JP5113044B2 - デガミングされた脂肪酸アルキルエステルの生成 - Google Patents
デガミングされた脂肪酸アルキルエステルの生成 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5113044B2 JP5113044B2 JP2008516129A JP2008516129A JP5113044B2 JP 5113044 B2 JP5113044 B2 JP 5113044B2 JP 2008516129 A JP2008516129 A JP 2008516129A JP 2008516129 A JP2008516129 A JP 2008516129A JP 5113044 B2 JP5113044 B2 JP 5113044B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fatty acid
- oil
- enzyme
- phospholipase
- aspergillus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 title claims abstract description 36
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 77
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 63
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 claims abstract description 51
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims abstract description 20
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 6
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 28
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 28
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 19
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 16
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 16
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 16
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 16
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 12
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 claims description 11
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 10
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 10
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims description 9
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 8
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 claims description 8
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 4
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 claims description 3
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 claims description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 3
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 claims description 2
- 241000146406 Fusarium heterosporum Species 0.000 claims description 2
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 claims description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 241001480052 Aspergillus japonicus Species 0.000 claims 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 claims 1
- ZOJBYZNEUISWFT-UHFFFAOYSA-N allyl isothiocyanate Chemical compound C=CCN=C=S ZOJBYZNEUISWFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000828 canola oil Substances 0.000 claims 1
- 235000019519 canola oil Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 claims 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 claims 1
- 239000010460 hemp oil Substances 0.000 claims 1
- 239000008164 mustard oil Substances 0.000 claims 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 claims 1
- 239000002641 tar oil Substances 0.000 claims 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 abstract description 42
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 abstract description 17
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 abstract description 10
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 abstract description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 74
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 15
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 description 8
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 description 8
- UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N Tributyrin Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)COC(=O)CCC UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010005400 cutinase Proteins 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 102100031415 Hepatic triacylglycerol lipase Human genes 0.000 description 3
- 241001661345 Moesziomyces antarcticus Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 3
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 3
- 238000006136 alcoholysis reaction Methods 0.000 description 3
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 3
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 3
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 3
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 2
- 241000221779 Fusarium sambucinum Species 0.000 description 2
- 241000567178 Fusarium venenatum Species 0.000 description 2
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 2
- 241000223198 Humicola Species 0.000 description 2
- 241001480714 Humicola insolens Species 0.000 description 2
- 101710098554 Lipase B Proteins 0.000 description 2
- 108020002496 Lysophospholipase Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000984201 Thermomyces lanuginosus Lipase Proteins 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 2
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- 208000015707 frontal fibrosing alopecia Diseases 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound CC1(C)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001133760 Acoelorraphe Species 0.000 description 1
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 1
- 241000892910 Aspergillus foetidus Species 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 1
- 101000775727 Bacillus amyloliquefaciens Alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 1
- 108010029675 Bacillus licheniformis alpha-amylase Proteins 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 1
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 1
- 244000188595 Brassica sinapistrum Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241001086914 Candida deformans Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 229920000832 Cutin Polymers 0.000 description 1
- 101100342470 Dictyostelium discoideum pkbA gene Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100385973 Escherichia coli (strain K12) cycA gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000567163 Fusarium cerealis Species 0.000 description 1
- 101100001650 Geobacillus stearothermophilus amyM gene Proteins 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101100295959 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) arcB gene Proteins 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N Phenylpropanol Chemical compound CCC(O)C1=CC=CC=C1 DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 1
- 101000968489 Rhizomucor miehei Lipase Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 235000005128 Sapium sebiferum Nutrition 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 241001199840 Senegalia laeta Species 0.000 description 1
- 241000187432 Streptomyces coelicolor Species 0.000 description 1
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 description 1
- 241001468239 Streptomyces murinus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 108010048241 acetamidase Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 108010045649 agarase Proteins 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 101150069003 amdS gene Proteins 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 101150008194 argB gene Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonic acid Substances OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 101150005799 dagA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000002781 deodorant agent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000002283 diesel fuel Substances 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010061330 glucan 1,4-alpha-maltohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 210000005256 gram-negative cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 101150039489 lysZ gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004308 marijuana Species 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 101150052264 xylA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150110790 xylB gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/649—Biodiesel, i.e. fatty acid alkyl esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
本発明は、デガミングされた(degummed)脂肪酸アルキルエステル、すなわち不純物、例えばリン酸脂質の含有率が低められた脂肪酸アルキルエステルの単純化された生成方法に関する。前記方法は、1つの溶液における1又は複数の脂肪分解酵素及び1又は複数のホスホリパーゼの使用による、脂肪及び油の脂肪酸アルキルエステルへの転換を包含する。
一般的に、植物又は動物脂肪及び油に起因する脂肪カルボン酸のアルキルエステルとして分類されるバイオディーゼルは、その環境的有益性のために、最近より興味あるものに成って来た。バイオディーゼルは現在、エステル交換(例えば、触媒としてNaOH及び/又はナトリウムメトキシドを用いる)により化学的に都合良く生成されるが、その開発を制限するいくつかの関連する問題、例えば遊離脂肪酸の高い含有率による油の前処理、エステル及びグリセロール相からの化学的触媒の除去、グリセロール回収の間の無機塩の除去、及びエステル交換の前、リン脂質の含有率の低減が存在する。
本発明は、脂肪酸アルキルエステル、及び低レベルの不純物、例えばリン脂肪を有する脂肪酸メチルエステル(FAME)及び脂肪酸エステルの生成方法に関する。本発明の方法は、2つの工程段階を、1つの単一工程段階に組合すことにより単純化され、そして従って、経済的に安価である。前記方法は、アルコールトリグリセリド及び/又は遊離脂肪酸、並びに1又は複数の脂肪酸酵素、及びタイプA1, A2, B及びリゾ−ホスホリパーゼから選択された1又は複数のホスホリパーゼを混合することを包含する。続いて、グリセリン、残留酵素及び加水分解されたリン脂質のほとんどを含む水性相が、非水性相からの分離され、それにより、非水性相におけるリン脂質の含有率が低められる。
本発明により生成される脂肪酸アルキルエステルは、バイオデーゼルのために独占的ではないが、しかしまた、オイル化学産業における下流工程において基本的オイル化学物質としても使用され得ることが強調される。
用語“リン低減された”とは、リン含有成分、例えばリン脂質の含有率が低められていることを意味する。非水性相における非加水分解性リン脂質が、ホスホリパーゼにより加水分解され、そして加水分解性リン脂質に転換され、次に、これは、油相から水性相に抽出される。脂肪相におけるリンの含有率は、Clausen, K in Eur. J. Lipid Sci. Technol.103 (2001 ), 333-340に記載される方法により測定される。本明細書における例によれば、それは、24時間の対応時間の後、P−値である。
本発明は、脂肪酸アルキルエステル、及び低レベルの不純物、例えばリン脂肪を有する脂肪酸メチルエステル(FAME)及び脂肪酸エステルの生成方法に関する。本発明の方法は、2つの工程段階を、1つの単一工程段階に組合すことにより単純化され、そして従って、経済的に安価である。前記方法は、アルコールトリグリセリド及び/又は遊離脂肪酸、並びに1又は複数の脂肪酸酵素、及びタイプA1, A2, B及びリゾ−ホスホリパーゼから選択された1又は複数のホスホリパーゼを混合することを包含する。続いて、グリセリン、残留酵素及び加水分解されたリン脂質のほとんどを含む水性相が、非水性相からの分離され、それにより、非水性相におけるリン脂質の含有率が低められる。
本発明に関して、用語“〜から得られる”とは、特定の微生物源に関して本明細書において使用される場合、酵素及び従って、前記酵素をコードするDNA配列が特定源により生成されることを意味する。
アスペルギラス属内の糸状菌種、例えばアスペルギラス・アワモリ、アスペルギラス・フォエチダス、アスペルギラス・ジャポニカス、アスペルギラス・ニガー、又は特にアスペルギラス・オリザエの株から得られる。
1)Tsung-Che など. (Phytopathological notes 58:1437-38 (1968))(フサリウム・ソラニからのホスホリパーゼ);及び
2)適切なF.クルモラムPL(例18を参照のこと)及び適切なF. オキシスポラムPL(例1−17を参照のこと)を開示するヨーロッパ特許出願番号97610056.0号。
3)多くの異なったアスペルギラスPL(請求項14を参照のこと)、及び特にA. オリザエからのPL(請求項17又は18)及びA. ニガーからのPL(請求項19)を開示するEP575133号;及び
4)適切なアスペルギラス調製物を開示するDE19527274A1号(例を参照のこと)。さらに、アスペルギラスホスホリパーゼを含むと思われる市販のホスホリパーゼ調製物Degomma VOD (Roehm, Germang)は、本発明の方法に使用するために適切である。好ましいホスホリパーゼは、WO00/32758号(例5)に開示されるようなサーモミセス・ラヌギノサスホスホリパーゼ変異体、及び市販の製品Lecitase(商標)Ultra (Novozymes A/S, Denmark)である。
さらに、本発明は、上記のような第1及び第2脂肪分解酵素を用いて、脂肪酸アルキルエステルを製造するためにバッチ方法及び/又は連続的な段階方法に関し、ここでアルコールが連続的に又は段階的に添加され、そして酵素は再循環されるか、又は1度のみ使用される。酵素が水性相に存在する場合、この相はデカンター、沈降タンク又は遠心分離により脂肪相から分離され得る。連続方法においては、それぞれ油及び水性の2種の相が向流的に処理され得る。Kosugi, Y; Tanaka, H. and Tomizuka, (1990), Biotechnology and Bioengineering, vol .36, 617-622は、固定されたリパーゼにより植物油を加水分解するための連続的向流工程を記載する。
トリグリセリド及び/又は脂肪酸を含んで成る基質がアルコール、好ましくはメタノール又はエタノールと共に混合され、そして逆水振盪槽(200rpm)上で30〜70℃、好ましくは約50℃に加熱される。好ましくは、水が添加され、そしてその溶液が混合され、そしてさらに、所望する温度に加熱される。酵素が添加され、そしてその溶液が激しく撹拌され、そして逆水振盪槽上に、所望する温度、好ましくは50℃及び200rpmで放置され、反応を可能にされる。反応混合物の相が高剪断ミキサー、例えば植物油の酵素的デガミングに使用されるような、Silverson又はIKA Labortechnikからのタイプの使用により混合され得る(Clausen, K. (2001), European Journal of Lipid Science and Technology, vol. 103, 333-340)。
本発明の方法はさらに、反応混合物における金属成分をキレート化し、そしてそれにより、水相における加水分解可能リン脂質の量を高める、キレート化剤の添加により最適化され得る。キレート化剤、例えばクエン酸又はエチレンジアミン四酢酸(EDTA)は、油含有率に基づいて、0.01〜1%のw/wの範囲で添加され得る。好ましくは0.04〜0.1%w/wである。
反応混合物中の脂肪相におけるリン酸含有化合物の含有率は、中でもリン脂質を吸収するシリカによる処理により、さらに低められ得る。
親脂肪分解酵素又はホスホリパーゼをコードするDNA配列は、当業界において良く知られている種々の方法を用いて、問題のα−アミラーゼを生成するいずれかの細胞又は微生物から単離され得る。最初に、ゲノムDNA及び/又はcDNAライブラリーが、研究されるべき酵素を生成する生物からの染色体DNA又はメッセンジャーRNAを用いて構成されるべきである。
本発明の方法の脂肪分解酵素又はホスホリパーゼをコードするDNA配列を担持する組換え発現ベクターは、便利には、組換えDNA方法にゆだねられ得るいずれかのベクターであり得、そしてベクターの選択はしばしば、それが導入される予定である宿主細胞に依存するであろう。ベクターは、宿主細胞中に導入される場合、宿主細胞ゲノム中に組み込まれ、そしてそれが組み込まれている染色体と一緒に複製されるベクターであり得る。適切な発現ベクターはpMT838を包含する。
ベクターはさらに、問題の宿主細胞におけるベクターの複製を可能にするDNA配列を含んで成ることができる。そのような配列の例は、プラスミドpUC19, pACYC177, pUB110, pE194, pAMB1, 及びpIJ702 の複製の起点である。
ベクターにおいて、DNA配列は適切なプロモーター配列に操作可能的に結合されるべきである。プロモーターは、選択の宿主細胞において転写活性を示すいずれかのDNA配列であり得、そして宿主細胞に対して相同であるか又は非相同であるタンパク質コードの遺伝子に由来することができる。
上記で定義されたような本発明のDNA構造体又は発現ベクターのいずれかを含んで成る本発明の方法に使用される酵素の生成のための宿主細胞は、好都合には、脂肪分解酵素又はホスホリパーゼの組換え生成において宿主細胞として使用される。細胞は、便利には、宿主染色体にDNA構造体(1または複数のコピーにおける)を組み込むことによって、脂肪分解酵素又はホスホリパーゼをコードする本発明のDNA構造体により形質転換され得る。この組み込みは一般的には、DNA配列が細胞において安定して維持されるので、好都合であると思われる。宿主染色体中へのDNA構造体の組み込むは、従来の方法、例えば相同又は非相同組換えにより行われ得る。他方では、細胞は、異なった型の宿主細胞に関して上記に記載されるようにして、発現ベクターにより形質転換され得る。
本発明の方法に使用される酵素は、宿主細胞を、前記酵素の生成の助けとなる条件下で培養し、そして細胞及び/又は培養物培地から酵素を回収することを含んで成る方法により生成され得る。
粗菜種油からの脂肪分解酵素及びホスホリパーゼの使用によるリン低減された脂肪酸メチルエステルの形成:
脂肪分解酵素:WO00/60063号に従ってのサーモミセス・ラヌギノサスリパーゼ変異体、用量:4000LU/8gの油、ホスホリパーゼ:WO00/32758号、例5に従ってのサーモミセス・ラヌギノサス変異体(活性10.000LU/g)、用量:30ppm又は100ppm(それぞれ、300及び1000LU/kgの油に対応する)。基質:100%の粗菜種油、8g。メタノール含有率:油に基づいて1.5モル当量、1.72ml。重量に基づいて30%H2O。サンプリング時間:3及び24時間。反応温度:50℃。
Claims (14)
- アルコール、トリグリセリド及び/又は脂肪酸を含んで成る基質、1又は複数のリパーゼ及び1又は複数のホスホリパーゼ、並びに水を混合することを含んで成り、ここでアルコール/脂肪酸残基のモル比が0.4−2の範囲にある、リンが低減された脂肪酸アルキルエステルの生成方法。
- 前記脂肪酸アルキルエステルのリン含量が、50ppm以下に低められる請求項1記載の方法。
- 前記脂肪酸が遊離脂肪酸を含んでなり、遊離脂肪酸の量が、0.01〜95重量%の範囲である、請求項1記載又は2に記載の方法。
- 前記トリグリセリドが、植物油供給原料、菜種油、大豆油、からし油、ひまわり油、カノーラ油、ココナツ油、大麻油、パーム油、タール油及び動物油脂の1又は複数のものに由来する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記アルコールがメタノール又はエタノールである請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 反応混合物が50%(w/w)までの水を含んで成る請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 温度が、30〜70℃である請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ホスホリパーゼが、フサリウム・クルモラス(Fusarium culmorum)、フサリウム・ヘテロスポラム(Fusarium heterosporum)、フサリウム・ソラニ(Fusarium solani)、フサリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)、アスペルギラス・アワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギラス・フォエチダス(Aspergillus foetidus)、アスペルギラス・ジャポニカス(Aspergillus japonicus)、アスペルギラス・ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギラス・オリザエ(Aspergillus oryzae)及びサーモミセス・ラヌギノサス(Thermomyces lanuginosus)の株からのホスホリパーゼから成る群から選択される請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- キレート化剤が、油含有物に基づいて、0.01〜1%w/wの範囲で添加される請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 工程がバッチモードで進行する請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 工程が連続モードで進行する請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 反応混合物における溶液相が、高剪断ミキサーを用いて混合される請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 工程が、向流モードで行われる請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記酵素含有水相が、新しい基質をまた含む反応混合物中に完全に又は部分的に再循環される請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200500858 | 2005-06-13 | ||
DKPA200500858 | 2005-06-13 | ||
PCT/DK2006/000329 WO2006133698A2 (en) | 2005-06-13 | 2006-06-13 | Production of degummed fatty acid alkyl esters |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008545443A JP2008545443A (ja) | 2008-12-18 |
JP5113044B2 true JP5113044B2 (ja) | 2013-01-09 |
Family
ID=37441018
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008516129A Expired - Fee Related JP5113044B2 (ja) | 2005-06-13 | 2006-06-13 | デガミングされた脂肪酸アルキルエステルの生成 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8012724B2 (ja) |
EP (1) | EP1893764B2 (ja) |
JP (1) | JP5113044B2 (ja) |
CN (1) | CN101194019A (ja) |
AT (1) | ATE420196T1 (ja) |
BR (1) | BRPI0611892A2 (ja) |
CA (1) | CA2611143C (ja) |
DE (1) | DE602006004733D1 (ja) |
WO (1) | WO2006133698A2 (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2368978B1 (en) * | 2006-03-10 | 2014-04-30 | Mitsubishi-Kagaku Foods Corporation | Novel phospholipase C enzyme(s) |
US7943792B2 (en) * | 2007-04-02 | 2011-05-17 | Inventure Chemical Inc. | Production of biodiesel, cellulosic sugars, and peptides from the simultaneous esterification and alcoholysis/hydrolysis of materials with oil-containing substituents including phospholipids and peptidic content |
JP2009017840A (ja) * | 2007-07-13 | 2009-01-29 | Japan Agengy For Marine-Earth Science & Technology | 外来遺伝子を細胞に安定に保持する方法 |
NZ598199A (en) | 2007-09-12 | 2013-12-20 | Martek Biosciences Corp | Biological oils and production and uses thereof |
US8076123B2 (en) | 2007-10-26 | 2011-12-13 | Oilseeds Biorefinery Corporation | Emulsification-free degumming of oil |
ES2713526T3 (es) * | 2009-07-17 | 2019-05-22 | Korea Advanced Inst Sci & Tech | Procedimiento de producción de ésteres alquílicos de ácidos grasos usando microorganismos que tienen capacidad de producir aceite |
EP2298727B1 (de) * | 2009-09-05 | 2015-03-04 | Cognis IP Management GmbH | Verfahren zur Herstellung von Estern kurzkettiger Alkohole aus triglyceridreichen Ölen |
WO2011082190A1 (en) | 2009-12-28 | 2011-07-07 | Martek Biosciences Corporation | Recombinant thraustochytrids that grow on sucrose, and compositions, methods of making, and uses thereof |
US9040263B2 (en) | 2010-07-28 | 2015-05-26 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Production of alcohol esters and in situ product removal during alcohol fermentation |
AU2011268220B2 (en) | 2010-06-18 | 2015-01-29 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Extraction solvents derived from oil for alcohol removal in extractive fermentation |
US8686198B2 (en) | 2012-05-18 | 2014-04-01 | Uop Llc | Integrated hydrolysis/hydroprocessing process for converting feedstocks containing renewable glycerides to paraffins and polyols |
EP3533866A1 (en) | 2013-03-21 | 2019-09-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having phospholipase a activity and polynucleotides encoding same |
WO2015140275A1 (en) | 2014-03-19 | 2015-09-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having phospholipase c activity and polynucleotides encoding same |
EP3143135B1 (en) | 2014-05-15 | 2019-04-10 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having phospholipase c activity and use thereof |
US9926942B2 (en) | 2015-10-27 | 2018-03-27 | Pratt & Whitney Canada Corp. | Diffuser pipe with vortex generators |
US10570925B2 (en) | 2015-10-27 | 2020-02-25 | Pratt & Whitney Canada Corp. | Diffuser pipe with splitter vane |
WO2017216382A1 (en) * | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Novozymes A/S | Reduction of phospholipids in phospholipid-containing oil material |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE117018T1 (de) | 1986-10-17 | 1995-01-15 | Novo Nordisk As | Positionsmässig nicht spezifische lipase von candida-arten; verfahren für ihre herstellung und ihre verwendung. |
JP2709736B2 (ja) * | 1988-08-11 | 1998-02-04 | 昭和産業株式会社 | 油脂の精製方法 |
US5057206A (en) * | 1988-08-25 | 1991-10-15 | Uop | Process for the production of white oils |
DE4115938A1 (de) | 1991-05-16 | 1992-11-19 | Metallgesellschaft Ag | Enzymatisches verfahren zur verminderung des gehaltes an phosphorhaltigen bestandteilen in pflanzlichen und tierischen oelen |
JP2937746B2 (ja) † | 1993-04-25 | 1999-08-23 | 昭和産業株式会社 | 油脂の精製方法 |
CA2203398A1 (en) | 1994-10-26 | 1996-05-09 | Thomas Sandal | An enzyme with lipolytic activity |
US5989599A (en) * | 1995-04-24 | 1999-11-23 | Nestec S.A. | Process for the interesterification of phospholipids |
US20050287250A1 (en) † | 1995-06-07 | 2005-12-29 | Danisco A/S | Method |
ATE226974T1 (de) † | 1996-12-09 | 2002-11-15 | Novozymes As | Verringerung von phosphorhaltigen substanzen in speiseölen mit hohem anteil an nicht- hydratisierbarem phosphor unter verwendung einer phospholipase, eine phospholipase aus fädenförmigen pilz, welche eine phospholipase a und/oder b-aktivität aufweist |
EP1131416B1 (en) | 1998-11-27 | 2009-09-02 | Novozymes A/S | Lipolytic enzyme variants |
EP2716753A1 (en) * | 1998-11-27 | 2014-04-09 | Novozymes A/S | Lipolytic enzyme variants |
EP1171581A1 (en) | 1999-03-31 | 2002-01-16 | Novozymes A/S | Lipase variant |
WO2001039602A1 (en) † | 1999-12-03 | 2001-06-07 | Danisco A/S | Method of improving dough and bread quality |
WO2001083559A2 (en) | 2000-04-28 | 2001-11-08 | Novozymes A/S | Production and use of protein variants having modified immunogenecity |
SE0201581D0 (sv) † | 2002-05-29 | 2002-05-29 | Scandinavian Biotechnology Res | New improved acyltransferase |
ES2525711T3 (es) | 2003-01-17 | 2014-12-29 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Método para producir un éster de proteína o un éster de subunidad de proteína |
CN1183238C (zh) | 2003-03-28 | 2005-01-05 | 刘阳 | 生物酶法制造植物油脂肪酸甲酯的新方法 |
CN1453332A (zh) | 2003-04-24 | 2003-11-05 | 华南理工大学 | 生物催化油脂转酯生产生物柴油的方法 |
US6942809B2 (en) † | 2003-06-13 | 2005-09-13 | Ip Holdings, L.L.C. | Method for treating soybean refinery wastewater |
DE10340739A1 (de) * | 2003-09-04 | 2005-04-07 | Satia Gmbh | Verfahren zur enzymatischen Herstellung von Mono- und Diacylglycerid-haltigen Emulgatoren |
CN101818177A (zh) † | 2004-07-16 | 2010-09-01 | 丹尼斯科公司 | 脂肪分解酶及其在食品工业中的应用 |
-
2006
- 2006-06-13 JP JP2008516129A patent/JP5113044B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-13 BR BRPI0611892-5A patent/BRPI0611892A2/pt active IP Right Grant
- 2006-06-13 DE DE602006004733T patent/DE602006004733D1/de active Active
- 2006-06-13 CA CA2611143A patent/CA2611143C/en active Active
- 2006-06-13 CN CNA2006800206440A patent/CN101194019A/zh active Pending
- 2006-06-13 AT AT06753304T patent/ATE420196T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-06-13 EP EP06753304.2A patent/EP1893764B2/en active Active
- 2006-06-13 WO PCT/DK2006/000329 patent/WO2006133698A2/en not_active Application Discontinuation
- 2006-06-13 US US11/916,052 patent/US8012724B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1893764B2 (en) | 2020-11-04 |
EP1893764A2 (en) | 2008-03-05 |
US8012724B2 (en) | 2011-09-06 |
WO2006133698A2 (en) | 2006-12-21 |
EP1893764B1 (en) | 2009-01-07 |
DE602006004733D1 (de) | 2009-02-26 |
US20080199924A1 (en) | 2008-08-21 |
WO2006133698A3 (en) | 2007-05-18 |
ATE420196T1 (de) | 2009-01-15 |
CN101194019A (zh) | 2008-06-04 |
BRPI0611892A2 (pt) | 2011-01-04 |
CA2611143A1 (en) | 2006-12-21 |
JP2008545443A (ja) | 2008-12-18 |
CA2611143C (en) | 2014-03-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5113044B2 (ja) | デガミングされた脂肪酸アルキルエステルの生成 | |
JP5133701B2 (ja) | 2つの脂肪分解酵素を使用する脂肪酸アルキルエステルの製造 | |
US9670513B2 (en) | Production of fatty acid alkyl esters | |
US8178326B2 (en) | Producing esters of fatty acid and C1-C3 alkyl alcohols | |
US20140017741A1 (en) | Esterification Process | |
CA2949886C (en) | Production of fatty acid alkyl esters with caustic treatment | |
WO2012049180A1 (en) | Processing of oils and fats | |
BRPI0611892B1 (pt) | A method for producing fatty acid alkyl esters of reduced phosphorus content by the combined transesterification and degumming | |
WO2023209070A1 (en) | Production of fatty acid alkyl esters | |
WO2023203080A1 (en) | Process for producing free fatty acids | |
WO2022233897A1 (en) | Enzymatic treatment of feedstock for hydrotreated vegetable oil (hvo) production |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090528 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111115 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120214 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120911 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20121011 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20151019 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |