JP4446678B2

JP4446678B2 - Antibacterial agent

Info

Publication number: JP4446678B2
Application number: JP2003129932A
Authority: JP
Inventors: 達郎山村; 秀信奥村; ます美高宮
Original assignee: Noevir Co Ltd
Current assignee: Noevir Co Ltd
Priority date: 2003-05-08
Filing date: 2003-05-08
Publication date: 2010-04-07
Anticipated expiration: 2023-05-08
Also published as: JP2004331577A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、優れた効果を発揮する抗菌剤に関する。さらに詳しくは、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とし、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、及び腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）に効果を発揮する抗菌剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
医薬品，化粧品，食品，飲料などの製品に関する微生物汚染の防止や細菌が惹き起こす疾患の予防・改善、あるいは日常の衛生を目的としてこれまでにも様々な抗菌剤が用いられている。これまでに医薬品，食品，化粧品などの微生物汚染の防止を目的に用いられている従来の抗菌剤としては、パラオキシ安息香酸誘導体などの安息香酸関連物質、ソルビン酸及びその塩、フェノキシエタノールなどのフェノール類、デヒドロ酢酸などが挙げられる。また、細菌が惹き起こす疾患の予防・改善のために用いられている従来の抗菌剤としては、大腸菌に対する抗菌剤であるホタテ貝の貝殻粉末（特許文献１参照），ブドウ球菌に対する抗菌剤であるマンネンタケの子実体傘部の抽出物（特許文献２参照），腋臭菌に対する抗菌剤であるショ糖エステル（特許文献３参照）などが知られている。
【０００３】
しかし、これらの抗菌剤は、抗菌スペクトルが狭いために特定菌に対してのみにしか抗菌作用を奏しない場合や安全性の面で問題があるため使用量が制限される場合も多く、優れた抗菌力を有するとともに人体に対する安全性の高い抗菌剤の開発が望まれていた。
【０００４】
一方、本発明に係るα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールは、既知の物質であり、低褐変性、低メイラード反応性、加熱安定性、非う食性、難消化性、高い保湿性を有し、食品、化成品、医薬品に利用できることが報告されている（特許文献４参照）。しかし、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの種々の細菌に対する抗菌作用に関してはこれまで全く知られていなかった。
【０００５】
【特許文献１】
特開２００１−１９９８２３号公報
【特許文献２】
特開平６−１１６１６２号公報
【特許文献３】
特開２００２−２５５７５５号公報
【特許文献４】
特開平１１−２２２４９６号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
医薬品，化粧品，食品などの製品の製造において微生物汚染を防止するために使用される抗菌剤は、安全性面で問題があるために使用量が制限される場合や抗菌スペクトルが狭いために製品に予期せぬ微生物汚染を起こしてしまう場合などがあり、より安全で広い抗菌スペクトルを有する抗菌剤の開発が望まれている。また、現代においては、黄色ブドウ球菌が関連するアトピー性皮膚炎などの細菌の惹き起こす疾患だけではなく、病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）による食中毒なども深刻な問題となっており、日常衛生に対しての人々の関心は非常に高く、優れた抗菌作用を発揮するだけではなく、優れた安全性も有する抗菌剤の開発が望まれている。本発明は、このような事情に鑑みてなされたものである。したがって、本発明の目的は、安全性に優れ、様々な細菌に対して優れた効果を発揮する抗菌剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、優れた効果を発揮する抗菌剤を見出すために、種々の物質について抗菌作用に関する検討を行った。その結果、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールが大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、及び腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）に対して、優れた抗菌作用を発揮することを見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とする抗菌剤に関するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられるα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールには、（２Ｒ）−１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化１），（２Ｓ）−１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化２），２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化３）の３成分が知られており、これらの１種又は２種以上の混合物を用いることができる。
【００１０】
【化１】

【００１１】
【化２】

【００１２】
【化３】

【００１３】
α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを得る方法としては、カビ類のα−グルコシダーゼをグリセロール溶液中で糖類の基質に作用させる方法、清酒，味噌，みりん等の醸造物から抽出，精製する方法、イソマルトース，マルチトールなどを四酢酸鉛や過ヨウ素酸塩でグリコール開裂したものを還元する方法、あるいはＫｏｅｎｉｇｓ−Ｋｎｏｒｒ反応により合成したβ−グルコシドをアノメリゼーションした後、β−グルコシダーゼでβ−グルコシドを加水分解する方法などが挙げられるが、カビ類のα−グルコシダーゼをグリセロール溶液中で糖類の基質に作用させる方法が最も効率が良く特に好ましい。
【００１４】
α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールは、そのままでも使用することができるが、水や極性溶媒に希釈したり、変性や分解のない範囲で脱色，脱臭の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１５】
本発明に係るα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とする抗菌剤は、様々な有害細菌に対して使用することが出来るが、特に大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、及び腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）に対して高い抗菌作用を示す。
【００１６】
α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とする抗菌剤は、製品の微生物汚染を防止する目的で、医薬品，食品，化粧品，洗浄料，香料，抗菌シートなどの様々な組成物に配合することができ、既存の防腐剤の低減を図るために既存の防腐剤と併用することも可能である。
【００１７】
また、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とする抗菌剤は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、及び腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）の惹き起こす様々な疾患や感染症の予防・改善を目的に使用することが出来る。
【００１８】
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）は、外毒素を産生し、食中毒をはじめとする様々な疾患を起こすことが知られている。黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）は、エンテロトキシン（腸管毒素）、溶血毒素、コアグラーゼ（血漿を凝固させる酵素）、表皮剥脱毒素、毒素性ショック症候群毒素など様々な外毒素や酵素を産生し、これらの様々な毒素や酵素の産生と密接に関係し、多彩な感染症を惹き起こす。広く知られている感染症は、皮膚の癰や膿痂疹、蜂巣織炎、毛嚢炎、結膜炎、乳房炎、肺炎などの化膿性炎症や、耐熱性エンテロトキシンによる毒素型食中毒、表皮剥脱毒素によるブドウ球菌性皮膚剥脱症候群、毒素性ショック症候群などがある。近年はメチシリンという化学療法剤に抵抗性のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）による院内感染が特に規模の大きな大学病院などで発生している。このＭＲＳＡはメチシリン以外の多くの化学療法剤にも抵抗性で、更に、ＭＲＳＡに有効であったバンコマイシンに対しても抵抗性を示す細菌（バンコマイシン抵抗性黄色ブドウ球菌；ＶＲＳＡ）も増加してきて、ますます治療が困難になっている。また、この菌の産生する外毒素にはスーパー抗原活性があり、アトピー性皮膚炎など多様な病変の原因となっていることが最近明らかとなっている。緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は、病原性はさほど強くないが、自己免疫力の低下などにより繁殖すると、皮膚の化膿、尿路感染症、肺炎などの呼吸器感染症、目の感染や敗血症などを惹き起こす。腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）は、消毒液の汚染菌として広く知られ、皮膚疾患、食中毒、腋臭などの原因となる。腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）や表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）は、皮膚上に存在する菌（常在菌）で、汗成分を分解・変質させることにより、低級脂肪酸等を生成し、腋臭といわれる不快臭を発生する原因菌として知られている。
【００１９】
α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とする抗菌剤は、単独でも使用することが出来るが、抗菌成分として種々の組成物に配合することにより、抗菌作用を有する抗菌用組成物を得ることが出来る。得られた抗菌作用を有する組成物は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、及び腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）に対して優れた抗菌作用を示し、これらの細菌の惹き起こす様々な疾患や感染症の予防・改善を目的に使用することが出来る。
【００２０】
本発明におけるα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを有効成分とする抗菌剤の種々の組成物への配合量は、組成物の種類や目的等によって調整することができるが、抗菌剤としての効果や使用性などの点から、組成物の全量に対して１重量％以上が好ましく、より好ましくは５重量％以上であり、最も好ましくは１２．５重量％以上である。
【００２１】
α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを配合する組成物の剤型は任意であるが、皮膚外用剤，洗浄剤，浴用剤などの場合には、ローションなどの可溶化系、乳液などの乳化系，カラミンローションなどの分散系，噴射剤と共に充填したエアゾール，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型として提供することができる。また、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを配合する組成物が経口用医薬品や食品の場合には、ドリンク剤・清涼飲料水・うがい液などの液剤，ガム・飴のような固形剤，カプセル，粉末，顆粒，錠剤などの一般的な剤型とすることができる。さらに、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを繊維シートに含有させ、シート状抗菌組成物として提供することも可能である。
【００２２】
α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを配合する組成物には、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの他に、必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，毛髪用化粧料，浴用剤，洗浄剤，食品などに配合される、油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，アルコール類，栄養強化物質，調味料などを適宜配合することができ、さらに他の抗菌剤や防腐剤との併用も可能である。
【００２３】
【実施例】
さらに実施例により、本発明の特徴について詳細に説明する。まず、本発明のα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの製造例を示す。
【００２４】
［製造例１］
マルトース５％，グリセロール３５％の水溶液１０００ｍＬに、０．１２５Ｕ／ｍＬ（１Ｕ：ｐＨ５．０，３７℃，５ｍＭｐ-ＮＰＧから１分間に１μｍｏｌのｐ−ＮＰを遊離する酵素量）のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ由来の酵素であるα−グルコシダーゼ（トランスグルコシダーゼＬ−アマノ，天野エンザイム製）を加え、４０℃，反応ｐＨ５．０の条件で２４時間反応させ、その後マルトースを１０回連続的に添加・反応させ、反応液を得た。得られた反応液を活性炭クロマトグラフィーにより精製し、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを得た。得られたα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールをＧＣ−ＭＳ分析により確認すると、（２Ｒ）−１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化１），（２Ｓ）−１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化２），２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化３）の３成分の混合物であった。
【００２５】
［製造例２］
清酒１０００ｍＬをＳｈｉｍ−ｐａｃｋＳＣＲ−１０１（Ｎ）（７．９×３００ｍｍ）カラム（カラム温度；５０℃，溶離液；水，流速；０．６ｍＬ／ｍｉｎ）により分画し、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを得た。得られたα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールをＧＣ−ＭＳ分析により確認すると、（２Ｒ）−１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化１），（２Ｓ）−１−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化２），２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化３）の３成分の混合物であった。
【００２６】
［製造例３］
１ｍＬの４％マルチトール水溶液に１０ｍＬの２％の過ヨウ素酸を添加し、室温にて４分間反応させた。反応終了後、塩化バリウムを添加し、生じた過ヨウ素酸バリウムの沈殿をろ別、除去した。さらに、イオン交換カラムで脱塩後、水素化ホウ素酸ナトリウムで還元し、活性炭クロマトグラフィーとＨＰＬＣにより分画精製し、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロール（化３）を得た。
【００２７】
［試験１：大腸菌，黄色ブドウ球菌，緑膿菌，腐敗菌，表皮ブドウ球菌を用いた抗菌作用の評価］
次に、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの大腸菌，黄色ブドウ球菌，緑膿菌，腐敗菌，表皮ブドウ球菌に対する抗菌作用を評価した試験について示す。試料には、製造例１にて調製したα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを用いた。評価は、次の手順で行った。任意の濃度に希釈した試料０．５ｍＬに対して、６.４×１０⁵個となるように調整しておいた大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、及び表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）の５菌種それぞれを接種し、３７℃で２４時間若しくは４８時間暴露した。暴露後にサンプリングを行い、ＳＣＤＬＰ寒天培地（日本製薬製）入りシャーレに塗末した。３７℃で４８時間培養後、菌数のカウントを行った。また、対象試験として、試料をグルコースに変え、同様の試験を行った。それぞれについてカウントした生菌数の結果を表１〜５に示す。なお、表中の「＜」は、暴露した菌数よりも増加していた場合を示している（以下の表中の記載についても同様である）。
【００２８】
【表１】

【００２９】
【表２】

【００３０】
【表３】

【００３１】
【表４】

【００３２】
【表５】

【００３３】
表１〜５より、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールに暴露した場合には、すべての菌種において菌数の減少が明らかに認められ、特に１２．５％，４８時間暴露した場合，２５％，５０％それぞれに２４時間，４８時間暴露したすべての場合において、完全に菌の死滅が確認された。これに対し、グルコースに暴露した場合には、すべての菌種において全く菌数の減少が認められず、接種菌数よりも増殖が進んでいることが分かった。このことから、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールは、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、腐敗菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）、及び表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）に対し、優れた抗菌性を発揮することが明らかとなった。
【００３４】
［試験２：腋臭菌を用いた抗菌作用の評価］
次に、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの腋臭菌に対する抗菌作用を評価した試験について示す。試料には、製造例１にて調製したα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを用いた。評価は、次の手順で行った。任意の濃度に希釈した試料１．０ｍＬに対して、２．９×１０⁶個に調整した腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）を接種し、３７℃で２４時間若しくは４８時間暴露した。暴露後にサンプリングを行い、ＳＣＤＬＰ寒天培地（日本製薬製）入りシャーレに塗末した。３７℃で４８時間培養後、菌数のカウントを行った。それぞれについてカウントした生菌数の結果を表６に示す。
【００３５】
【表６】

【００３６】
表６より、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールに暴露した場合には、腋臭菌の菌数の減少が明らかに認められた。これに対し、グルコースに暴露した場合には、全く菌数の減少が認められず、接種菌数よりも増殖が進んでいることが分かった。このことから、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールは、腋臭菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）に対し、優れた抗菌性を発揮することが明らかとなった。
【００３７】
［試験３：α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの皮膚刺激性の評価］
次に、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの皮膚刺激性について評価した試験について示す。試料には、製造例１にて調製したα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを用いた。評価は、次の手順で行った。フィンチャンバー（ＥＰＩＴＥＳＴＬｔｄ．製）にα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールの５０重量％水溶液を３０μＬ塗布し、被験者２０名の背部に２４時間閉塞貼付を行った。貼付して２４時間後にフィンチャンバーを除去し、試料貼付部位を７０％エタノール含浸脱脂綿で払拭した。貼付２５時間後（検体除去から１時間後）及び４８時間後（検体除去２４時間後）にそれぞれ皮膚の状態を観察して判定を行った。判定は表７の基準に準じて行った。評価結果を表８に示す。
【００３８】
【表７】

【００３９】
【表８】

【００４０】
表８より、すべての被験者において、紅斑や浮腫といった皮膚反応は全く認められず、α−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールは皮膚刺激性がなく、安全性に非常に優れていることが明らかとなった。
【００４１】
続いて、本発明に係るα−Ｄ−グルコピラノシルグリセロールを配合した抗菌用組成物の処方例を示す。
【００４２】
［処方例１］抗菌ローション
（１）エタノール５．０（重量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油０．３
（３）香料０．１
（４）α-Ｄ-グルコピラノシルグリセロール［製造例１］１５．０
（５）精製水７９．３８
（６）クエン酸０．０２
（７）クエン酸ナトリウム０．１
（８）ヒドロキシエチルセルロース０．１
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。溶解後、（４）〜（７）を順次添加した後、十分に攪拌し、（８）を加え、均一に混合し、抗菌ローションを得た。
【００４３】
［処方例２］抗菌洗浄料
（１）ミリスチン酸１０．０（重量％）
（２）パルミチン酸５．０
（３）α-Ｄ-グルコピラノシルグリセロール［製造例１］１５．０
（４）グリセリン５．０
（５）水酸化カリウム４．０
（６）精製水２０．０
（７）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン５．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース０．５
（９）精製水３５．５
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（６）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却を開始し、４０℃にて（７）及び予め均一混合しておいた（９）〜（10）を加え、均一に混合し、抗菌洗浄料を得た。
【００４４】
［処方例３］抗菌内服液
（１）α-Ｄ-グルコピラノシルグリセロール［製造例１］１３．０(重量％)
（２）エリスリトール１．０
（３）クエン酸０．１
（４）ステビア０．０１
（５）精製水８５．８９
製法：（１）〜（５）を均一に混合し、抗菌内服液を得た。
【００４５】
［処方例４］抗菌錠剤
（１）α-Ｄ-グルコピラノシルグリセロール［製造例１］０．１５（重量部）
（２）乳糖０．１５
（３）ステアリン酸マグネシウム０．００５
製法：（１）〜（３）を打錠機にて打錠し、直径１０mm、重量３００mgの抗菌錠剤を得た。
【００４６】
［処方例５］抗菌シート
コットン繊維（２０重量％）とポリエステル繊維（８０重量％）からなる不織布をα-Ｄ-グルコピラノシルグリセロール［製造例１］の２５重量％水溶液に含浸させ、搾液、乾燥し、抗菌シートを得た。
【００４７】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明によれば、優れた効果を有する抗菌剤を提供することができる。また、該抗菌剤を種々の組成物に配合することにより、組成物の微生物汚染を防止することができ、さらに組成物に抗菌作用を付与することもできる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an antibacterial agent that exhibits excellent effects. More specifically, α-D-glucopyranosylglycerol is an active ingredient, and Escherichia coli , Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa , rot fungus ( Pseudomonas cepa sphere , The present invention relates to an antibacterial agent that exerts an effect on ( Staphylococcus epidermidis ) and Corynebacterium mutissimum .
[0002]
[Prior art]
Various antibacterial agents have been used for the purpose of prevention of microbial contamination, prevention and improvement of diseases caused by bacteria, and daily hygiene for products such as pharmaceuticals, cosmetics, foods and beverages. Conventional antibacterial agents that have been used to prevent microbial contamination of pharmaceuticals, foods, cosmetics, etc. include benzoic acid-related substances such as paraoxybenzoic acid derivatives, sorbic acid and its salts, and phenols such as phenoxyethanol. And dehydroacetic acid. In addition, as a conventional antibacterial agent used for the prevention and improvement of diseases caused by bacteria, scallop shell powder, which is an antibacterial agent against Escherichia coli (see Patent Document 1), an antibacterial agent against staphylococci Extracts of Umbrella umbilicalum (see Patent Document 2), sucrose esters (see Patent Document 3), which are antibacterial agents against odorous bacteria, are known.
[0003]
However, these antibacterial agents are excellent in cases where the antibacterial spectrum is narrow and the antibacterial action is limited only to specific bacteria, and the amount of use is limited due to safety issues. Development of an antibacterial agent having antibacterial activity and high safety to the human body has been desired.
[0004]
On the other hand, α-D-glucopyranosylglycerol according to the present invention is a known substance, and has low browning, low Maillard reactivity, heat stability, non-cariogenicity, indigestibility, and high moisture retention. It has been reported that it can be used for foods, chemical products, and pharmaceuticals (see Patent Document 4). However, nothing has been known so far regarding the antibacterial action of α-D-glucopyranosylglycerol on various bacteria.
[0005]
[Patent Document 1]
JP 2001-199823 A [Patent Document 2]
JP-A-6-116162 [Patent Document 3]
JP 2002-255755 A [Patent Document 4]
Japanese Patent Laid-Open No. 11-222496
[Problems to be solved by the invention]
Antibacterial agents used to prevent microbial contamination in the manufacture of products such as pharmaceuticals, cosmetics, and foods have problems in terms of safety and are used in cases where the amount used is limited or the antibacterial spectrum is narrow. There are cases where unexpected microbial contamination occurs, and development of an antibacterial agent having a safer and wider antibacterial spectrum is desired. In addition, not only diseases caused by bacteria such as atopic dermatitis associated with Staphylococcus aureus but also food poisoning caused by pathogenic E. coli ( Escherichia coli ) has become a serious problem. The interest of all people is very high, and it is desired to develop an antibacterial agent that not only exhibits excellent antibacterial action but also has excellent safety. The present invention has been made in view of such circumstances. Accordingly, an object of the present invention is to provide an antibacterial agent that is excellent in safety and exhibits an excellent effect on various bacteria.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
In order to find an antibacterial agent exhibiting an excellent effect, the present inventors have investigated the antibacterial action of various substances. As a result, α-D- glucopyranosyl glycerol E. coli (Escherichia coli), Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), rot bacterium (Pseudomonas cepacia), Staphylococcus epidermidis (Staphylococcus epidermidis), As a result, the present inventors have found that it exhibits an excellent antibacterial action against Corynebacterium mutissimum , and has further studied to complete the present invention.
[0008]
That is, the present invention relates to an antibacterial agent containing α-D-glucopyranosylglycerol as an active ingredient.
[0009]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The α-D-glucopyranosylglycerol used in the present invention includes (2R) -1-O-α-D-glucopyranosylglycerol (Chemical Formula 1), (2S) -1-O-α-D. -Three components of glucopyranosyl glycerol (chemical formula 2) and 2-O-α-D-glucopyranosyl glycerol (chemical formula 3) are known, and one or a mixture of two or more thereof should be used. Can do.
[0010]
[Chemical 1]

[0011]
[Chemical formula 2]

[0012]
[Chemical 3]

[0013]
As a method for obtaining α-D-glucopyranosylglycerol, a method in which a mold α-glucosidase is allowed to act on a saccharide substrate in a glycerol solution, a method for extraction and purification from brewed products such as sake, miso, mirin, etc. A method of reducing glycol cleavage of isomaltose, maltitol, etc. with lead tetraacetate or periodate, or β-glucoside synthesized by Koenigs-Knorr reaction and then β-glucoside with β-glucosidase The method of allowing fungal α-glucosidase to act on a saccharide substrate in a glycerol solution is the most efficient and particularly preferred.
[0014]
α-D-Glucopyranosylglycerol can be used as it is, but it can be diluted with water or a polar solvent, decolorized or deodorized within a range without denaturation or decomposition, column chromatography, etc. You may use after performing the fractionation process by. It can also be used by encapsulating in vesicles such as liposomes or microcapsules.
[0015]
The antibacterial agent containing α-D-glucopyranosyl glycerol according to the present invention as an active ingredient can be used against various harmful bacteria, and in particular, Escherichia coli and Staphylococcus aureus . , Pseudomonas aeruginosa , rot fungus ( Pseudomonas cepacia ), Staphylococcus epidermidis , and corynebacterium minutisumum antibacterial.
[0016]
Antibacterial agents containing α-D-glucopyranosylglycerol as an active ingredient are incorporated into various compositions such as pharmaceuticals, foods, cosmetics, cleaning agents, fragrances and antibacterial sheets for the purpose of preventing microbial contamination of products. It can also be used in combination with existing preservatives in order to reduce the existing preservatives.
[0017]
In addition, antibacterial agents containing α-D-glucopyranosylglycerol as an active ingredient are Escherichia coli , Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa , rot fungus ( Pseudomonas cepace , Pseudomonas cepa ) It can be used for the purpose of prevention and improvement of various diseases and infectious diseases caused by Staphylococcus epidermidis and Corynebacterium minutisium .
[0018]
Escherichia coli is known to produce exotoxins and cause various diseases including food poisoning. Staphylococcus aureus produces various exotoxins and enzymes such as enterotoxin (enteric toxin), hemolytic toxin, coagulase (enzyme that coagulates plasma), epidermal exfoliation toxin, toxic shock syndrome toxin, etc. It is closely related to the production of various toxins and enzymes, and causes various infectious diseases. Commonly known infections include purulent inflammation such as skin folds and impetigo, cellulitis, folliculitis, conjunctivitis, mastitis, and pneumonia, toxin-type food poisoning caused by heat-resistant enterotoxin, and grapes caused by exfoliating toxins. Coccal exfoliation syndrome, toxic shock syndrome, etc. In recent years, nosocomial infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), which is resistant to a chemotherapeutic agent called methicillin, have occurred particularly in large university hospitals. This MRSA is resistant to many chemotherapeutic agents other than methicillin, and the number of bacteria (vancomycin-resistant Staphylococcus aureus; VRSA) showing resistance to vancomycin that has been effective against MRSA has also increased. Increasingly difficult to treat. In addition, it has recently been clarified that the exotoxin produced by this bacterium has superantigen activity and causes various lesions such as atopic dermatitis. Pseudomonas aeruginosa is not very pathogenic, but if it propagates due to decreased autoimmunity, it may cause skin suppuration, urinary tract infections, respiratory infections such as pneumonia, eye infections, sepsis, etc. Arouse. Rot bacteria ( Pseudomonas cepacia ) is widely known as a germ that contaminates the disinfectant solution, and causes skin diseases, food poisoning, odor and the like. Corynebacterium mintissimum and Staphylococcus epidermidis are bacteria that exist on the skin (resident bacteria), which produce lower fatty acids by decomposing and altering sweat components, resulting in an unpleasant odor Known as a causative bacterium that generates odors.
[0019]
The antibacterial agent containing α-D-glucopyranosylglycerol as an active ingredient can be used alone, but an antibacterial composition having an antibacterial action is obtained by blending it into various compositions as an antibacterial ingredient. I can do it. Compositions having obtained antimicrobial activity, E. (Escherichia coli), Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), putrefactive bacteria (Pseudomonas cepacia), Staphylococcus epidermidis (Staphylococcus epidermidis), and body odor It exhibits an excellent antibacterial action against fungi ( Corynebacterium mintissimum ) and can be used for the purpose of preventing and improving various diseases and infectious diseases caused by these bacteria.
[0020]
The blending amount of the antibacterial agent containing α-D-glucopyranosylglycerol as an active ingredient in the present invention in various compositions can be adjusted according to the type and purpose of the composition. From the viewpoints of usability and the like, the content is preferably 1% by weight or more, more preferably 5% by weight or more, and most preferably 12.5% by weight or more based on the total amount of the composition.
[0021]
The dosage form of the composition containing α-D-glucopyranosylglycerol is arbitrary, but in the case of an external preparation for skin, a cleaning agent, a bath preparation, etc., a solubilizing system such as lotion, an emulsifying system such as emulsion , Dispersion forms such as calamine lotion, aerosols filled with propellants, ointments, powders, granules and the like can be provided as various dosage forms. In addition, when the composition containing α-D-glucopyranosylglycerol is an oral medicine or food, it is a liquid preparation such as a drink, a soft drink or a gargle, a solid preparation such as a gum or a candy, a capsule , Powders, granules, tablets, etc. Furthermore, α-D-glucopyranosylglycerol can be contained in a fiber sheet and provided as a sheet-like antibacterial composition.
[0022]
In addition to α-D-glucopyranosylglycerol, the composition containing α-D-glucopyranosylglycerol is usually a pharmaceutical, a quasi-drug, a skin cosmetic, or a hair makeup, if necessary. Oily ingredients, moisturizers, powders, pigments, emulsifiers, solubilizers, detergents, UV absorbers, thickeners, drugs, perfumes, resins, alcohols Can be added as appropriate, and can be used in combination with other antibacterial agents and preservatives.
[0023]
【Example】
Further, the features of the present invention will be described in detail by way of examples. First, production examples of α-D-glucopyranosylglycerol of the present invention are shown.
[0024]
[Production Example 1]
From Aspergillus niger of 0.125 U / mL (1 U: pH 5.0, 37 ° C., amount of enzyme releasing 1 μmol of p-NP per minute from 5 mM p-NPG) in 1000 mL of an aqueous solution of 5% maltose and 35% glycerol Α-Glucosidase (transglucosidase L-Amano, manufactured by Amano Enzyme), which is an enzyme, is added and allowed to react for 24 hours under the conditions of 40 ° C. and reaction pH 5.0, and then maltose is continuously added and reacted 10 times. Got. The obtained reaction solution was purified by activated carbon chromatography to obtain α-D-glucopyranosylglycerol. When the obtained α-D-glucopyranosylglycerol was confirmed by GC-MS analysis, (2R) -1-O-α-D-glucopyranosylglycerol (Chemical Formula 1), (2S) -1-O -Α-D-glucopyranosylglycerol (chemical formula 2), 2-O-α-D-glucopyranosylglycerol (chemical formula 3).
[0025]
[Production Example 2]
1000 mL of sake was fractionated by a Shim-pack SCR-101 (N) (7.9 × 300 mm) column (column temperature: 50 ° C., eluent: water, flow rate: 0.6 mL / min), and α-D-gluco Pyranosylglycerol was obtained. When the obtained α-D-glucopyranosylglycerol was confirmed by GC-MS analysis, (2R) -1-O-α-D-glucopyranosylglycerol (Chemical Formula 1), (2S) -1-O -Α-D-glucopyranosylglycerol (chemical formula 2), 2-O-α-D-glucopyranosylglycerol (chemical formula 3).
[0026]
[Production Example 3]
10 mL of 2% periodic acid was added to 1 mL of 4% maltitol aqueous solution and reacted at room temperature for 4 minutes. After completion of the reaction, barium chloride was added, and the resulting barium periodate precipitate was filtered and removed. Furthermore, after desalting with an ion exchange column, reduction with sodium borohydride was performed, and fractionation purification was performed by activated carbon chromatography and HPLC to obtain 2-O-α-D-glucopyranosylglycerol (Chemical Formula 3). .
[0027]
[Test 1: Evaluation of antibacterial activity using Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, spoilage bacteria, Staphylococcus epidermidis]
Next, the test which evaluated the antibacterial action with respect to colon_bacillus | E._coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, spoilage bacteria, and Staphylococcus epidermidis of (alpha) -D-glucopyranosyl glycerol is shown. As a sample, α-D-glucopyranosylglycerol prepared in Production Example 1 was used. The evaluation was performed according to the following procedure. Escherichia coli , Staphylococcus aureus , and Pseudomonas aeruginosa adjusted to 6.4 × 10 ⁵ samples per 0.5 mL diluted to an arbitrary concentration ), Rot bacteria ( Pseudomonas cepacia ), and Staphylococcus epidermidis, respectively, and inoculated at 37 ° C. for 24 hours or 48 hours. Sampling was performed after the exposure and applied to a petri dish containing SCDLP agar medium (manufactured by Nippon Pharmaceutical). After culturing at 37 ° C. for 48 hours, the number of bacteria was counted. Moreover, the sample was changed into glucose as an object test, and the same test was done. The results of the viable count counted for each are shown in Tables 1-5. In addition, “<” in the table indicates a case where the number of exposed bacteria is increased (the same applies to the description in the table below).
[0028]
[Table 1]

[0029]
[Table 2]

[0030]
[Table 3]

[0031]
[Table 4]

[0032]
[Table 5]

[0033]
From Tables 1-5, when exposed to α-D-glucopyranosylglycerol, a decrease in the number of bacteria was clearly observed in all bacterial species, especially when exposed to 12.5% for 48 hours, 25 In all cases where 24% and 48% were exposed to% and 50% respectively, complete killing of the fungus was confirmed. On the other hand, when exposed to glucose, no decrease in the number of bacteria was observed in all bacterial species, indicating that the growth was more advanced than the number of inoculated bacteria. From this, α-D- glucopyranosyl glycerol, E. coli (Escherichia coli), Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), rot bacterium (Pseudomonas cepacia), and Staphylococcus epidermidis (Staphylococcus It has been clarified that it exhibits excellent antibacterial activity against epidermidis ).
[0034]
[Test 2: Evaluation of antibacterial action using odor-degrading bacteria]
Next, it shows about the test which evaluated the antibacterial action with respect to the odor bacterium of (alpha) -D-glucopyranosyl glycerol. As a sample, α-D-glucopyranosylglycerol prepared in Production Example 1 was used. The evaluation was performed according to the following procedure. A 1.0 mL sample diluted to an arbitrary concentration was inoculated with 2.9 × 10 ⁶ corynebacterium mutissimum and exposed at 37 ° C. for 24 or 48 hours. Sampling was performed after the exposure and applied to a petri dish containing SCDLP agar medium (manufactured by Nippon Pharmaceutical). After culturing at 37 ° C. for 48 hours, the number of bacteria was counted. Table 6 shows the results of the number of viable bacteria counted for each.
[0035]
[Table 6]

[0036]
From Table 6, when it exposed to (alpha) -D-glucopyranosyl glycerol, the reduction | decrease of the number of odor-dense bacteria was recognized clearly. On the other hand, when exposed to glucose, no decrease in the number of bacteria was observed, indicating that the growth was more advanced than the number of inoculated bacteria. From this, it was revealed that α-D-glucopyranosyl glycerol exhibits excellent antibacterial properties against Corynebacterium mintissisum .
[0037]
[Test 3: Evaluation of skin irritation of α-D-glucopyranosylglycerol]
Next, the test evaluated about the skin irritation of (alpha) -D-glucopyranosyl glycerol is shown. As a sample, α-D-glucopyranosylglycerol prepared in Production Example 1 was used. The evaluation was performed according to the following procedure. 30 μL of 50% by weight aqueous solution of α-D-glucopyranosylglycerol was applied to a fin chamber (manufactured by EPITEST Ltd.), and occlusion was applied to the back of 20 subjects for 24 hours. 24 hours after application, the fin chamber was removed, and the sample application site was wiped with 70% ethanol-impregnated absorbent cotton. Judgment was made by observing the skin condition 25 hours after application (1 hour after sample removal) and 48 hours (24 hours after sample removal). The determination was made according to the criteria in Table 7. The evaluation results are shown in Table 8.
[0038]
[Table 7]

[0039]
[Table 8]

[0040]
Table 8 shows that no skin reaction such as erythema or edema was observed in all subjects, and α-D-glucopyranosylglycerol had no skin irritation and was very excellent in safety. It was.
[0041]
Then, the formulation example of the antibacterial composition which mix | blended the alpha-D-glucopyranosyl glycerol which concerns on this invention is shown.
[0042]
[Formulation Example 1] Antibacterial lotion (1) Ethanol 5.0 (% by weight)
(2) Polyoxyethylene (40E.O.) hydrogenated castor oil 0.3
(3) Fragrance 0.1
(4) α-D-Glucopyranosylglycerol [Production Example 1] 15.0
(5) Purified water 79.38
(6) Citric acid 0.02
(7) Sodium citrate 0.1
(8) Hydroxyethyl cellulose 0.1
Production method: (2) and (3) are dissolved in (1). After dissolution, (4) to (7) were sequentially added, and then sufficiently stirred, (8) was added and mixed uniformly to obtain an antibacterial lotion.
[0043]
[Formulation Example 2] Antibacterial cleaning agent (1) Myristic acid 10.0 (% by weight)
(2) Palmitic acid 5.0
(3) α-D-Glucopyranosylglycerol [Production Example 1] 15.0
(4) Glycerin 5.0
(5) Potassium hydroxide 4.0
(6) Purified water 20.0
(7) Palm oil fatty acid amidopropyl betaine 5.0
(8) Hydroxyethyl cellulose 0.5
(9) Purified water 35.5
Production method: The oil phase components (1) to (4) are heated and dissolved at 80 ° C. On the other hand, the aqueous phase components (5) to (6) are heated and dissolved at 80 ° C., and mixed and stirred uniformly with the oil phase components. Cooling was started, and (7) and (9) to (10) that had been uniformly mixed at 40 ° C. were added and mixed uniformly to obtain an antibacterial cleaning material.
[0044]
[Prescription Example 3] Antibacterial oral solution (1) α-D-glucopyranosylglycerol [Production Example 1] 13.0 (% by weight)
(2) Erythritol 1.0
(3) Citric acid 0.1
(4) Stevia 0.01
(5) Purified water 85.89
Production method: (1) to (5) were mixed uniformly to obtain an antibacterial oral solution.
[0045]
[Prescription Example 4] Antibacterial Tablet (1) α-D-Glucopyranosylglycerol [Production Example 1] 0.15 (parts by weight)
(2) Lactose 0.15
(3) Magnesium stearate 0.005
Production method: (1) to (3) were tableted with a tableting machine to obtain an antibacterial tablet having a diameter of 10 mm and a weight of 300 mg.
[0046]
[Formulation Example 5] A non-woven fabric composed of antibacterial sheet cotton fibers (20 wt%) and polyester fibers (80 wt%) is impregnated with a 25 wt% aqueous solution of α-D-glucopyranosylglycerol [Production Example 1] and pressed. The liquid was dried to obtain an antibacterial sheet.
[0047]
【The invention's effect】
As described above in detail, according to the present invention, an antibacterial agent having an excellent effect can be provided. Further, by blending the antibacterial agent into various compositions, microbial contamination of the composition can be prevented, and further, an antibacterial action can be imparted to the composition.

Claims

An antibacterial agent containing α-D-glucopyranosylglycerol as an active ingredient.

E. (Escherichia coli), Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa), putrefactive bacteria (Pseudomonas cepacia), Staphylococcus epidermidis (Staphylococcus epidermidis), and an antibacterial agent against underarm odor bacteria (Corynebacterium minutissimum) according Item 1. An antibacterial agent according to item 1.