JP4733801B2

JP4733801B2 - Estrogenic agents and skin cosmetics

Info

Publication number: JP4733801B2
Application number: JP27287099A
Authority: JP
Inventors: 進山本; 喜孝中村; 善仁川嶋
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1999-08-23
Filing date: 1999-08-23
Publication date: 2011-07-27
Anticipated expiration: 2019-08-23
Also published as: JP2001064191A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、エストロゲン様作用剤および皮膚化粧料に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
エストロゲンは女性ホルモンの一種であって成人女性の健康維持に深くかかわっている。このホルモンの分泌不足は、種々の内科的疾患を招くほか、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの低下など、好ましくない肌の変化の原因ともなることが知られている。
【０００３】
そこで、エストロゲンの分泌が減少する更年期以後の女性に対し、エストロゲンと同様の作用をする物質を経皮的に投与することによって上記好ましくない肌の変化を防止することが行われており、そのためのエストロゲン様作用剤としては、従来、ステロイド系エストロゲン、非ステロイド系エストロゲン、フラボン系化合物を主とする植物性エストロゲン等が使われている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、新規なエストロゲン様作用物質を天然物より見いだし、前記エストロゲン不足に伴う障害の防止と改善のための手段として提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、イチョウ葉抽出物に含まれる生理活性物質の研究中に見いだされた新規な知見に基づくものであり、イチョウ葉抽出物から分離されたギンゴライド類を有効成分とするエストロゲン様作用剤、および、該エストロゲン様作用剤を配合してなる皮膚化粧料を提供するものである。
【０００６】
イチョウ葉抽出物は血管障害の治療や血流改善等のために、医薬品として、あるいは飲食品添加成分として、内外で利用されている。その場合の主たる有効成分は、量的にも最も多いフラボン配糖体であることが確認されている。フラボン配糖体と共にイチョウ葉抽出物中に含まれているテルペンラクトンのギンゴライド類については、ＰＡＦ（血小板活性化因子）により誘発される疾患の処置に有効であることが確認されているが、この物質がエストロゲン様作用を有することは知られていなかった。
【０００７】
【発明の実施の形態】
ギンゴライド類のエストロゲン様作用は、通常のイチョウ葉抽出物のままでは確認することができない。これは、イチョウ葉抽出物には上記２成分のほかにもビロバライド（セスキテルペンラクトン）、アルキルフェノール類等、多種多様な成分が含まれていてギンゴライド類はその中で３〜５重量％程度しか含まれていない少量成分であるためかと思われるが、ギンゴライド類のエストロゲン様作用の発現を阻害する成分がイチョウ葉抽出物中に含まれている可能性もあり、したがって、いずれにせよ、ギンゴライド類のエストロゲン様作用を利用するにはギンゴライド類の含有率を高めるための精製処理をイチョウ葉抽出物に施すことが必要である。
【０００８】
イチョウ葉抽出物が含有するギンゴライド類にはギンゴライドＡ、同Ｂ、同Ｃ、同Ｊ等があるが、エストロゲン様作用が強いのは、ギンゴライドＡおよびギンゴライドＢである。したがって、イチョウ葉抽出物の精製は全ギンゴライド類の含有率が高くなるだけでなくギンゴライド類の中でのギンゴライドＡおよび（または）ギンゴライドＢの含有率が高くなるように行われることが望ましい。
【０００９】
通常、ギンゴライド類による有意義なレベルのエストロゲン様作用が確認できるのは、ギンゴライド類が約２５重量％以上になるまで精製されたものである。したがって、エストロゲン様作用剤とするのに適当なものはイチョウ葉抽出物を精製してギンゴライド類含有率を約２５重量％以上、好ましくは約５０重量％以上に高めたものであり、特に好ましいのは、ギンゴライドＡおよびギンゴライドＢの合計量が全ギンゴライド類の約３０重量％以上になるまで精製したものである。
【００１０】
なお、イチョウ葉抽出物が含有するアルキルフェノール類は強いアレルギー原因物質であるから、ギンゴライド類含有率を上記のようにすることとは別に、エストロゲン様作用剤として利用するギンゴライド類がアルキルフェノール類を含まないように精製することは重要である。
【００１１】
イチョウ葉抽出物からギンゴライド類含有率の高い精製物を得る方法、中でもギンゴライドＡおよびギンゴライドＢを高率で含有しアルキルフェノール類は完全に除去されたものを得るための精製法の一例は、後記実施例１のように、吸着樹脂を用い含水脂肪族アルコールを溶媒としたクロマトグラフィー的な分画と含水アルコールを用いた結晶化処理を繰り返す方法である。このとき用いる脂肪族アルコールとしては、たとえばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブチレングリコール等、炭素数１〜４のものが適当であり、吸着樹脂としては、芳香族系または芳香族系修飾型のものが適当である。使用可能な吸着樹脂の具体例としては、ダイヤイオンＨＰ１０、同２０、同２１、同３０、同４０、同５０、セパビーズＳＰ２０７、同８２５、同８５０（以上、三菱化学社製品）、アンバーライトＸＡＤ２、同４、同７（以上、オルガノ社製品）等がある。
【００１２】
上述のようにして得られた精製物をさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、結晶化処理等により分画すれば、ギンゴライドＡおよびギンゴライドＢの各単品を得ることもできる。
【００１３】
なお、ギンゴライド類を濃縮するための精製に付するイチョウ葉抽出物は、ギンゴライド類を含有するものであればいかなる抽出法によるものでもよく、またなんらかの精製処理を既に受けたものであっても差し支えない。
【００１４】
上述の方法によって精製されたギンゴライド類は、ほとんど無色かつ無臭であり、またイチョウ葉抽出物よりもアルコールによく溶ける。したがって、クリーム、乳液、ローション、パック、軟こう、浴用剤等、任意の皮膚化粧料に配合してそのエストロゲン様作用を活用することができる。皮膚化粧料に対する好適配合量は、ギンゴライド類として約０．００５〜１０重量％である。
【００１５】
【実施例】
実施例１（ギンゴライド類の精製例）
イチョウ葉１００ｋｇを８０重量％エタノール２０００リットルにて１時間還流抽出し、抽出残渣に８０重量％エタノール１５００リットルを加えて同様の抽出処理を行なった。得られた抽出液３２００リットルを減圧下に１８０リットルまで濃縮したのち不溶化した色素類を珪藻土濾過により濾別し、濾液２１０ｋｇを得た。
【００１６】
上記濾液を多孔性吸着樹脂（ダイヤイオンＨＰ−２１）１００リットルのカラムに通液し、３０重量％エタノール５００リットルで洗浄後、８０重量％エタノール５００リットルを用いて脱着処理を行なった。得られた脱着液を減圧下に濃縮し、凍結乾燥した。得られた乾燥物（収量２．４６ｋｇ；以下、精製物ａという）は、ギンゴライド類含有率１０．３重量％、その内２．１重量％がギンゴライドＡ、１．０重量％がギンゴライドＢであった。
【００１７】
加熱した２０重量％エタノール１５リットルに精製物ａを溶解し、溶液を多孔性吸着樹脂（セパビーズＳＰ−８５０）５０リットルのカラムに通液し、２０重量％エタノール２００リットルで洗浄後、６０重量％エタノール２５０リットルを用いて脱着処理を行なった。得られた脱着液を減圧下に濃縮し、凍結乾燥した。得られた乾燥物（収量１．５４ｋｇ；以下、精製物ｂという）は、ギンゴライド類含有率１５．８重量％、その内３．３重量％がギンゴライドＡ、１．４８重量％がギンゴライドＢであった。
【００１８】
加熱した１０重量％エタノール１０リットルに精製物ｂを溶解し、室温に冷却後、５℃の冷蔵庫内に１週間静置した。生じた沈殿物をデカンテーションで回収し、減圧下に乾燥して得られた乾燥物（収量２２６ｇ；以下、精製物ｃという）は、ギンゴライド類含有率７９．８重量％、その内５１．２重量％がギンゴライドＡ、２５．６重量％がギンゴライドＢであった。
【００１９】
加熱した８０重量％エタノール１．５リットルに精製物ｃを溶解し、活性炭を加えて還流下に１時間加熱し、室温に冷却後、濾過し、濾液を減圧下に濃縮、乾燥した。得られた乾燥物（収量２１１ｇ；以下、精製物ｄという）は、ギンゴライド類含有率８５．１重量％、その内５４．６重量％がギンゴライドＡ、２６．９重量％がギンゴライドＢであった。
【００２０】
加熱した２０重量％エタノール８リットルに精製物ｄを溶解し、室温に冷却後、生じた結晶を濾別し減圧下に乾燥した。乾燥物（収量９８ｇ；以下、精製物ｅという）は、ギンゴライド類含有率９３．６重量％、その内３８．１重量％がギンゴライドＡ、５２．０重量％がギンゴライドＢであった。
【００２１】
精製物ｅについてさらに含水アルコール溶液から結晶化させる処理を繰り返すことによりギンゴライドＡとギンゴライドＢを分離し、いずれも純度９５％以上のギンゴライドＡおよびギンゴライドＢを得た。
【００２２】
実施例２（エストロゲン様作用の試験）
実施例１で得られた精製物ａ〜ｅおよびギンゴライドＡ，Ｂについて、エストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べるＴｈｏｍａｓらの方法（ＩｎＶｉｔｒｏＣｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２８Ａ，５９５−６０２，１９９２）によりエストロゲン様作用の試験を行なった。結果を表１に示す（コントロール値を１００とする）。
【００２３】
【表１】

【００２４】
実施例３（皮膚化粧料への配合例）
実施例１による精製物ａ、精製物ｃ、精製物ｄまたは精製物ｅを配合して下記組成のローションを常法により製造した。
実施例１によるギンゴライド精製物０．５ｇ
グリセリン４ｇ
１，３−ブチレングリコール４ｇ
エタノール７ｇ
メチルパラベン０．０５ｇ
クエン酸０．０１ｇ
クエン酸ソーダ０．１ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残部（全量を１００ｍｌとする）
【００２５】
対照品として、ギンゴライド精製物を配合しないほかは同様組成のローションを製造した。
【００２６】
得られたローションについて、下記の方法による使用試験を行なった。
試験法：２５歳から４２歳の女性４０名を無作為に４群に分け、ギンゴライド精製物配合ローションを右の二の腕に、対照品を左の二の腕に、それぞれ朝夕２回、２週間塗布させる。その後、使用結果について回答させる。
【００２７】
試験結果は表２〜表５のとおりで、ギンゴライド類配合化粧料の使用感および使用効果が優れていることを確認した。
【００２８】
【表２】

【００２９】
【表３】

【００３０】
【表４】

【００３１】
【表５】

【００３２】
実施例４
下記組成の乳液を常法により製造した。
ギンゴライドＡ（実施例１）０．２ｇ
セチルアルコール０．５ｇ
ミツロウ２ｇ
ＰＯＥ（１０）モノオレイン酸エステル１ｇ
グリセリンモノステアリン酸エステル１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム０．１ｇ
プロピレングリコール５ｇ
エタノール３ｇ
エチルバラベン０．３ｇ
香料０．０３ｇ
精製水残部（全量を１００ｍｌとする）
【００３３】
実施例５
下記組成のパックを常法により製造した。
ギンゴライドＢ（実施例１）０．３ｇ
ポリビニルアルコール１５ｇ
ポリエチレングリコール３ｇ
プロピレングリコール７ｇ
エタノール１０ｇ
メチルパラベン０．０５ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残部（全量を１００ｍｌとする）
【００３４】
実施例６
下記組成のクリームを常法により製造した。
ギンゴライド精製物ｂ（実施例１）０．８ｇ
セトステアリルアルコール３．５ｇ
スクワラン４０ｇ
ミツロウ３ｇ
還元ラノリン５ｇ
エチルバラベン０．３ｇ
ポリオキシエチレン２ｇ
ステアリン酸モノグリセリド２ｇ
１，３−ブチレングリコール５ｇ
香料０．０３ｇ
グリセリン５ｇ[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an estrogenic agent and a skin cosmetic.
[0002]
[Prior art]
Estrogens are a type of female hormone and are deeply involved in maintaining the health of adult women. This deficiency in hormone secretion is known to cause various medical diseases and to cause unfavorable skin changes such as skin hypersensitivity, reduced elasticity and reduced moisture.
[0003]
Therefore, the above undesirable skin changes are prevented by transdermally administering a substance having the same action as estrogen to women after menopause where estrogen secretion decreases. As estrogenic agents, steroidal estrogens, nonsteroidal estrogens, phytoestrogens mainly composed of flavone compounds, and the like have been used.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to find a novel estrogen-like substance from a natural product and to provide it as a means for preventing and improving a disorder caused by the estrogen deficiency.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present invention is based on novel findings found during the study of physiologically active substances contained in ginkgo biloba extract, an estrogenic agent containing gingolides isolated from ginkgo biloba extract as an active ingredient, And the skin cosmetics which mix | blend this estrogen-like agent are provided.
[0006]
Ginkgo biloba leaf extract is used both inside and outside as a medicine or as a food or beverage additive for the treatment of vascular disorders or blood flow improvement. In this case, it has been confirmed that the main active ingredient is the most flavone glycoside in terms of quantity. The terpene lactone gingolides contained in the ginkgo biloba extract together with flavone glycosides have been confirmed to be effective in the treatment of diseases induced by PAF (platelet activating factor). It was not known that the substance has an estrogenic effect.
[0007]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The estrogenic action of ginkgolides cannot be confirmed with ordinary ginkgo biloba extract. This is because ginkgo biloba extract contains various components such as bilobalide (sesquiterpene lactone) and alkylphenols in addition to the above two components, and gingolides contain only about 3 to 5% by weight. This may be because it is a small amount of the component, but it is possible that the ginkgo biloba extract contains a component that inhibits the expression of the estrogenic action of ginkgolides. In order to utilize the estrogen-like action, it is necessary to apply a purification treatment to the ginkgo biloba extract to increase the content of ginkgolides.
[0008]
Gingolides contained in the ginkgo biloba extract include gingolides A, B, C, and J. Gingolides A and Gingolide B have strong estrogenic effects. Therefore, it is desirable that purification of the ginkgo biloba extract is performed not only to increase the content of all gingolides but also to increase the content of gingolide A and / or gingolide B in the gingolides.
[0009]
Usually, a significant level of estrogenic action can be confirmed by ginkgolides that have been purified until gingolides are about 25% by weight or more. Accordingly, an agent suitable for an estrogen-like agent is one in which a ginkgo biloba extract has been purified to increase the content of ginkgolides to about 25% by weight or more, preferably about 50% by weight or more. Is purified until the total amount of Gingolide A and Gingolide B is about 30% by weight or more of all gingolides.
[0010]
In addition, since the alkylphenols contained in the ginkgo biloba extract are strong allergens, the gingolides used as estrogen-like agents do not contain alkylphenols, apart from setting the ginkgolides content as described above. It is important to purify so that
[0011]
An example of a purification method for obtaining a purified product having a high content of ginkgolides from a ginkgo biloba extract, particularly a method for obtaining a product containing a high percentage of gingolide A and gingolide B and from which alkylphenols have been completely removed, is described later. As in Example 1, this is a method in which an adsorption resin is used and chromatographic fractionation using hydrous aliphatic alcohol as a solvent and crystallization treatment using hydrous alcohol are repeated. As the aliphatic alcohol used at this time, for example, those having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, isopropyl alcohol, butylene glycol and the like are suitable, and the adsorption resin is an aromatic or aromatic modified type. Is appropriate. Specific examples of usable adsorption resins include Diaion HP10, 20, 21, 30, 30, 40, Sepabeads SP207, 825, 850 (above, Mitsubishi Chemical Corporation products), Amberlite XAD2. , 4 and 7 (above, Organo products).
[0012]
If the purified product obtained as described above is further fractionated by silica gel column chromatography, reverse phase chromatography, crystallization treatment, or the like, each single product of gingolide A and gingolide B can also be obtained.
[0013]
Note that the ginkgo biloba extract to be purified for concentrating gingolides may be extracted by any extraction method as long as it contains gingolides, and may have already undergone some purification treatment. Absent.
[0014]
Gingolides purified by the above method are almost colorless and odorless, and are more soluble in alcohol than ginkgo biloba extract. Therefore, it can be incorporated into any skin cosmetics such as creams, emulsions, lotions, packs, ointments, bath preparations, etc., and its estrogenic action can be utilized. The preferred amount of the skin cosmetic is about 0.005 to 10% by weight as gingolides.
[0015]
【Example】
Example 1 (Example of purification of gingolides)
100 kg of ginkgo biloba leaves were extracted by refluxing with 2000 liters of 80 wt% ethanol for 1 hour, and 1500 liters of 80 wt% ethanol was added to the extraction residue, and the same extraction treatment was performed. The obtained extract (3200 liters) was concentrated to 180 liters under reduced pressure, and then insolubilized pigments were filtered off by diatomaceous earth filtration to obtain 210 kg of filtrate.
[0016]
The filtrate was passed through a column of 100 liters of porous adsorption resin (Diaion HP-21), washed with 500 liters of 30 wt% ethanol, and desorbed using 500 liters of 80 wt% ethanol. The obtained desorption solution was concentrated under reduced pressure and lyophilized. The obtained dried product (yield 2.46 kg; hereinafter referred to as “purified product a”) had a gingolide content of 10.3% by weight, of which 2.1% by weight was gingolide A and 1.0% by weight was gingolide B. there were.
[0017]
The purified product a is dissolved in 15 liters of heated 20 wt% ethanol, and the solution is passed through a 50 liter column of porous adsorption resin (Separbeads SP-850), washed with 200 liters of 20 wt% ethanol, and then 60 wt%. Desorption treatment was performed using 250 liters of ethanol. The obtained desorption solution was concentrated under reduced pressure and lyophilized. The obtained dried product (yield 1.54 kg; hereinafter referred to as purified product b) had a gingolide content of 15.8% by weight, of which 3.3% by weight was gingolide A and 1.48% by weight was gingolide B. there were.
[0018]
The purified product b was dissolved in 10 liters of heated 10% by weight ethanol, cooled to room temperature, and left in a refrigerator at 5 ° C. for 1 week. The resulting precipitate was recovered by decantation and dried under reduced pressure (yield: 226 g; hereinafter referred to as “purified product c”). The content of gingolides was 79.8% by weight, of which 51.2 The weight percent was Gingolide A and 25.6% by weight was Gingolide B.
[0019]
The purified product c was dissolved in 1.5 liters of heated 80 wt% ethanol, activated carbon was added and heated under reflux for 1 hour, cooled to room temperature, filtered, and the filtrate was concentrated and dried under reduced pressure. The obtained dried product (yield 211 g; hereinafter referred to as purified product d) had a gingolide content of 85.1% by weight, of which 54.6% by weight was gingolide A and 26.9% by weight was gingolide B. .
[0020]
The purified product d was dissolved in 8 liters of heated 20% by weight ethanol, cooled to room temperature, and the resulting crystals were filtered off and dried under reduced pressure. The dried product (yield 98 g; hereinafter referred to as purified product e) had a ginkgolide content of 93.6% by weight, of which 38.1% by weight was gingolide A and 52.0% by weight was gingolide B.
[0021]
The purified product e was further crystallized from a hydrous alcohol solution to separate gingolide A and gingolide B. Both gingolide A and gingolide B having a purity of 95% or more were obtained.
[0022]
Example 2 (Test of estrogen-like action)
The method of Thomas et al. (In Vitro Cell. Dev. Biol. 28A, 595-602, 1992) for examining the effects of purified products a to e and gingolides A and B obtained in Example 1 on the proliferation of estrogen-dependent cells. Were tested for estrogen-like effects. The results are shown in Table 1 (control value is 100).
[0023]
[Table 1]

[0024]
Example 3 (Example of blending into skin cosmetics)
A purified product a, purified product c, purified product d or purified product e according to Example 1 was blended to prepare a lotion having the following composition by a conventional method.
0.5 g purified ginkgolide according to Example 1
Glycerin 4g
1,3-butylene glycol 4g
Ethanol 7g
Methylparaben 0.05g
0.01 g of citric acid
Sodium citrate 0.1g
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total volume is 100 ml)
[0025]
As a control, a lotion having the same composition was produced except that the purified gingolide was not blended.
[0026]
About the obtained lotion, the usage test by the following method was done.
Test method: 40 women aged 25 to 42 years are randomly divided into 4 groups, and a lotion containing a gingolide purified product is applied to the right upper arm and a control product is applied to the left upper arm twice each morning and evening for 2 weeks. Then, answer the usage results.
[0027]
The test results are as shown in Tables 2 to 5, and it was confirmed that the feeling of use and the use effect of the gingolide-containing cosmetics were excellent.
[0028]
[Table 2]

[0029]
[Table 3]

[0030]
[Table 4]

[0031]
[Table 5]

[0032]
Example 4
An emulsion having the following composition was produced by a conventional method.
Gingolide A (Example 1) 0.2 g
Cetyl alcohol 0.5g
Beeswax 2g
POE (10) monooleate 1g
Glycerin monostearate 1g
Sodium hyaluronate 0.1g
5g propylene glycol
Ethanol 3g
Ethylbaraben 0.3g
Perfume 0.03g
Purified water remainder (total volume is 100 ml)
[0033]
Example 5
A pack having the following composition was produced by a conventional method.
Gingolide B (Example 1) 0.3 g
Polyvinyl alcohol 15g
Polyethylene glycol 3g
7g of propylene glycol
Ethanol 10g
Methylparaben 0.05g
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total volume is 100 ml)
[0034]
Example 6
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Gingolide purified product b (Example 1) 0.8 g
Cetostearyl alcohol 3.5g
Squalane 40g
Beeswax 3g
Reduced lanolin 5g
Ethylbaraben 0.3g
Polyoxyethylene 2g
Stearic acid monoglyceride 2g
1,3-butylene glycol 5g
Perfume 0.03g
Glycerin 5g

Claims

An estrogenic agent containing ginkgolide A and ginkgolide B isolated from ginkgo biloba extract as active ingredients.