JP4331282B2

JP4331282B2 - Integrin expression promoter

Info

Publication number: JP4331282B2
Application number: JP05207598A
Authority: JP
Inventors: 努藤村; 繁森脇; 吉則武馬
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 1998-03-04
Filing date: 1998-03-04
Publication date: 2009-09-16
Anticipated expiration: 2018-03-04
Also published as: JPH11246428A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、癌転移抑制あるいは動脈硬化症の予防、治療剤等として有用なインテグリンの発現促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
インテグリンは、細胞表面に発現し、細胞接着に関与する受容体である。かかるインテグリンの重要性は近年急速に増大しており、例えば白血球接着抑制、血小板凝集阻害、癌転移抑制、あるいは心筋梗塞、動脈硬化症、骨溶解性疾患等の治療、予防への応用が検討されている。
【０００３】
ところでこれまでインテグリンの研究は、例えば白血球接着抑制等インテグリンの発現を抑制する研究が主体であった。例えばＲＧＤペプチドを初めとするインテグリンに特異的な各種ペプチド（特開平８−３０１８５７号公報、特開平７−３０４７９５号公報、特開平７−１４９７９４号公報、特開平６−９２２８２号公報、特開平８−２０８６９２号公報、特開平６−２９３６５９号公報）や抗インテグリン抗体（特開平６−５４６９８号公報、特開平３−２１６６６６号公報）等がインテグリン阻害剤として知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、インテグリンの発現を促進することに有用性があると考えられるものに癌転移抑制等が挙げられるにも係わらず、インテグリンの発現を促進するための研究はほとんど進捗していないのが現状である。
【０００５】
したがって本発明は、インテグリンの発現促進剤を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記目的を達成すべく鋭意研究した結果、特定の植物又はその抽出物がインテグリンの発現を促進することができることを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち本発明は、ヒバマタ、ローズマリー、キウイ、ブクリョウ、ゴボウ、ニンジン及びコウソウからなる群より選ばれる１以上の植物又はその抽出物を有効成分とするインテグリン発現促進剤を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に用いるヒバマタ、ローズマリー、キウイ、ブクリョウ、ゴボウ、ニンジン及びコウソウは、すでに一般の皮膚外用剤、化粧料、医薬品の原料、基材、添加剤として知られているものである。また保湿効果、抗炎症効果、血行促進効果、養毛効果、美白効果等の効果があることが知られているものである。しかしこれらがインテグリンの発現を促進することについては全く知られていなかった。
インテグリンは、αサブユニット、βサブユニットからなり、αサブユニットは更にα１からα５、αＬ等が存在し、βサブユニットはβ１、β２、β３等が存在するが、各種結合組織に存在するコラーゲン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ラミニン等マトリックスと線維芽細胞など結合組織に存在する細胞との相互作用を考えると、これらのうちα２サブユニット、α５サブユニット、β１サブユニットの発現が促進されるのが好ましく、更にはα２サブユニットの発現が促進され、同時にβ１サブユニットの発現が促進されることがより望ましい。また、特に、皮膚線維芽細胞に関してはコラーゲンとの相互作用の観点からα２β１インテグリンの発現が促進されることが好ましい。
【０００９】
ここで植物とは、それらの全草又はそれらの葉、葉柄、茎、根、種子の１もしくは２以上の箇所（以下、「原体」と称する）又はこれを乾燥して粉砕したものである。また植物抽出物とは、原体を乾燥し又は乾燥することなく粉砕した後、常温又は加温下で溶剤により抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる、溶媒抽出液、その希釈液もしくは濃縮液、又はその乾燥末をいう。
【００１０】
抽出に用いる溶剤としては水、有機溶媒及びこれらの混合物が挙げられるが、特に有機溶媒、又は水と有機溶媒との混合物が好ましい。有機溶媒としては、炭化水素類、ハロゲン化炭化水素類、エステル類、アルコール類が挙げられるが、特にメタノール、ブタノール、プロパノール、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等のアルコール類が好ましい。
【００１１】
原体からの抽出は例えば以下のように行う。すなわち原体そのもの又は乾燥物もしくは乾燥粉砕物に溶媒を加え、１〜１００℃、好ましくは３〜７０℃で０．５〜３０日間、好ましくは１〜１５日間抽出する。次いで得られた抽出液を適宜濾過、静置、濾過等することにより植物抽出物を得ることができる。当該抽出物は希釈、濃縮もしくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製し、適宜製剤化してもよい。また、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の精製処理を行ってもよい。植物抽出物は、このようにして抽出したものを用いてもよく、市販品を利用してもよい。
【００１２】
前記の種々の植物又はその抽出物は、そのままでインテグリン発現促進剤として用いることもできるが、適宜製剤化して用いることもできる。
【００１３】
本発明のインテグリン発現促進剤中、前記植物又はその抽出物の含有量は、効果、配合性、使用感の観点から通常有効成分の乾燥固形分として０．００００１〜１０重量％が好ましく、０．０００１〜３重量％が特に好ましい。
【００１４】
本発明のインテグリン発現促進剤には、前記種々の植物又はその抽出物の他、通常使用される外用基材、他の薬効成分を配合できる。
ここで用いられる外用基材としては、油性基剤をベースとするもの、油／水、水／油型の乳化系基剤をベースとするもの、水をベースとするもののいずれであってもよい。油性基剤としては、特に制限はなく、例えば植物油、動物油、合成油、シリコーン油、脂肪酸、天然又は合成のグリセリド等が挙げられる。また、保湿剤、紫外線吸収剤、アルコール類、キレート類、pH調整剤、防腐剤、増粘剤、色素、香料等を任意に組み合わせて配合することができる。また、上記薬効成分としては特に制限はなく、例えば鎮痛消炎剤、殺菌消毒剤、ビタミン類、皮膚柔軟化剤等を必要に応じて適宜使用できる。皮膚外用剤の形態としては、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ジェル、パック剤、パップ剤、ファンデーション等が挙げられる。
【００１５】
インテグリン発現促進剤は外用及び内服のいずれの方法でも投与することができるが、外用投与が好ましく、皮膚外用剤の形態とすることが特に好ましい。
【００１６】
なお、インテグリンの検出には種々の方法があり、抗体を用いる方法としては例えばフローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ）、イムノブロッティング、ウエスタンブロッティング、抗体染色法などが挙げられ、ｍＲＮＡを用いる方法としては例えばＰＣＲ、ノーザンブロッティングなどが挙げられる。インテグリンの検出に用いる細胞としては実際に皮膚真皮組織に存在する皮膚線維芽細胞が最も好ましいが、肺線維芽細胞等他の組織の線維芽細胞でもよく、また、軟骨細胞等でも良い。
【００１７】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００１８】
製造例１〜１２
表１に示す各植物の部位の粉砕物１kgを抽出溶媒５リットルに室温で１週間浸漬し、溶媒可溶成分を抽出した。抽出液を分離した残渣について同様の操作を繰り返し、合計１０リットルの抽出液を得た。この抽出液の溶媒を留去し、減圧乾固し、抽出物を得た。なお、以下において、Ｗは水を、ＢＧは１，３−ブチレングリコール、ＥＴはエタノールを示す。
【００１９】
【表１】

【００２０】
試験例１インテグリン発現促進活性の測定
インテグリン発現活性は、Ｒｉｉｋｏｎｅｎらの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０，１３５４８（１９９５））に従い行った。
ヒト皮膚線維芽細胞（ヒト包皮由来）を９０mm培養ディッシュに播種し、（５％牛胎児血清（ＦＣＳ）含有ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ））、２４時間後、製造例１５、、１０、１１及び１２で得られた各エキスを最終濃度が０．０１〜０．００１重量％（乾燥固形換算重量％）をとなるように加え培養した。またコントロールとして用いた溶媒を加え培養した。４８時間後、細胞をトリプシン／ＥＤＴＡを作用させて細胞を剥がし、ＦＣＳにてトリプシンを中和し、遠心して上清を廃棄するなどして洗浄した。０．１％ＦＣＳ及び０．０２％ＮａＮ₃含有ＰＢＳにて同様に２回洗浄したのち、細胞に抗ヒトインテグリンα２抗体（ｍｏｕｓｅ，ＧＩＢＣＯ社）、抗ヒトインテグリンβ１抗体（ｍｏｕｓｅ，ＧＩＢＣＯ社）及び抗ヒトインテグリンα２β１抗体（ｍｏｕｓｅ，ＣＨＥＭＩＣＯＮ社）各１／１００〜１／２００濃度を４℃で３０分間作用させた。２度洗浄後、二次抗体としてＦＩＴＣ標識抗マウスＩｇＧ１抗体を１／１００濃度で、４℃で３０分間作用させたのち、３度洗浄を繰り返した後ＦＡＣＳｃａｎ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて分析した。ＦＡＣＳｃａｎのブランクとしては一次抗体にｍｏｕｓｅＩｇＧ（１μｇ／ml）を用いた。各蛍光強度よりブランク分を差し引き、コントロールを１００％としたときの相対蛍光強度を算出した。結果を表２に示す。
【００２１】
【表２】

【００２２】
表２より、上記植物抽出物の作用により、インテグリンの発現が促進することが確認された。
【００２３】
【発明の効果】
本発明のインテグリン発現促進剤は、優れたインテグリン発現促進剤を有するものであり、癌転移抑制等へ利用することが可能である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an integrin expression promoter useful as an agent for inhibiting cancer metastasis or preventing or treating arteriosclerosis.
[0002]
[Prior art]
Integrins are receptors that are expressed on the cell surface and are involved in cell adhesion. The importance of such integrins has increased rapidly in recent years. For example, leukocyte adhesion inhibition, platelet aggregation inhibition, cancer metastasis inhibition, or treatment and prevention of myocardial infarction, arteriosclerosis, osteolytic disease, etc. have been studied. ing.
[0003]
By the way, until now, integrin research has been mainly focused on research on suppressing integrin expression such as leukocyte adhesion suppression. For example, various peptides specific to integrin such as RGD peptide (JP-A-8-301857, JP-A-7-304795, JP-A-7-149794, JP-A-6-92282, JP-A-8 Nos. -208692 and JP-A-6-293659) and anti-integrin antibodies (JP-A-6-54698 and JP-A-3-216666) are known as integrin inhibitors.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
However, despite the fact that cancer metastasis suppression and the like are thought to be useful in promoting integrin expression, there are currently few studies to promote integrin expression. is there.
[0005]
Therefore, an object of the present invention is to provide an integrin expression promoter.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have found that a specific plant or an extract thereof can promote integrin expression, and have completed the present invention.
[0007]
That is, the present invention provides an integrin expression promoter comprising as an active ingredient at least one plant selected from the group consisting of Hibamata, rosemary, kiwi, bukkake, burdock, carrot and carp.
[0008]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hibamata, rosemary, kiwi, bukkake, burdock, carrot, and sorghum used in the present invention are already known as general skin external preparations, cosmetics, raw materials, base materials, and additives for cosmetics. It is also known to have effects such as a moisturizing effect, an anti-inflammatory effect, a blood circulation promoting effect, a hair nourishing effect, and a whitening effect. However, it was not known at all that these promote the expression of integrins.
Integrins are composed of α subunits and β subunits, α subunits further include α1 to α5, αL, etc., and β subunits include β1, β2, β3, etc., but collagens present in various connective tissues , Vitronectin, fibronectin, laminin, etc., and the interaction between the cells present in the connective tissue such as fibroblasts, it is preferable that the expression of α2 subunit, α5 subunit, and β1 subunit is promoted. Furthermore, it is more desirable that expression of α2 subunit is promoted and expression of β1 subunit is promoted at the same time. In particular, regarding skin fibroblasts, expression of α2β1 integrin is preferably promoted from the viewpoint of interaction with collagen.
[0009]
Here, the plant is one or more of those whole plants or their leaves, petiole, stems, roots, seeds (hereinafter referred to as “raw materials”) or those dried and pulverized. . In addition, the plant extract is obtained by drying the active ingredient or pulverizing without drying, followed by extraction with a solvent at room temperature or under heating, or extraction using an extraction instrument such as a Soxhlet extractor, Solvent extract, diluted or concentrated solution thereof, or dried powder thereof.
[0010]
Examples of the solvent used for extraction include water, an organic solvent, and a mixture thereof, and an organic solvent or a mixture of water and an organic solvent is particularly preferable. Examples of the organic solvent include hydrocarbons, halogenated hydrocarbons, esters, and alcohols, and alcohols such as methanol, butanol, propanol, ethanol, propylene glycol, and butylene glycol are particularly preferable.
[0011]
Extraction from the drug substance is performed as follows, for example. That is, a solvent is added to the raw material itself or a dried product or a dried pulverized product, and extracted at 1 to 100 ° C., preferably 3 to 70 ° C. for 0.5 to 30 days, preferably 1 to 15 days. Subsequently, a plant extract can be obtained by appropriately filtering, allowing to stand, filtering, etc. the obtained extract. The extract may be diluted, concentrated, or lyophilized, then prepared as a powder or paste, and formulated as appropriate. Moreover, you may perform refinement | purification processes, such as a deodorizing and a decoloring, by a well-known method as needed. What extracted in this way may be used for a plant extract, and a commercial item may be utilized for it.
[0012]
The above-mentioned various plants or extracts thereof can be used as they are as integrin expression promoters, but can be appropriately formulated and used.
[0013]
In the integrin expression promoter of the present invention, the content of the plant or the extract thereof is preferably 0.00001 to 10% by weight as the dry solid content of the active ingredient from the viewpoint of effect, compoundability, and feeling of use. 0001-3 wt% is particularly preferred.
[0014]
In the integrin expression promoter of the present invention, in addition to the above-mentioned various plants or extracts thereof, commonly used external base materials and other medicinal ingredients can be blended.
The external base material used here may be any of those based on an oily base, those based on an oil / water, water / oil type emulsifying base, and those based on water. . The oily base is not particularly limited, and examples thereof include vegetable oils, animal oils, synthetic oils, silicone oils, fatty acids, natural or synthetic glycerides, and the like. Moreover, a moisturizer, an ultraviolet absorber, alcohols, chelates, pH adjusters, preservatives, thickeners, pigments, fragrances, and the like can be combined in any combination. Moreover, there is no restriction | limiting in particular as said medicinal component, For example, an analgesic anti-inflammatory agent, a disinfection disinfectant, vitamins, a skin softening agent, etc. can be used suitably as needed. Examples of the external preparation for skin include ointments, creams, emulsions, lotions, gels, packs, poultices, foundations and the like.
[0015]
The integrin expression promoter can be administered by either external or internal use, but external administration is preferred, and it is particularly preferred to be in the form of a skin external preparation.
[0016]
There are various methods for detecting integrin. Examples of methods using antibodies include flow cytometry (FACScan), immunoblotting, Western blotting, antibody staining, etc. Examples of methods using mRNA include PCR, Northern blotting etc. are mentioned. As the cells used for the detection of integrin, dermal fibroblasts actually present in the skin dermis tissue are most preferred, but may be fibroblasts of other tissues such as lung fibroblasts, and may be chondrocytes or the like.
[0017]
【Example】
EXAMPLES Next, although an Example is given and this invention is demonstrated in detail, this invention is not limited to these Examples.
[0018]
Production Examples 1-12
1 kg of a pulverized product of each plant part shown in Table 1 was immersed in 5 liters of extraction solvent at room temperature for 1 week to extract solvent-soluble components. The same operation was repeated for the residue from which the extract was separated to obtain a total of 10 liters of extract. The solvent of this extract was distilled off and dried under reduced pressure to obtain an extract. In the following, W represents water, BG represents 1,3-butylene glycol, and ET represents ethanol.
[0019]
[Table 1]

[0020]
Test Example 1 Measurement of integrin expression promoting activity The integrin expression activity was performed according to the method of Riikon et al. (J. Biol. Chem., 270, 13548 (1995)).
Human skin fibroblasts (derived from human foreskin) were seeded in a 90 mm culture dish (5% fetal calf serum (FCS) -containing DMEM (GIBCO)), and after 24 hours, obtained in Production Examples 15, 10, 11 and 12. Each extract was added to a final concentration of 0.01 to 0.001% by weight (weight% in terms of dry solids) and cultured. Moreover, the solvent used as a control was added and cultured. After 48 hours, the cells were detached by allowing trypsin / EDTA to act, and neutralized with trypsin by FCS, centrifuged and discarded. After washing twice with PBS containing 0.1% FCS and 0.02% NaN _{3 in the same} manner, the cells were treated with anti-human integrin α2 antibody (mouse, GIBCO), anti-human integrin β1 antibody (mouse, GIBCO) and Each anti-human integrin α2β1 antibody (mouse, CHEMICON) at a concentration of 1/100 to 1/200 was allowed to act at 4 ° C. for 30 minutes. After washing twice, FITC-labeled anti-mouse IgG1 antibody was allowed to act as a secondary antibody at 1/100 concentration for 30 minutes at 4 ° C., then washed three times, and then analyzed using FACScan (Becton Dickinson). As a FACScan blank, mouse IgG (1 μg / ml) was used as the primary antibody. The blank portion was subtracted from each fluorescence intensity, and the relative fluorescence intensity when the control was 100% was calculated. The results are shown in Table 2.
[0021]
[Table 2]

[0022]
From Table 2, it was confirmed that the expression of integrin was promoted by the action of the plant extract.
[0023]
【The invention's effect】
The integrin expression promoter of the present invention has an excellent integrin expression promoter and can be used for cancer metastasis suppression and the like.

Claims

Fucus or integrin expression promoting agent for the extract thereof as an active ingredient (where the composition for inducing apoptosis to cancer cells, anticancer agents, anti-metastatic agents, carcinostatic agents, tumor cell metastasis inhibitors, arteriosclerosis prevention and Except when used as a therapeutic agent or a prophylactic / therapeutic agent for myocardial infarction ).

The integrin expression promoter according to claim 1, wherein the β subunit of integrin is β1.

The integrin expression promoter according to claim 1, wherein the α subunit of the integrin is α2 or α5.

The integrin expression promoter according to claim 1, wherein the integrin is integrin α2β1.