JP4526971B2 - フィブュリン−5を指標とした皮膚老化状態の評価方法 - Google Patents
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Description
(1)被験体の皮膚の老化状態を評価するための皮膚検査方法であって、検査すべき皮膚中のフィブュリン−5の発現量が対照皮膚中の発現に比べて有意に低下している場合、皮膚の老化状態が進行しているものと判断することを特徴とする、皮膚検査方法。
(2)前記皮膚の老化が自然老化及び/又は紫外線B波(UVB)に対する暴露に起因する、(1)の皮膚検査方法。
(3)前記フィブュリン−5の発現量の測定を、検査すべき皮膚中のフィブュリン−5の量を測定することにより実施する、(1)又は(2)の皮膚検査方法。
(4)前記フィブュリン−5の量を、フィブュリン−5に特異的な抗体を使用するイムノアッセイにより測定する、(3)の皮膚検査方法。
(5)前記抗体がポリクローナル抗体である、(4)の皮膚検査方法。
(6)前記フィブュリン−5の発現量の測定を、皮膚から抽出されたフィブュリン−5をコードするmRNAの量を測定することにより決定される、(1)又は(2)の皮膚検査方法。
(7)前記mRNAの測定をポリメラーゼ連鎖反応法により行う、(6)の皮膚検査方法。
(8)前記ポリメラーゼ連鎖反応法がリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応法である、(7)の皮膚検査方法。
本発明は、皮膚の老化状態を評価するための方法を提供する。この方法は、検査すべき皮膚中のフィブュリン−5の発現量を測定し、その発現量を対照皮膚中の発現量と比較し、検査すべき皮膚中のフィブュリン−5の発現量が対照皮膚中の発現量に比べて有意に亢進している場合、皮膚の老化状態が進行しているものと判断することを特徴とする。皮膚老化の進行状況が早期に発見できれば、早期処置を施すことで皮膚老化の進行を未然に防ぐことができ、有利である。皮膚の老化状態のその評価基準として、例えば皮膚細胞中のフィブュリン−5の発現が対照皮膚細胞中のそれらと比べ10%以上、又は20%以上、又は30%以上、又は50%以上、又は70%以上、又は100%以上減少していたなら「皮膚の老化状態が進行している」と判断してよい。
被験者
すべての研究は、聖マリアンナ医大と資生堂の倫理委員会によって承認された。聖マリアンナ医大病院のすべての被験者から書面によるインフォームド・コンセントが提出された。男性1名、女性4名が大腿部の皮膚サンプルを提供し、男性2名、女性2名が上腕部の皮膚サンプルを提供し、男性1名、女性2名が頬の皮膚を提供した(年齢の幅は、5歳〜76歳)。サンプルは、形成外科手術の間に切り取った余剰皮膚から調製した。UVBを1回照射する研究を行うため、健康な2人の男性ボランティアから書面によるインフォームド・コンセントが提出された。対照となる日光を浴びていない皮膚からと、2MEDのUVBを照射した2日後の臀部の皮膚から、パンチ生検サンプル(3mm)を採取した。
エラスチン、フィブリリン−1、フィブュリン−2に対するモノクローナル抗体の特性は以前に明らかにされている(Charbonneau, N.L., 2003(前掲);Reinhardt, D.P. et al., 1996(前掲))。Markova, D.Y. et al., Am. J. Hum. Genet. 72:98-1004, 2003;Pan, T.C. et al, 1993(前掲))に記載されているようにして、pCEP-Puベクターを用いて293-EBNA細胞の中で発現させた組み換えフィブュリン−2とフィブュリン−5からウサギの抗血清を得た。
AMeX法(Sato, Y. et al, Am. J. Pathol. 125:431-435, 1986)に従い、皮膚の断片と生検サンプルを冷たいアセトンを用いて固定し、パラフィンに包埋した。キシレンを用いて厚さ3μmの切片からパラフィンを除き、再度水和させ、3%過酸化水素を用いて15分間にわたって予備処理し、内在性ペルオキシダーゼの活性を停止させた。標準的な10%ウサギ血清(ヒストファイン社、東京、日本国)を用いて非特異的結合を阻止し、サンプルを室温にて30分間にわたってインキュベートした。一次モノクローナル抗体を添加し、4℃にて一晩にわたってインキュベートし、次いで切片をEnVision(DAKO社、カーピンテリア、カリフォルニア州)とともにインキュベートした後、DAKO社の液体DAB+をベースとした色素原で染色し、ヘマトキシリンを用いて細胞核を染色した。
日光から保護された若いヒトの真皮におけるフィブュリン−5の存在状態
図1に、若い人の日光から保護された皮膚の真皮におけるエラスチン、フィブュリン−5、フィブリリン−1、フィブュリン−2の存在状態を示す。17歳の女性の日光から保護された上腕部の皮膚におけるエラスチン(aとe)、フィブュリン−5(bとf)、フィブリリン−1(cとg)、フィブュリン−2(dとh)の存在状態を、「材料と方法」に記載した特異的抗体を用いた免疫組織化学的手段によって調べた。
17歳の女性の日光から保護された上腕部から採取した皮膚の真皮網状層には、フィブュリン−5だけでなく、他の弾力線維要素(例えばエラスチン、フィブュリン−2、フィブリリン−1)も存在していた(図1a〜図1d)。フィブュリン−2は、フィブリリン−1とは異なり、子どもの皮膚と成人の皮膚のどちらにも検出されなかった(データは省略)。真皮乳頭層では、フィブュリン−5は、他の弾力線維要素の構造と似た、表皮に垂直な枝付き燭台様構造であった(図1e〜図1h)。しかし、表皮直下の領域を見ると、フィブュリン−5とエラスチンは存在していなかった(図1eと図1f)が、フィブリリン−1がその位置に繊維構造として観察された(図1g)。このフィブリリン−1は、表皮基底膜に挿入された可能性がある。真皮乳頭層におけるフィブュリン−2の繊維構造(図1h)は、エラスチン、フィブリリン−1、フィブュリン−5の繊維構造(図1e〜図1g)ほど明確ではなかったが、真皮網状層におけるフィブュリン−2の繊維構造(図1d)は、エラスチン、フィブリリン−1、フィブュリン−5の繊維構造(図1a〜図1c)よりも明確であった。
図2に、日光から保護された皮膚の真皮におけるエラスチン、フィブュリン−5、フィブリリン−1、フィブュリン−2の発現の年齢変化を示す。日光から保護された大腿部の真皮におけるエラスチン(a、e、i、m、q)、フィブュリン−5(b、f、j、n、r)、フィブリリン−1(c、g、k、o、s)、フィブュリン−2(d、h、l、p、t)の存在状態を、「材料と方法」に記載した特異的抗体を用いた免疫組織化学的手段によって調べた。年齢が5歳〜75歳の被験者から採取した皮膚の真皮において弾力線維要素の年齢変化を調べた。
5歳、13歳、16歳の被験者の日光から保護された大腿部から採取した真皮では、フィブュリン−5は、真皮乳頭層では枝付き燭台様構造を示し、真皮網状層では、他の弾力線維要素(例えばエラスチン、フィブュリン−2、フィブリリン−1)からなる弾力線維と結合していた(図2a〜図2l)。しかし34歳の被験者から採取した皮膚の真皮網状層におけるフィブュリン−5の染色強度(図2n)は、他の弾力線維要素の染色強度(図2m、図2o、図2p)と比べて低くなっていた。フィブュリン−5(図2r)は、75歳の女性から採取した皮膚の真皮網状層にはほとんど存在していなかった。同様に、弾力線維と結合したフィブュリン−5は、36歳の被験者の日光から保護された上腕部の皮膚の真皮網状層において、11歳、17歳、24歳の被験者から採取した真皮網状層におけるよりも少なかった(データは省略)。さらに、弾力線維と結合したフィブュリン−5は、34歳と75歳の被験者の腹部から採取した皮膚の真皮網状層において、フィブリリン−1およびフィブュリン−2よりも顕著に少なかった(データは省略)。それに対して真皮乳頭層では、フィブュリン−5は染色強度を維持していたが、染色された線維の数は加齢とともに減少しているように見えた(図2nと図2r)。またエラスチンは、年齢に依存した減少が、真皮網状層よりも真皮乳頭層においてはるかに大きかった(図2q)。
日光を浴びた皮膚では、20歳と45歳の被験者でさえ、フィブュリン−5が頬の皮膚の真皮でほとんど失われていた(図3bと図3f)。この変化は、日光から保護された皮膚(図2)よりもはるかに早く起こった。45歳の皮膚の真皮における弾力線維構造(図3e、図3g、図3h)は、20歳の皮膚の真皮における弾力線維構造(図3a、図3c、図3d)よりもはるかに広がって緩んでいるように見えた。これは、76歳の被験者の真皮で観察された弾力線維(図3i〜図3l)と似ているため、45歳の皮膚で日光弾力線維症が進行している可能性のあることを示唆している。興味深いことに、日光弾力線維症においてフィブュリン−5の堆積が増えていることが、他の弾力線維要素の場合と同様に観察された(図3j)。しかし日光を浴びた皮膚ではフィブュリン−5が加齢とともに減少するため、日光弾力線維症になることはなかった(図3bと図3f)。
図4には、UVB照射後の真皮におけるフィブュリン−5の減少を示す。臀部の皮膚の真皮におけるエラスチン(a、b、g、h)、フィブュリン−5(c、d、i、j)、フィブリリン−1(e、f、k、l)の存在状態を、「材料と方法」に記載した特異的抗体を用いた免疫組織化学的手段により、処理していない部位(a〜f)とUVBを照射した部位(g〜l)で比較した。
真皮のフィブュリン−5は、日光から保護された皮膚よりも日光を浴びた皮膚で早く減少したため、ボランティアの2人の男性から採取した臀部の皮膚においてUVB照射がフィブュリン−5の分布に及ぼす効果を調べた。2MEDのUVBを1回照射すると、真皮において、対照である照射していない皮膚(図4aから図4f)と比較して、フィブュリン−5(図4iと図4j)のレベルは顕著に低下し、フィブュリン−2(図4kと図4l)のレベルは中程度低下し、エラスチン(図4gと図4h)のレベルはわずかに低下した。
本発明者は、この研究を通じ、真皮網状層においてフィブュリン−5の含有量が加齢とともに減少し、しかもその減少速度は、他の弾力線維要素(例えばエラスチン、フィブュリン−2、フィブリリン−1)よりも大きいことを明らかにした。フィブュリン−5の減少は、UVBを照射することによって大きくなり、しかも日光から保護された皮膚よりも日光を浴びた皮膚のほうではるかに早く起こった。したがってUVBは、老化していく間に弾力線維の損傷を引き起こす主要な因子の1つであるであるように思われる。また、フィブュリン−5が早く失われるのは、老化していく間の弾力線維の変化、特に光加齢による弾力線維の変化に関係している可能性がある。
Claims (8)
- 被験体の皮膚の光加齢状態を評価するための皮膚検査方法であって、検査すべき皮膚中のフィブュリン−5の発現量が対照皮膚中の発現に比べて有意に低下している場合、皮膚の光加齢状態が進行しているものと判断することを特徴とする、皮膚検査方法。
- 前記皮膚の光加齢が紫外線B波(UVB)に対する暴露に起因する、請求項1記載の皮膚検査方法。
- 前記フィブュリン−5の発現量の測定を、検査すべき皮膚中のフィブュリン−5の量を測定することにより実施する、請求項1又は2記載の皮膚検査方法。
- 前記フィブュリン−5の量を、フィブュリン−5に特異的な抗体を使用するイムノアッセイにより測定する、請求項3記載の皮膚検査方法。
- 前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項4記載の皮膚検査方法。
- 前記フィブュリン−5の発現量の測定を、皮膚から抽出されたフィブュリン−5をコードするmRNAの量を測定することにより決定される、請求項1又は2記載の皮膚検査方法。
- 前記mRNAの測定をポリメラーゼ連鎖反応法により行う、請求項6記載の皮膚検査方法。
- 前記ポリメラーゼ連鎖反応法がリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応法である、請求項7記載の皮膚検査方法。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002511240A (ja) * | 1998-04-15 | 2002-04-16 | ライフスパン バイオサイエンシーズ, インコーポレイテッド | 薬物に関連した核酸配列およびタンパク質 |
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JP2002511240A (ja) * | 1998-04-15 | 2002-04-16 | ライフスパン バイオサイエンシーズ, インコーポレイテッド | 薬物に関連した核酸配列およびタンパク質 |
JP2004279334A (ja) * | 2003-03-18 | 2004-10-07 | St Marianna Univ School Of Medicine | 変形性関節症の検定方法 |
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