JP4352805B2 - Hrp測定方法及び大腸菌群測定方法。 - Google Patents
Hrp測定方法及び大腸菌群測定方法。 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4352805B2 JP4352805B2 JP2003286402A JP2003286402A JP4352805B2 JP 4352805 B2 JP4352805 B2 JP 4352805B2 JP 2003286402 A JP2003286402 A JP 2003286402A JP 2003286402 A JP2003286402 A JP 2003286402A JP 4352805 B2 JP4352805 B2 JP 4352805B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- measurement
- hrp
- concentration
- ratio
- measuring
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
発明者らは、ピリドピリダジン構造を有する化学発光基質8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido(3,4-d)pyridazine-1,4(2H,3H)dioneと過酸化水素とp−ヨードフェノールとを含有する測定試薬を用いた本発明のHRP測定方法の創出にあたり、先ず前記化学発光基質の測定試薬における最適な濃度の検討を行なった。ここでは、前記化学発光基質の濃度を変化させた測定試薬と既知濃度のHRP含有試料とを反応させて生じた発光反応をルミノメータ(UPD−4000(明電舎製))によって測定し、SN比を比較することで評価した。評価手順を以下に示した。
8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido(3,4-d)pyridazine-1,4(2H,3H)dione sodium salt(和光純薬工業製codeNo.120-04891,以下、実施の形態においてL−012と称す)と過酸化水素とp−ヨードフェノールとをトリス緩衝液(0.05mol/l,pH7.5)において以下の濃度となるように調製して測定試薬を得た。
過酸化水素 0.5[mmol/l]
p−ヨードフェノール 0.182[mmol/l]
2)発光量の測定とその評価 既知濃度1×10-10[mol/l]のHRP含有試料0.1mlを前記調製した試薬1mlと反応させた後にルミノメータ(UPD−4000(明電舎製))によって30秒間発光量を測定した。そして、各測定値のSN比を比較した。表1に各L−012濃度に対するSN比を示した。
過酸化水素 0.05,0.1,0.25,0.5,1.0[mmol/l]
p−ヨードフェノール 0.182[mmol/l]
2)発光量の測定とその評価 既知濃度1×10-10[mol/l]のHRP含有試料0.1mlを前記調製した測定試薬1mlと反応させた後にルミノメータ(UPD−4000(明電舎製))によって30秒間発光量測定した。そして、各測定値のSN比を比較した。表2に各過酸化水素濃度に対するSN比を示した。
過酸化水素 0.5[mmol/l]
p−ヨードフェノール 0.182,0.20,0.25,0.30,0.35[mmol/l]
2)発光量の測定とその評価 既知濃度1×10-10[mol/l]のHRP含有試料0.1mlを前記調製した測定試薬1mlと反応させた後にルミノメータ(UPD−4000(明電舎製))によって30秒間発光量測定した。そして、各測定値のSN比を比較した。表3に各p−ヨードフェノール濃度に対するSN比を示した。
0.1[mol/l]のリン酸緩衝液(pH6.0)によってHRP濃度が1.0×10-13,1.0×10-12,1.0×10-11,1.0×10-10[mol/l]となるようにHRP含有試料を調製した。
i)L−012含有測定試薬の調製 0.05[mol/l]のトリス緩衝液(pH7.5)で、L−012の濃度が0.005[mmol/l]、過酸化水素の濃度が0.5[mmol/l]、p−ヨードフェノールの濃度が0.3[mmol/l]となるように調製して測定試薬を得た。
前記濃度のHRP含有試料と前記調製した測定試薬1mlとを反応させた後にルミノメータ(UPD−4000(明電舎製))によって5〜35秒間発光量測定し、SN比を比較した(ブランクは0.1mol/lリン酸緩衝液0.1ml)。表4に各測定試薬を使用したHRP濃度に対するSN比を示した。
次いで、HRP測定に基づく大腸菌群測定方法における発光量測定時間の最適化の検討を行なった。化学発光法に基づく測定において、反応を開始してから発光量の時間的変化は測定系によって異なっており、測定時間の設定は測定感度へ影響を与えることがある。そこで、大腸菌群の測定における発光量測定時間を以下の試験で最適化した。試験手順を以下に示した。
Claims (3)
- 化学発光基質と過酸化水素とp−ヨードフェノールとを含む測定試薬をHRPと反応させ、この反応時に測定された発光量に基づいてHRPの濃度を測定するHRPの測定方法において、前記化学発光基質は8-Amino-5-chloro-7-phenylpyrido(3,4-d)pyridazine-1,4(2H,3H)dioneであり、
前記化学発光基質の濃度を0.003〜0.006mmol/lとし、
前記過酸化水素の濃度を0.25〜0.75mmol/lとし、
前記p−ヨードフェノールの濃度を0.29〜0.35mmol/lとした
ことを特徴とするHRP測定方法。 - 試料中のHRP濃度を請求項1に記載のHRP測定方法によって測定し、この測定結果に基づき大腸菌群を測定する
ことを特徴とする大腸菌群測定方法。 - 前記HRP測定における発光量の測定時間を1〜30秒間とする
ことを特徴とする請求項2に記載の大腸菌群測定方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003286402A JP4352805B2 (ja) | 2003-08-05 | 2003-08-05 | Hrp測定方法及び大腸菌群測定方法。 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003286402A JP4352805B2 (ja) | 2003-08-05 | 2003-08-05 | Hrp測定方法及び大腸菌群測定方法。 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005052075A JP2005052075A (ja) | 2005-03-03 |
JP2005052075A5 JP2005052075A5 (ja) | 2006-08-31 |
JP4352805B2 true JP4352805B2 (ja) | 2009-10-28 |
Family
ID=34365705
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003286402A Expired - Fee Related JP4352805B2 (ja) | 2003-08-05 | 2003-08-05 | Hrp測定方法及び大腸菌群測定方法。 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4352805B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106990100B (zh) * | 2017-03-29 | 2020-06-23 | 武汉海吉力生物科技有限公司 | 一种稳定的hrp酶促化学发光底物液 |
-
2003
- 2003-08-05 JP JP2003286402A patent/JP4352805B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2005052075A (ja) | 2005-03-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Martín-Yerga et al. | Electrochemical immunosensor for anti-tissue transglutaminase antibodies based on the in situ detection of quantum dots | |
CA2742025C (en) | Method for increasing and regulating light emission from a chemiluminescent reaction | |
Ramos et al. | Enhanced chemiluminescence biosensor for the determination of phenolic compounds and hydrogen peroxide | |
WO2011143606A1 (en) | Homogeneous chemiluminescence assay methods with increased sensitivity | |
Dou et al. | Voltammetric immunoassay for the detection of protein biomarkers | |
CN113702308B (zh) | 用于大肠杆菌检测的适配体纳米比色生物传感器及应用 | |
WO1997001762A1 (en) | Method for quantitative measurement of an enzyme linked immunosorbent assay | |
JPWO2002095407A1 (ja) | イムノアッセイ法 | |
JP4352805B2 (ja) | Hrp測定方法及び大腸菌群測定方法。 | |
Shi et al. | A dip-and-read test strip for the determination of mercury (II) ion in aqueous samples based on urease activity inhibition | |
JP2005052075A5 (ja) | ||
Safronova et al. | Lateral flow immunoassay for progesterone detection | |
CN103675299A (zh) | 一种用于检测尿液中纤维连接蛋白浓度的试剂盒及其方法 | |
Chauhan et al. | Covalent immobilization of uricase inside a plastic vial for uric acid determination in serum and urine | |
Zhao et al. | The enzyme linked immunosorbent and chemiluminescence assay for the detection of human chorionic gonadotrophin using soybean peroxidase as label enzyme | |
Zhou et al. | An amperometric immunosensor based on a conducting immunocomposite electrode for the determination of schistosoma japonicum antigen | |
EP1192467B1 (en) | Chemiluminescence redox assay to quantify analytes in biological samples | |
Li et al. | Bacteria-modified amperometric immunosensor for a Brucella melitensis antibody assay | |
Zamuner et al. | Clinical trials: Electrochemical nanobiosensors and protein detection | |
Martini et al. | A suitable immunosensor for chloramphenicol determination: study of two different competitive formats | |
Kergaravat et al. | Magneto immunofluorescence assay for diagnosis of celiac disease | |
Zhong et al. | Silica sol-gel amperometric immunosensor for Schistosoma japonicum antibody assay | |
JP4256802B2 (ja) | 感作ラテックス及び免疫学的測定法 | |
Arseneault | An enzyme immunoassay for the quantitation of IgG in serum and cerebrospinal fluid | |
JP2001333797A (ja) | 標識酵素の計測方法および装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060714 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060714 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090414 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090615 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090707 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090720 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120807 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130807 Year of fee payment: 4 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |