JP4846141B2 - Oral nutritional supplements containing flavonoid glycosides with immediate and long-lasting properties - Google Patents

Description

【００２１】
で示されるように、クエルセチン（quercetin、ケルセチンともいう）をアグリコンとし、その３位の水酸基に、Ｌ-ラムノシル-（α１→６）-グルコースがβ-結合したフラボノール配糖体をいう。このルチンはソバの全草、イチジク、アオギリ、タバコの葉などに含まれる。ルチンは、ビタミンＣとともに脆弱化した血管を正常に戻し、出血を防止するビタミンPとしての作用を有し、さらに消炎・鎮痛作用、骨密度の向上作用を有するほか、紫外線吸収、酸化防止、着色・退色防止などの作用も有する。
【００２２】
ルチンは、フェノール性物質であり、空気中では不安定である。また、ルチンは、アルカリ性水溶液には可溶であるが、水、酸性水溶液に難溶であり、室温では、１リットルの水に僅かに0.１ｇ程度しか溶けないため、その利用分野が限定されている。そこで、ルチンの水溶性を高めるための種々の方法およびその誘導体が提案されており、ルチンに糖を転移（付加）させたα-グルコシル化ルチン混合物が開発され（特開平3-27293号公報）、商品名「αＧ-ルチンP」として市販されている。
【００２３】
この「αＧルチンP」（以下、「αＧルチン」という）は、上記ルチンに酵素グリコシダーゼ、トランスグリコシダーゼなどの転移作用によりデンプン、デキストリンなどからグルコースをルチンのグルコース４位に転移した水溶性ルチンであり、下記式（II）に示すようにグルコース数の異なるα‐グルコシル化ルチンの混合物である。
【００２４】
【化２】

【００２５】
（但し、式（II)中、Ｒはグルコース残基、ｎは１〜数十の整数を表わす）
「αＧ-ルチン」は、α-位のグルコース残基数（ｎ）が１〜数十の範囲、平均ではｎが４〜５程度のα-グルコシル化ルチンの混合物である。このαＧ-ルチンには、α-位のグルコース残基数（ｎ）が１のモノグルコシルルチン（ＭＧＲ）などが含まれる。
【００２６】
αＧ-ルチンは水、アルコール等に対する溶解度が高く、水１００ｇ当り５０ｇ以上溶解し、また濃度５０％のアルコール１００ｇ当り２０ｇ以上溶解する。
このようにαＧ-ルチンでは、ルチンに比べてその溶解性（水溶性、脂溶性）は向上し、さらに耐熱性、長期保存性などの安定性も改善されている。α-グルコシル化ルチン混合物自体は、ルチンと同様の薬理・生理作用を示し、しかもルチンに比べて約５０００倍と著しく水溶性に優れている。
【００２７】
・イソクエルシトリン（isoquercitrin、イソケルシトリンともいう）
ルチンにα−1,6−ラムノシダーゼを作用させると、その炭素３位置に結合しているルチノース残基から、ラムノース単位のみが１つ外れてグルコース単位１つのみ残っているルチン誘導体、すなわちイソクエルシトリンが生成する。これもルチンと同様に水に難溶性の化合物であり、上記グルコース残基が外れクエルセチンを生成するため、生理活性はルチンと同様である。
【００２８】
・モノグルコシルルチン（ＭＧＲ）
ルチンのルチノース単位のグルコース残基にグルコース1個を転移させて得られる配糖体である。あるいは、ルチンをα‐グルコシル化した「αG-ルチンP（（登録商標）東洋精糖（株）製、商品名）」からグルコースを1残基残す形でα-グルコシダーゼを作用させてもよい。モノグルコシルルチンもまた、α-グルコシル化ルチン混合物と同様に水溶性に優れ、その生理作用は、他のルチン類またはヘスペリジン類と同様である。
【００２９】
以上述べてきたルチン（rutin）、クエルセチン（quercetin）、イソクエルシトリン（isoquercitrin）、ＭＧＲ（monoglucosyl rutin）、αＧ-ルチン（αＧ-rutin）の相互関係を下記式（III）に示す。
【００３０】
【化３】

【００３１】
ヘスペリジンおよびその誘導体
ヘスペリジン（Hesperidin）は、下記式［ＩV］：
【００３２】
【化４】

【００３３】
で示されるようにヘスペレチン（５，７，３’-トリヒドロキシ-４’-メトキシフラバノン）の７位の水酸基に、ルチノース（Ｌ-ラムノシル-（α１→６）-グルコース）がβ-結合したものをいう。このヘスペリジンは柑橘類の未熟な果皮に含まれ、ヘスペリジンおよびその誘導体は、骨密度を向上させる効果を有することのほか、毛細血管の強化、出血予防、血圧調整等の生理作用を発揮するビタミンＰとしての機能も有している。このビタミンＰ機能を利用する医薬品、化粧品等がこれまで供されてきた。このヘスペリジンは、アルカリ性水溶液には可溶であるが、水、酸に難溶であり、室温では、５０Ｌの水に僅かに１ｇ（約０．００２Ｗ／Ｖ％）程度しか溶けない。本発明では、このヘスペリジンのほか、その溶解性を改善した以下の「酵素処理ヘスペリジン」あるいは「モノグルコシルヘスペリジン高含有物」などのヘスペリジン誘導体を使用する。
【００３４】
・β‐モノグルコシルヘスペレチン
ヘスペリジンにα−1,6−ラムノシダーゼを作用させると、その炭素７位置に結合している糖部分、ルチノース残基からラムノース単位のみがはずれ、グルコース残基のみが残っているヘスペリジン誘導体が得られる。このβ‐モノグルコシルヘスペレチンは、下記式［V］で表される。
【００３５】
【化５】

【００３６】
これもヘスペリジンと同様に水に難溶性の化合物であり、上記グルコース残基が外れてヘスペレチンを生成するため、生理活性はヘスペリジンと同様である。
・α‐モノグルコシルヘスペリジン
ヘスペリジンのルチノース単位のグルコース残基にグルコース1個を転移させて得られる配糖体である。あるいは、ヘスペリジンをα‐グルコシル化した「αG-ヘスペリジンP（東洋精糖（株）製、商品名）」からグルコースを1残基残す形でα-グルコシダーゼを作用させてもよい。ルチンに対するα‐モノグルコシルルチンに相当するヘスペレチン誘導体である。α‐モノグルコシルヘスペリジンもまた、α-グルコシル化ルチン混合物と同様に水溶性に優れ、その生理作用は、他のルチン類またはヘスペリジン類と同様である。
【００３７】
生体内における動態
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤あるいは水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤がヒトやそれ以外の動物の体内に経口摂取されると、水溶性クエルセチン配糖体または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤に含まれていたルチン類またはヘスペリジン類などは、腸に到達すると腸内細菌のもつβ‐グルコシダーゼなどの作用を受けて、アグリコンのクエルセチンと糖、あるいはヘスペレチンと糖とに加水分解されてから吸収されると考えられている。後述するように、糖の種類及び糖残基数などにより加水分解は必ずしも同じように進まず、その結果、吸収速度および吸収量の違いになって表われる。
【００３８】
ルチン類の場合、モノグルコシルルチンも含め、α-グルコシル化ルチンは、ルチンと同様に経口摂取すると、その糖残基を腸内細菌の作用により順次外してルチンを生成するため、イソクエルシトリンよりも遅れて徐々に吸収される。このことは、α-グルコシル化ヘスペリジンについても同様であり、β-モノグルコシルヘスペレチンよりもその吸収は遅れる。
【００３９】
摂取されたイソクエルシトリンは、ルチンと同様に小腸に到達すると腸内細菌の持つβ-グルコシダーゼ作用を受けアグリコンであるクエルセチンと糖に加水分解されて後に体内に吸収されると考えられている。
しかしながら、小腸におけるイソクエルシトリンの吸収速度は、アグリコンのクエルセチンについで速やかであり、ルチン、モノグルコシルルチン、その他のα-グルコシル化ルチンよりも速い。これは、糖の種類およびその付加する位置などにより加水分解の難易が関係しており、ラムノース残基の加水分解は、腸内細菌のα-1,6-ラムノシダーゼの作用によるために容易に進まず、ルチノース単位を構成するグルコースの加水分解は、腸内細菌に多いβグルコシダーゼによるため迅速であると思われる。
【００４０】
クエルセチンは、吸収される際に腸の上皮細胞でグルクロン酸抱合化を受けて抱合体として門脈を経て肝臓に送られる。肝臓でさらに抱合化、メチル化反応を受け、その後血流に入り末梢組織に移動するが、最終的には腎臓を経て尿中に排泄される。
以上のことは、ヘスペリジン類およびそのアグリコンのヘスペレチンについても同様にあてはまる。
【００４１】
ルチン類またはヘスペリジン類が生体内における生理活性型に変換されると、ビタミンPとしての機能のほか、血中のコレステロールおよび中性脂質の低下作用、骨密度向上作用などの諸作用を発揮することとなる。
水溶性クエルセチン配糖体または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤
上記のように本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤においては、経口摂取後、腸管における吸収速度および吸収量の違いが、その後の血中動態にもそのまま反映される。すなわち、水溶性クエルセチン配糖体の場合には、速やかに吸収されるイソクエルシトリンが、クエルセチンのメチル化体・抱合体として出現するのは、摂取後0.5時間であり、その血中レベルは0.5時間がピークでもあり、その後は低下する。イソクエルシトリンより遅れて吸収されるモノグルコシルルチン（ＭＧＲ）に由来するアグリコンのメチル化体・抱合体の血中レベルがピークに達するのは、摂取後8時間も経過してからである。同様にルチンは、両者の中間の速度で吸収され、血中レベルがピークに到達するのは摂取して4時間後である。これらのことは、ヘスペリジン類についても同様にいえる。
【００４２】
本発明のクエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤またはヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤は、生体内では同一の生理作用を発揮するこれら水溶性クエルセチン配糖体または水溶性ヘスペレチン配糖体を、糖の種類と結合数に起因する腸管での吸収速度と吸収量の違いを考慮して含有させている。具体的には、本発明に係る、水溶性クエルセチン配糖体または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤において、イソクエルシトリンとモノグルコシルルチンとの含有モル比、あるいはα‐モノグルコシルヘスペリジンとβ‐モノグルコシルヘスペレチンとの含有モル比は、経口摂取後に、クエルセチン抱合体またはヘスペレチン抱合体について0.5時間後の血中濃度Ｃ_0.5と８時間後の血中濃度Ｃ₈との比Ｃ₈／Ｃ_0.5が0.2〜0.9の範囲内に維持可能となるように決定される。そのような割合で水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤は、血中に出現しピークに到達する時間差に基づき、即効性とともに持続性をも実現することができる。
【００４３】
具体的な含有モル比として、ルチン類の場合、モノグルコシルルチン：１に対して、イソクエルシトリンが0.1〜0.4、より好ましくは、0.2〜0.4である。あるいは所望するならば、さらにルチンが共存してもよく、モノグルコシルルチン：１に対して、イソクエルシトリンが0.1〜0.4、ルチンが0.001〜0.4（いずれもモル比）、より好ましくは、イソクエルシトリンが0.2〜0.4、ルチンが0.1〜0.2（いずれもモル比）の組成で含まれてなる経口栄養補給剤が望ましい。
【００４４】
このことは、ヘスペリジンについても同様にいえる。すなわち、α‐モノグルコシルヘスペリジン：１に対して、β‐モノグルコシルヘスペレチンが0.1〜0.4、より好ましくは、0.2〜0.4である。あるいは所望するならば、さらにヘスペリジンも共存する場合、α‐モノグルコシルヘスペリジン：１に対して、β‐モノグルコシルヘスペレチンが0.1〜0.4、ヘスペリジンが0.001〜0.4（いずれもモル比）、より好ましくは、β‐モノグルコシルヘスペレチンが0.2〜0.4、ヘスペリジンが0.1〜0.2（いずれもモル比）の組成で含まれてなる経口栄養補給剤が望ましい。
【００４５】
これは、含有成分の水への溶解度、さらにそれぞれの腸管における吸収速度および吸収量を総合的に勘案して、血中レベルのクエルセチン誘導体レベルが経時的になるべく大きく変動せず、一定の幅に収まるように適切な範囲を選択したものである。このことは、ヘスペリジンについても同様にいえる。
これらの含有比からなる組成物を経口摂取すると、クエルセチン抱合体について0.5時間後の血中濃度Ｃ_0.5と８時間後の血中濃度Ｃ₈との比Ｃ₈／Ｃ_0.5が0.2〜0.9の範囲内となるように維持されることとなり、クエルセチン誘導体の生理効果の時間的な平準化が図られ、安定的持続性が達成できる。さらにルチンが第3番目の成分として存在すると、0.5時間〜8時間の間でのクエルセチン誘導体レベルの上昇に寄与する。これは、腸管での吸収量も多いイソクエルシトリンの場合、0.5時間でピークに達し、その後は徐々に低下していくこと、その反面、イソクエルシトリンがルチンと同様に水に難溶性であるため、水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤においてイソクエルシトリンの含有割合をそれほど多くできないことにも関係する。また、水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の場合も同様である。
【００４６】
この水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤において、各種クエルセチン誘導体の含有割合は上記のモル比の割合で選択されているが、クエルセチン誘導体またはヘスペレチン誘導体の総体量を、任意の量で含めることができる。例えば0.001〜100重量％の範囲で含めてもよい。本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤では使いやすさなどの観点から、水溶性クエルセチン配糖体または水溶性ヘスペレチン配糖体の総量は、好ましくは0.１〜90重量％、より好ましくは１〜80重量%の割合で含有させる。
【００４７】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤には水溶性クエルセチン配糖体の混合物を、あるいは水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤には、水溶性ヘスペレチン配糖体の混合物を単独で用いてもよいが、本発明の目的を損なわない範囲で他の物質を配合してもよい。例えば、各種アミノ酸、ビタミン類を加えて栄養滋養の強化を図ってもよく、特にビタミンCを配合することにより毛細血管の抵抗性増強などのビタミンP作用において相乗効果を発揮させることができる。
【００４８】
さらに水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の嗜好性および品質向上のために甘味料、増量剤、香味料などの各種成分を１種または２種以上を必要に応じて配合できる。
たとえば水飴、ぶどう糖、マルトース、砂糖、異性化糖、パラチノース、キシリトール、エリスリトール、トレハロース、スクラロース、アセスルファムＫ、ステオビオシド、L-アスパラチルフェニルアラニンメチルエステル、グリチルリチンなどの甘味料；クエン酸、コハク酸、乳酸、リンゴ酸、グルコン酸などの各種有機酸塩類；各種フレーバーなどの香味料；デキストリン、デンプン、乳糖などの増量剤；などを配合してもよい。さらに一般に食品、医薬品に使用されている各種添加物、たとえば増粘剤、分散剤など任意の成分を含めることができる。
【００４９】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の剤型は特に限定されず、粉末状のフラボノイド類をそのまま用いてもよく、あるいは必要に応じて増量剤、賦形剤と混合して顆粒状、球状、キューブ、タブレット状などに成型して使用することができる。さらに水溶性の特徴を生かし、ペーストまたは液状品として用いてもよく、特に液状品では使用上便利なようにその濃度を適宜調節できる。またこの水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を充填する容器の性能・形態も特に問わない。
【００５０】
水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の製造方法
本発明による水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の製造方法は、モノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの含有モル比を、経口摂取後にクエルセチン抱合体について0.5時間後の血中濃度Ｃ_0.5と８時間後の血中濃度Ｃ₈との比であるＣ₈／Ｃ_0.5が、0.2〜0.9の範囲内に維持されるように決定して、ルチン類の生理作用の即効性および持続性を発揮させることを可能とする経口栄養補給剤の製造方法である。また水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤についても全く同様の製造方法である。たとえば、
モノグルコシルルチン（またはモノグルコシルヘスペリジン）： 1
イソクエルシトリン（またはα‐モノグルコシルヘスペリジン）：0.1〜0.4
さらに所望に応じて、ルチン（またはヘスペリジン）： 0.001〜0.4
のモル比で、クエルセチン誘導体またはヘスペレチン誘導体を含有させてもよい。
【００５１】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤に使用されるルチンまたはその誘導体、あるいは水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤に使用されるヘスペリジンまたはその誘導体は、市販のものを使用できる。これらを所定量秤量し、さらに他に加える物質があればそれらも所定量混合して水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を調製する。ペースト状または顆粒状にするか、成型する場合には必要量の水などを添加して混捏し、必要により濃縮、乾燥などをすればよい。液状品の場合には水などの溶媒に溶解等すればよい。
【００５２】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤に使用されるルチンまたはヘスペリジンおよびそれらの誘導体は以下の方法によっても調製できる。
・クエルセチン誘導体
α-グルコシル化ルチンとルチンとの混合物あるいはモノグルコシルルチンとルチンとの混合物から水溶性クエルセチン配糖体含有物を得ることができる。本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体含有物の第１の製造方法は、モノグルコシルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）にα-1,6-ラムノシダーゼ（E.C.3.2.1.40）を作用させて、ルチンをイソクエルシトリンに変化させることを特徴としている。本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体含有物の第２の製造方法は、α-グルコシル化ルチンとルチンとの混合物（Ａ）に、グルコアミラーゼ（E.C.3.2.1.3）とα-1,6-ラムノシダーゼを同時または別々に作用させ、α-グルコシル化ルチン混合物をモノグルコシルルチンに変化させるとともに、ルチンをイソクエルシトリンに変化させることを特徴としている。
【００５３】
モノグルコシルルチンの製造には、原料としてα-グルコシル化ルチンとルチンとの混合物（Ａ）が用いられ、この混合物（Ａ）は、通常、「αＧルチンＰ」（R）（東洋精糖（株）製）の商品名で市販されている。
αＧ-ルチンは、例えば下記のようにして製造される。すなわち、前記の式（I）で表わされる、水に極めて難溶（溶解度：水１００ｇ当り０．０１ｇ程度）であるルチンに、糖供与体としての澱粉あるいはその部分加水分解物（例：デキストリン、マルトース）を加えてなる組成物に、アミラーゼ、グリコシダーゼ、トランスグリコシダーゼなどのグルコース残基転移酵素を作用させて澱粉あるいはその部分分解物からルチンに糖（グルコース）を転移（付加）させることにより、α-グルコシル化ルチン混合物は得られる。
【００５４】
上記α-グルコシル化ルチン混合物の製造方法の詳細は、例えば特公昭５４ー３２０７３号公報あるいは特公昭５８ー５４７９９号公報、特許第２９２６４１１号に記載されている。
なお、このようにして得られた反応物には、通常、α-グルコシル化ルチン混合物とともに、未反応のルチンあるいはルチンの分解物であるクエルセチン等も少量含まれている。なお、この明細書中においては、その趣旨に反しない限り、α-グルコシル化ルチン混合物というときは、モノグルコシルルチンを含む。
【００５５】
本発明では、少なくともこのようなα-グルコシル化ルチン混合物とルチンとが含まれた混合物から上記水溶性クエルセチン配糖体含有物を酵素処理して得ている。以下、まずはじめに本発明の主な反応工程について詳細に説明するが、第１工程と第２工程のように隣合う工程において、用いられる各酵素が共通の作用を有するものである場合には、先の工程で用いられる酵素にて、それに続く後の工程の反応をも、通常、進行させることができる。
【００５６】
［第１工程］
本発明では、α-グルコシル化ルチン混合物とルチンとの混合物（Ａ）に、グルコアミラーゼを作用させて、α-グルコシル化ルチン混合物をモノグルコシルルチンに変える。こうした酵素としては、長瀬産業（株）のグルコチーム、天野製薬（株）のグルクザイムNL、（株）ヤクルトのユニアーゼ30等のグルコアミラーゼの他、田辺製薬のナリンギナーゼ、天野製薬（株）のセルラーゼA「アマノ」３などのような酵素などを例示することができる。すなわち、α-1,4-グルコシル結合を、グルコース単位で切断するグルコアミラーゼ活性を有する酵素であれば自由に用いることができる。さらにα-アミラーゼ、β-アミラーゼ等のように、α-1,4-グルコシル結合をグルコース単位以外でも切断する酵素を用いることもできる。しかしこれらの酵素のうちでは、α-グルコシル化ルチン混合物をモノグルコシルルチンに変える性質に優れたグルコアミラーゼが特に好ましく用いられる。
【００５７】
例えば、グルコアミラーゼの一種であるグルコチームは、α-グルコシル化ルチン混合物とルチンとの混合物（Ａ）１００ｇ当り、通常、０.０１〜１０ｇの量で、好ましくは０.２〜１ｇの量で、換言すれば、混合物（Ａ）中のα-グルコシル化ルチン混合物含有量１００ｇ当り、通常、０.０１〜１１ｇの量で、好ましくは０.２〜１ｇの量で用いられる。このような量でグルコチームを用いると、効率的（変換率９９％程度）にα-グルコシル化ルチン混合物をモノグルコシルルチンに変換することができる。
【００５８】
このようにα-グルコシル化ルチン混合物とルチンと混合物（Ａ）にグルコアミラーゼなどの酵素を作用させる際には、用いられる酵素の種類、活性などの違いにより一概に決定されないが、例えば、グルコチームでは、混合物（Ａ）含有溶液のｐＨを無機酸、有機酸等を用いて３〜６程度に調節することが好ましい。また、このモノグルコシル化反応の際には、３５〜６５℃程度の温度で、１〜６０時間程度保持することが好ましい。
【００５９】
このように、混合物（Ａ）中のα-グルコシル化ルチン混合物に酵素を作用させて得られたモノグルコシルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）に、第２工程では、α-1,6-ラムノシダーゼを作用させて、混合物（Ｂ）中のルチンをイソクエルシトリンに変える。
［第２工程］
本発明では、モノグルコシルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）に、α-1,6-ラムノシダーゼを作用させて、混合物（Ｂ）中のルチンからラムノース単位が取れたイソクエルシトリンに変える。この混合物（Ｂ）は、上記第１工程で原料（Ａ）を用いて得られるものに限らず、公知の方法で得られた原料（Ｂ）を用いることもできる。
【００６０】
第２工程で用いられる酵素は、α-1,6-ラムノシダーゼ活性を有する酵素であれば、いずれもルチンをイソクエルシトリンに変えることができる。このような酵素として田辺製薬（株）のヘスペリジナーゼ２号、ナリンギナーゼ、天野製薬（株）のセルラーゼA「アマノ」３などを挙げることができる。
例えば、田辺製薬（株）のヘスペリジナーゼ２号は、モノグルコシルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）１００ｇ当り、通常、０.０１〜１０ｇの量で、好ましくは０.３〜２ｇの量で、換言すれば、混合物（Ｂ）中のルチン含有量１００ｇ当り、通常、０.０５〜５０ｇの量で、好ましくは１.５〜１０ｇの量で用いられる。このような量でヘスペリジナーゼを用いると、効率的（変換効率９９％程度）にルチンをイソクエルシトリンに変換することができる。
【００６１】
なお、後述するように、原料（Ａ）に、第１工程と第２工程の酵素を加えこれらの反応を実質的に同時に進行させる場合において、両工程に共通の酵素（例：ナリンギナーゼあるいはセルラーゼＡ「アマノ」）を用いる場合には、その量を適宜加減し設定することができる。
モノグルコシルルチンとルチンと混合物（Ｂ）にα-1,6-ラムノシダーゼなどの酵素を作用させる際には、用いられる酵素の種類、活性などの違いにより一概に決定されないが、通常、例えば、ヘスペリジナーゼでは、混合物（Ｂ）含有溶液のｐＨ、温度、反応時間を第１工程のモノグルコシル化反応の場合と同様に保持することが好ましい。
【００６２】
本発明では、このような第２工程により、モノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの混合物である水溶性クエルセチン配糖体含有物が得られる。
なお、上記反応は還元剤の存在下に行うことが好ましい。ここで使用される還元剤としてはα-グルコシル化ルチン混合物あるいは反応生成物を過度に還元しないような還元力を有すると共に溶存酸素や空気による酸化を有効に防止し得る程度の還元力を有するものが好ましく、さらにモノグルコシルルチンの用途を考慮すると生体に対する影響力の少ないものが好ましい。このような還元剤の例としてはアスコルビン酸及びアスコルビン酸塩を挙げることができ、一般にはアスコルビン酸が使用される。その使用量はα-グルコシル化ルチン混合物１００ｇに対して０.１〜５ｇ程度の量である。このような量のアスコルビン酸は製造工程で容易に除去される。
【００６３】
上記の酵素処理液より、モノグルコシルルチン、イソクエルシトリンを一般的な精製方法すなわち、ろ過、遠心分離、ゲルろ過法、吸着またはイオン交換のクロマトグラフィーなどを適宜適用することによりほぼ純粋に近い状態にそれぞれ単離することができる。
なお、上記酵素処理溶液を得る際に、酵素処理の条件を調整することにより、モノグルコシルルチンおよびイソクエルシトリンの含有量、さらには所望する場合にはルチンの含有量が、本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤のそれぞれの組成に近い状態になるようにして、その後の精製工程を簡単なもの、あるいは不必要とすることも可能である。
【００６４】
・ヘスペレチン誘導体
本発明に係る剤に使用されるヘスペリジンまたはその誘導体は市販のものを使用できる。例えば、ヘスペリジンのグルコシル化誘導体としては、東洋精糖（株）製の、「αＧヘスペリジン」（登録商標）を使用できる。
また、本発明に係る剤に使用されるヘスペレチン誘導体は以下の方法によっても調製できる。
【００６５】
α‐モノグルコシルヘスペリジンおよびβ‐モノグルコシルヘスペレチンは、α-グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液、たとえば上記「酵素処理ヘスペリジン」溶液に、グルコアミラーゼおよびα-Ｌ-ラムノシダーゼを別々にまたは同時に作用させて、得られた酵素処理液から適当な分離手段によりそれぞれ分取すればよい。グルコアミラーゼは、α-グルコシルヘスペリジンのラムノースはそのままで、ヘスペレチン骨格７位のグルコース４位にα-1,4結合で多数結合しているグルコース（Ｇ）_nのうちの１個のみを残して加水分解して、α-モノグルコシルヘスペリジンに変える。他方、α-Ｌ-ラムノシダーゼは、ルチノース部分のラムノース単位のみを加水分解し、グルコース単位は残す。
【００６６】
「酵素処理ヘスペリジン」は、付加グルコース数の異なるα-グルコシルヘスペリジンおよび未反応のヘスペリジンが含まれる混合物である。この「酵素処理ヘスペリジン」については、特開平３-７５９３号公報に、ヘスペリジンに澱粉部分分解物（α-グルコシル糖化合物）共存下で糖転移酵素（α-グルコシル転移活性を有する酵素）を作用させる製造方法が開示されている。その主成分のα-グルコシルヘスペリジンは、式［Ｉ］で示されるヘスペリジンのグルコースの４位位置にグルコース（Ｇ）がα-１，４結合で順次ｎ個（１〜２０個）結合した化合物である。
【００６７】
上記方法による「酵素処理ヘスペリジン」の調製において、原料液に含まれるヘスペリジンの４０〜８０％が酵素処理によりα-グルコシルヘスペリジンに変換されるが、２０〜６０％は未反応ヘスペリジンとして残存している。未反応ヘスペリジンは、α-グルコシルヘスペリジンが共存すると、水溶液中での溶解性が高まっている。しかし、α-グルコシルヘスペリジンに対して未反応ヘスペリジンの比率が高いと、短時間に未反応ヘスペリジンが不溶化して析出してくる。この現象は上記酵素処理ヘスペリジンを液状物の形態で利用する場合には不都合なこととなる。
【００６８】
このような問題点を解決したのが、未反応ヘスペリジンをβ-モノグルコシルヘスペレチンに変換し、α-グルコシルヘスペリジンまたはモノグルコシルヘスペリジンと共存させる方法である。これは特開平10-70994号公報に示されている方法により調製される。未反応ヘスペリジンは、β-モノグルコシルヘスペレチンに変換されており、該混合物は著しく水溶性に優れ、長期間経過しても白濁などが生じない。
【００６９】
効率の観点からは、以下に述べる「モノグルコシルヘスペリジン高含有物」を上記の「酵素処理ヘスペリジン」から調製し、ヘスペレチン誘導体それぞれを精製して得る方法が好ましい。そのためには、クエルセチン誘導体の精製で述べたようなろ過、ゲルろ過法、イオン交換クロマトグラフィーなどの精製法を利用することによりほぼ純粋に近い状態にそれぞれ単離することができる。
【００７０】
「モノグルコシルヘスペリジン高含有物」の製法は、特開平10-323196号公報に記載されている。α-グルコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとを含有する「酵素処理ヘスペリジン」の溶液に、グルコアミラーゼと、α-L-ラムノシダーゼ活性を有する酵素、たとえばヘスペリジナーゼ（田辺製薬（株）製）とを作用させる「第Ｉ法」（特開平10-323196号公報）を採用することが好ましい。「モノグルコシルヘスペリジン高含有物」を得るための酵素使用量、ｐH、温度、作用時間などが具体的に開示されている。
【００７１】
「モノグルコシルヘスペリジン高含有物」からα-モノグルコシルヘスペリジンなどの分取方法については、特開平10-323196号公報に詳述されており、つぎのように多孔性吸着樹脂を利用する方法が簡便である。
多孔性吸着樹脂としては、具体的には、たとえばＨＰ−２０、ＨＰ−５０、ＸＡＤ−２などの非極性樹脂、ＸＡＤ−７などの中間極性樹脂が好ましく用いられる。カラムに上記の多孔性吸着樹脂を充填し、高濃度のエタノール水溶液などで活性化しておく。そのカラムに、上記酵素処理αモノグルコシルヘスペリジン含有液を１０〜６０℃の温度で通液するなどの方法で、該樹脂に接触させ、これによりα-モノグルコシルヘスペリジン、β-モノグルコシルヘスペレチン、ヘスペリジンなどを吸着させる。
【００７２】
ついで、充填樹脂容量の１〜４倍量の水で洗浄して遊離糖を主体とする夾雑物を除去したのち、アルコール、アルコール-水（アルコール／水＝50〜100／25〜1）などの溶離液を１０〜６０℃の温度で通液するなどの方法で、該樹脂に吸着残留しているα-モノグルコシルヘスペリジン、β-モノグルコシルヘスペレチン、ヘスペリジンなどを段階的に溶出させる。
【００７３】
本操作により、α-モノグルコシルヘスペリジン１重量部に対して、β-モノグルコシルヘスペレチンが0.5重量部以下、ヘスペリジンおよびヘスペレチンがそれぞれ0.1重量部以下、そして糖類などのその他の成分が0.1重量部以下の量である溶出液が得られる。
さらにα-モノグルコシルヘスペリジンを純粋に近い状態まで精製するには、低級アルコールを使った分画操作を行うことができる。その操作の詳細は、上記公報に記載されている。低級アルコールへの溶解度の差を利用したこの方法を適用することにより、併せてβ-モノグルコシルヘスペレチンもまた単離することもできる。
【００７４】
なお、上記「モノグルコシルヘスペリジン高含有物」を得る際に、酵素処理の条件を調整することにより、α‐モノグルコシルヘスペリジンおよびβ‐モノグルコシルヘスペレチンの含有量、さらには所望する場合にはヘスペリジンの含有量が、本発明に係るヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤のそれぞれの組成に近い状態になるようにして、その後の精製工程を簡単なもの、あるいは不必要とすることも可能である。
【００７５】
水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の用途
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤について、以下に有用な利用態様を例として挙げるが、該水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の用途がこれらに限定されるわけではない。
【００７６】
上記水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤は、一般食品、健康食品、機能性食品、栄養強化食品として、あるいはビタミンＰなどの他の薬効にも注目して医薬品、薬剤原料としての用途が挙げられる。
医薬品として利用される場合、ルチン類またはヘスペリジン類の様々な薬効を活かす利用形態が考えられる。例えば、ビタミンPの生理作用を発揮させることができるとともに、さらに消炎・鎮痛作用、抗酸化、中性脂質またはコレステロール低下の機能も期待される。特に血糖値が高い場合に糖とタンパク質のアミノ酸残基との結合に示される生体内グリケーションの抑制作用、抗老化、骨密度向上作用などの効能も示されている。したがってこれらの諸作用を保持した形で、従来の血管強化用など循環器疾患の治療用医薬品の成分原料としても使用しうる。このような医薬品としてはビタミンＰ強化剤；循環器系疾患、感受性疾患等の予防剤または治療剤（抗感受性疾患剤）；などが挙げられる。
【００７７】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の多くは、抗酸化作用をも有するため、食品、医薬品などに添加されれば、水溶性クエルセチン配糖体本来の生理作用に加えて食品、医薬品などの酸化防止効果も期待できる。したがって、水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を食品（健康食品、機能性食品、栄養強化食品等を含む）、医薬品などに添加することにより異味異臭の発生、変色または毒性物質の生成などを有効に防止し、その品質あるいは栄養価を維持することができる。上記各種疾患の治療用として経口投与される医薬品などにおいては、呈味の改善効果と抗酸化作用も強化される。そのような医薬品としては、たとえば、経腸栄養剤、補助栄養剤、水薬、シロップ剤などが挙げられる。
【００７８】
以上述べたような一般飲食物（健康食品、機能性食品、栄養強化食品等を含む）、嗜好品、医薬品などに本発明の水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を使用するには、その製品が完成するまでの工程のうち適切な段階で、この水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を添加することができる。例えば、水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を添加する際に他の配合成分と混合、混和、混捏してもよく、飲食物などに水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を浸透、溶解、散布、塗布、噴霧、注入などしてもよく、また液状の水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤に飲食物を浸漬してもよく、そのために従来より公知の方法が適宜採用される。
【００７９】
本発明の水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を摂取する形態は、単独であるいは医薬品としてあるいは食品として摂取する場合にその用量・用法は必ずしも同一ではない。しかしながら、水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の有効成分の起源は、もともと天然物由来の化合物であり、昔から食に供されてきた植物から抽出されたものであり、極めて安全性に優れている。したがって、副作用、摂取量の制限は少なく、継続的摂取の弊害も通常の場合にはないと考えられる。
【００８０】
【実施例】
以下、本発明について実施例に基づいてさらに具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例により何ら限定されるものではない。
なお、以下の例において、「％」は、特にその趣旨に反しない限り「重量％」の意味である。
【００８１】
【実施例１】
クエルセチン、イソクエルシトリン、ルチンは水に溶けないためプロピレングリコールに溶解し、ＭＧＲおよびαＧ-ルチンは水溶液として、Ｆ３４４ラット（雄、５週令）に、経口的に単回投与して、血中動態を調べた。ラット体重Kg当たり50μmoles（ルチンとして30mg／Kg）となるように投与し、投与後、0.5、１、２、４、８時間の各時点で採血した。血漿を37℃で20分間、β-グルクロニダーゼ処理した後、0.01Ｍシュウ酸を加えて混合し、これをSep-Pak C18カートリッジに通し、0.01Ｍシュウ酸、水、25％メタノール、100%メタノールの順に溶出液を通した。得られた100％メタノール画分についてＨＰＬＣ分析を行った。ＨＰＬＣは、Capcell Pak C18-UG120(Shiseido)カラムを使用し、溶出条件は、メタノール-ＴＦＡを移動層とし、流速は0.5ml/分、372nmで溶出物を検出した。定量は、各ルチンおよびルチン誘導体の投与群とも、総グルクロン酸抱合体量として求めた。
【００８２】
＜結果＞
各投与群について、血漿中のクエルセチン誘導体（グルクロン酸抱合体として測定）の経時変化は、図１に示すように変化した。
プロピレングリコールで溶解したクエルセチン、イソクエルシトリン投与群では、投与後0.5時間でピークに達し、その後は徐々に減少していった。
【００８３】
これに対し、同様に処理したルチン投与群では４時間後に、ＭＧＲ投与群では、８時間後にピークに到達した。一方、αＧ-ルチン投与群では、0.5時間および８時間時点の２回、ピークが観測された。αＧ-ルチンは、ＭＧＲとイソクエルシトリンの混合物でもあることから、0.5時間後のピークは、イソクエルシトリン由来、８時間後のピークはＭＧＲ由来のピークであると考えられる。
【００８４】
各クエルセチン誘導体は、いずれも50μmoles／Kg体重と等量投与したが、各投与群間で、血中への出現速度とともにピーク高低の違いも観測された。
＜考察＞
図１に示す各クエルセチン誘導体の吸収と動態に関する結果は、ラットの実験結果であるが、これと同様の結果がヒトの場合でも得られており、ラットおよびヒト間に共通点が多いと考えられる。
【００８５】
図１から明らかなように、プロピレングリコールで溶解したクエルセチンおよびイソクエルシトリンは、ルチンおよびその誘導体間で最も早くしかも効率よく腸管に吸収されることがわかる。とくにイソクエルシトリンは、投与後0.5時間時点でのピークが、クエルセチンのピークより２倍高く、吸収量が多いことを示している。両者はいずれも水にほとんど溶けないが、イソクエルシトリンがαグルコシルルチンと共存する場合、より溶解性が高まることから、本発明の水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤ではイソクエルシトリンを利用し、同様にヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤では、β-モノグルコシルヘスペレチンを利用する。
【００８６】
２回ピークが観測されたαＧ-ルチンは、単独に単回投与しても２つのピーク間では、生理効果の平準化を図ることはできない。これに対し、イソクエルシトリンとＭＧＲとの混合物を摂取したとすると、αＧ-ルチンの摂取と同様に２つの時点でピークが出現するものと考えられる。しかも、0.5時間以降８時間までの間のクエルセチン誘導体濃度（実際はクエルセチン抱合体レベル）は、両者の量比を調整することにより高くすることができる。すなわち、本実施例では、異なる群においてしかも投与量の比は、イソクエルシトリン：ＭＧＲが１：１であったが、両誘導体の量比を適切に選べば、αＧ-ルチンの場合と違い、両誘導体の含有物を投与した場合には、0.5時間および８時間時点の２回ピークは、高いレベルにすることができ、しかもその間も低レベルに落ち込むことはない。したがって、イソクエルシトリンとＭＧＲとの含有物を摂取すると、ルチンあるいはその誘導体を単独に摂取する場合と違い、ルチン類またはヘスペリジン類の作用の即効性および持続性が実現できる。このことを図１の結果を基にして以下、具体的にさらに検証する。
【００８７】
本発明に係るクエルセチン誘導体を含有する経口栄養補給剤において、水易溶性のモノグルコシルルチン１モルに対し、水難溶性のイソクエルシトリンを0.2モルの割合で含有させた場合を想定する。図１においては、0.5時間および8時間時点でのクエルセチン抱合体の血漿レベルが、イソクエルシトリン投与群ではそれぞれ0.45μg／ml、0.07μg／mlであり、モノグルコシルルチン投与群では、それぞれ、０μg／ml、0.04μg／mlであった。この結果を利用すると、上記した想定の割合で含有する経口栄養補給剤を摂取した場合、0.5時間および8時間時点でのクエルセチン抱合体の血漿レベルは、それぞれ、0.45×0.2+0 μg／ml, 0.07×0.2+0.04×1 μg／ml、すなわち、 0.09μg／ml、 0.054μg／mlとなる。結局、クエルセチン抱合体について0.5時間後の血中濃度Ｃ_0.5と８時間後の血中濃度Ｃ₈との比Ｃ₈/Ｃ_0.5は、0.6となり、0.2〜0.9の範囲内にはいっている。
【００８８】
以上述べてきたことは、ヘスペリジンについても同様にいえる。
【００８９】
【実施例２】
Ｆ３４４ラット（雄、６週令）にクエルセチン、ＭＧＲおよびαＧ-ルチンを別個に、それぞれ1，000ｐｐｍの濃度に含まれるように通常の固形飼料に添加した食餌を1週間与えた。ルチンおよびその誘導体の投与後、1週間時点でそれらの消化管動態をみるため、各群のラットを、採血後、腸管内容物を回収した。小腸、盲腸、大腸を、それぞれ両端を手術糸で結紮して摘出した。それらの内容物を0.9%塩化ナトリウム溶液で押し出して充分に混合した後、遠心分離（3,000ｒｐｍ、10分間）して、上清を分析サンプルとして得た。
【００９０】
血漿と同様に、β-グルクロニダーゼ処理（37℃、20分間）した後、0.01Ｍシュウ酸を加えて混合し、これをSep-Pak C18カートリッジに通し、0.01Ｍシュウ酸、水、25％メタノール、100%メタノールの順に溶出液を通した。得られた25％および100%メタノール画分についてＨＰＬＣ分析をした。Capcell Pak C18-UG120(Shiseido)カラムを使用し、溶出条件は、メタノール-ＴＦＡを移動層とし、流速は0.5ml/分、275nmまたは372nmで溶出物を検出した。定量は、各ルチンおよびルチン誘導体の投与群とも、総グルクロン酸抱合体量として求めた。
【００９１】
＜結果＞
ＭＧＲ投与群およびαＧ-ルチン投与群では、小腸でおもにルチン、盲腸でクエルセチンが検出された。クエルセチン投与群では、小腸でクエルセチン、タマリキセチン、イソラムネチンが、盲腸ではクエルセチンが検出された。血漿中には実施例１の場合と比べると、微量であるがクエルセチンが検出された。
【００９２】
以上のことから、ＭＧＲは、小腸で糖残基が１つ外れたルチンに分解され、盲腸ではクエルセチンにまで分解されるように、消化管内で徐々に分解されていくことが判明した。このように糖が付加すると腸管への吸収速度が遅く、吸収量も少なくなる傾向がある。おそらく吸収までに腸内細菌の酵素による加水分解作用を受けることによると考えられる。
【００９３】
これらのことは、ヘスペリジンについても同様にいえると考えられる。
【００９４】
【実施例３】
・経管経口栄養剤の製造
結晶性α‐マルトース２０重量部、グリシン1.1重量部、グルタミン酸ナトリウム0.18重量部、食塩1.2重量部、クエン酸１重量部、乳酸カルシウム0.4重量部、炭酸マグネシウム0.1重量部、水溶性クエルセチン配糖体組成物（モノグルコシルルチン１、イソクエルシトリン0.21、ルチン0.02、各モル比）0.1重量部、チアミン0.01重量部およびリボフラビン0.01重量部からなる配合物を調製した。この配合物24ｇずつをラミネートアルミ製小袋に充填し、ヒートシールして経管経口栄養剤を調製した。
【００９５】
本経管経口栄養剤は、一袋約300〜500mlの滅菌水に溶解し、経管方法により鼻腔、胃、腸などへの経口的または非経口的栄養補給液として有利に利用できる。
【００９６】
【実施例４】
・グレープフルーツゼリーの製造
マルチトール６重量部、安定剤1.2重量部、グレープフルーツ砂のう1重量部、ｐＨ調整剤0.9重量部、グレープフルーツ果汁（1／６濃縮）、水溶性ヘスペリジン配糖体組成物（α‐モノグルコシルヘスペリジン1.0、β‐モノグルコシルヘスペリジン0.18、ヘスペリジン0.01、各モル比）0.1重量部、酵素処理ステビア0.04重量部、ベニバナ黄色0.01重量部に精製水を加えて全体を100重量部としたグレープフルーツゼリーを調製した。
【００９７】
本ゼリーを摂取すると、ヘスペリジンの有する生理機能が即効的、持続的に期待できる。
【００９８】
【実施例５】
・酢酸飲料の製造
リンゴ酢10重量部、米酢６重量部、クエン酸２重量部、リンゴ酸２重量部、異性化糖38重量部、酵素処理ステビア0.7重量部、ソルビット１重量部、リンゴエッセンス0.5重量部、リンゴ果汁（１／５濃縮）２重量部、水溶性クエルセチン配糖体組成物（モノグルコシルルチン１、イソクエルシトリン0.21、ルチン0.02、各モル比）0.1重量部を調製した。
【００９９】
本飲料を摂取することにより、ルチンの有する生理機能が即効的、持続的に発揮されることが期待できる。
【０１００】
【発明の効果】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤あるいは水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤は、ルチン類、ヘスペリジン類の生理作用が即効性および持続性をもって発揮されるような割合で水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤である。すなわち、含有されるイソクエルシトリンとモノグルコシルルチンとのモル比、あるいはα‐モノグルコシルヘスペリジンとモノグルコシルヘスペリジンとのモル比が、クエルセチン抱合体またはヘスペレチン抱合体について経口摂取0.5時間後の血中濃度Ｃ_0.5と８時間後の血中濃度Ｃ₈との比Ｃ₈/Ｃ_0.5が0.2〜0.9の範囲内に維持されるように決定して各成分を含める。本発明の上記組成物により、ルチン類を含む水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤の作用が、投与後0.5時間で示される即効性ならびに8時間時点までその血中レベルが維持される持続性の両立が達成されるものである。
【０１０１】
本発明に係る水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を直接摂取するか、あるいはこの水溶性クエルセチン配糖体を含有する経口栄養補給剤または水溶性ヘスペレチン配糖体を含有する経口栄養補給剤を含む飲食物または医薬品を摂取すると、その組成に基づいて意図された吸収速度および血中への出現量が実現され、含まれているクエルセチン誘導体あるいはヘスペレチン誘導体が具えるビタミンPの諸作用のほか、消炎・鎮痛作用、血中の中性脂質、コレステロールの低下および骨密度の向上などの作用が効率よくしかも持続的に発揮されることを期待できる。したがって、投与回数、投与量が少なくなりコストパーフォーマンスに優れることとなる。また水溶性であるため、あらゆる形態の飲食物、医薬品に容易にしかも均一に含有させることが可能であり、広範囲な利用が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、血漿中のクエルセチン誘導体（グルクロン酸抱合体として）レベルの経時変化を示す。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention is an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside or a water-soluble hesperetin glycoside, and its various physiological actions of rutins or hesperidins have immediate effect and persistence when taken orally. It relates to oral nutritional supplements to be demonstrated. Furthermore, the present invention relates to the production method and use for foods and pharmaceuticals.
[0002]
TECHNICAL BACKGROUND OF THE INVENTION
Rutin contained in buckwheat and the like, hesperidin and naringin contained in citrus fruits and the like are substances belonging to flavonoids. Rutin, hesperidin, and naringin have so-called vitamin P effects such as strengthening of capillaries and prevention of bleeding, anti-inflammatory / analgesic effects, or arteriosclerosis, and hypertension. In addition, these flavonoids have been found to have functions such as antioxidation, ultraviolet absorption, fading prevention and flavor improvement, and are used as additives for foods, pharmaceuticals, etc. for the purpose of antioxidant and quality maintenance. Yes. The present inventors have so far developed a glycoside having enhanced water solubility and a method for producing the same for the above-mentioned rutin, hesperidin, and naringin that exhibit various physiological functions. Rutin, hesperidin, and naringin are used in foods, health foods, and pharmaceuticals as a preventive agent for diseases by using such water-soluble derivatives, and are highly safe and useful functional materials. is there.
[0003]
Establishing appropriate intake and usage methods for health foods, functional nutritional foods, foods for specified health use, etc. as well as pharmaceuticals is based on the active ingredients or physiologically active substances contained in these health foods. It is also desirable to ensure efficacy. For this purpose, information on absorption of active ingredients or physiologically active substances, kinetics in the body, mechanism of action, etc. is required.
[0004]
On the other hand, it is preferable that a physiologically active substance from an ingested health food or the like exhibits an immediate effect of exerting its effect immediately after being absorbed into the body, even if it is not a pharmaceutical product. Furthermore, if the absorbed physiologically active substance undergoes catabolic metabolism in the living body, resulting in a sudden decrease in the body concentration of the substance, the physiological action temporarily remains. Is necessary and cumbersome and burdensome. For example, since vitamin C disappears from the blood 3 hours after ingestion, it is necessary to continue ingesting vitamin C at least at an interval when the sustained effect is expected. For this reason, if a nutritional supplement, a pharmaceutical or a health food containing a physiologically active substance having both immediate effect and sustainability is realized by a single oral intake, it is extremely useful in practice and has excellent cost performance. This is ideal.
[0005]
As a result of diligent research in view of these circumstances, the present inventors have found that various physiological actions of rutins or hesperidins are immediately effective by combining the types and compositions of rutin derivatives or hesperidin derivatives as appropriate. The present invention has been completed by developing an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside or an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside, which is exerted with durability.
[0006]
The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the water-soluble hesperetin glycoside of the present invention has a blending ratio in consideration of actual absorption and in vivo kinetics, and of course can be used as a pharmaceutical. Furthermore, the above-mentioned effect can be expected even when added to general foods, foods, health foods and functional foods.
[0007]
OBJECT OF THE INVENTION
The present invention shows the same physiological activity but has different solubility and absorption rate / absorption amount in the intestinal tract due to glycosides. It is an object of the present invention to provide an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside or a water-soluble hesperetin glycoside in a ratio that also exhibits the above. Furthermore, an object of this invention is to provide those manufacturing methods and the application method to food-drinks and a pharmaceutical.
[0008]
SUMMARY OF THE INVENTION
An oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside according to the present invention,
Monoglucosyl rutin and isoquercitrin
Monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Further, as desired, rutin: 0.001-0.4
It is possible to exhibit the immediate effect and persistence of the physiological action of rutins.
[0009]
An oral nutritional supplement containing the above water-soluble quercetin glycoside is
Monoglucosyl rutin and isoquercitrin
Monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Further, as desired, rutin: 0.001-0.4
Of quercetin conjugate 0.5 hour after blood concentration C_0.5And blood concentration C after 8 hours₈Is the ratio of₈/ C_0.5Can be maintained within a range of 0.2 to 0.9.
[0010]
Production of an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside capable of maintaining the blood concentration of a quercetin conjugate of the present invention for a long time and exhibiting immediate effects and persistence of the physiological action of rutins The method is
Monoglucosyl rutin and isoquercitrin
Monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Furthermore, as desired, rutin: 0.001-0.4
The quercetin derivative is contained in a molar ratio of
[0011]
An oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside of the present invention,
α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin
α-Monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Further, as desired, hesperidin: 0.001-0.4
It is possible to exhibit the immediate effect and persistence of the physiological action of hesperidins.
[0012]
An oral nutritional supplement containing the above water-soluble hesperetin glycoside is
α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin
α-Monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Hesperidin as needed: 0.001-0.4
The blood concentration C of hesperetin conjugate after 0.5 hours_0.5And blood concentration C after 8 hours₈Is the ratio of₈/ C_0.5However, it can maintain so that it may exist in the range of 0.2-0.9.
[0013]
Production of an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside capable of maintaining the blood concentration of a hesperetin conjugate of the present invention for a long period of time and exhibiting the immediate effect and persistence of the physiological action of hesperidins The method is
α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin
α-Monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Further, as desired, hesperidin: 0.001-0.4
It is characterized by containing a hesperetin derivative at a molar ratio of
[0014]
Furthermore, this invention is a pharmaceutical containing said oral nutritional supplement.
The present invention may also be a food or drink containing the above oral nutritional supplement.
[0015]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention is a quercetin glycoside-containing agent containing monoglucosylrutin and isoquercitrin Or a hesperetin glycoside-containing agent containing α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin,
Monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Furthermore, as desired, rutin: 0.001-0.4, or
α-Monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Further, if desired, hesperidin: 0.001-0.4,
When the quercetin conjugate or hesperetin conjugate is taken orally, the blood concentration C after 0.5 hours_0.5And blood concentration C after 8 hours₈Ratio C₈/ C_0.5Can be maintained in a range of 0.2 to 0.9.
[0016]
Absorbed rutins or hesperidins are converted into a common active substance among rutins in vivo, or converted into a common active substance among hesperidins, and exhibit their physiological functions. it is conceivable that. Therefore, it seems that there is no difference in the content of the physiological effect to be exhibited, apart from the strength of the action of each derivative among rutins. The same is true among hesperidins. The water-soluble quercetin of the present invention, which is incorporated in the above ratio, considering the difference in blood kinetics of these derivatives between rutins or hesperidins and taking into consideration the solubility in water. An oral nutritional supplement containing a glycoside or an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside realizes both immediate effect and sustainability of the quercetin derivative action or the hesperetin derivative action. Therefore, maintaining the blood concentration of the quercetin derivative or the hesperetin derivative within the above range exhibits the physiological action of rutins or hesperidins almost immediately after administration, and this can be expected to last for 8 hours or more. Moreover, since it is water-soluble, it can be easily and uniformly contained in drinks and other forms of food and drink, and can be used in a wide range.
[0017]
Hereinafter, an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside according to the present invention or an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside, a quercetin derivative component or a hesperetin derivative component, their dynamics in vivo, A manufacturing method and those uses are demonstrated concretely.
In the present specification, the “quercetin derivative” is a collective term for a mixture of quercetin, isoquercitrin, rutin, monoglucosylrutin and α-glucosylrutin, and is sometimes referred to as “rutins” in some cases. Similarly, “hesperetin derivative” is a collective term for a mixture of hesperetin, β-monoglucosyl hesperetin, hesperidin, α-monoglucosyl hesperidin, α-glucosyl hesperidin, and is sometimes referred to as “hesperidins”.
[0018]
The “quercetin conjugate” and “hesperetin conjugate” are the forms of rutins and hesperidins present in vivo, and the levels thereof are regarded as the abundances of these flavonoids in vivo.
The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside according to the present invention contains isoquercitrin and monoglucosylrutin, and may further contain rutin if desired. Similarly, oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides include hesperetin derivatives containing hesperidin.
[0019]
About rutin and its derivatives
Rutin
Rutin is represented by the following formula [I]:
[0020]
[Chemical 1]

[0021]
As shown in the formula, flavonol glycosides in which quercetin (also referred to as quercetin) is aglycone and L-rhamnosyl- (α1 → 6) -glucose is β-linked to the hydroxyl group at the 3-position. This rutin is found in buckwheat whole grass, figs, green grass, and tobacco leaves. Rutin restores normal blood vessels with vitamin C to normal, and acts as vitamin P to prevent bleeding. In addition, it has anti-inflammatory and analgesic effects, bone density improving effects, UV absorption, antioxidant, coloring・ It also has the effect of preventing fading.
[0022]
Rutin is a phenolic substance and is unstable in air. In addition, rutin is soluble in alkaline aqueous solution, but hardly soluble in water and acidic aqueous solution, and only about 0.1 g is soluble in 1 liter of water at room temperature. ing. Thus, various methods for enhancing the water solubility of rutin and derivatives thereof have been proposed, and an α-glucosylated rutin mixture in which sugar is transferred (added) to rutin has been developed (Japanese Patent Laid-Open No. 3-27293). The product name “αG-rutin P” is commercially available.
[0023]
This “αG rutin P” (hereinafter referred to as “αG rutin”) is a water-soluble rutin in which glucose is transferred from the starch, dextrin, etc. to the glucose 4-position of rutin by the transfer action of the enzyme glycosidase, transglycosidase, etc. As shown in the following formula (II), it is a mixture of α-glucosylated rutin having different glucose numbers.
[0024]
[Chemical 2]

[0025]
(In the formula (II), R represents a glucose residue, and n represents an integer of 1 to several tens)
“ΑG-Rutin” is a mixture of α-glucosylated rutins in which the number of glucose residues at the α-position (n) is in the range of 1 to several tens, and on average n is about 4 to 5. This αG-rutin includes monoglucosylrutin (MGR) having 1 (n) glucose residues at the α-position.
[0026]
αG-rutin has a high solubility in water, alcohol, etc., and dissolves 50 g or more per 100 g of water, or dissolves 20 g or more per 100 g of 50% alcohol.
As described above, αG-rutin has improved solubility (water solubility and fat solubility) as compared with rutin, and further improved stability such as heat resistance and long-term storage stability. The α-glucosylated rutin mixture itself exhibits the same pharmacological and physiological effects as rutin, and is extremely excellent in water solubility, approximately 5000 times that of rutin.
[0027]
・ Isoquercitrin (also known as isoquercitrin)
When α-1,6-rhamnosidase is allowed to act on rutin, a rutin derivative in which only one rhamnose unit is removed from the rutinose residue bonded to the carbon 3 position and only one glucose unit remains, ie, isoquer. Citrine is produced. This is also a compound that is hardly soluble in water like rutin, and the physiological activity is the same as that of rutin because the glucose residue is removed to produce quercetin.
[0028]
・ Monoglucosyl rutin (MGR)
It is a glycoside obtained by transferring one glucose to the glucose residue of the rutinose unit of rutin. Alternatively, α-glucosidase may be allowed to act in the form of leaving one residue of glucose from “αG-rutin P (trade name, manufactured by Toyo Seika Co., Ltd.)” obtained by α-glucosylating rutin. Monoglucosylrutin is also excellent in water solubility like the α-glucosylated rutin mixture, and its physiological action is similar to other rutins or hesperidins.
[0029]
The interrelationship of rutin, quercetin, isoquercitrin, MGR (monoglucosyl rutin), and αG-rutin (αG-rutin) described above is shown in the following formula (III).
[0030]
[Chemical Formula 3]

[0031]
Hesperidin and its derivatives
Hesperidin is represented by the following formula [IV]:
[0032]
[Formula 4]

[0033]
As shown in the above, the 7-position hydroxyl group of hesperetin (5,7,3′-trihydroxy-4′-methoxyflavanone) is β-linked with rutinose (L-rhamnosyl- (α1 → 6) -glucose). Say. This hesperidin is contained in the immature pericarp of citrus fruits, and hesperidin and its derivatives have the effect of improving bone density, as well as vitamin P that exerts physiological actions such as strengthening of capillaries, prevention of bleeding, blood pressure regulation, etc. It also has the function of Pharmaceuticals, cosmetics, etc. that utilize this vitamin P function have been provided so far. This hesperidin is soluble in an alkaline aqueous solution, but is hardly soluble in water and acid, and only 1 g (about 0.002 W / V%) is soluble in 50 L of water at room temperature. In the present invention, in addition to this hesperidin, hesperidin derivatives such as the following “enzyme-treated hesperidin” or “high monoglucosyl hesperidin content” whose solubility is improved are used.
[0034]
・ Β-Monoglucosyl hesperetin
When α-1,6-rhamnosidase is allowed to act on hesperidin, a hesperidin derivative in which only the rhamnose unit is detached from the sugar moiety and rutinose residue bonded to the carbon 7 position and only the glucose residue remains is obtained. This β-monoglucosyl hesperetin is represented by the following formula [V].
[0035]
[Chemical formula 5]

[0036]
This is also a compound that is hardly soluble in water like hesperidin, and has the same physiological activity as hesperidin because the glucose residue is removed to produce hesperetin.
・ Α-Monoglucosyl hesperidin
It is a glycoside obtained by transferring one glucose to the glucose residue of hesperidin's rutinose unit. Alternatively, α-glucosidase may be allowed to act in the form of leaving one residue of glucose from “αG-Hesperidin P (trade name, manufactured by Toyo Seiki Co., Ltd.)” obtained by α-glucosylating hesperidin. Hesperetin derivative corresponding to α-monoglucosylrutin for rutin. α-Monoglucosyl hesperidin is also excellent in water solubility like α-glucosylated rutin mixture, and its physiological action is similar to other rutins or hesperidins.
[0037]
Dynamics in vivo
When an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside or an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention is orally taken into the body of a human or other animal, the water-soluble quercetin Rutins or hesperidins contained in oral nutritional supplements containing glycosides or water-soluble hesperetin glycosides are affected by the action of β-glucosidase of intestinal bacteria when they reach the intestine, and aglycon Quercetin and sugar, or hesperetin and sugar are considered to be absorbed after absorption. As will be described later, hydrolysis does not always proceed in the same manner depending on the type of sugar, the number of sugar residues, and the like, and as a result, a difference in absorption rate and absorption amount appears.
[0038]
In the case of rutins, α-glucosylated rutin, including monoglucosylrutin, when taken orally in the same way as rutin, produces rutin by sequentially removing its sugar residues by the action of intestinal bacteria. It is gradually absorbed with a delay. The same applies to α-glucosylated hesperidin, and its absorption is delayed as compared to β-monoglucosyl hesperetin.
[0039]
When ingested isoquercitrin reaches the small intestine in the same manner as rutin, it is thought that it is hydrolyzed into quercetin, which is an aglycon, and sugar by the action of β-glucosidase of intestinal bacteria and then absorbed into the body.
However, the absorption rate of isoquercitrin in the small intestine is rapid following the aglycon quercetin, and is faster than rutin, monoglucosylrutin, and other α-glucosylated rutins. This is related to the difficulty of hydrolysis depending on the type of sugar and the position where it is added, and the hydrolysis of rhamnose residues is facilitated by the action of α-1,6-rhamnosidase of enteric bacteria. First, it seems that hydrolysis of glucose constituting the rutinose unit is rapid due to β-glucosidase which is common in enteric bacteria.
[0040]
When absorbed, quercetin undergoes glucuronidation in intestinal epithelial cells and is sent to the liver via the portal vein as a conjugate. It further undergoes conjugation and methylation reactions in the liver, then enters the bloodstream and moves to peripheral tissues, but is eventually excreted in the urine via the kidneys.
The same applies to hesperidins and the aglycon hesperetin.
[0041]
When rutins or hesperidins are converted to physiologically active forms in vivo, in addition to their functions as vitamin P, they exhibit various actions such as reducing cholesterol and neutral lipids in blood and improving bone density. It becomes.
Oral nutritional supplement containing water-soluble quercetin glycoside or water-soluble hesperetin glycoside
As described above, in the oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention, the difference in absorption rate and absorption amount in the intestinal tract after oral ingestion is observed in the subsequent blood. It is reflected in the dynamics as it is. That is, in the case of a water-soluble quercetin glycoside, the rapidly absorbed isoquercitrin appears as a methylated product / conjugate of quercetin 0.5 hours after ingestion, and its blood level is 0.5 Time is also a peak and then decreases. The blood level of the methylated product / conjugate of aglycone derived from monoglucosylrutin (MGR), which is absorbed later than isoquercitrin, reaches the peak after 8 hours have passed since ingestion. Similarly, rutin is absorbed at an intermediate rate between the two, and blood levels reach a peak 4 hours after ingestion. The same applies to hesperidins.
[0042]
The oral nutritional supplement containing the quercetin glycoside of the present invention or the oral nutritional supplement containing the hesperetin glycoside is a water-soluble quercetin glycoside or a water-soluble hesperetin conjugate that exhibits the same physiological action in vivo. The saccharide is contained in consideration of the difference in absorption rate and absorption amount in the intestinal tract due to the type of sugar and the number of bonds. Specifically, in the oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside or a water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention, the molar ratio of isoquercitrin and monoglucosylrutin, or α-monoglucosyl The molar ratio of hesperidin to β-monoglucosyl hesperetin is determined by measuring the blood concentration C of quercetin conjugate or hesperetin conjugate 0.5 hours after oral ingestion._0.5And blood concentration C after 8 hours₈Ratio C₈/ C_0.5Is determined to be maintained within the range of 0.2 to 0.9. Oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides in such proportions or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides have immediate effects based on the time difference that appears in the blood and reaches the peak. Sustainability can also be realized.
[0043]
As a specific content molar ratio, in the case of rutins, isoquercitrin is 0.1 to 0.4, more preferably 0.2 to 0.4, with respect to monoglucosylrutin: 1. Alternatively, if desired, rutin may coexist, and monoglucosylrutin: 1 is 0.1 to 0.4 for isoquercitrin, 0.001 to 0.4 for rutin (all in molar ratio), more preferably isoquer. An oral nutritional supplement comprising 0.2 to 0.4 citrine and 0.1 to 0.2 rutin (molar ratio) is desirable.
[0044]
The same can be said for hesperidin. That is, β-monoglucosyl hesperetin is 0.1 to 0.4, more preferably 0.2 to 0.4, with respect to α-monoglucosyl hesperidin: 1. Alternatively, if desired, when hesperidin is also present, β-monoglucosyl hesperetin is 0.1 to 0.4, hesperidin is 0.001 to 0.4 (all in molar ratio), more preferably α-monoglucosyl hesperidin: An oral nutritional supplement comprising β-monoglucosyl hesperetin in a composition of 0.2 to 0.4 and hesperidin in a ratio of 0.1 to 0.2 (all in molar ratio) is desirable.
[0045]
This is based on comprehensive consideration of the solubility of the components in water, the absorption rate and the amount absorbed in each intestinal tract, and the quercetin derivative level in the blood level does not vary as much as possible over time, and remains constant. An appropriate range is selected so as to fit. The same can be said for hesperidin.
When a composition comprising these contents is orally ingested, the quercetin conjugate concentration C in blood after 0.5 hours_0.5And blood concentration C after 8 hours₈Ratio C₈/ C_0.5Is maintained within the range of 0.2 to 0.9, the physiological effect of the quercetin derivative is leveled over time, and stable durability can be achieved. Furthermore, the presence of rutin as the third component contributes to an increase in quercetin derivative levels between 0.5 and 8 hours. This is because isoquercitrin, which has a large amount of absorption in the intestinal tract, reaches its peak in 0.5 hours and then gradually decreases. On the other hand, isoquercitrin is hardly soluble in water like rutin. Therefore, it is also related to the fact that the content ratio of isoquercitrin cannot be increased so much in an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside. The same applies to oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides.
[0046]
In the oral nutritional supplement containing this water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside, the content ratio of various quercetin derivatives is selected in the above molar ratio ratio, The total amount of quercetin derivative or hesperetin derivative can be included in any amount. For example, it may be included in the range of 0.001 to 100% by weight. The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention has a water-soluble quercetin glycoside or a water-soluble hesperetin from the viewpoint of ease of use. The total amount of glycoside is preferably 0.1 to 90% by weight, more preferably 1 to 80% by weight.
[0047]
The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside according to the present invention is a mixture of water-soluble quercetin glycosides, or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside is water-soluble hesperetin. A mixture of saccharides may be used alone, but other substances may be blended within a range that does not impair the object of the present invention. For example, various amino acids and vitamins may be added to enhance nutritional nourishment, and particularly by adding vitamin C, a synergistic effect can be exerted in vitamin P action such as enhancement of capillary resistance.
[0048]
In addition, various ingredients such as sweeteners, extenders and flavors are added to improve the taste and quality of oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides. 1 type (s) or 2 or more types can be mix | blended as needed.
For example, sweeteners such as starch syrup, glucose, maltose, sugar, isomerized sugar, palatinose, xylitol, erythritol, trehalose, sucralose, acesulfame K, steobioside, L-aspartylphenylalanine methyl ester, glycyrrhizin; citric acid, succinic acid, lactic acid, Various organic acid salts such as malic acid and gluconic acid; flavoring agents such as various flavors; bulking agents such as dextrin, starch and lactose; Furthermore, various components generally used in foods and pharmaceuticals, for example, optional components such as thickeners and dispersants can be included.
[0049]
The dosage form of the oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention is not particularly limited, and powdered flavonoids may be used as they are. Or, if necessary, it can be mixed with a bulking agent and an excipient and molded into granules, spheres, cubes, tablets or the like. Furthermore, taking advantage of its water-soluble characteristics, it may be used as a paste or a liquid product. In particular, the concentration of the liquid product can be adjusted as appropriate for convenient use. The performance and form of the container filled with the oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside is not particularly limited.
[0050]
Method for producing oral nutritional supplement containing water-soluble quercetin glycoside or oral nutritional supplement containing water-soluble hesperetin glycoside
The method for producing an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside according to the present invention is based on the molar ratio of monoglucosyl rutin and isoquercitrin, and the blood concentration C after 0.5 hour of quercetin conjugate after oral ingestion._0.5And blood concentration C after 8 hours₈Is the ratio of₈/ C_0.5Is a method for producing an oral nutritional supplement, which is determined to be maintained within the range of 0.2 to 0.9, and can exert the immediate effect and sustainability of the physiological action of rutins. Also, an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside is the same production method. For example,
Monoglucosyl rutin (or monoglucosyl hesperidin): 1
Isoquercitrin (or α-monoglucosyl hesperidin): 0.1 to 0.4
Further, as desired, rutin (or hesperidin): 0.001-0.4
A quercetin derivative or a hesperetin derivative may be contained in a molar ratio of
[0051]
Rutin or a derivative thereof used for an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside according to the present invention, or hesperidin or a derivative thereof used for an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside, Commercially available products can be used. Weigh these in a predetermined amount, and if there are other substances to be added, mix them in a predetermined amount to obtain an oral nutritional supplement containing water-soluble quercetin glycoside or an oral nutritional supplement containing water-soluble hesperetin glycoside. Prepare. In the case of forming a paste or granule, or molding, a necessary amount of water or the like is added and kneaded, and if necessary, concentrated or dried. In the case of a liquid product, it may be dissolved in a solvent such as water.
[0052]
Rutin or hesperidin and their derivatives used for oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides according to the present invention can also be prepared by the following method .
・ Quercetin derivatives
A water-soluble quercetin glycoside-containing product can be obtained from a mixture of α-glucosylated rutin and rutin or a mixture of monoglucosyl rutin and rutin. A first method for producing a water-soluble quercetin glycoside-containing product according to the present invention comprises causing α-1,6-rhamnosidase (EC3.2.1.40) to act on a mixture (B) of monoglucosylrutin and rutin, It is characterized by changing rutin to isoquercitrin. A second method for producing a water-soluble quercetin glycoside-containing product according to the present invention comprises a mixture (A) of α-glucosylated rutin and rutin, glucoamylase (EC 3.2.1.3) and α-1,6- It is characterized in that rhamnosidase acts simultaneously or separately to change the α-glucosylated rutin mixture to monoglucosylrutin and to change rutin to isoquercitrin.
[0053]
In the production of monoglucosyl rutin, a mixture (A) of α-glucosylated rutin and rutin is used as a raw material, and this mixture (A) is usually “αG rutin P” (R) (Toyo Seika Co., Ltd.). It is commercially available under the trade name of
αG-rutin is produced, for example, as follows. That is, starch or a partial hydrolyzate thereof (eg, dextrin) as a sugar donor is added to rutin represented by the above formula (I), which is extremely hardly soluble in water (solubility: about 0.01 g per 100 g of water). By making a glucose residue transferase such as amylase, glycosidase, transglycosidase, etc. act on a composition comprising maltose), sugar (glucose) is transferred (added) from starch or a partially decomposed product thereof to rutin. -A glucosylated rutin mixture is obtained.
[0054]
Details of the method for producing the α-glucosylated rutin mixture are described in, for example, Japanese Patent Publication No. 54-32073, Japanese Patent Publication No. 58-54799, and Japanese Patent No. 2926411.
The reaction product thus obtained usually contains a small amount of unreacted rutin or quercetin, which is a degradation product of rutin, together with the α-glucosylated rutin mixture. In addition, in this specification, unless it is contrary to the meaning, when referring to an α-glucosylated rutin mixture, monoglucosylrutin is included.
[0055]
In the present invention, the above water-soluble quercetin glycoside-containing product is obtained by enzymatic treatment from a mixture containing at least such α-glucosylated rutin mixture and rutin. Hereinafter, first, the main reaction step of the present invention will be described in detail. In the adjacent steps such as the first step and the second step, when each enzyme used has a common action, In general, the reaction in the subsequent step can be allowed to proceed with the enzyme used in the previous step.
[0056]
[First step]
In the present invention, glucoamylase is allowed to act on the mixture (A) of the α-glucosylated rutin mixture and rutin to convert the α-glucosylated rutin mixture into monoglucosyl rutin. These enzymes include glucoamylases such as Glucozyme from Nagase Sangyo Co., Ltd., Gluczyme NL from Amano Pharmaceutical Co., Ltd., Uniase 30 from Yakult Co., Ltd., Naringinase from Tanabe Seiyaku, Cellulase A from Amano Pharmaceutical Co., Ltd. Enzymes such as “Amano” 3 can be exemplified. That is, any enzyme having a glucoamylase activity that cleaves an α-1,4-glucosyl bond at a glucose unit can be used freely. Furthermore, enzymes that cleave α-1,4-glucosyl bonds other than glucose units, such as α-amylase and β-amylase, can also be used. However, among these enzymes, glucoamylase excellent in the property of converting the α-glucosylated rutin mixture into monoglucosyl rutin is particularly preferably used.
[0057]
For example, glucosteam, a kind of glucoamylase, is usually in an amount of 0.01 to 10 g, preferably in an amount of 0.2 to 1 g, per 100 g of a mixture of α-glucosylated rutin and rutin (A). In other words, it is usually used in an amount of 0.01 to 11 g, preferably 0.2 to 1 g, per 100 g of the α-glucosylated rutin mixture content in the mixture (A). When glucosteam is used in such an amount, the α-glucosylated rutin mixture can be efficiently converted to monoglucosyl rutin (conversion rate of about 99%).
[0058]
As described above, when an enzyme such as glucoamylase is allowed to act on the α-glucosylated rutin mixture and rutin and mixture (A), it is not generally determined depending on the type and activity of the enzyme used. Then, it is preferable to adjust pH of a mixture (A) containing solution to about 3-6 using an inorganic acid, an organic acid, etc. Moreover, in the case of this monoglucosylation reaction, it is preferable to hold | maintain at the temperature of about 35-65 degreeC for about 1 to 60 hours.
[0059]
Thus, in the second step, α-1,6-rhamnosidase is added to the mixture (B) of monoglucosylrutin and rutin obtained by allowing the enzyme to act on the α-glucosylated rutin mixture in the mixture (A). To convert rutin in mixture (B) to isoquercitrin.
[Second step]
In the present invention, α-1,6-rhamnosidase is allowed to act on a mixture (B) of monoglucosylrutin and rutin, and the rutin in the mixture (B) is converted to isoquercitrin from which rhamnose units are removed. The mixture (B) is not limited to the one obtained using the raw material (A) in the first step, and the raw material (B) obtained by a known method can also be used.
[0060]
As long as the enzyme used in the second step is an enzyme having α-1,6-rhamnosidase activity, rutin can be changed to isoquercitrin. Examples of such an enzyme include Hesperidin No. 2 and Naringinase from Tanabe Seiyaku Co., Ltd. and Cellulase A “Amano” 3 from Amano Seiyaku Co., Ltd.
For example, hesperidin 2 of Tanabe Seiyaku Co., Ltd. is usually in an amount of 0.01 to 10 g, preferably in an amount of 0.3 to 2 g, per 100 g of a mixture of monoglucosyl rutin and rutin (B). Thus, it is usually used in an amount of 0.05 to 50 g, preferably 1.5 to 10 g per 100 g of rutin content in the mixture (B). When hesperidinase is used in such an amount, rutin can be efficiently converted to isoquercitrin (conversion efficiency of about 99%).
[0061]
As will be described later, when the enzyme in the first step and the second step is added to the raw material (A) and these reactions are allowed to proceed substantially simultaneously, an enzyme common to both steps (eg, naringinase or cellulase A) When "Amano") is used, the amount can be appropriately adjusted and set.
When an enzyme such as α-1,6-rhamnosidase is allowed to act on the mixture (B) of monoglucosylrutin and rutin, it is not generally determined depending on the type and activity of the enzyme used, but usually, for example, hesperidinase Then, it is preferable to hold | maintain pH, temperature, and reaction time of a mixture (B) containing solution similarly to the case of the monoglucosylation reaction of a 1st process.
[0062]
In the present invention, a water-soluble quercetin glycoside-containing product that is a mixture of monoglucosyl rutin and isoquercitrin is obtained by such a second step.
The above reaction is preferably performed in the presence of a reducing agent. The reducing agent used here has a reducing power that does not excessively reduce the α-glucosylated rutin mixture or reaction product, and a reducing power that can effectively prevent oxidation by dissolved oxygen or air. In view of the use of monoglucosyl rutin, those having less influence on the living body are preferable. Examples of such reducing agents include ascorbic acid and ascorbate, and ascorbic acid is generally used. The amount used is about 0.1 to 5 g with respect to 100 g of the α-glucosylated rutin mixture. Such amounts of ascorbic acid are easily removed in the manufacturing process.
[0063]
From the above-mentioned enzyme treatment solution, monoglucosylrutin and isoquercitrin are almost purified by appropriately applying general purification methods such as filtration, centrifugation, gel filtration, adsorption or ion exchange chromatography, etc. Respectively.
When obtaining the above-mentioned enzyme treatment solution, the content of monoglucosyl rutin and isoquercitrin, and if desired, the content of rutin can be controlled by adjusting the conditions for the enzyme treatment. It is possible to make the subsequent purification process simple or unnecessary so that the composition of the oral nutritional supplement containing the sex quercetin glycoside is close to the respective compositions.
[0064]
・ Hesperetin derivatives
Commercially available hesperidin or a derivative thereof can be used in the agent according to the present invention. For example, “αG Hesperidin” (registered trademark) manufactured by Toyo Seika Co., Ltd. can be used as a glucosylated derivative of hesperidin.
The hesperetin derivative used in the agent according to the present invention can also be prepared by the following method.
[0065]
α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin are obtained by allowing glucoamylase and α-L-rhamnosidase to act separately or simultaneously on a solution containing α-glucosyl hesperidin and hesperidin, for example, the above-mentioned “enzyme-treated hesperidin” solution. Thus, the obtained enzyme treatment solution may be separated by an appropriate separation means. Glucoamylase is a glucose (G) in which α-glucosyl hesperidin rhamnose remains as it is, and a number of α-1,4 bonds are bound to glucose 4-position of hesperetin skeleton 7-position._nHydrolyze leaving only one of them to change to α-monoglucosyl hesperidin. On the other hand, α-L-rhamnosidase hydrolyzes only the rhamnose unit of the rutinose moiety, leaving the glucose unit.
[0066]
“Enzyme-treated hesperidin” is a mixture containing α-glucosyl hesperidin having a different number of added glucose and unreacted hesperidin. Regarding this “enzyme-treated hesperidin”, in JP-A-3-7593, a glycosyltransferase (an enzyme having an α-glucosyltransferase activity) is allowed to act on hesperidin in the presence of a partially degraded starch (α-glucosylsugar compound). A manufacturing method is disclosed. The main component α-glucosyl hesperidin is a compound in which n (1 to 20) glucoses (G) are sequentially bonded with α-1,4 bonds at the 4-position of glucose of hesperidin represented by the formula [I]. is there.
[0067]
In the preparation of “enzyme-treated hesperidin” by the above method, 40 to 80% of hesperidin contained in the raw material liquid is converted to α-glucosyl hesperidin by enzyme treatment, but 20 to 60% remains as unreacted hesperidin. . Unreacted hesperidin has increased solubility in an aqueous solution when α-glucosyl hesperidin coexists. However, when the ratio of unreacted hesperidin to α-glucosyl hesperidin is high, unreacted hesperidin becomes insoluble and precipitates in a short time. This phenomenon is inconvenient when the enzyme-treated hesperidin is used in liquid form.
[0068]
A solution to these problems is a method in which unreacted hesperidin is converted into β-monoglucosyl hesperetin and coexisted with α-glucosyl hesperidin or monoglucosyl hesperidin. This is prepared by the method disclosed in JP-A-10-70994. Unreacted hesperidin has been converted to β-monoglucosyl hesperetin, and the mixture is extremely excellent in water solubility, and does not cause white turbidity even after a long period of time.
[0069]
From the viewpoint of efficiency, a method is preferred in which the following “high content of monoglucosyl hesperidin” is prepared from the above “enzyme-treated hesperidin” and each hesperetin derivative is purified. For that purpose, it can be isolated in a nearly pure state by using a purification method such as filtration, gel filtration method, ion exchange chromatography and the like described in the purification of quercetin derivative.
[0070]
A method for producing a “monoglucosyl hesperidin-rich product” is described in JP-A-10-323196. “Glucoamylase and an enzyme having α-L-rhamnosidase activity such as hesperidinase (manufactured by Tanabe Seiyaku Co., Ltd.) are allowed to act on a solution of“ enzyme-treated hesperidin ”containing α-glucosyl hesperidin and unreacted hesperidin. It is preferable to employ the “Method I” (Japanese Patent Laid-Open No. 10-323196). The amount of enzyme used, pH, temperature, action time, etc. for obtaining a “high content of monoglucosyl hesperidin” are specifically disclosed.
[0071]
A method for separating α-monoglucosyl hesperidin from “high content of monoglucosyl hesperidin” is described in detail in JP-A-10-323196, and a method using a porous adsorption resin as follows is simple. It is.
Specifically, for example, nonpolar resins such as HP-20, HP-50, and XAD-2 and intermediate polar resins such as XAD-7 are preferably used as the porous adsorption resin. The column is filled with the above porous adsorption resin and activated with a high-concentration ethanol aqueous solution or the like. The enzyme-treated α-monoglucosyl hesperidin-containing liquid is passed through the column by a method such as passing at a temperature of 10 to 60 ° C., whereby α-monoglucosyl hesperidin, β-monoglucosyl hesperetin, hesperidin is obtained. Adsorb etc.
[0072]
Next, after washing with 1 to 4 times the volume of the filled resin to remove contaminants mainly composed of free sugar, alcohol, alcohol-water (alcohol / water = 50 to 100/25 to 1), etc. The α-monoglucosyl hesperidin, β-monoglucosyl hesperetin, hesperidin, etc. remaining adsorbed on the resin are eluted stepwise by passing the eluent at a temperature of 10 to 60 ° C.
[0073]
By this operation, 1 part by weight of α-monoglucosyl hesperidin is 0.5 parts by weight or less of β-monoglucosyl hesperetin, 0.1 parts by weight or less of hesperidin and hesperetin, and 0.1 parts by weight or less of other components such as sugars. An eluate of a quantity is obtained.
Further, in order to purify α-monoglucosyl hesperidin to a nearly pure state, a fractionation operation using a lower alcohol can be performed. Details of the operation are described in the above publication. By applying this method using the difference in solubility in lower alcohol, β-monoglucosyl hesperetin can also be isolated.
[0074]
When obtaining the above-mentioned “monoglucosyl hesperidin-rich product”, the content of α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin is adjusted by adjusting the conditions for enzyme treatment, and if desired, the content of hesperidin. It is possible to make the subsequent purification process simple or unnecessary by making the content close to the respective composition of the oral nutritional supplement containing the hesperetin glycoside according to the present invention. is there.
[0075]
Use of oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides
The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention will be described below as examples of useful applications. The use of oral nutritional supplements containing saccharides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides is not limited to these.
[0076]
The above-mentioned oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides can be used as general foods, health foods, functional foods, fortified foods, or vitamin P Focusing on other medicinal effects, it can be used as pharmaceuticals and pharmaceutical raw materials.
In the case of use as a pharmaceutical, use forms that make use of various medicinal effects of rutins or hesperidins can be considered. For example, the physiological action of vitamin P can be exerted, and further anti-inflammatory / analgesic action, antioxidant, neutral lipid or cholesterol lowering functions are expected. In particular, when the blood sugar level is high, effects such as an in vivo glycation inhibitory action, an anti-aging effect, and a bone density improving action, which are shown by the binding between sugar and protein amino acid residues, are also shown. Therefore, it can be used as a raw material for components of pharmaceuticals for treating cardiovascular diseases such as those for strengthening blood vessels in the form that retains these various actions. Examples of such pharmaceuticals include vitamin P enhancers; preventive or therapeutic agents (anti-sensitive disease agents) for cardiovascular diseases, sensitive diseases, and the like.
[0077]
Many of the oral nutritional supplements containing the water-soluble quercetin glycosides or the oral nutritional supplements containing the water-soluble hesperetin glycosides according to the present invention also have an antioxidant action, so they are added to foods, pharmaceuticals, etc. Then, in addition to the original physiological action of water-soluble quercetin glycosides, antioxidative effects of foods, pharmaceuticals and the like can be expected. Therefore, oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides are used in foods (including health foods, functional foods, nutrition-enriched foods, etc.), pharmaceuticals, etc. By adding it, it is possible to effectively prevent the generation of off-flavors, discoloration, or generation of toxic substances, and maintain the quality or nutritional value. In pharmaceuticals orally administered for the treatment of the above-mentioned various diseases, the taste improving effect and the antioxidant effect are enhanced. Examples of such pharmaceuticals include enteral nutrients, supplemental nutrients, liquid medicines, and syrups.
[0078]
Oral nutritional supplement or water-soluble hesperetin containing the water-soluble quercetin glycoside of the present invention in general foods and beverages (including health foods, functional foods, nutrition-enhanced foods, etc.), luxury products, pharmaceuticals and the like as described above In order to use an oral nutritional supplement containing a glycoside, the oral nutritional supplement or water-soluble hesperetin delivery containing this water-soluble quercetin glycoside is used at an appropriate stage until the product is completed. Oral nutritional supplements containing saccharides can be added. For example, when an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside or an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside is added, it may be mixed, mixed, or mixed with other ingredients, Oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides may be permeated, dissolved, sprayed, applied, sprayed, injected, etc. Food and drink may be soaked in an oral nutritional supplement containing water-soluble quercetin glycoside or an oral nutritional supplement containing water-soluble hesperetin glycoside, and conventionally known methods are appropriately employed for this purpose. .
[0079]
The form of ingesting the oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside of the present invention is a dosage form when ingested alone or as a pharmaceutical or food.・ The usage is not necessarily the same. However, the origin of the active ingredient of oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides was originally derived from natural products and has long been used for food. It is extracted from the plant that has been developed, and is extremely safe. Therefore, there are few side effects and restrictions on the amount of intake, and the adverse effects of continuous intake are not considered to be normal.
[0080]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated further more concretely based on an Example, this invention is not limited at all by these Examples.
In the following examples, “%” means “% by weight” unless it is contrary to the purpose.
[0081]
[Example 1]
Quercetin, isoquercitrin, and rutin are not soluble in water, so they are dissolved in propylene glycol. MGR and αG-rutin are administered as an aqueous solution to F344 rats (male, 5 weeks old) by oral single administration, The dynamics were examined. Blood was collected at each time point of 0.5, 1, 2, 4, and 8 hours after the administration, at 50 μmoles per kg body weight of rat (30 mg / Kg as rutin). The plasma was treated with β-glucuronidase at 37 ° C. for 20 minutes, 0.01 M oxalic acid was added and mixed, and this was passed through a Sep-Pak C18 cartridge, and 0.01 M oxalic acid, water, 25% methanol, 100% methanol was added. The eluate was passed through in order. The obtained 100% methanol fraction was subjected to HPLC analysis. For HPLC, a Capcell Pak C18-UG120 (Shiseido) column was used. As elution conditions, methanol-TFA was used as a moving bed, and the eluate was detected at a flow rate of 0.5 ml / min and 372 nm. Quantification was determined as the total glucuronic acid conjugate amount for each of the rutin and rutin derivative administration groups.
[0082]
<Result>
For each administration group, the time course of the quercetin derivative (measured as a glucuronic acid conjugate) in plasma changed as shown in FIG.
In the group treated with quercetin and isoquercitrin dissolved in propylene glycol, the peak reached 0.5 hours after the administration, and then gradually decreased.
[0083]
On the other hand, the peak was reached after 4 hours in the rutin administration group treated in the same manner, and after 8 hours in the MGR administration group. On the other hand, in the αG-rutin administration group, peaks were observed twice at 0.5 and 8 hours. Since αG-rutin is also a mixture of MGR and isoquercitrin, it is considered that the peak after 0.5 hour is derived from isoquercitrin and the peak after 8 hours is derived from MGR.
[0084]
Each quercetin derivative was administered in an amount equivalent to 50 μmoles / Kg body weight, but a difference in peak height as well as the appearance rate in the blood was observed between each administration group.
<Discussion>
The results regarding the absorption and kinetics of each quercetin derivative shown in FIG. 1 are experimental results of rats, but similar results are obtained even in humans, and there are many common points between rats and humans. .
[0085]
As is apparent from FIG. 1, it is understood that quercetin and isoquercitrin dissolved in propylene glycol are absorbed into the intestinal tract most quickly and efficiently between rutin and its derivatives. In particular, isoquercitrin has a peak at 0.5 hours after administration, which is twice as high as that of quercetin, indicating that the absorption is high. Both of them are hardly soluble in water. However, when isoquercitrin coexists with α-glucosylrutin, the solubility is further enhanced. Therefore, the oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside of the present invention is isoquer. For oral nutritional supplements that use citrine and also contain hesperetin glycosides, β-monoglucosyl hesperetin is used.
[0086]
ΑG-rutin, in which two peaks are observed, cannot level the physiological effect between the two peaks even if a single dose is administered alone. On the other hand, if a mixture of isoquercitrin and MGR is ingested, it is considered that peaks appear at two time points, similar to the ingestion of αG-rutin. Moreover, the quercetin derivative concentration (actually the quercetin conjugate level) between 0.5 hours and 8 hours can be increased by adjusting the amount ratio of both. That is, in this example, the dose ratio in different groups was 1: 1 isoquercitrin: MGR, but if the amount ratio of both derivatives was appropriately selected, unlike the case of αG-rutin, When the contents of both derivatives are administered, the two peaks at 0.5 and 8 hours can be at high levels and do not drop to low levels during that time. Therefore, when the content of isoquercitrin and MGR is ingested, unlike the case of ingesting rutin or a derivative thereof alone, immediate action and persistence of the action of rutins or hesperidins can be realized. This will be specifically verified below based on the results of FIG.
[0087]
In the oral nutritional supplement containing the quercetin derivative according to the present invention, it is assumed that 0.2 mol of poorly water-soluble isoquercitrin is contained per 1 mol of readily water-soluble monoglucosylrutin. In FIG. 1, the plasma levels of quercetin conjugate at 0.5 and 8 hours are 0.45 μg / ml and 0.07 μg / ml in the isoquercitrin administration group, respectively, and 0 μg in the monoglucosylrutin administration group, respectively. / Ml, 0.04 μg / ml. Using this result, the quercetin conjugate plasma levels at 0.5 hours and 8 hours were 0.45 × 0.2 + 0 μg / ml, respectively, when an oral nutritional supplement containing the above-mentioned assumed ratio was ingested. 0.07 × 0.2 + 0.04 × 1 μg / ml, that is, 0.09 μg / ml, 0.054 μg / ml. Eventually, the blood concentration C of quercetin conjugate 0.5 hours later_0.5And blood concentration C after 8 hours₈Ratio C₈/ C_0.5Is 0.6, which falls within the range of 0.2 to 0.9.
[0088]
The same can be said for hesperidin.
[0089]
[Example 2]
F344 rats (male, 6 weeks old) were given a diet of quercetin, MGR and αG-rutin separately added to a normal chow diet so as to be contained at a concentration of 1,000 ppm each for 1 week. In order to observe their gastrointestinal kinetics at one week after administration of rutin and its derivatives, the intestinal contents were collected after collecting blood from each group of rats. The small intestine, cecum, and large intestine were removed by ligating both ends with surgical threads. The contents were extruded with a 0.9% sodium chloride solution and mixed well, and then centrifuged (3,000 rpm, 10 minutes) to obtain a supernatant as an analysis sample.
[0090]
As with plasma, after β-glucuronidase treatment (37 ° C., 20 minutes), 0.01 M oxalic acid was added and mixed, and this was passed through a Sep-Pak C18 cartridge, and 0.01 M oxalic acid, water, 25% methanol, The eluate was passed through in the order of 100% methanol. The obtained 25% and 100% methanol fractions were subjected to HPLC analysis. A Capcell Pak C18-UG120 (Shiseido) column was used, and elution was carried out using methanol-TFA as a moving bed at a flow rate of 0.5 ml / min at 275 nm or 372 nm. Quantification was determined as the total glucuronic acid conjugate amount for each of the rutin and rutin derivative administration groups.
[0091]
<Result>
In the MGR administration group and αG-rutin administration group, rutin was mainly detected in the small intestine and quercetin was detected in the cecum. In the quercetin administration group, quercetin, tamarixetine, and isorhamnetin were detected in the small intestine, and quercetin was detected in the cecum. Compared to the case of Example 1, quercetin was detected in plasma, although the amount was very small.
[0092]
From the above, it has been found that MGR is gradually decomposed in the digestive tract such that it is decomposed into rutin from which one sugar residue is removed in the small intestine and decomposed into quercetin in the cecum. When sugar is added in this way, the absorption rate into the intestinal tract tends to be slow, and the absorption amount tends to decrease. Probably due to the enzymatic hydrolysis of enterobacteria before absorption.
[0093]
These are considered to be the same for hesperidin.
[0094]
[Example 3]
・ Manufacture of tube oral nutrition
Crystalline α-maltose 20 parts by weight, glycine 1.1 parts by weight, sodium glutamate 0.18 parts by weight, sodium chloride 1.2 parts by weight, citric acid 1 part by weight, calcium lactate 0.4 parts by weight, magnesium carbonate 0.1 parts by weight, water-soluble quercetin glycoside composition A blend consisting of 0.1 parts by weight (monoglucosylrutin 1, isoquercitrin 0.21, rutin 0.02, each molar ratio), 0.01 parts by weight thiamine and 0.01 parts by weight riboflavin was prepared. Each 24 g of this blend was filled into laminated aluminum sachets and heat sealed to prepare tube oral nutrition.
[0095]
This tube oral nutrient can be dissolved in about 300 to 500 ml of sterilized water in a bag, and can be advantageously used as an oral or parenteral nutritional solution for the nasal cavity, stomach, intestine, etc. by the tube method.
[0096]
[Example 4]
・ Manufacture of grapefruit jelly
6 parts by weight of maltitol, 1.2 parts by weight of stabilizer, 1 part by weight of grapefruit sand, 0.9 part by weight of pH adjuster, grapefruit juice (1/6 concentrated), water-soluble hesperidin glycoside composition (α-monoglucosyl hesperidin) 1.0, β-monoglucosyl hesperidin 0.18, hesperidin 0.01, each molar ratio) 0.1 parts by weight, enzyme-treated stevia 0.04 parts by weight, safflower yellow 0.01 parts by weight to prepare purified grapefruit jelly with 100 parts by weight as a whole .
[0097]
When this jelly is ingested, the physiological function of hesperidin can be expected immediately and continuously.
[0098]
[Example 5]
・ Production of acetic acid beverages
10 parts by weight of apple vinegar, 6 parts by weight of rice vinegar, 2 parts by weight of citric acid, 2 parts by weight of malic acid, 38 parts by weight of isomerized sugar, 0.7 parts by weight of enzyme-treated stevia, 1 part by weight of sorbit, 0.5 parts by weight of apple essence, apple 2 parts by weight of fruit juice (1/5 concentrated) and 0.1 parts by weight of a water-soluble quercetin glycoside composition (monoglucosylrutin 1, isoquercitrin 0.21, rutin 0.02, each molar ratio) were prepared.
[0099]
By ingesting this beverage, it can be expected that the physiological function of rutin is exerted immediately and continuously.
[0100]
【The invention's effect】
The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside or the oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention exhibits immediate and long-lasting physiological effects of rutins and hesperidins. Oral nutritional supplements containing water-soluble quercetin glycosides or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides in such a proportion. That is, the molar ratio of isoquercitrin and monoglucosylrutin contained, or the molar ratio of α-monoglucosyl hesperidin and monoglucosyl hesperidin is the blood concentration 0.5 hours after oral intake of quercetin conjugate or hesperetin conjugate. C_0.5And blood concentration C after 8 hours₈Ratio C₈/ C_0.5Each component is determined to be maintained within the range of 0.2 to 0.9. According to the composition of the present invention, the effect of an oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside containing rutins or an oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside is shown 0.5 hours after administration. It achieves both immediate effect and sustainability that maintains its blood level until 8 hours.
[0101]
Oral nutrition supplement containing water-soluble quercetin glycoside or oral nutrition supplement containing water-soluble hesperetin glycoside according to the present invention, or oral nutrition containing this water-soluble quercetin glycoside Ingestion of food and beverages or pharmaceuticals containing oral supplements or oral nutritional supplements containing water-soluble hesperetin glycosides achieves and includes the intended absorption rate and amount in the blood based on its composition In addition to the various actions of vitamin P provided by quercetin derivatives or hesperetin derivatives, anti-inflammatory / analgesic effects, neutral lipids in the blood, lowering cholesterol, and increasing bone density, etc. are efficiently and continuously exerted. I can expect that. Therefore, the number of doses and the dose are reduced, and the cost performance is excellent. Moreover, since it is water-soluble, it can be easily and uniformly contained in all forms of foods and drinks and pharmaceuticals, and can be used in a wide range.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the time course of the level of quercetin derivative (as glucuronide conjugate) in plasma.

Claims (8)

Monoglucosyl rutin and isoquercitrin and monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Further, as desired, rutin: 0.001-0.4
An oral nutritional supplement containing a water-soluble quercetin glycoside, which is contained in a molar ratio of 1 and capable of exhibiting immediate effects and persistence of the physiological action of rutins. Monoglucosyl rutin and isoquercitrin and monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Further, as desired, rutin: 0.001-0.4
And also contains at a molar ratio, when taken orally, C ₈ / C _0.5, which is the ratio of the blood concentration C ₈ blood levels C _0.5 after 0.5 hours and after 8 hours for quercetin conjugates 0.2-0.9 2. The oral nutritional supplement containing the water-soluble quercetin glycoside according to claim 1, wherein the oral nutritional supplement is capable of being maintained within the range. Monoglucosyl rutin and isoquercitrin and monoglucosyl rutin: 1
Isoquercitrin: 0.1-0.4
Furthermore, as desired, rutin: 0.001-0.4
A water-soluble quercetin compound that maintains the blood concentration of quercetin conjugates for a long period of time and exhibits immediate and long-lasting physiological effects of rutins. A method for producing an oral nutritional supplement containing a saccharide. α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin to α-monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Further, as desired, hesperidin: 0.001-0.4
An oral nutritional supplement containing a water-soluble hesperetin glycoside, which is contained at a molar ratio of 1 and capable of exhibiting immediate effects and persistence of physiological effects of hesperidins. α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin to α-monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Hesperidin as needed: 0.001-0.4
Contained in a molar ratio becomes and, C ₈ / C _0.5, which is the ratio of the blood concentration C ₈ blood levels C _0.5 after 0.5 hours and after 8 hours for hesperetin conjugate on ingestion is 0.2 to 0.9 5. The oral nutritional supplement containing the water-soluble hesperetin glycoside according to claim 4, wherein the oral nutritional supplement can be maintained so as to fall within the range. α-monoglucosyl hesperidin and β-monoglucosyl hesperetin to α-monoglucosyl hesperidin: 1
β-monoglucosyl hesperetin: 0.1-0.4
Further, as desired, hesperidin: 0.001-0.4
A water-soluble hesperetin composition that maintains the blood concentration of hesperetin conjugates for a long period of time, and can exhibit the immediate effects and sustainability of the physiological effects of hesperidins, characterized by containing a hesperetin derivative at a molar ratio of A method for producing an oral nutritional supplement containing a saccharide. A pharmaceutical comprising the oral nutritional supplement according to any one of claims 1, 2, 4, and 5. A food or drink comprising the oral nutritional supplement according to any one of claims 1, 2, 4, and 5.

Images