JP5199116B2 - 反射モードで動作するルミネス・センサ - Google Patents
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Description
結合された目的物質の量の検出は、散乱、発光団の脱色、基質の背景発光や、励起光の不完全な除去などのいくつかの要因によって妨げられ得る。更に、結合されたラベルと、溶液内のラベルとを区別できるために、1つ又は複数の洗い出し工程を行って、結合されていないラベルを除去することが必要である。
媒質で充填される少なくとも1つの開口部と、
少なくとも1つの開口部に存在している光学的に可変な少なくとも1つの分子と、
光学的に可変な分子を励起するために励起放射で少なくとも1つの開口部を照射する励起放射源と、
光学的に可変な少なくとも1つの分子によって生成される発光を検出する検出器とを備え、
少なくとも1つの開口部は、媒質における励起放射の回折限度よりも大きな第1の水平方向寸法、及び、媒質における励起放射の回折限度よりも低い第2の水平方向寸法を有し、励起放射源及び検出器は、センサの同じ側において配置される。
少なくとも1つの開口部の前方側に配置された励起放射源から放出される励起放射により、少なくとも1つの光学的に可変な分子を励起する工程と、
励起された少なくとも1つの光学的に可変な分子によって生成される発光を検出する工程とを含み、
少なくとも1つの開口部は、開口部が充填される媒質における励起放射の回折限度よりも大きな第1の水平方向寸法、及び開口部が充填される媒質における励起放射の回折限度を下回る第2の水平方向寸法を有する。方法は、励起放射源が配置される、センサの同じ側で発光を検出する工程を更に含む。
1)目的物質の分子は、常に発光(例えば、蛍光)する光学的に可変な分子でラベリングされる。結合された前述の分子は目に見えるようになり得る一方、他の光学的に可変な分子は全て、洗い出すことが可能である。
2)目的物質の分子は、基質に付着した分子に結合される場合にのみ発光(例えば、蛍光)するマーカ分子でラベリングされる。そのようにして、ドナー・アクセプタ対が形成される。この場合、洗い出し工程を用いてストリンジェンシを得る。結合が弱い分子は洗い出されるからである。
3)基質に付着した分子は、目的物質の分子が結合すると発光(例えば、蛍光)する。やはり、洗い出しを用いてストリンジェンシを得る。結合が弱い分子は洗い出されるからである。
2Dサブ回折限度開口部(すなわち、両方の水平方向においてサブ回折限度寸法を有する開口部1)に基づいたバイオセンサは、本発明によるセンサ10よりもかなり悪い、発光(例えば、蛍光放射5)の透過度を有するからである。これは、開口部1内に生成される発光5(例えば、蛍光放射)が、かなり抑制されたエバネッッセント場にのみ結合することが可能であるからである。
1. 上記開口部を通るTM偏光励起光の透過度はTE偏光の場合よりもかなり大きい(図3参照)。
2. TM偏光光の強度パターンは定在波(y方向における干渉パターン)のようにみえる(図4参照)。
3. (TM偏光の場合の)定在波パターンは、より高い深度の場合も存在している(図4参照。曲線18乃至20の比較。全て、TM偏光放射の場合であるが、スリット1の深度dが異なる場合である)
と結論付けることが可能である。深度dを増加させると(曲線18乃至20)、励起放射(例えば、光)は、スリット1の出力になお存在しており(y=d)、スリット1の中により深く入っている位置yの場合、あまり減衰しない。
4. スリット1の深度dに依存するある種の共鳴作用(図4、特に曲線19参照)が存在しているように思われる。
1)ノッチ・フィルタ。励起放射3(例えば、励起光)の波長周りの十分に狭い帯域を抑制し、励起放射3(例えば、励起光)を事実上ほぼ完全に除去する一方で、発光5(例えば、蛍光放射)は事実上フィルタリングされない。大半の場合、発光(例えば、蛍光放射5)が最大である波長は、励起放射3(例えば、励起光)の波長と異なり、発光5(例えば、蛍光放射)の波長帯域は、一般に、励起放射源の帯域よりもかなり大きいからである。
2)代替策として帯域通過フィルタを使用することが可能である。帯域通過フィルタは、励起放射3(例えば、励起光)を事実上抑制する一方で発光(例えば、蛍光放射5)を透過する。
3)同様な議論に基づいて、高域通過フィルタは、発光5(例えば、蛍光放射)が事実上、励起放射3(例えば、励起光)の波長よりも大きな波長の場合に生じる場合にも使用することができるか、又は、低域通過フィルタは、発光5(例えば、蛍光放射)が事実上、より小さな波長の場合に生じる場合に使用することが可能である。後者は、例えば、第2高調波の生成の場合にあてはまり得る。
4)合成した反射励起放射3(励起光)及び発光5(例えば、蛍光放射)をスペクトル分解する分光計を使用することも可能である。
Exp(−α*d) (2) 透過モードでの検出、dは開口部1の深度である。
これは、反射モードでの組み合わせた効率が、距離y<d/2での発光団2(例えば、蛍光団)の場合、透過モードでの組み合わせた効率よりも良いことを示している。更に、透過モードでの効率は、発光団2(例えば、蛍光団)の距離yと無関係であり、よって、y<d/2の場合の効率は、y>d/2の場合の効率よりも大きい。平均的に、発光団2(例えば、蛍光団)の位置yが開口部1の深度dにわたって正規分布している場合、反射モードでの効率は透過モードでの効率よりも良い。前述のセンサの組み合わせた効率が、開口部1内の光学的に可変な分子の位置のみに依存する訳でないからである。
Claims (15)
- ルミネス・センサであって、
媒質で充填される少なくとも1つの開口部と、
前記少なくとも1つの開口部に存在している光学的に可変な少なくとも1つの分子と、
前記少なくとも1つの開口部の前方側に配置され、前記開口部において生成されるエバネッセント場により、前記光学的に可変な少なくとも1つの分子を励起するためにTE偏光励起放射で前記少なくとも1つの開口部を照射する励起放射源であって、前記励起放射が、前記少なくとも1つの開口部において抑制される励起放射源と、
前記励起放射源と同じ、前記少なくとも1つの開口部の前方側に配置され、前記光学的に可変な少なくとも1つの分子によって生成される発光を検出する検出器とを備え、
前記少なくとも1つの開口部は、金属において形成され、前記媒質における前記励起放射の回折限度よりも大きな第1の水平方向寸法を有し、前記媒質における前記励起放射の回折限度よりも低い第2の水平方向寸法を有するルミネス・センサ。 - 請求項1記載のルミネス・センサであって、前記第2の水平方向寸法が、前記媒質における前記励起放射の回折限度の80%よりも小さいルミネス・センサ。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、前記第1の水平方向寸法は、前記光学的に可変な分子から放出される放射の波長よりも大きいルミネス・センサ。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、前記少なくとも1つの開口部は内表面壁を備え、リガンドが、前記少なくとも1つの開口部の前記内表面壁上に固定化されるルミネス・センサ。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、開口部アレイを備えるルミネス・センサ。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、前記少なくとも1つの開口部がスリット又は楕円体開口部であるルミネス・センサ。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、前記開口部の前方側と、前記検出器との間に波長フィルタを更に備え、前記波長フィルタは反射励起放射を抑制するルミネス・センサ。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、前記検出器がCCD又はCMOS検出器であるルミネス・センサ。
- ルミネス・バイオセンサである、請求項1記載のルミネス・センサ。
- 前記ルミネス・バイオセンサが蛍光バイオセンサである、請求項9記載のルミネス・センサ。
- センサの少なくとも1つの開口部に存在している光学的に可変な少なくとも1つの分子によって生成される発光を検出する方法であって、前記少なくとも1つの開口部は媒質で充填され、
前記少なくとも1つの開口部の前方側において配置された励起放射源から放出されるTE偏光励起放射による、前記少なくとも1つの開口部の照射により、前記開口部において生成されるエバネッセント場によって前記光学的に可変な少なくとも1つの分子を前記開口部において励起する工程と、
前記励起された光学的に可変な少なくとも1つの分子によって前記開口部から生成される発光を検出する工程とを備え、
前記少なくとも1つの開口部は、金属において形成され、前記媒質における前記励起放射の回折限度よりも大きな第1の水平方向寸法を有し、前記媒質における前記励起放射の回折限度を下回る第2の水平方向寸法を有し、
前記励起放射源と同じ、前記少なくとも1つの開口部の前方側に配置された発光検出器により、前記発光を検出する工程を更に備える方法。 - 請求項11記載の方法であって、前記第2の水平方向寸法は、前記媒質における前記励起放射の回折限度の80%よりも小さい方法。
- 請求項11記載の方法であって、前記少なくとも1つの開口部は内表面壁を備え、前記少なくとも1つの開口部の前記内表面壁にリガンドを固定化する方法。
- 請求項1記載のルミネス・センサであって、透明性基質を更に備え、前記少なくとも1つの開口部が形成される非透明性材質が前記透明性基質の上に堆積されるルミネス・センサ。
- 請求項11記載の方法であって、前記少なくとも1つの開口部が形成される非透明性材質が透明性基質の上に堆積される方法。
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