JP4275015B2 - エラグ酸の検出・定量方法 - Google Patents
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また、この時、エラグ酸を含有する溶液に対して、ジメチルアセトアミドを2重量%以上程度添加すれば、試料調製液における優れたエラグ酸の沈殿防止効果が得られるため好ましい。逆に、ジメチルアセトアミドの添加量が2重量%よりも少ないと、液体中にエラグ酸が沈殿してしまうため、好ましくない。
また、移動相としては、10%トリフルオロ酢酸(TFA)を含むアセトニトリルと10%TFAを含む超純水を使用すると、最も良好な分離を示すため望ましい。その他移動相としてはアセトニトリルの代わりとしてメタノールが、緩衝液としてはギ酸、酢酸等が使用できる。
HPLC分析条件:
使用カラム:Inertsi1ODS−2(ジーエルサイエンス(株) 内径4.6mm,長さ250mm)
検出器:紫外吸光光度計測定波長=254nm
カラム温度:40℃
流量:1.0mL/min
注入量:20μL/min
移動相:(a)アセトニトリル:0.1%TFA=90:10
(b) 水:0.1%TFA=90:10
上記(a)(b)液を用い、表1に記したグラジェントによる測定を行い得られたクロマトグラムを図1に示した。
エラグ酸試薬20mgを精密に量り、DMAを用い正確に1mg/mLとし10分間超音波処理を行った。さらにDMAを用いて40、25、12.5、6.25、3.125μg/mLに希釈し標準溶液とした。別に、クマル酸20mgを精密に量り、DMAを用い正確に1mg/mLとし10分間超音波処理を行い内部標準液とした。
各標準溶液を950μLとり、内部標準液を各々50μL添加しvo1texをかけ混和し、上記の測定条件によりHPLCにて3回繰り返し測定し、図2に示す検量線を作成した。
測定サンプルにDMAを添加し超音波処理をしたものを、上記で示した高速液体クロマトグラフィーで同一条件により分析する。標準品との保持時間(リテンションタイム)の比較によりエラグ酸を同定する。
測定サンプルにDMAを添加し超音波処理をしたものを定性試験と同一の分析条件により分析する。標準試料のピーク面積値又はピーク高さから算出した内標比を縦軸に、標準試料濃度を横軸に検量線を作成し、試料調製液中のエラグ酸量を定量する。
先ず、エラグ酸の各種有機溶媒に対する溶解性について試験を行った。試験は、エラグ酸(東京化成工業(株))を2mg秤量し、これを表2記載の有機溶媒1mLに溶解し、その溶解性を評価した。
グァバ葉抽出液に50%DMAを添加し超音波処理をしたサンプルと無添加サンプル中のエラグ酸ピーク面積を、経時的に0、6、12、18、24、48、72時間に上記HPLC測定方法を用いて測定したところ、下記の図3の通り、50%DMA添加による溶液中のエラグ酸安定化効果が認められた。
バナバ、マレーフトモモ、モモタマナ抽出液の各々に50%DMAを添加し10分間超音波処理をし、サンプル溶液とした。クマル酸20mgを精密に量り、DMAを用い正確に1mg/mLとし、10分間超音波処理を行い調製した内部標準液50μLにサンプル溶液950μL加え、vo1texをかけ混和し、上記HPLC測定方法を用いてエラグ酸量の測定を行なった。
測定結果を表3に示す。
次に、上記実施例において、エラグ酸を含有する溶液に対して、ジメチルアセトアミドの好ましい添加割合に関して、下記の実験例を行った。
その結果、DMA1%添加サンプル中のエラグ酸ピーク面積は24時間以降減少し、安定してエラグ酸を測定するためには、2重量%以上添加することが好ましいがわかった。
Claims (2)
- 溶液中のエラグ酸を検出・定量する方法であって、
エラグ酸を含有する溶液に対して、2重量%以上50重量%以下のジメチルアセトアミドを添加し、得られた溶液を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)にて分離することを特徴とするエラグ酸の検出・定量方法。 - エラグ酸を含有する溶液がフトモモ科に含まれるグァバ、フトモモ、チョウジ、レンブ、ユーカリ等の植物や、タラ、バナバ、モモタマナ、ヌルデ、ヒシ、ゲンノショウコ、ウワウルシ、ラズベリー、ブルーベリー、ブラックベリー等の果実部、種子部、葉部、根部又は茎部から選ばれる1種又は2種以上の植物から抽出したものを含むことを特徴とする請求項1記載のエラグ酸の検出・定量方法。
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