JP5122147B2

JP5122147B2 - 抗酸化作用を有する２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド

Info

Publication number: JP5122147B2
Application number: JP2007007029A
Authority: JP
Inventors: 大樹本間; 素行田頭; 智正神田
Original assignee: Asahi Group Holdings Ltd
Current assignee: Asahi Group Holdings Ltd
Priority date: 2007-01-16
Filing date: 2007-01-16
Publication date: 2013-01-16
Anticipated expiration: 2027-01-16
Also published as: JP2008174457A

Description

本発明は、抗酸化作用を有し、成人病、悪性関節リウマチなど、健康維持上障害となる諸疾患、火傷などの外傷、にきび、しみなどの美容上の障害の予防、治療に効果を医薬品、化粧品、飲食品となり、劣化防止剤となる抗酸化作用を有する新規な２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを提供する。

活性酸素や不飽和脂質から生成する過酸化脂質が、老化や成人病、難病の発症といった生体への悪影響を及ぼすことが近年明らかとなっており、活性酸素消去作用や過酸化脂質の生成抑制作用を有する、いわゆる抗酸化物質の探索や、動脈硬化症、高脂血症、それらにより発症する脳梗塞、悪性リウマチ、ベーチェット病、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝炎、胃炎、パーキンソン病などの難病、農薬などの化学物質により惹起される疾患、光線過敏症、放射線障害等に対する治療薬としてのそれらの応用が一部で試みられている。また、活性酸素や過酸化脂質はしみ、そばかす、にきび、皮膚潰瘍などの成員にもなる他、食品を劣化させ嗜好的品質や栄養の低下を引き起こすことも知られてきているが、いまだにこれらの問題を十分に解決しうる物質が見出されていないのが現状である。

抗酸化化合物としては、例えば、ビタミンＣ（アスコルビン酸）などの水溶性抗酸化化合物、ビタミンＥ（α−トコフェノール）などの脂溶性抗酸化化合物、ＢＨＡ（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール）などの合成化合物が知られている。しかし、合成化合物ＢＨＡは発ガン性が報告されており、安全性の面から考えると原料として食品素材からの成分を摂取するほうが望ましい。有用な抗酸化剤が発明された場合、それは医薬品、化粧品、健康食品、食品添加物などとして利用価値のあるものである。

本発明者らは、天然物由来で抗酸化作用を有する化合物を探索し、ホップを由来とする新規な２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが優れた抗酸化作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

なお、特許文献１、非特許文献１〜３に各種のフロロアシルフェノン配糖体が開示されているが、本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドとは構造を異にするものである。
WO 2006/093202号パンフレット J. Nat. Prod. 2005, 68, 1545-1548 Chinese Chemical Letters Vol. 15, No. 3, pp313-315, 2004 Planta Med 2004: 70: 1128-1134

本発明は、以下に係わるものである。
（１）化学式［１］

で表されることを特徴とする２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド又は薬学的に許容されるその塩。
（２）アサ科カラハナソウ属の植物から得られることを特徴とする（１）記載の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド。
（３）アサ科カラハナソウ属の植物がホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）である（２）記載の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド。
（４）（１）記載の化合物を有効成分とする抗酸化剤。
（５）（１）記載の化合物を有効成分とする医薬品。
（６）（１）記載の化合物を有効成分とする化粧品。
（７）（１）記載の化合物を有効成分とする飲食品。

本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド又は薬学的に許容されるその塩を含有する医薬品、化粧品、飲食品は、抗酸化作用を有するので、生体内に生成した活性酸素や過酸化脂質によって引き起こされる障害を抑制する効果を有する。従って、健康上の障害、美容上の障害の予防、治療に有効であり、また飲食品の安定化、保存性の向上に有用である。産業的に価値のあるものである。

本発明者らは、ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）より、前記一般式［１］で表される新規な２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを単離し、それに強い抗酸化活性を有することを見出し、本発明を完成した。

ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）から２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを単離する方法としては、例えばＷＯ２００４／０５２８９８号パンフレットに記載された公知方法により抽出すればよい。

本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを医薬品、飲食品、化粧品として用いる場合、有利の形で用いることができるほか、薬学的に許容される塩の形で使用することもできる。

薬学的に許容される塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のようなアルカリ土類金属塩、鉄塩、銅塩のような遷移金属塩、アンモニウム塩、エチルアミン類、トリエチルアミン類、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、ジメチルアミノエタノール、アルギニン塩またはエチレンジアミン塩等のようなアミン塩が挙げられる。

これらの塩は、通常の手段で生成させることができ、例えば、塩が不溶な溶媒または溶質中で、あるいは真空乾燥又は凍結乾燥によって除去できる水のような溶媒中で、有利のフェノール酸の形にある本発明の化合物を１等量またはそれ以上の適当な塩基と反応させるか、適当なイオン交換樹脂にて、現存の塩のイオンを他のイオンに交換することにより生成させることができる。

または、本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド又はその薬学的に許容される塩は一般に使用される担体、助剤、添加剤等とともに製剤化することができ、定法に従って経口、非経口の製品として、医薬品、医薬部外品、化粧品等の分野で利用することができる。または食品素材として、混合して飲食品とすることができる。

医薬品は経口剤として錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤等が、非経口剤として軟膏剤、クリーム、水剤等の外用剤、無菌溶液剤や懸濁剤等の注射剤等がある。これらの製品を医薬として疾患に投与するときは、２ｍｇ〜５００ｍｇを１日に１ないし数回、すなわち２ｍｇ〜１０００ｍｇの全日量で投与し、十分にその効果を奏し得るものである。

本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドまたはその薬学的に許容される塩は、生理学的に認められるベヒクル、担体、賦形剤、結合剤、安定剤、香味剤等とともに要求される単位容量をとり得る。錠剤、カプセル剤に混和される佐薬は次のようなものである。トラガントゴム、アラビアゴム、コンスターチ、ゼラチンのような結合剤、微晶性セルロースのような賦形剤、コンスターチ、前ゼラチン化澱粉、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ショ糖、乳糖、サッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油、チェリーのような香味剤など。また、カプセル剤の混合は上記の材料に更に油脂のような液体担体を含有することができ、また、他の材料は被覆剤として、又は製剤の物理的形態を別な方法で変化させるために存在させることができる。例えば、錠剤はシェラック、砂糖で被覆することができる。シロップ又はエリキシルは活性化合物、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチル又はプロピルパラベン、色素およびチェリー又はオレンジ香味のような香味剤を含有することができる。

注射剤のための無菌組成物は、注射用水のようなベヒクル中の活性物質、ごま油、ヤシ油、落花生油、綿実油のような天然産出植物油、またはエチルオレートのような合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の方法によって処方することができる。または、緩衝材、防腐剤、酸化防止剤等を必要により配合することができる。

外用剤としては基剤として、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴール等を用い、通常の方法によって、軟膏剤、クリーム剤等とする。

本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド又は薬学的に許容されるその塩を添加した飲食品は、上記製剤の形態でもよいが、あめ、せんべい、クッキー、ジュースなどの形態でそれぞれの食品原料に所用量を加えて、一般の製造法により加工製造する。健康食品、機能性食品としての摂取は、病気予防、健康維持に用いられるので、経口摂取として１日数回に分けて、全日量として５ｍｇ〜５００ｍｇを含む加工品として摂取される。

また本発明の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、ビタミンＣ、ビタミンＥ、補酵素Ｑｎなどの抗酸化活性を有する化合物と併用することができる。また、これらの物質は、本飲食品の安定化剤としても作用を有し、併用することが有用である。これの抗酸化物質は常用量以下で添加される。
実施例
以下実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。

２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドの精製
ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）から得られる苞（以下、ホップ苞という）より既知の文献（ＷＯ２００４／０５２８９８号パンフレット）の方法に従い、ホップ苞ポリフェノール画分を調製した。すなわち、得られたホップ苞を５０％エタノールで５０℃、１０時間の条件で抽出し、遠心分離で沈殿を除去し、上清を減圧濃縮した。得られた抽出物を水に再溶解し、合成樹脂ＳＥＰＡＢＥＡＤＳＳＰ８５０ (三菱化学株式会社)を詰めたカラムに供し、水洗後、５０％エタノールで溶出した。この画分をスプレードライし、得られた茶色の粉末をホップ苞ポリフェノール画分とした。ホップ苞ポリフェノール画分１５０ｇを蒸留水３５０ｍｌに溶解し、ヘキサン３５０ｍｌで３回、続いて残った水層をジエチルエーテル３５０ｍｌで３回それぞれ溶媒分画した。次いで水画分を減圧、凍結乾燥することにより粉末化した。得られた粉末をＳＥＰＡＢＥＡＤＳＳＰ８５０樹脂カラム（三菱化学株式会社）にアプライし、水、２５％エタノール、５０％エタノールで段階的に溶出した。２５％エタノール画分を減圧濃縮、凍結乾燥した。残渣２．６ｇを下記の条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供し、６０分のピークを分取精製した。
ＨＰＬＣ条件
カラム：ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−３（φ２０×２５０ｍｍ、ＧＬｓｃｉｅｎｃｅｓ）
流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：Ａ液０．１％ギ酸水溶液、Ｂ液アセトニトリル：０．１％ギ酸水溶液＝１：１０→７０ｍｉｎ：９０％Ａ→７０％Ａ
検出：ＵＶ２８０ｎｍ

凍結乾燥して２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド９．２８ｍｇを淡黄色の粉末として得た。

２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドの分子式と構造決定
精製した化合物の分子式をＴＯＦ−ＭＳ（飛行時間型質量分析）を用い、構造式をＮＭＲ（核磁気共鳴）を用いて決定した。

ＴＯＦ−ＭＳ測定
「ＵＰＬＣ／ＴＯＦ−ＭＳ条件」
ＨＰＬＣ：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ（ウォーターズ）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８（５０×２．１ＭＭ、１．７μｍ：ウォーターズ）
移動相：Ａ液−メタノールＢ液−０．１（Ｖ／Ｖ）％ギ酸水溶液
１０（Ｖ／Ｖ）Ａ液（０ｍｉｎ） → ５０（Ｖ／Ｖ）Ａ液（５ｍｉｎ）
流速：０．６ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
注入量：５μｌ
検出器：ＬＣＴＰｒｅｍｉｅｒ（ウォーターズ）
イオン源：ＥＳＩ（ポジティブ、ネガティブ）、
コーン電圧：３０Ｖ
キャピラリー電圧：２５００Ｖ
イオン源温度：１２０℃
デソルベーション温度：３００℃
ＭＳスキャン：ｍ／ｚ１００−１０００
ポジティブイオンモードの測定で、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５２１、ネガティブイオンモードの測定で［Ｍ−Ｈ］⁻＝５１９のシグナルが観測されたことから、整数分子量を５２０と決定した。また、高分解能質量分析の結果より、分子式をＣ_２２Ｈ_３２０_１４と決定した。

ＮＭＲ測定
精製した化合物をＣＤ３ＯＤに溶解した。ＮＭＲ測定にはＸＷＩＮ−ＮＭＲＡＶ６００（ＢｒｕｋｅｒＢｉｏｓｐｉｎ）を用い、各種ＮＭＲスペクトル（１Ｈ，１３Ｃ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ）を測定した。表１に測定結果を示した。その結果、化合物を２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（以下、ＭＰＯＧと略する場合がある）と決定した。

（抗酸化活性測定）
ＤＰＰＨラジカル消去活性

既知のアシルフロログルシノール一配糖体２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化２）、新規化合物ＭＰＯＧについて、ＤＰＰＨ（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル）ラジカル消去活性を測定した。すなわち、９６ウエルプレート中でサンプルの希釈系列を作製し、１ウエル１００μｌ）、７５０μＭＤＰＰＨ溶液（５０％メタノール溶液）１００μｌを加え、室温で３０分間放置した後に５５０ｎｍでの吸光度を測定した。吸光度を半減させる供試物質の最終濃度（ＩＣ_５０）を求め、これを抗酸化活性の指標とした。その結果を図１に示した。ＭＰＯＧは２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドよりも強い活性を示した。（ＩＣ_５０はそれぞれ０．１０ｍＭ、１．０１ｍＭ）。

これらの結果から、抗酸化作用の高い新規なアシルフロログルシノール二糖配糖体を取得できたことが明らかとなった。

（錠剤、カプセル剤）
実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）１０％
乳糖７５％
ステアリン酸マグネシウム１５％
上記の成分を均一に混合し、錠剤およびカプセル剤とした。

（散剤、顆粒剤）
実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）２０％
澱粉３０％
乳糖５０％
上記の成分を均一に混合し、散剤および顆粒剤とした。

（注射剤）
実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）１％
界面活性剤９％
生理食塩水９０％
上記の成分を加熱混合し、滅菌して注射剤とした。

（クッキー）
実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）を２重量％を含む小麦粉に、食塩、ショ糖、バターなどで味付けしたものを適量の水でよく攪拌し、１９０〜２００℃で３０分間焼き上げてクッキーとした。

（ゼリー）
寒天１３ｇを水１リットルに加熱溶解し、さらにショ糖５００ｇ、水飴１５０ｇ及び塩少々を加え、攪拌しながら加熱溶解させた後、２重量％の実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）、果汁、着色料、香料などを加えて冷却し、ゼリーとした。

（あめ）
ショ糖２０重量部、水飴（７５％固形分）１０量部に水１０量部を加え混合し、１５０℃に加熱攪拌後、２重量％の実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）および着色料、香料などを加え、冷却してあめとした。

（ハンドローション剤）
カーボンワックス１５００を１５重量部、アルコール８重量部およびプロピレングリコール９０重量部をよく混合溶解し、水５２．５重量部、実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）２重量部および香料、防腐剤を適量加え、ハンドローション剤とした。

（外用剤）
パラオキシ安息香酸エチル０．１％、パラオキシ安息香酸ブチル０．１％、ラウロマクロゴール０．５％、セタノール１８％、白色ワセリン４０％、水３７．３％、実施例１で得られた化合物（ＭＰＯＧ）４％を混合し、定法に従って軟膏とした。

本発明により、抗酸化作用を有したホップ由来新規化合物を提供することができる。抗酸化作用を有するので、生体内に生成した活性酸素や過酸化脂質によって引き起こされる障害を抑制する効果を有する。従って、健康上の障害、美容上の障害の予防、治療に有効であり、医薬品、飲食品、化粧品に応用、加工ができる。

ＤＤＰＨアッセイの結果を示すグラフ。

Claims

化学式［１］
で表されることを特徴とする２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド又は薬学的に許容されるその塩。
アサ科カラハナソウ属の植物から得られることを特徴とする請求項１記載の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド。
アサ科カラハナソウ属の植物がホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）である請求項２記載の２−（２−メチルプロパノイル）フロログルシノール−１，５−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド。
請求項１記載の化合物を有効成分とする抗酸化剤。
単離された請求項１記載の化合物が有効成分として配合される医薬品。
単離された請求項１記載の化合物が有効成分として配合される化粧品。
単離された請求項１記載の化合物が有効成分として配合される飲食品。