JP4782065B2 - スチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法 - Google Patents
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Description
〔1〕 アスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイと、スチレン−(メタ)アクリル樹脂とを接触させることを特徴とするスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法、
〔2〕 アスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイと、スチレン−(メタ)アクリル樹脂とを固相条件下に接触させる前記〔1〕記載のスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法、
〔3〕 アスペルギルス テレウスがアスペルギルス テレウス(Aspergillus terreus)ATCC 10020であり、アスペルギルス ゾミイがアスペルギルス ゾミイ(Aspergillus thomii)ATCC 16859である前記〔1〕または〔2〕記載のスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法、
〔4〕 アスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイと、スチレン−(メタ)アクリル樹脂を含む廃棄物とを接触させ、前記スチレン−(メタ)アクリル樹脂を分解させることを特徴とする廃棄物の処理方法、ならびに
〔5〕 スチレン−(メタ)アクリル樹脂を含有する廃棄物に含まれているスチレン−(メタ)アクリル樹脂を分解させる廃棄物処理剤であって、前記スチレン−(メタ)アクリル樹脂を分解させるための成分としてアスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイを含有することを特徴とする廃棄物処理剤
に関する。
(1) スチレン−(メタ)アクリル樹脂含有液体培地を調製し、該培地の濁度を測定するステップ、
(2) 前記ステップ(1)で得られた培地で、評価対象微生物を培養するステップ、
(3) 前記ステップ(2)を行なった後に得られた培地の濁度を測定するステップ、および
(4) 前記ステップ(1)で測定された濁度と、前記ステップ(2)で測定された濁度とを比較するステップ
を含む評価方法により行なわれうる。かかる評価方法では、ステップ(1)で得られた培地(培養前の培地)の濁度と比べて、培養後の濁度が低下していること(例えば、スチレン−(メタ)アクリル樹脂含有液体培地の透明化など)が、評価対象微生物がスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解能を有する可能性がある微生物であることの指標として用いられる。かかる評価方法に用いられる培地が、スチレン−(メタ)アクリル樹脂を唯一の炭素源とする培地である場合、スチレン−(メタ)アクリル樹脂含有液体培地中における評価対象微生物の生育の有無を調べることにより、より容易に、評価対象微生物がスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解能を有する可能性がある微生物であるか否かの評価を行なうことができる。なお、前記スチレン−(メタ)アクリル樹脂乳化液は、スチレン−(メタ)アクリル樹脂粉末と、溶媒、例えば、ジクロロメタンなどとの混合物と、蒸留水と界面活性剤との混合物とを混合し、得られた混合物を攪拌して、乳化させ、得られた生成物を濾別した濾液から前記溶媒を除去することなどにより得られうる。
(1’) スチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートの外観を観察するステップ、
(2’) 前記ステップ(1’)で用いられたスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートとともに、評価対象微生物を培養するステップ、
(3’) 前記ステップ(2’)を行なった後にスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートが存在している場合、得られたスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートの外観を観察するステップ、および
(4’) 前記ステップ(1’)で観察されたスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートの外観と、前記ステップ(2’)で観察されたスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートの外観との間を比較するステップ
を含む評価方法により行なわれうる。かかる評価方法では、ステップ(2’)の後(培養後)にスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレートが消失していること、ステップ(1’)で観察されたスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレート(培養前の薄膜またはプレート)と比べ、ステップ(3’)で観察されたスチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜またはスチレン−(メタ)アクリル樹脂プレート(培養後の薄膜またはプレート)の表面が粗くなっていることなどが、評価対象微生物がスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解能を有する微生物であることの指標として用いられる。前記スチレン−(メタ)アクリル樹脂薄膜は、例えば、スチレン−(メタ)アクリル樹脂粉末を適切な溶媒(例えば、ジクロロメタンなど)に溶解させ、スチレン−(メタ)アクリル樹脂溶液を得、得られたスチレン−(メタ)アクリル樹脂溶液を、適切な固体培地(例えば、ポテトデキストロース固体培地など)に重層し、その後、乾燥させて該溶媒(例えば、ジメチルメタン)を除去することなどにより製造されうる。
(A) 前記評価対象微生物を、スチレン−(メタ)アクリル樹脂含有液体培地で培養するステップ、
(B) 前記ステップ(A)を行なった後に得られた培地中のスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解生成物などを、適切な溶媒(例えば、ジクロロヘキサンなど)で抽出するステップ、
(C) 前記ステップ(B)で得られた抽出物を、適切な溶媒〔例えば、組成:n−ヘキサン/トルエン(体積比)=2/8の溶媒など〕に溶解させて、分析用試料を得るステップ、および
(D) 前記ステップ(C)で得られた分析用試料を、クロマトグラフィー、例えば、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどに供し、展開溶媒(例えば、n−ヘキサンなど)で展開させ、スチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解生成物それぞれに対応するスポット、ピークなどを検出するステップ
を含む評価方法により行なわれうる。かかる評価方法では、スチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解生成物それぞれに対応するスポット、ピークなどが存在することが、評価対象微生物がスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解能を有する微生物であることの指標として用いられる。
近畿大学農学部敷地およびその周辺、八尾市一般廃棄物処理場、ならびに大阪市北港処分地南地区で土壌を採集した。得られた土壌を、生理的食塩水に懸濁し、試料を得た。
前記実験例1で選抜されたYA−5株について、商品名:DNeasy Plant Mini Kit〔キアゲン(QIAGEN)社製〕、商品名:puReTaq Ready―To―Go PCR beads〔アマシャム バイオサイエンシーズ(Amersham Biosciences)社製〕、商品名:Bigdye Terminator v3.1 Kit〔アプライド バイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕、および商品名:ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer System〔アプライド バイオシステムズ(Applied Biosystems)社製〕を用いて、28S rDNA D1/D2塩基配列を解析した。その後、得られた塩基配列について、BLASTアルゴリズム〔アルチュール(Altschul,SF)ら、ベーシックローカルアラインメントサーチツール、J.Mol.Biol.、第215巻、第403頁〜第410頁、(1990)〕を用い、デフォルト値で、データベースを検索し、前記YA−5株の属種を同定した。
スチレン−アクリル樹脂粉末〔商品名:エスレックP SE−0040、積水化学工業株式会社製、スチレンとアクリル酸n−ブチルエステルとアクリル酸2−エチルヘキシルエステルとの共重合体、フロー軟化温度:132.9℃、ガラス転移温度(示差走査熱量測定による変曲点):62.7℃、重合度:900、ゲル浸透クロマトグラフィーによる重量平均分子量:約270000〕を原材料として用いて製造されたスチレン−アクリル樹脂プレート〔大きさ:10mm×20mm×1mm〕を、Czapek−dox液体培地に入れた。スチレン−アクリル樹脂プレートを入れたCzapek−dox液体培地に、YA−5株を接種し、該YA−5株を、28℃で25日間静置培養した。つぎに、静置培養後のスチレン−アクリル樹脂プレートを、リン酸緩衝生理食塩水で2回洗浄した。洗浄後のスチレン−アクリル樹脂プレートを、2体積%グルタルアルデヒド(和光純薬工業株式会社製)−リン酸緩衝生理食塩水に1時間浸漬させ、菌体を固定した。その後、前記スチレン−アクリル樹脂プレートを、蒸留水で1回洗浄後、該スチレン−アクリル樹脂プレートを、順に、70体積%エタノール水溶液、80体積%エタノール水溶液、90体積%エタノール水溶液および99体積%エタノール水溶液に浸漬させ、乾燥させた。乾燥後のスチレン−アクリル樹脂プレートの表面に、イオンスパッター装置(商品名:Hitachi E−1030、株式会社日立製作所製)を用いて白金を3nmの層となるように蒸着させ、走査型電子顕微鏡用の試料を得た。得られた試料の表面を、走査型電子顕微鏡(S−900、株式会社日立製作所製)を用いて観察した。なお、対照として、糸状菌を接種しなかったスチレン−アクリル樹脂プレートを用いた。YA−5株培養下でのスチレン−アクリル樹脂プレートの状態を示す図面代用写真を図3に示す。図中、パネル(A)は、対照、パネル(B)〜(D)は、YA−5株培養下でのスチレン−アクリル樹脂プレートを示す。
前記YA−5株を、0.1質量%スチレン−アクリル樹脂含有Czapek−dox液体培地〔組成:スチレン−アクリル樹脂0.1質量%、グルコース0.6質量%、硝酸ナトリウム0.3質量%、塩化カリウム0.2質量%、リン酸二水素カリウム0.1質量%、硫酸マグネシウム7水和物0.05質量%、pH6.5〕5ml中、28℃で2日間培養した。その後、得られた培養物を、前記0.1質量%スチレン−アクリル樹脂含有Czapek−dox液体培地100mlに添加し、28℃で2日間培養した。得られた培養物を、商品名:Ultrafiltration Membranes〔NMWL:10,000、ミリポア(Millipore)社製〕により濾過して、菌糸体を得た。
前記YA−5株と同じアスペルギルス属に属する微生物であるアスペルギルス ニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス ソジェ(Aspergillus sojae)、アスペルギルス サイトイ(Aspergillus saitoi)、アスペルギルス タマリイ(Aspergillus tamarii)、アスペルギルス ウサミ(Aspergillus usamii)、アスペルギルス ユニラテラリス(Aspergillus unilateralis)、アスペルギルス ウスタス(Aspergillus ustus)、アスペルギルス バーシカラー(Aspergillus versicolor)、アスペルギルス シドウイ(Aspergillus sydowii)、アスペルギルス テレウス(Aspergillus terreus)、アスペルギルス ゾミイ(Aspergillus thomii)、アスペルギルス トキシカルリウス(Aspergillus toxicarius)、およびアスペルギルス フミガタスNo.232(Aspergillus fumigatus No.232)について、スチレン−アクリル樹脂の分解能の有無を調べた。
スチレン−アクリル樹脂粉末〔商品名:エスレックP SE−0040、積水化学工業株式会社製、スチレンとアクリル酸n−ブチルエステルとアクリル酸2−エチルヘキシルエステルとの共重合体、フロー軟化温度:132.9℃、ガラス転移温度(示差走査熱量測定による変曲点):62.7℃、重合度:900、ゲル浸透クロマトグラフィーによる重量平均分子量:約270000〕を、スチレン−アクリル樹脂の最終濃度が100g/lとなるように、ジクロロメタンに溶解させ、スチレン−アクリル樹脂溶液を得た。得られたスチレン−アクリル樹脂溶液2mlを、ポテトデキストロース固体培地に重層した後、乾燥させてジメチルメタンを除去し、スチレン−アクリル樹脂薄膜(スチレン−アクリル樹脂0.1g相当量)を得た。
Claims (5)
- アスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイと、スチレン−(メタ)アクリル樹脂とを接触させることを特徴とするスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法。
- アスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイと、スチレン−(メタ)アクリル樹脂とを固相条件下に接触させる請求項1記載のスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法。
- アスペルギルス テレウスがアスペルギルス テレウス(Aspergillus terreus)ATCC 10020であり、アスペルギルス ゾミイがアスペルギルス ゾミイ(Aspergillus thomii)ATCC 16859である請求項1または2記載のスチレン−(メタ)アクリル樹脂の分解方法。
- アスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイと、スチレン−(メタ)アクリル樹脂を含む廃棄物とを接触させ、前記スチレン−(メタ)アクリル樹脂を分解させることを特徴とする廃棄物の処理方法。
- スチレン−(メタ)アクリル樹脂を含有する廃棄物に含まれているスチレン−(メタ)アクリル樹脂を分解させる廃棄物処理剤であって、前記スチレン−(メタ)アクリル樹脂を分解させるための成分としてアスペルギルス テレウスおよび/またはアスペルギルス ゾミイを含有することを特徴とする廃棄物処理剤。
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