JP4992164B2

JP4992164B2 - Cosmetic composition

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Publication number: JP4992164B2
Application number: JP2001118479A
Authority: JP
Inventors: 実咲石田; さおり佐藤; 論橋爪; 伸二林
Original assignee: NOF Corp
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 2000-04-19
Filing date: 2001-04-17
Publication date: 2012-08-08
Anticipated expiration: 2021-04-17
Also published as: JP2002003363A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は化粧料組成物に関する。さらに詳しくは皮膚の美白効果に優れ、日焼けによって生じる「シミ」、「ソバカス」等を効果的に防止することができ、肌のうるおいを長時間保つとともに、肌にはりを与え、しわ抑制効果に優れ、しかも安全性と保存安定性に優れる化粧料組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚に紫外線が照射されると皮膚中のメラノサイトが活性化され、酵素チロシナーゼ及びＴＲＰ１、ＴＲＰ２の働きによってメラニンの合成が促進される。そして、生成したメラニンの皮膚中での沈着がいわゆる「シミ」、「ソバカス」になることから、それを防止する為に様々な化粧料組成物、特に美白化粧料が使用されている。また、同時に、紫外線は、皮脂、細胞膜などの酸化を促進して、様々な皮膚障害をもたらすことがわかってきた。特に近年、オゾン層の破壊に伴う紫外線量の増加も問題視されており、より有効に皮膚の酸化を防止することが望まれている。
【０００３】
美白効果を示す成分としては、アスコルビン酸燐酸エステル塩、ハイドロキノン誘導体、胎盤抽出物、コウジ酸、エラグ酸等が知られており、これらの成分を配合した化粧料組成物が知られている。その中でも、現在、最も一般的に使用されている成分は胎盤抽出物であり、通常、牛胎盤抽出物である。しかし、近年、狂牛病の問題が世界的に重要視されるようになってきた。そして、日本においても、２０００年１２月には、牛胎盤抽出物の使用が禁止された。そこで、新規で、有効な美白成分の開発が、特に望まれている。
【０００４】
一方、近年、植物に含有されるポリフェノール等に高い美白効果があることが報告され、それを使用した化粧料組成物が提案されている。さらに、例えば、特開平６−１６５３１号公報にはフラバノン類が、そして、特開平１０−１０１５４３号公報にはヒドロキシフラボン類が美白効果を有することが報告されている。しかしながら、これらの美白成分はその効果がまだ十分でないだけでなく、保存安定性に欠け、製品とした時に経時で種々の問題を生じ易い。さらに、これらの美白成分は美白効果を有していても、肌にはりを与える、しわを防止するなどの、いわゆる皮膚老化防止効果を十分に与えることができないのが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、美白効果に優れるとともに、皮膚老化防止効果を十分に発揮し、使用上の安全性が高く、かつ保存安定性にも優れている化粧料組成物が求められている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決することを目的とするものであり、本発明によって、特定のポリメトキシフラボン化合物が特定量配合することにより、十分な美白効果を発揮するとともに、肌にはりを与える、しわを防止するなどの、いわゆる皮膚老化防止効果を発揮すること、さらには、使用しても安全であり、保存安定性にも優れる化粧料組成物が提供される。
【０００７】
すなわち、本発明は、以下の一般式（Ｉ）で示されるポリメトキシフラボンを０．００００５重量％〜１０重量％含有することを特徴とする化粧料組成物である。
【０００８】
【化６】

【０００９】
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、およびＲ^１０は、それぞれ同一又は異なる水素原子、水酸基、炭素数１〜２０のアルコキシ基、炭素数１〜２０のアルキル基、炭素数２〜２０のアルケニル基、炭素数１〜２０のヒドロキシアルキル基又は糖残基を示すが、それらのうち少なくとも４個はメトキシ基を示す。）。
【００１０】
好ましい実施態様においては、本発明の化粧料組成物は前記ポリメトキシフラボンが、以下の式（II）〜式（V）で示される化合物からなる群から選択される少なくとも１種のポリメトキシフラボンを含有する。
【００１１】
【化７】

【００１２】
【化８】

【００１３】
【化９】

【００１４】
【化１０】

【００１５】
好ましい実施態様においては、前記ポリメトキシフラボンが、５，６，７，８，３’，４’−へキサメトキシフラボンおよび５，６，７，８，４’−ペンタメトキシフラボンからなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。
【００１６】
本発明は、また、ポリメトキシフラボンの単離精製方法であって、
ミカン科ミカン属植物の果皮を、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールからなる群から選択される１またはそれ以上の溶剤で抽出し、抽出物（Ｓ１）を得る工程；
該抽出物（Ｓ１）を酢酸エチルに溶解し、水を加えて撹拌、分層し、水層を除いた後、酢酸エチルを留去し、乾固物（Ｓ２）を得る工程；および該乾固物（Ｓ２）を溶剤に溶解し、液体カラムクロマトグラフィーに供する工程、を含む、単離精製方法に関する。
【００１７】
また、別の本発明は、ポリメトキシフラボンの単離精製方法であって、
ミカン科ミカン属植物の果皮を、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールからなる群から選択される１またはそれ以上の溶剤で抽出し、抽出物（Ｓ１）を得る工程；
該抽出物（Ｓ１）をヘキサンおよび／またはクロロホルムに溶解し、沈殿物を除去した後、ヘキサンおよび／またはクロロホルムを留去して乾固物（Ｓ３）を得る工程；および
該乾固物（Ｓ３）を溶剤に溶解し、液体カラムクロマトグラフィーに供する工程；を含む、単離精製方法に関する。
【００１８】
好ましい実施態様においては、前記液体カラムクロマトグラフィーが、シリカゲルおよび／またはアルミナを充填剤とし、溶離液として、ヘキサン／エタノールが容積比で７０／３０〜９７／３となる混合溶液を使用する。
【００１９】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられるポリメトキシフラボンは、以下の一般式（Ｉ）：
【００２０】
【化１１】

【００２１】
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、およびＲ^１０は、それぞれ同一又は異なる水素原子、水酸基、炭素数１〜２０のアルコキシ基、炭素数１〜２０のアルキル基、炭素数２〜２０のアルケニル基、炭素数１〜２０のヒドロキシアルキル基又は糖残基を示すが、それらのうち少なくとも４個はメトキシ基を示す。）で示される。その構造的特徴は、フラボノイド骨格の２，３位が還元され、そして、クロモン環及び２位に結合するベンゼン環に合計で４個またはそれ以上のメトキシ基を有する点である。すなわち、Ｒ^１〜Ｒ^１０のうちの少なくとも４つは、メトキシ基である。そして、メトキシ基の位置は、クロモン環あるいはベンゼン環の何れにあってもよいが、クロモン環により多くのメトキシ基が存在する方が好ましい。
【００２２】
メトキシ基以外の基としては、以下の基が挙げられる。炭素数１〜２０のアルコキシ基としては、炭素数１〜６の低級アルコキシ基が好ましく、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基などが好ましい。
【００２３】
炭素数１〜２０のアルキル基としては、炭素数１〜６の低級アルキル基が好ましく、メチル基、エチル基、プロピル基などが好ましい。
【００２４】
炭素数２〜２０のアルケニル基としては、炭素数２〜６の低級アルケニル基が好ましく、エテニル基、プロペニル基などが好ましい。
【００２５】
炭素数１〜２０のヒドロキシアルキル基としては、炭素数１〜６の低級ヒドロキシアルキル基が好ましく、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基などが好ましい。
【００２６】
糖残基としては、例えば、グルコース、ガラクトース、フコース、キシロース、マンノース、ラムノース、フルクトース、アラビノース、リキソース、リボース、アロース、アルトロース、イドース、タロース、デオキシリボース、キノボース、アベコースなどの単糖、これらの単糖が２〜４個結合した、例えば、マルトース、ラクトース、セロビオース、ラフィノース、キシロビオース、スクロースなどのオリゴ糖残基が挙げられる。好ましくは、グルコース、ガラクトース、フコース、キシロース、マンノース、ラムノース、フルクトースの残基である。
【００２７】
具体的に好ましいポリメトキシフラボンは、例えば、式（II）で示される３，５，６，７，８，３’，４’−へプタメトキシフラボン、式（III）で示される５，６，７，８，３’，４’−へキサメトキシフラボン（通称名ノビレチン）、式（IV）で示される５，６，７，８，４’−ペンタメトキシフラボン（通称名タンゲレチン）、および式（V）で示される５，７，８，３’，４’−ペンタメトキシフラボン等が挙げられる。
【００２８】
その中でも、式（III）で示される５，６，７，８，３’，４’−へキサメトキシフラボン（ノビレチン）、および式（IV）で示される５，６，７，８，４’−ペンタメトキシフラボン（タンゲレチン）が特に好ましい。
【００２９】
本発明に用いられるポリメトキシフラボン化合物は、化学合成法によっても得られるが、植物からの溶剤を用いた抽出物から、天然物として得ることも出来る。
【００３０】
化学合成法としては、例えば、Indian Journal of Heterocyclic Chemistry Vol.６.Jan.-March 1997, pp.221-222に記載の方法などがあり、この方法により、５，６，７，８，３’，４’−へキサメトキシフラボン（式(III)：ノビレチン）が合成されている。
【００３１】
植物の抽出物からポリメトキシフラボンを得る方法としては、例えば、ミカン科ミカン属植物の果皮から抽出する方法が挙げられる。ミカン科ミカン属植物、例えば、ウンシュウミカン、ポンカン、ハッサク、レモン、タチバナ、ユズ、スダチ、ザボン、タンジェリン、マンダリンオレンジ、グレープフルーツなどには、ポリメトキシフラボンが含有されている（Journal of Medicinal Plant Research Vol.46, 162-166, (1982)）。これらの中で、好ましい植物はウンシュウミカン、タチバナ、ユズ、およびスダチであり、より好ましい植物は、ウンシュウミカン、およびタチバナである。
【００３２】
ポリメトキシフラボンの単離精製は、これらのミカン科ミカン属植物の果皮を有機溶剤で抽出し、抽出物をカラムクロマトグラフィーにより分離することにより行われる。以下、具体的に説明する。
【００３３】
まず、ミカン属植物の果皮を水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノ-ル、プロピレングリコール、1，３−ブチレングリコール等の水溶性アルコール；アセトン、ヘキサン、酢酸エチル、クロロホルム等の溶剤；もしくはそれらの混合溶剤；を用いて抽出する。好ましい溶剤は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノ-ル、プロピレングリコール、1，３−ブチレングリコールおよび酢酸エチルからなる群から選択される１または２以上の溶剤である。より好ましい溶剤は、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、1，３−ブチレングリコールおよび酢酸エチルからなる群から選択される１または２以上の溶剤である。抽出液を濃縮すると目的のポリメトキシフラボンを約１〜１５重量％含有する抽出物（Ｓ１）が得られる。この抽出物（Ｓ１）は、さらに乾固してもよい。
【００３４】
この抽出物（Ｓ１）を２倍重量以上、好ましくは、３〜１０倍重量の酢酸エチルに溶解し、水を加えて撹拌・分層し、水層を除去してから酢酸エチルを留去して、乾固物（Ｓ２）を得る。
【００３５】
あるいは、抽出物（Ｓ１）をヘキサンおよび／またはクロロホルムに溶解し、撹拌、静置した後に沈殿物を除去し、その上澄みを濃縮して乾固物（Ｓ３）を得る。溶剤は、ヘキサンあるいはクロロホルムを単独で用いてもよいが、好ましくは、ヘキサン／クロロホルムを容積比で１／９〜９／１、好ましくは３／７〜７／３で混合した混合溶剤が用いられる。
【００３６】
得られた乾固物（Ｓ２）または（Ｓ３）は、好ましくは、適切な溶剤に再溶解されて液体カラムクロマトグラフィーに供され、ポリメトキシフラボンが単離・精製される。液体カラムクロマトグラフィーとしては、シリカゲルまたはアルミナを充填材とし、溶離液として、ヘキサン／エタノールを容積比で７０／３０〜９７／３で混合した混合溶剤が用いられる。
【００３７】
より具体的に、ミカン科タチバナ（橘）からのポリメトキシフラボンの単離・精製について説明する。乾燥させたタチバナの果皮（生薬名：キッピ）をブレンダーにて粉砕し、適切な溶剤（例えば、５倍重量の９５％エタノール）に適切な時間（例えば５日間）浸漬抽出し、抽出液を濾過後、減圧濃縮してキッピ抽出物（前記Ｓ１に相当）を得る。得られたキッピ抽出物に適切な量の酢酸エチルを加えて溶解し、酢酸エチルと等量の水を加えて撹拌し、静置による分層後、水層を除去する。この操作（水洗）を複数回、好ましくは３回以上繰り返した後、酢酸エチルを留去し、乾固物（前記Ｓ２に相当）を得る。あるいは、得られたキッピ抽出物に適切な量のヘキサン／クロロホルム（容積比１／１）の混合溶剤を加え、適切な温度（例えば、４℃）で一晩静置保存し、分離手段（例えば遠心分離）により沈殿物を取り除き、上澄みを濃縮して乾固物（前記Ｓ３に相当）を得る。この乾固物（前記Ｓ２またはＳ３に相当）を、適切な量の適切な溶剤（例えばヘキサン／エタノール（容積比８５／１５））に再溶解し、例えば、ヘキサン／エタノール混合溶剤を溶離液としてシリカゲルカラムあるいはアルミナカラムによる分取液体クロマトグラフィーに供して、分画する。このようにして、ポリメトキシフラボンが単離・精製される。
【００３８】
単離精製されたポリメトキシフラボンは、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）、質量分析スペクトルなど、当業者が通常用いる分析手段で、その構造が決定される。
【００３９】
尚、本発明においては、単離したポリメトキシフラボンを単独で添加してもよいし、２種以上混合して用いてもよいし、合成時の混合物のまま、あるいは植物抽出物等の複数の天然物を含む形で添加してもよい。
【００４０】
ポリメトキシフラボンは、化粧料組成物全量中に０．００００５〜１０重量％含まれ、好ましくは０．０００１〜７重量％、更に好ましくは０．００１〜５重量％含まれる。０．００００５重量％未満では十分な美白効果を得ることができず、また、肌に張りを与える効果、およびしわを抑制する効果を得ることができず、１０重量％を超えると経時安定性に問題を生じるだけでなくコスト的に不利である。
【００４１】
さらに、本発明の化粧料組成物には、美白成分として知られているアスコルビン酸及びその誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アルブチン等のハイドロキノン誘導体、胎盤抽出物、エラグ酸及びその誘導体を配合することができる。これらの美白成分は、０．０１〜１０重量％配合されることが好ましい。これらの美白成分と、ポリメトキシフラボンとを併用することにより、美白効果を相乗的に高めることも出来る。
【００４２】
尚、本発明の化粧料組成物には、化粧料組成物の性能を損なわない程度に、化粧料に常用されている基剤、添加剤などが、化粧料の種類に応じて適宜、配合される。例えば、エタノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール類；グリセリン、1，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の多価アルコール類；流動パラフィン、流動イソパラフィン、スクワラン、ワセリン、固形パラフィン等の炭化水素系油；牛脂、豚脂、魚油等の天然油脂類；トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル等の合成トリグリセライド；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸セチル、オレイン酸エチル、オレイン酸オレイル、ミリスチン酸オクチルドデシル等のエステル油；ミツロウ、カルナバロウ等のロウ類；直鎖及び環状のジメチルポリシロキサン、ポリエーテル変性ジメチルポリシロキサン、アミノ変性ジメチルポリシロキサン等のシリコーン誘導体；セラミド、コレステロール、蛋白誘導体、ラノリン、ラノリン誘導体、レシチン等の油性基剤；石鹸、アシルメチルタウリン塩、アミドエーテル硫酸エステル塩等の陰イオン性界面活性剤；アミドアミノ酸塩、アミドプロピルジメチルべタイン等の両性界面活性剤；ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、グリセリンモノ脂肪酸エステル、アルキルポリグルコシド、アルカノールアミド等の非イオン性界面活性剤；塩化アルキルトリメチルアンモニウム等の陽イオン性界面活性剤；アルキルジメチルアミンオキシド等の半極性界面活性剤；アルギン酸、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガム、ヒアルロン酸等の水溶性高分子；ピロリドンカルボン酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、食塩等の有機又は無機塩類；ｐＨ調整剤である酸及びアルカリ；抗炎症剤；殺菌剤、キレート剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、動植物由来の天然エキス、色素及び香料等を配合することができる。
【００４３】
本発明の化粧料組成物は、化粧水、乳液、水中油型クリーム、油中水型クリームなどの形態に好ましく用いられる。
【００４４】
【実施例】
次に実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明がこれらの実施例により限定されることはない。
【００４５】
（製造例１：ポリメトキシフラボンの単離）
ミカン科タチバナ（橘）の乾燥果皮（生薬名「キッピ」）１０ｋｇをブレンダーにて粉砕し、５倍重量の９５％エタノール（一級）で５日間浸漬、抽出した。抽出液を濾過後、減圧濃縮してキッピ抽出物５５０ｇを得た。このキッピ抽出物を５倍重量の酢酸エチルに溶解し、酢酸エチルと等量の水を加えて撹拌し、静置した。分層後、水層を除去した（水洗）。この操作（水洗）を３回繰り返した後、酢酸エチルを留去し、乾固物３００ｇを得た。さらに、この乾固物を２倍重量のヘキサン／エタノール混合溶剤（容積比８５／１５）に溶解し、溶解液を得た。シリカゲルを充填したカラム（φ３０ｃｍ、長さ１ｍ）にこの溶解液を全量チャージした。このカラムにカラム容量の２倍容量のヘキサンを流した後、溶離液としてヘキサン／エタノール混合溶剤（容積比９０／１０）を使用し、溶出液を１Ｌづつ分画した。この各分画液について、展開溶剤としてヘキサン／エタノール混合溶剤（容積比９０／１０）を使用したシリカゲル薄層クロマトグラフに供して分析したところ、化合物１〜４の存在を確認した。そして、それぞれの化合物を含有する分画液を合一してから溶媒を留去し、化合物１〜４を得た。各化合物の収量は化合物１が７ｇ、化合物２が６３ｇ、化合物３が３３ｇ、そして、化合物４が１３ｇであった。
【００４６】
得られたそれぞれの化合物１〜４について、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）、質量分析スペクトル（ＭＳ）を用いて分析した。化合物２の^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ及びＭＳスペクトルを図１〜３に、化合物３の^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ及びＭＳスペクトルを図４〜６に示す。
【００４７】
これらのデータと文献（Natural Medicines 51(3), 190-193(1997) 、Chem. Pharm. Bull. 37, 1092(1989)、薬学雑誌(YAKUGAKU ZASSHI) 116(3), 244-250(1996)、およびTetrahedron, 16(8), 64(1964)に記載されたデータとを比較すると、化合物２は、５，６，７，８，３’，４’−ヘキサメトキシフラボン（式（III）：ノビレチン）と同定された。また、化合物３は５，６，７，８，４’−ペンタメトキシフラボン（式（IV）：タンゲレチン）と同定された。
【００４８】
残りの化合物（化合物１および化合物４）について、^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ及びＭＳスペクトルを式（III）および式（IV）の化合物の^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ及びＭＳスペクトルと比較して、構造を決定し、それぞれ、３，５，６，７，８，３’，４’−へプタメトキシフラボン（式（II））、および５，７，８，３’，４’−ペンタメトキシフラボン（式（V））であるとした。
【００４９】
（製造例２：ポリメトキシフラボンの単離）
ミカン科タチバナ（橘）の乾燥果皮（生薬名「キッピ」）１０ｋｇをブレンダーにて粉砕し、５倍重量の９５％エタノール（一級）で５日間浸漬、抽出した。抽出液を濾過後、減圧濃縮してキッピ抽出物５６０ｇを得た。このキッピ抽出物にヘキサン／クロロホルム（容積比１／１）の混合溶剤５倍量を加えて約３０分間撹拌した。その後、４℃で一晩静置し、デカンテーションにより上清液を採取してから溶剤を留去し、乾固物３２０ｇを得た。この乾固物を製造例１と同じ方法でカラムクロマトグラフに供して分離・精製し、化合物１〜４を採取した。各化合物の収量は化合物１が６ｇ、化合物２が６５ｇ、化合物３が３５ｇ、そして、化合物４が１４ｇであった。なお、分析の結果、化合物１〜４は、それぞれ、式(II)〜式(V)の化合物であった。
【００５０】
（美白効果の確認−１：メラニン抑制効果の確認）
得られた式（II）〜式（V）の化合物を用いて、ヒトメラノーマ細胞（ＨＭ３ＫＯ）の、in vitroにおける、メラニン生成に対する抑制効果を調べた。すなわち、常法により５×１０^５程度に培養したＨＭ３ＫＯを遠心分離にて集めてペレットとし、これを予め、１０％ウシ胎児血清含有イーグル培地を添加した直径１０ｃｍの培養ディッシュに接種し、３７℃で２４時間培養した。その後、式（II）〜式（V）の各ポリメトキシフラボンを、そして比較として、コウジ酸、またはアルブチンを最終添加濃度として１０μＭになるように添加し、さらに６日間培養した。培養後、遠心分離により細胞を集め、２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌを加えて溶解させた。その溶解液について分光光度計により波長４１０ｎｍの吸光度を測定した。ここで、試料無添加の細胞溶解液の吸光度をメラニン生成率１００％とし、各溶解液の吸光度から、メラニン生成率を相対値として表した。結果を表１に示す。
【００５１】
【表１】

【００５２】
表１の結果は、式（II）〜式（V）のポリメトキシフラボンは、何れも、ＨＭ３ＫＯの黒色化を著しく抑制したことを示している。その効果は、コウジ酸やアルブチンをはるかに凌いでいた。
【００５３】
（美白効果の確認−２：紫外線誘導色素沈着の抑制）
褐色モルモットを用いてin vivoにおける紫外線誘導色素沈着の抑制効果を検討した。すなわち、褐色モルモットの背部を剃毛し、２×２ｃｍの長方形の穴を６ヶ所開けた紫外線遮蔽板で覆い、紫外線を照射し（０．５Ｊ／ｃｍ^２）、色素沈着を形成させた。その後、式（III）のポリメトキシフラボン（ノビレチン）、または式（IV）のポリメトキシフラボン（タンゲチレン）をそれぞれ、表２に記載の濃度で含有する７０％（Ｗ／Ｗ）エタノール水溶液４０μＬを１日２回塗布した。そして、塗布前と塗布後の黒化の度合いを色差計にて測定した。結果を表２に示す。
【００５４】
【表２】

【００５５】
なお、表２において、黒化度ΔＬは、色素計で、ＵＶ照射前のＬ値を測定してこれを０とし、ＵＶ照射後のＬ値との差として求めた。値の低い方が黒化度は高い。
【００５６】
表２より、本発明に用いられるポリメトキシフラボンは褐色モルモットの色素の生成を顕著に抑制することが判った。
【００５７】
（実施例１〜４及び比較例１〜３）
以下の表３に示す５成分を共通成分として使用し、表４に示す成分を含有する化粧水である化粧料組成物を調製した。使用したポリメトキシフラボンは製造例にて単離、精製した式（III)および式（IV）のポリメトキシフラボンである。
【００５８】
【表３】

【００５９】
得られた化粧料組成物について、下記の方法により評価を行なった。結果を表４に示す。
【００６０】
（１）美白効果
５０名の女性（２０才代〜３０才代）をパネラーとし、１日朝晩２回ずつ２ヶ月間化粧料を使用させ、その後の皮膚の「シミ」、「ソバカス」の改善度を肉眼で下記の基準で判定した。
１０点：明らかに有効であると判断された場合。
５点：やや効果が有ると判断された場合。
０点：全く効果が無いと判断された場合。
５０名の平均値を求めて、平均値５点以上を美白効果の高い化粧料であると評価した。
○：美白効果が高い（平均点５点以上）。
×：美白効果が低い（平均点５点未満）。
【００６１】
（２）肌のうるおい
２０名の女性（２２才〜３２才）をパネラーとし、洗顔後に化粧料を使用して直後の肌のうるおいと２時間後の肌のうるおいについて、下記の基準で判定した。
２点：使用直後から肌にうるおいが十分にあり、２時間後も肌がしっとりとしていると感じた場合。
１点：使用直後の肌のうるおいがやや足りない、もしくは、２時間後の肌がややかさかさすると感じた場合。
０点：肌のうるおいが足りないと感じた場合。
２０名の平均値を求めて、平均値１．５点以上を肌のうるおいを保つ効果の高い化粧料であると評価した。
○：肌のうるおいを保つ効果が高い（平均点１．５点以上）。
×：肌のうるおいを保つ効果が低い（平均点１．５点未満）。
【００６２】
（３）肌のはり
２０名の女性（２２才〜３２才）をパネラーとし、洗顔後に化粧料を使用したときの肌のはりについて、下記の基準で判定した。
２点：肌にはりがあると感じた場合。
１点：やや肌にはりがあると感じた場合。
０点：肌にはりがないと感じた場合。
２０名の平均値を求めて、平均値１．５点以上を肌にはりを与える効果の高い化粧料であると評価した。
○：肌にはりを与える効果が高い（平均点１．５点以上）。
×：肌にはりを与える効果が低い（平均点１．５点未満）。
【００６３】
（４）しわ抑制効果
２０名の女性（２４才〜３５才）をパネラーとし、化粧料を１日２回（朝、夜）づつ２週間連続で使用したときの肌の状態について、下記の基準で判定した。
２点：しわが明らかに目立たなくなったと感じた場合。
１点：しわがやや目立たなくなったと感じた場合。
０点：しわ抑制効果が全くないと感じた場合。
２０名の平均値を求めて、平均値１．５点以上をしわ抑制効果の高い化粧料であると評価した。
○：しわを抑制する効果が高い（平均点１．５点以上）。
×：しわを抑制する効果が低い（平均点１．５点未満）。
【００６４】
（５）経時安定性
化粧料を透明ガラス容器に密封して０℃、２５℃、４０℃で３ヶ月間保存し、その外観を観察して、下に示す３段階で評価した。
○：安定性良好（いずれの温度においても外観の変化がない。）。
△：安定性やや不良（いずれかの温度において若干おり、沈殿を生じる又は若干着色を生じる。）。
×：安定性不良（いずれかの温度においており、沈殿を生じる又は分離する。もしくは着色が著しい。）。
【００６５】
結果を表４に示す。
【００６６】
【表４】

【００６７】
実施例１〜４より、本発明の、ポリメトキシフラボンを配合した化粧水はいずれも美白効果に優れるとともに、うるおいを長時間保ち、肌にはりを与える効果およびしわ抑制効果に優れ、経時安定性にも優れていた。一方、比較例１〜３では十分な性能が得られていない。つまり、比較例１ではポリメトキシフラボンが配合されていないことから美白効果が殆ど無く、ポリメトキシフラボンに代えて胎盤抽出物（プラセンタエキス）を用いる比較例２は、美白効果が弱く、はだのうるおい、肌のはり、しわの抑制効果は得られていない。ポリメトキシフラボンに代えてアスコルビン酸塩を用いる比較例３は、美白効果が弱く、はだのうるおい、肌のはり、しわの抑制効果は得られていないうえ、保存安定性に問題を生じている。
【００６８】
（実施例５〜７）
以下の表５に示す１２成分を共通成分として使用し、表８に示す水中油型乳液である美白化粧料組成物を調製した。
【００６９】
【表５】

【００７０】
得られた乳液を実施例１〜４と同じ方法により評価した。結果を表８に示す。
【００７１】
（実施例８〜９）
以下の表６に示す１２成分を共通成分として使用し、表８に示す成分を含有する水中油型クリームである皮膚化粧料組成物を調製した。
【００７２】
【表６】

【００７３】
得られた水中油型クリームの美白効果を実施例１〜４と同じ方法により評価した。経時安定性については下記の（５’）に示す方法により評価を行なった。
【００７４】
（５’）経時安定性
化粧料を透明ガラス容器に密封して−５℃、２５℃、４５℃で１ヶ月間保存したときの状態を調査し、下に示す３段階で評価した。
○：安定性良好（いずれの温度においても外観の変化がなくブツ等も生じない。）。
△：安定性やや不良（いずれかの温度において僅かに沈殿を生じるか僅かに分離が見られる。又は僅かにブツ、ダマを生じている。）。
×：安定性不良（いずれかの温度において明らかに沈殿を生じるか分離する。又はブツやダマを生じる。）。
【００７５】
結果を表８に示す。
【００７６】
（実施例１０〜１１）
以下の表７に示す１２成分を共通成分として使用し、表８に示す成分を含有する油中水型クリームである化粧料組成物を調製した。
【００７７】
【表７】

【００７８】
得られた油中水型クリームについて、実施例８〜９と同じ方法により評価した。
【００７９】
結果を表８に示す。
【００８０】
【表８】

【００８１】
実施例５〜７から、本発明の化粧料組成物（乳液）はいずれも美白効果に優れるとともに、うるおいを長時間保ち、肌にはりを与える効果、およびしわ抑制効果に優れ、経時安定性にも優れていることが示された。
【００８２】
実施例８〜９より、本発明の皮膚化粧料組成物（クリーム）はいずれも美白効果に優れるとともに、うるおいを長時間保ち、肌にはりを与える効果、およびしわ抑制効果に優れ、経時安定性にも優れていることが示された。
【００８３】
実施例１０〜１１より、本発明の化粧料組成物（クリーム）はいずれも美白効果に優れるとともに、うるおいを長時間保ち、肌にはりを与える効果、およびしわ抑制効果に優れ、経時安定性にも優れていることが示された。
【００８４】
【発明の効果】
以上記載のように、本発明の化粧料組成物は美白効果に優れるとともに経時安定性にも優れている。
【図面の簡単な説明】
【図１】式（III）で示される化合物の^１Ｈ−ＮＭＲを示す図である。
【図２】式（III）で示される化合物の^１３Ｃ−ＮＭＲを示す図である。
【図３】式（III）で示される化合物のマススペクトルを示す図である。
【図４】式（IV）で示される化合物の^１Ｈ−ＮＭＲを示す図である。
【図５】式（IV）で示される化合物の^１３Ｃ−ＮＭＲを示す図である。
【図６】式（IV）で示される化合物のマススペクトルを示す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a cosmetic composition. More specifically, it has excellent skin whitening effect, can effectively prevent “stains” and “sobacas” caused by sunburn, keeps the skin moisturized for a long time, gives skin to the skin, and suppresses wrinkles The present invention relates to a cosmetic composition excellent in safety and storage stability.
[0002]
[Prior art]
When the skin is irradiated with ultraviolet rays, melanocytes in the skin are activated, and the synthesis of melanin is promoted by the action of the enzymes tyrosinase, TRP1, and TRP2. Since the deposited melanin in the skin becomes so-called “stains” and “sobacas”, various cosmetic compositions, particularly whitening cosmetics, are used to prevent this. At the same time, it has been found that ultraviolet rays promote oxidation of sebum, cell membranes and the like and cause various skin disorders. In particular, in recent years, an increase in the amount of ultraviolet rays associated with the destruction of the ozone layer has been regarded as a problem, and it is desired to prevent skin oxidation more effectively.
[0003]
As components showing a whitening effect, ascorbic acid phosphoric acid ester salts, hydroquinone derivatives, placenta extracts, kojic acid, ellagic acid and the like are known, and cosmetic compositions containing these components are known. Among them, the most commonly used component at present is placenta extract, usually bovine placenta extract. However, in recent years, the problem of mad cow disease has become increasingly important worldwide. In Japan, the use of bovine placenta extract was prohibited in December 2000. Therefore, development of a new and effective whitening component is particularly desired.
[0004]
On the other hand, in recent years, it has been reported that polyphenols contained in plants have a high whitening effect, and cosmetic compositions using the same have been proposed. Furthermore, for example, JP-A-6-16531 reports that flavanones have a whitening effect, and JP-A-10-101543 reports that hydroxyflavones have a whitening effect. However, these whitening components are not only sufficiently effective, but also lack storage stability and tend to cause various problems over time when made into products. Furthermore, even if these whitening components have a whitening effect, they are not able to sufficiently provide a so-called skin aging prevention effect such as giving skin or preventing wrinkles.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
Accordingly, there is a demand for a cosmetic composition that is excellent in whitening effect, sufficiently exhibits an anti-skin aging effect, has high safety in use, and is excellent in storage stability.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
The present invention is intended to solve the above-mentioned problems, and according to the present invention, when a specific amount of a specific polymethoxyflavone compound is blended, a sufficient whitening effect is exhibited and a skin tone is given. A cosmetic composition that exhibits a so-called skin aging prevention effect such as preventing wrinkles, and is safe to use and excellent in storage stability is provided.
[0007]
That is, the present invention is a cosmetic composition characterized by containing 0.00005 wt% to 10 wt% of a polymethoxyflavone represented by the following general formula (I).
[0008]
[Chemical 6]

[0009]
(Wherein R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ , R ⁸ , R ⁹ And R ¹⁰ Are the same or different hydrogen atoms, hydroxyl groups, alkoxy groups having 1 to 20 carbon atoms, alkyl groups having 1 to 20 carbon atoms, alkenyl groups having 2 to 20 carbon atoms, hydroxyalkyl groups having 1 to 20 carbon atoms, or sugar residues. Of which at least 4 are methoxy groups. ).
[0010]
In a preferred embodiment, the cosmetic composition of the present invention comprises at least one polymethoxyflavone selected from the group consisting of compounds represented by the following formulas (II) to (V): contains.
[0011]
[Chemical 7]

[0012]
[Chemical 8]

[0013]
[Chemical 9]

[0014]
[Chemical Formula 10]

[0015]
In a preferred embodiment, the polymethoxyflavone is selected from the group consisting of 5,6,7,8,3 ′, 4′-hexamethoxyflavone and 5,6,7,8,4′-pentamethoxyflavone. At least one compound.
[0016]
The present invention also provides a method for isolating and purifying polymethoxyflavone,
Extract the pericarp of Citrus mandarin plant with one or more solvents selected from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, butanol, ethyl acetate, acetone, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, extract Obtaining (S1);
Dissolving the extract (S1) in ethyl acetate, adding water, stirring and separating the layers, removing the aqueous layer, and then distilling off the ethyl acetate to obtain a dried product (S2); and The present invention relates to an isolation and purification method comprising a step of dissolving a solid substance (S2) in a solvent and subjecting it to liquid column chromatography.
[0017]
Another aspect of the present invention is a method for isolating and purifying polymethoxyflavone,
Extract the pericarp of Citrus mandarin plant with one or more solvents selected from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, butanol, ethyl acetate, acetone, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, extract Obtaining (S1);
Dissolving the extract (S1) in hexane and / or chloroform and removing the precipitate, and then distilling off the hexane and / or chloroform to obtain a dried product (S3); and
A step of dissolving the dried product (S3) in a solvent and subjecting it to liquid column chromatography.
[0018]
In a preferred embodiment, the liquid column chromatography uses a mixed solution having silica gel and / or alumina as a filler and hexane / ethanol in a volume ratio of 70/30 to 97/3 as an eluent.
[0019]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The polymethoxyflavone used in the present invention has the following general formula (I):
[0020]
Embedded image

[0021]
(Wherein R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ , R ⁸ , R ⁹ And R ¹⁰ Are the same or different hydrogen atoms, hydroxyl groups, alkoxy groups having 1 to 20 carbon atoms, alkyl groups having 1 to 20 carbon atoms, alkenyl groups having 2 to 20 carbon atoms, hydroxyalkyl groups having 1 to 20 carbon atoms, or sugar residues. Of which at least 4 are methoxy groups. ). Its structural feature is that the flavonoid skeleton is reduced at the 2- and 3-positions and has a total of 4 or more methoxy groups on the chromone ring and the benzene ring bonded to the 2-position. That is, R ¹ ~ R ¹⁰ At least 4 of these are methoxy groups. The position of the methoxy group may be in either the chromone ring or the benzene ring, but it is preferable that many methoxy groups exist in the chromone ring.
[0022]
Examples of the group other than the methoxy group include the following groups. As a C1-C20 alkoxy group, a C1-C6 lower alkoxy group is preferable, and a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, etc. are preferable.
[0023]
As a C1-C20 alkyl group, a C1-C6 lower alkyl group is preferable, and a methyl group, an ethyl group, a propyl group, etc. are preferable.
[0024]
As a C2-C20 alkenyl group, a C2-C6 lower alkenyl group is preferable, and an ethenyl group, a propenyl group, etc. are preferable.
[0025]
As a C1-C20 hydroxyalkyl group, a C1-C6 lower hydroxyalkyl group is preferable, and a hydroxymethyl group, a hydroxyethyl group, a hydroxypropyl group, etc. are preferable.
[0026]
Examples of sugar residues include glucose, galactose, fucose, xylose, mannose, rhamnose, fructose, arabinose, lyxose, ribose, allose, altrose, idose, talose, deoxyribose, quinobose, and absucrose. Examples thereof include oligosaccharide residues in which 2 to 4 monosaccharides are bonded, such as maltose, lactose, cellobiose, raffinose, xylobiose, and sucrose. Preferred are residues of glucose, galactose, fucose, xylose, mannose, rhamnose, and fructose.
[0027]
Specific preferred polymethoxyflavones are, for example, 3,5,6,7,8,3 ′, 4′-heptamethoxyflavone represented by the formula (II), 5,6 represented by the formula (III) 7,8,3 ′, 4′-hexamethoxyflavone (common name: nobiletin), 5,6,7,8,4′-pentamethoxyflavone (common name: tangeretine) represented by formula (IV), and formula ( 5,7,8,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone represented by V).
[0028]
Among them, 5,6,7,8,3 ′, 4′-hexamethoxyflavone (nobiletin) represented by the formula (III) and 5,6,7,8,4 ′ represented by the formula (IV) -Pentamethoxyflavone (tangeretin) is particularly preferred.
[0029]
The polymethoxyflavone compound used in the present invention can be obtained by a chemical synthesis method, but can also be obtained as a natural product from an extract using a solvent from a plant.
[0030]
Examples of the chemical synthesis method include the method described in Indian Journal of Heterocyclic Chemistry Vol.6.Jan.-March 1997, pp.221-222. According to this method, 5, 6, 7, 8, 3 ′ 4,4'-hexamethoxyflavone (formula (III): nobiletin) has been synthesized.
[0031]
As a method for obtaining polymethoxyflavone from a plant extract, for example, a method for extracting from the pericarp of Rutaceae citrus plants can be mentioned. Citrus mandarin plants, for example, Satsuma mandarin, Ponkan, Hassaku, lemon, Tachibana, Yuzu, Sudachi, Pomelo, Tangerine, Mandarin orange, Grapefruit, etc. contain polymethoxyflavone (Journal of Medicinal Plant Research Vol. .46, 162-166, (1982)). Among these, preferred plants are Satsuma mandarin, Tachibana, Yuzu and Sudachi, and more preferred plants are Satsuma mandarin and Tachibana.
[0032]
Isolation and purification of polymethoxyflavone is performed by extracting the peels of these Citrus mandarin plants with an organic solvent and separating the extract by column chromatography. This will be specifically described below.
[0033]
First, the skin of a mandarin plant is water, methanol, ethanol, propanol, butanol, propylene glycol, water-soluble alcohol such as 1,3-butylene glycol; solvents such as acetone, hexane, ethyl acetate, chloroform; Extract with a mixed solvent. Preferred solvents are one or more solvents selected from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, butanol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol and ethyl acetate. More preferred solvents are one or more solvents selected from the group consisting of methanol, ethanol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol and ethyl acetate. When the extract is concentrated, an extract (S1) containing about 1 to 15% by weight of the desired polymethoxyflavone is obtained. This extract (S1) may be further dried.
[0034]
This extract (S1) is dissolved in ethyl acetate of 2 times weight or more, preferably 3 to 10 times weight, water is added, stirred and separated, and the aqueous layer is removed, and then ethyl acetate is distilled off. To obtain a dried product (S2).
[0035]
Alternatively, the extract (S1) is dissolved in hexane and / or chloroform, and after stirring and standing, the precipitate is removed, and the supernatant is concentrated to obtain a dried product (S3). As the solvent, hexane or chloroform may be used alone, but a mixed solvent in which hexane / chloroform is mixed at a volume ratio of 1/9 to 9/1, preferably 3/7 to 7/3 is used. .
[0036]
The dried product (S2) or (S3) obtained is preferably redissolved in an appropriate solvent and subjected to liquid column chromatography, and polymethoxyflavone is isolated and purified. For liquid column chromatography, a mixed solvent in which silica gel or alumina is used as a filler and hexane / ethanol is mixed at a volume ratio of 70/30 to 97/3 is used as an eluent.
[0037]
More specifically, the isolation and purification of polymethoxyflavone from the citrus family Tachibana (Tachibana) will be described. The dried skin of tachibana (name of crude drug: Kippi) is pulverized in a blender, soaked and extracted in a suitable solvent (eg, 5% weight of 95% ethanol) for a suitable time (eg, 5 days), and the extract is filtered. Thereafter, it is concentrated under reduced pressure to obtain a Kippi extract (corresponding to S1). An appropriate amount of ethyl acetate is added to the resulting Kipi extract and dissolved, and water equivalent to ethyl acetate is added and stirred. After separation by standing, the aqueous layer is removed. This operation (washing with water) is repeated a plurality of times, preferably 3 times or more, and then ethyl acetate is distilled off to obtain a dried product (corresponding to S2). Alternatively, an appropriate amount of a mixed solvent of hexane / chloroform (volume ratio 1/1) is added to the obtained Kipi extract, and the mixture is stored at an appropriate temperature (for example, 4 ° C.) overnight and separated. The precipitate is removed by centrifugation, and the supernatant is concentrated to obtain a dry solid (corresponding to S3). This dried product (corresponding to S2 or S3) is redissolved in an appropriate amount of an appropriate solvent (for example, hexane / ethanol (volume ratio 85/15)), for example, using a hexane / ethanol mixed solvent as an eluent. Fractionation by preparative liquid chromatography using silica gel column or alumina column. In this way, polymethoxyflavone is isolated and purified.
[0038]
The structure of the isolated and purified polymethoxyflavone is determined by analysis means commonly used by those skilled in the art, such as nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) and mass spectrometry spectrum.
[0039]
In the present invention, the isolated polymethoxyflavone may be added alone, or may be used in combination of two or more, or may be used as a mixture at the time of synthesis or as a plurality of plant extracts and the like. You may add in the form containing a natural product.
[0040]
Polymethoxyflavone is contained in the total amount of the cosmetic composition in an amount of 0.00005 to 10% by weight, preferably 0.0001 to 7% by weight, and more preferably 0.001 to 5% by weight. If it is less than 0.00005% by weight, a sufficient whitening effect cannot be obtained, and an effect of imparting tension to the skin and an effect of suppressing wrinkles cannot be obtained. Not only does it cause problems, it is also disadvantageous in terms of cost.
[0041]
Furthermore, ascorbic acid and its derivatives, kojic acid and its derivatives, hydroquinone derivatives such as arbutin, placenta extract, ellagic acid and its derivatives, which are known as whitening ingredients, are blended in the cosmetic composition of the present invention. Can do. These whitening components are preferably blended in an amount of 0.01 to 10% by weight. By using these whitening components in combination with polymethoxyflavone, the whitening effect can be synergistically enhanced.
[0042]
The cosmetic composition of the present invention is appropriately blended with bases, additives and the like commonly used in cosmetics to the extent that the performance of the cosmetic composition is not impaired. The For example, lower alcohols such as ethanol and isopropyl alcohol; polyhydric alcohols such as glycerin, 1,3-butylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol and polyethylene glycol; liquid paraffin, liquid isoparaffin, squalane, petrolatum, solid paraffin, etc. Hydrocarbon oils; natural fats and oils such as beef tallow, lard, fish oil; synthetic triglycerides such as glyceryl tri-2-ethylhexanoate; isopropyl myristate, isopropyl palmitate, cetyl palmitate, ethyl oleate, oleyl oleate, Ester oil such as octyldodecyl myristate; waxes such as beeswax and carnauba wax; linear and cyclic dimethylpolysiloxane, polyether-modified dimethylpolysiloxane, amino-modified dimethylpolysiloxane Silicone derivatives such as xanthones; oily bases such as ceramide, cholesterol, protein derivatives, lanolin, lanolin derivatives, lecithin; anionic surfactants such as soaps, acylmethyl taurate salts, amide ether sulfate salts; amide amino acid salts, Amphoteric surfactants such as amidopropyldimethylbetaine; polyoxyethylene alkyl ether, polyethylene glycol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid Nonionic surfactants such as esters, glycerin monofatty acid esters, alkylpolyglucosides, alkanolamides; cationic interfaces such as alkyltrimethylammonium chloride Semi-polar surfactant such as alkyldimethylamine oxide; water-soluble polymer such as alginic acid, carboxyvinyl polymer, carboxymethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxyethylcellulose, xanthan gum, hyaluronic acid; pyrrolidone carboxylate, citrate Organic or inorganic salts such as malate, sodium chloride; acids and alkalis that are pH adjusters; anti-inflammatory agents; bactericides, chelating agents, antioxidants, ultraviolet absorbers, natural extracts derived from animals and plants, pigments and fragrances, etc. Can be blended.
[0043]
The cosmetic composition of the present invention is preferably used in the form of lotion, milky lotion, oil-in-water cream, water-in-oil cream and the like.
[0044]
【Example】
EXAMPLES Next, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not limited by these Examples.
[0045]
(Production Example 1: Isolation of polymethoxyflavone)
10 kg of dried pericarp (herb medicine name “Kippi”) of Citrus Tachibana (Tachibana) was pulverized by a blender, and immersed and extracted for 5 days in 5% weight of 95% ethanol (first grade). The extract was filtered and concentrated under reduced pressure to obtain 550 g of a Kippi extract. This Kippi extract was dissolved in 5 times the weight of ethyl acetate, and the same amount of water as ethyl acetate was added, stirred and allowed to stand. After separation, the aqueous layer was removed (washed with water). After repeating this operation (washing with water) three times, ethyl acetate was distilled off to obtain 300 g of a dried solid product. Further, this dried product was dissolved in a double weight hexane / ethanol mixed solvent (volume ratio 85/15) to obtain a solution. A column (φ30 cm, length 1 m) packed with silica gel was charged with the entire amount of the solution. After flowing hexane having a volume twice the column volume through this column, a hexane / ethanol mixed solvent (volume ratio 90/10) was used as an eluent, and the eluate was fractionated by 1 L. Each fraction was analyzed by silica gel thin layer chromatography using a hexane / ethanol mixed solvent (volume ratio 90/10) as a developing solvent. As a result, the presence of compounds 1 to 4 was confirmed. And the fraction liquid containing each compound was united, Then, the solvent was distilled off and the compounds 1-4 were obtained. The yield of each compound was 7 g for compound 1, 63 g for compound 2, 33 g for compound 3, and 13 g for compound 4.
[0046]
About each obtained compound 1-4, it analyzed using the nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) and the mass spectrometry spectrum (MS). Of compound 2 ¹ H-NMR, ¹³ C-NMR and MS spectra are shown in FIGS. ¹ H-NMR, ¹³ C-NMR and MS spectra are shown in FIGS.
[0047]
These data and literature (Natural Medicines 51 (3), 190-193 (1997), Chem. Pharm. Bull. 37, 1092 (1989), Pharmaceutical Journal (YAKUGAKU ZASSHI) 116 (3), 244-250 (1996) And the data described in Tetrahedron, 16 (8), 64 (1964), Compound 2 is 5,6,7,8,3 ′, 4′-hexamethoxyflavone (formula (III): Compound 3 was identified as 5,6,7,8,4′-pentamethoxyflavone (formula (IV): tangerine).
[0048]
For the remaining compounds (compound 1 and compound 4), ¹ H-NMR, ¹³ C-NMR and MS spectra of the compounds of formula (III) and formula (IV) ¹ H-NMR, ¹³ Compared to C-NMR and MS spectra, the structure was determined and 3,5,6,7,8,3 ', 4'-heptamethoxyflavone (formula (II)) and 5,7, respectively. 8,3 ′, 4′-pentamethoxyflavone (formula (V)).
[0049]
(Production Example 2: Isolation of polymethoxyflavone)
10 kg of dried pericarp (herb medicine name “Kippi”) of Citrus Tachibana (Tachibana) was pulverized by a blender, and immersed and extracted for 5 days in 5% weight of 95% ethanol (first grade). The extract was filtered and concentrated under reduced pressure to obtain 560 g of a Kippi extract. To this Kippi extract, a mixed solvent of hexane / chloroform (volume ratio 1/1) was added 5 times, and stirred for about 30 minutes. Thereafter, the mixture was allowed to stand at 4 ° C. overnight, the supernatant was collected by decantation, and then the solvent was distilled off to obtain 320 g of a dried solid product. This dried product was subjected to column chromatography in the same manner as in Production Example 1 for separation and purification, and compounds 1 to 4 were collected. The yield of each compound was 6 g for compound 1, 65 g for compound 2, 35 g for compound 3, and 14 g for compound 4. As a result of analysis, compounds 1 to 4 were compounds of formula (II) to formula (V), respectively.
[0050]
(Confirmation of whitening effect-1: Confirmation of melanin suppression effect)
Using the obtained compounds of the formulas (II) to (V), the inhibitory effect of human melanoma cells (HM3KO) on melanogenesis in vitro was examined. That is, 5 × 10 5 by a conventional method ⁵ HM3KO cultured to a certain extent was collected by centrifugation to give a pellet, which was inoculated in a culture dish having a diameter of 10 cm to which an Eagle medium containing 10% fetal bovine serum had been added in advance and cultured at 37 ° C. for 24 hours. Thereafter, each of the polymethoxyflavones of the formulas (II) to (V) and, as a comparison, kojic acid or arbutin were added to a final addition concentration of 10 μM, and the cells were further cultured for 6 days. After culturing, the cells were collected by centrifugation and dissolved by adding 1 ml of 2N aqueous sodium hydroxide solution. The absorbance of the solution was measured with a spectrophotometer at a wavelength of 410 nm. Here, the absorbance of the cell lysate without addition of the sample was defined as 100% melanin production rate, and the melanin production rate was expressed as a relative value from the absorbance of each lysate. The results are shown in Table 1.
[0051]
[Table 1]

[0052]
The results in Table 1 indicate that any of the polymethoxyflavones of formulas (II) to (V) significantly suppressed the blackening of HM3KO. The effect was far superior to kojic acid and arbutin.
[0053]
(Confirmation of whitening effect-2: suppression of UV-induced pigmentation)
Inhibitory effect of UV-induced pigmentation in vivo was studied using brown guinea pigs. In other words, the back of a brown guinea pig was shaved, covered with 6 pieces of 2 × 2 cm rectangular holes with ultraviolet shielding plates and irradiated with ultraviolet rays (0.5 J / cm ² ), Pigmentation was formed. Thereafter, 40 μL of a 70% (W / W) ethanol aqueous solution containing the polymethoxyflavone of formula (III) (nobiletin) or the polymethoxyflavone of formula (IV) (tangetylene) at the concentrations shown in Table 2, respectively. It was applied twice a day. The degree of blackening before and after coating was measured with a color difference meter. The results are shown in Table 2.
[0054]
[Table 2]

[0055]
In Table 2, the degree of blackening ΔL was determined as a difference from the L value after UV irradiation by measuring the L value before UV irradiation with a dye meter and setting this to 0. The lower the value, the higher the degree of blackening.
[0056]
From Table 2, it was found that the polymethoxyflavone used in the present invention remarkably suppresses the production of brown guinea pig pigment.
[0057]
(Examples 1-4 and Comparative Examples 1-3)
Using the 5 components shown in Table 3 below as common components, a cosmetic composition that was a skin lotion containing the components shown in Table 4 was prepared. The polymethoxyflavones used are the polymethoxyflavones of formula (III) and formula (IV) isolated and purified in the production examples.
[0058]
[Table 3]

[0059]
The obtained cosmetic composition was evaluated by the following method. The results are shown in Table 4.
[0060]
(1) Whitening effect
50 women (20's to 30's) are panelists and allowed to use cosmetics twice a day for two months, and then the degree of improvement of “stains” and “sobacas” on the skin is visually examined below. Judged by the criteria of.
10 points: When clearly determined to be effective.
5 points: When judged to have some effect.
0 point: When it is judged that there is no effect at all.
An average value of 50 people was obtained, and an average value of 5 or more was evaluated as a cosmetic with a high whitening effect.
○: Whitening effect is high (average score of 5 points or more).
X: The whitening effect is low (less than 5 average points).
[0061]
(2) Skin moisture
Twenty women (22 to 32 years old) were panelists, and the skin moisture immediately after using a cosmetic after washing the face and the moisture after 2 hours were determined according to the following criteria.
2 points: When the skin feels moist enough immediately after use and the skin feels moist after 2 hours.
1 point: When the moisture of the skin immediately after use is slightly insufficient, or when it is felt that the skin after 2 hours is slightly soft.
0 point: When it feels that the moisture of the skin is insufficient.
An average value of 20 people was obtained, and an average value of 1.5 points or more was evaluated as a cosmetic having a high effect of keeping the skin moist.
○: The effect of keeping the skin moist is high (average score of 1.5 points or more).
X: The effect of keeping the skin moist is low (average point less than 1.5 points).
[0062]
(3) Skin tension
Twenty women (22 to 32 years old) were panelists, and the skin tension when using cosmetics after face washing was determined according to the following criteria.
2 points: When the skin is felt to be sticky.
1 point: When the skin is slightly felt.
0 points: When the skin feels non-sticky.
An average value of 20 people was obtained, and an average value of 1.5 points or more was evaluated as a highly effective cosmetic that gives skin.
○: High effect on skin (average of 1.5 points or more).
X: The effect which gives a skin is low (average point less than 1.5 points).
[0063]
(4) Wrinkle suppression effect
Twenty women (24 to 35 years old) were panelists, and the skin condition when cosmetics were used twice a day (morning and evening) for two consecutive weeks was determined according to the following criteria.
2 points: When wrinkles are clearly inconspicuous.
1 point: When wrinkles are slightly inconspicuous.
0 point: When there is no wrinkle suppression effect.
An average value of 20 people was obtained, and an average value of 1.5 points or more was evaluated as a cosmetic having a high wrinkle suppressing effect.
◯: The effect of suppressing wrinkles is high (average score of 1.5 points or more).
X: The effect which suppresses wrinkles is low (average point less than 1.5 points).
[0064]
(5) Stability over time
The cosmetic was sealed in a transparent glass container and stored at 0 ° C., 25 ° C., and 40 ° C. for 3 months. The appearance was observed and evaluated in the following three stages.
A: Good stability (no change in appearance at any temperature).
Δ: Slightly poor (slightly at any temperature, causing precipitation or slight coloration).
X: Stability failure (at any temperature, precipitation occurs or separates, or coloring is significant).
[0065]
The results are shown in Table 4.
[0066]
[Table 4]

[0067]
From Examples 1 to 4, the lotion containing the polymethoxyflavone of the present invention is excellent in whitening effect, kept moisturized for a long time, excellent in the effect of giving skin elasticity and wrinkle suppressing effect, and stable over time. It was also excellent. On the other hand, in Comparative Examples 1-3, sufficient performance is not obtained. That is, in Comparative Example 1, since no polymethoxyflavone is blended, there is almost no whitening effect, and in Comparative Example 2 using placenta extract (placenta extract) instead of polymethoxyflavone, the whitening effect is weak and bare. It has not been effective in suppressing moisture, skin elasticity and wrinkles. In Comparative Example 3 using ascorbate instead of polymethoxyflavone, the whitening effect is weak, the effect of suppressing moisture, skin elasticity and wrinkles is not obtained, and there is a problem in storage stability. .
[0068]
(Examples 5-7)
Using the 12 components shown in Table 5 below as common components, a whitening cosmetic composition as an oil-in-water emulsion shown in Table 8 was prepared.
[0069]
[Table 5]

[0070]
The obtained emulsion was evaluated by the same method as in Examples 1 to 4. The results are shown in Table 8.
[0071]
(Examples 8 to 9)
Using the 12 components shown in Table 6 below as a common component, a skin cosmetic composition that was an oil-in-water cream containing the components shown in Table 8 was prepared.
[0072]
[Table 6]

[0073]
The whitening effect of the obtained oil-in-water cream was evaluated by the same method as in Examples 1-4. The stability over time was evaluated by the method shown in the following (5 ′).
[0074]
(5 ') Stability over time
The state when the cosmetic was sealed in a transparent glass container and stored at −5 ° C., 25 ° C., and 45 ° C. for one month was investigated and evaluated in the following three stages.
◯: Good stability (no change in appearance at any temperature and no flaws, etc.).
Δ: Slightly inferior (slight precipitation or slight separation at any temperature, or slight bumps and lumps)
X: Stability failure (clearly precipitates or separates at any temperature.
[0075]
The results are shown in Table 8.
[0076]
(Examples 10 to 11)
Using the 12 components shown in Table 7 below as a common component, a cosmetic composition that was a water-in-oil cream containing the components shown in Table 8 was prepared.
[0077]
[Table 7]

[0078]
About the obtained water-in-oil type cream, it evaluated by the same method as Examples 8-9.
[0079]
The results are shown in Table 8.
[0080]
[Table 8]

[0081]
From Examples 5 to 7, the cosmetic composition (milky lotion) of the present invention is all excellent in whitening effect, kept moisturized for a long time, excellent in the effect of giving the skin and wrinkle suppressing effect, and stable over time. Was also shown to be excellent.
[0082]
From Examples 8 to 9, the skin cosmetic composition (cream) of the present invention is all excellent in the whitening effect, kept moist for a long time, excellent in the effect of giving the skin and wrinkle suppressing effect, and stable over time. It was also shown to be excellent.
[0083]
From Examples 10 to 11, all of the cosmetic compositions (creams) of the present invention are excellent in whitening effect, kept moist for a long time, excellent in the effect of giving the skin, and in suppressing wrinkle, and stable over time. Was also shown to be excellent.
[0084]
【Effect of the invention】
As described above, the cosmetic composition of the present invention is excellent in whitening effect and excellent in stability over time.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows a compound represented by formula (III). ¹ It is a figure which shows H-NMR.
FIG. 2 shows a compound of the formula (III) ¹³ It is a figure which shows C-NMR.
FIG. 3 is a diagram showing a mass spectrum of a compound represented by the formula (III).
FIG. 4 shows a compound represented by formula (IV). ¹ It is a figure which shows H-NMR.
FIG. 5 shows a compound represented by formula (IV). ¹³ It is a figure which shows C-NMR.
FIG. 6 is a diagram showing a mass spectrum of a compound represented by the formula (IV).

Claims

(A) 0.00005% by weight to 10% by weight of a whitening agent comprising polymethoxyflavone represented by the following formula (III) ; and (b) ascorbic acid, ascorbic acid derivative, kojic acid, kojic acid derivative, hydroquinone derivative, A cosmetic composition comprising 0.01 to 10% by weight of at least one whitening component selected from the group consisting of placenta extract, ellagic acid and ellagic acid derivatives .