JP5209990B2 - 反応及び／又は検出容器、並びにこれを含む反応及び／又は検出キット - Google Patents
反応及び／又は検出容器、並びにこれを含む反応及び／又は検出キット Download PDFInfo
- Publication number
- JP5209990B2 JP5209990B2 JP2008049242A JP2008049242A JP5209990B2 JP 5209990 B2 JP5209990 B2 JP 5209990B2 JP 2008049242 A JP2008049242 A JP 2008049242A JP 2008049242 A JP2008049242 A JP 2008049242A JP 5209990 B2 JP5209990 B2 JP 5209990B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- reagent
- tube container
- tube
- lid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 title claims description 73
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 69
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 6
- 239000013076 target substance Substances 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 24
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 22
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 19
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 11
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 1
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、試料の微量分析に適したチューブ容器、並びにこれを含むキットに関する。
血液、尿、糞便、唾液等の生体試料をはじめとして、食品中、環境水中等の遺伝子分析を行う際に、標的核酸を効率よく分析するために核酸増幅法が利用される。一方、分析対象となる検体から得られる核酸は少なく、ごく微量の溶液中、通常は１０μＬ単位の溶液中で核酸増幅を実施することとなる。そのため、核酸増幅反応に用いる、容量の小さい、さまざまな蓋付き反応チューブが提案されている。
蓋を容易に開閉でき、加温による容器内圧の上昇によって開放される虞が殆どなく、閉鎖された蓋が確実に保持されるように、蓋と容器開口部との嵌合性や、蓋と連結体が検討された一体型のプラスチック容器が提案されている（特許文献１）。また、蓋の開閉頻度を下げ、一度に処理できる検体数を増大させた、容器と一体型の隔壁を設けた反応チューブが提案されている（特許文献２）。さらに、前記蓋が極薄の膜を有し、蓋と容器連結部の折畳み蝶番に２個の刻み溝が設けられた、一体型反応容器が提案されている（特許文献３）。
前記反応チューブを用いて核酸増幅反応を実施する場合、予め反応チューブ内に核酸増幅反応に必要な試薬を投入することにより、試薬の調製を簡便化させることができる。特に、試薬を乾燥状態で投入することにより、冷凍設備等の多大な機器を必要とせず、簡便に核酸増幅反応を実施することが可能となる。しかし、容器内下部の反応部に直接試薬を投入して乾燥させると、減圧乾燥時の突沸による乾燥試薬の剥離が生じる。そのため、乾燥試薬を反応チューブの下部に落とす必要があるだけでなく、核酸増幅反応を迅速かつ良好に実施できず、検出が不十分となって分析精度が著しく落ちるという問題点を有していた。
また、試料溶液を用いて試薬を溶解する際の溶解速度は均一性に乏しく、安定な反応結果を得るためには試薬調製時に氷冷する必要がある。さらに、連結した反応チューブを用いて多検体の増幅反応を同時に実施する場合、最初と最後の反応チューブに試料溶液を投入する時間差が生じ、安定した反応結果を得るための障害となる。
本発明者らは、上記問題を解決するために鋭意研究を行った結果、蓋部の内面若しくは反応チューブ側部の内面において核酸増幅反応に必要な試薬を乾燥させることにより、乾燥試薬の剥離がなく、試料溶液による溶解も均一に行えることを見出した。その結果、均一な溶解速度と反応チューブ間の時間差のない反応により、安定した反応結果が得られた。
さらに、本発明者らは、乾燥状態の試薬に限らず、ガラス状態、ゲル状態若しくは溶液状態の試薬においても、蓋部の内面若しくは反応チューブ側部の内面に試薬を保持することにより、試料溶液による溶解が均一に行えることを見出した。
すなわち、本発明は以下の構成からなる。
（１）試料中の標的物質の反応及び／又は検出を行う、蓋部と反応チューブを組み合わせた密閉可能なチューブ容器で、反応部と接触しない部分に試薬を保持したチューブ容器。
（２）チューブ容器に含まれる試薬が、乾燥状態である（１）記載のチューブ容器。
（３）チューブ容器に含まれる試薬が、ガラス状態である（１）記載のチューブ容器。
（４）チューブ容器に含まれる試薬が、ゲル状態である（１）記載のチューブ容器。
（５）チューブ容器に含まれる試薬が、溶液状態である（１）記載のチューブ容器。
（６）チューブ容器に含まれる試薬が、周囲から遮断されている（１）〜（５）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（７）試薬保持・溶解部が、蓋部の内面である（１）〜（６）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（８）試薬保持・溶解部が、反応チューブ側部の内面である（１）〜（６）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（９）２個又は２個以上のチューブ容器が、連結部を介して連結している（１）〜（８）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（１０）（１）〜（９）のいずれか１項に記載の試薬を含むチューブ容器を含む、反応及び／又は検出キット。
（１）試料中の標的物質の反応及び／又は検出を行う、蓋部と反応チューブを組み合わせた密閉可能なチューブ容器で、反応部と接触しない部分に試薬を保持したチューブ容器。
（２）チューブ容器に含まれる試薬が、乾燥状態である（１）記載のチューブ容器。
（３）チューブ容器に含まれる試薬が、ガラス状態である（１）記載のチューブ容器。
（４）チューブ容器に含まれる試薬が、ゲル状態である（１）記載のチューブ容器。
（５）チューブ容器に含まれる試薬が、溶液状態である（１）記載のチューブ容器。
（６）チューブ容器に含まれる試薬が、周囲から遮断されている（１）〜（５）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（７）試薬保持・溶解部が、蓋部の内面である（１）〜（６）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（８）試薬保持・溶解部が、反応チューブ側部の内面である（１）〜（６）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（９）２個又は２個以上のチューブ容器が、連結部を介して連結している（１）〜（８）のいずれか１項に記載のチューブ容器。
（１０）（１）〜（９）のいずれか１項に記載の試薬を含むチューブ容器を含む、反応及び／又は検出キット。
容器内下部の反応部において増幅反応に必要な試薬を乾燥させることに比較して、蓋部の内面若しくは反応チューブ側部の内面において乾燥させることは、円滑に試薬の乾燥が行われ、乾燥試薬の剥離をなくすことを可能にする。
また、本発明のチューブ容器は、蓋部の内面若しくは反応チューブ側部の内面に増幅反応に必要な乾燥状態、ガラス状態、ゲル状態若しくは溶液状態の試薬を保持することにより、試料溶液を反応容器に注入し、蓋部により密封した後に、転倒若しくは横転し、試料溶液を用いて試薬を溶解する。この方法を用いることにより、試料溶液による試薬の溶解が速やかに行われる。
さらに、連結したチューブ容器を用いて多検体の増幅反応を同時に実施する際に、全ての試料溶液を反応チューブに注入し、蓋部により密封した後に、転倒若しくは横転し、試料溶液を用いて試薬を溶解する。この方法を用いることにより、試薬が瞬時にかつ均一に溶解でき、全ての検体の反応が、遅滞なく同時に行われるため、安定した増幅反応結果が得られる。
本発明は、反応チューブと、その上面の開口部を密閉する蓋部を組み合わせたチューブ容器に基づく。すなわち、予めチューブ容器内に核酸増幅反応に必要な試薬を乾燥状態、ガラス状態、ゲル状態若しくは溶液状態で保持することにより、試料溶液を投入するだけで簡単に反応液の調製を行なうことができる。
しかし、試料溶液を投入する際に乾燥状態、ガラス状態、ゲル状態若しくは溶液状態で保持されている試薬と試料溶液が接触すると、試薬の溶解が始まり、反応液の均一な調製に支障を来たす虞がある。それゆえ、試薬を乾燥状態、ガラス状態、ゲル状態若しくは溶液状態で保持する部位として、反応チューブの下部を避けることが、安定した増幅反応結果を得るための必要条件となる。
上記条件を満たす第一の態様としては、乾燥状態の試薬をチューブ容器の蓋部の内面に保持することがある。具体的には、図１に示すとおり、チューブ容器の蓋部に核酸増幅反応に必要な試薬を注入し、風乾、減圧乾燥、凍結乾燥等を用いて乾燥させることによって完成する。
上記条件を満たす第二の態様としては、乾燥状態の試薬をチューブ容器の反応チューブ側部の内面に凹部を設け、そこに保持することがある。具体的には、図２に示すとおり、チューブ容器の反応チューブ側部の内面に凹部に核酸増幅反応に必要な試薬を注入し、風乾、減圧乾燥、凍結乾燥等を用いて乾燥させることによって完成する。
ガラス状態、ゲル状態又は溶液状態の試薬の場合も、同様の位置に試薬を保持することによって完成する。また、試薬の保持、安定性を高めるため、必要に応じて薄膜を用いて試薬を被覆することもある。
試料溶液を用いて核酸増幅反応を開始するとき、上記第一の態様のようにチューブ容器の蓋部の内面で試薬を保持している場合には、反応チューブに試料溶液を注入し、蓋部を用いて反応チューブ上面の開口部を密閉した後にチューブ容器を転倒させて、試料溶液と保持試薬を接触させることにより、反応液が復元されて調製が完成する。図３に具体的な工程を示す。
上記第二の態様のようにチューブ容器の反応チューブ側部の内面で試薬を保持する場合には、反応チューブに試料溶液を注入し、蓋部を用いて反応チューブ上面の開口部を密閉した後にチューブ容器を横転させて、試料溶液と保持試薬を接触させることにより、反応液が復元されて調製が完成する。図４に具体的な工程を示す。
以下に簡易な核酸増幅法であるＬＡＭＰ法を例に挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。なお、反応試薬中の成分のＦＩＰ、ＢＩＰ、ＬＰＦ、ＬＰＢ、Ｆ３及びＢ３は、ＬＡＭＰ法に用いるプライマーを示す。
１．実施例
反応試薬（１４ｍＭ ｄＮＴＰｓ、４μＭ ＦＩＰ、４μＭ ＢＩＰ、２μＭ ＬＰＦ、２μＭ ＬＰＢ、０．５μＭ Ｆ３、０．５μＭ Ｂ３、６２．５μＭ Ｃａｌｃｅｉｎ、１．２５ｍＭ ＭｎＣｌ２、４０Ｕ Ｂｓｔ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）を調製する。調製した反応試薬を蓋部の内面に１０μＬずつ分注する。分注した反応試薬が蓋部よりこぼれ出ないように置き、減圧乾燥を実施した。
反応試薬（１４ｍＭ ｄＮＴＰｓ、４μＭ ＦＩＰ、４μＭ ＢＩＰ、２μＭ ＬＰＦ、２μＭ ＬＰＢ、０．５μＭ Ｆ３、０．５μＭ Ｂ３、６２．５μＭ Ｃａｌｃｅｉｎ、１．２５ｍＭ ＭｎＣｌ２、４０Ｕ Ｂｓｔ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）を調製する。調製した反応試薬を蓋部の内面に１０μＬずつ分注する。分注した反応試薬が蓋部よりこぼれ出ないように置き、減圧乾燥を実施した。
２．比較例
実施例と同様に調製した反応試薬を反応チューブの下部に１０μＬずつ分注する。チューブ容器を立てておき、実施例と同様に減圧乾燥を実施した。
実施例と同様に調製した反応試薬を反応チューブの下部に１０μＬずつ分注する。チューブ容器を立てておき、実施例と同様に減圧乾燥を実施した。
３．減圧乾燥後の乾燥試薬
比較例では、減圧乾燥時に突沸が生じ、試薬の内壁からの剥離が１２例中１例に認められた。一方、実施例では、減圧乾燥時の乾燥面積が増大したことにより突沸が生じなくなり、１２例全てに試薬の全剥離並びに一部剥離は認められなかった。
比較例では、減圧乾燥時に突沸が生じ、試薬の内壁からの剥離が１２例中１例に認められた。一方、実施例では、減圧乾燥時の乾燥面積が増大したことにより突沸が生じなくなり、１２例全てに試薬の全剥離並びに一部剥離は認められなかった。
核酸増幅用のチューブ容器内の反応部と接触しない部分の試薬保持・溶解部に、核酸増幅に必要な試薬を予め担持させることにより、試料溶液中の対象核酸の核酸増幅を容易に行うことができる。また、チューブ容器を連結させることにより、多検体の核酸増幅を、均一な条件で実施することができる。
Claims (9)
- 試料中の標的物質の反応及び／又は検出を行う、蓋部と反応チューブを組み合わせた密閉可能なチューブ容器で、反応部と接触しない部分に試薬を保持し、反応部に試料溶液を注入した後に蓋を閉じて密封し、転倒若しくは横転し、試料溶液を用いて試薬を溶解することが出来るチューブ容器。
- チューブ容器に含まれる試薬が、乾燥状態である請求項１記載のチューブ容器。
- チューブ容器に含まれる試薬が、ガラス状態である請求項１記載のチューブ容器。
- チューブ容器に含まれる試薬が、ゲル状態である請求項１記載のチューブ容器。
- チューブ容器に含まれる試薬が、周囲から遮断されている請求項１〜４のいずれか１項に記載のチューブ容器。
- 試薬保持・溶解部が、蓋部の内面である請求項１〜５のいずれか１項に記載のチューブ容器。
- 試薬保持・溶解部が、反応チューブ側部の内面である請求項１〜５のいずれか１項に記載のチューブ容器。
- ２個又は２個以上のチューブ容器が、連結部を介して連結している請求項１〜７のいずれか１項に記載のチューブ容器。
- 請求項１〜８のいずれか１項に記載の試薬を含むチューブ容器を含む、反応及び／又は検出キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2008049242A JP5209990B2 (ja) | 2008-02-29 | 2008-02-29 | 反応及び／又は検出容器、並びにこれを含む反応及び／又は検出キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2008049242A JP5209990B2 (ja) | 2008-02-29 | 2008-02-29 | 反応及び／又は検出容器、並びにこれを含む反応及び／又は検出キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2009201458A JP2009201458A (ja) | 2009-09-10 |
| JP5209990B2 true JP5209990B2 (ja) | 2013-06-12 |
Family
ID=41144340
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008049242A Active JP5209990B2 (ja) | 2008-02-29 | 2008-02-29 | 反応及び／又は検出容器、並びにこれを含む反応及び／又は検出キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5209990B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9208914B2 (en) | 2009-11-05 | 2015-12-08 | Holtec International | System, method and apparatus for providing additional radiation shielding to high level radioactive materials |
| JP2016209782A (ja) * | 2015-04-30 | 2016-12-15 | 栄研化学株式会社 | 遠心機ローター、遠心機、および、遠心機使用方法 |
| JP2016221476A (ja) * | 2015-06-02 | 2016-12-28 | メディカテック株式会社 | 遠心機 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012121225A1 (ja) | 2011-03-04 | 2012-09-13 | 株式会社カネカ | 核酸の検出方法及びその方法に用いるデバイス、キット |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5599660A (en) * | 1993-01-19 | 1997-02-04 | Pharmacia Biotech Inc. | Method and preparation for sequential delivery of wax-embedded, inactivated biological and chemical reagents |
| US5795748A (en) * | 1996-09-26 | 1998-08-18 | Becton Dickinson And Company | DNA microwell device and method |
| BR9704709A (pt) * | 1996-09-26 | 1998-12-29 | Becton Dickinson Co | Cavidade de amostra coberta para uso em ensaios de ácido nucleico e imunoensaios |
| US20060194207A1 (en) * | 2003-07-30 | 2006-08-31 | Riken | Kit for detecting nucleic acids |
| FI20040768A0 (fi) * | 2004-06-04 | 2004-06-04 | Teemu Korpimaeki | Menetelmä määritysreagenssien stabiloimiseksi, stabilisoituja määritysreagensseja sisältävä reagenssisäiliö ja sen käyttö |
| KR20070091656A (ko) * | 2004-12-16 | 2007-09-11 | 세페이드 | 다단계 처리를 수행하기 위한 베슬용 캡 및 다단계 처리방법 |
-
2008
- 2008-02-29 JP JP2008049242A patent/JP5209990B2/ja active Active
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9208914B2 (en) | 2009-11-05 | 2015-12-08 | Holtec International | System, method and apparatus for providing additional radiation shielding to high level radioactive materials |
| JP2016209782A (ja) * | 2015-04-30 | 2016-12-15 | 栄研化学株式会社 | 遠心機ローター、遠心機、および、遠心機使用方法 |
| JP2016221476A (ja) * | 2015-06-02 | 2016-12-28 | メディカテック株式会社 | 遠心機 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2009201458A (ja) | 2009-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7001225B2 (ja) | アッセイ装置 | |
| Hirs | [35] Detection of peptides by chemical methods | |
| EP3754011B1 (en) | Devices for sample collection, stabilization and preservation | |
| KR101954218B1 (ko) | 신속한 핵산 추출 방법 및 장치 | |
| US8911941B2 (en) | Methods and apparatus for point-of-care nucleic acid amplification and detection | |
| JP5209990B2 (ja) | 反応及び／又は検出容器、並びにこれを含む反応及び／又は検出キット | |
| US20080206751A1 (en) | Method For Carrying Out A Multi-Step Reaction, Breakable Container For Storing Reagents And Method For Transferring Solid Reagent Using An Electrostatically Charged Wand | |
| US20210115915A1 (en) | Two-way pump selectable valve and bypass waste channel | |
| US20050014273A1 (en) | Method and device for preparing a sample of biological origin in order to determine at least one constituent contained therein | |
| CN113150965B (zh) | 一种防污染检测管和基于其的crispr分子诊断检测方法 | |
| WO2016105508A2 (en) | Devices and methods for autonomous measurements | |
| JP2014500509A (ja) | 少なくとも１つの検体溶液を少なくとも１つの試薬と混合する方法及び器具 | |
| WO1997046318A1 (fr) | Carte d'analyse a usage unique comprenant un conduit d'ecoulement de liquides | |
| EP2729068B1 (en) | Coagulation controlling agents and devices comprising the same | |
| WO2023138148A1 (zh) | 一种应用于快速检测的密封装置及其使用方法、应用 | |
| EP3302802B1 (en) | Sample processing devices, and methods of use thereof | |
| CN109420531B (zh) | 微流控芯片及其试剂的储存和释放方法 | |
| US20170234783A1 (en) | Biological substance extraction device and biological substance extraction apparatus | |
| US9304066B2 (en) | Fluidically integrated rotary bead beader | |
| US20170291171A1 (en) | Substance purification device and cartridge | |
| WO2018204127A1 (en) | Device and method for extracting nucleic acids from biological sample materials with solvent-free reagents | |
| EP3630355B1 (en) | Modified sample processing tubule | |
| JP2019062828A (ja) | ターゲット分析キットおよびターゲット分析方法 | |
| US11345097B2 (en) | Method of making a frangible seal in a sample processing device | |
| CN117025379A (zh) | 一种rapid恒温扩增核酸检测装置以及检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110225 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20120229 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120626 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120824 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120924 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20121219 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20121227 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130213 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130222 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20160301 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Ref document number: 5209990 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20160301 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |