JP4646631B2 - RB経路のモディファイヤーとしてのCCT6sおよび使用方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2002年11月25日出願の米国特許仮出願第60/428,872号の優先権を主張するものである。先行出願の内容は、その全体が本明細書中に組み込まれる。
小児性眼腫瘍である網膜芽細胞腫はこれまで癌になりやすい遺伝的傾向の重要なモデルであった。網膜芽細胞腫の進行の原発メカニズムは、この遺伝子の両方の対立遺伝子の喪失又は不活性化である(Murphree, A.L.及びBenedict, W.F. (1984) Science 223:1028-1033)。遺伝的に1つの網膜芽細胞腫遺伝子を持つ患者に二次的原発腫瘍が多く発生することは、この癌遺伝子がその他複数の原発性悪性腫瘍の病因に重要な役割を持つことを示唆している。
網膜芽細胞腫タンパク質であるRBは、細胞周期を通じて進行を制御することにより腫瘍抑制因子として機能し、これは細胞成長に関わる様々な核タンパク質を隔離することによって達成される。従って、RBは、細胞周期時計を転写機構に接続するシグナルトランスデューサーとして作用する(Weinberg, R.A. (1995) Cell 81:323-330)。RBは、転写因子のE2Fファミリーと相互作用してG1に細胞を捕獲することで細胞周期の進行をG1中の特定の点に制限することにより細胞増殖を調節する(Goodrich, D.W.等 (1991) Cell 67:293-302; Zhang, H.S.等 (1999) Cell 97:53-61)。
RB配列は進化の過程で保存されており、マウス(Bernards R等 (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:6474-6478)、ラット(Roy NK等 (1993) Nucleic Acids Res. 21:170-170)、ショウジョウバエ(Du W等 (1996) Genes Dev 10:1206-18)及び線虫(The C. elegans Sequencing Consortium (1998) Science 282:2012-2018)に存在する。
本発明者らは、ショウジョウバエ細胞でRB経路を改変させる遺伝子を発見し、ヒトにおけるそのオルソログを同定し、本明細書中では以降これをシャペロニン含有T複合体1サブユニット6(CCT6)と呼ぶ。本発明は、これらのRBモディファイヤー遺伝子およびポリペプチドを利用して、RB機能及び/又はCCT6機能の欠陥又は不全に関連する疾患の治療に使用できる候補治療剤であるCCT6調節剤を同定する方法を提供する。好ましいCCT6調節剤(modulating agent)は、CCT6ポリペプチドに特異的に結合してRB機能を修復する。他の好ましいCCT6調節剤は、アンチセンスオリゴマーやRNAiなど、例えば対応する核酸(すなわちDNAまたはmRNA)に結合してそれを阻害することによってCCT6遺伝子発現または生成物の活性を抑制する核酸モジュレーターである。
ヒト網膜芽細胞腫(RB)遺伝子のショウジョウバエ相同体である、ショウジョウバエRbf遺伝子(Du W等 (1996)、上掲)と総合的致死性であるモディファイヤー遺伝子を同定するために、Rb共同RNAi疾病または疾患スクリーニングを設計した。Rbfと疾病または疾患に相互作用するモディファイヤー遺伝子の同定に加えて、このスクリーニングにより、不活性化すると正常細胞と比較してRbfを欠く細胞の生存度を優先的に低下させるモディファイヤー遺伝子が同定された。CG8231遺伝子が、Rbf経路のモディファイヤーとして同定された。したがって、これらモディファイヤーの脊椎動物のオルソログ、好ましくはヒトのオルソログであるCCT6遺伝子(すなわち核酸およびポリペプチド)は、癌などのRBシグナル伝達経路の欠陥に関連する病変の治療における魅力的な薬剤標的である。
本発明で使用することができるCCT6核酸及びポリペプチドに関連する配列は、核酸はGI#22095341(配列番号1)、14348899(配列番号2)、14517631(配列番号3)、5729760(配列番号4)、14771917(配列番号5)及び1655415(配列番号6)、ポリペプチドはGI#4502643(配列番号8)及び5729761(配列番号9)として、Genbankに開示されている(Genbank識別(GI)番号により参照)。
CCT6核酸およびポリペプチドは、CCT6機能を調節する薬剤の同定および試験、ならびにRB経路におけるCCT6の関与に関連する他の用途に有用である。CCT6核酸ならびにその誘導体およびオルソログは、利用可能な任意の方法を使用して得ることができる。例えば、DNAライブラリをスクリーニングすることによって、またはポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用することによって、目的のcDNAまたはゲノムDNA配列を単離する技術が、当分野で周知である。一般的に、タンパク質の具体的な使用により、発現、生成、および精製方法の詳細が規定される。例えば、スクリーニングして調節剤を探すために使用するタンパク質を生成するには、これらタンパク質の特異的生物活性を保存する方法が必要であるかもしれないが、抗体を産生するためのタンパク質を生成するには、特定のエピトープの構造的な完全性が必要であるかもしれない。スクリーニングまたは抗体を産生するために精製すべきタンパク質を発現させるには、特定のタグの付加が必要であるかもしれない(例えば融合タンパク質の生成)。細胞周期制御や低酸素性応答の関与などCCT6機能を評価するのに使用するアッセイのためのCCT6タンパク質を過剰発現させるには、これらの細胞活動が可能な真核細胞系中での発現が必要であるかもしれない。タンパク質を発現、生成、および精製する方法は当分野で周知であり、したがって、任意の適切な手段を使用することができる(例えば、Higgins SJおよびHames BD編、Protein Expression:A PRBtical Approach、Oxford University Press Inc.、ニューヨーク、1999年;Stanbury PF他、Principles of Fermentation Technology、第2版、Elsevier Science、ニューヨーク、1995年;Doonan S編、Protein Purification Protocols、Humana Press、ニュージャージー、1996年;Coligan JE他、Current Protocols in Protein Science編、1999年、John Wiley&Sons、ニューヨーク)。具体的な実施態様では、組換えCCT6は、欠陥RB機能を有することで知られている細胞系で発現される(例えば、中でもアメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC)、マナッサス、バージニア州から入手可能なSAOS−2骨芽細胞、BT549乳癌細胞、及びC33A子宮頸癌細胞)。この組換え細胞は、以下にさらに記載する本発明の細胞に基づくスクリーニングアッセイ系で使用する。
候補RB調節剤の活性を試験するため、または細胞死や細胞増殖などRB経路のプロセスにおけるCCT6の役割をさらに評価するために、CCT6の発現が変化するように遺伝子が改変された動物モデルを、インビボアッセイで使用することができる。好ましくは、変化したCCT6の発現により、正常なCCT6発現を有する対照動物に比べて低減または上昇した細胞増殖、血管新生、または細胞死のレベルなど、検出可能な表現型がもたらされる。この遺伝子改変動物はさらに、RB発現が変化していてもよい(例えばRBノックアウト)。好ましい遺伝子改変動物は、特に、霊長類、げっ歯類(好ましくはマウス又はラット)などの哺乳動物である。好ましい哺乳動物でない種には、ゼブラフィッシュ、線虫(C.elegans)、およびショウジョウバエが含まれる。好ましい遺伝子改変動物は、染色体外エレメントとして存在する異種核酸をその細胞の一部分内に有するトランスジェニック動物、すなわちモザイク動物(例えば、Jakobovits、1994年、Curr.Biol.、4:761〜763によって記載されている技術参照)、または異種核酸が生殖系列DNA内(すなわち細胞のほとんどまたはすべてのゲノム配列中)に安定に組み込まれているトランスジェニック動物である。異種核酸は、例えば宿主動物の胚または胚性幹細胞を遺伝子操作することによって、このようなトランスジェニック動物の生殖系列内に導入される。
本発明は、CCT6の機能および/またはRB経路と相互作用しおよび/またはこれを調節する作用剤を同定する方法を提供する。本方法により同定された調節剤もまた本発明の一部である。このような作用剤は、RB経路に関連する様々な診断および治療用途、ならびにCCT6タンパク質およびRB経路におけるその寄与のより詳しい分析に有用である。したがって、本発明はまた、CCT6相互作用剤または調節剤を投与することによってCCT6活性を特異的に調節する工程を含む、RB経路を調節する方法も提供する。
小分子は多くの場合、酵素機能を有しおよび/またはタンパク質相互作用ドメインを含むタンパク質の機能を調節することが好ましい。当分野で「小分子」化合物と呼ばれる化学剤は通常、分子量が10,000以下、好ましくは5,000以下、より好ましくは1,000以下、最も好ましくは500ダルトン以下である有機非ペプチド分子である。このクラスのモジュレーターには、化学的に合成した分子、例えばコンビナトリアル化学ライブラリからの化合物が含まれる。合成化合物は、既知または推定CCT6タンパク質の特性に基づいて合理的に設計または同定する、あるいは化合物ライブラリをスクリーニングすることによっても同定することができる。このクラスの代わりの適切なモジュレーターは、天然産物、特に、やはり化合物ライブラリをスクリーニングしてCCT6変調活性を探すことによって同定することができる、植物や真菌類など生物由来の二次代謝産物である。化合物を作製して得る方法は、当分野で周知である(Schreiber SL、Science、2000年、151:1964〜1969; Radmann JおよびGunther J、Science、2000、151:1947〜1948)。
特異的なCCT6相互作用タンパク質は、RB経路および関連疾患に関連する様々な診断上および治療上の用途、ならびに他のCCT6調節剤の検証アッセイにおいて有用である。好ましい実施態様では、CCT6相互作用タンパク質は、転写、タンパク質の発現、タンパク質の局在化、細胞活性または細胞外活性を含めた正常なCCT6機能に影響を与える。別の実施態様では、CCT6相互作用タンパク質は、癌などRBに関連する疾患に関連性があるので、CCT6タンパク質の機能に関する情報を検出および提供するのに有用である(例えば診断上の手段用)。
別の実施態様では、このタンパク質モジュレーターはCCT6に特異的な抗体アゴニストまたはアンタゴニストである。この抗体は治療上および診断上の用途を有しており、CCT6モジュレーターを同定するスクリーニングアッセイで使用することができる。また、様々な細胞応答ならびにCCT6の通常のプロセッシングおよび成熟を担当するCCT6経路の部分の分析においても、この抗体を使用することができる。
他の好ましいCCT6調節剤としては、一般的にCCT6活性を阻害するアンチセンスオリゴマーや二本鎖RNA(dsRNA)などの核酸分子が含まれる。好ましい核酸モジュレーターは、DNAの複製、転写、タンパク質翻訳部位へのCCT6 RNAの転位、CCT6 RNAからのタンパク質の翻訳、CCT6 RNAをスプライシングして1つまたは複数のmRNA種を得ること、またはCCT6 RNAに関与しまたはそれによって促進され得る触媒活性など、CCT6核酸の機能を妨げる。
本発明は、CCT6活性の特異的なモジュレーターを同定するアッセイ系およびスクリーニング方法を提供する。本明細書中で使用する「アッセイ系」とは、具体的な事象を検出および/または測定するアッセイを実施してその結果を分析するのに必要なすべての構成要素を包含する。一般的に、一次アッセイを使用して、CCT6核酸またはタンパク質に関するモジュレーターの特異的な生化学的効果または分子効果を同定または確認する。一般的に、二次アッセイでは、一次アッセイによって同定されたCCT6調節剤の活性がさらに評価され、この調節剤がRB経路に関連する方式でCCT6に影響を与えることが確認されることもある。場合によっては、CCT6モジュレーターを直接二次アッセイで試験する。
一般的に、試験するモジュレーターの種類によって一次アッセイの種類が決まる。
小分子モジュレーターには、候補モジュレーターを同定するためにスクリーニングアッセイを使用する。スクリーニングアッセイは、細胞に基づくものでもよく、またこの標的タンパク質に関連する生化学的反応を再度引き起こさせるまたは保持する無細胞系を使用してもよい(Sittampalam GS他、Curr Opin Chem Biol、1997年、1:384〜91および付随の参考文献に総説がある)。本明細書中で使用する用語「細胞に基づく」とは、生細胞、死滅細胞、または膜分画、小胞体分画、ミトコンドリア分画など特定の細胞分画を使用したアッセイを言う。用語「無細胞」とは、実質的に精製されたタンパク質(内因性または組換えによって生成された)、部分的に精製したまたは粗細胞抽出物を使用したアッセイを包含する。スクリーニングアッセイでは、タンパク質−DNA相互作用、タンパク質−タンパク質相互作用(例えば受容体−リガンド結合)、転写活性(例えばレポーター遺伝子)、酵素活性(例えば基質の特徴を介するもの)、セカンドメッセンジャーの活性、免疫原性、および細胞形態や他の細胞性特徴の変化を含めた様々な分子事象を検出することができる。適切なスクリーニングアッセイでは、蛍光、放射活性、比色、分光光度、および電流滴定を含めた広範囲の検出方法を使用して、検出する具体的な分子事象の読出しを行うことができる。
抗体モジュレーターでは、適切な一次アッセイ試験は、CCT6タンパク質に対する抗体の親和性および特異性を試験する結合アッセイである。抗体の親和性および特異性を試験する方法は当分野で周知である(HarlowおよびLane、1988年、1999年、上掲)。CCT6に特異的な抗体を検出する好ましい方法は酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)である。他の方法には、FACSアッセイ、ラジオイムノアッセイ、および蛍光アッセイが含まれる。
核酸モジュレーターでは、一次アッセイにより核酸モジュレーターがCCT6遺伝子の発現、好ましくはmRNAの発現を阻害または増強する能力を試験し得る。一般的に、発現分析には、核酸モジュレーター存在下または非存在下の細胞の類似集団(例えば、内因的にまたは組換えによってCCT6を発現する2種の細胞プール)中のCCT6発現を比較することが含まれる。mRNAおよびタンパク質の発現を分析する方法は当分野で周知である。例えば、ノーザンブロッティング、スロットブロッティング、RNA分解酵素保護、定量的RT−PCR(例えばTaqMan(登録商標)、PE Applied Biosystemsを使用)、またはマイクロアレイ分析を使用して、核酸モジュレーターで処置した細胞中でCCT6 mRNAの発現が低減していることを確認することができる(例えば、Current Protocols in Molecular Biology、1994年、Ausubel FM他編、John Wiley&Sons, Inc.、第4章;Freeman WM他、Biotechniques、1999年、26:112〜125; Kallioniemi OP、Ann Med、2001年、33:142〜147; Blohm DHおよびGuiseppi-Elie、A Curr Opin Biotechnol、2001年、12:41〜47)。タンパク質の発現をモニターすることもできる。タンパク質は、最も一般的にはCCT6タンパク質または特異的なペプチドのどちらかに対する特異的な抗体または抗血清を用いて検出される。ウエスタンブロッティング、ELISA、インサイツ検出を含めた様々な手段が利用可能である(Harlow EおよびLane D、1988年および1999年、上掲)。
調節剤がRB経路に関連する様式でCCT6に影響を与えることを確認するために、二次アッセイを使用して上記の任意の方法によって同定したCCT6調節剤の活性をさらに評価することができる。本明細書中で使用するCCT6調節剤は、以前に同定した調節剤から誘導した候補臨床化合物または他の作用剤を包含する。また、二次アッセイを使用して、特定の遺伝的または生化学的経路における調節剤の活性を試験するために、あるいは調節剤がCCT6と相互作用する特異性を試験することもできる。
細胞に基づいたアッセイでは、欠陥RB機能を有することで知られる様々な哺乳動物の細胞系を使用できる(例えば、中でもアメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC)、マナッサス、バージニア州から入手可能なSAOS−2骨芽細胞、BT549乳癌細胞、及びC33A子宮頸癌細胞)。細胞に基づいたアッセイでは内因性RB経路活性を検出するか、あるいはこれはRB経路構成要素の組換えによる発現に依存し得る。前述の任意のアッセイをこの細胞に基づいた形式で使用することができる。候補モジュレーターは、通常は細胞培地に加えるが、細胞に注入するまたは任意の他の有効な手段によって送達してもよい。
候補CCT6モジュレーターを試験するために、正常または欠陥のあるRB経路の様々な非ヒト動物のモデルを使用することができる。通常、欠陥RB経路のモデルでは、RB経路に関与する遺伝子がミスエクスプレスされる(例えば過剰発現または発現が欠けている)ように操作された遺伝子改変動物を使用する。一般的に、アッセイには、経口投与、注入などによって候補モジュレーターを全身に送達する必要がある。
特異的なCCT6調節剤は、疾病または疾病予後が血管新生、細胞死、または増殖疾患などRB経路の欠陥に関連している様々な診断および治療用途に有用である。したがって、本発明は、CCT6活性を特異的に調節する作用剤を細胞に投与する工程を含む、細胞、好ましくはRB機能の欠陥又は不全(例えば、RBの過剰発現、過少発現、又は誤発現、或いは遺伝子突然変異による)を有することが事前に確定されている細胞におけるRB経路を調節する方法も提供する。好ましくは、調節剤は細胞中に検出可能な表現型の変化を生じさせ、これにより、RB機能が修復されたことが示される。本明細書で使用する「機能が修復された」という表現、及びそれと同等の表現は、所望の表現型が達成されたか、又は未処理の細胞と比較した場合に正常に近づいたことを意味する。例えば、RB機能が修復されると、細胞増殖及び/又は細胞周期の進行が正常化するか、又は未処理の細胞と比較した場合に正常に近づく。本発明はまた、RB経路を調節するCCT6調節剤の治療的有効量を投与することによる、RB機能不全に関連する疾患又は疾病の治療方法を提供する。さらに本発明は、CCT6調節剤を投与することによる、細胞、好ましくはCCT6機能の欠陥又は不全を有することが事前に決定されている細胞において、CCT6機能を調節する方法を提供する。これらに加えて、本発明は、CCT6調節剤の治療的有効量を投与することによる、CCT6機能不全に関連する疾患又は疾病の治療法を提供する。
RNA干渉(RNAi)を使用してRbfを欠く培養ショウジョウバエ細胞を生成し(SchneiderS2 cell (Schneider, I. (1972) J. Embryol. Exp. Morph. 27, 363)、Invitrongen Corp(カリフォルニア州カールズバド)の無血清培地に適合させた。細胞を、Rbfd二本鎖RNA(dsRNA)か、又はEGFPルシフェラーゼcDNA由来の配列を代表する対照dsRNAを用いて3日間処理した。Rbf又は対照dsRNAでの前処理に続いて、細胞を96ウェルフォーマットに蒔き、約6000の異なるショウジョウバエ遺伝子を代表するdsRNAを各ウェルに添加した。細胞増殖アッセイ(ProCheck(登録商標)アッセイ−Serological Corporation/ジョージア州ノークロス)を用いて、96時間後に細胞生存度を定量化した。このようにして試験した6000を超えるdsRNA配列の各々について、Rbf欠陥細胞(Rbf dsRNA処理済み)及び対照細胞(EGFPルシフェラーゼdsRNA処理済み)のデータを取得した。各dsRNAのデータを比較することにより、Rbf欠陥細胞の生存度を優先的に低下させるdsRNA配列が同定された。Rbf欠陥細胞の生存度を低下させたモディファイヤーが同定された。モディファイヤーのヒトオルソログを本明細書においてCCT6と呼ぶ。
BLAST分析(Altschul他、上掲)を行ってショウジョウバエのモディファイヤーのオルソログを同定した。 例えば、CCT6由来の代表的配列であるGI#4502643(配列番号8)及びGI#5729761(配列番号9)は、ショウジョウバエCG8231とそれぞれ69%及び66%のアミノ酸同一性を有していた。
蛍光標識したCCT6ペプチド/基質を、試験緩衝液(10mMのHEPES、10mMのNaCl、6mMの塩化マグネシウム、pH7.6)中の試験剤と共に96ウェルのマイクロタイタープレートの各ウェルに加えた。Fluorolite FPM−2 Fluorescence Polarization Microtiter System(Dynatech Laboratories,Inc)を用いて決定した蛍光偏光の対照値に対する変化により、試験化合物がCCT6活性の候補モディファイヤーであることが示される。
33P標識のCCT6ペプチドを、試験剤と共にアッセイ緩衝液(100mMのKCl、20mMのHEPES pH7.6、1mMのMgCl2、1%のグリセロール、0.5%のNP−40、50mMのβ−メルカプトエタノール、1mg/mlのBSA、プロテアーゼ阻害剤の反応混液)中で、Neutralite−アビジンでコーティングしたアッセイプレートのウェルに加え、25℃で1時間インキュベートした。その後、ビオチン標識した基質を各ウェルに加え、1時間インキュベートした。PBSで洗浄することによって反応を停止させ、シンチレーション計数器で計数した。試験剤を用いない対照に比べて活性に変化を引き起こさせる試験剤が、候補RB調節剤として同定された。
形質移入させたタンパク質の共沈では、CCT6タンパク質を含む3×106個の適切な組換え細胞を10cmのディッシュに植え付け、発現用コンストラクトを用いて次の日に形質移入させた。空ベクターを加えることによって、それぞれの形質移入での総DNA量を一定に保った。24時間後、細胞を回収し、リン酸緩衝生理食塩水で1回洗浄し、50mMのHepes、pH7.9、250mMのNaCl、20mMのグリセロホスフェート、1mMのオルトバナジン酸ナトリウム、5mMのp−ニトロフェニルリン酸、2mMのジチオスレイトール、プロテアーゼ阻害剤(complete、Roche Molecular Biochemicals)、および1%のノニデットP−40を含む溶解緩衝液1ml中、氷上で20分間溶解させた。15,000×g、15分間の遠心分離2回によって、細胞細片を取り除いた。細胞溶解物を25μlのM2ビーズ(Sigma)と共に2時間、4℃で緩やかに揺り動かしながらインキュベートした。
以下の実験で使用したすべての細胞系はNCI(米国立癌センター)の系であり、ATCC(アメリカンタイプカルチャーコレクション、バージニア州マナサス、20110〜2209)から入手可能である。正常組織および腫瘍組織は、Impath、UC Davis、Clontech、Stratagene、Ardais、Genome CollaborativeおよびAmbionから得た。
表1
RNAi実験を行い、小妨害RNA(siRNA, Elbashir等、上掲)を用いて様々な細胞系のCCT6(配列番号1及び4)の発現をノックダウンした。
細胞増殖及び成長に対するCCT6 RNAiの影響。上述のように、BrdU及びCell Titer−Glo(登録商標)アッセイを用いて細胞増殖におけるCCT6発現の低下の影響を研究した。これら実験の結果は、配列番号1及び4両方のCCT6のRNAiが、LX1肺癌及びHCT116大腸癌細胞における増殖を低減することを示すものであった。また、上述のようにMTS細胞増殖アッセイを用いて細胞増殖におけるCCT6発現の低下の影響を研究した。この実験の結果により、配列番号1のCCT6のRNAiが、肺癌及びSW480大腸癌細胞における増殖を低減することが示された。配列番号4のCCT6のRNAiにより、LX1肺癌、231T乳癌、A549肺癌、HCT116大腸癌、及びSW480大腸癌細胞における増殖が低減した。上述のように、標準コロニー成長アッセイを使用して細胞成長に対するCCT6発現の低下の影響を研究した。アポトーシスに対するCCT6 RNAiの影響。上述のように、ヌクレオソームELISAアポトーシスアッセイを用いて、アポトーシスにおけるCCT6発現低下の影響を研究した。その結果、配列番号1のCCT6のRNAiがA549肺癌及びLX1肺癌細胞においてアポトーシスを増大させることがわかった。配列番号4のCCT6のRNAiはLX1肺癌細胞においてアポトーシスを増大させた。
CCT6過剰発現分析。上述のようにコロニー成長アッセイにおいてCCT6(配列番号4)を過剰発現させ、試験した。過剰発現した配列番号4のCCT6は、細胞に対していくらかの形態学的影響を持ち、またコロニー成長に対して強い影響を持っていた。また、種々の転写因子の発現に対する過剰発現CCT6の影響を研究した。CCT6の過剰発現は、以下の転写因子、即ちSRE(血清応答要素)、ETS1(ETSオンコジーン;v−etsトリ赤芽球症ウイルスe26オンコジーン相同体1)、及びEGR(早期成長応答)の発現を増大させた。
Claims (10)
- 被検体の試験生物試料において、インビトロで、胸部腫瘍細胞、大腸腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、リンパ腫腫瘍、膵臓腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、又は精巣腫瘍細胞の存在を検出する方法であって、
(a)取得された試験生物試料を、配列番号8または9のアミノ酸配列を有するCCT6ポリペプチドをコードする核酸の発現検出用プローブと接触させること、および
(b)工程(a)からの結果を、対応する組織の正常生物試料と比較することを含んでなり、試験生物試料中における前記核酸のレベルの増加により試験生物試料中に前記腫瘍細胞が存在することが示される、方法。 - 配列番号1又は4の核酸配列を有するCCT6核酸に特異的に結合するCCT6特異的核酸モジュレーターであって、胸部腫瘍細胞、大腸腫瘍細胞及び肺腫瘍細胞からなる群から選択される腫瘍細胞の増殖を抑制するために使用される特異的核酸モジュレーター。
- 前記特異的核酸モジュレーターがアンチセンスオリゴマーである、請求項2に記載の特異的核酸モジュレーター。
- 前記特異的核酸モジュレーターがdsRNAまたはsiRNAである、請求項2または3に記載の特異的核酸モジュレーター。
- 配列番号1又は4の核酸配列を有するCCT6核酸に特異的に結合するCCT6特異的核酸モジュレーターを含む、胸部腫瘍細胞、大腸腫瘍細胞及び肺腫瘍細胞からなる群から選択される腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬。
- 前記特異的核酸モジュレーターがアンチセンスオリゴマーである、請求項5に記載の医薬。
- 前記特異的核酸モジュレーターがdsRNAまたはsiRNAである、請求項5に記載の医薬。
- 配列番号1又は4の核酸配列を有するCCT6核酸に特異的に結合するCCT6特異的核酸モジュレーターの、胸部腫瘍細胞、大腸腫瘍細胞及び肺腫瘍細胞からなる群から選択される腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬の製造における使用。
- 前記特異的核酸モジュレーターがアンチセンスオリゴマーである、請求項8に記載の使用。
- 前記特異的核酸モジュレーターがdsRNAまたはsiRNAである、請求項8に記載の使用。
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