JP4613331B2 - 遠心液液分配クロマトグラフ用コイル状カラム - Google Patents
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Description
Murayama W. et al., J. Chromatogr. 239, 643 (1982) Ikehata J.I. et al., J. Chromatogr. A, 1025, 169-175 (2004)
以下、図面を用いて本発明の遠心液液分配クロマトグラフ用コイル状カラムを説明する。
本発明においては、上記コイル状カラムを遠心機に装着した遠心液液分配クロマトグラフ装置を用いて物質の分離を行うことができる。
本発明において、分離の目的となる物質は特に限定されるものではなく、任意に選択することができる。例えばタンパク質、細胞などの生体物質、糖類、天然物由来の生理活性物質などが挙げられる。これら目的物質の具体例は以下の通りである。
細胞:各種動物細胞、植物細胞、微生物細胞等の分離
糖類:スクロースとフコース、グルクロン酸とグルクロノラクトン、ガラクツロン酸とグルクロノラクトンの分離、p−ニトロフェニル誘導体とした糖誘導体の分離
生理活性物質:ダイズ胚芽中イソフラボン類の分離
本発明において、分離相(溶媒)は水性-水性相または水性-油性相の二相溶媒系を使用することができる。カラムを構成する各コイルユニットは、円盤上に法線方向(垂直方向)に固定されるため、溶媒は各コイル内で上下2層に分かれて存在する。このときの溶媒は、上層を固定相(下層を移動相)にしてもよく、下層を固定相(上層を移動相)にしてもよい。
n-ヘキサンとAcNの混合比は任意であるが、好ましくは1:1である。
MBEと0.1%TFA水溶液の混合比は任意であるが、好ましくは1:1である。
1-BuOHとH2Oの混合比は任意であるが、好ましくは1:1である。
また、本発明においては、水性-水性ポリマー相系、水性-油性ポリマー相系などの溶媒を使用することができ、水性-水性ポリマー相系であることが好ましい。「水性-水性ポリマー相系」とは、異なる2種類のポリマーの溶液、またはポリマーと無機塩を水に溶解して2液相とした溶液を意味する。ポリマーとしては、例えばポリエチレングリコール(PEG)、デキストラン、フィコールなどが挙げられる。
12.5%(w/w) ポリエチレングリコール1000/12.5%(w/w) K2HPO4
(b) PEG-1000-リン酸水素二カリウム及びリン酸二水素カリウムからなるリン酸塩緩衝液
(c) PEG-8000-デキストランT500(リン酸塩緩衝液及び塩化ナトリウムを含む)
クロマトグラフは、カラムを遠心することにより行うことができる。「遠心する」とは、カラムの円盤の中心を軸として回転させることを意味する。遠心方向は、時計回り及び反時計回りのどちらでもよいが、円盤を上から見たときに反時計回りとなるように回転させることが好ましい。
カラムは、内径1mm、外径2mmのフッ素樹脂製チューブを外径5mm、長さ8cmのナイロンチューブに左巻きに巻き付けたものを1ユニットとし、その42ユニットを直列に連結した。このチューブを、直径21cmの円板上に、図1に示すように並列に配置した(直径12cmの円周を描くように配置)。カラム容量は29.0mLであった。図1及び2において、チューブ内に向かう矢印及びチューブから外に向かう矢印は、それぞれ試料の流入、流出方向を示す。
(1) 装置
CPCは、三鬼エンジニアリング社製のものを用い、これにHPLC用ポンプ(島津製作所製LC-10AVP型)及びフラクションコレクター(Advantec社製SF-160型)を接続して使用した。
コイル状カラムの分離効率を調べるために、極性の異なる次の4種類の二相溶媒系を調製した。
II. メチル t-ブチルエーテル(MBE)/水性0.1%トリフルオロ酢酸(TFA) 1:1
III. 1-BuOH/H2O 1:1
IV. 12.5%(w/w) ポリエチレングリコール1000/12.5%(w/w) K2HPO4
各溶媒系により分離した試料及びその量は表1に示す通りである。
CPCに二相溶媒のいずれか一方の相を固定相としてポンプで充填した後、試料溶液を注入し、カラムを一定速度で回転させた。その後、他方の相を移動相としてポンプで一定の速度で送液し、溶出液をフラクションコレクターで回収した。このとき、上相を移動相とするときはAscending mode、下相を移動相とするときはDescending modeとなるように配管バルブを切り替えた。各溶媒系でのカラムの回転速度、移動相流速、分画溶液量、溶出した画分の検出条件は表1に示す通りである。なお、溶媒系IIIで行った水溶性カルボン酸の分離では、試料化合物がそのままの吸光度では検出されないため、EDC-ONPH法(Shinomiya K. et al., Bunseki Kagaku, 35, T29 (1986))により誘導体化(呈色反応)を行った後530nmで検出した。吸光度測定には島津製作所製紫外可視分光光度計UV-1600型を使用した。
CW及びCCWにおける分離効率を比較するために、以下の計算式に従って、理論段数(Theoretical plate number: N)及び分離度(Resolution factor: Rs)を算出した。
分離度 Rs=2(tR2-tR1)/(W1 + W2)
実験は、カラムの回転方向を除き、他の条件はCWとCCWで同一となるように行った。図3には、下層を移動相に用いて得られたクロマトグラムを、また表2にはその解析結果を示す。
Claims (7)
- チューブがコイル状に巻かれた円柱状の複数のコイルユニットを直列に連結し、それぞれのコイルユニットを回転可能な円盤の法線方向に配向すると共に当該円盤上の所定の円周上に沿って配置してなる遠心液液分配クロマトグラフ用コイル状カラム。
- 前記チューブは、前記円盤の上方から見たときに、前記円盤の遠部から近部に向かって左巻きに巻かれたものである請求項1記載のカラム。
- 請求項1又は2記載のカラムが遠心機に装着された遠心液液分配クロマトグラフ装置。
- 請求項1又は2記載のカラムの前記チューブに試料を充填してカラムを遠心することを特徴とする物質の分離方法。
- 前記試料は、二相系溶媒に前記物質が溶解されたものである請求項4記載の方法。
- 前記物質が糖類、タンパク質又は生理活性物質である請求項4記載の方法。
- 前記遠心が、前記円盤を上方から見たときの反時計回りに回転させて行われるものである請求項4記載の方法。
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JPS5616868A (en) * | 1979-07-21 | 1981-02-18 | Sanki Eng Kk | Centrifugal countercurrent distribution chromatograph unit |
JPS5815989A (ja) * | 1981-06-12 | 1983-01-29 | Sanki Eng Kk | 生理活性蛋白質の精製方法 |
JPS629270A (ja) * | 1985-07-08 | 1987-01-17 | Sanki Eng Kk | 遠心液々分配クロマトグラフ装置に使用する分配管カラムカ−トリツジ |
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