JP4262616B2 - 検体の免疫学的検査方法及びその方法に用いる検査器具 - Google Patents
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Description
(1)上記のような検体液又はその希釈液(以下、これらを濾過した液を併せて「希釈検体液」と称する。)を、酵素、金属コロイド、着色ラテックス、色素などの呈色識別物質で抗体を標識した標識抗体液と接触させる。
(2)この接触により、検体中の抗原と標識抗体とを特異的に反応させて、抗原抗体の免疫複合体を形成させる。
(3)その免疫複合体の量を、目視によるか又は光学的な変化として測定し、検体中の抗原の定性測定又は定量測定をおこなう。
(1)先端が小孔を有するノズル状部であり、かつ、標識抗体を含浸させた第1フィルターを内蔵している第1キャップ
(2)先端に第1キャップを装着して検体収容容器を形成する可撓性の容器本体
(3)第1キャップの小孔と連通する小孔を有し、第1キャップのノズル状部外側に嵌め込んで用いる攪拌子
(4)先端が小孔を有するノズル状部であり、かつ、第2フィルターを内蔵している第2キャップ
(5)先端に第2キャップを装着すると共に、後端から先端に攪拌子を装着した検体収容容器を挿入して回転自在に嵌合させ、次いで、密封状態に嵌合することが可能な注入用容器
(1)検体収容容器の容器本体に希釈検体液を収容する。容器本体は、指で押圧すると凹む程度の可撓性を有する必要がある。例えば、軟質ポリエチレン製のものが好ましい。また、容器本体は、下窄まりのテーパー状の細い筒型であり、かつ、その外壁のほぼ中央部(抽出用容器の内壁に嵌合する位置)に複数のリブを設けてあることが好ましい。
(2)第1フィルター(標識抗体を含浸させたフィルター)を第1キャップに挿入して内蔵させる。第1キャップは、先端を小孔を有するノズル状に成形したものである。
(3)希釈検体液を収容した容器本体に第1キャップを装着して検体収容容器とする。
(4)第1キャップのノズル状部の先端に攪拌子を取り付ける。攪拌子は、出っ張った攪拌翼を備え、その中心部に第1キャップのノズル状部の小孔に連通する小孔を貫通してある。したがって、攪拌子を取り付けた状態で検体収容容器の側壁を指で押圧すると、希釈検体液が攪拌子の先端から吐出される。
(5)一方、注入用容器の先端に第2フィルター(標識抗体を含浸させていないフィルター)を内蔵した第2キャップを装着する。注入用容器は、例えば、内窄まりのテーパー状の細い筒型であり、その後端は、検体収容容器の外壁と嵌合が可能であると共に開放状態に形成してある。すなわち、抽出用容器には底部がない。
(6)攪拌子を取り付けた検体収容容器を注入用容器の後端から挿入して、まず、回転自在に嵌合させる。抽出用容器の内壁と検体収容容器の外壁に設けたリブの部分とが接触するように嵌合すると、注入用容器との嵌合状態を維持しながら検体収容容器を容易に回転させることができる。
(7)注入用容器と嵌合した検体収容容器の容器本体の側壁を指で押圧して希釈検体液を注入用容器内に吐出する。そうすると、第1キャップのノズル状部に取り付けた攪拌子の周囲は吐出された希釈検体液で充満する。なお、吐出された希釈検体液は、第1フィルター(標識抗体を含浸させてあるフィルター)を通過したので、「標識抗体を含む検体濾過液」の状態となっている。
(8)検体収容容器を把持して回転させることによって先端の攪拌子を回転させ、注入用容器内の標識抗体を含む検体濾過液を攪拌・混合する。この操作によって、検体中の抗原と標識抗体とが十分に混和された状態で免疫複合体を形成することができる。
(9)次いで、検体収容容器を押し込んで、抽出用容器に密着させる。検体収容容器と抽出用容器とを、どちらも下窄まりのテーパー状に形成してあると、検体収容容器を押し込むだけで両者は容易に密着し、密封する。
(10)再び検体収容容器の側壁を押圧して注入用容器内の標識抗体を含む検体濾過液の全量を注入用容器に装着した第2キャップの先端からテストデバイスへ吐出・注入する。
(11)テストデバイスは、表面に開口部を有し、吸収材(脱脂綿や吸収紙など)と抗体を固定化させた多孔性膜材(メンブレンなど)を収納してある。テストデバイスに注入された標識抗体を含む検体濾過液は、検体中の抗原と標識抗体との免疫複合体を多孔性膜材に吸着させる。
(12)テストデバイスに洗浄液を注入して多孔性膜材を洗浄する。
(13)テストデバイス上の反応を観察して、抗原の有無や種別を鑑別・診断する。
(1)試験方法
実施例1で使用した検体収容容器の容器本体、第1フィルター(標識抗体を含浸させてあるフィルター)、第1キャップ(第1フィルターを内蔵したキャップ)、第2フィルター(標識抗体を含浸させてないフィルター)、第2キャップ(第2フィルターを内蔵したキャップ)、注入用容器、テストデバイスなどと同一の部材や容器を用い、以下の2通りの方法によって、検体の免疫学的な検査をおこなった。両方法とも、同じ検体について同じ標識抗体や同じ希釈液・洗浄液を用い、同じテストデバイスに注入して洗浄後、反応を観察した。試験結果は表1と表2に示すとおりである。
a.従来法:
検体収容容器の容器本体に希釈検体液を収容し、標識抗体液を3滴滴下して混和した 後、容器本体に第2フィルターを内蔵した第2キャップを装着し、標識抗体を含む検体 濾過液をテストデバイスに注入する方法(従来から主として実施されている検査方法)b.本発明法:
先端に攪拌子を取り付けた第1キャップ(第1フィルターを内蔵している)を、希釈 検体液を収容した容器本体に装着して検体収容容器となし、この検体収容容器を第2フ ィルターを装着した抽出用容器に回転自在に嵌合させ、注入用容器内に希釈検体液を吐 出し、これを攪拌子によって攪拌・混合した後、注入用容器から標識抗体を含む検体濾 過液をテストデバイスへ注入する方法(実施例1の検査方法)
(2)供試した試薬類や部材の調製
a.希釈検体液
緩衝液に界面活性剤などを添加して製した希釈液によって卵培養したウイルス(1.25
×107)を6.25倍から125倍まで段階的に希釈した検体を加えて攪拌し、希釈検
体液を調製した。
b.標識抗体液
すでに広く知られている金コロイド調製法により金コロイドを調製した後、抗インフ ルエンザA型抗体及び抗インフルエンザB型抗体を既知の方法で結合させて、それぞれ の金コロイド標識抗体が混合している状態の標識抗体液を作成した。
c.第1フィルター(標識抗体を含浸させたフィルター)の作成
上記の標識抗体液を2滴ずつ、ガラス繊維系の濾紙に塗布した後、自然乾燥させ、そ の上に別の濾紙を1枚重ねて第1フィルターとした。
d.テストデバイスの調製
選択されたポアサイズを有するメンブランに抗インフルエンザA型抗体及び抗インフ ルエンザB型抗体並びに抗マウスIgGに対する抗体のそれぞれ至適量をテストデバイ スの所定の場所に塗布した。その際、塗布する形状は任意の形状とすることが可能であ り、反応後の視認性を考慮して、塗布間隔及び塗布量を決定した。また、検体液と標識 抗体との混合液を滴下する開口部は、円形、楕円形、長四角形、菱形、台形など、検出 するサインの数などの目的に合わせて選択することができるが、3種類のサインの検出 を目的とする本試験例の場合は、視認性のよい楕円形が好ましいので、楕円形を選択し た。なお、抗マウスIgGに対する抗体の代わりにヒトインフルエンザA型抗原及びB 型抗原の混合体を選択してもよい。
e.洗浄液
緩衝液にウレアなどの蛋白変性剤を添加して調製した。
(3)試験結果
(注1)原ウイルス量は、公知のTCID50(50% tissue culture infective dose) で算出
したものを併記した。
(注2)ブランクとして、生理食塩液を用いた。
(注3)−:陰性、+:陽性、++:強陽性、を示す。
(注1)原ウイルス量は、公知のTCID50(50% tissue culture infective dose) で算出
したものを併記した。
(注2)ブランクとして、生理食塩液を用いた。
(注3)−:陰性、+:陽性、++:強陽性、を示す。
(4)所見
表1・表2から、本発明法(希釈検体液を標識抗体含浸フィルターを通過させ、かつ標識抗体を含む検体濾過液を攪拌する方法)は、従来法(希釈検体液に標識抗体液を滴下する方法)と一致する結果が得られることが確認された。この結果から、本発明法の検査精度は、従来法と同等であることが理解できる。
(1)試験方法
試験例1で実施した2通りの試験方法(本発明法と従来法)について、それぞれの方法によって「希釈検体液を検体収容容器の容器本体に収容する直前からテストデバイスへ吐出・注入する直前までの所要時間」を計測した。その方法は、各試験方法ごとに5名のパネラー(検体の免疫学的検査の未経験者)を選んで両試験をおこなわせ、所要時間を計測した。なお、所要時間の計測は30秒単位でおこなった。すなわち、5分から5分30秒の間に終了すれば5分30秒を、5分30秒から6分の間に終了すれば6分を、それぞれ所要時間とした。試験結果を表3に示す。
(2)試験結果
表3から、本発明法は、従来法に比べて、検査所要時間を格段に短縮できることが確認された。
61:そのノズル状部、 7:第2フィルター、 8:注入用容器の容器本体、
9:注入用容器、 a:希釈検体液
Claims (5)
- 先端が小孔を有するノズル状部であり、かつ標識抗体を含浸させたフィルターを内蔵し、該ノズル状部外側に嵌め込んだ攪拌子を有するキャップを装着した検体収容容器を注入用容器の容器本体後端から該検体収容容器の先端を挿入し、嵌合させ、検体収容容器から検体液又はその希釈液を注入用容器内に吐出し、吐出した液を注入用容器内で前記攪拌子を用いて攪拌・混合した後注入用容器からテストデバイスに吐出・注入して反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査・診断することを特徴とする検体の免疫学的検査方法。
- 検体液又はその希釈液を濾過しながら標識抗体を添加する操作とこの標識抗体を含む検体濾過液を攪拌する操作とこの攪拌した検体濾過液をさらに濾過しながらテストデバイスに注入する操作とを、一体化させた容器を用いておこなうこととした請求項1に記載の検体の免疫学的検査方法。
- 検体中の抗原がインフルエンザウイルスである請求項1又は2に記載の検体の免疫学的検査方法。
- 少なくとも、以下の(1)〜(5)の部材からなり、これらの部材を一体化させて検体の免疫学的検査のために用いる検査器具。
(1)先端が小孔を有するノズル状部であり、かつ、標識抗体を含浸させた第1フィルターを内蔵している第1キャップ
(2)先端に第1キャップを装着して検体収容容器を形成する可撓性の容器本体
(3)第1キャップの小孔と連通する小孔を有し、第1キャップのノズル状部外側に嵌め込んで用いる攪拌子
(4)先端が小孔を有するノズル状部であり、かつ、第2フィルターを内蔵している第2キャップ
(5)先端に第2キャップを装着すると共に、後端から先端に攪拌子を装着した検体収容容器を挿入して回転自在に嵌合させ、次いで、密封状態に嵌合することが可能な注入用容器 - インフルエンザウイルスの検査・診断に用いる請求項4に記載の検査器具。
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