JP4288884B2 - 1,2-dioxetane derivative, luminescent reagent, luminescent method and measuring method - Google Patents
1,2-dioxetane derivative, luminescent reagent, luminescent method and measuring method Download PDFInfo
- Publication number
- JP4288884B2 JP4288884B2 JP2002057606A JP2002057606A JP4288884B2 JP 4288884 B2 JP4288884 B2 JP 4288884B2 JP 2002057606 A JP2002057606 A JP 2002057606A JP 2002057606 A JP2002057606 A JP 2002057606A JP 4288884 B2 JP4288884 B2 JP 4288884B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- compound
- general formula
- mmol
- dioxetane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Cc1ccccc1 Chemical compound Cc1ccccc1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】
本発明は、1,2−ジオキセタン誘導体に関する。本発明の1,2−ジオキセタン誘導体は化学発光を誘導することができる化合物であり、例えば免疫測定等の基質として使用することができる。
【0002】
【従来の技術】
1,2−ジオキセタン誘導体は、従来より種々合成されており、特に3位にスピロアダマンチル基が結合した化合物は化学発光基質として有用であることが知られている(例えば、特公平5−21918号公報及び特公平5−45590号公報参照)。また、本発明者らが既に製造したものとして、特開平8−245615号、特開平8−169885号、特開平8−165287号の各公報に記載の化合物が知られている。しかしながら、これらの1,2−ジオキセタン誘導体は、熱的な安定性については低いものであった。特開平9−216887号公報には、熱的安定性を改良した化合物が開示されている。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】
1,2−ジオキセタン誘導体に関しては前記のように様々な検討がなされ、種々の化合物が創出されている。しかしながら、臨床検査等の分野で応用するためには化合物自体が安定で取扱いが容易であり、かつ高い効率で発光を行うことができる等の性質が要求され、従来の化合物よりもさらに優れた化合物の創出が望まれていた。
【0004】
また、前記の特開平9−216887号公報記載の化合物をはじめ従来の化合物は、水系などのプロトン性溶媒中においてはその発光効率が著しく低下するものであり、実際に臨床検査における免疫測定に採用しても、測定条件がプロトン性溶媒である場合、実用に耐えうる程の強度を出すことが出来なかった。そこで、測定時には当該1,2−ジオキセタン誘導体以外の発光を増強させる物質をエンハンサーとして共存させなければならなかった。
【0005】
エンハンサーとしては、カチオン性界面活性剤(たとえばセチルトリメチルアンモニウムブロマイド,セチルジメチルベンジルアンモニウムクロライド)、水溶性重合第四級オニウム塩[第四級アンモニウム塩,第四級スルホニウム塩,第四級ホスホニウム塩を含む。たとえばポリ(ビニルベンジルジメチルベンジルアンモニウムクロライド),ポリ(ビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロライド),ポリ(ビニルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド)]、天然高分子(たとえばほ乳類の血清アルブミン,免疫グロブリン,血清リポ蛋白質など)等が用いられていた。しかしこれらを使用すると、粘性が高くなるなど取り扱いには注意が必要であった。従って、プロトン性溶媒中においてもエンハンサーを用いることなく高い発光効率を示すことができる化合物があれば、より有用である。
【0006】
【課題を解決するための手段】
本願発明者らは、前記のような状況の下、従来化合物よりもさらに優れた化合物を創出するために鋭意検討した結果、前記式(A)および(B)で表されるイソオキサゾール環などの複素五員環を結合した芳香環置換基を有する1,2−ジオキセタン誘導体が、水などのプロトン性溶媒中においてもエンハンサーを用いなくとも高い発光効率を示すことを見出し本発明を完成したものである。
【0007】
即ち本発明は、一般式(I)
【0008】
【化7】
【0009】
で表される1,2−ジオキセタン誘導体(式中、R1、R2はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基又はアリール基である。また、R1、R2は一体となり、ジオキセタン環にスピロ結合する環式又は多環式有機環基を形成することもできる。R3はアルキル基又はアリール基であり、R3とR1又はR2とが一体となってジオキセタン環とヘテロ原子を含む縮合環を形成してもよい。Arは式(A)
【0010】
【化8】
【0011】
(式中、R4はヒドロキシル基、アルコキシル基、アラルキルオキシ基、−OSi(R5R6R7)(ただし、R5、R6及びR7は互いに独立にアルキル基又はアリール基である。)で表される基、リン酸塩基又は−S(C=O)R8(ただし、R8はアルキル基又はアリール基である。)で表される基である。R9及びR10は互いに独立に水素原子、アルキル基、アリール基又はハロゲン原子であり、Xはハロゲン原子であり、Vは酸素原子又は硫黄原子である。)で表される基、又は式(B)
【0012】
【化9】
【0013】
(式中、R4は前記式(A)のR4と同じである。R11及びR12は互いに独立に水素原子、アルキル基、アリール基又はハロゲン原子であり、Yはハロゲン原子であり、Wは酸素原子又は硫黄原子である。)で表される基である。)である。
【0014】
また本発明は、上述の1,2−ジオキセタン誘導体を含有してなることを特徴とする化学発光試薬である。さらに本発明は、上述の1,2−ジオキセタン誘導体を分解し化学発光を生じさせることを特徴とする、発光方法である。更に本発明は、上述の発光方法を用いて、試料中の検出物質を測定することを特徴とする測定方法である。更に本発明は、1,2−ジオキセタン構造を有する化合物を、プロトン性溶媒中で他のエンハンサーの非共存下に発光させることを特徴とする発光方法である。以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【0015】
本明細書中で「アルキル基」とは、置換基を有していてもよい炭素数1〜20個の直鎖状、分枝鎖状または環状のアルキル基をいい、そのアルキル基は、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニルの直鎖の基及び前記のアルキル基が適宜分枝状に結合した基、またはそれらが環状となった基をいう。前記の有していてもよい置換基とは、例えば、ヒドロキシル基、アルコキシル基、アリール基等である。そのアルコキシル基としては、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、メトキシエトキシ、メトキシプロポキシ、エトキシエトキシ、エトキシプロポキシ、メトキシエトキシエトキシ基等の炭素数1〜20個のアルコキシル基が直鎖状又は分枝状に1〜5個結合したもの等を挙げることができる。また前記アリール基としては、例えば、フェニル、ナフチル基等の炭素数6〜20個の芳香族炭化水素基、及び、フリル、チエニル、ピリジル基等の環内に1〜5個の窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を有するヘテロアリール基等を挙げることができる。
【0016】
また、本明細書中で「アルコキシル基」とは、前記したアルキル基に置換してもよいアルコキシル基と同じものを挙げることができ、「アリール基」とは、これも前記したアルキル基に置換してもよいアリール基と同じものを挙げることができる。さらに、本願明細書中で「多環式有機環基」とは、C1〜C10アルキル、C1〜C10アルコキシ、ハロゲン及びハロ−C1〜C10アルキルの中から独立して選択した1〜10個の基で任意に置換された炭素原子数6〜30の多環式アルキレンであり、例えばアダマンチル基、ビシクロ[2.2.1]ヘプチル等である。また、その多環式有機環基の任意の炭素にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、シアノ基、アミド基、アルコキシ基あるいはカルボキシル基が結合していても構わない。「アラルキルオキシ基」とは、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ基等の炭素数7〜20の基であり、「ハロゲン原子」とはフッ素、塩素、臭素等である。
【0017】
また一般式(I)において、R3とR1またはR2とが一体となってジオキセタン環とヘテロ原子を含む縮合環を形成する場合としては、例えばジオキセタン環とフラン環との縮合環、またはジオキセタン環とピラン環との縮合環を例示することができる。
【0018】
本発明においては、上記一般式(I)においてArが式(a)
【0019】
【化10】
【0020】
(式中、R4、R9、R10、X及びVは前記式(A)のR4、R9、R10、X及びVと同じである。)で表される基、または式(b)
【0021】
【化11】
【0022】
(式中、R4、R11、R12、Y及びWは前記式(B)のR4、R11、R12、Y及びWと同じである。)で表される基であるものが好ましい。
【0023】
上記一般式(I)において、R3とR1又はR2とが一体となってジオキセタン環とフラン環の縮合環を形成している場合が好ましく、より好ましくは、R3と縮合環を形成していないR2又はR1が炭素数3〜4のアルキル基である。中でも、一般式(I’)
【0024】
【化12】
【0025】
(式中、R4は前記と同様)で表される化合物は、特に好ましいものである。
【0026】
本発明の前記一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体は、一般式(II)
【0027】
【化13】
【0028】
(式中、R1〜R3は一般式(I)のR1〜R3と同じであり、R41はアルコキシル基又はアラルキルオキシ基である。また、(R41)Arは、式(A')
【0029】
【化14】
【0030】
(式中、R9、R10、X及びVは前記式(A)のR9、R10、X及びVと同じであり、R41は前記一般式(II)のR41と同じである。)で表される基又は式(B')
【0031】
【化15】
【0032】
(式中、R11、R12、Y及びWは前記式(B)のR11、R12、Y及びWと同じであり、R41は前記一般式(II)のR41と同じである。))で表されるR41で置換されたアリール基を有するエノールエーテル誘導体から下記反応式に従って製造することができる。
【0033】
【化16】
【0034】
(式中、R1〜R3及びR41は前記一般式(I)(II)のR1〜R3及びR41と同じである。R42は−OSi(R5R6R7)(ただし、R5、R6及びR7は前記と同じである。)で表される基又は式
【0035】
【化17】
【0036】
(式中、R13及びR14はアルカリ金属、四級アンモニウム塩又はアルキル基であり、R13及びR14が一体となり環を形成してもよい基である。)で表される基である。一般式(III)で表される化合物の(HO)Arで表される基は、一般式(II)の置換基R41の位置と同じ位置にOH基を有するものであり、一般式(IV)の(R42)Arは、一般式(II)の置換基R41の位置と同じ位置に置換基R42を有するものである。)
(第1工程)本工程は、前記一般式(II)で表される化合物の脱保護反応を行い一般式(III)で表される化合物を製造するものである。脱保護反応に供する化合物としては、前記一般式(II)(ここでR1〜R3は前記と同じであり、R41はヒドロキシル基の保護基(好ましくは、メトキシ基又はベンジルオキシ基である。)である。)で表される化合物で、本反応は当業者に熟知された方法、即ちアルキルチオールのアニオンを反応させ行うかあるいは水素添加反応に付すことにより行うことができるが、どちらの反応を選択するかは脱保護すべき基により適宜選択すればよい。
【0037】
(第2工程)本工程は、前記一般式(III)で表される化合物に、シリルオキシ基あるいはリン酸基形成のため対応するハロゲン化トリアルキルシランあるいはハロゲン化ホスフェートを反応させ、一般式(IV)で表される化合物を製造するものである。本工程において、例えばリン酸基導入のためクロロエチレンホスフェートを反応させた場合には、シアン化ナトリウムでシアノエチルホスフェートのナトリウム塩に変換し、さらにシアノエチル基を脱離し、アンモニウムナトリウム塩に変換することができる。このアンモニウム ナトリウム塩は、例えば炭酸水素ナトリウムと反応させることにより容易にジナトリウム塩に変換できる。
【0038】
(第3工程)本工程は一般式(II)、(III)又は(IV)で表される化合物を一重項酸素と反応させ、前記一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体を製造するものである。一重項酸素との反応は、前記一般式(II)、(III)又は(IV)で表されるエノールエーテル誘導体を、メチレンブルー、ローズベンガル、テトラフェニルポルフィン(TPP)等の光増感剤の共存下、酸素雰囲気の下で可視光照射を行うことにより達成される。このとき、溶媒はジクロロメタン、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素又はメタノール、エタノール等のアルコール等を用いることができる。なお、反応は−80℃〜室温で行うことが好ましい。
【0039】
前記一般式(II)で表されるエノールエーテル誘導体の製造方法は、例えば、下記の方法を挙げることができる。
【0040】
【化18】
【0041】
(式中、R1〜R3及びR41は前記一般式(I)(II)のR1〜R3及びR41と同じである。R15及びR16はアルキル基あるいはR15及びR16が一体となり環を形成してもよい基である。)
(第1A工程)本工程は、一般式(1A)で表される芳香族カルボン酸エステルと一般式(2A)で表されるケトンとを反応させ、一般式(II)で表されるエノールエーテル誘導体を製造するものである。反応はチタンの存在下に行うことを必須の要件とするものである。通常、チタンは塩化チタン等のハロゲン化チタンを水素化リチウムアルミニウム等の還元剤及びトリエチルアミン等の塩基を用いて還元状態を形成させ、反応に供することが好ましい。反応を行うにあたってはテトラヒドロフラン(THF)等の有機エーテル中で行うことができる。反応は0〜100℃で進行するが、THFの還流下に行うことが操作及び反応性の観点から好ましい。
【0042】
(第1B工程)本工程は一般式(1B)で表されるアリールメチルホスホネートと前記一般式(2B)で表されるケトンとを反応させ前記一般式(II)で表されるエノールエーテル誘導体を製造するものである。
【0043】
前記一般式(1B)で表されるアリールメチルホスホネートは前記特公平5−45590号に記載の方法に従い容易に製造することができる化合物である。ジイソプロピルアミンをブチルリチウム等を用いてリチウムアミドを形成させ、反応に供することが好ましい。反応を行うにあたってはテトラヒドロフラン(THF)等の有機エーテル中で行うことができる。反応は−78℃〜室温で行うことが好ましい。
【0044】
前記一般式(II)で表される化合物がジヒドロフラン誘導体の場合の製造方法は、例えば、下記の方法を挙げることができる。
【0045】
【化19】
【0046】
(式中、R17、R18、R19、R20、及びR21はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基又はアリール基である。またR18とR19、R20とR21、R17とR19、R17とR20、及びR18とR20は一体となり、それぞれ独立に環状アルキル基を形成することができる。R41は前記と同じである。R22はハロゲン原子、置換スルホニルオキシ基又はヒドロキシル基である。)。
【0047】
(第1C工程)本工程は、前記一般式(1C)で表される化合物を前記一般式(2C)で表される化合物と反応させることによって前記一般式(3C)で表される化合物を製造するものである。反応は当業者に熟知された、いわゆる、ウィリアムソン合成により達成することができる。ここで、一般式(1C)で表される化合物の置換基R22がハロゲン原子又は置換スルホニルオキシ基である場合は直接反応に付し、R22がヒドロキシル基である場合には、一旦反応系中でハロゲン化トシル等によりスルホニルオキシ基に変換してから反応に付すことで本工程を達成することができる。
【0048】
(第2C工程)本工程は、前記一般式(3C)で表される化合物を酸化することによって、前記一般式(4C)で表される化合物を製造するものである。本工程における酸化は、クロム系酸化剤又は活性化剤を用いることにより行うことができる。前記クロム系酸化剤としてはピリジニウムクロロクロメート(PCC)、ピリジニウムジクロロクロメート(PDC)等を用いることができ、この時、溶媒はジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素を用いることができる。また、前記活性化剤を用いる場合は、Py・SO3/トリエチルアミン/DMSO、Ac2O/DMSO系等のような溶媒との組み合わせで反応を行うことができる。
【0049】
(第3C工程)本工程は、前記一般式(4C)で表される化合物を閉環させ、前記一般式(5C)で表される化合物を製造するものである。反応はリチウムジイソプロピルアミド等の2級アミンのリチウム塩又はt−ブトキシカリウム等の塩基を用いて行うものである。溶媒としては、THF、DMSO等の有機溶媒を用いることができ、0℃〜室温で、1〜5時間反応を行うことが好ましい。
【0050】
(第4C工程)本工程は、前記一般式(5C)で表される化合物を臭素化し、前記一般式(6C)で表される化合物を製造するものである。反応は、N−ブロモスクシンイミド等の臭素化剤を用いることにより達成される。溶媒としては、含水THF、ジオキサン、DMF等の有機溶媒を用いて行うことができる。
【0051】
(第5C工程)本工程は、前記一般式(6C)で表される化合物を脱水することによって、前記一般式(7C)で表される化合物を製造するものである。反応はピリジン等の塩基の存在下、塩化チオニルを作用させるか又はリン酸、p−トルエンスルホン酸等の酸を触媒として用いることができる。溶媒としては、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素又はトルエン等の芳香族炭化水素を用いることができ、作用させる試薬によって、適宜選択することができる。
【0052】
(第6C工程)本工程は前記一般式(7C)で表される化合物から前記一般式(II’)で表される化合物を製造するものである。反応は前記一般式(7C)で表される化合物の臭素を置換することにより目的の置換基を導入した前記一般式(II’)で表される化合物を製造するものである。置換アミノ基を導入するには、ブチルリチウム等のリチウム塩を用い、カルボキシル基を導入し、次いでカルボニルイミダゾールを縮合剤として用い、アミン又はアンモニアと反応させることによって行うことができる。さらに、上記反応によって製造されたアミドから、例えば、オキサゾリン環を有する化合物とするには、置換又は無置換のエタノールアミンを作用させることにより行うことができる。また、アシル基を導入するには、前記と同様にブチルリチウム等のリチウム塩を用い、N−メチルホルムアニリドと反応させるか又はアセトアルデヒド、ベンズアルデヒド等のアルデヒドと反応させた後、二酸化マンガン等の酸化剤により、ヒドロキシルβ基を酸化させることによって達成される。ここで、アシル基を導入した化合物は、アシル基をヒドロキシイミノ基に変換し、そのジアニオンと相当するアミドまたはエステルを反応させ、脱水を経てイソオキサゾール環を形成できる。別の方法としては、アシル基を導入した化合物をβ−ジケトンタイプの置換基に変換し、そこにヒドロキシアミンを反応させイソオキサゾール環を形成できる。
【0053】
前記一般式(II)で表される化合物がジヒドロピラン誘導体の場合の製造方法は、例えば、下記の方法を挙げることができる。
【0054】
【化20】
【0055】
(式中、R23、R24、R25、R26、R27、R28及びR29はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基又はアリール基である。またR24とR25、R26とR27、R28とR29、R23とR24、R23とR26、R23とR28、R24とR26、R24とR28、及びR26とR28は一体となり、それぞれ独立に環状アルキル基を形成することができる。R41及びR22は前記と同じである。)。
【0056】
(第1D工程、第2D工程、第3D工程、第4D工程、第5D工程及び第6D工程)これらの工程によって前記一般式(7D)で表される化合物を製造する方法は、前記第1C工程、第2C工程、第3C工程、第4C工程、第5C工程及び第6C工程と同様にして達成することができる。
【0057】
本発明の一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体は、アルカリ性条件下で化学発光を伴ってカルボニル化合物に分解するほか、アリールエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ等のエステラーゼ(カルボン酸エステルヒドロラーゼ)、アルカリ性フォスファターゼ等の酵素、テトラブチルアンモニウムフルオライド等のフッ素化合物、酸性又はアミン化合物によって、化学発光を伴って分解する。
【0058】
従って、一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体は化学発光試薬となる。この化学発光を伴う1,2−ジオキセタン誘導体の分解は、他のエンハンサーの共存下に行ってもよく、また他のエンハンサーの非共存下に行ってもよい。一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体は、化学発光を伴う分解がプロトン性溶媒中で行われても、かつ他のエンハンサーの非共存下で行われても高い発光量子収率を示すことが特徴の1つである。発光量子収率としては1%以上が好ましく、更に好ましくは10%以上、とりわけ20%以上のものが好ましい。
【0059】
また本発明の化学発光試薬は、試料中の検出物質の濃度を求めることを目的とするあらゆる測定法に利用でき、例えば免疫測定法における免疫測定試薬として利用することができるほか、酵素検定法;化学検定法;ヌクレオチドプローブ法等にも用いることができる。
【0060】
上記免疫測定法における検出物質としては、例えば、hCG、TSH、LH等のホルモン、AFP、CEA等の癌関連物質、HIV、HTLV−I等のウイルス抗原並びにその抗体及び核酸(DNA、RNA)等を挙げることができる。
【0061】
上記免疫測定法としては、例えば、上記のような検出物質に対する特異的結合性を有する物質に上記酵素をあらかじめ結合させておき、これと検出物質を含む試料を混合し、一定時間反応させて、試料中の検出物質とそれに結合性を有する物質とを結合させる工程、及び、結合したか又は結合しなかった結合性を有する物質の量を求める工程より行うことができる。前記結合したか又は結合しなかった結合性を有する物質の量を求める工程は、酵素と本発明の1,2−ジオキセタン誘導体とを反応させ、酵素量に比例して1,2−ジオキセタン誘導体からの発光強度が増大するので、この発光強度を測定することによって該物質の濃度を求めることができる。
【0062】
本発明の1,2−ジオキセタン誘導体を含有する免疫測定試薬及びそれを用いた前記のような免疫測定も本発明の一つである。
【0063】
本発明の一般式(I)で表される1,2−ジオキセタン誘導体は、量子収率の高い安定な発光効率を示すことができ、かつ熱的安定性が高く、冷蔵保存によっては1年後に分解産物が全く見られない程安定な化合物である。よって、発光の測定を簡便に効率良く行うことができ、例えば、臨床検査の分野等で有用である。
【0064】
【実施例】
以下、実施例及び参考例により本発明を詳細に説明する。しかし本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【0065】
(参考例1)
【0066】
【化21】
【0067】
窒素雰囲気下、0℃で60%水素化ナトリウム2.12g(53.0mmol)をDMF80mLに懸濁した溶液にDMF15mLに溶解した2,2,4,4−テトラメチル−1,3−ペンタンジオール(化合物〔2〕)7.05g(44.1mmol)を30分間かけて滴下し、さらに30分間撹拌した。この溶液に、DMF15mLに溶解した3−メトキシベンジルクロライド(化合物〔1〕)9.07g(57.9mmol)を30分かけて滴下した後12時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に投じ酢酸エチルで抽出した。抽出層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウム乾燥後濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの10:1混合溶媒で流しだしたところ1−(3−メトキシベンジルオキシ)−2,2,4,4−テトラメチル−3−ペンタノール(化合物〔3〕)を10.7g、収率86.7%で無色油状物として得た。
【0068】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.03(s,9H),1.04(s,3H),1.07(s,3H),3.23(d,J=4.9Hz,1H),3.25(d,J=8.8Hz,1H),3.41(d,J=8.8Hz,1H),3.43(d,J=4.9Hz,1H),3.81(s,3H),4.48(s,2H),6.81−6.91(m,3H),7.23−7.28(m,1H)ppm
IR(liquid film);3502,2954,2870,1489,1457,1267,1080,1053cm-1
Mass(m/z,%);280(M+,2),135(31),121(100),107(8),91(9),69(13),55(14)。
【0069】
(参考例2)
【0070】
【化22】
【0071】
窒素雰囲気下、室温でセライト9.9gおよび1−(3−メトキシベンジルオキシ)−2,2,4,4−テトラメチル−3−ペンタノール(化合物〔3〕)4.61g(16.5mmol)をジクロロメタン75mLに加え撹拌した。この溶液にPCC4.26g(19.7mmol)を加え7時間撹拌した後、PCC800mg(3.71mmol)をさらに加え一晩撹拌した。反応混合物にエーテルを加えセライト濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルカラムにかけヘキサンと酢酸エチルの10:1の混合溶媒で流しだしたところ、1−(3−メトキシベンジルオキシ)−2,2,4,4−テトラメチル−3−ペンタノン(化合物〔4〕)を4.32g、収率94.4%で無色油状物として得た。
【0072】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.23(s,9H),1.28(s,6H),3.50(s,2H),3.80(s,3H),4.47(s,2H),6.78−6.88(m,3H),7.23(t,J=8.1Hz,1H)ppm
IR(liquid film);2959,2870,1658,1480,1466,1458,1267,1108,1049cm-1
Mass(m/z,%);278(M+,100),222(50),121(31),97(5),55(8)。
【0073】
(参考例3)
【0074】
【化23】
【0075】
窒素雰囲気下、室温で無水THF15mLにジイソプロピルアミン1.50mL(11.4mmol)および1.6Mブチルリチウムヘキサン溶液6.60mL(10.6mmol)を加え、30分間撹拌した。この溶液に−78℃で、THF10mLに溶解した1−(3−メトキシベンジルオキシ)−2,2,4,4−テトラメチル−3−ペンタノン(化合物〔4〕)1.48g(5.32mmol)を加え2時間撹拌した。反応溶液を徐々に室温に昇温しながら3時間20分間撹拌した。反応混合物を飽和食塩水に投じ酢酸エチルで抽出した。抽出層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウム乾燥後濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの1:2混合溶媒で流しだしたところ3−t−ブチル−3−ヒドロキシ−2−(3−メトキシフェニル)−4,4−ジメチル−2,3,4,5−テトラヒドロフラン(化合物〔5〕)が1.30g、収率87.8%で得られた。
融点;83.0−83.5℃(無色粒状晶、ヘキサンと酢酸エチルより再結晶)。
【0076】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ0.90(broad s,9H),1.19(s,3H),1.39(s,3H),1.92(s,1H),3.80(qAB,J=8.1Hz,2H),3.80(s,3H),5.00(s,1H),6.80(dd,J=7.8 and 2.4Hz,1H),7.10(d,J=2.4Hz,1H),7.11(d,J=7.8Hz,1H),7.21(t,J=7.8Hz,1H)ppm
IR(liquid film);3493,2962,2881,1591,1481,1278,1070,1048cm-1
Mass(m/z,%);278(M+,1),260(29),245(100),203(12),189(45),135(52),121(10),107(11),77(9),55(33)。
【0077】
(参考例4)
【0078】
【化24】
【0079】
3−t−ブチル−3−ヒドロキシ−2−(3−メトキシフェニル)−4,4−ジメチル−2,3,4,5−テトラヒドロフラン(化合物〔5〕)2.16g(7.77mmol)をTHF20mLとH2O2mLの混合溶媒に加え0℃で撹拌した。この溶液にNBS1.54g(8.65mmol)を加え徐々に室温にしながら一晩撹拌した後、さらにNBS140mg(0.787mmol)を加え6時間撹拌した。反応混合物を飽和食塩水に投じ酢酸エチルで抽出した。抽出層をチオ硫酸ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム乾燥後濃縮した。濃縮物を酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒より結晶化したところ、2−(4−ブロモ−3−メトキシフェニル)−3−t−ブチル−3−ヒドロキシ−4,4−ジメチル−2,3,4,5−テトラヒドロフラン(化合物〔6〕)が1.323g、収率47.7%で得られた。
【0080】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ0.89(s,9H),1.20(s,3H),1.38(s,3H),1.92(s,1H),3.80(qAB,J=8.3Hz,2H),3.89(s,3H),4.98(s,1H),7.02(dd,J=8.1 and 2.0Hz,1H),7.12(d,J=2.0Hz,1H),7.45(d,J=8.1Hz,1H)ppm
Mass(m/z,%);358(M++2,2.4),356(M+,2.5),340(19),338(20),325(79),323(84),215(73),213(67),201(18),199(19),109(10),55(100)。
【0081】
(参考例5)
【0082】
【化25】
【0083】
室温、窒素雰囲気下で無水トルエン30mLに、4−t−ブチル−5−(4−ブロモ−3−メトキシフェニル)−4−ヒドロキシ−3,3−ジメチル−2,3,4,5−テトラヒドロフラン(化合物〔6〕)4.68g(13mmol)を加え、10分撹拌した。この反応溶液にp−トルエンスルホン酸1水和物0.27g(1.4mmol、0.1当量)を加え、120℃にして30分撹拌した。反応溶液を室温まで戻し、これを酢酸エチルと飽和食塩水の混合溶液に投じ、抽出を行った。得られた有機層を飽和食塩水にて洗浄した。この有機層を硫酸マグネシウムにて乾燥し、濃縮した。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの2:1混合溶媒にて流しだしたところ4−t−ブチル−5−(4−ブロモ−3−メトキシフェニル)−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔7〕)を3.78g(11.2mmol)、収率85%で無色油状物として得た。
【0084】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.06(s,9H),1.33(s,6H),3.87(s,2H),3.9(s,3H),6.79(dd,J=7.9 and 1.6Hz,1H),6.82(d,J=1.6Hz,1H),7.49(d,J=7.9Hz,1H)ppm
IR(liquid film);2957,2866,1739,1650,1570,1480,1392,1237,1049,1025,795cm-1Mass(m/z,%);340(M++2,26),338(M+,26),325(97),323(100),283(6),282(3),281(4),187(7),185(5),172(4),170(3),77(7),55(67)。
【0085】
(参考例6)
【0086】
【化26】
【0087】
窒素雰囲気下、室温において、4−t−ブチル−5−(4−ブロモ−3−メトキシフェニル)−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔7〕)5.05g(14.88mmol)を溶かしたTHF(50mL)溶液に、−78℃にて1.63Mブチルリチウムヘキサン溶液(10.5mL,17.1mmol)を加え、15分撹拌した後、ヘキサンに溶解したアセトアルデヒド(14.0mL,45.1mmol)を加え、30分撹拌した。その反応溶液に少量のH20を滴下して反応を停止し、飽和塩化アンモニウム水溶液(100mL)に投じ、酢酸エチル(100mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(100mL)で再度抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水(200mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色油状物(4.93g)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの4:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の4−t−ブチル−5−〔4−(1−ヒドロキシエチル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔8〕)を無色固体(3.73g,12.25mmol,82.3%)として得た。
【0088】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.06(s,9H),1.34(s,6H),1.49(d,J=6.2Hz,3H),2.60(d,J=4.9Hz,1H),3.87(s,3H),3.87(s,2H),5.08(pent,J=6.2Hz,1H),6.79(s,lH),6.90(d,J=7.6Hz,1H),7.28(d,J=7.6Hz,1H)ppm
13CNMR(125MHz,CDCl3);δ22.9,27.4,32.4,32.5,47.1,66.3,83.0,111.9,122.5,125.5,125.6,133.3,136.2,149.8,156.0ppm
IR(KBr);3491,2962,2870,1651,1604,1461,1402,1229,1129,1088,859cm-1
Mass(m/z,%);304(M+,5),303(9),287(19),271(100),177(14),161(69),149(10),135(11),111(23),55(88)。
【0089】
(参考例7)
【0090】
【化27】
【0091】
窒素雰囲気下、室温において、4−t−ブチル−5−〔4−(1−ヒドロキシエチル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔8〕)(1.02g,3.351mmol)を溶解させたDMSO(10mL)とTHF(5mL)の溶液に、トリエチルアミン(1.65mL,11.8mmol)、ピリジン三酸化硫黄錯体(1.60g,10.1mmol)を加えて一時間撹拌した。その反応溶液を飽和食塩水(50mL)に投じ、酢酸エチル(50mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(50mL)で再度抽出を行い先の有機層と合わせ、飽和食塩水(100mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色油状物(1.02g)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの4:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の5−(4−アセチル−3−メトキシフェニル)−4−t−ブチル−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔9〕)を無色固体(943mg,3.118mmol,93.0%)として得た。
【0092】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.07(s,9H),1.34(s,6H),2.61(s,3H),3.89(s,2H),3.92(s,3H),6.89(d,J=1.3Hz,1H),6.95(dd,J=7.8and 1.3Hz,1H),7.70(d,J=7.8Hz,1H)ppm
13CNMR(100MHz,CDCl3);δ27.3,31.8,32.4,32.4,47.3,55.5,83.8,113.1,122.4,126.4,127.7,129.9,141.8,148.8,158.4,199.4ppm
IR(KBr);2957,2868,1676,1600,1560,1463,1401,1232,1053cm-1
Mass(m/z,%);302(M+,27),287(100),231(40),203(14),177(78),149(9),135(6),55(48)。
【0093】
(参考例8)
【0094】
【化28】
【0095】
室温にて5−(4−アセチル−3−メトキシフェニル)−4−t−ブチル−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔9〕)(1.35g,4.464mmol)を溶かしたエタノール(15mL)溶液に、炭酸水素ナトリウム(562mg,6.69mmol)を加えた後、塩酸ヒドロキシルアミン(472mg,6.79mmol)を加え、90℃にして30分還流した。その反応溶液を飽和食塩水(50mL)に投じ、酢酸エチル(50mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(50mL)で再度抽出を行い、先の有機層と合わせ飽和食塩水(100mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色固体(1.38g)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの4:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の4−t−ブチル−5−〔4−(1−ヒドロキシイミノエチル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔10〕)を無色固体(1.11g,3.497mmol,78.3%)として得た。
【0096】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.07(s,9H),1.34(s,6H),2.22(s,3H),3.84(s,3H),3.88(s,2H),6.83(d,J=1.4Hz,1H),6.90(dd,J=7.6and 1.4Hz,1H),7.23−7.27(m,1H),7.81(br−s,1H)ppm
13CNMR(125MHz,CDCl3);δ15.1,27.4,32.4,32.5,47.2,55.5,83.1,112.6,122.3,125.9,126.4,128.8,138.1,149.5,156.5,156.9ppm
IR(KBr);3228,2963,2865,1602,1561,1396,1311,1226,1051,930cm-1
Mass(m/z,%);317(M+,29),302(100),286(32),270(13),260(10),246(18),230(11),214(14),192(14),176(7),57(4)。
【0097】
(参考例9)
【0098】
【化29】
【0099】
窒素雰囲気下、室温において、4−t−ブチル−5−〔4−(1−ヒドロキシイミノエチル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔10〕)(980mg,3.087mmol)を溶かしたTHF(10mL)溶液を、−78℃にて1.61Mブチルリチウムヘキサン溶液(4.20mL,6.76mmol)を加え、5分間撹拌した。そこにトリフルオロ酢酸S−エチルエステル(0.50mL,8.90mmol)を加え、徐々に室温に戻して一昼夜撹拌した。その反応溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液(50mL)に投じ、酢酸エチル(50mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(50mL)で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水(100mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色油状物(1.25mg)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの4:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−5−ヒドロキシイソオキサゾリン−3−イル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔11〕)を無色固体(841mg,2.034mmo1,65.9%)として得た。
【0100】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.07(s,9H),1.34(s,6H),3.49(br−s,1H),3.63(d,J=18.8Hz,1H),3.84(d,J=18.8Hz,1H),3.88(s,3H),3.89(s,2H),6.86(d,J=1.4Hz,1H),6.96(dd,J=8.0and 1.4Hz,1H),7.77(d,J=8.0Hz,1H)ppm
13CNMR(100MHz,CDCl3);δ27.3,32.5,32.5,45.4,47.3,55.6,83.1,103.1(q,J=33.7Hz),113.0,116.4,122.0(d,J=283.3Hz),122.8,126.7,128.7,140.1,148.5,155.7,157.0ppm
IR(KBr);3329,2962,2873,1605,1466,1410,1185,1050,1005,860cm-1
Mass(m/z,%);413(M+,29),398(100),380(28),342(26),324(12),288(35),270(60),214(22),160(22),57(8)。
【0101】
(参考例10)
【0102】
【化30】
【0103】
室温において、4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−5−ヒドロキシイソオキサゾリン−3−イル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔11〕)(922mg,2.230mmol)を溶かしたトルエン(10mL)溶液に、p−トルエンスルホン酸1水和物(45.8mg,0.241mmol)を加え、130℃にして1時間還流した。その反応溶液を飽和重曹水(50mL)に投じ、酢酸エチル(50mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(50mL)で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水(100mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色固体(930mg)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの4:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔12〕)を無色固体(748mg,1.983mmo1,88.9%)として得た。
【0104】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.09(s,9H),1.36(s,6H),3.90(s,2H),3.93(s,3H),6.95(d,J=1.2Hz,1H),7.02(dd,J=7.8and 1.2Hz,1H),7.23(d,J=0.7Hz,1H),7.89(d,J=7.8Hz,1H)ppm
13CNMR(100MHz,CDCl3);δ27.4,32.5,32.5,47.3,55.7,83.6,106.8(d,J=1.7Hz),113.0,115.8,118.0(d,J=269.8Hz),122.9,126.4,128.8,140.2,148.8,156.6.157.8(q,J=42.0Hz),159.8ppm
IR(KBr);2961,2870,1606,1450,1313,1178,1152,1052,967,834cm-1
Mass(m/z,%);395(M+,22),380(100),345(16),338(19),324(25),270(53),244(10),228(7),214(9),160(13),149(10),57(15)。
【0105】
(参考例11)
【0106】
【化31】
【0107】
窒素雰囲気下、0℃において、水素化ナトリウム60%、135mg(3.38mmol)を懸濁させたDMF(3mL)にエタンチオール(0.40mL,5.40mmol)を加え、15分間撹拌した。その反応溶液に4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−メトキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔12〕)(664mg,1.679mmol)を溶解させたDMF(3mL)溶液を滴下し、140℃にして1時問加熱した。その反応溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液(50mL)に投じ、酢酸エチル(50mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(50mL)で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水(100mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色固体(671mg)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの4:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔13〕)を無色固体(533mg,1,398mmol,83.3%)として得た。
【0108】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.08(s,9H),1.34(s,6H),3.89(s,2H),6.95(dd,J=8.1and1.5Hz,1H),7.06(d,J=1.2Hz,1H),7.57(d,J=1.5Hz,1H),7.84(d,J=8.1Hz,1H),10.6(s,1H)
ppm
13CNMR(100MHz,CDCl3);δ27.3,32.5,32.5,47.4,83.3,109.2,118.7(q,J=266.8Hz),119.1,121.6,126.0,127.5(d,J=3.3Hz),138.4(q,J=44.5Hz),142.1,148.4,157.3,163.
0ppm
IR(KBr);3355,3148,2960,2868,1629,1576,1494,1330,1179,1147,1052,765cm-1
Mass(m/z,%);381(M+,61),366(100),324(6),310(88),278(11),256(85),228(18),200(17),57(19)。
【0109】
(実施例1)
【0110】
【化32】
【0111】
酸素雰囲気下、0℃において、4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔13〕)(80.0mg,0.2098mmol)を溶かしたCH2C12(5mL)溶液に、TPP(2.1mg)を加えた後、ナトリウムランプを照射し、30分撹拌した。その反応溶液を濃縮し、残留物を緑色固体(81.2mg)として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンとジエチルエーテルの20:1混合溶媒にて流しだしたところ、目的の4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−4,4−ジメチル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタン(化合物〔14〕)を淡黄色固体(75.3mg,0.1822mmol,86.8%)として得た。
【0112】
1HNMR(400MHz,CDCl3);δ1.02(s,9H),1.17(s,3H),1.39(s,3H),3.85(d,J=8.3Hz,1H),4.60(d,J=8.3Hz,1H),7.28(dd,J=8.3and1.5Hz,1H),7.39(d,J=1.5Hz,1H),7.59(d,J=1.5Hz,1H),7.91(d,J=8.3Hz,1H),10.67(s,1H)ppm
13CNMR(100MHz,CDCl3);δ18.5,25.1,27.0,36.8,45.7,80.5,105.4,110.3,115.9,117.9,118.7(q,J=267.0Hz),119.7,126.0,127.5(d,J=2.5Hz),138.7(q,J=44.5Hz),141.8,
157.3,162.7ppm
IR(KBr);3144,2975,2898,1613,1550,1494,1371,1331,1219,1149,1035,959,872cm-1
Mass(m/z,%);413(M+,1),381(13),366(20),357(28),328(7),273(33),256(100),228(13),200(14),57(25)。
【0113】
(実施例2)
実施例1で得られた4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−4,4−ジメチル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタン(化合物〔14〕)の1.00×10-5Mアセトニトリル溶液1mLを、テトラブチルアンモニウムフルオライドの1.00×10-2M DMSO溶液2mLに40℃で加え、そのときの発光を蛍光分析計で測定した。このときの発光量子収率は0.44と見積もられ、発光の半減期は1400秒、λmaxは481nmであった。
【0114】
(実施例3)
実施例1で得られた4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−4,4−ジメチル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタン(化合物〔14〕)の1.00×10-4Mアセトニトリル溶液1mLを、水酸化ナトリウムの0.1N溶液2mLに40℃で加え、そのときの発光を蛍光分析計で測定した。このときの発光量子収率は0.39と見積もられ、発光の半減期は2700秒、λmaxは479nmであった。
【0115】
(実施例4)
実施例1で得られた4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−4,4−ジメチル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプタン(化合物〔14〕)の1.00×10-3Mアセトニトリル溶液0.1mLを、水酸化ナトリウムの0.1N溶液2mL+蒸留水0.9mLに40℃で加え、そのときの発光を蛍光分析計で測定した。このときの発光量子収率は0.24と見積もられ、発光の半減期は1200秒、λmaxは476nmであった。
【0116】
(参考例12)
【0117】
【化33】
【0118】
窒素雰囲気下、0℃において、ジクロロメタン30mLにピリジン1.84mL(22.8mmol)を加え、さらにオキシ塩化リン1.33mL(14.3mmol)を加え15分間攪拌した。その反応溶液に4−t−ブチル−5−〔4−(5−トリフルオロメチル−3−イソオキサゾリル)−3−ヒドロキシフェニル〕−3,3−ジメチル−2,3−ジヒドロフラン(化合物〔13〕)(1.44g,3.78mmol)を溶解させたジクロロメタン(12mL)溶液を滴下し、0℃にして2時問攪拌し、さらに徐々に室温に戻して一昼夜攪拌した。
【0119】
反応溶液をふたたび0℃に冷却し、ピリジン3.68mL(45.5mmol)を加え、さらにエチレンシアノヒドリン3.20mL(47.3mmol)を加え、徐々に室温に戻して一昼夜攪拌した。その反応溶液を純水(50mL)に投じ、酢酸エチル(50mL)で抽出を行った。水層を酢酸エチル(50mL)で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、純水(100mL×3)で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮したところ、目的の、リン酸−5−(3−t−ブチル−4,4−ジメチル−4,5−ジヒドロフラン−2−イル)−2−(5−トリフルオロメチルイソオキサゾール−3−イル)フェニルエステル ビス−(2−シアノエチル)エステル(化合物〔15〕)を淡黄色油状物(2.10g,3.70mmol,98.1%)として得た。
【0120】
1HNMR(500MHz,CDCl3 );δ1.08(s,9H),1.35(s,6H),2.80(m,4H),3.90(s,2H),4.45(m,4H),7.33(dd,1H),7.53(d,1H),7.63(d,1H),8.09(dd,1H),ppm。
【0121】
(参考例13)
【0122】
【化34】
【0123】
室温において、リン酸−5−(3−t−ブチル−4,4−ジメチル−4,5−ジヒドロフラン−2−イル)−2−(5−トリフルオロメチルイソオキサゾール−3−イル)フェニルエステル ビス−(2−シアノエチル)エステル(化合物〔15〕)(1.20g,2.11mmol)を溶かしたメタノール(40mL)溶液に28%ナトリウムメチラート・メタノール溶液(1.6mL)加え1時間30分攪拌した。その反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(2.0mL)加え、さらに30分攪拌後、濃縮することにより白色の固体を得た。この固体にメタノール(20mL)を加え、不溶物を濾過にて取り除いた。濾液を濃縮したところ、目的の、リン酸モノ−[5−(3−t−ブチル−4,4−ジメチル−4,5−ジヒドロフラン−2−イル)−2−(5−トリフルオロメチルイソオキサゾール−3−イル)フェニル]エステル ジナトリウム塩(化合物〔16〕)を白色固体(0.69g,1.37mmol,64.5%)として得た。
【0124】
1HNMR(500MHz,CD3OD);δ1.11(s,9H),1.34(s,6H),3.83(s,2H),6.98(dd,1H),7.78(d,1H),7.85(d,1H),8.05(d,1H),ppm。
【0125】
(実施例5)
【0126】
【化35】
【0127】
酸素雰囲気下、0℃において、リン酸モノ−[5−(3−t−ブチル−4,4−ジメチル−4,5−ジヒドロフラン−2−イル)−2−(5−トリフルオロメチルイソオキサゾール−3−イル)フェニル]エステル ジナトリウム塩(化合物〔16〕)(65.0mg,0.129mmol)を溶かしたメタノール(4mL)とジクロロメタン(15mL)の混合溶液に、TPP(2.0mg)を加えた後、ナトリウムランブを照射し、2時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮物にメタノールを加えて不溶物を0.45μmのポリテトラフルオロエチレン製のフィルターで濾過し、再度濃縮した。濃縮物を純水(1.5ml)に溶解し、ポリマー系逆相C18の分取用カラムを用いてHPLCにかけ、水とアセトニトリルで溶出させた画分を凍結乾燥したところ、目的の、リン酸モノ−[5−(5−t−ブチル−4,4−ジメチル−2,6,7−トリオキサビシクロ[3.2.0]ヘプト−1−イル)−2−(5−トリフルオロメチルイソオキサゾール−3−イル)フェニル]エステル ジナトリウム塩(化合物〔17〕)を白色固体(52.0mg,0.097mmol,75.3%)として得た。
【0128】
1HNMR(500MHz,CD3OD);δ1.04(s,9H),1.14(s,3H),1.44(s,3H),3.83(d,1H),4.49(d,1H),7.33(dd,1H),7.79(d,1H),7.91(dd,1H),8.35(d,1H)ppm。
【0129】
【発明の効果】
本発明の1,2−ジオキセタン誘導体(I)は、量子収率の高い安定な発光を示すことができ、かつ熱的安定性が高いため冷蔵保存によっては1年後に分解産物が全く見られないほど安定な化合物である。よって、発光の測定を簡便に効率良く行うことができ、例えば、臨床検査の分野等で有用である。また本発明の1,2−ジオキセタン誘導体(I)は、高い熱的安定性と高い発光効率を併せ持つだけでなく、プロトン性溶媒中においてエンハンサー自体及びエンハンサーを加える操作等を省くことができるため費用、時間の節約をすることができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to 1,2-dioxetane derivatives. The 1,2-dioxetane derivative of the present invention is a compound capable of inducing chemiluminescence, and can be used as a substrate for immunoassay, for example.
[0002]
[Prior art]
Various 1,2-dioxetane derivatives have been conventionally synthesized, and in particular, a compound having a spiroadamantyl group bonded to the 3-position is known to be useful as a chemiluminescent substrate (for example, Japanese Patent Publication No. 5-21918). Gazette and Japanese Patent Publication No. 5-45590). Further, as compounds already produced by the present inventors, compounds described in JP-A-8-245615, JP-A-8-169885, and JP-A-8-165287 are known. However, these 1,2-dioxetane derivatives have low thermal stability. Japanese Patent Application Laid-Open No. 9-216887 discloses a compound having improved thermal stability.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, various studies have been made on 1,2-dioxetane derivatives, and various compounds have been created. However, in order to apply in the field of clinical tests, etc., the compound itself is stable, easy to handle, and requires properties such as being able to emit light with high efficiency, and is a compound that is superior to conventional compounds The creation of was desired.
[0004]
In addition, conventional compounds including the compounds described in JP-A-9-216887 have a significantly reduced luminous efficiency in aqueous protic solvents and are actually used for immunoassay in clinical tests. However, when the measurement condition was a protic solvent, it was not possible to obtain a strength sufficient for practical use. Therefore, at the time of measurement, a substance that enhances luminescence other than the 1,2-dioxetane derivative must be present as an enhancer.
[0005]
Enhancers include cationic surfactants (eg cetyltrimethylammonium bromide, cetyldimethylbenzylammonium chloride), water-soluble polymerized quaternary onium salts [quaternary ammonium salts, quaternary sulfonium salts, quaternary phosphonium salts. Including. For example, poly (vinyl benzyl dimethyl benzyl ammonium chloride), poly (vinyl benzyl trimethyl ammonium chloride), poly (vinyl benzyl tributyl ammonium chloride)], natural polymers (such as mammalian serum albumin, immunoglobulin, serum lipoprotein, etc.) It was used. However, when these were used, caution was required in handling such as increased viscosity. Therefore, it is more useful if there is a compound that can exhibit high luminous efficiency without using an enhancer even in a protic solvent.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
Under the circumstances as described above, the present inventors have intensively studied to create a compound that is superior to conventional compounds, and as a result, the isoxazole ring represented by the above formulas (A) and (B), etc. The present invention was completed by finding that a 1,2-dioxetane derivative having an aromatic ring substituent bonded to a hetero five-membered ring exhibits high luminous efficiency even in a protic solvent such as water without using an enhancer. is there.
[0007]
That is, the present invention relates to the general formula (I)
[0008]
[Chemical 7]
[0009]
1,2-dioxetane derivatives represented by the formula:1, R2Are each independently a hydrogen atom, an alkyl group or an aryl group. R1, R2Can be combined to form a cyclic or polycyclic organic ring group that is spiro-bonded to the dioxetane ring. RThreeIs an alkyl group or an aryl group, RThreeAnd R1Or R2And a dioxetane ring and a condensed ring containing a hetero atom may be formed together. Ar is the formula (A)
[0010]
[Chemical 8]
[0011]
(Wherein RFourIs a hydroxyl group, an alkoxyl group, an aralkyloxy group, -OSi (RFiveR6R7) (However, RFive, R6And R7Are independently an alkyl group or an aryl group. ), A phosphate group or -S (C = O) R8(However, R8Is an alkyl group or an aryl group. ). R9And RTenAre each independently a hydrogen atom, an alkyl group, an aryl group or a halogen atom, X is a halogen atom, and V is an oxygen atom or a sulfur atom. Or a group represented by formula (B)
[0012]
[Chemical 9]
[0013]
(Wherein RFourIs R in the formula (A)FourIs the same. R11And R12Are each independently a hydrogen atom, an alkyl group, an aryl group or a halogen atom, Y is a halogen atom, and W is an oxygen atom or a sulfur atom. ). ).
[0014]
The present invention also provides a chemiluminescent reagent comprising the above-described 1,2-dioxetane derivative. Furthermore, the present invention is a luminescence method characterized by decomposing the aforementioned 1,2-dioxetane derivative to cause chemiluminescence. Furthermore, the present invention is a measurement method characterized in that a detection substance in a sample is measured using the above-described light emitting method. Furthermore, the present invention is a light-emitting method characterized by causing a compound having a 1,2-dioxetane structure to emit light in a protic solvent in the absence of another enhancer. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
[0015]
In the present specification, the “alkyl group” refers to a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 20 carbon atoms which may have a substituent. Methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tetradecyl, pentadecyl, hexadecyl, heptadecyl, octadecyl, nonadecyl, icosanyl and the above alkyl groups are appropriately separated. A group bonded in a branched manner or a group in which they are cyclic. Examples of the substituent which may be included include a hydroxyl group, an alkoxyl group, and an aryl group. Examples of the alkoxyl group include straight-chain alkoxy groups having 1 to 20 carbon atoms such as methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, pentyloxy, hexyloxy, methoxyethoxy, methoxypropoxy, ethoxyethoxy, ethoxypropoxy, and methoxyethoxyethoxy groups. Examples thereof include those in which 1 to 5 chains or branches are bonded. Examples of the aryl group include aromatic hydrocarbon groups having 6 to 20 carbon atoms such as phenyl and naphthyl groups, and 1 to 5 nitrogen atoms and oxygen in the ring such as furyl, thienyl and pyridyl groups. Examples include heteroaryl groups having an atom or a sulfur atom.
[0016]
In the present specification, the “alkoxyl group” can include the same alkoxy groups that may be substituted with the above-described alkyl group, and the “aryl group” is also substituted with the above-described alkyl group. The same thing as the aryl group which may be mentioned can be mentioned. Further, in the present specification, “polycyclic organic ring group” means C1~ CTenAlkyl, C1~ CTenAlkoxy, halogen and halo-C1~ CTenA polycyclic alkylene having 6 to 30 carbon atoms optionally substituted with 1 to 10 groups independently selected from alkyl, such as an adamantyl group, bicyclo [2.2.1] heptyl, etc. is there. In addition, a halogen atom, an alkyl group, an aryl group, a cyano group, an amide group, an alkoxy group, or a carboxyl group may be bonded to any carbon of the polycyclic organic ring group. The “aralkyloxy group” is a group having 7 to 20 carbon atoms such as benzyloxy or phenethyloxy group, and the “halogen atom” is fluorine, chlorine, bromine or the like.
[0017]
In the general formula (I), RThreeAnd R1Or R2And a dioxetane ring and a heteroatom-containing condensed ring can be exemplified as a condensed ring of a dioxetane ring and a furan ring, or a condensed ring of a dioxetane ring and a pyran ring.
[0018]
In the present invention, Ar in the general formula (I) is represented by the formula (a)
[0019]
[Chemical Formula 10]
[0020]
(Wherein RFour, R9, RTen, X and V are R in the formula (A)Four, R9, RTen, X and V are the same. Or a group represented by formula (b)
[0021]
Embedded image
[0022]
(Wherein RFour, R11, R12, Y and W are R in the formula (B)Four, R11, R12, Y and W are the same. ) Are preferred.
[0023]
In the above general formula (I), RThreeAnd R1Or R2And a dioxetane ring and a furan ring to form a condensed ring, more preferably RThreeR not forming a condensed ring with2Or R1Is an alkyl group having 3 to 4 carbon atoms. Among them, the general formula (I ′)
[0024]
Embedded image
[0025]
(Wherein RFourAre the same as those described above.
[0026]
The 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) of the present invention is represented by the general formula (II)
[0027]
Embedded image
[0028]
(Wherein R1~ RThreeIs R in the general formula (I)1~ RThreeAnd R41Is an alkoxyl group or an aralkyloxy group. Also, (R41) Ar represents the formula (A ′)
[0029]
Embedded image
[0030]
(Wherein R9, RTen, X and V are R in the formula (A)9, RTen, X and V and R41Is R in the general formula (II)41Is the same. Or a group represented by formula (B ′)
[0031]
Embedded image
[0032]
(Wherein R11, R12, Y and W are R in the formula (B)11, R12, Y and W and R41Is R in the general formula (II)41Is the same. R represented by))41It can be produced from an enol ether derivative having an aryl group substituted with the following reaction formula.
[0033]
Embedded image
[0034]
(Wherein R1~ RThreeAnd R41Is R in the general formulas (I) and (II)1~ RThreeAnd R41Is the same. R42Is -OSi (RFiveR6R7) (However, RFive, R6And R7Is the same as above. ) Or a group represented by
[0035]
Embedded image
[0036]
(Wherein R13And R14Is an alkali metal, quaternary ammonium salt or alkyl group, R13And R14Are groups that may form a ring together. ). The group represented by (HO) Ar of the compound represented by the general formula (III) is a substituent R of the general formula (II).41Having an OH group at the same position as that of (R) in the general formula (IV)42) Ar is a substituent R of the general formula (II)41Substituent R at the same position as42It is what has. )
(First Step) In this step, the compound represented by the general formula (III) is produced by deprotecting the compound represented by the general formula (II). Examples of the compound used for the deprotection reaction include the aforementioned general formula (II) (where R1~ RThreeIs the same as above and R41Is a hydroxyl-protecting group (preferably a methoxy group or a benzyloxy group). This reaction can be carried out by a method familiar to those skilled in the art, that is, by reacting with an alkylthiol anion or by subjecting it to a hydrogenation reaction. May be appropriately selected depending on the group to be deprotected.
[0037]
(Second Step) In this step, the compound represented by the general formula (III) is reacted with a corresponding halogenated trialkylsilane or halogenated phosphate to form a silyloxy group or a phosphate group, and the general formula (IV ) Is produced. In this step, for example, when chloroethylene phosphate is reacted for the introduction of a phosphate group, it may be converted to sodium salt of cyanoethyl phosphate with sodium cyanide, and the cyanoethyl group may be eliminated and converted to ammonium sodium salt. it can. This ammonium sodium salt can be easily converted to a disodium salt by, for example, reacting with sodium hydrogen carbonate.
[0038]
(Third Step) In this step, the compound represented by the general formula (II), (III) or (IV) is reacted with singlet oxygen, and the 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) is used. Is to be manufactured. In the reaction with singlet oxygen, the enol ether derivative represented by the general formula (II), (III) or (IV) is used in combination with a photosensitizer such as methylene blue, rose bengal, tetraphenylporphine (TPP). This is achieved by performing visible light irradiation under an oxygen atmosphere. At this time, the solvent may be a halogenated hydrocarbon such as dichloromethane, dichloroethane, or carbon tetrachloride, or an alcohol such as methanol or ethanol. The reaction is preferably performed at −80 ° C. to room temperature.
[0039]
Examples of the method for producing the enol ether derivative represented by the general formula (II) include the following methods.
[0040]
Embedded image
[0041]
(Wherein R1~ RThreeAnd R41Is R in the general formulas (I) and (II)1~ RThreeAnd R41Is the same. R15And R16Is an alkyl group or R15And R16Are groups that may form a ring together. )
(Step 1A) In this step, an aromatic carboxylic acid ester represented by the general formula (1A) is reacted with a ketone represented by the general formula (2A), and the enol ether represented by the general formula (II) A derivative is produced. The reaction must be carried out in the presence of titanium. Usually, titanium is preferably subjected to a reaction by forming a reduced state of titanium halide such as titanium chloride using a reducing agent such as lithium aluminum hydride and a base such as triethylamine. The reaction can be carried out in an organic ether such as tetrahydrofuran (THF). The reaction proceeds at 0 to 100 ° C., but it is preferable to carry out the reaction under reflux of THF from the viewpoint of operation and reactivity.
[0042]
(Step 1B) In this step, the arylmethylphosphonate represented by the general formula (1B) is reacted with the ketone represented by the general formula (2B) to produce the enol ether derivative represented by the general formula (II). To manufacture.
[0043]
The arylmethylphosphonate represented by the general formula (1B) is a compound that can be easily produced according to the method described in the above Japanese Patent Publication No. 5-45590. It is preferable to form a lithium amide from diisopropylamine using butyllithium or the like and use it for the reaction. The reaction can be carried out in an organic ether such as tetrahydrofuran (THF). The reaction is preferably performed at −78 ° C. to room temperature.
[0044]
Examples of the production method when the compound represented by the general formula (II) is a dihydrofuran derivative can include the following methods.
[0045]
Embedded image
[0046]
(Wherein R17, R18, R19, R20And Rtwenty oneAre each independently a hydrogen atom, an alkyl group or an aryl group. Also R18And R19, R20And Rtwenty one, R17And R19, R17And R20And R18And R20Can be united and can independently form a cyclic alkyl group. R41Is the same as above. Rtwenty twoIs a halogen atom, a substituted sulfonyloxy group or a hydroxyl group. ).
[0047]
(Step 1C) In this step, the compound represented by the general formula (3C) is produced by reacting the compound represented by the general formula (1C) with the compound represented by the general formula (2C). To do. The reaction can be achieved by the so-called Williamson synthesis familiar to those skilled in the art. Here, the substituent R of the compound represented by the general formula (1C)twenty twoIs a halogen atom or a substituted sulfonyloxy group, it is directly subjected to the reaction, Rtwenty twoIn the case where is a hydroxyl group, this step can be achieved by converting it into a sulfonyloxy group with a tosyl halide or the like in the reaction system and then subjecting it to a reaction.
[0048]
(Step 2C) In this step, the compound represented by the general formula (4C) is produced by oxidizing the compound represented by the general formula (3C). The oxidation in this step can be performed by using a chromium-based oxidant or an activator. As the chromium-based oxidizing agent, pyridinium chlorochromate (PCC), pyridinium dichlorochromate (PDC) or the like can be used. At this time, a halogenated hydrocarbon such as dichloromethane can be used as the solvent. When the activator is used, Py · SOThree/ Triethylamine / DMSO, Ac2The reaction can be performed in combination with a solvent such as an O / DMSO system.
[0049]
(Step 3C) In this step, the compound represented by the general formula (4C) is cyclized to produce the compound represented by the general formula (5C). The reaction is carried out using a secondary amine lithium salt such as lithium diisopropylamide or a base such as t-butoxy potassium. As the solvent, an organic solvent such as THF or DMSO can be used, and the reaction is preferably performed at 0 ° C. to room temperature for 1 to 5 hours.
[0050]
(Step 4C) In this step, the compound represented by the general formula (5C) is brominated to produce the compound represented by the general formula (6C). The reaction is accomplished by using a brominating agent such as N-bromosuccinimide. As a solvent, it can carry out using organic solvents, such as hydrous THF, a dioxane, and DMF.
[0051]
(Step 5C) In this step, the compound represented by the general formula (7C) is produced by dehydrating the compound represented by the general formula (6C). In the reaction, thionyl chloride is allowed to act in the presence of a base such as pyridine, or an acid such as phosphoric acid or p-toluenesulfonic acid can be used as a catalyst. As the solvent, a halogenated hydrocarbon such as methylene chloride or an aromatic hydrocarbon such as toluene can be used, and it can be appropriately selected depending on the reagent to act.
[0052]
(Step 6C) In this step, the compound represented by the general formula (II ') is produced from the compound represented by the general formula (7C). The reaction is to produce the compound represented by the general formula (II ′) into which the target substituent is introduced by substituting bromine of the compound represented by the general formula (7C). The substituted amino group can be introduced by using a lithium salt such as butyl lithium, introducing a carboxyl group, and then reacting with amine or ammonia using carbonylimidazole as a condensing agent. Furthermore, from the amide produced by the above reaction, for example, to obtain a compound having an oxazoline ring, it can be carried out by allowing a substituted or unsubstituted ethanolamine to act. In order to introduce an acyl group, a lithium salt such as butyl lithium is used in the same manner as described above, and reacted with N-methylformanilide or reacted with an aldehyde such as acetaldehyde or benzaldehyde, and then oxidized with manganese dioxide or the like. This is accomplished by oxidizing the hydroxyl β group with an agent. Here, a compound into which an acyl group has been introduced can form an isoxazole ring through dehydration by converting the acyl group into a hydroxyimino group and reacting the dianion with the corresponding amide or ester. As another method, the compound into which an acyl group is introduced can be converted into a β-diketone type substituent, and a hydroxylamine can be reacted therewith to form an isoxazole ring.
[0053]
Examples of the production method when the compound represented by the general formula (II) is a dihydropyran derivative can include the following methods.
[0054]
Embedded image
[0055]
(Wherein Rtwenty three, Rtwenty four, Rtwenty five, R26, R27, R28And R29Are each independently a hydrogen atom, an alkyl group or an aryl group. Also Rtwenty fourAnd Rtwenty five, R26And R27, R28And R29, Rtwenty threeAnd Rtwenty four, Rtwenty threeAnd R26, Rtwenty threeAnd R28, Rtwenty fourAnd R26, Rtwenty fourAnd R28And R26And R28Can be united and can independently form a cyclic alkyl group. R41And Rtwenty twoIs the same as above. ).
[0056]
(1D process, 2D process, 3D process, 4D process, 5D process and 6D process) The method for producing the compound represented by the general formula (7D) by these processes is the 1C process. , 2C process, 3C process, 4C process, 5C process and 6C process.
[0057]
The 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) of the present invention is decomposed to a carbonyl compound with chemiluminescence under alkaline conditions, and esterases (carboxylate ester hydrolase) such as aryl esterase and acetylcholinesterase. It is decomposed with chemiluminescence by an enzyme such as alkaline phosphatase, a fluorine compound such as tetrabutylammonium fluoride, an acid or an amine compound.
[0058]
Therefore, the 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) becomes a chemiluminescent reagent. The decomposition of the 1,2-dioxetane derivative accompanied with chemiluminescence may be performed in the presence of another enhancer or in the absence of another enhancer. The 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) has a high emission quantum yield even when decomposition involving chemiluminescence is carried out in a protic solvent and in the absence of other enhancers. One of the features is to show the rate. The light emission quantum yield is preferably 1% or more, more preferably 10% or more, and particularly preferably 20% or more.
[0059]
Further, the chemiluminescent reagent of the present invention can be used in any measurement method for the purpose of determining the concentration of a detection substance in a sample. For example, it can be used as an immunoassay reagent in an immunoassay, as well as an enzyme assay method; It can also be used for chemical assay; nucleotide probe method and the like.
[0060]
Examples of the detection substance in the immunoassay include hormones such as hCG, TSH, and LH, cancer-related substances such as AFP and CEA, virus antigens such as HIV and HTLV-I, and antibodies and nucleic acids (DNA, RNA) thereof. Can be mentioned.
[0061]
As the immunoassay, for example, the enzyme is previously bound to a substance having specific binding properties to the detection substance as described above, and the sample containing the detection substance is mixed and reacted for a certain period of time, This can be carried out by a step of binding the detection substance in the sample and a substance having binding properties thereto, and a step of determining the amount of the binding substance that is bound or not bound. The step of determining the amount of the bound or unbound substance having the binding property comprises reacting the enzyme with the 1,2-dioxetane derivative of the present invention, and from the 1,2-dioxetane derivative in proportion to the amount of the enzyme. Therefore, the concentration of the substance can be determined by measuring the emission intensity.
[0062]
The immunoassay reagent containing the 1,2-dioxetane derivative of the present invention and the immunoassay using the same are also included in the present invention.
[0063]
The 1,2-dioxetane derivative represented by the general formula (I) of the present invention can exhibit a stable emission efficiency with a high quantum yield and has high thermal stability, and after 1 year depending on refrigeration storage. It is a compound that is so stable that no degradation products are found. Therefore, the measurement of luminescence can be performed simply and efficiently, and is useful, for example, in the field of clinical examinations.
[0064]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Reference Examples. However, the present invention is not limited to these examples.
[0065]
(Reference Example 1)
[0066]
Embedded image
[0067]
2,2,4,4-tetramethyl-1,3-pentanediol dissolved in 15 mL of DMF in a solution of 2.12 g (53.0 mmol) of 60% sodium hydride suspended in 80 mL of DMF at 0 ° C. under a nitrogen atmosphere Compound [2]) 7.05 g (44.1 mmol) was added dropwise over 30 minutes, and the mixture was further stirred for 30 minutes. To this solution, 9.07 g (57.9 mmol) of 3-methoxybenzyl chloride (compound [1]) dissolved in 15 mL of DMF was added dropwise over 30 minutes, followed by stirring for 12 hours. The reaction mixture was poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution and extracted with ethyl acetate. The extract layer was washed with saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated. The concentrate was applied to a silica gel column and poured into a 10: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate. As a result, 1- (3-methoxybenzyloxy) -2,2,4,4-tetramethyl-3-pentanol (compound [ 3]) as a colorless oil in a yield of 86.7%.
[0068]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.03 (s, 9H), 1.04 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 3.23 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.25 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.43 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 4. 48 (s, 2H), 6.81-6.91 (m, 3H), 7.23-7.28 (m, 1H) ppm
IR (liquid film); 3502, 2954, 2870, 1489, 1457, 1267, 1080, 1053 cm-1
Mass (m / z,%); 280 (M+2), 135 (31), 121 (100), 107 (8), 91 (9), 69 (13), 55 (14).
[0069]
(Reference Example 2)
[0070]
Embedded image
[0071]
9.9 g of Celite and 4.61 g (16.5 mmol) of 1- (3-methoxybenzyloxy) -2,2,4,4-tetramethyl-3-pentanol (compound [3]) at room temperature under a nitrogen atmosphere Was added to 75 mL of dichloromethane and stirred. To this solution, 4.26 g (19.7 mmol) of PCC was added and stirred for 7 hours, and then 800 mg (3.71 mmol) of PCC was further added and stirred overnight. Ether was added to the reaction mixture, and the mixture was filtered through celite. The filtrate was concentrated, applied to a silica gel column and poured out with a 10: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate. As a result, 1- (3-methoxybenzyloxy) -2,2,4,4-tetramethyl-3-pentanone ( Compound [4]) was obtained as a colorless oil in an amount of 4.32 g and a yield of 94.4%.
[0072]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.23 (s, 9H), 1.28 (s, 6H), 3.50 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 4.47 (s, 2H), 6.78 −6.88 (m, 3H), 7.23 (t, J = 8.1 Hz, 1H) ppm
IR (liquid film); 2959, 2870, 1658, 1480, 1466, 1458, 1267, 1108, 1049 cm-1
Mass (m / z,%); 278 (M+, 100), 222 (50), 121 (31), 97 (5), 55 (8).
[0073]
(Reference Example 3)
[0074]
Embedded image
[0075]
Under a nitrogen atmosphere, 1.50 mL (11.4 mmol) of diisopropylamine and 6.60 mL (10.6 mmol) of 1.6 M butyl lithium hexane solution were added to 15 mL of anhydrous THF at room temperature, and the mixture was stirred for 30 minutes. To this solution, 1.48 g (5.32 mmol) of 1- (3-methoxybenzyloxy) -2,2,4,4-tetramethyl-3-pentanone (compound [4]) dissolved in 10 mL of THF at −78 ° C. And stirred for 2 hours. The reaction solution was stirred for 3 hours and 20 minutes while gradually warming to room temperature. The reaction mixture was poured into saturated brine and extracted with ethyl acetate. The extract layer was washed with saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated. The concentrate was applied to a silica gel column and poured out with a 1: 2 mixed solvent of hexane and ethyl acetate to find 3-t-butyl-3-hydroxy-2- (3-methoxyphenyl) -4,4-dimethyl-2,3. , 4,5-tetrahydrofuran (compound [5]) was obtained with a yield of 87.8%.
Melting point: 83.0-83.5 ° C. (colorless granular crystals, recrystallized from hexane and ethyl acetate).
[0076]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 0.90 (broad s, 9H), 1.19 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.92 (s, 1H), 3.80 (qAB, J = 8.1 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 5.00 (s, 1H), 6.80 (dd, J = 7.8 and 2.4 Hz, 1H), 7.10 (D, J = 2.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H) ppm
IR (liquid film); 3493, 2962, 2881, 1591, 1481, 1278, 1070, 1048 cm-1
Mass (m / z,%); 278 (M+, 1), 260 (29), 245 (100), 203 (12), 189 (45), 135 (52), 121 (10), 107 (11), 77 (9), 55 (33).
[0077]
(Reference Example 4)
[0078]
Embedded image
[0079]
3-t-butyl-3-hydroxy-2- (3-methoxyphenyl) -4,4-dimethyl-2,3,4,5-tetrahydrofuran (compound [5]) (2.16 g, 7.77 mmol) in THF (20 mL) And H2It added at the mixed solvent of O2mL, and stirred at 0 degreeC. To this solution, 1.54 g (8.65 mmol) of NBS was added and stirred overnight while gradually reaching room temperature, and then 140 mg (0.787 mmol) of NBS was further added and stirred for 6 hours. The reaction mixture was poured into saturated brine and extracted with ethyl acetate. The extract layer was washed successively with aqueous sodium thiosulfate solution and saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated. When the concentrate was crystallized from a mixed solvent of ethyl acetate and hexane, 2- (4-bromo-3-methoxyphenyl) -3-t-butyl-3-hydroxy-4,4-dimethyl-2,3,4 , 5-tetrahydrofuran (compound [6]) was obtained in 1.323 g, yield 47.7%.
[0080]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 0.89 (s, 9H), 1.20 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.92 (s, 1H), 3.80 (qAB, J = 8.3 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 4.98 (s, 1H), 7.02 (dd, J = 8.1 and 2.0 Hz, 1H), 7.12. (D, J = 2.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.1 Hz, 1H) ppm
Mass (m / z,%); 358 (M++2, 2.4), 356 (M+2.5), 340 (19), 338 (20), 325 (79), 323 (84), 215 (73), 213 (67), 201 (18), 199 (19), 109 (10) 55 (100).
[0081]
(Reference Example 5)
[0082]
Embedded image
[0083]
To 30 mL of anhydrous toluene at room temperature under a nitrogen atmosphere, 4-t-butyl-5- (4-bromo-3-methoxyphenyl) -4-hydroxy-3,3-dimethyl-2,3,4,5-tetrahydrofuran ( 4.68 g (13 mmol) of compound [6]) was added and stirred for 10 minutes. To this reaction solution, 0.27 g (1.4 mmol, 0.1 equivalent) of p-toluenesulfonic acid monohydrate was added, and the mixture was stirred at 120 ° C. for 30 minutes. The reaction solution was returned to room temperature, and this was poured into a mixed solution of ethyl acetate and saturated brine to perform extraction. The obtained organic layer was washed with saturated brine. The organic layer was dried over magnesium sulfate and concentrated. When this was applied to a silica gel column and poured out with a 2: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, 4-t-butyl-5- (4-bromo-3-methoxyphenyl) -3,3-dimethyl-2,3 -Dihydrofuran (compound [7]) was obtained as a colorless oil in 3.78 g (11.2 mmol), yield 85%.
[0084]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.06 (s, 9H), 1.33 (s, 6H), 3.87 (s, 2H), 3.9 (s, 3H), 6.79 (dd, J = 7.9 and) 1.6 Hz, 1 H), 6.82 (d, J = 1.6 Hz, 1 H), 7.49 (d, J = 7.9 Hz, 1 H) ppm
IR (liquid film); 2957, 2866, 1739, 1650, 1570, 1480, 1392, 1237, 1049, 1025, 795 cm-1Mass (m / z,%); 340 (M++2, 26), 338 (M+26), 325 (97), 323 (100), 283 (6), 282 (3), 281 (4), 187 (7), 185 (5), 172 (4), 170 (3), 77 (7), 55 (67).
[0085]
(Reference Example 6)
[0086]
Embedded image
[0087]
Under a nitrogen atmosphere at room temperature, 5.05 g (14. 4-t-butyl-5- (4-bromo-3-methoxyphenyl) -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [7]). (88 mmol) in THF (50 mL) solution was added 1.63 M butyllithium hexane solution (10.5 mL, 17.1 mmol) at −78 ° C., stirred for 15 minutes, and then acetaldehyde (14. 0 mL, 45.1 mmol) was added and stirred for 30 minutes. A small amount of H is added to the reaction solution.2The reaction was stopped by adding 0 dropwise, poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution (100 mL), and extracted with ethyl acetate (100 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (100 mL), combined with the previous organic layer, and washed with saturated brine (200 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give a residue as a pale yellow oil (4.93 g). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 4: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, the desired 4-t-butyl-5- [4- (1-hydroxyethyl) -3-methoxyphenyl] -3 was obtained. , 3-Dimethyl-2,3-dihydrofuran (Compound [8]) was obtained as a colorless solid (3.73 g, 12.25 mmol, 82.3%).
[0088]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.06 (s, 9H), 1.34 (s, 6H), 1.49 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 2.60 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.87 (s, 2H), 5.08 (pent, J = 6.2 Hz, 1H), 6.79 (s, lH), 6.90 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.28 (d, J = 7.6 Hz, 1 H) ppm
13CNMR (125 MHz, CDClThree); Δ 22.9, 27.4, 32.4, 32.5, 47.1, 66.3, 83.0, 111.9, 122.5, 125.5, 125.6, 133.3 136.2, 149.8, 156.0 ppm
IR (KBr); 3491, 2962, 2870, 1651, 1604, 1461, 1402, 1229, 1129, 1088, 859 cm-1
Mass (m / z,%); 304 (M+5), 303 (9), 287 (19), 271 (100), 177 (14), 161 (69), 149 (10), 135 (11), 111 (23), 55 (88).
[0089]
(Reference Example 7)
[0090]
Embedded image
[0091]
4-t-butyl-5- [4- (1-hydroxyethyl) -3-methoxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [8]) (at room temperature under nitrogen atmosphere) To a solution of DMSO (10 mL) and THF (5 mL) in which 1.02 g, 3.351 mmol) was dissolved, triethylamine (1.65 mL, 11.8 mmol), pyridine sulfur trioxide complex (1.60 g, 10.1 mmol) And stirred for 1 hour. The reaction solution was poured into saturated brine (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (50 mL), combined with the previous organic layer, and washed with saturated brine (100 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give a residue as a pale yellow oil (1.02 g). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 4: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, the desired 5- (4-acetyl-3-methoxyphenyl) -4-tert-butyl-3,3-dimethyl- 2,3-Dihydrofuran (compound [9]) was obtained as a colorless solid (943 mg, 3.118 mmol, 93.0%).
[0092]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.07 (s, 9H), 1.34 (s, 6H), 2.61 (s, 3H), 3.89 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 6.89 (D, J = 1.3 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 7.8 and 1.3 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 1H) ppm
13CNMR (100 MHz, CDClThree); Δ 27.3, 31.8, 32.4, 32.4, 47.3, 55.5, 83.8, 113.1, 122.4, 126.4, 127.7, 129.9, 141.8, 148.8, 158.4, 199.4 ppm
IR (KBr); 2957, 2868, 1676, 1600, 1560, 1463, 1401, 1232, 1053 cm-1
Mass (m / z,%); 302 (M+27), 287 (100), 231 (40), 203 (14), 177 (78), 149 (9), 135 (6), 55 (48).
[0093]
(Reference Example 8)
[0094]
Embedded image
[0095]
At room temperature, 5- (4-acetyl-3-methoxyphenyl) -4-tert-butyl-3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [9]) (1.35 g, 4.464 mmol) was added. Sodium bicarbonate (562 mg, 6.69 mmol) was added to the dissolved ethanol (15 mL) solution, and then hydroxylamine hydrochloride (472 mg, 6.79 mmol) was added, followed by refluxing at 90 ° C. for 30 minutes. The reaction solution was poured into saturated brine (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (50 mL), combined with the previous organic layer, and washed with saturated brine (100 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give a residue as a pale yellow solid (1.38 g). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 4: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, the desired 4-t-butyl-5- [4- (1-hydroxyiminoethyl) -3-methoxyphenyl]- 3,3-Dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [10]) was obtained as a colorless solid (1.11 g, 3.497 mmol, 78.3%).
[0096]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.07 (s, 9H), 1.34 (s, 6H), 2.22 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.88 (s, 2H), 6.83 (D, J = 1.4 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 7.6 and 1.4 Hz, 1H), 7.23-7.27 (m, 1H), 7.81 (br-s) , 1H) ppm
13CNMR (125 MHz, CDClThree); Δ 15.1, 27.4, 32.4, 32.5, 47.2, 55.5, 83.1, 112.6, 122.3, 125.9, 126.4, 128.8, 138.1, 149.5, 156.5, 156.9 ppm
IR (KBr); 3228, 2963, 2865, 1602, 1561, 1396, 1311, 1226, 1051, 930 cm-1
Mass (m / z,%); 317 (M+29), 302 (100), 286 (32), 270 (13), 260 (10), 246 (18), 230 (11), 214 (14), 192 (14), 176 (7), 57 (4).
[0097]
(Reference Example 9)
[0098]
Embedded image
[0099]
4-t-butyl-5- [4- (1-hydroxyiminoethyl) -3-methoxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [10]) at room temperature under nitrogen atmosphere To a THF (10 mL) solution in which (980 mg, 3.087 mmol) was dissolved, a 1.61 M butyllithium hexane solution (4.20 mL, 6.76 mmol) was added at −78 ° C., and the mixture was stirred for 5 minutes. Trifluoroacetic acid S-ethyl ester (0.50 mL, 8.90 mmol) was added thereto, and the mixture was gradually returned to room temperature and stirred for a whole day and night. The reaction solution was poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (50 mL), combined with the previous organic layer, and washed with saturated brine (100 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give a residue as a pale yellow oil (1.25 mg). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 4: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, the desired 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-5-hydroxyisoxazoline-3] was obtained. -Yl) -3-methoxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [11]) was obtained as a colorless solid (841 mg, 2.034 mmol, 65.9%).
[0100]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.07 (s, 9H), 1.34 (s, 6H), 3.49 (br-s, 1H), 3.63 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 3.84 ( d, J = 18.8 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.89 (s, 2H), 6.86 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 8.0and 1.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H) ppm
13CNMR (100 MHz, CDClThree); Δ 27.3, 32.5, 32.5, 45.4, 47.3, 55.6, 83.1, 103.1 (q, J = 33.7 Hz), 113.0, 116.4 , 122.0 (d, J = 283.3 Hz), 122.8, 126.7, 128.7, 140.1, 148.5, 155.7, 157.0 ppm
IR (KBr); 3329, 2962, 2873, 1605, 1466, 1410, 1185, 1050, 1005, 860 cm-1
Mass (m / z,%); 413 (M+29), 398 (100), 380 (28), 342 (26), 324 (12), 288 (35), 270 (60), 214 (22), 160 (22), 57 (8).
[0101]
(Reference Example 10)
[0102]
Embedded image
[0103]
4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-5-hydroxyisoxazolin-3-yl) -3-methoxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran at room temperature P-Toluenesulfonic acid monohydrate (45.8 mg, 0.241 mmol) was added to a toluene (10 mL) solution in which (Compound [11]) (922 mg, 2.230 mmol) was dissolved. Refluxed. The reaction solution was poured into saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (50 mL), combined with the previous organic layer, and washed with saturated brine (100 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give a residue as a pale yellow solid (930 mg). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 4: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, the desired 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3- Methoxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [12]) was obtained as a colorless solid (748 mg, 1.983 mmol, 88.9%).
[0104]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.09 (s, 9H), 1.36 (s, 6H), 3.90 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 6.95 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 7.8 and 1.2 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H) ppm
13CNMR (100 MHz, CDClThree); Δ 27.4, 32.5, 32.5, 47.3, 55.7, 83.6, 106.8 (d, J = 1.7 Hz), 113.0, 115.8, 118.0 (D, J = 269.8 Hz), 122.9, 126.4, 128.8, 140.2, 148.8, 156.6.157.8 (q, J = 42.0 Hz), 159.8 ppm
IR (KBr); 2961, 2870, 1606, 1450, 1313, 1178, 1152, 1052, 967, 834 cm-1
Mass (m / z,%); 395 (M+22), 380 (100), 345 (16), 338 (19), 324 (25), 270 (53), 244 (10), 228 (7), 214 (9), 160 (13), 149 (10), 57 (15).
[0105]
(Reference Example 11)
[0106]
Embedded image
[0107]
Under nitrogen atmosphere, at 0 ° C., ethanethiol (0.40 mL, 5.40 mmol) was added to DMF (3 mL) in which sodium hydride 60%, 135 mg (3.38 mmol) was suspended, and the mixture was stirred for 15 minutes. To the reaction solution, 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3-methoxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [12] ) (664 mg, 1.679 mmol) dissolved in DMF (3 mL) was added dropwise and heated to 140 ° C. for 1 hour. The reaction solution was poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (50 mL), combined with the previous organic layer, and washed with saturated brine (100 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to give a residue as a pale yellow solid (671 mg). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 4: 1 mixed solvent of hexane and ethyl acetate, the desired 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3- Hydroxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [13]) was obtained as a colorless solid (533 mg, 1,398 mmol, 83.3%).
[0108]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ1.08 (s, 9H), 1.34 (s, 6H), 3.89 (s, 2H), 6.95 (dd, J = 8.1 and 1.5 Hz, 1H), 7.06 ( d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 10.6 (s, 1H)
ppm
13CNMR (100 MHz, CDClThree); Δ 27.3, 32.5, 32.5, 47.4, 83.3, 109.2, 118.7 (q, J = 266.8 Hz), 119.1, 121.6, 126.0 , 127.5 (d, J = 3.3 Hz), 138.4 (q, J = 44.5 Hz), 142.1, 148.4, 157.3, 163.
0 ppm
IR (KBr); 3355, 3148, 2960, 2868, 1629, 1576, 1494, 1330, 1179, 1147, 1052, 765 cm-1
Mass (m / z,%); 381 (M+, 61), 366 (100), 324 (6), 310 (88), 278 (11), 256 (85), 228 (18), 200 (17), 57 (19).
[0109]
Example 1
[0110]
Embedded image
[0111]
In an oxygen atmosphere at 0 ° C., 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3-hydroxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran ( Compound [13]) (80.0 mg, 0.2098 mmol) dissolved in CH2C12After adding TPP (2.1 mg) to the (5 mL) solution, the solution was irradiated with a sodium lamp and stirred for 30 minutes. The reaction solution was concentrated to give a residue as a green solid (81.2 mg). When this was applied to a silica gel column and poured out with a 20: 1 mixed solvent of hexane and diethyl ether, the desired 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3- Hydroxyphenyl] -4,4-dimethyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0] heptane (compound [14]) as a pale yellow solid (75.3 mg, 0.1822 mmol, 86.8% ).
[0112]
1HNMR (400 MHz, CDClThree); Δ 1.02 (s, 9H), 1.17 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 3.85 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.3 and 1.5 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 1) .5 Hz, 1 H), 7.91 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 10.67 (s, 1 H) ppm
13CNMR (100 MHz, CDClThree); Δ 18.5, 25.1, 27.0, 36.8, 45.7, 80.5, 105.4, 110.3, 115.9, 117.9, 118.7 (q, J = 267.0 Hz), 119.7, 126.0, 127.5 (d, J = 2.5 Hz), 138.7 (q, J = 44.5 Hz), 141.8,
157.3, 162.7 ppm
IR (KBr); 3144, 2975, 2898, 1613, 1550, 1494, 1371, 1331, 1219, 1149, 1035, 959, 872 cm-1
Mass (m / z,%); 413 (M+, 1), 381 (13), 366 (20), 357 (28), 328 (7), 273 (33), 256 (100), 228 (13), 200 (14), 57 (25).
[0113]
(Example 2)
4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3-hydroxyphenyl] -4,4-dimethyl-2,6,7-trioxa obtained in Example 1 1.00 × 10 of bicyclo [3.2.0] heptane (compound [14])-Five1 mL of M acetonitrile solution was added to 1.00 × 10 4 of tetrabutylammonium fluoride.-2It added to 2 mL of M DMSO solutions at 40 degreeC, and the light emission at that time was measured with the fluorescence spectrometer. The quantum yield of light emission at this time is estimated to be 0.44, the half-life of light emission is 1400 seconds, λmaxWas 481 nm.
[0114]
(Example 3)
4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3-hydroxyphenyl] -4,4-dimethyl-2,6,7-trioxa obtained in Example 1 1.00 × 10 of bicyclo [3.2.0] heptane (compound [14])-Four1 mL of M acetonitrile solution was added to 2 mL of 0.1N sodium hydroxide solution at 40 ° C., and luminescence at that time was measured with a fluorescence analyzer. The quantum yield of light emission at this time is estimated to be 0.39, the half-life of light emission is 2700 seconds, λmaxWas 479 nm.
[0115]
(Example 4)
4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3-hydroxyphenyl] -4,4-dimethyl-2,6,7-trioxa obtained in Example 1 1.00 × 10 of bicyclo [3.2.0] heptane (compound [14])-30.1 mL of M acetonitrile solution was added at 40 ° C. to 2 mL of 0.1N sodium hydroxide solution and 0.9 mL of distilled water, and the luminescence at that time was measured with a fluorescence analyzer. At this time, the emission quantum yield is estimated to be 0.24, the half-life of emission is 1200 seconds, λmaxWas 476 nm.
[0116]
(Reference Example 12)
[0117]
Embedded image
[0118]
Under nitrogen atmosphere, at 0 ° C., 1.84 mL (22.8 mmol) of pyridine was added to 30 mL of dichloromethane, and further 1.33 mL (14.3 mmol) of phosphorus oxychloride was added and stirred for 15 minutes. 4-t-butyl-5- [4- (5-trifluoromethyl-3-isoxazolyl) -3-hydroxyphenyl] -3,3-dimethyl-2,3-dihydrofuran (compound [13]) was added to the reaction solution. ) (1.44 g, 3.78 mmol) in dichloromethane (12 mL) was added dropwise, stirred at 0 ° C. for 2 hours, gradually warmed to room temperature and stirred overnight.
[0119]
The reaction solution was cooled again to 0 ° C., 3.68 mL (45.5 mmol) of pyridine was added, 3.20 mL (47.3 mmol) of ethylene cyanohydrin was further added, and the mixture was gradually returned to room temperature and stirred overnight. The reaction solution was poured into pure water (50 mL) and extracted with ethyl acetate (50 mL). The aqueous layer was extracted again with ethyl acetate (50 mL), combined with the previous organic layer, and washed with pure water (100 mL × 3). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated to obtain the target 5- (3-tert-butyl-4,4-dimethyl-4,5-dihydrofuran-2-yl) -2- (5) phosphate. -Trifluoromethylisoxazol-3-yl) phenyl ester Bis- (2-cyanoethyl) ester (compound [15]) was obtained as a pale yellow oil (2.10 g, 3.70 mmol, 98.1%).
[0120]
1HNMR (500 MHz, CDClThree ); Δ 1.08 (s, 9H), 1.35 (s, 6H), 2.80 (m, 4H), 3.90 (s, 2H), 4.45 (m, 4H), 7.33 (Dd, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), ppm.
[0121]
(Reference Example 13)
[0122]
Embedded image
[0123]
Phosphoric acid-5- (3-tert-butyl-4,4-dimethyl-4,5-dihydrofuran-2-yl) -2- (5-trifluoromethylisoxazol-3-yl) phenyl ester at room temperature 28% sodium methylate / methanol solution (1.6 mL) was added to a solution of bis- (2-cyanoethyl) ester (compound [15]) (1.20 g, 2.11 mmol) dissolved in methanol (40 mL) for 1 hour 30 minutes. Stir. A saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (2.0 mL) was added to the reaction solution, and the mixture was further stirred for 30 minutes and concentrated to obtain a white solid. Methanol (20 mL) was added to the solid, and insoluble materials were removed by filtration. When the filtrate was concentrated, the target mono- [5- (3-t-butyl-4,4-dimethyl-4,5-dihydrofuran-2-yl) -2- (5-trifluoromethylisophosphate) was obtained. Oxazol-3-yl) phenyl] ester disodium salt (compound [16]) was obtained as a white solid (0.69 g, 1.37 mmol, 64.5%).
[0124]
1HNMR (500 MHz, CDThreeOD); δ 1.11 (s, 9H), 1.34 (s, 6H), 3.83 (s, 2H), 6.98 (dd, 1H), 7.78 (d, 1H), 7. 85 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), ppm.
[0125]
(Example 5)
[0126]
Embedded image
[0127]
Mono- [5- (3-t-butyl-4,4-dimethyl-4,5-dihydrofuran-2-yl) -2- (5-trifluoromethylisoxazole) phosphate at 0 ° C. in an oxygen atmosphere -3-yl) phenyl] ester disodium salt (compound [16]) (65.0 mg, 0.129 mmol) dissolved in methanol (4 mL) and dichloromethane (15 mL) was mixed with TPP (2.0 mg). After the addition, it was irradiated with sodium lamp and stirred for 2 hours. The reaction mixture was concentrated, methanol was added to the concentrate, and the insoluble material was filtered through a 0.45 μm polytetrafluoroethylene filter and concentrated again. The concentrate was dissolved in pure water (1.5 ml) and subjected to HPLC using a polymer reverse phase C18 preparative column, and the fraction eluted with water and acetonitrile was lyophilized to obtain the desired phosphoric acid. Mono- [5- (5-t-butyl-4,4-dimethyl-2,6,7-trioxabicyclo [3.2.0] hept-1-yl) -2- (5-trifluoromethyliso Oxazol-3-yl) phenyl] ester disodium salt (compound [17]) was obtained as a white solid (52.0 mg, 0.097 mmol, 75.3%).
[0128]
1HNMR (500 MHz, CDThreeOD); δ 1.04 (s, 9H), 1.14 (s, 3H), 1.44 (s, 3H), 3.83 (d, 1H), 4.49 (d, 1H), 7. 33 (dd, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.91 (dd, 1H), 8.35 (d, 1H) ppm.
[0129]
【The invention's effect】
The 1,2-dioxetane derivative (I) of the present invention can exhibit stable luminescence with a high quantum yield and has high thermal stability, so that no degradation products are seen after one year depending on refrigeration storage. It is a very stable compound. Therefore, the measurement of luminescence can be performed simply and efficiently, and is useful, for example, in the field of clinical examinations. In addition, the 1,2-dioxetane derivative (I) of the present invention has not only high thermal stability and high luminous efficiency, but also eliminates the operation of adding the enhancer itself and the enhancer in a protic solvent. Can save you time.
Claims (7)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002057606A JP4288884B2 (en) | 2001-03-08 | 2002-03-04 | 1,2-dioxetane derivative, luminescent reagent, luminescent method and measuring method |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2001-65347 | 2001-03-08 | ||
JP2001065347 | 2001-03-08 | ||
JP2002057606A JP4288884B2 (en) | 2001-03-08 | 2002-03-04 | 1,2-dioxetane derivative, luminescent reagent, luminescent method and measuring method |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2002338576A JP2002338576A (en) | 2002-11-27 |
JP4288884B2 true JP4288884B2 (en) | 2009-07-01 |
Family
ID=26610891
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002057606A Expired - Fee Related JP4288884B2 (en) | 2001-03-08 | 2002-03-04 | 1,2-dioxetane derivative, luminescent reagent, luminescent method and measuring method |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4288884B2 (en) |
-
2002
- 2002-03-04 JP JP2002057606A patent/JP4288884B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2002338576A (en) | 2002-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6045991A (en) | Compositions and methods for generating red chemiluminescence | |
ES2230710T3 (en) | GENERATING COMPOSITIONS OF CHEMOLUMINISCENCE AND CORRESPONDING PROCEDURES. | |
AU767757B2 (en) | Compositions and methods for generating red chemiluminescence | |
EP0794987B1 (en) | Chemiluminescent dialkyl-substituted 1,2-dioxetane compounds, methods of synthesis and use | |
JPH0670797A (en) | Method of measuring enzyme using chemiluminescent reaction | |
JPH07509736A (en) | Improved chemiluminescent 1,2-dioxetanes | |
AU9102398A (en) | Novel compounds for generating chemiluminescence with a peroxidase | |
US5225584A (en) | Synthesis of stable water-soluble chemiluminescent 1,2-dioxetanes and intermediates therefor | |
US6218135B1 (en) | 1,2-dioxetane derivative | |
JP4421692B2 (en) | 1,2-Dioxetane derivative condensed with pyran ring, measuring reagent and measuring method using the derivative | |
JP4288884B2 (en) | 1,2-dioxetane derivative, luminescent reagent, luminescent method and measuring method | |
EP1238976B1 (en) | 1,2-dioxetane derivates, luminescent reagents, luminescence methods and measuring methods | |
JP4453259B2 (en) | Tricyclic 1,2-dioxetane derivatives | |
US7115757B2 (en) | 1,2-dioxetane derivatives and reagents employing them | |
JP4421693B2 (en) | 1,2-Dioxetane derivative condensed with furan ring, measuring reagent and measuring method using the derivative | |
JPH09216887A (en) | 1,2-dioxetane derivative cyclicly condensed with furan ring | |
JP5092254B2 (en) | 1,2-Dioxetane derivative and reagent using the same | |
JP2004002300A (en) | 1,2-dioxetane derivative and reagent using the same | |
JPH08245615A (en) | 1,2-dioxetane derivative | |
AU2004200649B2 (en) | Novel compounds for generating chemiluminescence with a peroxidase | |
JPH09157271A (en) | 1,2-dioxetane derivative bonded to oxobenzocycloalkene ring in spiro state |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050207 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080930 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081128 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090120 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090210 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090310 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090323 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 4288884 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120410 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120410 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130410 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130410 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140410 Year of fee payment: 5 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |