JP4935173B2 - Process for preparing polyamine compositions from plants - Google Patents
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Description
本発明は、植物からポリアミン組成物を効率的に、大量に製造する方法に関する。 The present invention relates to a method for efficiently and in large quantities producing a polyamine composition from a plant.
ポリアミンは、第1級アミノ基を2つ以上もつ脂肪族炭化水素の総称で生体内に普遍的に存在する天然物であり、20種類以上のポリアミンが見いだされている。代表的なポリアミンとしてはプトレシン、スペルミジン、スペルミンがある。ポリアミンの主な生理作用としては(1)核酸との相互作用による核酸の安定化と構造変化(2)種々の核酸合成系への促進作用(3)タンパク質合成系の活性化(4)細胞膜の安定化や物質の膜透過性の強化(5)活性酸素の消去(6)細胞増殖の促進(7)抗アレルギー作用が知られている。 Polyamine is a generic term for aliphatic hydrocarbons having two or more primary amino groups, and is a natural product that exists universally in the living body, and more than 20 types of polyamines have been found. Typical polyamines include putrescine, spermidine and spermine. The main physiological functions of polyamines are as follows: (1) Stabilization and structural changes of nucleic acids by interaction with nucleic acids (2) Promotion of various nucleic acid synthesis systems (3) Activation of protein synthesis systems (4) Cell membrane Stabilization and enhancement of membrane permeability of substances (5) elimination of active oxygen (6) promotion of cell growth (7) anti-allergic action is known.
ポリアミンは、動物、植物、微生物などの生物体内に遍在する天然物であり、肉類、チーズ、発酵食品にはポリアミン含量が比較的高いが、全体的には食品中に含まれるポリアミン含量は低いレベルである。特に植物中に含まれるポリアミン濃度は生体中1g当たり数10〜数100nmolのオーダーである(非特許文献1)。これらの事情から、植物ではなく、ポリアミン濃度が高い動物関連素材からのポリアミンの調製がこれまでに検討されてきた。 Polyamines are natural products that are ubiquitous in living organisms such as animals, plants, and microorganisms. Meat, cheese, and fermented foods have a relatively high polyamine content, but overall the content of polyamines in food is low. Is a level. In particular, the concentration of polyamine contained in plants is on the order of several tens to several hundreds nmol per gram in the living body (Non-patent Document 1). Under these circumstances, the preparation of polyamines not from plants but from animal-related materials having a high polyamine concentration has been studied.
工業的に利用できるポリアミン又はポリアミン組成物の調製方法は、魚類の白子(特許文献1)、乳素材(特許文献2,特許文献3)、酵母(特許文献4,特許文献5)や化学合成(特許文献6)、酵素反応や微生物代謝による化学的合成(非特許文献2)に関して報告されている。しかし、植物由来以外からポリアミン組成物を調製する場合、化学合成や、酵素反応でポリアミン組成物を調製する場合には、安全性や収率に多くの問題や課題がある。例えば安全性の問題として化学合成で調製したポリアミン組成物は、合成反応に用いた物質や触媒の混入有無から食品用途に適用するのは極めて困難である。
The methods for preparing industrially available polyamines or polyamine compositions include fish larvae (Patent Literature 1), milk materials (Patent Literature 2 and Patent Literature 3), yeast (
植物からのポリアミン又はポリアミン組成物の調製方法に関する報告はない。ポリアミンは非常に不安定、かつポリアミン酸化酵素によって分解されやすく、ポリアミン又はポリアミン組成物を大量に調製することは困難であった。植物は、強固な細胞壁を持つことから細胞内に存在するポリアミン又はポリアミン組成物を回収するためには、ポリアミン又はポリアミン組成物が分解されない安定な条件下で細胞壁に損傷を与える必要があった。さらに、植物及び/又は植物抽出物中には大量の多糖類、ポリフェノール、二次代謝産物等の不純物が含まれており、これらの不純物がポリアミン又はポリアミン組成物の回収を阻害する大きな要因となっていた。
近年、ポリアミンは、様々な生理作用が解明されることでその重要性が高まっている。ポリアミン又はポリアミン組成物は、健康、化粧品、食品、医薬品用途に利用されつつある。しかし、ポリアミン又はポリアミン組成物を調製するための十分な方法は確立されていなかった。特に、植物からのポリアミン又はポリアミン組成物の調製方法は今まで確立されていなかった。 In recent years, the importance of polyamines has increased due to elucidation of various physiological actions. Polyamines or polyamine compositions are being used for health, cosmetics, food and pharmaceutical applications. However, a sufficient method for preparing polyamines or polyamine compositions has not been established. In particular, the preparation method of the polyamine or polyamine composition from a plant has not been established until now.
本発明の目的は、安全性が高い植物素材から高収率でポリアミン又はポリアミン組成物を調製する方法を提供することである。 An object of the present invention is to provide a method for preparing a polyamine or a polyamine composition in a high yield from a plant material with high safety.
本発明者らは上記の目的を達成すべく鋭意努力した結果、植物から健康、化粧品、食品、医薬品用途に利用可能なポリアミン又はポリアミン組成物を効率的に、大量に調製する方法を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のような構成からなる。 As a result of diligent efforts to achieve the above object, the present inventors have found a method for efficiently and in large quantities preparing a polyamine or a polyamine composition that can be used from plants for health, cosmetics, food, and pharmaceutical applications. The invention has been completed. That is, the present invention has the following configuration.
1.(1)植物及び/又は植物抽出物を酸性条件下に処す工程と、(2)液体画分を分離する工程とを含むことを特徴とするポリアミン組成物の調製方法。
2.鉱酸及び/又は有機酸を含む酸溶液を添加し酸性条件下に処すことを特徴とする1のポリアミン組成物の調製方法。
3.鉱酸及び/又は有機酸が、塩酸、硫酸、硝酸、酢酸、リン酸、トリクロロ酢酸、過塩素酸、クエン酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸、蓚酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、安息香酸、スルホサリチル酸及びギ酸よりなる群から選ばれた少なくとも1種以上の酸であることを特徴とする2のポリアミン組成物の調製方法。
4.酸性条件下になるように添加する酸溶液が、塩酸及び/又は過塩素酸であることを特徴とする1〜3のいずれかのポリアミン組成物の調製方法。
5.植物及び/又は植物抽出物を酸性条件下に処すと同時又は後に、ポリフェノール吸着剤を添加し、液体画分を分離することを特徴とする1〜4のいずれかのポリアミン組成物の調製方法。
6.植物及び/又は植物抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも1種以上であることを特徴とする1〜5のいずれかのポリアミン組成物の調製方法。
7.ポリアミン組成物が、1,3−ジアミノプロパン、プトレシン、カダベリン、カルジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、アミノプロピルカダベリン、テルミン、スペルミン、テルモスペルミン、カナバルミン、アミノペンチルノルスペルミジン、N,N−ビス(アミノプロピル)カダベリン、ホモスペルミン、カルドペンタミン、ホモカルドペンタミン、カルドヘキサミン及びホモカルドヘキサミンよりなる群から選ばれた少なくとも1種以上の化合物を含むことを特徴とする1〜6のいずれかのポリアミン組成物の調製方法。
8.ポリアミン組成物が、プトレシン、カダベリン、スペルミジン及びスペルミンからなる群から選ばれた少なくとも1種以上の化合物を含むことを特徴とする1〜7のいずれかのポリアミン組成物の調製方法。
9.液体画分を分離する工程が、遠心分離及び/又は濾過分離であることを特徴とする1〜8のいずれかのポリアミン組成物の調製方法。
10.1〜9のいずれかの調製方法によって回収されたポリアミン組成物を、さらにイオン交換法、ゲル濾過法、膜分画法及び電気透析法よりなる群から選ばれた少なくとも1種以上の処理により精製することを特徴とするポリアミン組成物の調製方法。
1. (1) A method for preparing a polyamine composition, comprising: treating a plant and / or plant extract under acidic conditions; and (2) separating a liquid fraction.
2. 1. A method for preparing a polyamine composition according to 1, wherein an acid solution containing a mineral acid and / or an organic acid is added and treated under acidic conditions.
3. Mineral acid and / or organic acid is hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, acetic acid, phosphoric acid, trichloroacetic acid, perchloric acid, citric acid, lactic acid, propionic acid, butyric acid, succinic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid 2. A method for preparing a polyamine composition according to 2, wherein the polyamine composition is at least one acid selected from the group consisting of malic acid, tartaric acid, benzoic acid, sulfosalicylic acid and formic acid.
4). The method for preparing a polyamine composition according to any one of 1 to 3, wherein the acid solution added so as to be in an acidic condition is hydrochloric acid and / or perchloric acid.
5. The method for preparing a polyamine composition according to any one of 1 to 4, wherein a polyphenol adsorbent is added and a liquid fraction is separated simultaneously with or after the plant and / or plant extract is treated under acidic conditions.
6). The plant and / or plant extract is at least one selected from the group consisting of soybean seed, soybean germ, soybean embryo, wheat seed, wheat germ, wheat embryo, soy milk and okara 1 to 6. The method for preparing a polyamine composition according to any one of 5 above.
7). The polyamine composition is 1,3-diaminopropane, putrescine, cadaverine, cardine, spermidine, homospermidine, aminopropyl cadaverine, theremin, spermine, thermospermine, canabalmine, aminopentylnorspermidine, N, N-bis (aminopropyl) 1. The polyamine composition according to any one of 1 to 6, comprising at least one compound selected from the group consisting of cadaverine, homospermine, cardopentamine, homocardopentamine, cardohexamine and homocardohexamine. Preparation method.
8). The polyamine composition comprises at least one compound selected from the group consisting of putrescine, cadaverine, spermidine, and spermine.
9. The method for preparing a polyamine composition according to any one of 1 to 8, wherein the step of separating the liquid fraction is centrifugation and / or filtration separation.
At least one treatment selected from the group consisting of an ion exchange method, a gel filtration method, a membrane fractionation method, and an electrodialysis method is further applied to the polyamine composition recovered by any one of the preparation methods of 10.1 to 9. A method for preparing a polyamine composition, characterized by being purified by the method.
本発明により、植物素材から高収率でポリアミン又はポリアミン組成物を大量に調製する方法を提供することが可能になった。 According to the present invention, it has become possible to provide a method for preparing a large amount of a polyamine or a polyamine composition in high yield from a plant material.
本発明において「植物及び/又は植物抽出物」とは、種々の植物、植物抽出物であり、特に限定されるものではないが、例えば双子葉植物、単子葉植物、草本性植物、木本性植物、ウリ科植物、ナス科植物、イネ科植物、アブラナ科植物、マメ科植物、アオイ科植物、キク科植物、アカザ科植物、マメ科の植物、該植物抽出物、該植物エキスなどが挙げられる。例えば、サツマイモ、トマト、キュウリ、カボチャ、メロン、スイカ、タバコ、シロイヌナズナ、ピーマン、ナス、マメ、サトイモ、ホウレンソウ、ニンジン、イチゴ、ジャガイモ、イネ、トウモロコシ、アルファルファ、コムギ、オオムギ、ダイズ、ナタネ、ソルガム、ユーカリ、ポプラ、ケナフ、杜仲、サトウキビ、シュガービート、キャッサバ、サゴヤシ、アカザ、ユリ、ラン、カーネーション、バラ、キク、ペチュニア、トレニア、キンギョソウ、シクラメン、カスミソウ、ゼラニウム、ヒマワリ、シバ、ワタ、エノキダケ、ホンシメジ、マツタケ、シイタケ、キノコ類、チョウセンニンジン、アガリクス、ウコン、オタネニンジン、柑橘類、緑茶、紅茶、ウーロン茶、バナナ、キウイ、納豆、豆乳、ダイズエキス、コムギエキス、胚芽エキス、胚エキス、果汁、オカラ、コメ胚芽、コムギ胚芽、オオムギ胚芽、ダイズ胚芽、トウモロコシ胚芽、マイロ胚芽、ヒマワリ胚芽などが挙げられる。
好ましくは、単子葉植物や双子葉植物がよく、さらに好ましくはイネ科植物やマメ科植物がよく、特に好ましくは、トウモロコシ、キノコ類、ダイズ、コムギ、納豆、豆乳、オカラ、コムギ胚芽、ダイズ胚芽、トウモロコシ胚芽、ダイズエキス、コムギエキス、胚芽エキス、胚エキスがよい。特に国民一人・1年当たり供給純食料が多い植物、例えば、平成15年度で年間6.7kgのダイズ、平成15年度で年間32.6kgのコムギなどからポリアミン又はポリアミン組成物を回収してもよい。
In the present invention, “plants and / or plant extracts” are various plants and plant extracts, and are not particularly limited. For example, dicotyledonous plants, monocotyledonous plants, herbaceous plants, and woody plants. Cucurbitaceae plant, solanaceous plant, gramineous plant, cruciferous plant, legume plant, mallow plant, asteraceae plant, red plant plant, legume plant, plant extract, plant extract, etc. . For example, sweet potato, tomato, cucumber, pumpkin, melon, watermelon, tobacco, Arabidopsis, pepper, eggplant, bean, taro, spinach, carrot, strawberry, potato, rice, corn, alfalfa, wheat, barley, soybean, rapeseed, sorghum, Eucalyptus, poplar, kenaf, Tochu, sugar cane, sugar beet, cassava, sago palm, red pepper, lily, orchid, carnation, rose, chrysanthemum, petunia, torenia, snapdragon, cyclamen, gypsophila, geranium, sunflower, shiba, cotton, enoki mushroom , Matsutake, shiitake mushrooms, ginseng, agaricus, turmeric, ginseng, citrus, green tea, tea, oolong tea, banana, kiwi, natto, soy milk, soybean extract, wheat extract, Bud extract, embryo extract, fruit juice, Ocala, rice germ, wheat germ, barley germ, soybean germ, corn germ, milo germ, such as sunflower germ, and the like.
Preferred are monocotyledonous plants and dicotyledonous plants, more preferred are grasses and legumes, and particularly preferred are corn, mushrooms, soybean, wheat, natto, soy milk, okara, wheat germ, soybean germ. Corn germ, soybean extract, wheat extract, germ extract, embryo extract are preferred. In particular, polyamines or polyamine compositions may be recovered from plants with a large amount of net food per person per year, for example, 6.7 kg of soybean per year in 2003, 32.6 kg of wheat per year in 2003.
ポリアミン組成物を回収する植物組織としては、特に限定はされない。好ましくは、種子形態、生育過程にあるものである。生育過程にある植物は全体、あるいは部分的な組織から回収することができる。回収できる部位としては、特に限定されないが全樹、花、蕾、子房、果実、葉、子葉、茎、芽、根、種子、乾燥種子、胚、胚芽、根などである。好ましくは、果実、葉、茎、芽、種子、乾燥種子、胚芽、胚であり、特に好ましくは、種子、乾燥種子、胚芽、胚などである。 The plant tissue for recovering the polyamine composition is not particularly limited. Preferably, the seed is in the form of seed or growth process. Plants in the process of growing can be recovered from whole or partial tissues. Although it does not specifically limit as a site | part which can be collect | recovered, a whole tree, a flower, a cocoon, an ovary, a fruit, a leaf, a cotyledon, a stem, a bud, a root, a seed, a dry seed, an embryo, an embryo, a root, etc. Preferred are fruits, leaves, stems, buds, seeds, dried seeds, embryos, embryos, and particularly preferred are seeds, dried seeds, germs, embryos, and the like.
本発明において重要な開示の一つは、精製工程において、植物及び/又は植物抽出物に、酸性条件下になるように酸溶液を添加することにある。発明者らは、この工程によりポリアミンが高度に安定に精製できることを見いだした。 One of the important disclosures in the present invention is to add an acid solution to the plant and / or plant extract so as to be in an acidic condition in the purification step. The inventors have found that polyamines can be highly stably purified by this process.
本発明において「酸性条件下」とは、pHが6以下の条件をいう。精製時に、pHを酸性条件下にすることにより、植物組織から効率的かつ安定的なポリアミン組成物回収の効果が得られる。この効果は、pHが6以下であれば一様に得られるが、好ましくはpHが4以下であり、特に好ましくはpHが2以下などである。下限については、使用する酸溶液の原液のpHで構わないので、特に制限されないが、好ましくは、pH0〜2である。 In the present invention, “under acidic conditions” refers to conditions under which the pH is 6 or less. By effecting the pH under acidic conditions during purification, an efficient and stable polyamine composition recovery effect can be obtained from plant tissue. This effect is uniformly obtained as long as the pH is 6 or less, but is preferably 4 or less, particularly preferably 2 or less. The lower limit is not particularly limited because it may be the pH of the stock solution of the acid solution to be used, but is preferably pH 0-2.
本願発明の「植物抽出物」とは植物から得られる物又はその加工物をいう。その調製方法とは、植物を水、有機溶媒、水と有機溶媒の混合物などを用いて、低温、室温、加温条件下での含浸法、蒸留法、圧搾法、超音波法、超臨界流体法、亜臨界流体法などで抽出物を回収する。さらに植物や植物から回収した抽出物を発酵させるなどの加工処理した加工物なども含まれる。例えば植物エキス、豆乳、オカラ、小麦粉、発酵エキス、納豆などが挙げられる。 The “plant extract” of the present invention refers to a product obtained from a plant or a processed product thereof. The preparation method is impregnation method under low temperature, room temperature and warm condition using water, organic solvent, mixture of water and organic solvent, distillation method, pressing method, ultrasonic method, supercritical fluid The extract is recovered by the method or subcritical fluid method. Furthermore, the processed material etc. which fermented the extract collect | recovered from the plant and the plant are included. For example, plant extracts, soy milk, okara, wheat flour, fermented extract, natto and the like can be mentioned.
酸性条件下になるように添加する酸溶液としては、塩酸、硫酸、リン酸などの鉱酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、蓚酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸などの有機酸および酸性水が挙げられるが、0.01N〜6Nの塩酸、硫酸、硝酸、酢酸、リン酸、トリクロロ酢酸、スルホサリチル酸、ギ酸、クエン酸、乳酸や0.1〜10%の過塩素酸などの無機酸や有機酸などである。好ましくは、0.0625〜1Nの塩酸、0.25〜5%の過塩素酸などである。 Acid solutions to be added under acidic conditions include mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, propionic acid, butyric acid, succinic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, malic acid, lactic acid Organic acids such as tartaric acid, citric acid, benzoic acid and acidic water, but 0.01N to 6N hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, acetic acid, phosphoric acid, trichloroacetic acid, sulfosalicylic acid, formic acid, citric acid, lactic acid, Inorganic acids such as 0.1 to 10% perchloric acid and organic acids. Preferred are 0.0625 to 1N hydrochloric acid, 0.25 to 5% perchloric acid, and the like.
本発明において重要な開示の別の一つは、精製工程において、「ポリフェノール吸着剤」を添加することにある。ポリフェノール吸着剤の添加により、ポリアミン又はポリアミン組成物の回収を容易ならしめることを見いだした。 Another important disclosure in the present invention is to add a “polyphenol adsorbent” in the purification step. It has been found that the addition of a polyphenol adsorbent facilitates the recovery of the polyamine or polyamine composition.
本発明において「ポリフェノール吸着剤」とは、ポリフェノール類を吸着出来る物質であれば、特に限定はされないが、PVPP(ポリビニルポリピロリドン)、PVP(ポリビニルピロリドン)、PEG(ポリエチレングリコール)等が好ましく使用される。特に好ましくは、PVPP(ポリビニルポリピロリドン)である。これらのポリフェノール吸着剤は市販の物質を使用してもよい。たとえば、ポリクラール(登録商標)、POLYCLAR(登録商標)(アイエスピー社製)、Dowex(登録商標)−1、PVP−40等を使用しても良い。植物及び/又は植物抽出物に酸溶液を添加した後にポリフェノール吸着剤を添加することで、ポリアミン組成物の回収量、収率、純度が高まることが期待できる。
ポリフェノール吸着剤の添加量は、好ましくは0.1〜30%(w/v)、より好ましくは0.5〜20%(w/v)、さらに好ましくは、1〜10%(w/v)である。
In the present invention, the “polyphenol adsorbent” is not particularly limited as long as it is a substance capable of adsorbing polyphenols, but PVPP (polyvinyl polypyrrolidone), PVP (polyvinyl pyrrolidone), PEG (polyethylene glycol) and the like are preferably used. The Particularly preferred is PVPP (polyvinyl polypyrrolidone). These polyphenol adsorbents may use commercially available materials. For example, Polyclar (registered trademark), POLYCLAR (registered trademark) (manufactured by IS Corporation), Dowex (registered trademark) -1, PVP-40, or the like may be used. By adding a polyphenol adsorbent after adding an acid solution to a plant and / or plant extract, it can be expected that the recovered amount, yield, and purity of the polyamine composition are increased.
The amount of polyphenol adsorbent added is preferably 0.1 to 30% (w / v), more preferably 0.5 to 20% (w / v), still more preferably 1 to 10% (w / v). It is.
植物及び/又は植物抽出物に、酸性条件下になるように酸溶液を添加又は酸性条件下になるように酸溶液を添加した後にポリフェノール吸着剤を添加した後に破砕、粉砕、混合をおこなうことでポリアミン組成物の回収量を高めることができる。特に植物組織の場合は細胞壁を有することから細胞壁に損傷を与えることが望ましい。植物抽出液や植物エキスの場合は細胞壁を含まないことから特に細胞壁に損傷を与えるような破砕や粉砕を行う必要はない。破砕や粉砕を行う方法としては、例えば、ミキサー、ブレンダー、ホモジナイザー、乳鉢、超音波破砕機などを利用することができる。 By crushing, crushing, and mixing the plant and / or plant extract after adding the acid solution to the acidic condition or adding the acid solution to the acidic condition and then adding the polyphenol adsorbent The recovery amount of the polyamine composition can be increased. Particularly in the case of plant tissue, it is desirable to damage the cell wall because it has a cell wall. In the case of a plant extract or plant extract, it does not need to be crushed or crushed so as to damage the cell wall because it does not contain the cell wall. As a method for performing crushing or crushing, for example, a mixer, a blender, a homogenizer, a mortar, an ultrasonic crusher, or the like can be used.
植物及び/又は植物抽出物に含まれていたポリアミンを酸溶液中(液体画分)に十分に抽出した後に遠心分離や濾過分離によって液体画分を残査や沈殿と分離する。回収された液体画分にはポリアミンが多く含まれており「ポリアミン組成物」として得た。 After sufficiently extracting the polyamine contained in the plant and / or plant extract into the acid solution (liquid fraction), the liquid fraction is separated from the residue and precipitate by centrifugation or filtration. The recovered liquid fraction contained a large amount of polyamine and was obtained as a “polyamine composition”.
本発明において「ポリアミン」とは、第1級アミノ基を2つ以上もつ脂肪族炭化水素の総称で生体内に普遍的に存在する天然物であり、20種類以上のポリアミンが見いだされている。例えば、1,3−ジアミノプロパン、プトレシン、カダベリン、カルジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、アミノプロピルカダベリン、テルミン、スペルミン、テルモスペルミン、カナバルミン、アミノペンチルノルスペルミジン、N,N−ビス(アミノプロピル)カダベリン、ホモスペルミン、カルドペンタミン、ホモカルドペンタミン、カルドヘキサミン、ホモカルドヘキサミンなどが挙げられる。代表的なポリアミンとしてはプトレシン、スペルミジン、スペルミンがある。 In the present invention, “polyamine” is a general term for aliphatic hydrocarbons having two or more primary amino groups, and is a natural product that exists universally in the living body, and more than 20 types of polyamines have been found. For example, 1,3-diaminopropane, putrescine, cadaverine, cardine, spermidine, homospermidine, aminopropyl cadaverine, theremin, spermine, thermospermine, canabalmin, aminopentylnorspermidine, N, N-bis (aminopropyl) cadaverine, homo Examples include spermine, cardopentamine, homocardopentamine, cardohexamine, and homocardohexamine. Typical polyamines include putrescine, spermidine and spermine.
本発明で言うところの「プトレシン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を2つもつ脂肪族炭化水素化合物である。「カダベリン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を2つもつ脂肪族炭化水素化合物である。「スペルミジン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を3つもつ脂肪族炭化水素化合物である。「スペルミン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を4つもつ脂肪族炭化水素化合物である。 In the present invention, “putrescine” is one of typical polyamines and is a general natural product that exists universally in living organisms, and is an aliphatic hydrocarbon compound having two primary amino groups. . “Cadaverine” is one of the typical polyamines and is a general natural product that exists universally in living organisms, and is an aliphatic hydrocarbon compound having two primary amino groups. “Spermidine” is one of the typical polyamines and is a general natural product ubiquitously present in living organisms, and is an aliphatic hydrocarbon compound having three primary amino groups. “Spermine” is one of the typical polyamines and is a general natural product universally present in living organisms, and is an aliphatic hydrocarbon compound having four primary amino groups.
必要に応じてポリアミン組成物は、イオン交換法、膜分画法、ゲル濾過法、電気透析法で脱塩処理や精製処理を行っても良く、これらの方法を少なくとも1つ以上実施することで、より高純度なポリアミン組成物を得ることができる。例えば、イオン交換法としては、ポリアミン溶液をイオン交換樹脂を充填したカラムに通し、ポリアミンとアミノ酸、ペプチド、蛋白質、糖類等の夾雑物とを分離する。使用するイオン交換樹脂としては、イオン交換基がスルホン酸基、スルホプロピル基、リン酸基、カルボキシルメチル基、アミノエチル基、ジエチルアミノ基、4級アミノエチル基、4級アンモニウム基等であればよく、陽イオン交換樹脂でも陰イオン交換樹脂でもいずれも使用することができる。陽イオン交換樹脂を使用した場合には、ポリアミンは陽イオン交換樹脂に吸着されるので、非吸着物質を十分に分離した後、硫酸、塩酸等の酸性溶液や塩化ナトリウム等の塩溶液でポリアミンを溶出する。陰イオン交換樹脂を使用した場合には、ポリアミンは陰イオン交換樹脂に吸着されないので、ポリアミンを含む非吸着画分を回収する。例えば、膜分画法としては、セルロース系、酢酸セルロース系、ポリスルホン系、ポリアミド系、ポリアクリルニトリル系、ポリ四フッ化エチレン系、ポリエステル系、ポリプロピレン系等で分画分子量が1000〜100000の範囲の限外濾過(UF)膜を使用してポリアミン組成物のUFを行い、ポリアミンを含む透過液を回収する。また、食塩阻止率30〜80%のナノフィルトレーション (NF) 膜を使用してポリアミン溶液のNFを行い、脱塩する。例えば、ゲル濾過法は、ポリアミン組成物を中和し、ゲル濾過担体を充填したカラムに通して分子量分画によりポリアミンを回収する。使用するゲル濾過担体は、デキストラン系、アクリルアミド系、アガロース系、セルロース系、ポリビニル系、ガラス系、ポリスチレン系などで分画分子量が100〜100000の範囲である。例えば、電気透析法は、陽イオン交換膜と陰イオン交換膜とによって仕切られた各膜間にポリアミン組成物と食塩水とを交互に供給して電気透析を行う。電気透析の条件は、初期電流密度が 0.5〜15A/dm2、電圧が 0.1〜1.5V/槽などが挙げられる。
If necessary, the polyamine composition may be subjected to desalting treatment or purification treatment by ion exchange method, membrane fractionation method, gel filtration method, electrodialysis method, and by carrying out at least one of these methods. A higher purity polyamine composition can be obtained. For example, as an ion exchange method, a polyamine solution is passed through a column packed with an ion exchange resin to separate the polyamine from impurities such as amino acids, peptides, proteins, and sugars. As the ion exchange resin to be used, the ion exchange group may be a sulfonic acid group, sulfopropyl group, phosphoric acid group, carboxylmethyl group, aminoethyl group, diethylamino group, quaternary aminoethyl group, quaternary ammonium group, etc. Either a cation exchange resin or an anion exchange resin can be used. When a cation exchange resin is used, the polyamine is adsorbed on the cation exchange resin. Therefore, after sufficiently separating non-adsorbed substances, the polyamine is removed with an acidic solution such as sulfuric acid or hydrochloric acid, or a salt solution such as sodium chloride. Elute. When an anion exchange resin is used, the polyamine is not adsorbed on the anion exchange resin, and thus the non-adsorbed fraction containing the polyamine is collected. For example, as a membrane fractionation method, cellulose, cellulose acetate, polysulfone, polyamide, polyacrylonitrile, polytetrafluoroethylene, polyester, polypropylene and the like have a fractional molecular weight in the range of 1000 to 100,000. The polyamine composition is subjected to UF using an ultrafiltration (UF) membrane, and the permeate containing the polyamine is recovered. Further, NF of the polyamine solution is performed using a nanofiltration (NF) membrane having a salt rejection rate of 30 to 80% for desalting. For example, in the gel filtration method, the polyamine composition is neutralized and passed through a column packed with a gel filtration carrier to recover the polyamine by molecular weight fractionation. The gel filtration carrier used is a dextran-based, acrylamide-based, agarose-based, cellulose-based, polyvinyl-based, glass-based, polystyrene-based, or the like with a molecular weight cut-off in the range of 100 to 100,000. For example, in electrodialysis, electrodialysis is performed by alternately supplying a polyamine composition and saline between each membrane partitioned by a cation exchange membrane and an anion exchange membrane. The electrodialysis conditions include an initial current density of 0.5 to 15 A / dm 2 and a voltage of 0.1 to 1.5 V / tank.
本発明で回収されたポリアミン組成物は、医薬部外品類、皮膚・頭髪用化粧品類、飲食品類、医薬品類、動物飼料などに配合して用いることができる。 The polyamine composition recovered in the present invention can be used in combination with quasi drugs, cosmetics for skin and hair, foods and drinks, pharmaceuticals, animal feeds and the like.
具体的には化粧品類、医薬部外品類としては、例えば内用・外用薬用製剤、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パックなどの基礎化粧料、洗顔料や皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料などの頭髪化粧料、育毛養毛剤、ファンデーション、白粉、おしろい、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨、まつ毛などのメークアップ化粧料、美爪料などの仕上げ用化粧料、香水類、浴用剤、その他、歯磨き類、口中清涼剤・含嗽剤、液臭・防臭防止剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュなどが挙げられる。 Specific examples of cosmetics and quasi-drugs include basic cosmetics such as internal and external pharmaceutical preparations, lotions, emulsions, creams, ointments, lotions, oils, packs, facial cleansers, skin cleansers, shampoos, etc. Hair conditioner, rinse, hair treatment, hair cream, pomade, hair spray, hair conditioner, permanent agent, hair nick, hair dye, hair restorer, hair restorer, hair restorer, foundation, white powder, funny, lipstick, blusher, eye Makeup cosmetics such as shadows, eyeliner, mascara, eyebrows and eyelashes, cosmetics for finishing such as nail care, perfumes, bath preparations, toothpastes, mouth fresheners, gargles, liquid odors and deodorants Agents, sanitary products, sanitary cotton, and wet tissue.
飲食品類としては、例えば清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓、そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類、飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類、カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品、加工乳、乳児用調製粉乳、育児用粉乳、離乳食、発酵乳等の乳製品、サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品、ソース、たれ等の調味料、カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品、種々の形態の健康・栄養補助食品、保健機能食品、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチなどが挙げられる。 Examples of foods and beverages include soft drinks, carbonated drinks, nutrition drinks, fruit drinks, lactic acid drinks, ice cream, ice sherbet, shaved ice and other frozen desserts, buckwheat, udon, harsame, gyoza skin, shumai skin, chinese food Noodles such as noodles, instant noodles, candy, candy, gum, chocolate, tablet confectionery, snack confectionery, biscuits, jelly, jam, cream, baked confectionery, bakery confectionery, crab, salmon, clams, tuna, sardines, shrimp, Skipjack, mackerel, whale, oyster, saury, squid, red scallop, scallop, abalone, sea urchin, salmon roe, tofubushi and other marine products, fishery products such as kamaboko, ham, sausage, processed milk, infant formula, infant formula Milk products such as milk powder, baby food, fermented milk, salad oil, tempura oil, margarine, mayonnaise, shortening, whipped cream , Oils and fats such as dressings, processed foods such as sauces, sauces, sauces, curry, stew, oyakodon, rice bowls, miscellaneous cooking, Chinese rice bowls, and rice bowls, tempura, eel rice, hayashi rice, oden, mabodorf, beef bowl, meat sauce , Egg soup, omelet rice, dumplings, shumai, hamburger, meatballs and other retort pouch foods, various forms of health and nutritional supplements, health functional foods, tablets, capsules, drinks, troches and the like.
本発明で回収されたポリアミン組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が期待できる限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。 The polyamine composition recovered in the present invention is suitably applied to humans, but can also be applied to animals other than humans as long as each effect can be expected.
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。 EXAMPLES The present invention will be described more specifically with reference to the following examples. However, these are merely examples and do not limit the scope of the present invention.
(ポリアミン分析方法)
植物又は/及び植物抽出物として、葉、茎、根、種子、果実、胚、胚芽、豆乳、納豆、オカラなどに含まれるポリアミン含量を調べることができる。ポリアミンは遊離型ポリアミン、化合型ポリアミン、結合型ポリアミンがあり抽出方法は異なるがいずれも解析することができる(Plant Cell Physiol., 43(2), 196-206, 2002)。具体例として種子の遊離型ポリアミンの分析方法について詳細に示す。約0.1〜1.0gのダイズ種子に希釈内部標準液(1,6−hexanediamine、又は1,7−diaminoheptane、内部標準量=7.5〜48nmol)と5%過塩素酸水溶液(試料生体重1.0g当たり5〜20ml)を加え、ポリトロンミキサーを用いて室温下で十分に磨砕抽出する。磨砕液を、4℃・35,000×gで20分間遠心分離して上清液を採取し本液を遊離型ポリアミン溶液とする。スクリューキャップ付きのマイクロチューブに100〜400μlの遊離型ポリアミン溶液(ポリアミン組成物,精製ポリアミン組成物)、200μlの飽和炭酸ナトリウム水溶液、200μlのダンシルクロライド/アセトン溶液(10mg/ml)を加えて軽く混和する。チューブの栓をしっかりと閉めたのちアルミ箔で覆い、60℃のウォーターバスで1時間加温してダンシル化を行う。チューブを放冷した後、プロリン水溶液(100mg/ml)を200μl加えて混和する。アルミ箔で覆ってウォーターバスで30分間再加温する。放冷後、窒素ガスを吹き付けてアセトンを除いた後に、600μlのトルエンを加えて激しく混和する。チューブを静置して2相に分かれた後に、上層のトルエン層を300μlマイクロチューブに分取する。分取したトルエンに窒素ガスを吹き付けてトルエンを完全除去する。チューブに200μlのメタノールを加えてダンシル化遊離型ポリアミンを溶解させる。プトレシン、スペルミジン、スペルミンの遊離型ポリアミン量の定量は蛍光検出器(励起波長:365nm・発光波長:510nm)を接続した高速液体クロマトグラフィーを用いて内部標準法で分析する。HPLCカラムはμBondapak C18(Waters社製:027324、3.9×300mm、粒子径10μm)を使用する。試料中のポリアミン含量は標準液と試料のHPLCチャートから、それぞれ各ポリアミンと内部標準のピーク面積を求めて算出する。
(Polyamine analysis method)
The content of polyamines contained in leaves, stems, roots, seeds, fruits, embryos, embryos, soy milk, natto, okara, etc. can be examined as plants or / and plant extracts. Polyamines include free polyamines, compound polyamines, and conjugated polyamines, which can be analyzed with different extraction methods (Plant Cell Physiol., 43 (2), 196-206, 2002). As a specific example, a method for analyzing seed free polyamine will be described in detail. About 0.1 to 1.0 g of soybean seeds were diluted with an internal standard solution (1,6-hexaneamine or 1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 7.5 to 48 nmol) and a 5% aqueous perchloric acid solution (sample raw 5-20 ml per 1.0 g body weight) and thoroughly triturate and extract at room temperature using a Polytron mixer. The grinding solution is centrifuged at 4 ° C., 35,000 × g for 20 minutes to collect the supernatant, and this solution is used as a free polyamine solution. Add 100-400 μl of free polyamine solution (polyamine composition, purified polyamine composition), 200 μl of saturated sodium carbonate aqueous solution, 200 μl of dansyl chloride / acetone solution (10 mg / ml) to a microtube with a screw cap and mix gently. To do. After tightly closing the stopper of the tube, it is covered with aluminum foil and heated in a water bath at 60 ° C. for 1 hour for dansylation. After allowing the tube to cool, add 200 μl of an aqueous proline solution (100 mg / ml) and mix. Cover with aluminum foil and reheat in water bath for 30 minutes. After cooling, nitrogen gas is blown to remove acetone, and then 600 μl of toluene is added and mixed vigorously. After the tube is allowed to stand to separate into two phases, the upper toluene layer is dispensed into 300 μl microtubes. Nitrogen gas is blown onto the collected toluene to completely remove the toluene. 200 μl of methanol is added to the tube to dissolve the dansylated free polyamine. The amount of free polyamines of putrescine, spermidine, and spermine is analyzed by an internal standard method using high-performance liquid chromatography connected to a fluorescence detector (excitation wavelength: 365 nm, emission wavelength: 510 nm). As the HPLC column, μ Bondapak C18 (manufactured by Waters: 0273324, 3.9 × 300 mm,
(実施例1)ダイズ種子からのポリアミン組成物の調製
100gのダイズ種子(品種‘フクユタカ’)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=1200nmol)と480mlの5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で一晩放置した。その後、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を16g添加し、ブレンダーミキサーでダイズ種子を十分に破砕後、室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで20分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが8.2mg、スペルミジンが12.4mg、スペルミンが6.1mg含まれており、合計で26.7mgであった。さらに回収したポリアミン組成物を陽イオン交換樹脂(AG 50W-X4, 200-400mesh, H+型, バイオラッド社製)で充填したカラムに通し、ポリアミンを樹脂に吸着させた。0.7N NaCl/0.1Mリン酸ナトリウム溶液(pH8.0)、水、1N塩酸を順次流してカラムを洗浄した。不純物を除去した後に、6N塩酸でポリアミンを溶出して30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を精製ポリアミン粗成物とした。精製ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが6.4mg、スペルミジンが10.4mg、スペルミンが5.1mg含まれており、合計で21.9mgであった。ポリアミン組成物と精製ポリアミン組成物のHPLC分析のチャート図を図1に示した。プトレシン(検出時間:10.173分・10.175分)、カダベリン(検出時間:10.903分・10.890分)、スペルミジン(検出時間:16.050分・16.137分)、スペルミン(検出時間:20.100分・20.225分)のシャープな単一ピークがいずれの組成物においても検出された。ポリアミン以外の不純物ピークはほとんど検出されず、明らかにポリアミン組成物は高純度であり、ポリアミンが主成分であることが確認された。ポリアミン純度をHPLC分析のピーク面積から算出したところ、ポリアミン組成物は80〜86%、精製ポリアミン組成物は88〜93%であった。ポリアミン組成物が高純度である理由は、ポリフェノール吸着剤を添加し、酸条件下で抽出することで種子タンパク質などの不純物を変性及び吸着除去していることが大きく影響している。精製ポリアミン組成物は電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。
(Example 1) Preparation of polyamine composition from soybean seeds 100 g soybean seed (variety 'Fukuyutaka') diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 1200 nmol) and 480
100gのダイズ種子(品種‘フクユタカ’)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=1200nmol)と500mlの1N塩酸溶液を加えて低温(4℃)下で一晩放置した。その後、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を16g添加し、ブレンダーミキサーでダイズ種子を十分に破砕後、低温(4℃)下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで20分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが4.1mg、スペルミジンが9.1mg、スペルミンが2.9mg含まれており、合計で16.1mgであった。 Diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 1200 nmol) and 500 ml of 1N hydrochloric acid solution were added to 100 g of soybean seeds (variety 'Fukuyutaka') and allowed to stand overnight at low temperature (4 ° C.). Thereafter, 16 g of polyphenol VT (made by ISP), a polyphenol adsorbent, was added, and the soybean seeds were sufficiently crushed with a blender mixer, and then allowed to stand at low temperature (4 ° C.) for 30 minutes to form a polyamine composition under acidic conditions. Extracted. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 20 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. The polyamine composition contained 4.1 mg of putrescine, 9.1 mg of spermidine, and 2.9 mg of spermine as the polyamine, for a total of 16.1 mg.
以上の結果から、ダイズ種子から工業的又は実用的に利用できるポリアミン又はポリアミン組成物を回収することができた。特に、植物から1N塩酸でポリアミン又はポリアミン組成物が回収できることが確認できたことから、安全性に優れたポリアミン又はポリアミン組成物を提供することができる。塩酸でポリアミン又はポリアミン組成物を回収し、30%の水酸化ナトリウムで中和すれば、ごく一般的なイオンによる中和反応となり、トリクロロ酢酸に比べて安全性が高と考えられる。 From the above results, it was possible to recover a polyamine or a polyamine composition that can be used industrially or practically from soybean seeds. In particular, since it was confirmed that the polyamine or the polyamine composition can be recovered from the plant with 1N hydrochloric acid, the polyamine or the polyamine composition excellent in safety can be provided. If a polyamine or a polyamine composition is recovered with hydrochloric acid and neutralized with 30% sodium hydroxide, it becomes a neutral reaction by a very general ion, and is considered to be safer than trichloroacetic acid.
(実施例2)ダイズ芽からのポリアミン組成物の調製
ダイズ種子(品種‘フクユタカ’)を吸水させて、光条件下又は暗黒条件下、26℃で2日間培養して発芽させた。光条件下又は暗黒条件下で培養した発芽ダイズの芽部分をそれぞれ約50gサンプリングした。50gのダイズ芽に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=600nmol)、250mlの5%過塩素酸水溶液、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を8g添加し、ホモジナイザーでダイズ芽を十分に破砕した。次に室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで20分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。光条件下で発芽させたダイズ芽からポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンとカダベリンが26.2mg、スペルミジンが1.8mg、スペルミンが0.2mg含まれており、合計で28.2mgであった。暗黒条件下で発芽させたダイズ芽からポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンとカダベリンが17.1mg、スペルミジンが1.6mg、スペルミンが0.2mg含まれており、合計で18.9mgであった。
(Example 2) Preparation of polyamine composition from soybean buds Soybean seeds (variety 'Fukuyutaka') were allowed to absorb water and cultivated by culturing at 26 ° C for 2 days under light or dark conditions. About 50 g of bud parts of germinated soybeans cultured under light conditions or dark conditions were sampled. 8 g of diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 600 nmol), 250 ml of 5% perchloric acid aqueous solution, polyphenol adsorbent polyclar VT (manufactured by ISP) was added to 50 g of soybean bud, and homogenizer Soy soybean buds were sufficiently crushed. Next, it was left to stand at room temperature for 30 minutes, and the polyamine composition was extracted under acidic conditions. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 20 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. Soybean buds germinated under light conditions contained 26.2 mg of putrescine and cadaverine as polyamines, 1.8 mg of spermidine, and 0.2 mg of spermine as a polyamine, for a total of 28.2 mg. . Soybean buds germinated under dark conditions contained 17.1 mg of putrescine and cadaverine as polyamines, 1.6 mg of spermidine and 0.2 mg of spermine as a polyamine, for a total of 18.9 mg. .
以上の結果から、ダイズの芽には特にプトレシンとカダベリンが多く含まれていることが明らかとなった。ポリアミンの中でもプトレシンやカダベリンを特に有効成分として利用する際には、ダイズの芽を抽出材料として利用することが望ましい。ダイズ芽から工業的又は実用的に利用できるポリアミン又はポリアミン組成物を回収することができた。 From the above results, it was revealed that soybean buds were particularly rich in putrescine and cadaverine. Among polyamines, when putrescine or cadaverine is used as an active ingredient, it is desirable to use soybean buds as an extraction material. Polyamines or polyamine compositions that can be used industrially or practically could be recovered from soybean buds.
(実施例3)ダイズ胚芽(ダイズ胚)からのポリアミン組成物の調製
100gのダイズ胚芽(フォーユー社製)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=1200nmol)、500mlの5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で1時間放置した。その後、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を16g添加し、ブレンダーミキサーでダイズ胚芽を十分に破砕後、室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで20分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが23.5mg、スペルミジンが24.0mg、スペルミンが9.6mg含まれており、合計で57.1mgであった。さらに回収したポリアミン組成物を陽イオン交換樹脂(AG 50W-X4, 200-400mesh, H+型, バイオラッド社製)で充填したカラムに通し、ポリアミンを樹脂に吸着させた。0.7N NaCl/0.1Mリン酸ナトリウム溶液(pH8.0)、水、1N塩酸を順次流してカラムを洗浄した。不純物を除去した後に、6N塩酸でポリアミンを溶出して30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を精製ポリアミン粗成物とした。精製ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが20.4mg、スペルミジンが22.3mg、スペルミンが7.7mg含まれており、合計で50.4mgであった。精製ポリアミン組成物は電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。
(Example 3) Preparation of polyamine composition from soybean germ (soybean embryo) 100 g soybean germ (manufactured by Foryou) diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 1200 nmol), 500 ml of 5% A perchloric acid aqueous solution was added and the mixture was allowed to stand at room temperature for 1 hour. Thereafter, 16 g of polyclar VT (ISP), which is a polyphenol adsorbent, was added, and the soybean germ was sufficiently crushed with a blender mixer, and then left at room temperature for 30 minutes to extract a polyamine composition under acidic conditions. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 20 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. The polyamine composition contained 23.5 mg of putrescine, 24.0 mg of spermidine and 9.6 mg of spermine as the polyamine, for a total of 57.1 mg. Further, the recovered polyamine composition was passed through a column packed with a cation exchange resin (AG 50W-X4, 200-400 mesh, H + type, manufactured by Bio-Rad), and the polyamine was adsorbed on the resin. The column was washed by flowing 0.7N NaCl / 0.1M sodium phosphate solution (pH 8.0), water and 1N hydrochloric acid sequentially. After removing the impurities, the polyamine was eluted with 6N hydrochloric acid and neutralized with 30% sodium hydroxide to obtain a purified polyamine crude product. The purified polyamine composition contained 20.4 mg of putrescine, 22.3 mg of spermidine and 7.7 mg of spermine as polyamines, for a total of 50.4 mg. The purified polyamine composition was desalted with an electrodialyzer (Acylizer S3, manufactured by Astom Corp.) and concentrated.
1kgのダイズ胚芽(フォーユー社製)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=10μmol)、5Lの1N塩酸溶液を加えて室温下で1時間放置した。その後、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を80g添加し、ホモジナイザーでダイズ胚芽を十分に破砕後、室温下で1時間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで30分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが235.1mg、スペルミジンが241.8mg、スペルミンが80.1mg含まれており、合計で557.0mgであった。ポリアミン組成物のHPLC分析のチャート図を図2に示した。プトレシン(検出時間:10.925分)、スペルミジン(検出時間:15.898分)、スペルミン(検出時間:20.025分)のシャープな単一ピークが検出された。13.002分の単一ピークは希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane)である。ポリアミンと希釈内部標準以外の不純物ピークはほとんど検出されず、明らかにポリアミン組成物は高純度であり、ポリアミンが主成分であることが確認された。ポリアミン組成物が高純度である理由は、胚芽(胚)部分のみを用いることで種子タンパク質等の混入が低いことと、ポリフェノール吸着剤を添加し、酸条件下で抽出することで種子タンパク質などの不純物を変性及び吸着除去していることが大きく影響している。ポリアミン組成物は電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。 To 1 kg of soybean germ (manufactured by Foyu), a diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 10 μmol) and 5 L of 1N hydrochloric acid solution were added and left at room temperature for 1 hour. Thereafter, 80 g of polyclar VT (ISP), which is a polyphenol adsorbent, was added, the soybean germ was sufficiently crushed with a homogenizer, and left at room temperature for 1 hour to extract a polyamine composition under acidic conditions. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 30 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. The polyamine composition contained 235.1 mg of putrescine as polyamine, 241.8 mg of spermidine, and 80.1 mg of spermine, for a total of 557.0 mg. A chart of the HPLC analysis of the polyamine composition is shown in FIG. Sharp single peaks of putrescine (detection time: 10.925 minutes), spermidine (detection time: 15.898 minutes), and spermine (detection time: 20.025 minutes) were detected. The single peak at 13.002 minutes is the diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane). Impurity peaks other than polyamine and diluted internal standard were hardly detected, and it was clearly confirmed that the polyamine composition was highly pure and polyamine was the main component. The reason for the high purity of the polyamine composition is that the use of only the embryo (embryo) part results in low contamination of seed proteins and the like, and addition of a polyphenol adsorbent and extraction under acidic conditions such as seed proteins. The fact that impurities are denatured and adsorbed and removed has a great influence. The polyamine composition was desalted with an electrodialyzer (Acylizer S3, manufactured by Astom Corp.) and concentrated.
以上の結果から、ダイズ胚芽(ダイズ胚)から極めて高含量なポリアミン又はポリアミン組成物が回収できることが明らかとなった。特にダイズ胚芽から、これ程の量のポリアミン又はポリアミン組成物が回収された報告は全くなく、ダイズ胚芽中にポリアミン含量が著しく高いことについても始めての知見であった。これまでにポリアミン又はポリアミン組成物を植物から抽出して工業的に利用する場合、植物中に含まれるポリアミン含量が極めて低く、さらに抽出効率が低いことが大きな問題であったが、1kgのダイズ胚芽(ダイズ芽)から約0.5gのポリアミン又はポリアミン組成物が回収できたことから、生産コストの面でも大きな改善がなされた。植物から1N塩酸でポリアミン又はポリアミン組成物が回収できることが確認できたことから、安全性に優れたポリアミン又はポリアミン組成物を提供することができる。 From the above results, it was revealed that a very high content of polyamine or polyamine composition can be recovered from soybean germ (soybean embryo). In particular, there has been no report that this amount of polyamine or polyamine composition has been recovered from soybean germ, and it was also the first finding that the polyamine content in soybean germ was extremely high. In the past, when polyamines or polyamine compositions were extracted from plants and used industrially, the content of polyamines contained in plants was extremely low and the extraction efficiency was low, but 1 kg of soybean germ Since about 0.5 g of polyamine or polyamine composition was recovered from (soybean bud), the production cost was greatly improved. Since it was confirmed that the polyamine or the polyamine composition can be recovered from the plant with 1N hydrochloric acid, the polyamine or the polyamine composition excellent in safety can be provided.
(実施例4)コムギ胚芽(コムギ胚)からのポリアミン組成物の調製
100gのコムギ胚芽(培焼・ローストタイプ,日清ファルマ社製)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=1200nmol)、500mlの5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で1時間放置した。その後、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を16g添加し、ブレンダーミキサーでダイズ胚芽を十分に破砕後、室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで20分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが6.4mg、スペルミジンが23.9mg、スペルミンが14.3mg含まれており、合計で44.6mgであった。さらに回収したポリアミン組成物を陽イオン交換樹脂(AG 50W-X4, 200-400mesh, H+型, バイオラッド社製)で充填したカラムに通し、ポリアミンを樹脂に吸着させた。0.7N NaCl/0.1Mリン酸ナトリウム溶液(pH8.0)、水、1N塩酸を順次流してカラムを洗浄した。不純物を除去した後に、6N塩酸でポリアミンを溶出して30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を精製ポリアミン粗成物とした。精製ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが5.7mg、スペルミジンが21.5mg、スペルミンが12.9mg含まれており、合計で40.1mgであった。精製ポリアミン組成物は電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。
Example 4 Preparation of Polyamine Composition from Wheat Germ (Wheat Embryo) Diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount) in 100 g of wheat germ (cultured and roasted type, manufactured by Nisshin Pharma) = 1200 nmol), 500 ml of 5% perchloric acid aqueous solution was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 1 hour. Thereafter, 16 g of polyclar VT (ISP), which is a polyphenol adsorbent, was added, and the soybean germ was sufficiently crushed with a blender mixer, and then left at room temperature for 30 minutes to extract a polyamine composition under acidic conditions. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 20 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. The polyamine composition contained 6.4 mg of putrescine, 23.9 mg of spermidine and 14.3 mg of spermine as polyamines, for a total of 44.6 mg. Further, the recovered polyamine composition was passed through a column packed with a cation exchange resin (AG 50W-X4, 200-400 mesh, H + type, manufactured by Bio-Rad), and the polyamine was adsorbed on the resin. The column was washed by flowing 0.7N NaCl / 0.1M sodium phosphate solution (pH 8.0), water and 1N hydrochloric acid sequentially. After removing the impurities, the polyamine was eluted with 6N hydrochloric acid and neutralized with 30% sodium hydroxide to obtain a purified polyamine crude product. The purified polyamine composition contained 5.7 mg of putrescine, 21.5 mg of spermidine and 12.9 mg of spermine as polyamines, for a total of 40.1 mg. The purified polyamine composition was desalted with an electrodialyzer (Acylizer S3, manufactured by Astom Corp.) and concentrated.
1kgのコムギ胚芽(培焼・ローストタイプ,日清ファルマ社製)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=10μmol)、5Lの1N塩酸溶液を加えて室温下で1時間放置した。その後、ポリフェノール吸着剤であるポリクラールVT(ISP社製)を80g添加し、ホモジナイザーでコムギ胚芽を十分に破砕後、室温下で1時間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで30分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが75.1mg、スペルミジンが294.0mg、スペルミンが119.4mg含まれており、合計で488.5mgであった。ポリアミン組成物のHPLC分析のチャート図を図3に示した。プトレシン(検出時間:10.110分)、スペルミジン(検出時間:15.892分)、スペルミン(検出時間:20.019分)のシャープな単一ピークがそれぞれ検出された。12.994分の単一ピークは希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane)である。ポリアミンと希釈内部標準以外の不純物ピークはほとんど検出されず、明らかにポリアミン組成物は高純度であることが確認された。ポリアミン組成物が高純度である理由は、胚芽(胚)部分を用いることで種子タンパク質等の混入が低いことと、ポリフェノール吸着剤を添加し、酸条件下で抽出することでタンパク質などの不純物を変性又は吸着除去していることが大きく影響している。ポリアミン組成物は電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。 Diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 10 μmol) and 5 L of 1N hydrochloric acid solution are added to 1 kg of wheat germ (cultured and roasted type, manufactured by Nisshin Pharma) and left at room temperature for 1 hour. did. Thereafter, 80 g of polyphenol VT (manufactured by ISP), which is a polyphenol adsorbent, was added and the wheat germ was sufficiently crushed with a homogenizer, and then left at room temperature for 1 hour to extract a polyamine composition under acidic conditions. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 30 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. The polyamine composition contained 75.1 mg of putrescine, 294.0 mg of spermidine, and 119.4 mg of spermine as polyamines, for a total of 488.5 mg. A chart of the HPLC analysis of the polyamine composition is shown in FIG. Sharp single peaks of putrescine (detection time: 10.110 minutes), spermidine (detection time: 15.892 minutes), and spermine (detection time: 20.19 minutes) were detected. The single peak at 12.994 minutes is a diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane). Impurity peaks other than polyamine and diluted internal standard were hardly detected, and it was clearly confirmed that the polyamine composition was highly pure. The reason for the high purity of the polyamine composition is that the use of the germ (embryo) part reduces the contamination of seed proteins and the like, and the addition of polyphenol adsorbent and extraction under acidic conditions removes impurities such as proteins. Degeneration or adsorption removal has a great influence. The polyamine composition was desalted with an electrodialyzer (Acylizer S3, manufactured by Astom Corp.) and concentrated.
以上の結果から、コムギ胚芽(コムギ胚)から工業的又は実用的に利用できるポリアミン又はポリアミン組成物を回収することができた。コムギ胚芽中にはポリアミン以外にも有効な成分が多く含まれていることから、回収したポリアミン組成物中には主成分であるポリアミン以外にも有効成分が含まれている可能性がある。ポリアミン以外の有効成分の効果と作用がポリアミンの効果と作用に混合されることによって、より優れた効果と作用がさらに期待できる。植物から1N塩酸でポリアミン又はポリアミン組成物が回収できることが確認できたことから、安全性に優れたポリアミン又はポリアミン組成物を提供することができる。 From the above results, it was possible to recover a polyamine or a polyamine composition that can be used industrially or practically from wheat germ (wheat embryo). Since wheat germ contains many effective components in addition to polyamines, the recovered polyamine composition may contain active components in addition to the main component polyamines. By mixing the effects and actions of active ingredients other than polyamines with the effects and actions of polyamines, more excellent effects and actions can be expected. Since it was confirmed that the polyamine or the polyamine composition can be recovered from the plant with 1N hydrochloric acid, the polyamine or the polyamine composition excellent in safety can be provided.
(実施例5)豆乳からのポリアミン組成物の調製
100mlの豆乳(品種‘フクユタカ’)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=1200nmol)、100mlの5%過塩素酸水溶液を加えた。その後、ミキサーで十分に混合後、室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。混合物を4℃・27,700×gで20分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが0.7mg、スペルミジンが1.9mg、スペルミンが0.7mg含まれており、合計で3.3mgであった。回収したポリアミン組成物を30%の水酸化ナトリウムで中和し、電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。
(Example 5) Preparation of polyamine composition from soymilk 100 ml of soymilk (variety 'Fukuyutaka') diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 1200 nmol), 100 ml of 5% perchloric acid aqueous solution added. Then, after sufficiently mixing with a mixer, the polyamine composition was extracted under acidic conditions by being left at room temperature for 30 minutes. The mixture was centrifuged at 4 ° C., 27,700 × g for 20 minutes to collect a liquid fraction, and neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. In the polyamine composition, 0.7 mg of putrescine, 1.9 mg of spermidine and 0.7 mg of spermine were contained as polyamines, and the total amount was 3.3 mg. The recovered polyamine composition was neutralized with 30% sodium hydroxide, desalted with an electrodialyzer (Acylizer S3, manufactured by Astom Corp.) and concentrated.
100mlの豆乳(品種‘フクユタカ’)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=960nmol)、10%過塩素酸水溶液を2.5ml(終濃度0.25%)、5ml(終濃度0.5%)、10ml(終濃度1%)、20ml(終濃度2%)、40ml(終濃度4%)それぞれ加えた。その後、ミキサーで十分に混合後、室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。混合物を2℃・27,700×gで20分間遠心分離して液体画分を採取した。0.25%の過塩素酸濃度では液体画分が白色を呈した。過塩素酸濃度が低いことで、pH低下によるダイズタンパク質の変性が不十分になり液体画分に混入したと考えられる。0.5%と1%の過塩素酸濃度でも僅かに白色を呈した。ポリアミンの回収量は0.25%の過塩素酸濃度のポリアミン組成物ではポリアミン以外のピークが見られ他の成分の混入が見られた、他の過塩素酸濃度に比べてポリアミン回収量が低下した。一方、0.5%以上の過塩素酸濃度のポリアミン組成物では、回収量は同じレベルでポリアミンとしてプトレシンが1.8mg、スペルミジンが2.8mg、スペルミンが1.0mg含まれており、合計で5.6mgであった。0.5%の過塩素酸濃度でもポリアミン又はポリアミン組成物が回収できることが確認でき、安全性の面でも優れた調製方法が見出された。
100 ml of soymilk (variety 'Fukuyutaka') diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 960 nmol), 10% perchloric acid aqueous solution 2.5 ml (final concentration 0.25%), 5 ml (final) 10 ml (final concentration 1%), 20 ml (final concentration 2%), and 40 ml (
100mlの豆乳(品種‘フクユタカ’)に希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=800nmol)を加え、6N塩酸を用いて終濃度が0.0625N、0.125N、0.25N、0.5N、1Nになるように添加した。その後、ミキサーで十分に混合後、室温下で30分間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。混合物を2℃・27,700×gで20分間遠心分離して液体画分を採取した。0.0625N、0.125N、0.25N、0.5Nの塩酸濃度では液体画分が少し白色を呈した。塩酸濃度が低いことで、pH低下によるダイズタンパク質の変性が不十分になり液体画分に混入したと考えられる。ポリアミンの回収量は全ての塩酸濃度でほぼ同じレベルでポリアミンとしてプトレシンが1.1mg、スペルミジンが2.3mg、スペルミンが0.6mg含まれており、合計で4.0mgであった。1N以下の塩酸でもポリアミン又はポリアミン組成物が回収できることが確認でき、安全性の面でも優れた調製方法が見出された。1Nの塩酸で回収したポリアミン組成物のHPLC分析のチャート図を図4に示した。プトレシン(検出時間:10.124分)、スペルミジン(検出時間:15.929分)、スペルミン(検出時間:20.040分)のシャープな単一ピークがそれぞれ検出された。ポリアミン以外の不純物ピークはほとんど検出されず、明らかにポリアミン組成物は高純度であることが確認された。ポリアミン組成物が高純度である理由は、酸条件下で抽出することで豆乳中に混入している種子タンパク質のほとんどが変性し、遠心分離によって沈殿除去されたためである。 A diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 800 nmol) was added to 100 ml of soymilk (variety 'Fukuyutaka'), and final concentrations of 0.0625N, 0.125N, 0.25N using 6N hydrochloric acid were added. 0.5N and 1N were added. Then, after sufficiently mixing with a mixer, the polyamine composition was extracted under acidic conditions by being left at room temperature for 30 minutes. The mixture was centrifuged at 2 ° C., 27,700 × g for 20 minutes, and a liquid fraction was collected. The liquid fraction was slightly white at hydrochloric acid concentrations of 0.0625N, 0.125N, 0.25N, and 0.5N. It is considered that the soy protein was not sufficiently denatured due to a decrease in pH due to the low concentration of hydrochloric acid and mixed into the liquid fraction. The recovered amount of polyamine was almost the same at all hydrochloric acid concentrations, including 1.1 mg of putrescine, 2.3 mg of spermidine, and 0.6 mg of spermine as a polyamine, for a total of 4.0 mg. It was confirmed that the polyamine or the polyamine composition could be recovered even with hydrochloric acid of 1N or less, and an excellent preparation method was found in terms of safety. The chart of the HPLC analysis of the polyamine composition recovered with 1N hydrochloric acid is shown in FIG. Sharp single peaks of putrescine (detection time: 10.124 minutes), spermidine (detection time: 15.929 minutes), and spermine (detection time: 20.040 minutes) were detected. Impurity peaks other than polyamine were hardly detected, and it was clearly confirmed that the polyamine composition had high purity. The reason for the high purity of the polyamine composition is that most of the seed protein mixed in the soymilk was denatured by extraction under acid conditions, and the precipitate was removed by centrifugation.
以上の結果から、豆乳から工業的又は実用的に利用できるポリアミン又はポリアミン組成物を回収することができた。豆乳からポリアミン又はポリアミン組成物を回収する場合には、破砕や粉砕処理が不要であり、調製行程が少なくメリットが大きい。豆乳中にはポリアミン以外にも有効な成分が多く含まれていることから、回収したポリアミン組成物中には主成分であるポリアミン以外にも有効成分が含まれている可能性がある。ポリアミン以外の有効成分の効果と作用がポリアミンの効果と作用に混合されることによって、より優れた効果と作用がさらに期待できる。特に、過塩素酸や塩酸の濃度を下げることで、ポリアミン組成物中のダイズタンパク質の混入量が高めること確認されたので、用途に応じて過塩素酸や塩酸の濃度を低くして調製すればよい。豆乳はごく一般的に飲食されていることから豆乳から調製したポリアミン又はポリアミン組成物の安全性は極めて高い。 From the above results, it was possible to recover a polyamine or a polyamine composition that can be used industrially or practically from soy milk. When recovering a polyamine or a polyamine composition from soymilk, crushing or pulverization is not required, and the preparation process is small and the merit is great. Since soy milk contains many effective components other than polyamines, the recovered polyamine composition may contain active components in addition to the polyamines as the main components. By mixing the effects and actions of active ingredients other than polyamines with the effects and actions of polyamines, more excellent effects and actions can be expected. In particular, by reducing the concentration of perchloric acid and hydrochloric acid, it has been confirmed that the amount of soy protein mixed in the polyamine composition is increased, so if the concentration of perchloric acid and hydrochloric acid is reduced depending on the application, Good. Since soy milk is generally eaten and consumed, the safety of polyamines or polyamine compositions prepared from soy milk is extremely high.
(実施例6)オカラからのポリアミン組成物の調製
1kgのオカラに希釈内部標準液(1,7−diaminoheptane、内部標準量=10μmol)、5Lの5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で1時間放置した。その後、ホモジナイザーでオカラを十分に破砕後、室温下で1時間放置して酸性条件下でポリアミン組成物を抽出した。破砕物を2℃・22,000×gで30分間遠心分離して液体画分を採取し、30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液をポリアミン組成物とした。ポリアミン組成物中にはポリアミンとしてプトレシンが5.4mg、スペルミジンが17.8mg、スペルミンが6.5mg含まれており、合計で29.7mgであった。ポリアミン組成物は電気透析装置(アシライザーS3, アストム社製)により脱塩して濃縮した。
(Example 6) Preparation of polyamine composition from okara To 1 kg of okara, diluted internal standard solution (1,7-diaminoheptane, internal standard amount = 10 μmol), 5 L of 5% aqueous perchloric acid solution was added, and 1 at room temperature. Left for hours. Thereafter, the okara was sufficiently crushed with a homogenizer, and allowed to stand at room temperature for 1 hour to extract a polyamine composition under acidic conditions. The crushed material was centrifuged at 2 ° C. and 22,000 × g for 30 minutes to collect a liquid fraction, which was neutralized with a 30% sodium hydroxide solution to obtain a polyamine composition. The polyamine composition contained 5.4 mg of putrescine, 17.8 mg of spermidine and 6.5 mg of spermine as the polyamine, and the total amount was 29.7 mg. The polyamine composition was desalted with an electrodialyzer (Acylizer S3, manufactured by Astom Corp.) and concentrated.
以上の結果から、オカラから工業的又は実用的に利用できるポリアミン又はポリアミン組成物を回収することができた。オカラは豆乳採取後の残査であり、ポリアミン又はポリアミン組成物がほとんど含まれていないと考えられていたが、豆乳よりは少ないがポリアミンが多く含まれていることが確認された。オカラは豆乳採取後の残査であることから、ダイズタンパク質等の含量が低く、ポリアミン組成物中のポリアミン純度は高く、陽イオン交換樹脂での精製が不要であることも明らかとなった。オカラはそのほとんどが廃棄されていることから、オカラを生産材料としてポリアミン又はポリアミン組成物を回収すれば、産業上大きなメリットが期待される。 From the above results, polyamines or polyamine compositions that can be used industrially or practically from Okara could be recovered. Okara was a residue after collection of soymilk and was thought to contain little polyamine or polyamine composition, but was confirmed to contain a lot of polyamine, although less than soymilk. Since Okara is a residue after collecting soymilk, it has also been clarified that the content of soybean protein and the like is low, the polyamine purity in the polyamine composition is high, and purification with a cation exchange resin is unnecessary. Since most of okara is discarded, a great industrial advantage is expected if polyamine or polyamine composition is recovered using okara as a production material.
本発明によって、安全性が高いポリアミン又はポリアミン組成物を高収率でポリアミン又はポリアミン組成物を大量に調製する方法を提供することが可能になった。従って、健康、化粧品、食品、医薬品用途に利用可能な安全なポリアミン又はポリアミン組成物を提供できるようになり、産業の発展に大いに寄与できることが期待される。 According to the present invention, it is possible to provide a method for preparing a polyamine or a polyamine composition having a high safety in a large yield with a high yield. Therefore, it becomes possible to provide a safe polyamine or polyamine composition that can be used for health, cosmetics, food, and pharmaceutical applications, and is expected to contribute greatly to industrial development.
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