:40%
カノラ油:30%
大豆油:30%。
エンシュア・ハイ・プロテインは、マルトデキストリンおよびショ糖の組合せを含む。マイルドな甘味料およびフレーバー(バニラシュプレーム、チョコレートロイヤル、ワイルドベリーおよびバナナ)に加えてペカン、チェリー、ストロベリー、レモンおよびオレンジ中のバリ−フレーバーズ(VARI-FLAVORS;登録商標)フレーバー・パクス(Flavor Pacs)はフレーバー疲労を予防するのを助け、患者コンプライアンスを助ける。
ショ糖:60%
マルトデキストリン:40%。
ショ糖:70%
マルトデキストリン:30%。
使用
エンシュア・ライトは、食事と一緒または食事の間に経口栄養サプリメントとして使用するように設計された低脂肪液体食である。エンシュア・ライトは、ラクトースもグルテンも含まず、低コレステロール食を含めた調整食中に使用するのに適している。
−50%未満の脂肪およびエンシュアよりも20%少ないカロリーを含むサプリメント中に過度の栄養を必要としている正常体重および過体重の患者;
−適正に摂食せず、追加の栄養を必要としている健康な成人。
−脂肪および飽和脂肪が少ない;
−一人分あたり3gの総脂質および<5mgのコレステロールを含む;
−濃厚でクリーミーな味;
−カルシウムおよび他の必須ビタミンおよびミネラルの優れたソース;
−低コレステロール食;
−ラクトースを含まず、簡単に消化する。
フレンチバニラ:
−D水、マルトデキストリン(コーン)、糖(ショ糖)、カゼイン酸カルシウム、高オレイン紅花油、カノラ油、塩化マグネシウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、第二リン酸カリウム、第二リン酸マグネシウム、天然および人工フレーバー、第三リン酸カルシウム、セルロースゲル、塩化コリン、大豆レシチン、カラゲナン、塩(塩化ナトリウム)、アスコルビン酸、セルロースガム、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、ニコチンアミド、硫酸マンガン、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、塩酸チアミン、パルミチン酸ビタミンA、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、塩化クロム、葉酸、モリブデン酸ナトリウム、ビオチン、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
タンパク質源は、カゼイン酸カルシウムである。
カゼイン酸カルシウム:100%。
脂肪源は、2種の油、すなわち高オレイン紅花油およびカノラの混合物である。
カノラ油:30%。
エンシュア・ライトは、マルトデキストリンおよびショ糖の組合せを含む。チョコレートフレバーはコーンシロップも含む。マイルドな甘味料およびフレーバー(フレンチバニラ、チョコレートシュプレーム、ストロベリースウィール)に加えてペカン、チェリー、ストロベリー、レモンおよびオレンジ中のバリ−フレーバーズ(登録商標)フレーバー・パクスはフレーバー疲労を予防するのを助け、患者コンプライアンスを助ける。
ショ糖:51%
マルトデキストリン:49%。
ショ糖:47.0%
コーンシロップ:26.5%
マルトデキストリン:26.5%。
一人分のエンシュア・ライト(8floz)は24個の主要ビタミンおよびミネラルに関するRDIの少なくとも25%を提供する。
カフェインフレーバーは、8fl ozあたり2.1mgのカフェインを含む。
使用
エンシュア・プラスは、タンパク質は正常濃度であるが過剰のカロリーおよび栄養分が必要であるときに使用するための高カロリーの低残渣液体食である。代用食品として食事と一緒または食事の間に適量使用する経口栄養サプリメントとして主に設計されている。エンシュア・プラスは、ラクトースもグルコースも含まない。主として経口栄養サプリメントあるが、経管栄養補給することもできる。
−限られた容量でタンパク質は正常濃度であるが過剰のカロリーおよび栄養分が必要である患者;
−健康体重を得るかまたは保持することが必要な患者。
−濃厚でクリーミーな味;
−必須ビタミンおよびミネラルの良好なソース。
バニラ:
−D水、コーンシロップ、マルトデキストリン(コーン)、コーン油、カゼイン酸ナトリウムおよびカルシウム、糖(ショ糖)、大豆タンパク質単離物、塩化マグネシウム、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、大豆レシチン、天然および人工フレーバー、クエン酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化コリン、アスコルビン酸、カラゲナン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、パルミチン酸ビタミンA、葉酸、ビオチン、塩化クロム、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、シアノコバラミンおよびビタミンD3。
タンパク質源は、2種の生物学的価値の高いタンパク質、すなわちカゼインと大豆の混合物である。
カゼイン酸ナトリウムおよびカルシウム:84%
大豆タンパク質単離物:16%。
脂肪源は、コーン油である。
コーン油:100%。
エンシュア・プラスは、マルトデキストリンおよびショ糖の組合せを含む。マイルドな甘味料およびフレーバー(バニラ、チョコレート、ストロベリー、コーヒー、バターピーカンおよびエッグノッグ)に加えてペカン、チェリー、ストロベリー、レモンおよびオレンジ中のバリ−フレーバーズ(登録商標)フレーバー・パクスはフレーバー疲労を予防するのを助け、患者コンプライアンスを助ける。
コーンシロップ:39%
マルトデキストリン:38%
ショ糖:23%。
コーンシロップ:36%
マルトデキストリン:34%
ショ糖:30%。
一人分のエンシュア・プラス(8floz)は25個の主要ビタミンおよびミネラルに関するRDIの少なくとも15%を与える。
チョコレートフレーバーは8flozあたり3.1mgのカフェインを含む。コーヒーフレーバーは微量のカフェインを含む。
使用:エンシュア・プラスHNは高いカロリーおよびタンパク質を必要とするかまたは限定量のトレランスを有する患者に対して設計された栄養的に完全な高カロリー/高窒素液体食である。経口栄養補給または経管による完全栄養サポートのために使用することができる。エンシュア・プラスHNはラクトースもグルテンも含まない。
−術後か負傷後のような多量のカロリーおよびタンパク質を必要とする患者;
−耐容容量が限られており、早期満腹を有する患者。
−栄養補給または完全栄養のため;
−経口または経管栄養補給;
−1.5CaVmL;
−高窒素;
−カロリー的に濃い。
バニラ:
−D水、マルトデキストリン(コーン)、カゼイン酸ナトリウムおよびカルシウム、コーン油、糖(ショ糖)、大豆タンパク質単離物、塩化マグネシウム、クエン酸カリウム、第三リン酸カルシウム、大豆レシチン、天然および人工フレーバー、クエン酸ナトリウム、塩化コリン、アスコルビン酸、タウリン、L−カルニチン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、ニコチンアミド、カラゲナン、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸第二銅、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、パルミチン酸ビタミンA、葉酸、ビオチン、塩化クロム、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、亜セレン酸ナトリウム、フィロキノン、シアノコバラミンおよびビタミンD3。
使用
(水で再生)エンシュア粉末は、食事と一緒または食事の間に使用される経口栄養サプリメントとして主に設計された低残渣液体食である。エンシュア粉末は、ラクトースもグルテンも含まず、低コレステロール食を含めた調整食中に使用するのに適している。
−調整食を摂取している患者;
−栄養的に危険な状態にある高齢患者;
−病気/手術からの回復期の患者;
−低残渣食を必要としている患者。
−便利で簡単に混合される;
−飽和脂肪が少ない;
−一人分あたり9gの総脂肪および<5mgのコレステロール;
−ビタミンおよびミネラルが豊富;
−低コレステロール食;
−ラクトースを含まず、簡単に消化。
−Dコーンシロップ、マルトデキストリン(コーン)、糖(ショ糖)、コーン油、カゼイン酸ナトリウムおよびカルシウム、大豆タンパク質単離物、人工フレーバー、クエン酸カリウム、塩化マグネシウム、クエン酸ナトリウム、第三リン酸カルシウム、塩化カリウム、大豆レシチン、アスコルビン酸、塩化コリン、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、塩酸チアミン、硫酸第二銅、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、パルミチン酸ビタミンA、葉酸、ビオチン、モリブデン酸ナトリウム、塩化クロム、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
タンパク質源は、2種の生物学的価値の高いタンパク質、すなわちカゼインおよび大豆の混合物である。
カゼイン酸ナトリウムおよびカルシウム:84%
大豆タンパク質単離物:16%。
脂肪源は、コーン油である。
コーン油:100%。
エンシュア粉末は、コーンシロップ、マルトデキストリンおよびショ糖の組合せを含む。エンシュア粉末のマイルドな甘味料に加えてペカン、チェリー、ストロベリー、レモンおよびオレンジ中のバリ−フレーバーズ(登録商標)フレーバー・パクスは、フレーバー疲労を予防するのを助け、患者コンプライアンスを助ける。
コーンシロップ:35%
マルトデキストリン:35%
ショ糖:30%。
使用:エンシュア・プリンは食事と一緒または食事の間に使用される非液体形態でバランスのとれた栄養を与える栄養分に富むサプリメントである。濃さ調整食(例えば、ソフト、ピューレまたは完全な液体)のため、または嚥下困難な患者のために適当である。エンシュア ・プリンはグルテンを含まない。
−濃さ調整食(例えば、ソフト、ピューレまたは完全な液体)を使用している患者;
−嚥下困難な患者。
−濃厚ででクリーミー、美味;
−必須ビタミンおよびミネラルの良好なソース;
−冷凍する必要がなく便利;
−グルテンを含まない。
カロリー250、タンパク質10.9%、総脂質34.9%、炭水化物54.2%。
−D脱脂乳、水、糖(ショ糖)、部分水素化大豆油、改質食用スターチ、硫酸マグネシウム、ナトリウムステアロイルラクチレート、第二リン酸ナトリウム、人工フレーバー、アスコルビン酸、硫酸亜鉛、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、塩化コリン、ニコチンアミド、硫酸マンガン、パントテン酸カルシウム、FD&Cイエロー#5、クエン酸カリウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、FD&Cイエロー#6、葉酸、ビオチン、フィロキノン、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
タンパク質源は脱脂乳である。
−脱脂乳100%。
脂肪源は、水素化大豆油である。
−水素化大豆油100%。
エンシュア ・プリンはショ糖および改質食用スターチの組合せを含む。マイルドな甘味料およびフレーバー(バニラ、チョコレート、バタースコッチおよびタピオカ)はフレーバー疲労を予防するのを助ける。製品は一人分あたり9.2gのラクトースを含む。
ショ糖:56%
ラクトース:27%
改質食用スターチ:49%。
ショ糖:58%
ラクトース:26%
改質食用スターチ:16%。
使用:ファイバー入りエンシュアは、食物繊維および栄養分を多く取りたい人のために設計された繊維を含む栄養的に完全な液体食である。ファイバー入りエンシュアは、低残渣食を必要としない人に適している。経口または経管により栄養補給することができ、規則的な食事への栄養補給としてまたは適量で代用食品として使用することができる。ファイバー入りエンシュアは、ラクトースもグルコースも含まず、低コレステロール食を含めた調整食中に使用するのに適している。
−食物繊維および栄養分を多く取りたい患者。
−飽和脂肪が少量で、ビタミンおよびミネラルが多い新しい調製乳;
−一人分あたり6gの総脂質および<5mgのコレステロールを含む;
−濃厚でクリーミーな味;
−繊維の良好なソース;
−必須ビタミンおよびミネラルの優れたソース;
−低コレステロール食;
−ラクトースもグルテンも含まない。
−D水、マルトデキストリン(コーン)、糖(ショ糖)、カゼイン酸カルシウム、オート麦繊維、高オレフィン紅花油、カノラ油、大豆タンパク質単離物、コーン油、大豆繊維、第三リン酸カルシウム、塩化マグネシウム、クエン酸カリウム、セルロースガム、大豆レシチン、第二リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、天然および人工フレーバー、塩化コリン、リン酸マグネシウム、アスコルビン酸、セルロースガム、塩化カリウム、カラゲナン、硫酸第一鉄、α−トコフェリルアセテート、硫酸亜鉛、ニコチンアミド、硫酸マンガン、パントテン酸カルシウム、硫酸第二銅、パルミチン酸ビタミンA、塩酸チアミン、ピリドキシン塩酸塩、リボフラビン、葉酸、塩化クロム、ビオチン、モリブデン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、セレン酸ナトリウム、フィロキノン、ビタミンD3およびシアノコバラミン。
タンパク質源は、2種の生物学的価値の高いタンパク質−カゼインおよび大豆の混合物である。
大豆タンパク質:20%。
脂肪源は、3種の油、すなわち高オレイン紅花、カノラおよびコーンの混合物である。
カノラ油:40%
コーン油:20%。
ファイバー入りエンシュアは、マルトデキストリンおよびショ糖の組合せを含む。マイルドな甘味料およびフレーバー(バニラ、チョコレートおよびバターピカン)に加えてペカン、チェリー、ストロベリー、レモンおよびオレンジ中のバリ−フレーバーズ(登録商標)フレーバー・パクスはフレーバー疲労を予防するのを助け、患者コンプライアンスを助ける。
マルトデキストリン:66%
ショ糖:25%
オート麦:7%
大豆繊維:2%。
マルトデキストリン:55%
ショ糖:36%
オート麦繊維:7%
大豆繊維:2%。
ファイバー入りエンシュア中に使用される繊維混合物は、オート麦繊維および大豆多糖から構成される。この混合物により、8fl.oz缶あたり全部で約4gの食物繊維が提供される。不溶性繊維/溶解性繊維の比率は95:5である。
オキセパは、ARDSの危険があるかまたはその状態にある患者の食事管理のために設計された低炭水化物でカロリー的に濃い経腸栄養品である。エイコサペンタエン酸(漁油由来のEPA)、γ−リノレン酸(ルリヂサ油由来のGLA)および高い酸化防止剤レベルを含む油ブレンドを含めた諸成分の固有の組合せを有する。
カロリー密度は、エネルギー必要量を満たすのに必要な容量を最小限とするために1.5Cal/ml(355Cal/8floz)ほど高い。オキセパ中のカロリー分布を表Aに示す。
−オキセパは一人分(8floz)あたり22.2gの脂肪を含む(93.7g/L);
−脂肪源は、カノラ油31.8%、中鎖トリグリセリド(MCT)25%、ルリヂサ油20%、魚油20%および大豆レシチン3.2%の油混合物である;オキセパの典型的な脂肪酸プロファイルを表Bに示す;
−オキセパは表IVに示すように多価不飽和、モノ不飽和および飽和脂肪酸をバランスよく含む;
−脂肪ブレンドの25%を占める中鎖トリグリセリド(MCT)は胆汁酸により乳化されることなく腸管に吸収されるので胃内容物排泄を助ける。
−炭水化物含量は、一人分(8fl oz)あたり25.0gである(105.5g/L);
−炭水化物源は、マルトデキストリン(複雑な炭水化物)45%およびショ糖(単純な炭水化物)55%であり、これらはいずれも容易に消化、吸収される;
−オキセパの高脂肪および低炭水化物含量は、二酸化炭素(CO2)発生を最小限とするように設計されている。高いCO2レベルは人工呼吸器を付けている患者において人工呼吸器の離脱を悪化させる恐れがある;
−低レベルの炭水化物はストレスによる過血糖を発症している患者にも有用であることができる;
−オキセパはラクトースを含まない。
−オキセパは、一人分(8floz)あたり14.8gのタンパク質を含む(62.5g/L);
−総カロリー/窒素比率(150:1)は、ストレスを受けている患者の要求量を満たす;
−オキセパは同化作用および呼吸器の問題を呈することなくやせた体を維持するのに十分なタンパク質を与える。高いタンパク質摂取は呼吸不全の患者には問題である。タンパク質はCO2発生に対して殆ど影響を与えないが、高タンパク質食は換気駆動力を高める;
−オキセパのタンパク質源は、カゼイン酸ナトリウム86.8%およびカゼイン酸カルシウム13.2%である;
−オキセパ中のタンパク質系のアミノ酸プロファイルは全米科学アカデミーが設定している高品質タンパク質の基準を満たすかまたはその基準を超えている;
−オキセパはグルテンを含まない。
デラクロイキシア・コロナタ(ATCC28565)からのデサチュラーゼ単離およびcDNA合成のための縮重オリゴヌクレオチドの設計
真菌デラクロイキシア・コロナタ(D.コロナタ)(ATCC28565)の脂肪酸組成分析を検討して、これが産生した多価不飽和脂肪酸(PUFA)の種類および量を確認した。この真菌は、かなりの量(総脂質の約19%)のPUFAアラキドン酸(ARA、C20:4n−6)を含むことが認められた(図1参照)。こうして、D.コロナタが恐らくリノール酸(LA、C18:2n−6)をγ−リノレン酸(GLA、C18:3n−6)に変換するΔ6−デサチュラーゼおよびジホモ−γ−リノレン酸(DGLA、C20:3n−6)をARAに変換するΔ5−デサチュラーゼを含むことが明らかにされた。従って目標は、D.コロナタから予測されるデサチュラーゼ遺伝子を単離し、中間宿主での発現によってその酵素の機能性を検証することにあった。
a.タンパク質モチーフ1(配列番号9):NH3−VYDVTEWVKRHPGG−COOH
プライマーRO834(配列番号10):5′−GTBTAYGAYGTBACCGARTGGGTBAAGCGYCAYCCBGGHGGH−3′。
b.タンパク質モチーフ2(配列番号11):NH3−GASANWWKHQHNVHH−COOH
プライマーRO835(順方向)配列番号12):
5′−GGHGCYTCCGCYAACTGGTGGAAGCAYCAGCAYAACGTBCAYCAY−3′
プライマーRO836(逆方向)(配列番号13):
5′−RTGRTGVACGTTRTGCTGRTGCTTCCACCAGTTRGCGGARGCDCC−3′
c.タンパク質モチーフ3(配列番号14):
NH3−NYQIEHHLFPTM−COOH
プライマーRO838(逆方向)(配列番号15): 5′−TTGATRGTCTARCTYGTRGTRGASAARGGVTGGTAC−3′。
プライマーRO753(配列番号17):
5′−CATCATCATNGGRAANARRTGRTG−3′プライマー
RO754(配列番号18):
5′−CTACTACTACTACAYCAYACNTAYACNAAY−3′。
RACEcDNAの作製およびデラクロイキシア・コロナタ(ATCC28565)からの全長遺伝子配列の単離
RACE(cDNA末端迅速増幅)レディ(ready)cDNAを反応の標的として用いて、全長cDNAを単離した。RACEレディcDNAを作成するため、逆転写によってcDNA標的を製造するためのジーン・レーサー(GeneRacer;商標名)キット(Invitrogen, Carlsbad, CA)およびスーパースクリプト(Superscript)II(商標名)酵素(Invitrogen, Carlsbad, CA)を用い、製造者の指示に従って、総RNA約5μgを用いた。末端の初回増幅のため、パーキン・エルマー9600で、94℃で2分間の初回溶融とそれに続く94℃で30秒間および72℃で3分間の5サイクル、94℃で30秒間、70℃で30秒間および72℃で3分間の10サイクル、次いで94℃で30秒間、68℃で30秒間および72℃で3分間の20サイクル、次に72℃で10分間の伸長という熱サイクルプロトコールを用いた。
ヒスチジンボックス2(配列番号34):HNTHH
ヒスチジンボックス3(配列番号35):QVEHH。
酵母での推定デサチュラーゼを含むプラスミドの発現
3種類全てのプラスミドを、コンピテントなサッカロマイセス・セレヴィシエ株334に形質転換した。酵母の形質転換は、製造者が指定した条件に従って、アルカリ−カチオン酵母形質転換キット(Alkali-Cation Yeast Transformation Kit;BIO 101, Vista, CA)を用いて実施した。形質転換体は、ウラシル欠乏培地(DOB[−Ura])でのウラシル栄養要求性について選択した。これらクローンの特異的デサチュラーゼ活性を検出するため、50μMの下記特異的脂肪酸基質の存在下に形質転換体を増殖させた。
b.α−リノレン酸(ALA、C18:3n−3)(ステアリドン酸への変換はΔ6−デサチュラーゼ活性を示すものと考えられる。);
c.(C20:2n−6)(ジホモ−γ−リノレン酸への変換は、Δ8−デサチュラーゼ活性を示すものと考えられる。);
d.(C20:3n−3)(エイコサテトラエン酸への変換は、Δ8−デサチュラーゼ活性を示すものと考えられる。);
e.ジホモ−γ−リノレン酸(DGLA、C20:3n−6)(アラキドン酸への変換はΔ8−デサチュラーゼ活性を示すものと考えられる。);
f.エイコサテトラエン酸(ETA、C20:4n−3)(エイコサペンタエン酸への変換は、Δ5−活性を示すものと考えられる。);
g.アドレン酸(ADA、C22:4n−6)(ω6−ドコサペンタエン酸への変換は、Δ4−デサチュラーゼ活性を示すものと考えられる。);
h.ω3−ドコサペンタエン酸(DPA、C22:4n−6)(ドコサヘキサエン酸への変換はΔ4−デサチュラーゼ活性を示すものと考えられる。)。
酵母でのDel−D6(デラクロイキシアからのΔ6−デサチュラーゼ)のモルティエラ・アルピナエロンガーゼとの共発現
プラスミドpRDC−12を、pRPBG−2からのM.アルピナエロンガーゼ遺伝子を含むクローンであるpRSP−46で共形質転換した(米国公開特許出願第US2003/0177508A1号(参照によって全体が本明細書に組み込まれる)参照)。表2に、50μMの基質LA(C18:2n−6)を加えた場合、デサチュラーゼがLAをGLAに変換し、エロンガーゼがGLAに2個の炭素を付加させて、DGLAを産生することができたことが示されている。対照形質転換334(pYX242/pESC−Ura)によっては、DGLAは産生されなかった。また、50μMの基質ALA(18:3n−3)を加えた場合、デサチュラーゼはALAをSTAに変換し、エロンガーゼがSTAに2個の炭素を付加させてETAを産生することができた。対照形質転換334(pYX242/pESC−Ura)によって、ETAは産生されなかった。従って、D.コロナタΔ6−デサチュラーゼは、予想されるPUFAを産生するPUFA生合成経路からの他の異種酵素(M.アルピナエロンガーゼ)の基質である異種発現系で、生成物を産生可能であった。これは、Δ6−デサチュラーゼが実際に、酵母などの異種発現系におけるPUFA経路で他の異種酵素とともに作用可能であることを示している。
他のPUFA産生生物からのΔ6−デサチュラーゼ相同物の確認
総脂肪酸プロファイルの分析での生物におけるGLA(18:3n−6)、ARA(20:4n−6)および/またはEPA(20:5n−3)の存在に基づいて、Δ6−デサチュラーゼは、多くのPUFA産生性の真菌および藻類に存在すると予想されている。実施例Iに記載のものと同様のPCR反応において縮重プライマー集合RO834(配列番号8)およびRO838(配列番号13)を用いると、これら生物からΔ6−デサチュラーゼ遺伝子に相当する断片を単離し、次に実施例Iに記載のプロトコールを用いて全長遺伝子を単離することができる。Δ6−デサチュラーゼ遺伝子を単離するのに用いることが可能な生物は、クスダマカビ属(Cunninghamella)、クモノスカビ属(Rhizopus)、ゴングロネラ属(Gongronella)、アラミセス属(Allamyces)、シンキトリウム属(Synchytrium)、アクルヤ属(Achlya)、ヒゲカビ属(Phycomyces)、コウガイケカビ属(Choanephora)、マキエダカビ属(Helicostylum)、エントモプトラ属(Entomopthora)などの真菌;クロレラ属(Chlorella)、デュナリエラ属(Dunaliella)、ラウデリア属(Lauderia)、ヒバマタ属(Fucus)、ホンダワラ属(Sargassum)、ラエンガリア属(Layengaria)、コルポメニア属(Colpomenia)、プロカミウム属(Plocamium)、ロドメラ属(Rhodomella)、ゲリジウム属(Gelidium)、ポリシフォニア属(Polysiphonia)、ツノマタ属(Chondrus)(Folia Microbiol. (1992) 37: 357-359;Stredanska S. & Sajbidor J.; Appl. Microbiol. Biotechnol. (1991) 35: 421-430; Radwan S. S.; Biochum. Biophys. ACTA (1965) 98: 230-237, Shaw R.)などの微細藻類に属するものと考えられる。
Claims (25)
- デサチュラーゼ活性を有するポリペプチド(前記ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有する。)をコードするヌクレオチド配列を含むまたは前記ヌクレオチド配列に対して相補的である単離核酸。
- 配列番号1、配列番号3、配列番号5および配列番号7からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有するヌクレオチド配列を含むまたは前記ヌクレオチド配列に対して相補的であり、デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離核酸。
- 前記単離核酸が、基質としてモノ不飽和または多価不飽和脂肪酸を使用する機能活性デサチュラーゼをコードする請求項1または2に記載の単離核酸。
- 前記単離核酸が真菌から単離される請求項1または2に記載の単離核酸。
- 前記真菌がデラクロイキシア・コロナタ(Delacroixia coronata)である請求項4に記載の単離核酸。
- 請求項1または2に記載の単離核酸によってコードされている精製ポリペプチド。
- 多価不飽和脂肪酸を炭素6で不飽和化し、配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含む精製ポリペプチド。
- a)
i)配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするまたは
ii)配列番号1、配列番号3、配列番号5および配列番号7からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する
ヌクレオチド配列を含むまたは前記ヌクレオチド配列に対して相補的な核酸を単離する段階;
b)i)前記単離核酸がii)制御配列に作動的に結合されている前記単離核酸を有するベクターを構築する段階;
c)前記デサチュラーゼを発現させるのに十分な時間および条件下で前記ベクターを宿主細胞に導入する段階
を有するデサチュラーゼの製造方法。 - a)
i)配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするまたは
ii)配列番号1、配列番号3、配列番号5および配列番号7からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する
ヌクレオチド配列を含むまたは前記ヌクレオチド配列に対して相補的である、デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離核酸
b)前記単離核酸に作動的に結合されている制御配列
を有するベクター。 - 請求項9に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 前記ベクターの前記単離核酸の発現が植物細胞、植物または植物組織による多価不飽和脂肪酸の産生をもたらす、請求項9に記載のベクターを含む単離植物細胞、植物または植物組織。
- 前記多価不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸およびステアリドン酸からなる群から選択される請求項11に記載の植物細胞、植物または植物組織。
- 前記ベクターの前記単離核酸の発現がトランスジェニック植物の種子における多価不飽和脂肪酸の産生をもたらす、請求項9に記載のベクターを含むトランスジェニック植物。
- a)
i)配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするかまたは
ii)配列番号1、配列番号3、配列番号5および配列番号7からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する
ヌクレオチド配列を含むまたは前記ヌクレオチド配列に対して相補的な核酸を単離する段階;
b)前記単離核酸を含むベクターを構築する段階;
c)Δ6−デサチュラーゼの発現に十分な時間および条件下で前記ベクターを宿主細胞に導入する段階;および
d)前記発現Δ6−デサチュラーゼを基質多価不飽和脂肪酸に曝露して前記基質を生成物多価不飽和脂肪酸に変換する段階
を有する多価不飽和脂肪酸の製造方法。 - 前記基質多価不飽和脂肪酸がリノール酸またはα−リノレン酸であり;前記生成物多価不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸またはステアリドン酸である請求項14に記載の方法。
- 前記生成物多価不飽和脂肪酸をエロンガーゼに曝露して、前記生成物多価不飽和脂肪酸を他の多価不飽和脂肪酸に変換する段階をさらに有する請求項14に記載の方法。
- 前記生成物多価不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸またはステアリドン酸であり;前記他の多価不飽和脂肪酸がジホモ−γ−リノレン酸またはエイコサテトラエン酸である請求項16に記載の方法。
- a)基質モノ不飽和または多価不飽和脂肪酸をデサチュラーゼに曝露して、前記基質を生成物多価不飽和脂肪酸に変換する段階;および
b)段階a)の前記生成物多価不飽和脂肪酸を、配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するΔ6−デサチュラーゼに曝露して前記生成物多価不飽和脂肪酸を最終生成物多価不飽和脂肪酸に変換する段階
を有する多価不飽和脂肪酸の製造方法。 - 前記基質モノ不飽和脂肪酸がオレイン酸であり;前記多価不飽和脂肪酸がリノール酸である請求項18に記載の方法。
- 前記最終生成物多価不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸またはステアリドン酸である請求項18に記載の方法。
- a)
i)配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするまたは
ii)配列番号1、配列番号3、配列番号5および配列番号7からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する
ヌクレオチド配列を含むまたは前記ヌクレオチド配列に対して相補的である核酸を単離する段階、ここで、単離された核酸は、デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする;
b)
i)前記単離核酸、
ii)エロンガーゼをコードする単離核酸および
iii)Δ5−デサチュラーゼをコードする単離核酸
を含むベクターを構築する段階;
c)Δ6−デサチュラーゼ、前記エロンガーゼおよび前記Δ5−デサチュラーゼを発現させる上で十分な時間および条件下で、宿主細胞に前記ベクターを導入する段階;および
d)前記発現Δ6−デサチュラーゼ、前記発現エロンガーゼおよび前記発現Δ5−デサチュラーゼを基質多価不飽和脂肪酸に曝露して、前記基質を生成物多価不飽和脂肪酸に変換し、前記生成物多価不飽和脂肪酸を他の多価不飽和脂肪酸に変換し、前記他の多価不飽和脂肪酸を最終生成物多価不飽和脂肪酸に変換する段階
を有する多価不飽和脂肪酸の製造方法。 - 前記基質多価不飽和脂肪酸がリノール酸であり;前記生成物多価不飽和脂肪酸がγ−リノレン酸であり;前記他の多価不飽和脂肪酸がジホモ−γ−リノレン酸であり;前記最終生成物多価不飽和脂肪酸がアラキドン酸である請求項21に記載の方法。
- 前記基質多価不飽和脂肪酸がα−リノレン酸であり;前記生成物多価不飽和脂肪酸がステアリドン酸であり;前記他の多価不飽和脂肪酸がエイコサテトラエン酸であり;前記最終生成物多価不飽和脂肪酸がエイコサペンタエン酸である請求項21に記載の方法。
- 高ストリンジェント条件下で、配列番号1、配列番号3、配列番号5および配列番号7からなる群から選択される核酸にハイブリダイズする、デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離核酸。
- 高ストリンジェント条件下で、配列番号2、配列番号4、配列番号6および配列番号8からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする単離核酸にハイブリダイズする、デサチュラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする単離核酸。
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