JP4487049B2 - 表面プラズモン共鳴法による免疫測定 - Google Patents
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度)など極めて低濃度でのみ存在する重要なペプチド類があり、これまで汎用的に用いられてきた酵素イムノアッセイ法を用いてこれら極低濃度ペプチドを定量することは感度的に困難である。サンドイッチイムノアッセイ法では、前述の酵素イムノアッセイ法にくらべ、高感度測定が可能であることが知られている。しかしながら、測定対象分子が小さい場合、二次抗体と結合し難く、応用範囲は限られていた。一方、ラジオイムノアッセイ法は極めて高感度な定量が可能であるものの、放射性同位元素を用いるため安全性に問題があり、ベッドサイド或いは在宅での測定は困難であった。このため、例えば心疾患患者などの一刻を争う臨床現場においては、心疾患のマーカー分子をベッドサイドなどで迅速に測定する新規な手法が必要とされている。
(1)試料中の測定対象分子を定量する方法であって、測定対象分子に対する抗体とコリンエステラーゼとが結合した酵素標識抗体を試料と混合して抗原抗体反応を生じさせた後、測定対象分子と結合した酵素標識抗体又は結合していない酵素標識抗体のコリンエステ
ラーゼ活性を表面プラズモン共鳴法を用いて測定することを含む前記方法。
(2)コリンエステラーゼ活性の測定を、コリンエステラーゼ活性によりアシルチオコリンからチオコリンを生成させ、チオコリンを金属膜表面上に吸着させ、表面プラズモン共鳴法により吸着量又は吸着速度を検出することにより行う(1)に記載の方法。
(3)アシルチオコリンがアセチルチオコリンである(2)に記載の方法。
(4)金属膜に負電位が印加されている(2)又は(3)に記載の方法。
(5)前記負電位が銀塩化銀参照電極に対して−0.3〜−0.8Vである(4)に記載の方法。
(6)測定対象分子が脳性ナトリウム利尿ペプチドである(1)〜(5)の何れかに記載の方法。
(7)コリンエステラーゼがアセチルチオコリンエステラーゼ(EC 3.1.1.7)である(1)〜(6)の何れかに記載の方法。
以下に、本発明に係る測定方法を順を追って説明する。
活性、或いは該基材に結合していない標識抗体のコリンエステラーゼ活性を測定できる。
らに銀薄膜を100nm堆積させることにより形成した。上記金属膜を備えたガラス基板をマッチングオイルを介してSPR装置に取り付けた。その後、5mMのアセチルチオコリンを含む0.1Mのリン酸緩衝溶液(pH8)を50μL滴下し、SPR角を観察した。安定したSPR角を得た後、前述した、酵素反応によりチオコリンを含む溶液50μLを加えることにより、徐々にSPR角が大きくなる様子を観測することができた。これは、溶液中に含まれるチオコリンが徐々に銀薄膜表面に吸着されていく様子を示している。
Claims (7)
- 試料中の測定対象分子を定量する方法であって、測定対象分子に対する抗体とコリンエステラーゼとが結合した酵素標識抗体を試料と混合して抗原抗体反応を生じさせた後、測定対象分子と結合した酵素標識抗体又は結合していない酵素標識抗体のコリンエステラーゼ活性を、コリンエステラーゼ活性によりアシルチオコリンからチオコリンを生成させ、チオコリンを、銀塩化銀参照電極に対する電位が−0.3〜−0.8Vに保持されるように印加された金属薄膜基板表面上に吸着させ、表面プラズモン共鳴法により吸着速度を検出することにより、測定することを含む前記方法。
- コリンエステラーゼ活性によりアシルチオコリンからチオコリンを生成させる反応を行いながら、当該反応で生成したチオコリンの前記金属薄膜基板表面上への吸着速度を表面プラズモン共鳴法により検出することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記金属薄膜基板が、銀薄膜基板であることを特徴とする、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記金属薄膜の厚さが200nm以下である請求項1〜3の何れか1項に記載の方法。
- アシルチオコリンがアセチルチオコリンである請求項1〜4の何れか1項に記載の方法。
- 測定対象分子が脳性ナトリウム利尿ペプチドである請求項1〜5の何れか1項に記載の方法。
- コリンエステラーゼがアセチルチオコリンエステラーゼ(EC 3.1.1.7)である請求項1〜6の何れか1項に記載の方法。
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