JP4406503B2 - New liver disorder inhibitor - Google Patents

Description

【００１０】
【化７】

【００１１】
【化８】

【００１２】
【化９】

【００１３】
【化１０】

（２）前記（１）の肝障害抑制剤を含有する、肝障害抑制用医薬用組成物。
（３）前記（１）の肝障害抑制剤を含有する、肝障害抑制用食品用組成物。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明は、肝障害抑制剤および、肝障害抑制剤の有効成分として使用できる新規化合物に関するものである。
【００１６】
本発明の肝障害抑制剤の有効成分として使用できる化合物には、式１または２で表される新規リノール酸誘導体、式３で表される新規オレイン酸誘導体および、式４または５で表されるリノール酸誘導体が含まれ、式１〜３の化合物を「新規不飽和脂肪酸誘導体」、式１〜５の化合物を「不飽和脂肪酸誘導体」呼び、以下説明する。
【００１７】
＜１＞本発明の肝障害抑制剤
まず、肝障害抑制剤の有効成分として使用できる新規不飽和脂肪酸誘導体について説明する。本発明の新規不飽和脂肪酸誘導体は、上記の式１〜３の構造を有する化合物である。すなわち、式１で表される化合物１（分子量３１８：Ｃ₂₁Ｈ₃₄Ｏ₂）は、（２Ｅ，５Ｅ，１２Ｚ，１５Ｚ）−１−ヒドロキシヘンイコサ−２，５，１２，１５−テトラエン−４−オンであり、式２で表される化合物２（分子量３２０：Ｃ₂₁Ｈ₃₆Ｏ₂）は、（２Ｅ，１２Ｚ，１５Ｚ）−１−ヒドロキシヘンイコサ−２，１２，１５−トリエン−４−オンであり、式３で表される化合物３（分子量３８０：Ｃ₂₃Ｈ₄₀Ｏ₄）は、（５Ｅ，１２Ｚ）−１−（アセチルオキシ）−２−ヒドロキシヘンイコサ−５，１２−ジエン−４−オンである。式１〜３の不飽和脂肪酸誘導体は、本発明により初めて単離精製、同定された新規化合物であり、優れた肝障害抑制作用、特に慢性肝障害抑制作用を有する。
【００１８】
また、式４の化合物４及び式５の化合物５で表される不飽和脂肪酸誘導体は、アボガドから単離された既知物質であるが、上記式１〜３で表される化合物と一緒に、肝障害抑制作用を示す化合物として、単離精製された。
【００１９】
式４の化合物４については、ＮＯ，Ｏ₂ ^-の産生抑制作用があることが報告がされている(BIO INDUSTRY,Vol.15,No8,p.34-40(1998))。また、式５の化合物５は、別名ｐｅｒｓｉｎとも呼ばれ、ＮＯ，Ｏ₂ ^-の産生抑制作用の他、各種の成長阻害作用が認められ、その生理的作用が研究されている(Journal of Natural Products,Vol.61,No.9,p.1168-1170(1998), Natural Toxins,3,p.344-349(1995), BIO INDUSTRY,Vol.15,No8,p.34-40(1998),WO 95/22696)。しかしながら、式４及び５の化合物の肝障害抑制作用については報告はなく、本発明において初めて、これらの化合物が優れた肝障害抑制作用、特に慢性肝障害抑制作用を有することが明らかになった。
【００２０】
このように上記の式１〜５で表される不飽和脂肪酸誘導体は、いずれも肝障害抑制作用が認められる分子量が３００〜４００の常温で無色油状の化合物であり、ヘキサンや酢酸エチル等の各種の溶媒に溶解するため、例えば、常温で液体の各種脂肪酸等の脂溶性の物質と適宜混合して使用することができる。
【００２１】
上記の式１〜５の不飽和脂肪酸誘導体は、アボガド植物から下記に示す方法により、溶媒抽出して単離精製することにより得てもよいし、化学的に合成してもよい。
【００２２】
化学的合成方法としては、例えば、Natural Toxins,3,p.344-349(1995)に記載されているように、アルデヒド誘導体とメチルケトンをアルドール縮合することにより（Paterson I,Goodman JM, Lister MA, Schumann RC, McClure CK, Norcross RD,Tetrahedron 46,p.4663-4684(1990)）、また、適宜、公知の方法を組み合わせることにより合成することができる。また、国際公開ＷＯ９５／２２９６９に記載の方法又はその方法に適宜変更を加えて合成してもよい。
【００２３】
また、本発明の肝障害抑制作用を有する式１〜５の不飽和脂肪酸誘導体は、例えば、アボガド植物から以下のような方法を経て、単離精製することができる。
【００２４】
本発明において用いるアボガド植物はクスノキ科ワニナシ、アボガド属（M. shearei, Persea）に属する植物である。ワニナシ、アボガド属としては、アメリカナ（P. americana）、メキシコ系（Mexican race）、ガテマラ系（Guatemalan race）、西インド諸島系（Indian race）等が挙げられ、特にアメリカナ（P. americana）が好ましい。
【００２５】
本発明の肝障害抑制作用を有する不飽和脂肪酸誘導体は、アボガド植物の果肉、果皮、種子、葉、葉柄、枝等、並びにそれらを粉砕、乾燥、濃縮等を行った処理物に含まれているが、特に該物質は果肉、果皮に多く含まれているため、それら組織およびそれら組織の処理物から抽出することが好ましい。
【００２６】
アボガド植物の抽出処理は、連続式、バッチ式等の方法で、常法により冷浸または温浸にて任意の時間行う。例えば、アボガド植物の乾燥粉末を、細かく粉砕し、抽出溶媒に、室温で１〜４８時間、浸漬及び又は振とうして行う。その後、抽出液から抽出残渣を除いて、減圧または限外濾過を行い抽出物を濃縮する。さらに、必要に応じて溶媒を留去する。
【００２７】
このような抽出に用いる溶媒としては、有機溶媒が好ましく、より好ましくは無極性有機溶媒であり、具体的には、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、四塩化炭素等が挙げられ、中でもｎ−ヘキサンが好ましい。
【００２８】
本発明の肝障害抑制作用を有する物質の抽出例を以下に例示するが、本発明はこの抽出例に限定されるものではない。まず、アボガド植物を凍結乾燥し、この乾燥粉末に非水溶性の無極性有機溶媒であるｎ−ヘキサンを加え、この溶媒に可溶性の成分を抽出する。アボガド植物に加える溶媒の量は、乾燥粉末１ｇ当たり、１〜２００ｍｌであるのが好ましく、５〜５０ｍｌであるのが更に好ましい。操作はアボガド植物にこの溶媒を加えた後、スターラー等でよく攪拌し、無極性有機溶媒に可溶性の画分を抽出する。この操作は、通常２回〜５回繰り返すのが好ましい。この様にして得られた抽出画分の溶媒を除去することにより油状の抽出物が得られる。溶媒の除去方法としては、常圧または減圧条件下で溶媒を蒸発させる等の、通常に用いられる各種の除去方法により行うことができる。
【００２９】
さらに、上述した抽出物を吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィーを単独あるいは組み合わせて使用してクロマトグラフ分画することによりさらに分離・精製を行い、かかる分画により得られた肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物から、本発明の肝障害抑制剤に含有させる式１〜５の不飽和脂肪酸誘導体を単離精製することが好ましい。ここで、肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物（すなわち、不飽和脂肪酸誘導体を含む画分）は、薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０、展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）におけるＲｆ値が０．１９〜０．２５の範囲内の値であるといった特徴を有しているため、これを指標として分画物の選別を行うことができる。
【００３０】
本発明の肝障害抑制作用を有する物質のクロマトグラフ分画の例を以下に例示するが、これらに限定されるものではない。
【００３１】
上述した抽出物を溶出力の低い溶出液に溶解し、吸着クロマトグラフィーとしてシリカゲルカラムに供する。溶出力を段階的に高くした溶出液で溶出させ、経時的に溶出液を採取することにより分画して分離・精製する。この分画した画分中の溶媒を除去し、肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物を得ることができる。溶媒の除去方法としては、常圧または減圧条件下で溶媒を蒸発させる等の、通常に用いられる各種の除去方法により行うことができる。また、分画物の選別は上述した方法により行うことができる。
【００３２】
また、上述した抽出物および分画物に肝障害抑制作用を有する物質が含まれているか否かを判断する方法としては、公知の肝障害作用を検定する方法を用いることができる。例えば、マウス等のモデル動物に、かかる抽出物または分画物を一定期間投与した群と、投与しなかった群とを作製し、これら各群にＤ−ガラクトサミン等の肝障害を誘発する物質を投与し、各群のモデル動物におけるＧＴＰ、ＧＯＰ等を測定する。かかる測定値を肝障害の指標として効果の有無を判別し、肝障害抑制作用を有する物質が含まれているか否かを判断することができる。
【００３３】
そして、肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物を、例えば、溶出液の組成を適宜変更させた条件で、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、更に分画して、本願発明の新規化合物１〜３および、肝障害抑制作用を有する化合物４及び５を得ることができる。分画により単離精製した化合物の同定は、¹Ｈ-ＮＭＲ、¹³Ｃ-ＮＭＲ、ＩＲスペクトル、ＵＶスペクトル等の定法に従って測定した値により確認すればよい。
【００３４】
本発明の肝障害抑制剤は、上記の式１〜５の化合物を肝障害を抑制する有効成分として含有することを特徴とするが、これらの式１〜５の化合物は単独で配合しても良いし、２種類以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３５】
＜２＞本発明の肝障害抑制剤を含有する肝障害抑制用医薬用組成物
本発明の医薬用組成物は、上記の肝障害抑制剤を、常法にしたがって配合したものであり、肝障害抑制作用が期待できるものであれば特に限定されるものではない。
【００３６】
本発明の医薬組成物の剤型は、特に限定されないが、一般に製剤上許容される１または２種類以上の担体、賦形剤、統合剤、防腐剤、安定剤、香味剤等と共に混合して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水薬、ドリンク剤等の内服剤型とすることが好ましい。このような製剤化は、通常、医薬の製造に用いられる方法にしたがって製剤化することができる。
【００３７】
上記医薬用組成物の投与量としては、疾患の種類、症状、患者の年齢、体重等に異なるが、成人１日当たり、１〜１００ｍｇを、１回ないし数回に分けて経口投与するのが好ましい。
【００３８】
＜３＞本発明の肝障害抑制剤を含有する肝障害抑制用食品用組成物
本発明の食品用組成物は、上記の肝障害抑制剤を、常法にしたがって配合したものである。
【００３９】
本発明の食品用組成物としては、上記の肝障害抑制剤を含有するものであれば特に限定されるものではないが、種々の食品に、食品として通常用いられている任意成分とともに、食品原料に抽出物を所要量配合することができる。この抽出物を配合する際に特に留意するすることはなく、通常の製造方法により加工製造することにより、健康食品、機能性食品を製造することができる。配合量は、食品の種類のより異なるが、食品の味を損なわず、且つ十分な肝障害抑制効果を得るためには、食品全量に対して、０．００１〜１重量％の割合で配合するのが好ましい。
【００４０】
【実施例】
以下実施例により、本発明を更に具体的に説明する。
【００４１】
【実施例１】
＜本発明の不飽和脂肪酸誘導体の単離精製＞
アボガドの果肉部分を凍結乾燥し、乾燥粉末を得た。この乾燥粉末を、以下の図１に示す流れに従って分画し、後の評価に使用した。
【００４２】
（ａ）ヘキサンによる分画
アボガドの果肉部分を凍結乾燥して得た乾燥粉末１００ｇに１Ｌのｎ−ヘキサンを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清をヘキサン抽出液として得た。この操作を更に２回繰り返し、計３回の操作により、３０００ｍｌのヘキサン抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮させることにより、５８．６ｇの油状濃縮物がヘキサン画分から得られた。
【００４３】
（ｂ）酢酸エチルによる分画
次に上記の操作（ａ）の残渣４１．４ｇに酢酸エチル１Ｌを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清を酢酸エチル抽出液として得た。この操作を更に２回繰り返し、計３回の操作により、３０００ｍｌの酢酸エチル抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより、０．８ｇの固形物が酢酸エチル画分から得られた。
【００４４】
（ｃ）７０％エタノールによる分画
次に上記の操作（ｂ）の残渣４０．６ｇに７０％エタノール１Ｌを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清を７０％エタノール抽出液として得た。この操作を更に４回繰り返し、計５回の操作により、５０００ｍｌの７０％エタノール抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより１６．０ｇの固形物が７０％エタノール画分から得られた。また、操作（ｃ）により、２４．６ｇのエタノール残渣が得られた。
【００４５】
（ｄ）ブチルアルコール（ブタノール）による分画
次に上記の操作（ｃ）による濃縮乾固物１６．０ｇを５００ｍｌの蒸留水に溶解させた。そして、この溶液に５００ｍｌのｎ−ブタノールを加え十分に攪拌後、分液ロートを用いた向流分配によりブタノール層を抽出した。残った水層には、更に５００ｍｌのｎ−ブチルアルコールを加え十分に攪拌後、ｎ−ブチルアルコールによる抽出を行った。この抽出を更に３回繰り返し、計５回の抽出操作により、２５００ｍｌのブチルアルコール抽出液を得た。このブチルアルコール抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより２．８ｇの固形物がブチルアルコール画分から得られた。
【００４６】
また、操作（ｄ）で水層部分の溶液を凍結乾燥装置を用いて濃縮乾固させることにより１３．２ｇの固形物が水溶性画分から得られた。
【００４７】
上記の操作による分画により得られた各分画への分配率（重量％）を表１に示す。ここで、分配率とは、各分画から得られた固形物の重量を、分画開始前の重量（１００ｇ）で除した値に１００を乗じて％表示したものである。
【００４８】
【表１】

【００４９】
（ｅ）ヘキサン画分のシリカゲルカラムによる分画
再び操作（ａ）と同様の操作を規模拡大して行い、ヘキサン画分の油状濃縮物を得た。得られた乾燥固形物１００ｇを、ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒（５／１）５００ｍｌに再溶解し、シリカゲルカラム（メルク社製シリカゲル６０、 ８×７３ｃｍ）に供し、組成を変化させた溶媒をにより溶出させた。ここで使用した溶出溶媒は、ヘキサン/酢酸エチル（5/1）、ヘキサン/酢酸エチル（4/1）、ヘキサン/酢酸エチル（3/2）、ヘキサン/酢酸エチル（2/3）、酢酸エチル、メタノールであり、この順にカラムに供し、溶出液を経時的に採取することにより分画した。これらの抽出物について薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０、展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）を行い、紫外吸収を有するバンドが確認できなくなった時点で、次の溶出溶媒に変更した。これら分画された溶出液の分画物について薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０、展開溶媒；ヘキサン/酢酸エチル＝4/1）を行い、このＲｆ値の結果を指標として、最終的に７画分に分けた。それぞれの画分の収量は、画分▲１▼は８４．１ｇ、画分▲２▼は１．２ｇ、画分▲３▼は１．８ｇ、画分▲４▼は７．１ｇ、画分▲５▼は１．９ｇ、画分▲６▼は１．５ｇ、画分▲７▼は２．４ｇであった。各画分の薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値、分配率および溶出溶媒の組成は表２に示す通りである。
【００５０】
【表２】

次に、上記の分画の後、画分▲４▼をアセトニトリル：水混合溶媒（９８：２）に再溶解し、ＯＤＳカラム（Wakosil-II 5C18HG Prep,和光純薬工業（株）製）を用いた高速液体クロマトグラフィー（アセトニトリル：水＝９８：２、UV/VIS検出器:220nm）に供し、５つの化合物を得た。
【００５１】
これらの各化合物の収量は以下の表３の通りである。
【００５２】
【表３】

ここで、収率とは、得られた各化合物の重量を、分画開始前の重量（ＯＤＳカラムへの供試重量：１０．４５ｇ）で除した値に１００を乗じて％表示したものである。そして、上記の化合物１〜５について、物質の同定を行ったところ、それぞれ以下のような結果を得た。
【００５３】
（１）化合物１
▲１▼分子量３１８（Ｃ₂₁Ｈ₃₄Ｏ₂）
▲２▼赤外線吸収スペクトル：3420, 1740, 1667, 1616 cm^-1
▲３▼核磁気共鳴スペクトル(¹H-NMR,δ)：0.87(3H,t,J=6.9), 1.27(4H,m), 1.34(6H,m), 1.47(2H,m), 2.05(4H,m), 2.23(2H,dt,J=7.0,6.4), 2.75(2H,dd,J=6.1,6.1),4.38(2H,br,s), 5.30(2H,m), 5.34(2H,m), 6.29(1H,dt,J=14.3,1.2), 6.62(1H,dt,J=15.4,2.1), 6.91(1H,m), 6.93(1H,m)
▲４▼核磁気共鳴スペクトル(¹³C-NMR,δ)：14.0, 22.5, 25.6, 27.1, 27.2, 28.0, 28.8, 29.3, 29.4, 31.5, 32.7, 62.2, 126.3, 127.8, 128.3, 129.2, 129.8, 130.3, 144.8, 148.7, 189.2.
▲５▼色および性状：無色油状
以上の分析結果から、化合物１は下記の式１の構造式を有する新規リノール酸誘導体と同定した。
【００５４】
【化１１】

【００５５】
（２）化合物２
▲１▼分子量３２０（Ｃ₂₁Ｈ₃₆Ｏ₂）
▲２▼赤外線吸収スペクトル：3430, 1668cm^-1
▲３▼核磁気共鳴スペクトル(¹H-NMR,δ)：0.86(3H,t,J=6.8), 1.27(14H,m), 1.57(2H,m), 2.02(4H,m), 2.51(2H,t,J=7.5), 2.78(2H,t,J=6.6), 4.3(2H,m), 5.32(4H,m), 6.33(1H,ddd,J=15.9,3.1,2.1), 6.85(1H,dt,J=15.9,4.0)
▲４▼核磁気共鳴スペクトル(¹³C-NMR,δ)：13.9, 22.4, 24.0, 25.5, 27.0, 29.0, 29.1, 29.2, 29.5, 31.4, 40.0, 61.6, 127.76, 127.84, 127.9, 129.8, 130.0,145.1, 201.0, 189,2
▲５▼色および性状：無色油状
以上の分析結果から、化合物２は下記の式２の構造式を有する新規リノール酸誘導体と同定した。
【００５６】
【化１２】

【００５７】
（３）化合物３
▲１▼分子量３８０（Ｃ₂₃Ｈ₄₀Ｏ₄）
▲２▼赤外線吸収スペクトル：3454, 1741, 1667cm^-1
▲３▼核磁気共鳴スペクトル(¹H-NMR,δ)：0.84(3H,t,J=6.9), 1.22(16H,m), 1.43(2H,m), 2.00(4H,m), 2.06(3H,s), 2.19(2H,m), 2.73(2H,d,J=6.1), 4.05(1H,dd,J=11.3,6.1), 4.10(1H,dd,J=11.3,4.1), 4.30(1H,ddt,J=4.1,6.1,6.1), 5.31(2H,m), 6.07(1H,d,J=15.9), 6.85(1H,dt,J=15.9,7.0)
▲４▼核磁気共鳴スペクトル(¹³C-NMR,δ)：14.0, 22.6, 27.1, 27.9, 29.1, 29.28,29.31, 29.4, 29.56, 29.58, 29.6, 31.9, 32.5, 42.3, 66.1, 67.3, 130.2, 149.5, 171.0, 199.6
▲５▼色および性状：無色油状
以上の分析結果から、化合物３は下記の式３の構造式を有する新規オレイン酸誘導体と同定した。
【００５８】
【化１３】

【００５９】
（４）化合物４
ＩＲ、ＮＭＲにより化合物１〜３と同様に化合物４を同定したところ、下記の式４の構造式を有する、リノール酸誘導体（分子量３７８（Ｃ₂₃Ｈ₃₈Ｏ₄）、無色液状物質、Bio Industry,15,8.p.34-40(1998)に記載）であることを確認した。
【００６０】
【化１４】

【００６１】
（５）化合物５
ＩＲ、ＮＭＲにより化合物１〜３と同様に化合物５を同定したところ、下記の式４の構造式を有する、リノール酸誘導体（分子量３８０（Ｃ₂₃Ｈ₄₀Ｏ₄）、無色液状物質、Natural Toxins,3,p.344-349(1995)に記載）であることを確認した。
【００６２】
【化１５】

【００６３】
【実施例２】
次に、上記の化合物１〜５の慢性肝炎に対する肝保護作用を、ラットを用いたＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害モデルにより評価した。
＜肝障害抑制効果の評価＞
四塩化炭素誘導性の肝障害モデルが急性毒性的な肝障害モデルであるのに対して、このＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害モデルは、免疫系を介しての肝障害作用が示唆される慢性肝炎のモデルとされており、臨床試験での評価結果と相関性が高い。
【００６４】
評価には、６週齢の雄性ウィスター系ラットを用いた。１０日間の予備飼育の後、各群の平均体重がほぼ等しくなるように各群７匹として群分けを行った。そして、上記の各化合物１〜５をアボガド油（アボガド果肉部をヘキサンで抽出し、抽出物をシリカゲルクロマトグラフィーに供し、トリグリセライド画分を回収したもの）に溶解させ（濃度：１００ｍｇ／０．３ｍｌ）、ラット体重１ｋｇあたり１００ｍｇとなるように、カテーテルを用いてラットの胃の中へ注入した。
【００６５】
なお、偽薬処理群およびコントロール群には、アボガド油のみを、カテーテルを用いてラットの胃の中へ注入した。
【００６６】
上記の化合物投与の４時間後に、肝障害を誘発するＤ−ガラクトサミンを、ラットの体重１ｋｇあたり３５０ｍｇとなるように腹膜内投与し、その２２時間後に採血を行った。なお、偽薬処理群では、生理食塩水をを腹内投与した後、同様の条件で採血を行った。
【００６７】
次に、この採血した血液を用いて、肝細胞の脱落により血中濃度が上昇することが知られている酵素、すなわち、ＡＬＴ：アラニン アミノトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）活性と、ＡＳＴ：アスパラギン酸 アミノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）活性を市販の測定キット（和光純薬工業（株）製）により測定した。そして、この酵素活性の増減を肝障害の指標とした。酵素活性の増減の結果を図２および３にそれぞれ示す。
【００６８】
図２に示したとおり、コントロールでは顕著に両酵素の活性値が上昇しており、肝細胞の壊死がおきていることが示唆された。一方、化合物１〜５を投与した群では、全ての群で明かな肝障害抑制作用が観察された。
【００６９】
尚、図２中に示しているアルファベット（ａ，ｂ，ｃ，ｄ）は、共通するアルファベットを有していない群間で、危険率５％未満で、統計的に有意な差があることを示す（分散分析後、事後検定法としてＤｕｎｃａｎ法で検定）。
【００７０】
【発明の効果】
本発明の新規不飽和脂肪酸誘導体は優れた肝障害抑制効果を有するため、肝障害抑制剤の有効成分として使用することができる。また、本発明の不飽和脂肪酸誘導体を有効成分として含有する肝障害抑制剤は、優れた肝障害抑制効果、特に慢性肝障害抑制効果を有する。更に、本発明の肝障害抑制剤は植物由来であるため安全であり、且つその抽出が容易であるため、処方が容易な、該肝障害抑制剤を含む医薬用または食品用組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 アボガドから肝障害抑制作用を有する、不飽和脂肪酸誘導体を抽出する一例を示す図である。
【図２】 薬物投与２２時間後のＡＬＴ（ＧＰＴ）活性及びＡＳＴ（ＧＯＴ）活性値を示す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a hepatic disorder inhibitor and a novel compound that can be used as an active ingredient of a hepatic disorder inhibitor.
[0002]
[Prior art]
Various studies have been conducted on acute liver disorders among liver disorders, and various treatments have been carried out. However, there are many unclear points regarding chronic liver disorders, and an effective treatment method has not been established. This chronic liver disorder is considered to be a liver disorder via the immune system.
[0003]
Treatment with such Chinese medicine is performed for such chronic liver disorders. In this Kampo therapy, Dai-saiko-to, Sho-saiko-to, Saiko-Kei-to, Sai-ko-Kai-to, Shikakusan, etc. are used. Kampo Special Committee (1975), "Introduction to Kampo" by Ken Fujihira, Shigenari Ogura, Sogensha (1979)). Although there are many unclear points about the active ingredients of herbal medicines contained in these Chinese herbal medicines, for example, for ginseng, the ingredients have been found to have a hepatoprotective effect (Japanese Patent Application No. 8-46154). In addition, these herbal medicines are known to have the advantage of fewer side effects.
[0004]
However, these herbal medicines are difficult to obtain because many of them depend on raw materials overseas, and the action is not constant due to the collection of wild things ("Biopharmaceutical 4th edition" written by Isao Kitagawa et al. (Yodogawa Shoten) p.384-387 (1992)), “Evaluation and Development Technology of Traditional Chinese Medicine”, edited by Tokyo Crude Medicine Research Group (CMC Corporation) p. 353-354 (1983)). For this reason, herbal medicines are generally expensive and have the disadvantage of being difficult to take on a daily basis.
[0005]
Moreover, extraction of the active ingredient which has a liver disorder inhibitory effect from vegetable as a raw material is also tried. In vegetables, garlic (Kagawa, K. et al. Japan. J. Pharmacol., Vol. 42, p. 19-26 (1986), Nakagawa, S. et al. Hiroshima J. Med. Sci., Vol. 34 , p.303-309 (1985)), ginseng (Bishayee, A. et al. J. Ethnopharmacl., Vol.47, p.69-74 (1995), baboon (САРТИКОВ, А.С.et al. Khim) Farm. Zh., Vol. 24, p.38-40 (1990)) is known to show an effect of suppressing acute liver injury, but none of which shows an effect of suppressing chronic liver injury was known.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
This invention makes it a subject to provide the novel compound which can be used as an active ingredient of a liver disorder inhibitor and a liver disorder inhibitor.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted an extensive search to solve the above problems, and found that the linoleic acid derivative and oleic acid derivative in the avocado plant have an excellent liver damage-inhibiting action, and a compound that exhibits an action to suppress liver damage has been identified. After separation and purification, it was identified that a novel compound was contained, and the present invention was completed.
[0008]
That is, the present invention is as follows.
(1) Liver containing oleic acid derivative represented by Formula 1, 2, 4, or linoleic acid derived thereof or Formula 3 below is represented by the 5 following, or combinations of two or more thereof as an active ingredient Disorder inhibitor.
[0009]
[Chemical 6]

[0010]
[Chemical 7]

[0011]
[Chemical 8]

[0012]
[Chemical 9]

[0013]
[Chemical Formula 10]

( 2 ) A pharmaceutical composition for suppressing liver damage, comprising the liver damage inhibitor of the above ( 1 ).
( 3 ) A composition for food for inhibiting liver damage, comprising the liver damage inhibitor of ( 1 ).
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
[0015]
The present invention relates to a hepatic disorder inhibitor and a novel compound that can be used as an active ingredient of a hepatic disorder inhibitor.
[0016]
The compound that can be used as an active ingredient of the liver disorder inhibitor of the present invention includes a novel linoleic acid derivative represented by Formula 1 or 2, a novel oleic acid derivative represented by Formula 3, and a formula 4 or 5. Linoleic acid derivatives are included, the compounds of formulas 1 to 3 are referred to as “new unsaturated fatty acid derivatives”, and the compounds of formulas 1 to 5 are referred to as “unsaturated fatty acid derivatives”, which will be described below.
[0017]
<1> Liver injury inhibitor of the present invention First, a novel unsaturated fatty acid derivative that can be used as an active ingredient of a liver injury inhibitor will be described. The novel unsaturated fatty acid derivative of the present invention is a compound having the structure of the above formulas 1 to 3. That is, Compound 1 represented by Formula 1 (molecular weight 318: C ₂₁ H ₃₄ O ₂ ) is (2E, 5E, 12Z, 15Z) -1-hydroxyhenicosa-2,5,12,15-tetraene- Compound 2 (molecular weight 320: C ₂₁ H ₃₆ O ₂ ) which is 4-one and is represented by formula 2 is (2E, 12Z, 15Z) -1-hydroxyhenicosa-2,12,15-triene- Compound 3 (molecular weight 380: C ₂₃ H ₄₀ O ₄ ) which is 4-one and is represented by formula 3 is (5E, 12Z) -1- (acetyloxy) -2-hydroxyhenicosa-5,12 -Dien-4-one. The unsaturated fatty acid derivatives of formulas 1 to 3 are novel compounds isolated and purified and identified for the first time by the present invention, and have an excellent liver injury-inhibiting action, particularly chronic liver injury-inhibiting action.
[0018]
Further, the unsaturated fatty acid derivative represented by the compound 4 of the formula 4 and the compound 5 of the formula 5 is a known substance isolated from avocado, but together with the compound represented by the above formulas 1-3, liver It was isolated and purified as a compound showing a disorder inhibiting action.
[0019]
It has been reported that the compound 4 of the formula 4 has a NO, O ₂ ⁻ production inhibitory action (BIO INDUSTRY, Vol. 15, No. 8, p. 34-40 (1998)). In addition, compound 5 of formula 5 is also called “persin”, and various growth inhibitory actions are recognized in addition to NO, O ₂ ⁻ production suppression action, and its physiological action has been studied (Journal of Natural Products). , Vol. 61, No. 9, p. 1168-1170 (1998), Natural Toxins, 3, p. 344-349 (1995), BIO INDUSTRY, Vol. 15, No. 8, p. 34-40 (1998), WO 95/22696). However, there is no report on the liver injury-suppressing action of the compounds of formulas 4 and 5, and for the first time in the present invention, it has been clarified that these compounds have excellent liver damage-inhibiting action, particularly chronic liver damage-inhibiting action.
[0020]
As described above, the unsaturated fatty acid derivatives represented by the above formulas 1 to 5 are compounds that are colorless and oily at room temperature with a molecular weight of 300 to 400 in which an action of inhibiting liver damage is observed, and various kinds of compounds such as hexane and ethyl acetate. For example, it can be used by appropriately mixing with a fat-soluble substance such as various fatty acids that are liquid at room temperature.
[0021]
The unsaturated fatty acid derivatives of the above formulas 1 to 5 may be obtained from an avocado plant by solvent extraction and isolated and purified by the method shown below, or may be chemically synthesized.
[0022]
As a chemical synthesis method, for example, as described in Natural Toxins, 3, p.344-349 (1995), an aldehyde derivative and methyl ketone are subjected to aldol condensation (Paterson I, Goodman JM, Lister MA, Schumann RC, McClure CK, Norcross RD, Tetrahedron 46, p.4663-4684 (1990)), and can be synthesized by appropriately combining known methods. Further, the method described in International Publication WO95 / 22969 or the method may be appropriately modified and synthesized.
[0023]
Moreover, the unsaturated fatty acid derivative of Formula 1-5 which has the liver disorder inhibitory effect of this invention can be isolated and purified through the following methods, for example from an avocado plant.
[0024]
The avocado plant used in the present invention is a plant belonging to the genus M. shearei, Persea. Alligator, Avocado, Americana (P. americana), Mexican (Mexican race), Guatemalan (Guatemalan race), West Indies (Indian race), etc., especially Americana (P. americana) Is preferred.
[0025]
The unsaturated fatty acid derivative having an inhibitory effect on liver damage of the present invention is contained in pulp, pericarp, seeds, leaves, petioles, branches, etc. of avocado plants, and processed products obtained by pulverizing, drying, concentrating, etc. However, since the substance is contained in a large amount in the flesh and pericarp, it is preferable to extract them from these tissues and processed products of those tissues.
[0026]
The avocado plant is extracted by a continuous method, a batch method, or the like, and is carried out for an arbitrary time by cold or digestion according to a conventional method. For example, the dry powder of an avocado plant is finely pulverized, and immersed in an extraction solvent at room temperature for 1 to 48 hours and / or shaken. Thereafter, the extraction residue is removed from the extract, and the extract is concentrated under reduced pressure or ultrafiltration. Further, if necessary, the solvent is distilled off.
[0027]
The solvent used for such extraction is preferably an organic solvent, more preferably a nonpolar organic solvent, and specifically includes n-hexane, cyclohexane, benzene, carbon tetrachloride, etc. Among them, n-hexane Is preferred.
[0028]
Although the extraction example of the substance which has the liver disorder inhibitory effect of this invention is illustrated below, this invention is not limited to this extraction example. First, an avocado plant is freeze-dried, and n-hexane, which is a non-water-soluble nonpolar organic solvent, is added to the dried powder to extract components soluble in the solvent. The amount of the solvent added to the avocado plant is preferably 1 to 200 ml, more preferably 5 to 50 ml, per 1 g of the dry powder. In the operation, after adding this solvent to the avocado plant, the mixture is stirred well with a stirrer or the like to extract a fraction soluble in a nonpolar organic solvent. This operation is usually preferably repeated 2 to 5 times. An oily extract is obtained by removing the solvent of the extract fraction thus obtained. The solvent can be removed by various commonly used removal methods such as evaporation of the solvent under normal pressure or reduced pressure.
[0029]
Furthermore, the above-mentioned extract is further separated and purified by chromatographic fractionation using various chromatographies such as adsorption chromatography and partition chromatography alone or in combination, and liver damage obtained by such fractionation. It is preferable to isolate and purify the unsaturated fatty acid derivative of formulas 1 to 5 contained in the hepatic disorder inhibitor of the present invention from the fraction containing a substance having an inhibitory action. Here, a fraction containing a substance having an inhibitory effect on liver damage (that is, a fraction containing an unsaturated fatty acid derivative) was subjected to thin-layer chromatography (silica gel 60, developing solvent; hexane / ethyl acetate = 4 / Since the Rf value in 1) is a value within the range of 0.19 to 0.25, the fraction can be selected using this as an index.
[0030]
Examples of chromatographic fractionation of the substance having an inhibitory effect on liver damage of the present invention are illustrated below, but are not limited thereto.
[0031]
The above-mentioned extract is dissolved in an eluate having a low elution power and is applied to a silica gel column as adsorption chromatography. Elution is carried out with an eluate whose elution power is increased stepwise, and the eluate is collected over time to be fractionated and separated and purified. By removing the solvent in the fractionated fraction, a fraction containing a substance having an inhibitory effect on liver damage can be obtained. The solvent can be removed by various commonly used removal methods such as evaporation of the solvent under normal pressure or reduced pressure. The fraction can be selected by the method described above.
[0032]
In addition, as a method for determining whether or not the extract and fractions described above contain a substance having a liver injury-inhibiting action, a known method for examining a liver damage action can be used. For example, a group in which such an extract or fraction is administered to a model animal such as a mouse for a certain period and a group in which such an extract or fraction is not administered are prepared, and a substance that induces liver damage such as D-galactosamine is added to each group. And GTP, GOP and the like in the model animal of each group are measured. It is possible to determine whether or not there is an effect by using such a measured value as an index of liver damage, and to determine whether or not a substance having an action of suppressing liver damage is contained.
[0033]
Then, the fraction containing the substance having a liver injury-inhibiting action is further fractionated by, for example, high performance liquid chromatography (HPLC) under conditions where the composition of the eluate is appropriately changed, and the novel compound of the present invention 1 to 3 and compounds 4 and 5 having an inhibitory effect on liver damage can be obtained. Identification of a compound isolated and purified by fractionation may be confirmed by a value measured according to a conventional method such as ¹ H-NMR, ¹³ C-NMR, IR spectrum, or UV spectrum.
[0034]
The hepatic disorder inhibitor of the present invention is characterized by containing the compounds of the above formulas 1 to 5 as active ingredients for suppressing hepatic disorder, but these compounds of the formulas 1 to 5 may be added alone. It is good and you may use combining two or more types.
[0035]
<2> Pharmaceutical composition for inhibiting liver damage containing the liver disorder inhibitor of the present invention The pharmaceutical composition of the present invention comprises the above-mentioned liver disorder inhibitor formulated according to a conventional method. There is no particular limitation as long as a suppressive action can be expected.
[0036]
The dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and is generally mixed with one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients, integrating agents, preservatives, stabilizers, flavoring agents and the like. , Tablets, granules, capsules, liquid medicines, drinks, etc. Such formulation can usually be formulated according to a method used for production of a medicine.
[0037]
The dosage of the above pharmaceutical composition varies depending on the type of disease, symptoms, patient age, body weight, etc., but it is preferable to administer 1 to 100 mg per day for adults in one or several divided doses. .
[0038]
<3> Food composition for inhibiting liver damage containing the liver disorder inhibitor of the present invention The food composition of the present invention is prepared by blending the above liver disorder inhibitor according to a conventional method.
[0039]
The food composition of the present invention is not particularly limited as long as it contains the above-mentioned hepatopathy inhibitor, but various foods, together with optional ingredients that are usually used as foods, food ingredients The required amount of extract can be added to When blending this extract, there is no particular consideration, and health foods and functional foods can be produced by processing and producing them by a normal production method. The blending amount is different depending on the kind of food, but in order to obtain a sufficient liver damage suppressing effect without impairing the taste of the food, it is blended at a ratio of 0.001 to 1% by weight with respect to the total amount of the food. Is preferred.
[0040]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples.
[0041]
[Example 1]
<Isolation and purification of unsaturated fatty acid derivative of the present invention>
The avocado pulp was freeze-dried to obtain a dry powder. This dry powder was fractionated according to the flow shown in FIG. 1 below and used for later evaluation.
[0042]
(A) Fractionation with hexane 1 L of n-hexane was added to 100 g of dry powder obtained by freeze-drying the pulp part of avocado, and after stirring sufficiently, the supernatant from which the residue was removed was obtained as a hexane extract. This operation was further repeated twice, and 3000 ml of hexane extract was obtained by a total of three operations. By concentrating this extract using an evaporator, 58.6 g of an oily concentrate was obtained from the hexane fraction.
[0043]
(B) Fractionation with ethyl acetate Next, 1 L of ethyl acetate was added to 41.4 g of the residue obtained in the above operation (a), and after sufficient stirring, a supernatant from which the residue was removed was obtained as an ethyl acetate extract. This operation was further repeated twice to obtain 3000 ml of ethyl acetate extract by a total of three operations. The extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 0.8 g of a solid from the ethyl acetate fraction.
[0044]
(C) Fractionation with 70% ethanol Next, 1 L of 70% ethanol was added to 40.6 g of the residue obtained in the above-mentioned operation (b), and after sufficient stirring, a supernatant from which the residue was removed was obtained as a 70% ethanol extract. This operation was further repeated 4 times, and 5000 ml of 70% ethanol extract was obtained by a total of 5 operations. The extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 16.0 g of a solid from the 70% ethanol fraction. In addition, 24.6 g of ethanol residue was obtained by the operation (c).
[0045]
(D) Fractionation with butyl alcohol (butanol) Next, 16.0 g of the concentrated dried product obtained by the above operation (c) was dissolved in 500 ml of distilled water. Then, 500 ml of n-butanol was added to this solution and sufficiently stirred, and then the butanol layer was extracted by countercurrent distribution using a separatory funnel. To the remaining aqueous layer, 500 ml of n-butyl alcohol was further added and sufficiently stirred, followed by extraction with n-butyl alcohol. This extraction was further repeated 3 times, and a total of 5 extraction operations yielded 2500 ml of butyl alcohol extract. The butyl alcohol extract was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 2.8 g of a solid from the butyl alcohol fraction.
[0046]
In addition, 13.2 g of a solid was obtained from the water-soluble fraction by concentrating and drying the solution in the aqueous layer portion using a freeze-drying apparatus in operation (d).
[0047]
Table 1 shows the distribution ratio (% by weight) to each fraction obtained by fractionation by the above operation. Here, the distribution ratio is a value obtained by dividing the weight of the solid matter obtained from each fraction by the weight (100 g) before the start of fractionation and multiplying by 100 to display the percentage.
[0048]
[Table 1]

[0049]
(E) Fractionation of hexane fraction with silica gel column The same operation as that of the operation (a) was performed again on an enlarged scale to obtain an oily concentrate of the hexane fraction. 100 g of the obtained dry solid was redissolved in 500 ml of a hexane / ethyl acetate mixed solvent (5/1) and applied to a silica gel column (silica gel 60, 8 × 73 cm manufactured by Merck), and the solvent whose composition was changed was Elute. The elution solvent used here was hexane / ethyl acetate (5/1), hexane / ethyl acetate (4/1), hexane / ethyl acetate (3/2), hexane / ethyl acetate (2/3), ethyl acetate. Methanol was applied to the column in this order and fractionated by collecting the eluate over time. These extracts were subjected to thin layer chromatography (silica gel 60 manufactured by Merck & Co., developing solvent; hexane / ethyl acetate = 4/1) and changed to the next elution solvent when no band having ultraviolet absorption could be confirmed. did. The fractions of these fractionated eluates are subjected to thin layer chromatography (silica gel 60, Merck & Co., developing solvent: hexane / ethyl acetate = 4/1), and finally the results of the Rf values are used as indices. Divided into 7 fractions. The yield of each fraction is 84.1 g for fraction (1), 1.2 g for fraction (2), 1.8 g for fraction (3), and 7.1 g for fraction (4). (5) was 1.9 g, fraction (6) was 1.5 g, and fraction (7) was 2.4 g. Table 2 shows the Rf value, the distribution rate, and the composition of the elution solvent in the thin layer chromatography of each fraction.
[0050]
[Table 2]

Next, after the above fractionation, fraction (4) was redissolved in an acetonitrile: water mixed solvent (98: 2), and an ODS column (Wakosil-II 5C18HG Prep, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used. The compound was subjected to the high performance liquid chromatography used (acetonitrile: water = 98: 2, UV / VIS detector: 220 nm) to obtain five compounds.
[0051]
The yield of each of these compounds is as shown in Table 3 below.
[0052]
[Table 3]

Here, the yield is a value obtained by dividing the weight of each compound obtained by the weight before the start of fractionation (test weight on the ODS column: 10.45 g) by multiplying by 100 and expressed in%. is there. And when the substance was identified about said compounds 1-5, the following results were obtained, respectively.
[0053]
(1) Compound 1
(1) Molecular weight 318 (C ₂₁ H ₃₄ O ₂ )
(2) Infrared absorption spectrum: 3420, 1740, 1667, 1616 cm ^-1
(3) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹ H-NMR, δ): 0.87 (3H, t, J = 6.9), 1.27 (4H, m), 1.34 (6H, m), 1.47 (2H, m), 2.05 ( 4H, m), 2.23 (2H, dt, J = 7.0,6.4), 2.75 (2H, dd, J = 6.1,6.1), 4.38 (2H, br, s), 5.30 (2H, m), 5.34 (2H , m), 6.29 (1H, dt, J = 14.3,1.2), 6.62 (1H, dt, J = 15.4,2.1), 6.91 (1H, m), 6.93 (1H, m)
(4) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹³ C-NMR, δ): 14.0, 22.5, 25.6, 27.1, 27.2, 28.0, 28.8, 29.3, 29.4, 31.5, 32.7, 62.2, 126.3, 127.8, 128.3, 129.2, 129.8, 130.3, 144.8, 148.7, 189.2.
(5) Color and properties: From the analysis result of colorless oil or more, Compound 1 was identified as a novel linoleic acid derivative having the following structural formula (1).
[0054]
Embedded image

[0055]
(2) Compound 2
(1) Molecular weight 320 (C ₂₁ H ₃₆ O ₂ )
(2) Infrared absorption spectrum: 3430, 1668cm ^-1
(3) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹ H-NMR, δ): 0.86 (3H, t, J = 6.8), 1.27 (14H, m), 1.57 (2H, m), 2.02 (4H, m), 2.51 ( 2H, t, J = 7.5), 2.78 (2H, t, J = 6.6), 4.3 (2H, m), 5.32 (4H, m), 6.33 (1H, ddd, J = 15.9,3.1,2.1), 6.85 (1H, dt, J = 15.9,4.0)
(4) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹³ C-NMR, δ): 13.9, 22.4, 24.0, 25.5, 27.0, 29.0, 29.1, 29.2, 29.5, 31.4, 40.0, 61.6, 127.76, 127.84, 127.9, 129.8, 130.0, 145.1, 201.0, 189,2
(5) Color and properties: From the analysis result of colorless oil or more, Compound 2 was identified as a novel linoleic acid derivative having the following structural formula (2).
[0056]
Embedded image

[0057]
(3) Compound 3
(1) Molecular weight 380 (C ₂₃ H ₄₀ O ₄ )
(2) Infrared absorption spectrum: 3454, 1741, 1667cm ^-1
(3) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹ H-NMR, δ): 0.84 (3H, t, J = 6.9), 1.22 (16H, m), 1.43 (2H, m), 2.00 (4H, m), 2.06 ( 3H, s), 2.19 (2H, m), 2.73 (2H, d, J = 6.1), 4.05 (1H, dd, J = 11.3,6.1), 4.10 (1H, dd, J = 11.3,4.1), 4.30 (1H, ddt, J = 4.1,6.1,6.1), 5.31 (2H, m), 6.07 (1H, d, J = 15.9), 6.85 (1H, dt, J = 15.9,7.0)
(4) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹³ C-NMR, δ): 14.0, 22.6, 27.1, 27.9, 29.1, 29.28, 29.31, 29.4, 29.56, 29.58, 29.6, 31.9, 32.5, 42.3, 66.1, 67.3, 130.2, 149.5, 171.0, 199.6
(5) Color and properties: From the analysis result of colorless oil or more, Compound 3 was identified as a novel oleic acid derivative having the following structural formula (3).
[0058]
Embedded image

[0059]
(4) Compound 4
Compound 4 was identified by IR and NMR in the same manner as compounds 1 to 3. As a result, linoleic acid derivative (molecular weight 378 (C ₂₃ H ₃₈ O ₄ ), colorless liquid substance, Bio Industry, 15,8.p.34-40 (1998)).
[0060]
Embedded image

[0061]
(5) Compound 5
The compound 5 was identified by IR and NMR in the same manner as the compounds 1 to 3. As a result, a linoleic acid derivative (molecular weight 380 (C ₂₃ H ₄₀ O ₄ ), colorless liquid substance, Natural Toxins, 3, p. 344-349 (1995)).
[0062]
Embedded image

[0063]
[Example 2]
Next, the hepatoprotective action of the above compounds 1 to 5 against chronic hepatitis was evaluated by a D-galactosamine-induced liver injury model using rats.
<Evaluation of liver disorder suppression effect>
The carbon tetrachloride-induced liver injury model is an acute toxic liver injury model, whereas this D-galactosamine-induced liver injury model is a chronic disease that suggests liver damage through the immune system. It is regarded as a model of hepatitis and has a high correlation with the evaluation results in clinical trials.
[0064]
For the evaluation, 6-week-old male Wistar rats were used. After 10 days of preliminary breeding, each group was grouped as 7 animals so that the average body weight of each group was almost equal. Each of the above compounds 1 to 5 is dissolved in avocado oil (the avocado pulp part is extracted with hexane, the extract is subjected to silica gel chromatography, and the triglyceride fraction is recovered) (concentration: 100 mg / 0.3 ml). ), And injected into the rat stomach using a catheter so that the rat body weight was 100 mg / kg.
[0065]
In the placebo treatment group and the control group, only avocado oil was injected into the stomach of rats using a catheter.
[0066]
Four hours after the administration of the above compound, D-galactosamine that induces liver damage was intraperitoneally administered at 350 mg / kg body weight of the rat, and blood was collected 22 hours later. In the placebo treatment group, physiological saline was intraperitoneally administered, and then blood was collected under the same conditions.
[0067]
Next, using this collected blood, an enzyme known to increase in blood concentration due to hepatocyte loss, that is, ALT: alanine aminotransferase (GPT) activity and AST: aspartate aminotransferase ( GOT) activity was measured with a commercially available measurement kit (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). The increase or decrease in enzyme activity was used as an index of liver injury. The results of increase / decrease in enzyme activity are shown in FIGS. 2 and 3, respectively.
[0068]
As shown in FIG. 2, the activity values of both enzymes were significantly increased in the control, suggesting that necrosis of hepatocytes occurred. On the other hand, in the group to which compounds 1 to 5 were administered, a clear liver injury inhibitory effect was observed in all groups.
[0069]
Note that the alphabets (a, b, c, d) shown in FIG. 2 have a statistically significant difference between groups that do not have a common alphabet with a risk rate of less than 5%. Shown (after analysis of variance, Duncan's test as a post-test).
[0070]
【The invention's effect】
Since the novel unsaturated fatty acid derivative of the present invention has an excellent liver injury-inhibiting effect, it can be used as an active ingredient of a liver injury inhibitor. Moreover, the liver disorder inhibitor which contains the unsaturated fatty acid derivative of this invention as an active ingredient has the outstanding liver disorder inhibitory effect, especially a chronic liver disorder inhibitory effect. Furthermore, since the liver injury inhibitor of the present invention is derived from a plant and is safe and easy to extract, a pharmaceutical or food composition containing the liver injury inhibitor that is easy to formulate is provided. be able to.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing an example of extracting an unsaturated fatty acid derivative having an action of suppressing liver damage from avocado.
FIG. 2 shows ALT (GPT) activity and AST (GOT) activity values 22 hours after drug administration.

Claims (3)

Following formula 1, 2, 4, or oleic acid derivative represented by linoleic acid derived thereof or Formula 3 below are represented by 5, or hepatopathy suppressing agent containing two or more combinations thereof as an active ingredient .

The pharmaceutical composition for liver disorder suppression containing the liver disorder inhibitor of Claim 1 . The composition for foodstuffs for liver disorder suppression containing the liver disorder inhibitor of the said Claim 1 .

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