JP4718416B2 - Dnaとポリカチオンの複合体からのフィルムの製造方法 - Google Patents
Dnaとポリカチオンの複合体からのフィルムの製造方法 Download PDFInfo
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Description
対向する離型面間に、DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物に加水した材料を配置する工程と、
前記離型面を介して前記材料を加熱下で加圧して前記材料を透明フィルム化する工程と
を有することを特徴とするDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法である。
(実施例1)
(DNA/キトサン複合体の製造)
(a)用いた溶液
・DNA溶液;サケ精子由来DNA(300塩基対、ニチロ社製)を蒸留水に溶解する。(5mg/1ml)
・キトサン水溶液;キトサン(分子量13万、ニチロ社製)を0.2N HCl 50mlに溶解した。この溶液に0.2N NaOHと蒸留水を徐々に加え、pH5の溶液100mlとした。(5mg/1ml)
(b)キトサン水溶液とDNA水溶液からの合成
撹拌しているキトサン水溶液100mlにDNA水溶液を加え、1時間反応させた。反応後生じた沈殿物を遠心分離した。得られた沈殿物をトリス塩酸緩衝液(10mM、pH7.2)(以下Tris−HCl緩衝液という)60mlで洗浄し、再度遠心分離した。Tris−HCl緩衝液洗浄は2回行った。次に、蒸留水60mlで洗浄した後、遠心分離を行った。蒸留水洗浄は3回行った。得られた白色沈殿物を凍結乾燥した。収量は600mgで、リンの定量よりDNA/キトサン複合体(サンプルA)の分子量比率(モル比)は0.95/1であった。この凍結乾燥物を以下の実施例2及び3で使用した。
(実施例2)
実施例1で得られたDNA/キトサン複合体粉末を、複合体粉末0.1gに対して0.2mlの水を加えてペースト化した後、図1に示すように、ポリエチレンシート及びフッ素樹脂シート間に挟持させて、20 MPa、80℃で10分間加熱加圧成形して、透明なフィルムを作製した。透明フィルムの平面形状は、概ね直径5cmの円形であった。なお、ポリエチレンシートとしては、帝人デュポンフィルム株式会社の商品名「テイジンテトロンフィルム」を、フッ素樹脂シートとしては、株式会社ユニバーサルの商品名「テフロンフィルムテープ」(厚さ50μm)を用いた。また、加圧成形機としては株式会社井元製作所の小型加熱プレスを用いた。
(実施例3)
実施例1で得られたDNA/キトサン複合体粉末を、複合体粉末1gに対して4mlの水を加えてペースト化し、ろ紙で余剰の水分を除去した。これをポリエチレンシートではさんで、図1に示すホットプレートのプレス面間に配置し、室温、すなわち非加熱下で10分間、20 MPaで加圧した後、凍結乾燥して不透明なシートを得た。シートの平面形状は、概ね直径7cmの円形であった。この不透明なシートを蒸留水中に5分間浸漬して湿らせてから、カッターナイフで1.5cm角に切断した。切断したシート1枚を、図1に示すようにポリエチレンシート及びフッ素樹脂シート間に挟持させて、20 MPa、80℃で10分間加熱加圧成形して、透明なフィルムを得た。透明フィルムの平面形状は、概ね直径5cmの円形であった。
実施例1で得られたDNA/キトサン複合体粉末に蒸留水を加えてペースト化し、図2(A)に示したモールド(型)に填入した。その後、pH7.4のリン酸バッファー(PBS)中に、図2(B)の状態でモールドごと10分間浸漬し、ろ紙で余剰の水分を除去した。更にモールドごと凍結乾燥した後に、モールドからDNA/キトサン複合体からなる直径約1cmのディスクを離型した。
(DNA/ポリアリルアミン複合体、DNA/ポリアミンスルホン複合体の製造)
実施例1(a)で得られたDNA溶液100mlに、蒸留水で10倍に希釈したPAA-HCl-01を10ml加え、5分間反応させた。反応後生じた沈殿物を遠心分離した。得られた沈殿物を蒸留水30mlで洗浄し、再度遠心分離した。蒸留水洗浄は2回行った。得られた沈殿物を凍結乾燥した。ポリアミンスルホン(PAS-H-1L、PAS-M-1L及びPAS-J-81L)に関しても、同様の方法で複合体を製造することができる。収量は500〜600mgで、これらの凍結乾燥物を以下の実施例7で使用した。
(実施例6)
(DNA/プロタミン、DNA/ポリリジン複合体の製造)
実施例1(a)で得られたDNA溶液100mlに、プロタミン塩酸塩(分子量4500、ニチロ社製)2gを蒸留水100mlに溶かした溶液を加え、5分間反応させた。反応後生じた沈殿物を遠心分離した。得られた沈殿物を蒸留水30mlで洗浄し、再度遠心分離した。蒸留水洗浄は2回行った。得られた白色沈殿物を凍結乾燥した。プロタミン塩酸塩をプロタミン硫酸塩(分子量4500、ニチロ社製)、ポリリジン(Poly-L-Lysine Hydrobromide、分子量70000以上、MP Biomedicals, Inc.)で置き換えても、複合体を製造可能である。これらの凍結乾燥物を以下の実施例7で使用した。
(実施例7)
DNA/ポリカチオン複合体として、実施例5及び6で得られたDNA/ポリアリルアミン複合体、DNA/ポリアミンスルホン複合体、DNA/プロタミン複合体、及びDNA/ポリリジン複合体をそれぞれ別々に用いて以下の操作によりフィルムを作成した。DNA/ポリカチオン複合体粉末に、この粉末0.1gに対して0.4mlの割合で水を加えて湿らせた後、図1に示すようにポリエチレンシート及びフッ素樹脂シート間に挟持させて、20 MPa、80℃で10分間加熱加圧成形して、透明なフィルムを作製した。このとき、室温で10分間の加圧成形をしても透明なフィルムが作製可能であった。
2 フッ素樹脂シート
3 ポリエチレンシート
4 ホットプレート
4a、4b プレス面
5 ステンレス板
6 シリコーンリング
7 ナイロンメッシュ
Claims (8)
- DNAとポリカチオン化合物との複合体を含む透明フィルムの製造方法において、
対向する離型面間に、DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物に加水した材料を配置する工程と、
前記離型面を介して前記材料を加熱下で加圧して前記材料を透明フィルム化する工程と
を有することを特徴とするDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。 - 前記材料が、前記DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物からなる粉末に加水することにより得られたものである請求項1に記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
- 前記材料が、前記DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物からなる粉末を加圧して得られたシートまたはディスクに加水することにより得られたものである請求項1に記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
- 前記材料が、前記DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物からなるシートまたはディスクに加水することにより得られたものである請求項1に記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
- 前記シートまたはディスクが、前記DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物に水を添加して得たペーストをシートまたはディスクに成形し凍結乾燥することにより得られたものである請求項4に記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
- 前記材料がペーストとして前記対向する離型面間に配置される請求項1から5のいずれか1項に記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
- 前記DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物の0.1gに対して、少なくとも0.2mlの水を添加する請求項1から6のいずれか1項に記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
- 前記DNAとポリカチオン化合物との複合体の乾燥物が、DNAとポリカチオンを含む水性媒体中でこれらを反応させて得られたDNAとポリカチオンとの複合体の沈殿物を乾燥することにより得られたものである請求項1から7のいずれかに記載のDNA/ポリカチオン複合体フィルムの製造方法。
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