JP4583655B2

JP4583655B2 - Anti-allergic skin external composition

Info

Publication number: JP4583655B2
Application number: JP2001137089A
Authority: JP
Inventors: 隆夫手原; 英彦八巻
Original assignee: DHC Corp
Current assignee: DHC Corp
Priority date: 2001-05-08
Filing date: 2001-05-08
Publication date: 2010-11-17
Anticipated expiration: 2021-05-08
Also published as: JP2002332238A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、優れた抗アレルギー作用を有し、更に活性酸素種による酸化的ストレス、紫外線等による皮膚障害を予防し、改善し得る抗アレルギー皮膚外用組成物に関する。
更に詳しくは、オリーブの果実及び葉及び枝の混合物から得られた抽出物を配合することを特徴とする抗アレルギー皮膚外用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年の食習慣の変化、生活様式の変化や様々な環境条件の悪化による環境科学物質の影響をはじめ、社会生活におけるストレスの増大等により、蕁麻疹、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎などのアレルギー反応の関与する皮膚疾患が増大している。
アレルギー反応は、Ｉ型〜IV型に分類される。
Ｉ型アレルギー反応は、IgE抗体が主として関与している。外来性の抗原に対してIgE 抗体が産生され、肥満細胞や好塩基球にIgE 抗体が固着し感作が成立し、再び抗原が接触することにより感作細胞にて抗原抗体反応が起こり、ヒスタミン、セロトニンなどの化学伝達物質が遊離し、血管透過性の亢進、浮腫、平滑筋の収縮などを引き起こして各種のアレルギー症状を発現する。
II型アレルギー反応は、IgG 、IgM抗体が関与している。抗体が抗原細胞に結合すると、補体系を形成するタンパク質が連鎖的に活性化され細胞膜を破壊する複合体が形成されることにより、細胞破壊が起こる。また、補体系の活性化の過程で、アナフィラトキシンが過剰に生じると、血管透過性の亢進、平滑筋の収縮、ヒスタミンの遊離などが起こり、各種のアレルギー症状が発現する。
III 型アレルギー反応は、主にIgG 抗体が関与する。発症は、補体系や多形核白血球など多くの因子が関与する複雑な機構で起こるといわれている。
IV型アレルギーは、感作Ｔリンパ球と抗原との反応により生じる。先のＩ〜III 型が即時型であるのに対して遅延型反応であり、アレルギー性接触皮膚炎などのように外部からの接触物が皮膚から吸収され、接触部位に一致して湿疹反応を起こす。
【０００３】
アレルギー疾患の治療においては、肥満細胞の細胞膜安定化作用を有する薬物、ケミカルメディエーターの産生又は遊離を抑制する薬物、あるいはケミカルメデイエーターに対し拮抗作用を有する薬物等の抗アレルギー薬、抗コリン薬、抗ヒスタミン薬、キサンチン系薬、交換神経刺激薬、ステロイド薬等の対症療法的薬物の適用が検討されている。
【０００４】
一方、化粧料をはじめとする皮膚外用剤では、高い安全性を有するものや、作用が穏和で、日常的な皮膚の手入れにも使用できるような抗アレルギー剤の需要も高く、甘草由来のグリチルリチン誘導体が主に使用されてきた。また、天然指向の向上も相俟って、植物起原の抗アレルギー剤のスクリーニングも盛んに行われており、ウラジオガシ（特開平６−２３９７５７号）、エンゴサク（特開平７−１０７６４号）、ウルシ科植物（特開平７−１０７６５号）、ハイビスカス（特開平９−８７１８８号）、ザクロ（特開平９−１１０７１０号）、イヌカタヒバ（特開平９−２６３５２６号）、ジュズダマ属植物・ドクダミ科植物等（特開平１０−１２０５８３号）、ゴマ・レンギョウ等（特開平１１−１８０８８５号）の抽出成分が有効成分として開示されている。
【０００５】
しかしながら、従来の抗アレルギー薬の中には、局所刺激性、粘膜刺激性等を有したり、抗ヒスタミン薬に代表されるように、副作用を有するものが存在していた。また、植物起原の抗アレルギー剤の中には、十分な作用効果が得られなかったり、製剤化において支障となる色・匂いの問題があるものも多く、一定した品質のものが得られにくいといった問題点があった。
【０００６】
従って、本発明の目的は、皮膚安全性及び効果の面から化粧料添加剤として優れた抗アレルギー作用、抗炎症作用、活性酸素種消去作用を有する植物抽出物を配合することによりアレルギー性の皮膚疾患、過敏症・敏感肌といった皮膚トラブルの予防改善、ついては皮膚の老化防止に有効で、安全性の高い皮膚外用剤・浴剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
このような事情に鑑み、本発明者らは、抗アレルギーあるいは抗炎症作用に優れ、かつ皮膚学上副作用がなく、皮膚に緩和に作用する物質について、広く天然界に存在する植物について鋭意検討を行なった結果、オリーブの果実、葉、枝の混合物よりの抽出物に高いヒアルロニダーゼ活性阻害作用、β-hexosaminidase遊離抑制作用を見出し、本発明を完成するに至った。
本願は、下記の請求項１及び請求項２により構成されている。
請求項１：オリーブの果実及び葉及び枝の混合物からエタノール溶媒で抽出したオリー
ブ抽出物を含有することを特徴とする抗アレルギー皮膚外用組成物。
請求項２：請求項１のオリーブ抽出物とオリーブ油を配合することを特徴とする抗アレルギー皮膚外用組成物。
【０００８】
本発明で用いるオリーブとは、オリーブ Olea europaea L.（モクセイ科）で、地中海沿岸地方、北アフリカ原産の植物で、現在地中海沿岸地方をはじめ世界各地の比較的気温の高い土地で栽培されている。一方本発明に係るオリーブ抽出物は、OLEA EUROPAEA (OLIVE) FRUIT EXTRACT 、OLEA EUROPAEA (OLIVE) LEAF EXTRACTとしてInternational Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (Eighth Edition 2000) に記載されており、化粧品添加剤として広く使用されている。
しかしながら、これら抽出物は、果実又は葉がそれぞれ単独で抽出されたもので、混合物から抽出されたものは見当たらない。
また、オリーブ葉抽出物の効果としては、活性酸素種消去作用や抗酸化作用（Phytochemistry,Vol31,No.4,p.1173-1178,1992、特開２０００−１２８７６５、特開２００１−２５５０、特開２０００−２６５１８）、美白効果（特開２００１−２５５０）が知られている。オリーブ果実抽出物の効果としては、美白効果（特開平８−１１９８２５号）、抗酸化作用（特開平９−７８０６１号）が知られている。また、オリーブ未精製油の抗酸化作用については、古くから知られている。
しかしながら、オリーブ果実、葉、枝の混合物からの抽出物に関する、これらの相加・相乗効果、抗アレルギー・抗炎症効果については、これまで全く知られていない。
【０００９】
本発明の必須成分であるオリーブ抽出物に用いるオリーブの果実、葉、枝は、必要に応じ、生又は乾燥したものをそのまま又は粉砕したものを使用し、有機栽培された果実、葉、枝も同様に使用することができる。さらに、オリーブの果実は、オリーブ油を搾油した後の粕をそのまま又は乾燥して同様に使用できる。抽出物の調製方法は、オリーブの果実、葉及び枝を混合したものから抽出するが、その混合比率は特に限定されるものではなく、種々の適当な溶媒を用い、室温又は加温下において抽出する方法があげられる。
【００１０】
具体的に抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級一価アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステルが例示され、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができるが、好ましくは、水又はエタノール溶液又は１，３−ブチレングリコール溶液を用いるのが良い。
【００１１】
本発明のオリーブ抽出物は、上記のようにして得られた抽出液をそのまま用いてもよいが、得られた抽出液を濃縮した濃縮物として用いることもできる。また、スプレードライや凍結乾燥などの操作により、エキス粉末として用いることもできる。さらに、カラムクロマトグラフィー、向流分配クロマトグラフィーなどにより精製したものを用いることができる。抽出物の加工、精製法に限定されるものではない。
【００１２】
本発明で使用するオリーブ油は、オリーブの果実より圧搾した油であるが、その製法に限定されるものではない。また、オーガニック栽培されたオリーブの果実を用いることもできる。好ましくは、オーガニック栽培されたオリーブ果実の低温圧搾の一番絞りを用いるのがよい。
【００１３】
本発明に係る抗アレルギー皮膚外用組成物の必須成分であるオリーブ抽出物の含有量は、何ら限定されるものではないが、乾燥固形物に換算して０．０００１〜５．０重量％（以下、単に「％」で示す）、好ましくは、０．００１〜０．５％がよい。
【００１４】
本発明におけるオリーブ抽出物とオリーブ油の配合割合は特に限定されないが、オリーブ油は、０．０１％〜２０．０％、好ましくは０．１〜１０．０％がよい。
【００１５】
本発明の皮膚外用剤には、上記必須成分の他、化粧料成分として一般に使用されている界面活性剤、油類、高給脂肪酸、合成エステル、シリコーン、保湿剤、紫外線吸収剤、ビタミン類、天然水溶牲高分子、半合成水溶牲高分子、合成水溶牲高分子、粉末成分、色素、防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、その他多価アルコール、低級アルコール、増粘剤、散乱剤、ｐＨ調整剤、香料等を適宜配合することができる。これらの添加成分の具体例を示すと次のとおりである。
【００１６】
界面活性剤としては、
（イ）石けん用素地、脂肪酸石けん、高級アルキル硫酸エステル、アルキルエーテル硫酸エステル塩、N −アシルサルコシン酸、高級脂肪酸アミドスルホン酸塩、リン酸エステル塩、スルホコハク酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、高級脂肪酸エステル硫酸エステル塩、硫酸化油、ＰＯＥアルキルエーテルカルボン酸塩、ＰＯＥアルキルアリルエーテルカルボン酸塩、α−オレフィンスルホン酸塩、高級脂肪酸エステルスルホン酸塩、二級アルコール硫酸エステル塩、高級脂肪酸アルキロールアミド硫酸エステル塩、ラウロイルモノエタノールアミドコハク酸塩、Ｎ−パルミトイルアスパラギン酸ジトリエタノールアミン、カゼインナトリウム等のアニオン界面活性剤。アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、アルキルピリジウム塩、アルキル四級アンモニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、アルキルイソキノニウム塩、ジアルキルモルホニウム塩、ＰＯＥアルキルアミン、アルキルアミン塩、ポリアミン脂肪酸誘導体、アミルアルコール脂肪酸誘導体、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等のカチオン界面活性剤
（ロ）イミダゾリン系界面活性剤、ベタイン系界面活性剤等の両性界面活性剤
（ハ）ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体等の親油性非イオン界面活性剤
（ニ）ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル、ＰＯＥ脂肪酸エステル、ＰＯＥアルキルエーテル、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル、テトラＰＯＥ・テトラＰＯＰエチレンジアミン縮合物、ＰＯＥ硬化ヒマシ油誘導体、ＰＯＥミツロウ・ラノリン誘導体、アルカノールアミド、ＰＯＥプロピレングリコール脂肪酸エステル、ＰＯＥアルキルアミン、ＰＯＥ脂肪酸アミド、ショ糖脂肪酸エステル等の親水性非イオン界面活性剤
等が挙げられる。
【００１７】
油類としては、
（イ）アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油及びその硬化油
（ロ）トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリン
（ハ）流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油。
等が挙げられる。
【００１８】
高級脂肪酸としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などがある。高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール、ホホバアルコール、ラノリンアルコール、バチルアルコール、２−デシルテトラテセシノール、コレステロール、フィトステロール、イソステアリルアルコール等がある。
又、合成エステルとしては、例えば、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等がある。シリコーンとしては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルシクロポリシロキサン等の環状ポリシロキサン、シリコーン樹脂等の三次元網目構造のもの等がある。
【００１９】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ヘキシレングリコール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ムコイチン硫酸、アテロコラーゲン、尿素、乳酸ナトリウム、胆汁酸塩、dlピロリドンカルボン酸塩、可溶性コラーゲン、等のほか、各種動植物抽出物、酵母抽出物等がある。
【００２０】
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸誘導体等の安息香酸系紫外線吸収剤、ホモメンチル−Ｎ−アセチルアントラニレート等のアントラニル酸系紫外線吸収剤、アミルサシリレート等のサリチル酸系紫外線吸収剤、オクチルシンナメート等の桂皮酸系紫外線吸収剤、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系紫外線吸収剤、４−メチルベンジリデンカンファー、３−ベンジリデンカンファー、２−フェニル−５−メチルベンゾキサゾール等がある。
【００２１】
ビタミン類としては、例えば、ビタミン油、レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン等のビタミンＢ2 類、ピリドキシン塩酸塩等のビタミンB6類、Ｌ−アスコルビン酸等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、エルゴカルシフェノール等のビタミンＤ類、ニコチン酸アミド等のニコチン酸類、酢酸トコフェノール等のビタミンＥ類、ビタミンＰ、ビオチン等がある。
【００２２】
天然水溶性高分子としては、例えば、アラビアガム、トラガントガム、ガラクタン、グアガム、キャロブガム、カラヤガム、カラギーナン、ペクチン、カンテン、クインスシード、アルゲコロイド、デンプン、キサンタンガム、デキストラン、サクシノグルカン、プルラン、コラーゲン、カゼイン、ヒアルロン酸、アルブミン、ゼラチンなどがある。
半合成水溶性高分子としては、例えば、メチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース系高分子、カルボキシメチルデンプン等のデンプン系高分子、アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸系高分子等がある。
合成水溶性高分子としては、例えば、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー等のビニル系高分子、ポリエチレングリコール2000等のポリオキシエチレン系高分子、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体等の共重合高分子系、ポリアクリルアミド等のアクリル系高分子、ポリエチレンイミン、カチオンポリマー等がある。
【００２３】
粉末成分としては、例えば、タルク、カオリン、雲母、セリサイト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、シリカ、硫酸バリウム、焼セッコウ、フッ素アパタイト、セラミックパウダー等の無機粉末、ナイロン粉末、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末等の有機粉末などがある。
色素剤としては、二酸化チタン、酸化鉄、カーボンブラック、コバルトバイオレツト等の無機顔料、赤色２０１号、赤色３号、黄色２０５号、黄色４号等の有機顔料、クロロフィル、リボフラビン、β−カロチン等の天然色素、ベニバナ、ウコン等の植物抽出物色素等がある。
防腐剤としては、安息香酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオール、レゾルシン、エタノール等がある。
酸化防止剤としては、トコフェノール、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸エステル等がある。
キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、クエン酸等がある。
【００２４】
さらに、抗菌、細胞賦活、皮脂分泌調整、消炎、収斂、抗酸化、美白、活性酸素抑制、抗アレルギー等の生理活性作用を有する植物抽出物及びこれらの抽出分画、精製物を併用することもできる。また、上記の他、香料、アルコール、水等を適宜配合することができる。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤組成物は、一般皮膚化粧料に限定されるものではなく、医薬品、医薬部外品、薬用化粧料等を包含するものである。本発明の皮膚外用剤組成物の剤型は、可溶化系、乳化系、粉末分散系等何れでもよく、用途も、化粧水、乳液、クリーム、パック等の基礎化粧料、ファンデーション等のメークアップ化粧料、シャンプー、リンス、石けん、ボディーシャンプーなどのトイレタリー製品、浴用剤等を問わない。
【００２６】
次に実施例をあげて説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００２７】
（製造例１）
乾燥したオリーブの果実１００ｇ、乾燥したオリーブの葉１００ｇ、及び乾燥したオリーブの枝１０ｇに３０％１，３−ブチレングリコール溶液３ｋｇを加え、４０℃にて８時間抽出する。抽出後、ろ過し、ろ液を５℃にて５日間静置し、さらにろ過して抽出物Ａ、約２．４ｋｇを得る。この抽出物の固形分は、１．１％であった。
【００２８】
（製造例２）
オリーブ油を製造するために圧搾したオリーブ果実の圧搾粕の乾燥物１ｋｇ、乾燥したオリーブの葉２ｋｇ及びオリーブの枝２００ｇに、５０ｖｏｌ％エタノール溶液５０Ｌを加え、５０℃にて１０時間抽出を行い、冷後、ろ過し、抽出物約４０ｋｇを得る。抽出物を減圧下、３０℃以下にて約２ｋｇまで濃縮する。濃縮液を凍結乾燥機にて凍結乾燥した後、粉砕し、抽出物Ｂのエキス末約４５０ｇを得る。
【００２９】
（製造例３）
オリーブ果実の圧搾粕の乾燥物１００ｇ、乾燥したオリーブの葉５００ｇ及びオリーブの枝１０ｇに３０ｖｏｌ％エタノール溶液１０Ｌを加え、室温にて１０日間抽出を行い、ろ過し、抽出物約８ｋｇを得る。抽出物を減圧下、濃縮乾固する。乾固物に５０％１，３−ブチレングリコール３．５ｋｇを加え、加温溶解した後、ろ過し、抽出物Ｃを得る。この抽出物の固形分は、２．０％であった。
【００３０】
（製造例４）
オリーブの成熟した果実２５０ｇ、乾燥したオリーブの葉２５０ｇ、オリーブの枝５０ｇに水１０ｋｇを加え、８０℃にて８時間抽出を行い、冷後ろ過する。
抽出物を減圧下、約１ｋｇまで濃縮する。濃縮物を、径６０ｍｍ、長さ１０００ｍｍのガラスカラムに高分子吸着体（ダイヤイオンＨＰ−２０、三菱化学株式会社製）２Ｌを充填して水に置換したカラムに、約２気圧で充填する。水４Ｌにて溶出後、更に３０％ｖｏｌエタノール溶液５Ｌで溶出し、溶出液を合わせて回収する。回収液を減圧下約５００ｇまで濃縮する。濃縮液を凍結乾燥機にて乾燥後、粉砕し、約８０ｇの抽出物Ｄを得る。
【００３１】
（試験例１）ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の測定
ヒアルロニダーゼは、結合組織に分布するヒアルロン酸の加水分解酵素であり、炎症時において活性化され、結合組織のマトリックスを破壊し、炎症系の細胞及び血管の透過性を高める役割を演じると考えられている。また起炎酵素として知られており、抗炎症剤や抗アレルギー剤により阻害されることもしられている。従って、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用は、抗アレルギー活性の一つとされている。
【００３２】
（試験方法）
本発明のオリーブ抽出物は、製造例２に示した凍結乾燥抽出物を精製水にて０．５％濃度となるように溶解し、試料とした。
別に、製造例２と同様の方法にて、圧搾したオリーブ果実の圧搾粕のみ３ｋｇを用いて凍結乾燥抽出物を製造し、上記と同様に操作して試験試料を調製した。
乾燥したオリーブの葉及びオリーブの枝についても同様に製造、試験試料を調製した。
陽性対照として、阻害活性が既に知られているクロモグリク酸ナトリウム（藤沢薬品工業製）を試験に用いた。試験方法は、Morgan-Elson法を応用する方法にて行なった。
【００３３】
試料を適当量に０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０に調製）にて希釈した溶液０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ（Sigma 社製，TypeIV-S，最終酵素活性を４００NFunit／ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃にて２０分間で放置後、活性化剤としてcompound４８／８０(Sigma社製) の酢酸緩衝液溶液（０．１ｍｇ／ｍＬ）０．２ｍＬを加え、更に３７℃にて２０分間放置する。これにヒアルロン酸カリウム（和光純薬工業製）溶液（最終濃度ｍｇ／ｍＬ）０．５ｍＬを加え、３７℃にて４０分間放置する。次に、氷上にて０．４Ｎ水酸化ナトリウム溶液０．２ｍＬを加えて反応を停止させた後、ホウ酸溶液（ホウ酸４．９５ｇに水５０ｍＬを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液にてｐＨ９．１に調製した後、水を加えて１００ｍＬとする）０．２ｍＬを加え、混和後沸騰水浴中にて３分間加熱し酵素を失活させる。次に氷上にて室温まで冷却し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド試薬（和光純薬工業製、１０ｇに１０Ｎ塩酸溶液１２．５ｍＬ、酢酸８７．５ｍＬを混合溶解し、使用直前に酢酸にて１０倍に希釈する）６ｍＬを加え、３７℃にて２０分間放置した後、５８５ｎｍにて吸光度を測定する。なお、試料溶液の代わりに酢酸緩衝液を入れたものを対照とし、各資料溶液、対照について酵素を入れないものブランクとし、次式により阻害活性率を求め、試料濃度を調整することにより５０％阻害活性濃度（ＩＣ50）を求めた。
阻害率（％）＝〔１−（試料溶液の吸光度−試料溶液ブランクの吸光度）／（対照溶液の吸光度−対照溶液ブランクの吸光度）〕×１００
【００３４】
（試験結果）
表１のごとく、本発明のオリーブ抽出物は、果実、葉、枝の単独の抽出物に比べて高い活性阻害を示し、相乗効果があることが確認された。また、本発明のオリーブ抽出物は、阻害活性が既知のクロモグリク酸ナトリウムより低いものの、十分に抗アレルギー作用が期待できる結果であった。
【００３５】
【表１】

【００３６】
（試験例２）ラット好塩基球白血病（ＲＢＬ−２Ｈ３）細胞からのβ-hexosaminidase 遊離抑制作用
ＲＢＬ−２Ｈ３細胞は継代が可能で無限増殖能を獲得した樹立細胞系の細胞であり、正常の皮膚組織中の肥満細胞や血液中の好塩基球と同様に細胞膜上の高親和性IgE リセプターがIgE 抗体と抗原により架橋されることにより活性化され、脱顆粒現象が生じてβ-hexosaminidase やセロトニン、ヒスタミン等の化学伝達物質を遊離する即時型アレルギー反応機構を備えた細胞である。従って、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞からのβ-hexosaminidase 遊離抑制作用は、抗アレルギー作用の可能性を示す指標の一つと考えられている。
【００３７】
（試験方法）
試験に使用した反応混合液は、試験例１で使用した試験試料１０μＬ、ビオチン化マウス抗ＤＮＰIgE 抗体（３μg/ｍＬ）、アビジン（１μg/ｍＬ）を加え、放出溶媒（１１６．９ｍＭ塩化ナトリウム、５．４ｍＭ塩化カリウム、０．８ｍＭ硫酸マグネシウム、２．０ｍＭ塩化カルシウム・２水和物、５．６ｍＭＤ−グルコース、２５ｍｍＨＥＰＥＳ、１ｍｇ／ｍＬＢＳＥ、ｐＨ７．７）で全量を１ｍＬとする。
【００３８】
ＲＢＬ−２Ｈ３細胞（５×１０5 個／穴）を４８穴プレートの穴中で３％ＦＣＳ（HyClone 製）を含むＲＰＭＩ−１６４０（Gibco 製）培養液と共に３７℃、５％二酸化炭素下で２４時間培養する。培養液を除去後、穴を放出溶媒５００μＬで２回洗浄し、反応混合液２５０μＬを加え、３７℃にて１時間反応させる。
その後、穴から細胞外液１００μＬを分取し、残余の細胞外液を吸引除去する。
次に、０．２％Triton Ｘ−１００２５０μＬを穴に加え、１０分後に細胞溶解液（細胞内液）１００μＬを分取する。
【００３９】
β-hexosaminidase 活性の測定は、細胞外液（Ａ）、細胞内液（Ｂ）に５０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）で，５ｍＭｐ−ニトロフェニル−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（和光純薬製）とした基質溶液４００μＬを加えて、３７℃で３０分間反応させる。反応停止液として、０．２Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ１０．７）１ｍＬを加え、生成したｐ−ニトロフェノールの吸光度を４０５ｎｍで測定する。試験試料を含まない反応混合液による遊離率（net ％release of control）は４５％、放出溶媒のみの反応混合液は、３．５％であった。
【００４０】
β-hexosaminidase の遊離抑制率は、次式により求める。
Net % release ofβ-hexosaminidase ＝[ Ａ／（Ａ＋Ｂ）] ×１００
抑制率（％）＝１００×（１−Net ％ release of sample／Net ％ release of control ）
【００４１】
（試験結果）
表２のごとく、本発明のオリーブ抽出物は、果実、葉、枝の単独の抽出物に比べて高い活性阻害を示し、相乗効果があることが確認され、抗アレルギー作用が期待できる結果であった。
【００４２】
【表２】

【００４３】
（試験例３）パネルテスト−１
軽度のアトピー性皮膚症状を有する２０〜３９歳の女性３０名（平均年齢２４．８歳）を対象として、表３の抗アレルギー皮膚外用組成物を１日２回（朝、夕）連続２ケ月顔面に塗布、使用せしめた結果の評価を同じく表３に示す。
評価は、次の基準で評価した。
有効：炎症に伴う赤みやかゆみ、肌荒れが改善された
やや有効：炎症に伴う赤みやかゆみ、肌荒れが改善された
無効：使用前と変化なし
【００４４】
【表３】

【００４５】
（試験例４）パネルテスト−２
２０〜３５歳の健常人女性５０名（平均年齢２４．２歳）を対象として、パネルテスト−１で使用した抗アレルギー皮膚外用組成物を用いて、１日２回（朝、夕）連続３ケ月間顔面に塗布、使用せしめた結果を表４に示す。
官能評価は、潤い、きめ、皺、日焼けによるしみ・そばかすの４項目とした。
【００４６】
【表４】

【００４７】
表４より明らかなように、本発明のオリーブ抽出物、オリーブバージン油を含有する抗アレルギー皮膚外用組成物の使用により、本組成物について、皮膚の炎症の改善に優れた効果があること、及び皮膚改善効果、紫外線によるしみ・そばかすの防止効果があることが確認された。
【００４８】
（試験例５）皮膚安全性試験
製造例３に示した抽出物を試験溶液として用いた。
皮膚一次刺激性試験は、ニュージーランドホワイト種ウサギ３匹を用いて行なった結果、皮膚一次刺激指数は０．０であった。連続皮膚刺激性試験は、雌雄各３匹のDunkin Hartley系モルモツトを用いて、１４日間連続反復投与した結果、最大週別平均刺激指数は０．０となり、無刺激と判定された。
眼刺激性試験は、ニュージーランドホワイト種ウサギ３匹の眼について行い、最大群平均評点は０．０で非刺激性と判定された。
皮膚感作性試験は、白色モルモットをAdjuvant/Patch法にて、試験動物、対照動物各１０匹によって行い、発現率０／１０で感作性のないものであることが確認された。
光毒性及び光感作性試験は、Dunkin Hartley系モルモット雌各５匹を使用して行なったところ、光毒性及び光感作性の兆候を引き起こさなかった。
これらの皮膚安全性の結果から、本発明のオリーブ抽出物は、皮膚安全性の上で、非常に安全性が高いものであることが明白である。
【００４９】
（試験例６）パッチテスト
２０歳〜５１歳（平均年齢２６．３歳）までの男女各２０名からなる健常人４０名のボランティアを用いた。
被験物質は、先の製造例３の抽出物及びパネルテストで使用した抗アレルギー皮膚外用組成物Ａを用い、対照として５０％１，３−ブチレングリコール溶液及び生理食塩水を使用した。試験は、２４時間閉塞塗布試験を行なった。人体貼付試験用フィンチャンバー（径１１ｍｍ、大正製薬）を使用し、被験物質をそれぞれ０．１ｍＬ塗布した後、直ちに被験者の背部に貼付し、２４時間放置した。そして、２４時間後にフィンチャンバーを除去して、３０分後及び翌日（４８時間後）に判定基準に従って皮膚反応を観察した。
【００５０】
判定基準は、本邦パッチテスト研究会の判定基準に従った。
無反応・・・・（−）
僅かな紅斑・・・・（±）
明らかな紅斑・・・・（＋）
紅斑＋腫脹・・・・（＋＋）
紅斑＋腫脹＋丘疹又は小水泡・・・・（＋＋＋）
大水泡・・・・（＋＋＋＋）
【００５１】
試験結果を表５に示す。陽性反応（＋以上）を示した例は認められなかった。
なお、僅かな紅斑（±）を生じた例は各検体群において、５０％１，３−ブチレングリコール溶液や生理食塩水例とほぼ同程度の頻度であった。従って、皮膚刺激性は低いものと判断され、皮膚外用剤に配合するにあたって安全性の面で問題のないことが明らかとなった。
【００５２】
【表５】

【００５３】

【００５４】
（実施例２）乳液
（成分）（重量％）
（１）オリーブ油６．０％
（２）植物性スクワラン２．０％
（３）ビタミンＡ油０．０５％
（４）ｄ−δ−トコフェノール０．１％
（５）ステアリン酸２．０％
（６）ベヘニルアルコール０．５％
（７）ポリオキシエチレンフィトステロール０．６％
（８）水素添加大豆リン脂質０．５％
（９）吸着精製ラノリン１．０％
（10）パラオキシ安息香酸エステル０．４％
（11）製造例３のオリーブ抽出物５．０％
（12）１，３−ブチレングリコール１１．０％
（13）カルボキシビニルポリマー６．０％
（14）ケイ酸アルミニウムマグネシウム１．５％
（15）ヒアルロン酸ＦＣＨ水溶液１．０％
（16）グリチルリチン酸ジカリウム０．０５％
（17）プラセンターエキス０．５％
（18）エバーセルホワイト０．５％
（19）アロエ液汁０．５％
（20）水酸化カリウム０．０７％
（21）精製水６０．７３％
【００５５】
（実施例３）化粧水
（成分）（重量％）
（１）１，３−ブチレングリコール１０．０％
（２）ｄｌ−ピロリドンカルボン酸ナトリウム液３．０％
（３）製造例１のオリーブ抽出物５．０％
（４）ソルビトール発酵多糖類１．０％
（５）トレハロース液１．０％
（６）Ｌ−セリン０．１５％
（７）グリチルリチン酸ジカリウム０．０５％
（８）アラントイン０．０２％
（９）クエン酸ナトリウム０．１％
（10）クエン酸０．０３％
（11）パラオキシ安息香酸エステル０．１２％
（12）精製水７９．５３％
【００５６】
（実施例４）石けん
（成分）（重量％）
（１）石けん素地５３．２％
（２）スクロール１９．４％
（３）オリーブ油０．２５％
（４）製造例１のオリーブ抽出物５．０％
（５）還元ハチミツ液０．２５％
（６）濃グリセリン６．５％
（７）ヒドロキシエタンジホスホン酸０．１５％
（８）常水１５．２５％
【００５７】
（実施例５）クレンジングジェル
（成分）（重量％）
（１）モノミリスチン酸ヘキサグリセリル２０．０％
（２）流動パラフィン５４．７％
（３）オリーブ油５．０％
（４）パラオキシ安息香酸エステル０．３％
（５）製造例２のオリーブ抽出物０．１％
（６）濃グリセリン５．９％
（７）ソルビトール５．０％
（８）香料０．１％
（９）精製水８．９％
【００５８】
（実施例６）パック剤
（成分）（重量％）
（１）ポリビニルアルコール２０．０％
（２）グリセリン５．０％
（３）カオリン６．０％
（４）製造例４のオリーブ抽出物０．０５％
（５）塩化ベンザルコニウム２０．０％
（６）エタノール２０．０％
（７）パラオキシ安息香酸エステル０．２％
（８）香料０．１％
（９）精製水２７．７％
【００５９】
（実施例７）シャンプー
（成分）（重量％）
（１）Ｎ−ヤシ油脂肪酸グルタミン酸トリエタノールアミン２５．０％
（２）ラウリン酸ジエタノールアミド５．０％
（３）ミリスチン酸カリウム５．０％
（４）ジステアリン酸エチレングリコール２．０％
（５）ポリエチレングリコール４００１５．０％
（６）オリーブ油１．０％
（７）製造例１のオリーブ抽出物３．０％
（８）クロルキシレノール０．１％
（９）ビタミンＥ０．１％
（10）パラオキシ安息香酸エステル０．２％
（11）香料０．３％
（12）精製水４３．３％
【００６０】
（実施例８）浴用剤
（成分）（重量％）
（１）乾燥硫酸ナトリウム４０．０％
（２）炭酸水素ナトリウム５７．５％
（３）オリーブ油０．２％
（４）実施例２のオリーブ抽出物０．１％
（５）軽質無水ケイ酸０．３％
（６）香料１．７％
（７）黄色２０２号の（１）０．２％
【００６１】
【発明の効果】
以上、詳述したように、本発明の必須成分であるオリーブ抽出物は、優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用、β-hexosaminidase 遊離抑制作用を有し、安全性に優れ、これを含有する皮膚外用組成物は、炎症に伴う赤みやかゆみ、肌荒れを改善する。
さらにこれらの効果は、本発明オリーブ抽出物とオリーブバージン油を併用することにより、より大きな効果として発揮され、かつ安全性にも優れたものである。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an antiallergic skin external composition that has an excellent antiallergic action, and can further prevent and ameliorate skin damage caused by oxidative stress due to reactive oxygen species, ultraviolet rays and the like.
More particularly, the present invention relates to an antiallergic skin external composition characterized by containing an extract obtained from a mixture of olive fruits and leaves and branches.
[0002]
[Prior art]
In recent years, urticaria, contact dermatitis, atopic dermatitis, etc. have been caused by increased stress in social life, including the effects of environmental science substances due to changes in eating habits, lifestyle changes and various environmental conditions. Skin diseases involving allergic reactions are increasing.
Allergic reactions are classified into types I to IV.
IgE antibodies are mainly involved in type I allergic reactions. IgE antibodies are produced against foreign antigens, IgE antibodies adhere to mast cells and basophils and sensitization is established, and when antigens come into contact again, antigen-antibody reactions occur in the sensitized cells, and histamine In addition, chemical mediators such as serotonin are liberated, causing increased vascular permeability, edema, smooth muscle contraction, and other symptoms of various allergies.
Type II allergic reaction involves IgG and IgM antibodies. When the antibody binds to the antigen cell, the protein that forms the complement system is activated in a chain to form a complex that destroys the cell membrane, thereby causing cell destruction. In addition, when anaphylatoxin is excessively generated during the activation of the complement system, increased vascular permeability, contraction of smooth muscle, release of histamine, etc., and various allergic symptoms appear.
Type III allergic reactions mainly involve IgG antibodies. Onset is said to occur by a complex mechanism involving many factors such as the complement system and polymorphonuclear leukocytes.
Type IV allergy results from the reaction of sensitized T lymphocytes with antigen. In contrast to the immediate types I to III, this is a delayed reaction, and external contact materials such as allergic contact dermatitis are absorbed from the skin, and the eczema reaction occurs in accordance with the contact site. Wake up.
[0003]
In the treatment of allergic diseases, antiallergic drugs such as drugs having a cell membrane stabilizing action of mast cells, drugs that suppress the production or release of chemical mediators, or drugs that have an antagonistic action on chemical mediators, anticholinergics, Application of symptomatic drugs such as antihistamines, xanthines, exchange nerve stimulants, steroids, etc. is being studied.
[0004]
On the other hand, for external preparations for skin including cosmetics, there is a high demand for anti-allergic agents that have high safety and mild action and can be used for daily skin care, and glycyrrhizin derived from licorice Derivatives have been mainly used. In addition, with the improvement of natural orientation, screening of anti-allergic agents originated from plants has also been actively conducted, such as Vladivostok (JP-A-6-239757), Engosaku (JP-A-7-10764), Urushi. Plant (Japanese Patent Laid-Open No. 7-10765), hibiscus (Japanese Patent Laid-Open No. 9-87188), pomegranate (Japanese Patent Laid-Open No. 9-110710), Inukata Hiba (Japanese Patent Laid-Open No. 9-263526), genus plant of the genus Juzudama, JP-A-10-120583), sesame and forsythia (JP-A-11-180885) have been disclosed as active ingredients.
[0005]
However, some of the conventional antiallergic drugs have local irritation, mucosal irritation, etc., and have side effects as represented by antihistamines. In addition, there are many plant-derived antiallergic agents that do not have sufficient action effects or have problems of color and odor that hinder the formulation, and it is difficult to obtain products of constant quality. There was a problem.
[0006]
Accordingly, an object of the present invention is to provide an allergic skin by blending a plant extract having excellent antiallergic action, anti-inflammatory action, and reactive oxygen species elimination action as a cosmetic additive in terms of skin safety and effects. The purpose is to provide a highly safe skin external preparation and bath preparation that is effective in preventing and improving skin troubles such as diseases, hypersensitivity and sensitive skin, and effective in preventing skin aging.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
In view of such circumstances, the present inventors have conducted extensive studies on plants that exist widely in the natural world with respect to substances that have excellent antiallergic or anti-inflammatory effects, have no dermatological side effects, and act to relax the skin. As a result, a high hyaluronidase activity inhibitory action and β-hexosaminidase release inhibitory action were found in an extract from a mixture of olive fruits, leaves and branches, and the present invention was completed.
This application is constituted by the following claims 1 and 2.
Claim 1: Olive oil extracted from a mixture of olive fruits and leaves and branches with ethanol solvent
A composition for external application of anti-allergic skin, characterized by containing a buoy extract.
[2] An antiallergic skin external composition comprising the olive extract of [1] and olive oil.
[0008]
The olive used in the present invention is olive Olea europaea L. (Asteraceae), a plant native to the Mediterranean region and North Africa, and is currently cultivated on relatively warm land in the world including the Mediterranean region. . On the other hand, the olive extract according to the present invention is described in the International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook (Eighth Edition 2000) as OLEA EUROPAEA (OLIVE) FRUIT EXTRACT and OLEA EUROPAEA (OLIVE) LEAF EXTRACT, and is widely used as a cosmetic additive. ing.
However, in these extracts, fruits or leaves are each extracted alone, and no extract is extracted from the mixture.
Moreover, as an effect of the olive leaf extract, reactive oxygen species scavenging action and antioxidant action (Phytochemistry, Vol31, No.4, p.1173-1178, 1992, JP2000-128765, JP2001-2550, Open 2000-26518), whitening effect (Japanese Patent Laid-Open No. 2001-2550) is known. As the effect of the olive fruit extract, a whitening effect (Japanese Patent Laid-Open No. 8-198125) and an antioxidant effect (Japanese Patent Laid-Open No. 9-78061) are known. In addition, the antioxidant effect of unrefined olive oil has been known for a long time.
However, nothing has been known so far regarding these additive / synergistic effects and anti-allergic / anti-inflammatory effects regarding extracts from a mixture of olive fruits, leaves and branches.
[0009]
The fruits, leaves and branches of olives used in the olive extract, which is an essential component of the present invention, are used as is or after pulverizing fresh or dried fruits, leaves and branches grown organically. It can be used as well. Furthermore, olive fruit can be used in the same manner after squeezing olive oil as it is or after drying. The method for preparing the extract is extracted from a mixture of olive fruits, leaves and branches, but the mixing ratio is not particularly limited, and the extract is extracted at room temperature or under heating using various appropriate solvents. How to do.
[0010]
Specific examples of the extraction solvent include lower monohydric alcohols such as water, methanol, and ethanol, liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, dipropylene glycol, and 1,3-butylene glycol, and lower alkyl esters such as ethyl acetate. Illustratively, one or two or more of these mixed solvents can be used, but water, an ethanol solution, or a 1,3-butylene glycol solution is preferably used.
[0011]
For the olive extract of the present invention, the extract obtained as described above may be used as it is, but it can also be used as a concentrate obtained by concentrating the obtained extract. It can also be used as an extract powder by operations such as spray drying and freeze drying. Furthermore, what was refine | purified by column chromatography, countercurrent distribution chromatography, etc. can be used. It is not limited to the processing and purification methods of the extract.
[0012]
The olive oil used in the present invention is an oil squeezed from the fruit of olive, but is not limited to its production method. Organically grown olive fruits can also be used. Preferably, the most squeezed cold-pressed organically grown olive fruit is used.
[0013]
The content of the olive extract, which is an essential component of the antiallergic skin external composition according to the present invention, is not limited in any way, but is 0.0001 to 5.0% by weight (hereinafter referred to as “dry solid”). , Simply indicated by “%”), preferably 0.001 to 0.5%.
[0014]
The blending ratio of olive extract and olive oil in the present invention is not particularly limited, but olive oil is 0.01% to 20.0%, preferably 0.1 to 10.0%.
[0015]
In the external preparation for skin of the present invention, in addition to the above essential components, surfactants generally used as cosmetic ingredients, oils, high-fat fatty acids, synthetic esters, silicone, humectants, ultraviolet absorbers, vitamins, natural Water-soluble polymers, semi-synthetic water-soluble polymers, synthetic water-soluble polymers, powder components, dyes, preservatives, antioxidants, chelating agents, other polyhydric alcohols, lower alcohols, thickeners, scattering agents, pH adjustment Agents, fragrances and the like can be appropriately blended. Specific examples of these additive components are as follows.
[0016]
As surfactant,
(I) Soap base, fatty acid soap, higher alkyl sulfate, alkyl ether sulfate, N-acyl sarcosine, higher fatty acid amide sulfonate, phosphate ester, sulfosuccinate, alkyl benzene sulfonate, N- Acyl glutamate, higher fatty acid ester sulfate, sulfated oil, POE alkyl ether carboxylate, POE alkyl allyl ether carboxylate, α-olefin sulfonate, higher fatty acid ester sulfonate, secondary alcohol sulfate Anionic surfactants such as higher fatty acid alkylolamide sulfate, lauroyl monoethanolamide succinate, ditriethanolamine N-palmitoyl aspartate, and sodium caseinate. Alkyltrimethylammonium salt, dialkyldimethylammonium salt, alkylpyridium salt, alkylquaternary ammonium salt, alkyldimethylbenzylammonium salt, alkylisoquinonium salt, dialkylmorphonium salt, POE alkylamine, alkylamine salt, polyamine fatty acid derivative , Cationic surfactants such as amyl alcohol fatty acid derivatives, benzalkonium chloride, benzethonium chloride
(B) Amphoteric surfactants such as imidazoline surfactants and betaine surfactants
(C) Lipophilic nonionic surfactants such as sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, hydrogenated castor oil derivative, glycerin alkyl ether, polyoxyethylene / methylpolysiloxane copolymer
(D) POE sorbitan fatty acid ester, POE sorbite fatty acid ester, POE glycerin fatty acid ester, POE fatty acid ester, POE alkyl ether, POE alkyl phenyl ether, POE / POP alkyl ether, tetra-POE / tetra-POP ethylenediamine condensate, POE hydrogenated castor oil Derivatives, POE beeswax lanolin derivatives, alkanolamides, POE propylene glycol fatty acid esters, POE alkylamines, POE fatty acid amides, sucrose fatty acid esters, and other hydrophilic nonionic surfactants
Etc.
[0017]
As oils,
(I) Avocado oil, olive oil, sesame oil, camellia oil, evening primrose oil, turtle oil, macadamian nut oil, corn oil, mink oil, rapeseed oil, egg yolk oil, persic oil, wheat germ oil, southern castor oil, castor oil, flaxseed Oil, safflower oil, cottonseed oil, eno oil, soybean oil, peanut oil, tea seed oil, kaya oil, rice bran oil, kiri oil, jojoba oil, cocoa butter, coconut oil, horse oil, palm oil, palm kernel oil, beef tallow , Sheep oil, pork fat, lanolin, whale wax, beeswax, carnauba wax, molefish, candelilla wax, squalane, etc. and its hardened oil
(B) Synthetic triglycerin such as glycerin tripalmitate
(C) Mineral oil such as liquid paraffin and petrolatum.
Etc.
[0018]
Examples of higher fatty acids include lauric acid, myristic acid, palmitic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, stearic acid, behenic acid, 12-hydroxystearic acid, isostearic acid, undecinic acid, tallic acid, eicosapentaenoic acid, docosahexaenoic acid and so on. Examples of higher alcohols include lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, behenyl alcohol, myristyl alcohol, oleyl alcohol, cetostearyl alcohol, jojoba alcohol, lanolin alcohol, batyl alcohol, 2-decyltetrathececinol, cholesterol, phytosterol, and isostearyl. There is alcohol.
Synthetic esters include, for example, cetyl octanoate, octyldodecyl myristate, isopropyl myristate, myristyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, decyl orenate, dimethyl octanoate, cetyl lactate, lactic acid There is myristyl. Examples of silicone include linear polysiloxanes such as dimethylpolysiloxane and methylphenylpolysiloxane, cyclic polysiloxanes such as decamethylcyclopolysiloxane, and three-dimensional network structures such as silicone resins.
[0019]
Examples of humectants include glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, dipropylene glycol, polyethylene glycol, hexylene glycol, xylitol, sorbitol, maltitol, chondroitin sulfate, hyaluronic acid, mucoitin sulfate, atelocollagen, urea, In addition to sodium lactate, bile salts, dl pyrrolidone carboxylate, soluble collagen, etc., there are various animal and plant extracts, yeast extracts and the like.
[0020]
Examples of ultraviolet absorbers include benzoic acid ultraviolet absorbers such as paraaminobenzoic acid and paraaminobenzoic acid derivatives, anthranilic acid ultraviolet absorbers such as homomenthyl-N-acetylanthranilate, and salicylic acid ultraviolet absorbers such as amylsacylylate. Cinnamic acid UV absorbers such as octylcinnamate, benzophenone UV absorbers such as 2,4-dihydroxybenzophenone, 4-methylbenzylidene camphor, 3-benzylidene camphor, 2-phenyl-5-methylbenzoxazole, etc. is there.
[0021]
Examples of vitamins include vitamin A such as vitamin oil and retinol, vitamin B2 such as riboflavin, vitamin B6 such as pyridoxine hydrochloride, vitamin C such as L-ascorbic acid, and pantothenic acids such as calcium pantothenate. Vitamin D such as ergocalciphenol, nicotinic acid such as nicotinamide, vitamin E such as tocophenol acetate, vitamin P, biotin and the like.
[0022]
Examples of natural water-soluble polymers include gum arabic, tragacanth gum, galactan, guar gum, carob gum, caraya gum, carrageenan, pectin, agar, quince seed, algae colloid, starch, xanthan gum, dextran, succinoglucan, pullulan, collagen, casein. , Hyaluronic acid, albumin, gelatin and the like.
Examples of the semi-synthetic water-soluble polymer include cellulose polymers such as methyl cellulose, nitrocellulose and sodium carboxymethyl cellulose, starch polymers such as carboxymethyl starch, and alginic polymers such as sodium alginate.
Examples of the synthetic water-soluble polymer include vinyl polymers such as polyvinyl alcohol and carboxyvinyl polymer, polyoxyethylene polymers such as polyethylene glycol 2000, and copolymer polymers such as polyoxyethylene polyoxypropylene copolymer. Systems, acrylic polymers such as polyacrylamide, polyethyleneimine, and cationic polymers.
[0023]
Examples of the powder component include talc, kaolin, mica, sericite, magnesium carbonate, calcium carbonate, silicate, silica, barium sulfate, calcined gypsum, fluorapatite, ceramic powder and other inorganic powders, nylon powder, polyethylene powder, There are organic powders such as polystyrene powder and cellulose powder.
Examples of coloring agents include inorganic pigments such as titanium dioxide, iron oxide, carbon black, and cobalt violet, organic pigments such as red No. 201, red No. 3, yellow No. 205, and yellow No. 4, chlorophyll, riboflavin, β-carotene, etc. Natural pigments, plant extract pigments such as safflower and turmeric.
Examples of the preservative include benzoate, salicylate, sorbate, dehydroacetate, p-hydroxybenzoate, benzalkonium chloride, hinokitiol, resorcin, and ethanol.
Antioxidants include tocophenol, ascorbic acid, butylhydroxyanisole, dibutylhydroxytoluene, gallic acid esters and the like.
Examples of the chelating agent include sodium ethylenediaminetetraacetate, sodium polyphosphate, and citric acid.
[0024]
In addition, plant extracts having physiological activities such as antibacterial activity, cell activation, sebum secretion control, anti-inflammatory, astringent, antioxidant, whitening, active oxygen suppression, anti-allergy and the like, and these extract fractions and purified products may be used in combination. it can. In addition to the above, perfume, alcohol, water and the like can be appropriately blended.
[0025]
The skin external preparation composition of the present invention is not limited to general skin cosmetics, but includes pharmaceuticals, quasi drugs, medicinal cosmetics, and the like. The dosage form of the external preparation for skin according to the present invention may be any of solubilization system, emulsification system, powder dispersion system, etc., and the use is made up of basic cosmetics such as skin lotion, emulsion, cream, pack, etc., foundations, etc. Regardless of cosmetics, shampoos, rinses, soaps, body shampoos and other toiletries, bath preparations, etc.
[0026]
Next, although an example is given and explained, the present invention is not limited to these examples.
[0027]
(Production Example 1)
Add 3 kg of 30% 1,3-butylene glycol solution to 100 g of dried olive fruit, 100 g of dried olive leaves, and 10 g of dried olive branches, and extract at 40 ° C. for 8 hours. After extraction, the mixture is filtered, and the filtrate is allowed to stand at 5 ° C. for 5 days, followed by filtration to obtain Extract A, about 2.4 kg. The solid content of this extract was 1.1%.
[0028]
(Production Example 2)
50 kg of 50% ethanol solution was added to 1 kg of dried olive fruit pressed 1 kg, 2 kg of dried olive leaves and 200 g of olive branch to produce olive oil, and extracted at 50 ° C. for 10 hours. Thereafter, filtration is performed to obtain about 40 kg of an extract. The extract is concentrated under reduced pressure to about 2 kg at 30 ° C. or lower. The concentrated solution is freeze-dried with a freeze dryer and then pulverized to obtain about 450 g of an extract powder of Extract B.
[0029]
(Production Example 3)
10 g of 30 vol% ethanol solution is added to 100 g of dried olive fruit press cake, 500 g of dried olive leaves and 10 g of olive branches, extracted at room temperature for 10 days, and filtered to obtain about 8 kg of extract. The extract is concentrated to dryness under reduced pressure. To the dried product, 3.5 kg of 50% 1,3-butylene glycol is added and dissolved by heating, followed by filtration to obtain extract C. The solid content of this extract was 2.0%.
[0030]
(Production Example 4)
10 kg of water is added to 250 g of mature olive fruit, 250 g of dried olive leaves and 50 g of olive branch, extracted at 80 ° C. for 8 hours, cooled and filtered.
Concentrate the extract under reduced pressure to about 1 kg. The concentrate is packed at about 2 atm into a column in which a glass column having a diameter of 60 mm and a length of 1000 mm is filled with 2 L of a polymer adsorbent (Diaion HP-20, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) and replaced with water. After elution with 4 L of water, elution is further performed with 5 L of a 30% vol ethanol solution, and the eluates are combined and recovered. The recovered liquid is concentrated to about 500 g under reduced pressure. The concentrated solution is dried by a freeze dryer and pulverized to obtain about 80 g of extract D.
[0031]
(Test Example 1) Measurement of hyaluronidase activity inhibitory action
Hyaluronidase is a hydrolase of hyaluronic acid that is distributed in connective tissue, and is thought to play a role in inflammatory cell and blood vessel permeability by being activated during inflammation and destroying the connective tissue matrix. Yes. Also known as a pro-inflammatory enzyme, it is also inhibited by anti-inflammatory agents and anti-allergic agents. Therefore, the hyaluronidase activity inhibitory action is regarded as one of the antiallergic activities.
[0032]
(Test method)
The olive extract of the present invention was prepared by dissolving the lyophilized extract shown in Production Example 2 in purified water to a concentration of 0.5%.
Separately, a freeze-dried extract was produced using 3 kg of the compressed olive fruit squeezed in the same manner as in Production Example 2, and a test sample was prepared in the same manner as described above.
The dried olive leaves and olive branches were similarly produced and test samples were prepared.
As a positive control, cromoglycate sodium (manufactured by Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.) whose inhibitory activity was already known was used in the test. The test method was performed by applying the Morgan-Elson method.
[0033]
Add 0.1 mL of hyaluronidase (Sigma, Type IV-S, final enzyme activity of 400 NF unit / mL) to 0.2 mL of a solution obtained by diluting the sample with an appropriate amount of 0.1 M acetate buffer (adjusted to pH 4.0). After standing at 37 ° C. for 20 minutes, 0.2 mL of compound 48/80 (Sigma) acetate buffer solution (0.1 mg / mL) is added as an activator, and then left at 37 ° C. for 20 minutes. . To this, 0.5 mL of potassium hyaluronate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) solution (final concentration mg / mL) is added and left at 37 ° C. for 40 minutes. Next, after 0.2 mL of 0.4N sodium hydroxide solution was added on ice to stop the reaction, 50 mL of water was added to boric acid solution (4.95 g of boric acid, pH 9. with 1N sodium hydroxide solution). (1), then add water to make 100 mL), mix and heat in a boiling water bath for 3 minutes to inactivate the enzyme. Next, the mixture was cooled to room temperature on ice, and p-dimethylaminobenzaldehyde reagent (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 10 g of 10N hydrochloric acid solution 12.5 mL and acetic acid 87.5 mL were mixed and dissolved. 6 mL) is added and allowed to stand at 37 ° C. for 20 minutes, after which the absorbance is measured at 585 nm. It should be noted that 50% can be obtained by adjusting the concentration of the sample by adjusting the sample concentration by obtaining the inhibitory activity rate by the following formula using the sample solution containing acetate buffer instead of the sample solution as a control, and using each sample solution and control as a blank without enzyme. The inhibitory activity concentration (IC50) was determined.
Inhibition rate (%) = [1- (absorbance of sample solution−absorbance of sample solution blank) / (absorbance of control solution−absorbance of control solution blank)] × 100
[0034]
(Test results)
As shown in Table 1, it was confirmed that the olive extract of the present invention exhibited a higher activity inhibition than the single extract of fruits, leaves, and branches, and had a synergistic effect. Moreover, although the olive extract of the present invention had a lower inhibitory activity than that of known sodium cromoglycate, it was a result that a sufficient antiallergic action could be expected.
[0035]
[Table 1]

[0036]
(Test Example 2) β-hexosaminidase release inhibitory action from rat basophil leukemia (RBL-2H3) cells
RBL-2H3 cells are cells of an established cell line that can be passaged and have acquired infinite proliferation ability, and have high affinity IgE receptors on the cell membrane as well as mast cells in normal skin tissue and basophils in blood Is activated by cross-linking with an IgE antibody and an antigen, causing degranulation and releasing a chemical mediator such as β-hexosaminidase, serotonin, and histamine. Therefore, the β-hexosaminidase release inhibitory action from RBL-2H3 cells is considered as one of the indexes showing the possibility of antiallergic action.
[0037]
(Test method)
To the reaction mixture used in the test, 10 μL of the test sample used in Test Example 1, biotinylated mouse anti-DNP IgE antibody (3 μg / mL) and avidin (1 μg / mL) were added, and the release solvent (116.9 mM sodium chloride, 5 4 mM potassium chloride, 0.8 mM magnesium sulfate, 2.0 mM calcium chloride dihydrate, 5.6 mM D-glucose, 25 mm HEPES, 1 mg / mL BSE, pH 7.7) to a total volume of 1 mL.
[0038]
RBL-2H3 cells (5 × 10 5 cells / well) were mixed with RPMI-1640 (Gibco) culture medium containing 3% FCS (HyClone) in a 48-well plate well at 37 ° C. under 5% carbon dioxide for 24 hours. Incubate. After removing the culture solution, the wells are washed twice with 500 μL of the release solvent, 250 μL of the reaction mixture is added, and the mixture is reacted at 37 ° C. for 1 hour.
Thereafter, 100 μL of extracellular fluid is collected from the hole, and the remaining extracellular fluid is removed by suction.
Next, 250 μL of 0.2% Triton X-100 is added to the well, and after 10 minutes, 100 μL of cell lysate (intracellular fluid) is collected.
[0039]
The β-hexosaminidase activity was measured with 5 mM p-nitrophenyl-2-acetamido-2-deoxy-β- with 50 mM citrate buffer (pH 4.5) in the extracellular fluid (A) and intracellular fluid (B). 400 μL of a substrate solution made of D-glucopyranoside (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. As a reaction stop solution, 1 mL of 0.2 M glycine buffer (pH 10.7) is added, and the absorbance of the produced p-nitrophenol is measured at 405 nm. The release rate (net% release of control) of the reaction mixture containing no test sample was 45%, and the reaction mixture containing only the release solvent was 3.5%.
[0040]
The inhibition rate of β-hexosaminidase release is determined by the following formula.
Net% release of β-hexosaminidase = [A / (A + B)] x 100
Suppression rate (%) = 100 x (1-Net% release of sample / Net% release of control)
[0041]
(Test results)
As shown in Table 2, the olive extract of the present invention showed a high activity inhibition compared to the fruit, leaf and branch extract alone, and was confirmed to have a synergistic effect, and an antiallergic effect was expected. It was.
[0042]
[Table 2]

[0043]
(Test Example 3) Panel test-1
Targeting 30 women aged 20 to 39 years (average age 24.8 years) with mild atopic skin symptoms, anti-allergic skin topical composition shown in Table 3 twice a day (morning and evening) for 2 consecutive months Table 3 also shows the evaluation of the results of application and use on the face.
Evaluation was performed according to the following criteria.
Effective: Improved redness, itching and rough skin caused by inflammation
Slightly effective: improved redness, itching and rough skin caused by inflammation
Invalid: No change before use
[0044]
[Table 3]

[0045]
(Test Example 4) Panel test-2
Using the anti-allergic skin external composition used in Panel Test-1 for 50 healthy women aged 20 to 35 (average age 24.2 years), 3 times a day (morning and evening) 3 Table 4 shows the results of applying and using on the face for a month.
The sensory evaluation was made up of four items: moisture, texture, candy, sunburn spots and freckles.
[0046]
[Table 4]

[0047]
As is apparent from Table 4, the use of the anti-allergic skin external composition containing the olive extract and olive virgin oil of the present invention has an excellent effect on improving skin inflammation, and It was confirmed that it has a skin-improving effect and an effect of preventing stains and freckles due to ultraviolet rays.
[0048]
(Test Example 5) Skin safety test
The extract shown in Production Example 3 was used as a test solution.
The skin primary irritation test was conducted using 3 New Zealand white rabbits, and the skin primary irritation index was 0.0. In the continuous skin irritation test, Dunkin Hartley guinea pigs of 3 males and 3 females were continuously administered for 14 days. As a result, the maximum weekly average irritation index was 0.0, which was determined to be no irritation.
The eye irritation test was conducted on the eyes of three New Zealand white rabbits, and the maximum group average score was 0.0, which was determined to be non-irritating.
The skin sensitization test was carried out using white guinea pigs by the Adjuvant / Patch method with 10 test animals and 10 control animals, and it was confirmed that the expression rate was 0/10 and there was no sensitization.
The phototoxicity and photosensitization studies were performed using 5 female Dunkin Hartley guinea pigs and did not cause any signs of phototoxicity or photosensitization.
From these skin safety results, it is clear that the olive extract of the present invention is very safe in terms of skin safety.
[0049]
(Test Example 6) Patch test
Forty healthy volunteers consisting of 20 men and women from 20 to 51 years old (average age 26.3 years) were used.
As the test substance, the extract of Preparation Example 3 and the anti-allergic skin external composition A used in the panel test were used, and a 50% 1,3-butylene glycol solution and physiological saline were used as controls. The test was a 24 hour occlusion application test. Using a human body sticking test fin chamber (diameter 11 mm, Taisho Pharmaceutical Co., Ltd.), each 0.1 mL of the test substance was applied, and immediately applied to the back of the subject and left for 24 hours. Then, the fin chamber was removed 24 hours later, and the skin reaction was observed 30 minutes later and the next day (48 hours later) according to the criteria.
[0050]
Judgment criteria were in accordance with the judgment criteria of the Japanese Patch Test Study Group.
No reaction ... (-)
Slight erythema ... (±)
Evident erythema ... (+)
Erythema + swelling (...)
Erythema + swelling + papules or small blisters ... (++)
Large water bubbles ... (++++)
[0051]
The test results are shown in Table 5. There were no cases showing a positive reaction (+ or more).
In addition, the example which produced slight erythema (±) was almost the same frequency as the 50% 1,3-butylene glycol solution and the physiological saline example in each sample group. Therefore, it was judged that the skin irritation was low, and it became clear that there was no problem in terms of safety when blended into a topical skin preparation.
[0052]
[Table 5]

[0053]

[0054]
(Example 2) Latex
(Ingredient) (wt%)
(1) Olive oil 6.0%
(2) Plant-based squalane 2.0%
(3) Vitamin A oil 0.05%
(4) d-δ-tocophenol 0.1%
(5) Stearic acid 2.0%
(6) Behenyl alcohol 0.5%
(7) Polyoxyethylene phytosterol 0.6%
(8) Hydrogenated soybean phospholipid 0.5%
(9) Adsorption purified lanolin 1.0%
(10) Paraoxybenzoic acid ester 0.4%
(11) Olive extract of Production Example 3 5.0%
(12) 1,3-butylene glycol 11.0%
(13) Carboxyvinyl polymer 6.0%
(14) Aluminum magnesium silicate 1.5%
(15) Hyaluronic acid FCH aqueous solution 1.0%
(16) Dipotassium glycyrrhizinate 0.05%
(17) Placenta extract 0.5%
(18) Evercel White 0.5%
(19) Aloe juice 0.5%
(20) Potassium hydroxide 0.07%
(21) Purified water 60.3%
[0055]
(Example 3) Lotion
(Ingredient) (wt%)
(1) 1,3-butylene glycol 10.0%
(2) dl-Pyrrolidonecarboxylate sodium solution 3.0%
(3) Olive extract of Production Example 1 5.0%
(4) Sorbitol-fermenting polysaccharide 1.0%
(5) Trehalose solution 1.0%
(6) L-serine 0.15%
(7) Dipotassium glycyrrhizinate 0.05%
(8) Allantoin 0.02%
(9) Sodium citrate 0.1%
(10) Citric acid 0.03%
(11) Paraoxybenzoic acid ester 0.12%
(12) 79.53% purified water
[0056]
(Example 4) Soap
(Ingredient) (wt%)
(1) Soap base 53.2%
(2) Scroll 19.4%
(3) 0.25% olive oil
(4) Olive extract of Production Example 1 5.0%
(5) Reduced honey solution 0.25%
(6) Concentrated glycerin 6.5%
(7) Hydroxyethane diphosphonic acid 0.15%
(8) Ordinary water 15.25%
[0057]
(Example 5) Cleansing gel
(Ingredient) (wt%)
(1) Hexaglyceryl monomyristate 20.0%
(2) Liquid paraffin 54.7%
(3) Olive oil 5.0%
(4) Paraoxybenzoic acid ester 0.3%
(5) 0.1% olive extract of Production Example 2
(6) Concentrated glycerin 5.9%
(7) Sorbitol 5.0%
(8) Fragrance 0.1%
(9) Purified water 8.9%
[0058]
(Example 6) Packing agent
(Ingredient) (wt%)
(1) Polyvinyl alcohol 20.0%
(2) Glycerin 5.0%
(3) Kaolin 6.0%
(4) 0.05% olive extract from Production Example 4
(5) Benzalkonium chloride 20.0%
(6) Ethanol 20.0%
(7) Paraoxybenzoic acid ester 0.2%
(8) Fragrance 0.1%
(9) Purified water 27.7%
[0059]
(Example 7) Shampoo
(Ingredient) (wt%)
(1) N-coconut oil fatty acid glutamic acid triethanolamine 25.0%
(2) Lauric acid diethanolamide 5.0%
(3) Potassium myristate 5.0%
(4) Ethylene glycol distearate 2.0%
(5) Polyethylene glycol 400 15.0%
(6) 1.0% olive oil
(7) 3.0% olive extract from Production Example 1
(8) Chloroxylenol 0.1%
(9) Vitamin E 0.1%
(10) Paraoxybenzoic acid ester 0.2%
(11) Fragrance 0.3%
(12) 43.3% purified water
[0060]
(Example 8) Bath agent
(Ingredient) (wt%)
(1) Dry sodium sulfate 40.0%
(2) Sodium bicarbonate 57.5%
(3) Olive oil 0.2%
(4) Olive extract of Example 2 0.1%
(5) Light anhydrous silicic acid 0.3%
(6) Fragrance 1.7%
(7) Yellow No. 202 (1) 0.2%
[0061]
【The invention's effect】
As described above in detail, the olive extract, which is an essential component of the present invention, has an excellent hyaluronidase activity inhibitory action and β-hexosaminidase release inhibitory action, is excellent in safety, and contains an external composition for skin. Improves redness and itching associated with inflammation and rough skin.
Furthermore, these effects are exhibited as a greater effect by using the olive extract of the present invention and olive virgin oil in combination, and are excellent in safety.

Claims

An antiallergic skin external composition comprising an olive extract extracted from a mixture of olive fruits and leaves and branches with an ethanol solvent.

An anti-allergic skin external composition comprising the olive extract of claim 1 and olive oil.