JP5301832B2 - 抗生物質フリーのColE1プラスミドを増殖するための宿主ベクター系 - Google Patents
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- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
Description
i)発現が調節されるべきタンパク質をコードし、且つ動作可能にこれに結合されたDNA配列と、
ii)RNAII配列またはその一部を模倣し、且つColE1複製開始点を備えたプラスミドから転写可能なRNAI配列に対して相補的なRNA配列をコードするDNA配列と
を含んだ天然に存在しないバクテリア細胞に関する。
a)ColE1複製開始点を備えたプラスミドと;
b)その中で前記プラスミドを複製することができるバクテリア宿主細胞と
を含んでなり、
該宿主細胞は
i)その発現が調節されるべきタンパク質をコードし、且つ動作可能にこれに結合されたDNA配列;および
ii)RNAII配列またはその一部を模倣し、且つ前記プラスミドa)から転写可能なRNAI配列に対して相補的なRNA配列をコードするDNA配列
を含み、
前記ii)に定義されたRNA配列は、プラスミドa)の不存在下で前記タンパク質の発現を可能にし、
また前記プラスミドa)が前記宿主細胞b)の中に存在するときに、前記プラスミドから転写された前記RNAI分子は、ii)で定義されたRNA配列とハイブリダイズし、それによって前記タンパク質の発現が抑制される。
好ましい実施形態において、前記外来DNAi)によってコードされるタンパク質は、前記宿主細胞に対して毒性または致死的である。
a)ColE1複製開始点を備えたプラスミドと;
b)下記i)およびii)をゲノムの中に組み込んだ状態で含む、天然に存在しないバクテリア宿主細胞
i)前記宿主細胞に対して致死的または毒性のタンパク質をコードし、且つ動作可能にこれに結合された外来DNA配列;
ii)RNAII配列またはその一部を模倣し、且つ前記プラスミドa)から転写可能なRNAI配列に対して相補的なRNA配列をコードするDNA配列;
とを含んでなり、
前記ii)に定義されたRNA配列は、前記宿主細胞の増殖が完全にまたは部分的に阻害されるように、プラスミドa)の不存在下で前記致死的または毒性のタンパク質の発現を可能にし、
また前記プラスミドa)が前記宿主細胞b)の中に存在するときに、前記プラスミドから転写された前記RNAI分子はii)で定義されたRNA配列とハイブリダイズし、それによって前記致死的または毒性の発現が抑制される結果、前記プラスミドを有する細胞における前記完全なまたは部分的な増殖阻害が抑制される。
1.宿主細胞
それらの複製は該宿主の機構に依存するので、ColE1型プラスミドは、宿主範囲の狭いプラスミドである。複製はE.coliおよび関連バクテリア、例えばサルモネラおよびクレブシエラに制限される(Kues and Stahl, 1989)。従って、宿主の唯一の必須の性質は、それがColE1プラスミドを複製する能力を有することである。適切な宿主は、広範に使用される大腸菌株K12もしくはB株、または関連の商業的に入手可能な株、例えばJM108、TG1、DH5アルファ、Nova Blue、XL1Blue、HMS174もしくはLl21である(レビューについては、Casali, 2003参照)。
特に致死的マーカータンパク質の場合には、その誘導なしでの発現を回避するのが望ましい。
宿主細胞を操作するのに適した構築物の原理が、図2に示されている。
全ての成分、即ち、二つの相同性アーム[H]、プロモータ+オペレータ[P+O]、RNAIマーカー配列(RNAII様配列)、転写ターミネータおよびKanカセット(FRT、+/−FLPリコンビナーゼ認識マーカー配列を含むカナマイシン耐性カセット;或いは他の慣用的な選別マーカーを使用してもよい)を備えたマーカー遺伝子[gene](実施例では、GFPが初期実験で使用された)を、適切なベクター、例えばpBluescript KS+のマルチクローニング部位にクローニングする。ゲノム挿入のための線型断片を制限酵素で切出し、PCRにより増幅する。
2.1.相同性アーム
本発明の初期の実験において、当該構築物の両側にある30bpの相同性が、λRedシステムによる組換えのためには十分であることが見出された(Yu,2000)。しかし、より長い相同性を用いたときには更に良好な結果が得られるので、該アームは50〜400bpの範囲であるのが好ましい。実施例では、250〜350bpの相同性アームを使用した。
外来マーカー遺伝子の産物が、それ自身で細胞に対して毒性または致死的であるか、或いはそれがリプレッサであるならば、その発現は調節されなければならない。該プロモータ領域は、遺伝子発現の制御を可能にする適切なオペレータ配列(例えばLacオペレータ)を含まなければならない。
RNAIは部分的または完全な阻害剤として作用しなければならないので、RNAI(10〜555nt)に対して相補的なRNAII様配列は、該RNAII様配列の上流もしくは下流またはその中に埋め込まれているリボゾーム結合部位(シャイン・ダルガノ配列)と共に、マーカー遺伝子の上流に提示されなければならない。シャイン・ダルガノ配列(SD)とは、原核mRNA分子上における翻訳開始部位の上流にある長さの短いヌクレオチドを意味し、リボゾームRNAに結合することにより、リボゾームをmRNAの開始コドンに結合させるように働く。RNAII様配列の上流に位置するとき、好ましくは7ヌクレオチド(GAAGGAG)からなるSD配列は、当該マーカー遺伝子のATG開始コドンの約4〜15bp、例えば7bpだけ上流に位置するべきである。リボゾーム結合部位がマーカー遺伝子に対して相補的なRNAI配列の中に埋め込まれる場合、RNAIとのアンチセンスRNA相互作用およびキス複合体の形成を可能にするために、この配列は、ステム領域のみが変化し、ループ構造および好ましくは全ての二次構造が完全なままであるように挿入されるべきである。
本発明の重要な特徴であるRNAIに媒介されたマーカー遺伝子のダウンレギュレーションは、如何なる目的であっても、その発現が調節されるべき如何なる遺伝子にも適用することができる。
本発明においては、それらの本来のRNAI/RNAII対ならびに修飾されたRNAI及び/又はRNAII配列を備えた、例えばWO02/29067に記載された全てのColE1型プラスミドを使用してよい。
本発明は、プラスミドDNAの製造のため、および組換えタンパク質を製造するために、最新の発酵技術において広範に使用することができる。
インビボ転写された構築物を用いたハイブリダイゼーション実験
その翻訳がハイブリダイゼーションによって阻害されるべきmRNA分子内での、RNAIに対して相補的な配列(RNAII様配列)の望ましい長さおよび位置を選択するために、インビトロでのアンチセンス実験が行われる。異なる合成RNAおよびRNAIIに対するRNAIのRNAハイブリッドを、ゲル移動アッセイにかける。
ゲル1:
1.陰性対照RNA
2.RNAI+陰性対照RNA
3.RNAII108nt
4.RNAI+RNAII108nt(インキュベーションの前に90℃で3分の加熱)
5.RNAI+RNAII108nt
6.RNAI(インキュベーションの前に90℃で3分の加熱)
7.RNAI
ゲル2:
8. RNAI
9. RNAI(+RNAII ループ2)
10.RNAI(+RNAII ループ1および2)
遺伝子発現および遺伝子サイレンシングを試験するためのインビボアッセイ
試験すべき構築物において、一つまたは二つのRNAIIステムループが発現ベクターの中にクローニングされる。転写物の二次構造および適正な折畳みが、コンピュータプログラムRNAフォールド(Gene Quest, Vienna RNA folding procedure; Zuker, 1999参照)によって確認される。この実験について、非ColE1起点を備えた発現ベクター、例えばpMMB67EH(Furste et al., 1986)は、該プラスミド内においてRNAI−標的の相互作用を回避し、またリボゾーム結合部位の近傍における追加の配列の存在によってGFP発現が妨害されるかどうかを決定するために有用と考えられる。リボゾームトラック上またはその近傍における追加の配列および二次構造は、通常は遺伝子発現を減少させ、または完全に阻害するので(Malmgren, 1996; Ringquist, 1993)、これは重要な点と考えられる。
発酵の際のマーカー遺伝子の発現/抑制
プラスミドpBR322の存在を伴った、およびこれを伴わない半回分発酵法の際に、E.coli株IS11およびIS5が分析される。表4は、四つの半回分発酵の実験設定を要約している。各株は、pBR322の存在下または不存在下で増殖される。
必須遺伝子の発現を調節するためのリプレッサの使用
a)必須遺伝子のための構築物の作製
試験すべき第一の必須遺伝子は、map(Li et al., 2004)、即ち、E.coli染色体のmin4に位置するメチオニンアミノペプチダーゼの遺伝子、rpsB−tsfオペロンからの357塩基対、およびT44−RNA遺伝子からの201bpである。 これら二つの遺伝子は多岐に転写され、プロモータは重ならない。該必須遺伝子のプロモータは全体的に除去されて、選択されたリプレッサに特異的な誘導性プロモータによって置換えられるから、これは不可欠の事項である。Chang et al, 1989は、lacプロモータにより制御されるmap遺伝子をもった、条件的に致死性の突然変異体株を記載した。該mapカセットによって、67bpの染色体区画が、mapプロモータを含むように置換される(Chang et al, 1989)。ゲノムからの可能な転写を回避するために、rrnBオペロン(Brosius et al, 1981)由来の二つの強い転写ターミネータT1およびT2が、組み込みカセットに加えられる。
図8は、必須遺伝子プロモータの置換を含む、必須遺伝子に基づく構築物の原理を示している。
pBluescriptKSII+によって例示される構築物の原理が、図9に示されている。
プラスミドpBSKTn7<pLtetOgfp−T7aL3tetR−Cat>は、幾つかの連続するクローニング工程において、出発ベクターとしてのpBSKTn7<T7al3GFP>、および個々の断片(プライマー配列については表5および表6参照)を含む中間体プラスミドから構築される。Tn7相同体1は、プライマーであるSacI−Tn7/1−backおよびEcoRI−Tn7/1−forを使用してバクテリア鋳型から増幅され、またTn7相同体2は、プライマーであるXhoI−Tn7/2−backおよびKpnI−Tn7/2−forを使用して増幅され、rrnBT12ターミネータは、プライマーであるEcoRI−T12−backおよびHindIII−SalI−T12−forを使用して増幅され、またcat遺伝子は、プライマーであるHindIII−SalI−Cat−backおよびXhoI−Cat−forを使用して増幅される(表5)。テトラサイクリンリプレッサ遺伝子(tetR)は、Tn10を含有するテトラサイクリン耐性株IS1(HMS174(DE3) ilv500::Tn10)から、プライマーであるNheI−tetR−backおよびBamHI−tetR−forを使用して増幅される。tet誘導性のpLtetOプロモータは、プライマー(HindIII−PLtetO−NotI−RBS−GFP−back)上で、gfpを増幅するために使用したプライマーであるEcoRI−GFP−forと共に完全に合成される。ゲノム組み込みのために、組立てられたベクターpBSKTn7<pLtetOgfp−T7al3tetR−Cat>を、再度SacIおよびNotIで消化して、望ましい発現カセットを放出させる。
HMS174(DE3)Tn7::pLtetOgfpT7aL3tetRCat(HMS−GTC)であってpBR322を用いたもの、および用いないものの一晩培養物を、半合成培地中に1:100で希釈し、インデューサであるIPTGを伴った、および伴わない二つの並列な震盪フラスコ培養に分割する。これらの培養物を、37℃で震盪することによって増殖させる。震盪フラスコが0.7を越えるOD600nmに達したときに、gfp−ELISAのためのサンプリングを開始する。
Claims (24)
- i)発現が調節されるべきタンパク質をコードするDNA配列と、
ii)RNAII配列の1つ又は2つのループ構造をコードし、且つ、
a)ColE1複製開始点を備えたプラスミドから転写可能なRNAI配列に対して相補的であり、且つ、
b)配列i)に動作可能に結合された
RNA配列をコードするDNA配列と
をゲノム中に含んだ、天然に存在しないバクテリア細胞であって、
前記RNAII配列は、前記相補的な配列の十分なRNA−RNA相互作用を保証して、前記プラスミドが存在するときには、それから転写されたRNAIがi)のDNA配列から転写されるmRNAの翻訳を阻害するのに充分な程度に、前記mRNAに結合するように設計および配置されている、バクテリア細胞。 - 請求項1に記載のバクテリア細胞であって、前記DNA配列i)は、前記細胞に対して外来のDNA配列であるバクテリア細胞。
- 請求項2に記載のバクテリア細胞であって、前記外来DNA配列i)が、前記細胞に対して致死的または毒性であるタンパク質をコードするバクテリア細胞。
- 請求項3に記載のバクテリア細胞であって、前記外来DNA配列i)が、誘導性プロモータの制御下にあるバクテリア細胞。
- 請求項3に記載のバクテリア細胞であって、前記外来DNA配列i)は、それ自身が、または毒性物質を発生させることによって、前記細胞に対して致死的または毒性であるタンパク質をコードするバクテリア細胞。
- 請求項3に記載のバクテリア細胞であって、前記外来DNA配列i)は、前記細胞の増殖に不可欠な必須遺伝子の転写を抑制することによって、前記バクテリア細胞に対して致死的または毒性であるリプレッサタンパク質をコードするバクテリア細胞。
- 請求項6に記載のバクテリア細胞であって、前記必須遺伝子がプロモータに対して動作可能に連結されるように操作され、該プロモータは、前記リプレッサタンパク質によって認識され且つ特異的に結合されるDNA配列を含んだバクテリア細胞。
- 請求項7に記載のバクテリア細胞であって、前記必須遺伝子に連結された前記プロモータが誘導性であるバクテリア細胞。
- 請求項8に記載のバクテリア細胞であって、前記誘導性プロモータは、請求項4の誘導性プロモータとは独立に誘導可能であるバクテリア細胞。
- 請求項1に記載のバクテリア細胞であって、前記DNA配列ii)が、前記DNA配列i)のリボゾーム結合部位と開始コドンの間に挿入されるバクテリア細胞。
- 請求項1に記載のバクテリア細胞であって、前記DNA配列i)および前記DNA配列ii)は、それらが融合タンパク質をコードするように連結されるバクテリア細胞。
- 請求項1に記載のバクテリア細胞であって、前記DNA配列i)と前記DNA配列ii)との間に重複する停止コドン及び開始コドンを有する配列をさらに含む、バクテリア細胞。
- 請求項1〜12の何れか1項に記載のバクテリア細胞であって、ColE1複製開始点を備えたプラスミドを複製する能力を有するバクテリア細胞。
- 請求項13に記載のバクテリア細胞であって、それが大腸菌細胞であるバクテリア細胞。
- a)ColE1複製開始点を備えたプラスミドと;
b)その中で前記プラスミドa)を複製することができるバクテリア宿主細胞と
を含んでなり、
該宿主細胞は、
i)その発現が調節されるべきタンパク質をコードするDNA配列;および
ii)RNAII配列の1つ又は2つのループ構造をコードし、且つ、
a)前記プラスミドa)から転写可能なRNAI配列に対して相補的であり、且つ、
b)配列i)に動作可能に結合された
RNA配列をコードするDNA配列
をゲノム中に含む、宿主ベクター系であって、
前記ii)に定義されたRNA配列は、前記プラスミドa)の不存在下で前記タンパク質の発現を可能にし、
また前記プラスミドa)が前記宿主細胞b)の中に存在するときに、前記プラスミドから転写された前記RNAI分子は、ii)で定義されたRNA配列とハイブリダイズし、それによって前記タンパク質の発現が抑制される宿主ベクター系。 - 請求項15に記載の宿主ベクター系であって、前記バクテリア宿主細胞b)は、請求項1〜12および請求項14の何れか1項に定義したバクテリア細胞である宿主ベクター系。
- 請求項15または16に記載の宿主ベクター系であって、前記外来DNA配列i)は、前記バクテリア細胞に対して致死的または毒性であるタンパク質をコードし、またii)に定義された前記RNA配列は、前記プラスミドa)の不存在下において、前記宿主細胞の増殖が完全にまたは部分的に阻害されるように前記致死的または毒性のタンパク質の発現を可能にし、また前記プラスミドa)が前記宿主細胞の内部に存在するときは、前記プラスミドから転写されたRNAI分子が、ii)で定義した前記RNA配列とハイブリダイズし、それにより前記致死的または毒性のタンパク質の発現が抑制されて、前記プラスミドを有する細胞において前記完全なまたは部分的な増殖阻害が抑制される宿主ベクター系。
- 請求項15に記載の宿主ベクター系であって、前記プラスミドa)が、更に興味ある遺伝子を含んでいる宿主ベクター系。
- 請求項18に記載の宿主ベクター系であって、前記興味ある遺伝子が治療用遺伝子である宿主ベクター系。
- 請求項15〜19のいずれか1項に記載の宿主ベクター系であって、前記プラスミドがpUCプラスミドである宿主ベクター系。
- プラスミドDNAを製造する方法であって:
i)請求項3のバクテリア宿主細胞の集団を、ColE1複製開始点を有し、且つ前記バクテリア宿主細胞内で前記プラスミドから発現されない興味ある遺伝子を含んだプラスミドを用いて形質転換する工程と、
ii)前記バクテリア宿主細胞ポピュレーションを、前記致死的または毒性のタンパク質が前記細胞内で発現される条件下において増殖させ、それによって前記タンパク質の発現は、前記プラスミドを含む細胞が前記プラスミドフリーの細胞よりも速く増殖するように、前記プラスミドフリーの細胞の増殖を完全にまたは部分的に阻害する工程と、
iii)プラスミドを含む細胞を回収する工程と、
iv)前記プラスミドDNAを単離および精製する工程と
を含んでなる方法。 - 請求項21に記載の方法であって、前記興味ある遺伝子が、哺乳類における発現を可能にする真核細胞プロモーターに動作可能に結合された治療用遺伝子である方法。
- 興味あるタンパク質を製造する方法であって:
i)請求項3のバクテリア宿主細胞の集団を、ColE1複製開始点を有し、且つ前記バクテリア宿主内で前記タンパク質の発現を可能にする原核性プロモータの制御下にある興味あるタンパク質をコードするDNA配列を含んだプラスミドを用いて形質転換する工程と、
ii)前記バクテリア宿主細胞ポピュレーションを、前記致死的または毒性のタンパク質が前記細胞内で発現される条件下において増殖させ、それによって前記タンパク質の発現は、前記プラスミドを含む細胞が前記プラスミドフリーの細胞よりも速く増殖するように、前記プラスミドフリーの細胞の増殖を完全にまたは部分的に阻害する工程と、
iii)前記興味あるタンパク質を回収する工程と、
iv)それを単離および精製する工程と
を含んでなる方法。 - 請求項21または23に記載の方法であって、前記プラスミドがpUCプラスミドである方法。
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EP2500427B1 (en) * | 2007-11-22 | 2014-07-30 | Japan Science and Technology Agency | Translation regulation system in cell or artifical cell model by using low-molecular-weight RNA |
DK2432884T3 (en) * | 2009-05-22 | 2016-08-22 | Merial Inc | Antibiotic-free PLASMID |
US20110269184A1 (en) | 2009-07-16 | 2011-11-03 | Boehringer Ingelheim Rcv Gmbh & Co. Kg | Method for controlling plasmid copy number in e.coli |
WO2012082946A2 (en) * | 2010-12-14 | 2012-06-21 | The Regents Of The University Of California | Creation of super-stable coie1 plasmids by duplication of sl 1-4 sequence and point mutations. |
GB201021795D0 (en) | 2010-12-21 | 2011-02-02 | Msd Biolog Uk Ltd | Expression Process |
CA2883227A1 (en) | 2012-08-29 | 2014-03-06 | Nature Technology Corporation | Dna plasmids with improved expression |
US20150322439A1 (en) | 2012-11-19 | 2015-11-12 | Nature Technology Corporation | Replicative minicircle vectors with improved expression |
JP7161991B2 (ja) * | 2016-11-02 | 2022-10-27 | アーチャーディーエックス, エルエルシー | 免疫レパートリーシーケンシングのための核酸サンプル調製の方法 |
CN107142272A (zh) * | 2017-06-05 | 2017-09-08 | 南京金斯瑞生物科技有限公司 | 一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法 |
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WO2023166132A1 (en) * | 2022-03-04 | 2023-09-07 | Gen-H Genetic Engineering Heidelberg Gmbh | Microorganism strain for antibiotic-free plasmid-based fermentation and method for generation thereof |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9215541D0 (en) * | 1992-07-22 | 1992-09-02 | Celltech Ltd | Protein expression system |
US5922583A (en) * | 1995-10-17 | 1999-07-13 | Biostar Inc. | Methods for production of recombinant plasmids |
EP1195436A1 (en) | 2000-10-04 | 2002-04-10 | BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH | Expression vectors with modified ColE1 origin of replication for control of plasmid copy number |
US20040248083A1 (en) * | 2001-05-17 | 2004-12-09 | Mikkelsen Jacob Giehm | Vectors for gene therapy |
SE0102204D0 (sv) * | 2001-06-21 | 2001-06-21 | Leif Isaksson | New method |
CN1490056A (zh) * | 2002-10-18 | 2004-04-21 | ��¡���ɵ°��̲��о����� | 针对hiv-1的免疫方法和组合物 |
GB0327056D0 (en) * | 2003-11-20 | 2003-12-24 | Cobra Biolog Ltd | Plasmid maintenance |
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