JP4173541B2 - Compounds with growth hormone releasing properties - Google Patents

Description

（ここでＲ¹⁶およびＲ¹⁷は各々独立に水素または低級アルキルである）である〕；
Ｂは（Ｇ）_t−（Ｈ）_uであり
〔ここでｔおよびｕは各々独立に０または１であり；
ＧおよびＨは天然Ｌ−アミノ酸もしくはそれらの対応するＤ−異性体、または非天然アミノ酸、例えば１，４−ジアミノ酪酸、アミノイソ酪酸、１，３−ジアミノプロピオン酸、４−アミノフェニルアラニン、３−ピリジルアラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸、Ｎ−メチルアントラニル酸、アントラニル酸、Ｎ−ベンジルグリシン、３−アミノメチル安息香酸、３−アミノ−３−メチルブタン酸、サルコシン、ニペコチン酸もしくはイソニペコチン酸、から成る群より選ばれたアミノ酸残基であり；そしてｔとｕが共に１である時、ＧとＨの間のアミド結合はＹ−ＮＲ¹⁸−により置き換えられることがあり、ここでＹは−CO−または−CH₂−でありそしてＲ¹⁸は水素、低級アルキルまたは低級アラルキルである〕；
Ｃは式−NH−CH（（CH₂）_w−Ｒ⁴）−CO−のＤ−アミノ酸であり
〔ここでｗは０，１または２であり；そして
Ｒ⁴は、場合により各々がハロゲン、低級アルキル、低級アルキルオキシ、低級アルキルアミノ、アミノまたはヒドロキシにより置換されることがある次の基：

から成る群より選ばれる〕；
Ｄは、ｐが１である時、式
−ＮＲ²⁰−CH（（CH₂）_k−Ｒ⁵）−CO−であり、または
ｐが０である時、式
−ＮＲ²⁰−CH（（CH₂）_l−Ｒ⁵）−CH₂−Ｒ⁶もしくは
−ＮＲ²⁰−CH（（CH₂）_m−Ｒ⁵）−CO−Ｒ⁶であり
〔ここでｋは０，１または２であり；
１は０，１または２であり；
ｍは０，１または２であり；
Ｒ²⁰は低級アルキルまたは低級アラルキルから成る群より選ばれ；
Ｒ⁵は、場合により各々がハロゲン、低級アルキル、低級アルキルオキシ、アミノまたはヒドロキシにより置換されることがある次の基：

から成る群より選ばれ；
Ｒ⁶はピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、−ＯＨまたは−Ｎ（Ｒ⁷）−Ｒ⁸であり、ここでＲ⁷およびＲ⁸は各々独立に水素または低級アルキルである〕；
Ｅは、ｐが１である時、−NH−CH（Ｒ¹⁰）−（CH₂）_v−Ｒ⁹であり
〔ここでｖは０または１，２，３，４，５，６，７，８の群から選ばれた整数であり；
Ｒ⁹は水素、イミダゾリル、グアニジノ、ピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、−Ｎ（Ｒ¹¹）−Ｒ¹²、または

（ここでｎは０，１または２でありそしてＲ¹⁹は水素または低級アルキルである）

（ここでｏは１，２，３の群より選ばれた整数であり、Ｒ¹¹およびＲ¹²は各々独立に水素または低級アルキルである）、または

（上記基は各々、ハロゲン、低級アルキル、低級アルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシにより置換されることがある）、またはアミノ基とヘキサピラノースもしくはヘキサピラノシル−ヘキサピラノースからのアマドリ転位生成物であり；そして
Ｒ¹⁰は、ｐが１である時、−Ｈ，−COOH，−CH₂−Ｒ¹³，−CO−Ｒ¹³または−CH₂−OHであり、ここで
Ｒ¹³はピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、−OHまたは−Ｎ（Ｒ¹⁴）−Ｒ¹⁵であり、ここでＲ¹⁴およびＲ¹⁵は各々独立に水素または低級アルキルである〕；
ＣとＤの間の結合を除いた式Ｉ中の全てのアミド結合は独立に−Ｙ−ＮＲ¹⁸−により置き換えられてもよく、ここでＹは−CO−または−CH₂−であり、そしてＲ¹⁸は水素、低級アルキルまたは低級アラルキルである｝
により表される化合物、または医薬上許容されるその塩であって、次の化合物：
（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
３−（H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
２−（H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe−NH）−２−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
２−（H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
２−（（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
３−（H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
３−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
２−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
を除いた化合物。
式Ｉのペプチド誘導体は、場合により上記に指摘したような−Ｙ−ＮＲ¹⁸−〔例えばアミノメチレン（−CH₂−NH−）〕によるアミド結合（−CO−NH−）の置換および／またはペプチドのＮ末端もしくはＣ末端における修飾と組み合わされた、ペプチド配列中の隣接Ｄ−アミノ酸の存在のため、酵素によるタンパク質分解に対して高められた耐性を示す。先行技術文献中に提案されたペプチドのものと比べて高められた本発明のペプチド誘導体の生物学的利用能は、本発明の化合物がタンパク質分解に対するそれらの耐性と小さいサイズとを合わせ持つことによってもたらされると抽象的には考えられる。
上記構造式中と本明細書全体を通して、下記の用語は後述するような意味を有する：
上述した低級アルキル成分は、直鎖または分枝鎖または環状構造のいずれかである指定の長さのアルキル成分、好ましくは炭素原子数１〜６のアルキル成分を包含するものである。直鎖アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルである。分枝鎖アルキルの例はイソプロピル、sec−ブチル、tert−ブチル、イソペンチルおよびイソヘキシルである。環状アルキルの例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。
上述した低級アルコキシ成分は、直鎖または分枝鎖または環状構造のいずれかである指定の長さのアルコキシ成分、好ましくは炭素原子数１〜６のアルコキシ成分を包含するものである。直鎖アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシおよびヘキソキシである。分枝鎖アルコキシの例はイソプロポキシ、sec−ブトキシ、tert−ブトキシ、イソペントキシおよびイソヘキソキシである。環状アルコキシの例はシクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシおよびシクロヘキシルオキシである。
上述した低級アルキルアミノ成分は、直鎖または分枝鎖または環状構造のいずれかである指定の長さのアルキルアミノ成分、好ましくは炭素原子数１〜６のアルキルアミノ成分を包含するものである。直鎖アルキルアミノの例はメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、ペンチルアミノおよびヘキシルアミノである。分枝鎖アルキルアミノの例はイソプロピルアミノ、sec−ブチルアミノ、tert−ブチルアミノ、イソペンチルアミノおよびイソヘキシルアミノである。環状アルキルアミノの例はシクロプロピルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロペンチルアミノおよびシクロヘキシルアミノである。
本明細書中、「アリール」なる語は、芳香族環、例えばフェニル、ナフチル、ピリジル、１−Ｈ−テトラゾール−５−イル、チアゾリル、イミダゾリル、インドリル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チオフェネイル、キノリニル、ピラジニルまたはイソチアゾリルから成る群より選択された炭素環式および複素環式芳香族環であって、場合により１または複数のＣ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、ハロゲン、アミノまたはアリールにより置換されることがある芳香族環を包含する。アリールは好ましくは、ハロゲンにより、アミノにより、ヒドロキシにより、Ｃ_1-6アルキルによりもしくはＣ_1-6アルコキシにより置換されることがある、フェニル、チエニル、イミダゾリル、ピリジル、インドリル、キノリニルまたはナフチルである。
上述した低級アラルキル成分は低級アルキル成分とアリール成分とから構成され、ここで前記低級アルキル成分とアリール成分は前に定義した通りである。
「ハロゲン」なる語はCl，Ｆ，BrおよびＩを包含する。
天然アミノ酸には慣用的な三文字記号、例えばアラニンにはAlaが使われる。
発明の詳細な説明
式Ｉの化合物の好ましい態様によれば、Ａは水素、３−N-Me-AMB、３−AMBまたはAibである。ｔが１である時、式Ｉの化合物中のＧは好ましくは、Ala、Gly、サルコシン、３−アミノメチルベンゾイル、Ｒ−ニペコチニル、ニペコチン酸またはイソニペコチン酸であり、より好ましくは３−アミノメチルベンゾイル、Ｒ−ニペコチニル、ニペコチン酸またはイソニペコチン酸である。。ｕが１である時、Ｈは好ましくはHis, Phe, Tic, Phe（4-NH₂）， 3-Pyal, Gly, Ala, Sar, Pro, Tyr, Arg, Orn，３−アミノメチル安息香酸またはD-Pheであり、より好ましくはＨはHis， PheまたはAlaであり、最も好ましくはＨはHisまたはAlaである。式Ｉの化合物中のＣは好ましくはＤ−２−ナフチルアラニン（D-2Nal）、Ｄ−１−ナフチルアラニン（D-lNal）、D-PheまたはD-Trpであり、より好ましくはD-2NalまたはD-Pheであり、最も好ましくはN-Me-D-2Nal, D-2Nal, D-PheまたはN-Me-D-Pheである。式Ｉの化合物中のＤは、好ましくは−ＮＲ²⁰−CH（（CH₂）_k−Ｒ⁵）−CO−（ここでｋは好ましくは１でありそしてＲ²⁰は低級アルキルである）であり、より好ましくはＤはD-PheまたはD-2Nalである。最も好ましくは、ＤはN-Me-D-Phe-オール、N-Me-D-Phe、N-Me-D-2Nal-オール、N-Me-D-Phe−NH₂、N-Me-D-Phe-NH-MeまたはN-Me-D-（4-I）Phe-NH-Meである。
式Ｉの化合物中のｐが１である時、Ｅは好ましくはLys-NH₂、Ser-NH₂、NH−（２−（１−ピペラジノ）エチル）、NH−（３−（１−モルホリノ）プロピル）、NH−（２−アミノエチル）、NH−（４−アミノメチルベンジル）、NH−（ベンジル）、Lys-OH、NH−（１−ヒドロキシ−６−アミノ−２Ｓ−ヘキシル）、NH−（２−（１−メチル−２−ピロリジニル）エチル）または３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルであり、最も好ましくは、ＥはNH−（２−（１−メチル−２−ピロリジニル）エチル）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル、Lys-NH₂またはSer-NH₂である。
式Ｉの化合物中のＲ⁴は好ましくは２−ナフチルである。Ｒ⁵は好ましくはフェニルである。ｖは好ましくは２〜６であり、そしてＲ⁹はNH₂、２−モルホリノエチル、３−モルホリノプロピルまたは（１−メチルピロリジニル）エチルである。Ｒ¹⁰は好ましくは−COOH，−CH₂-OH，−Ｈ，−CONH₂または−CON（CH₃）₂である。
本発明の特定化合物の例を下記に示す：
（２Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−（２−ナフチル）プロパノール：

（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂：

３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン：

H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂：

（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂：

H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノエタン：

（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-Me：

３−（（３−メチルアミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン：

（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-N-Me₂：

H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe：

３−メチルアミノメチル−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH₃：

ピペリジン−４−カルボン酸Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルアミド：

非天然アミノ酸残基の構造：

ペプチド結合代替物に用いる略号：

式Ｉの化合物は液相または固相ペプチド合成の常法により調製することができる。例えば、固相合成は、本質的にStewartおよびYoung, Solid Phase Peptide Synthesis，第２版，ロックフォード，イリノイ州，アメリカ合衆国，1976年により記載された通りに実施することができる。液相ペプチド合成は例えば本質的にBondansky他，Peptide Synthesis,第２版，ニューヨーク，ニューヨーク州，アメリカ合衆国，1976年により記載された通りに実施することができる。
アミド結合の代替物としてのアミノメチレンは例えばY. SasakiおよびD.H. Coy, Peptides 8（1）, 1987, 119-121頁により記載された方法に従って導入することができる。モノ−またはジ−ヘキサピラノースで誘導体化されたアミノ基を含むペプチド誘導体は、本質的にR. Albert他，Life Sciences 53, 1993, 517-525頁に記載された方法によるアマドリ転位によって、調製することができる。適当なモノ−またはジ−ヘキサピラノースの例は、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトースまたはセロビオースである。合成の出発物質として用いる誘導体は商業的に入手でき且つ必要な時には適当な保護基を提供することができ、一般式Ｉの“Ａ”成分を調製するのに用いる出発物質は周知の方法により調製することができ且つ所望であればそれ自体既知の方法で保護することができる。
保護基に使われる略号：

式Ｉの化合物の医薬上許容される酸付加塩としては、該ペプチドを無機または有機酸と、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、酢酸、リン酸、乳酸、マレイン酸、フタル酸、クエン酸、グルタル酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸、シュウ酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、スルファミン酸およびフマル酸と反応させることによって調製されるものが挙げられる。
別の面では、本発明は、医薬上許容される担体または希釈剤と共に、一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容される塩を活性成分として含んで成る医薬組成物に関する。
本発明の化合物を含有する医薬組成物は、常用技術により、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, 1985に記載されたようにして、調製することができる。該組成物は常用の剤形、例えばカプセル剤、錠剤、エアゾール剤、液剤、懸濁液剤または局所用剤の剤形であることができる。
使用される医薬担体または希釈剤は、常用の固形または液状担体であることができる。固形担体の例はラクトース、石膏、ショ糖、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはセルロースの低級アルキルエーテルである。液状担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンおよび水である。
同様に、担体または希釈剤として、当該技術分野において知られている任意の持効性材料、例えば単独のまたはワックスと混合したグリセリルモノステアレートもしくはグリセリルジステアレートを挙げることができる。
固形担体を経口投与用に使う場合、製剤は錠剤に成形するか、粉末もしくはペレットの形で硬質ゼラチンカプセル中に入れるか、またはそれをトローチもしくはロゼンジの形態にすることができる。固形担体の量は広範囲に異なるだろうが、通常は約25mg〜約１ｇであろう。
常用の錠剤成形技術により製造することができる典型的な錠剤は下記の成分を含有することができる：
コア：
活性化合物（遊離化合物またはその塩として） 100mg
コロイド状二酸化ケイ素（Aerosil） 1.5mg
微結晶セルロース（Avicel) 70mg
改質セルロースガム（Ac-Di-Sol） 7.5mg
ステアリン酸マグネシウム
コーティング：
HPMC 約 9mg
^*Mywacett 9-40 約0.9mg
（^*フィルムコーティング用の可塑剤として使われるアシル化モノグリセリド。）
液状担体を使う場合、製剤はシロップ剤、乳剤、軟質ゼラチンカプセル剤または無菌注射液剤、例えば水性もしくは非水性の懸濁液剤もしくは液剤の形態であることができる。
経鼻または肺投与用には、製剤はエアゾール投与用の液状担体、特に水性担体中に溶解または懸濁された式Ｉの化合物を含有することができる。担体は添加剤、例えば可溶化剤、例えばプロピレングリコール、界面活性剤、例えば胆汁酸塩、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールもしくはポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、吸収促進剤、例えばレシチン（ホスファチジルコリン）もしくはシクロデキストリン、または保存剤、例えばパラベンを含んでもよい。
経皮投与用製剤は、貼付またはイオン電気導入に適当な形態であることができる。
一般に、本発明の化合物は、１回量あたり0.0001〜100mgの活性成分と医薬上許容される担体とを含んで成る１回量剤形に計量分配される。
本発明の化合物の用量は、薬剤として患者（例えばヒト）に投与される時、好ましくは１〜500mg／日、例えば約100mg／回である。
一般式Ｉの化合物が生体内で内因性成長ホルモンを放出させる能力を有することが証明された。従って、該化合物は、増加された血漿成長ホルモンレベルを必要とする状態の処置に、例えば成長ホルモンを欠損しているヒトにまたは高齢患者にまたは家畜に、使用することができる。
よって、特定の面によれば、本発明は、下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激するための医薬組成物であって、医薬上許容される担体または希釈剤と共に活性成分として一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容される塩を含んで成る組成物に関する。
別の面では、本発明は下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激する方法であって、それを必要とする被検者に有効量の一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容される塩を投与することを含んで成る方法に関する。
更に別の面では、本発明は、下垂体からの成長ホルオンの放出を刺激する薬剤の調製に、一般式Ｉまたはそれの医薬上許容される塩を使用する方法に関する。
式Ｉの化合物は重要な薬理学的性質を有する。そのような性質の例は、成長ホルモンそれ自体と同様な作用または用途を有する下垂体からの成長ホルモンの放出の刺激である。成長ホルモンの使用目的は次のように要約することができる：高齢者における成長ホルモン放出の刺激；糖質コルチコイドの異化副作用の予防、オステオポローシスの治療、免疫系の刺激、損傷治癒の促進、骨折修復の促進、成長遅滞の治療、成長遅滞に起因する腎不全もしくは機能不全の治療、成長ホルモン欠損児童を含む生理学的不足状態および慢性疾患に関連した不足状態の治療、肥満および肥満に関連した成長遅滞の治療、プラーダー−ヴィリ症候群およびターナー症候群に関連した成長遅滞の治療；火傷患者の回復の促進および入院の削減；子宮内発育遅滞、骨格形成異常、高コルチコイド症およびクッシング症候群の治療；拍動性成長ホルモン放出の誘導；ストレス患者における成長ホルモンの置換、骨軟骨形成異常、ヌーナン症候群、精神分裂病、うつ病、アルツハイマー病、遅延損傷治癒および心理社会的剥奪の治療、肺機能不全および呼吸器依存症の治療、大手術後のタンパク質異化反応の減衰、癌やエイズ（AIDS）のような慢性疾患によるタンパク損失および悪液質の減少；膵島細胞症を含む高インスリン血症の治療、排卵誘発のためのアジュバント療法；胸腺の発育を刺激するためおよび加齢に伴う胸腺機能の衰退を防ぐため、免疫抑制患者の治療、筋肉強度、運動性の向上、高齢者における皮膚の厚さ、代謝恒常性、腎恒常性の維持、骨芽細胞、骨再造形および軟骨成長の刺激、伴生動物における免疫系の刺激、伴生動物における高齢疾患の治療、家畜の成長促進並びにヒツジにおける増毛の刺激。
上記適応のための用量は、使用する式Ｉの化合物、投与の形式、および所望する療法に依存して異なるだろう。しかしながら、一般に、内因性成長ホルモンの効果的放出を得るために0.0001〜100mg／kg体重／日の用量レベルを患者および動物に投与することができる。普通、経口または経鼻投与に適する剤形は、医薬上許容される担体または希釈剤と混合された約0.0001mg〜約100mg、好ましくは約0.001〜約50mgの式Ｉの化合物を含んで成る。
式Ｉの化合物は、医薬上許容される酸付加塩の形で、または適当な場合にはアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩もしくは低級アルキルアンモニウム塩として、投与することができる。そのような塩の形態は遊離塩基の形態とほぼ同じオーダーの活性を示すと思われる。
所望により、本発明の医薬組成物は、別の活性を示す１または複数の化合物（例えば抗生物質または別の薬理活性物質）と組み合わせて式Ｉの化合物を含んで成ることができる。これは別の分泌促進物質、例えばGHRP（１または６）もしくはGHRHまたはそれらの類似体、成長ホルモンまたはそれの類似体、あるいはソマトメジン（例えばIGF-1またはIGF-2）であることができる。
投与経路は、活性化合物を適当なまたは所望の作用部位に効率的に運ぶ任意の経路、例えば経口、経鼻、肺、経皮または非経口であることができるが、経口経路が好ましい。
式Ｉの化合物の医薬用途の他に、それらは成長ホルモンの放出の制御を研究するための有用な試験管内手段であることができる。
式Ｉの化合物は、下垂体の成長ホルモン放出能力を評価するための有用な生体内手段であることもできる。例えば、それらの化合物をヒトに投与する前と後に採取した血清試料を、成長ホルモンについてアッセイすることができる。各血清試料中の成長ホルモンの比較は、成長ホルモンを放出する患者の下垂体の能力を直接決定するだろう。
式Ｉの化合物は、成長の速度および度合いを増加させるために、並びに乳生産を増加させるために、商業的に重要な動物に投与することができる。
薬理学的方法
式Ｉの化合物は、ラットの始原ソマトトロフ（ソマトトロピン産生細胞）において成長ホルモンを放出させるそれらの効能および活力について試験管内で評価することができる。
ラット始原ソマトトロフは本質的には以前に記載された通りに（Chen他，Endocrinology 1991, 129, 3337-3342およびChen他，Endocrinology 1989, 124, 2791-2798）調製することができる。簡単に言えば、まずラットを断頭により犠牲にし、下垂体を素早く切除する。下垂体をハンクス平衡塩類溶液中で0.2％コラーゲナーゼと0.2％ヒアルロニダーゼで消化する。0.37％NaHCO₃、10％ウマ血清、2.5％ウシ胎児血清、１％非必須アミノ酸、１％グルタミンおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に懸濁し、1.5×10⁵細胞／mlの密度に調整する。この懸濁液１mlを24ウエルプレートの各ウエルに入れ、そして２〜３日間おいた後で放出実験を実施する。
実験の第１日目に、細胞を25mM HEPES, pH7.4を含む前記培地で２回洗浄する。25mM HEPESと試験化合物を含有する培地の添加により成長ホルモン放出を開始させる。37℃で15分間のインキュベーションを行う。インキュベーション後、培地中に放出された成長ホルモンを標準ＲＩＡにより測定する。
式Ｉの化合物は、以前に記載されたように（Bercu他，Endocrinology 1991, 129, 2592-2598）ペントバルビタールで麻酔した雌ラットにおいて成長ホルモン放出に対するそれらの試験管内作用について評価することができる。簡単に言えば、成熟した雄Sprague-Dawleyラットを50mg／kg ipのペントバルビタールで麻酔する。ラットが十分に麻酔された後、ラットの頸動脈と頸静脈に気管カニューレとカテーテルを挿入する。15分間回復後、０時として血液試料を採取する。下垂体分泌促進薬をiv投与し、そして動脈血試料を15分間氷上におき、次いで12,000×gで２分間遠心分離する。血清をデカンテーションし、そして標準ＲＩＡを使って成長ホルモンの量を測定する。
本発明を下記の実施例において更に説明する。しかしながら、この実施例は本発明の範囲を限定するつもりではない。
下記の実施例において調製される化合物は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）塩として単離した。
実施例１
２（Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−フェニルプロパノールの調製

165.7mgのBoc-N-Me-D-2Nal-OH、165.2mgの（Ｒ）−メチルアミノ−３−フェニルプロパン−１−オール（Mckennon, M.J.；Meyers, A.I., J. Org. Chem. 1993, 58, 3568-71に準じてH-N-Me-D-Phe-OHから調製）及び68.1mgのHOAtを、０℃において２mlのDMFと４mlのDCMからなる混合物に溶解した。115mgのEDACを添加し、該混合物を０℃で１時間、その後室温で18時間撹拌した。窒素流下で混合物からDCMを除去した後、50mlのEtOAcを添加し、生じた混合物を順次、５％炭酸水素ナトリウム水溶液100ml、水100ml、５％硫酸水素カリウム水溶液100ml及び水100mlで抽出した。硫酸ナトリウムを用いてその有機相を乾燥し、ロータリーエバポレーターを用いて真空下で濃縮してオイルとした。
DMF ２滴を添加して、502.6mgの3−Boc−アミノメチル安息香酸を10mlのDCMに溶解し、次いで191.6mgのEDACと共に10分間撹拌し対称無水物に転化した。５mlのDCM中に凍結乾燥済の前記２（Ｒ）−（H-N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−フェニルプロパノールと342μｌのDIEAを含有する溶液をこの混合物に添加し、室温で20時間反応させた。反応混合物を濃縮してオイルとし、それを50mlのEtOAcに再溶解させた。５％炭酸水素ナトリウム水溶液100ml、水100ml、５％硫酸水素カリウム水溶液100ml及び水100mlで順次この溶液を抽出した。得られた有機相を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、ロータリーエバポレーター上で真空下で濃縮してオイルとした。このオイルを４mlのDCM／TFA（１：１）中に溶解し撹拌した。10分後、混合物を窒素流下で濃縮し、得られたオイルを20mlの70％アセトニトリル／0.03Ｍ塩酸中に再溶解し、480mlの水を添加した。４Ｍの硫酸を用いてpHを2.5に調整した、28％アセトニトリルを含有する0.05Ｍ硫酸アンモニウムを用いて事前に平衡化し、７μ Ｃ−18シリカを充填した25mm×250mmのカラム上での７回の半調製用HPLCにより粗生成物を精製した。
pH2.5、流速10ml／分の条件で47分間に渡る40℃で0.05Ｍの硫酸アンモニウム中のアセトニトリルの28％から38％の勾配によりカラムを溶出させ、回収したペプチド含有画分を３容量の水で希釈し、そして0.1％TFAで平衡化したSep-Pak^▲Ｒ▼Ｃ18カートリッジ（Waters part.＃：51910）に投入した。70％アセトニトリル／0.1％TFAを用いてSep-Pak^▲Ｒ▼カートリッジから該ペプチドを溶出させ、水で希釈した後、凍結乾燥して溶出液より単離した。分析用RP-HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により最終生成物を分析した。質量スペクトルの結果、得られた分子質量は実験誤差の範囲内で期待の構造のものと合致した（質量スペクトル±0.9amu）。RP−HPLC分析は214nmの紫外検出及び、１ml／分、42℃の条件で溶出させたVydac 218TP54 4.6mm×250mm ５μ Ｃ−18シリカカラム（The Separation Group、Hesperia）を用いて行った。２つの異なる溶出条件を用いた。
Ａ：５％アセトニトリルを含有する、４Ｍの硫酸でpHを2.5に調整した0.1Ｍの硫酸アンモニウム緩衝液を用いてカラムを平衡化し、そして50分間かけて同緩衝液中のアセトニトリルの５％から60％への勾配により溶出させた。
Ｂ：５％アセトニトリル／0.1％ TFA／水でカラムを平衡化させ、50分間かけて５％アセトニトリル／0.1％ TFA／水から60％アセトニトリル／0.1％ TFA／水への勾配により溶出させた。
Ａ１及びＢ２の溶出条件を用いた結果、保持時間はそれぞれ29.90分及び31.52分であった。
３−Boc−アミノメチル安息香酸の合成
25％アンモニア／水70ml中に25ｇの３−シアノ安息香酸を溶解し、そこに200mlの水と５ｇの10％Pd／Ｃを窒素雰囲気下で添加した。12％アンモニア／水を添加してpHを常時10.5に調整しながら、この混合物を常圧下室温で水素化した。18時間に渡り４ｌの水素を吸収させた後反応を止め、濾過して触媒を除去した。真空下で濾液を20mlまで濃縮し、1.5Ｍの塩酸200mlで酸性化させた後、酢酸エチルで抽出して未反応の出発原料を除去した。水相を濃縮して乾固させ、400mlのTHFと343mlの１Ｍ水酸化ナトリウムに再溶解した。100mlのTHFに溶解した30ｇのBoc無水物を添加し、混合物を一晩撹拌した。その後、１Ｎ塩酸で混合物をpH3.0まで酸性化し、３×300mlのEtOAcで抽出した。有機相を蒸発させてフォームにした。収量は22ｇであった。
略号：
r.t.：室温
EDAC：Ｎ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
EtOAc：酢酸エチル
Boc：ｔ−ブチルオキシカルボニル
N-Me-D-2Nal：Ｎ−メチル−Ｄ−２−ナフチルアラニン
DCM：ジクロロメタン
DIEA：ジイソプロピルエチルアミン
DMF：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
HOAt：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
N-Me-D-Phe-ol：Ｎ−メチル−Ｄ−フェニルアラニノール
TFA：トリフルオロ酢酸
THF：テトラヒドロフラン
実施例２
３−（（３−アミノメチルベンゾイル））−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン

Boc-N-Me-D-Phe-OH（279mg）をDMF（４ml）に溶解し、HoBt（168mg）及びEDAC（230mg）と共に10分間撹拌した。３−ジメチルアミノ−１−プロピルアミン（188μｌ）を添加し、室温で18時間撹拌した。その後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）を添加し、得られた混合物をEtOAc（50ml）で抽出し、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮してオイルとした。TFA／DCM（１：１）（６ml）と共にこのオイルを室温で10分間撹拌した。その後TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）、１Ｎ塩酸（３ml）及び水（37ml）の混合液中に溶解し、その混合液を直ちに凍結させて凍結乾燥した。
凍結乾燥生成物をDMF（６ml）とDCM（12ml）に溶解した。撹拌しながら、この混合物にBoc-N-Me-D-2Nal-OH（494mg）、HOAt（204mg）、DIEA（171μｌ）を添加し、０℃に冷却した後でさらにEDAC（288mg）を添加した。室温で18時間撹拌した後、DCMを窒素流下で蒸発させ、EtOAc（100ml）を添加した。５％水性炭酸水素ナトリウム（100ml）及び水（100ml）を用いてこの混合物を２回抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮してオイルとした（480mg）。このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。その後、窒素流下でTFA／DCMを蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）中に再溶解した。１Ｎ塩酸（１ml）と水（47ml）を添加し、得られた混合物を直ちに凍結乾燥してオイルにした。（2HCl・H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-（CH₂）₃-N（CH₃）₂）。
上記のオイルの半量（2HCl・H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-（CH₂）₃-N（CH₃）₂）をDCM（９ml）に溶解し、DMF ２滴及びDIEA（342μｌ）を添加した。この溶液に、あらかじめ室温で15分間撹拌しておいたDCM（５ml）中のBoc-3AMB-OH（503mg）とEDAC（192mg）の溶液に添加した。20時間撹拌後、この反応混合物を窒素流下でオイルに濃縮し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）と共に15分間撹拌した。その後、EtOAc（50ml）を添加し、有機相を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）及び水（100ml）で抽出洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした（340mg）。
このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、水で希釈して最終容量50mlに調整した。実施例１に記載と同様の手順を用いて粗生成物を半調製用HPLCで８回に分けて精製した後、凍結乾燥した。得られた最終生成物を分析用RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：608.2amu）は実験誤差の範囲内で期待の構造のもの（理論MH⁺：608.8amu）と合致した。実施例１に示した溶出条件Ａ１及びＢ２を用いた結果、RP−HPLCの保持時間はそれぞれ25.23分及び26.58分であった。
実施例３
３−（（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン

実施例２でオイルとして得られた2HCl・H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-（CH₂）₃-N（CH₃）₂の半量をDCM（９ml）に溶解し、DMF ２滴及びDIEA（342μｌ）を添加した。この溶液を、あらかじめ室温で15分間撹拌しておいたBoc-（R）ニペコチン酸（459mg）及びEDAC（192mg）含有のDCM（５ml）溶液に添加した。20時間撹拌後、この反応混合物を窒素流下で濃縮してオイルとし、そのオイルを５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）と共に15分間撹拌した。その後、EtOAc（50ml）を添加し、有機相を分離し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）及び水（100ml）で抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした。このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。該TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）中に溶解し、水で希釈して最終容量50mlに調整した。粗生成物を半調製用HPLCで５回に分けて精製した後、実施例１に記載と同様の手順を用いて凍結乾燥した。分析用RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により最終生成物を分析した。実測の分子質量（MH⁺：586.3amu）は実験誤差の範囲内で期待の構造のもの（理論MH⁺：585.8amu）と合致した。実施例１に示した溶出条件Ａ１及びＢ２を用いた結果、RP−HPLCの保持時間はそれぞれ25.33分及び26.35分であった。
実施例４
２−（（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン

Boc-N-Me-D-Phe-OH（279mg）をDMF（10ml）に溶解し、HOBt（168mg）及びEDAC（384mg）と共に室温で10分間撹拌した。２−（アミノエチル）−１−メチルピロリジン（290μｌ）とDIEA（171μｌ）を添加し、混合物を室温で20時間撹拌した。その後、混合物をオイル状にまで濃縮し、50mlの水に溶かし、乾燥させた。生成物を25mlの水に再溶解し、0.03Ｎの塩酸で平衡化したSep-Pak^▲Ｒ▼Ｃ18カートリッジ（Waters part.＃：43345）に適用した。70％アセトニトリルを含有する0.03Ｎ塩酸でSep-Pak^▲Ｒ▼カートリッジから溶出させた生成物を水で希釈した後、凍結乾燥して溶出液から単離した。得られた生成物をTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。その後、窒素流下でTFA／DCMを蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、１Ｎ塩酸（２ml）を添加した。水（50ml）で希釈した後、凍結乾燥により生成物を単離した。
得られた物質をDMF（３ml）に溶解し、Boc-N-Me-D-2Nal-OH（329mg）、HOAt（136mg）、EDAC（230mg）及びDIEA（171μｌ）を添加した後、18時間室温で撹拌した。その後、EtOAc（50ml）を添加し、この混合物を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）、５％硫酸水素カリウム水溶液（50ml）及び水（50ml）で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした。
このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。該TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、１Ｎ塩酸（３ml）を添加した。水（50ml）で希釈した後、凍結乾燥して生成物を単離した。
286mgの凍結乾燥生成物をDCM（15ml）とDIEA（171μｌ）に溶解した。あらかじめ室温で25分間撹拌しておいたDCM（10ml）中のBoc-（R）−ニペコチン酸（459mg）とEDAC（192mg）の溶液（10ml）にこの溶液を添加した。20時間撹拌後、この反応混合物を窒素流下でオイルに濃縮し、EtOAc（100ml）に再溶解し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）、５％硫酸水素カリウム水溶液（50ml）、及び水（50ml）でこの混合物を抽出洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした。このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。該TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、水で希釈して最終容量50mlとした。実施例１に記載と同様の手順を用いて粗生成物を半調製用HPLCで３回に分けて精製した後、凍結乾燥した。分析用RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により最終生成物を分析した。実測分子質量（MH⁺：612.2amu）は実験誤差の範囲内で期待の構造のもの（理論MH⁺：612.39amu）と合致した。実施例１に示した溶出条件Ａ１を用いた結果、RP−HPLCの保持時間は25.80分であった。
実施例５
（２Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−（２−ナフチル）プロパノール

（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）−プロピオン酸メチルエステル

（Ｒ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（5.0ｇ；16.4ミリモル）を乾燥DMF（50ml）に溶解した。ヨードメタン（6.2ml；98.4ミリモル）及び酸化銀（Ｉ）（13.3ｇ；57.4ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を塩化メチレン（200ml）で抽出した。シアン酸カリウム（２×50ml；５％）及び水（３×75ml）で有機相を洗浄した。有機相を乾燥し（硫酸マグネシウム）、真空下で溶媒を除去した。溶離液として酢酸エチル／ヘプタン（１：２）を用いたクロマトグラフィーにより残油を精製し（シリカ、５×40cm）、4.98ｇの（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）−プロピオン酸メチルエステルを得た。
¹H-NMR（CDCl₃）：1.30, 1.35（2s, 9H）；2.71, 2.75（2s, 3H）；3.19, 3.47（2m, 2H）；3.74, 3.77（2s, 3H）；4.65, 5.05（2dd, 1H）；7.29-7.82（m, 7H）（回転異性体混合物）
（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸

（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）−プロピオン酸メチルエステル（21.73ｇ；65.57ミリモル）を１，４−ジオキサン（200ml）に溶解し、水（20ml）を添加した。反応混合物を氷沿中で冷却し、水酸化リチウム（1.73ｇ；72.13ミリモル）を添加した。15分後、水（140ml）を添加し、室温でさらに３時間混合物を撹拌し続けた。酢酸エチル（400ml）と水（300ml）を添加し、１Ｍ硫酸水素ナトリウム（110ml）でpHを2.5に調整した。相を分離し、水相を酢酸エチル（200ml）で抽出した。合わせた有機相を水（300ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を真空下で除去し、20.1ｇの（Ｒ）２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸を得た。
¹H-NMR（DMSO）：1.18, 1.21（2s, 9H）；2.62, 2.66（2s, 3H）；3.11-3.58（m, 2H）；4.75, 4.90（2dd, 1H）；7.48-7.88（m, 7H）；1.85（s（br）, 1H）（回転異性体混合物）
（Ｒ）２−ホルミルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸

（Ｒ）２−アミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（18.11ｇ；84.14ミリモル）をギ酸（204ml）に溶解し、無水酢酸（70ml）を滴下添加した。反応混合物を55℃に加熱し、室温で３時間半撹拌した。氷水（70ml）を滴下添加し、０℃で20分間撹拌した。反応混合物を濾過し、氷水（20ml）で洗浄し、20.26ｇの（Ｒ）２−ホルミルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸を得た。
¹H-NMR（DMSO）：3.05（dd, 1H）；3.27（dd, 1H）；4.64（m, 1H）；7.48-7.87（m, 7H）；7.95（s, 1H）；8.45（d, 1H）；12.9（s（br）, 1H）
（Ｒ）−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロパン−１−オール

（Ｒ）２−ホルミルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（4.37ｇ；18ミリモル）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（1.6ｇ；43.2ミリモル）を添加した。ヨウ素（4.57ｇ；18ミリモル）を乾燥テトラヒドロフラン（40ml）に溶解し、40℃以下に保ちながら反応混合物に滴下添加した。添加後、反応混合物を還流させながら12時間加熱した。水酸化カリウム（50ml；20％）を添加した。水相をメチルtertブチルエステル（４×50ml）で抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム（150ml）で洗浄し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、溶媒を真空下で除去した。残渣をDCM／メタノール／アンモニア（100：10：１）を用いたクロマトグラフィー（シリカ；５×40cm）により精製して、1.81ｇの（Ｒ）−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロパン−１−オールを得た。
¹H-NMR（CDCl₃）：2.43（s, 3H）；2.88-3.05（m, 3H）；3.10（s（br）, 2H）；3.42（dd, 1H）；3.69（dd, 1H）；7.30-7.82（m, 7H）
Ｎ−｛（１Ｒ）−１−[Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル]−２−（２−ナフチル）エチル｝−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル

（Ｒ）−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（0.55ｇ；1.67ミリモル）及び（Ｒ）−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロパン−１−オール（0.38ｇ；2.00ミリモル）を塩化メチレン（15ml）とジメチルホルムアミド（7.5ml）に溶解した。反応混合物を氷浴中で冷却した。１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（0.24ｇ；2.09ミリモル）及びＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（0.38ｇ；2.0ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で12時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。酢酸エチル（200ml）を添加し、水（100ml）、炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウム（pH９）（75ml）、硫酸水素ナトリウム（75ml；10％）、水（100ml）で有機相を洗浄し、乾燥した（硫酸マグネシウム）。真空下で溶媒を除去し、残渣を酢酸エチルでクロマトグラフィーにより精製し（Silica；２×45cm）、0.25ｇのＮ−｛（１Ｒ）−１−（Ｎ−［（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル]−２−（２−ナフチル）エチル｝−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステルを得た。
¹H-NMR（DMSO）：0.80-1.99（複数のs, 9H）；2.45-4.20（m, 12H）；4.70-5.12（m, 2H）（抜粋したピーク；回転異性体混合物）。
（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド

Ｎ−｛（１Ｒ）−１−（Ｎ−［（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル]−２−（２−ナフチル）エチル｝−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル（0.25ｇ；0.475ミリモル）をDCM（3ml）に溶解した。トリフルオロ酢酸（１ml）を添加し、反応混合物を20分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。DCM（５ml）を添加し、真空下で除去した。この操作を繰り返した。残渣をメタノール（５ml）に溶解した。炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウム（５ml；pH９）を添加し、溶液を酢酸エチル（２×10ml）で抽出した。有機相を乾燥し（硫酸マグネシウム）、溶媒を除去して0.22ｇの（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミドを得た。
¹H-NMR（CDCl₃）：1.70, 2.37, 2.45, 2.93（4s, 6H）；2.56-3.05（m, 2H）；3.52-3.85（m, 7H）；4.25, 4.97（2m, 1H）；6.86-7.78（m, 14H）（抜粋したピーク、回転異性体の混合物）
（２Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−（２−ナフチル）プロパノール

３−Boc−アミノメチル安息香酸（502.6mg）をDCM（６ml）に溶解し、次いで15分間EDAC（191.6mg）と共に撹拌することにより、対称無水物に転化した。
DCM（５ml）に溶かした（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（200mg）の溶液をこの混合物に添加し、室温で20時間反応させた。
つぎに反応混合物を濃縮してオイルとし、EtOAc（100ml）中に再溶解させた。この溶液を順次、５％NaHCO₃水溶液（２×50ml）、５％KHSO₄水溶液（２×50ml）およびH₂O（２×50ml）で抽出した。生成した有機相をNa₂SO₄で乾燥し、ロータリーエバポレーターにより真空中で濃縮してオイルとした。このオイルをDCM／TFA（１：１）（６ml）中に溶解し、撹拌した。10分後、この混合物を窒素流により濃縮し、生成したオイルを70％ CH₃CN／0.1％TFA（５ml）中に再溶解し、水で希釈して100mlの容量とした。
この粗生成物を二回に分けて半調製用HPLCで精製し、実施例１に記載したのと同様の手順により凍結乾燥した。
得られた最終生成物は、分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：559.5amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論値：MH⁺：560.72amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、33.07分及び34.63分であることがわかった。
実施例６
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

このペプチドは、NMP中のHBTU介在カップリング及びFmoc保護基の脱保護のUVモニタリングを使用する製造業者により供給されたFastMoc UVプロトコルを用いて、0.22ミリモルスケールでApplied Biosytems431A型ペプチド合成装置により、Fmoc法に従って合成した。合成に使用した出発樹脂は、スイス国ブーベンドルフのBachem Feinchemikalien AG社からのcat.＃：Ｄ−1675,（427）mgであり、これはアミド結合によりアミノメチルポリスチレン樹脂に結合したFmoc−２，４−ジメトキシ−４′−（カルボキシメチルオキシ）ベンズヒドリルアミンであった。置換能力は0.55ミリモル／ｇであった。使用された保護アミノ酸誘導体はFmoc-N-N-Me-D-Phe-OH, Fmoc-D-2Nal-OH, Fmoc-His（Trt）及びFmoc-Aib-OHであった。Fmoc-N-Me-D-Phe-OHのカップリングは二重カップリングとして実施した。合成後このペプチドを室温で180分間、８mlのTFA、600mgのフェノール、200μｌのエタンジチオール、400μｌのチオアニソール及び400μｌのH₂Oと共に撹拌することにより、750mgのペプチド樹脂から開裂せしめた。開裂混合物を濾過し、濾液を窒素流によりほぼ２mlに濃縮した。この粗ペプチドを50mlのジエチルエーテルを用いてこのオイルから沈殿させ、50mlのジエチルエーテルで２回洗浄した。この粗ペプチドを乾燥し、半調製HPLCにより一回で洗浄し、実施例１に記載したものと同じ手順を用いて凍結乾燥した。
得られた最終生成物は、分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：598.5amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：598.73amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、24.68分及び25.58分であることがわかった。
実施例７
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Ser-NH₂

この化合物は実施例６に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：685.6amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：685.81amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、24.42分及び25.92分であることがわかった。
実施例８
（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

この化合物は実施例６に記載したものと同様の手順を用いて合成した。但し、Fmoc-D-2Nal-OHのカップリングは活性化試薬としてHATUを用いて行われた。H-N-Me-D-Phe−樹脂（0.23ミリモル）をDIEA（２ミリモル）の存在下で１ミリモルのFmoc-D-2Nal-OHと150分間カップリングせしめた。
得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：511.2amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：509.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、30.73分及び32.47分であることがわかった。
実施例９
（４−ピペリジンカルボニル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：486.8amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：487.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、27.03分及び28.48分であることがわかった。
実施例10
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：486.9amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：487.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、28.03分及び29.50分であることがわかった。
実施例11
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。但し最後の残渣を、対称無水物カップリング法を用いて導入した。Boc−３−アミノメチル安息香酸（251mg）を、DCMに溶かしたEDAC（96mg）と共に15分間撹拌した。次いで樹脂（429mg）を添加し、撹拌を18時間続けた。もう１つの例外は、樹脂からのペプチドの開裂時間が60分に短縮されたことであった。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：522.9amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：523.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、28.83分及び30.13分であることがわかった。
実施例12
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成したが、Fmoc-N-Me-D-2Nal-OHとFmoc-His（Trt）の双方をHATUを用いてカップリングし、また樹脂からのペプチドの開裂時間を60分に短縮した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：612.3amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：612.8amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、24.33分及び26.20分であることがわかった。
実施例13
（３−アミノメチルベンゾイル）−D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：587.2amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：586.74amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、21.13分及び22.60分であることがわかった。
実施例14
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

この化合物は実施例11に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：601.6amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：601.77amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、20.40分及び21.70分であることがわかった。
実施例15
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

この化合物は実施例11に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：579.4amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：579.8amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、19.88分及び21.20分であることがわかった。
実施例16
H-Aib-His-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

この化合物は実施例12に記載したもの同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：690.6amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：690.9amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、15.71分及び17.82分であることがわかった。
実施例17
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

この化合物は実施例11に記載したものと同様の手順を用いて合成したが、Fmoc-N-Me-D-Phe-OH、Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH及びBoc-（R）−ニペコチン酸を使用した。ここでFmoc-N-Me-D-2Nal-OH及びBoc-（Ｒ）−ニペコチン酸の双方をHATUを用いてカップリングした。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：500.7amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：501.7amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、28.18分及び29.55分であることがわかった。
実施例18
H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

この化合物は実施例６に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH⁺：660.7amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH⁺：660.8amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、25.63分及び26.75分であることがわかった。
実施例19
Ｈ−３−アミノメチルベンゾイル−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH₃

Boc-3AMB-OH（115mg, 0.458ミリモル）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（62mg, 0.458ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（97mg, 0.504ミリモル）をDCM（８ml）及びDMF（１ml）に溶かし、15分間撹拌した。DCM（５m）に溶解したＮ−メチル−２−メチルアミノ−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（185mg, 0.458mmol）を添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（80ml, 0.458ミリモル）を添加し、混合物を20時間撹拌した。
有機相を炭酸水素ナトリウム（50ml, ５％）、H₂O（50ml）及び飽和NaCl／H₂O（50ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。残渣をDCM（２ml）に溶かし、TFA（２ml）で10分間処理した。Ｎ₂流により揮発分を除去した。この残渣を20％ MeCN 50mlに溶かし、H₂Oで希釈して500mlとした。
半調製HPLC
10ml／分、５回、30−40％MeCN／0.1Ｍ（NH₄）₂SO₄、pH2.5
検出276nm、Sep-Pak^▲Ｒ▼、70％MeCN／0.1％TFA、凍結乾燥

実施例20
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe

Fmoc-L-His（Trt）-OH（1.54ｇ, 2.48ミリモル）（BACHEM B-1570）及び１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール（338mg, 2.48ミリモル）を９mlのDMFに溶かし、０−４℃に冷却し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（475mg, 2.48ミリモル）を添加した。反応混合物を15分間、０−４℃で撹拌した。塩化メチレン（18ml）に溶かしたＮ−メチル−２−メチルアミノ−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（500mg, 1.24ミリモル）を０−４℃に冷却して添加し、０−４℃で１時間撹拌し、次いでジイソプロピルエチルアミン（0.425ml, 2.48ミリモル）を添加した。この混合物の温度をゆっくり室温まで上昇させ、72時間撹拌した。DCMをＮ₂流中で蒸発させ、この混合物に100mlの酢酸エチルを添加し、炭酸水素ナトリウム（２×100ml,５％）及び硫酸水素カリウム（100ml, ５％）で洗浄した。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。残渣をDMF（８ml）中に溶解し、ピペリジンで15分間処理し、H₂O（100ml）で希釈し、酢酸（1.5ml）でクエンチングした。アセトニトリルを添加し、混合物をH₂Oで希釈して250mlとした。透明な溶液を10ｇの“Seppaks”＃Waterに適用し、H₂O／0.03Ｍ HClで洗浄し、50mlの35％MeCN／0.03Ｍ HClで溶出させた。H₂Oにより希釈して200mlとして凍結乾燥した。
Boc−αアミノイソ酪酸（756mg, 3.72ミリモル）、１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール水和物（506mg, 3.72ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（713mg, 3.72ミリモル）をDMF（６mg）に溶かし、15分後に、DCM（12ml）に溶解したH-L-His（Trt）−NMe-D2Nal-NMe-D-Phe-NHCH₃．2HClを添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（0.637ml）を添加し、72時間撹拌した。DCMをＮ₂流中で蒸発させ、混合物に100mlの酢酸エチルを添加し、炭酸水素ナトリウム（２×50ml, ５％）及び硫酸水素カリウム（50ml, ５％）で洗浄した。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発した。残渣をDCM（６ml）中に溶かし、０−４℃に冷却し、TFA（６ml）で10分間、０−４℃で処理した。Ｎ₂流により揮発物を除去した。油状残渣を35mlの70％アセトニトリルに溶解し、H₂Oで希釈して50mlとし、10mlの濃塩酸（12モル）を添加し、72時間撹拌した。混合物をH₂Oで希釈して200mlとし、固体炭酸ナトリウムで中和し、最後にH₂Oで希釈して400mlとした。
半調製HPLC

実施例21
３−メチルアミノメチルベンゾイル−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH₃

Boc-NMe3AMB-OH（658mg, 2.48ミリモル）、１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール水和物（338mg, 2.48ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（475mg, 2.48ミリモル）を６mlのDMFに溶解し、15分間撹拌した。
塩化メチレン（12ml）に溶かしたＮ−メチル−２−メチルアミノ−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（500mg, 1.24ミリモル）を添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（0.425ml, 2.48ミリモル）を添加した。この混合物を20時間撹拌した。
DCMをＮ₂流中で蒸発させ、この混合物に75mlの酢酸エチルを添加し、炭酸水素ナトリウム（２×50ml, ５％）及び硫酸水素カリウム（50ml, ５％）で洗浄した。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。残渣を10mlの塩化メチレンに溶解し、０−４℃に冷却し、TFA（10ml）で10分間、０−４℃で処理した。Ｎ₂流で揮発物を除去した。油状残渣を25mlの70％MeCN／0.1％TFA中に溶かし、H₂Oで希釈して600mlとした。
半調製HPLC
ラージカラム、40ml／分、８回28−40＆Pll（NH₄）₂SO₄、276nM
Seppak、凍結乾燥

実施例22
ピペリジン−４−カルボン酸Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルアミド

（２Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（４−ヨードフェニル）プロピオン酸

Can J. Chem.（1977）, 55, 906に従って調製した。
¹H-NMR：（CDCl₃）d 1.34（s, 4.5H）, 1.38（s, 4.5H）, 2.70（s, 1.5H）, 2.75（s, 1.5H）；2.85-3.10（m, 1H）, 3.2-3.4（m, 1H）；4.4-4.6（m, 0.5H）, 6.9-7.0（m, 2H）, 7.62（d, J=10Hz, 2Hz）, 9.5-10（bs, 1H）
Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル

（２Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（４−ヨードフェニル）プロピオン酸（2.00ｇ, 4.9ミリモル）を塩化メチレン（20ml）に溶解した。ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（0.67ｇ, 4.9ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（0.99ｇ, 4.9ミリモル）を添加し、混合物を15分間撹拌した。メチルアミン（メタノール中40％溶液0.38ｇ、4.9ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。塩化メチレン（40ml）を添加し、混合物を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（50ml）及び硫酸水素ナトリウム溶液（10％, 50ml）で洗浄した。有機相を乾燥（MgSO₄）し、溶媒を真空中で除去した。残渣を、溶離剤として酢酸エチル／ヘプタン（２：１）を用いてシリカ（2.5×20cm）上でクロマトグラフィーにより精製して1.77ｇのＮ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステルを得た。
¹H-NMR：（CDCl₃）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 1.39（s, 9H）；2.75（s, 3H）；2.80（d, 3H）；3.29（dd, 1H）；4.88（t, 1H）。
（２Ｒ）−３−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−メチル−２−（メチルアミノ）プロピオンアミド

Ｎ−（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル（1.7ｇ, 4.0ミリモル）を塩化メチレン（10ml）に溶解し、トリフルオロ酢酸（５ml）を添加した。混合物を１時間撹拌した。塩化メチレン（30ml）及び水（30ml）を添加した。固体の炭酸水素ナトリウムを加えてpH８とした。有機相を分離し、乾燥し（MgSO₄）、真空中で蒸発して1.22ｇの（２Ｒ）−３−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−メチル−２−（メチルアミノ）プロピオンアミドを得た。
H-NMR：（CDCl₃）d 2.28（s, 3H）；2.68（dd, 1H）；2.81（d, 3H）；3.08-3.19（m, 2H）；6.95（d, 2H）；7.63（d, 2H）
Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−（４−ヨードフェニル）エチル）カルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）カルバミン酸tert−ブチルエステル

（２Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（1.10ｇ, 3.30ミリモル）を塩化メチレン（10ml）に溶解し、HOAt（0.45ｇ, 3.1ミリモル）及びEDAC（0.66ｇ, 3.5ミリモル）を添加した。15分間撹拌した後、（２Ｒ）−３−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−メチル−２−（メチルアミノ）プロピオンアミド（1.0ｇ, 3.1ミリモル）及びジイソプロピルエチルアミン（0.45ｇ, 3.4ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。塩化メチレン（30ml）を添加し混合物を、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（30ml）及び硫酸水素ナトリウム溶液（10％, 30ml）で洗浄した。有機相を乾燥し（MgSO₄）、溶媒を真空下で除去した。残渣を、溶離剤として酢酸エチル／ヘプタン（２：１）を用いてシリカ（2.5×20cm）上でのクロマトグラフィーにより精製して1.74ｇのＮ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−（４−ヨードフェニル）エチル）カルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）カルバミン酸tert−ブチルエステルを得た。
¹H-NMR：（CDCl₃）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 1.38（s, 9H）；2.18（d, 3H）；2.45（s, 3H）；2.75（s, 3H）；5.05（m, 1H）；5.42（m, 1H）。
（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド

Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−（４−ヨードフェニル）エチル）カルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）カルバミン酸tert−ブチルエステルを、塩化メチレンとトリフルオロ酢酸の混合物中に溶かし、15分間撹拌した。
塩化メチレン（20ml）及び水（30ml）を添加した。固体の炭酸水素ナトリウムを添加してpH８とした。有機相を分離し、乾燥し（MgSO₄）、真空中で蒸発させて1.40ｇの（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミドを得た。
¹H-NMR：（CDCl₃）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 1.79（s, 3H）；2.02（d, 3H）；2.55（s, 3H）；3.78（dd, 1H）；5.44（dd, 1H）.
４−（Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル

１−tert−ブトキシカルボニルピペリジン−４−カルボン酸（143mg, 0.66ミリモル）を塩化メチレン（10ml）中に溶かし、HOAt（90mg, 0.66ミリモル）及びEDAC（140mg, 0.73ミリモル）を添加した。15分間撹拌後、（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（350mg, 0.66ミリモル）とジイソプロピルエチルアミン（85mg, 0.66ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。塩化メチレン（20mg）を添加し、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（20ml）及び硫酸水素ナトリウム溶液（10％, 20ml）で混合物を洗浄した。有機相を乾燥し（MgSO₄）、溶媒を真空中で除去した。残渣を、溶離剤として酢酸エチルを用いてシリカ（2.5×20cm）上でのクロマトグラフィーにより精製して412mgの４−（Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを得た。
４−（Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（412mg, 0.56ミリモル）を、塩化メチレン（５ml）とトリフルオロ酢酸（５ml）の混合物に溶かし、５分間撹拌した。塩化メチレン（20ml）及び炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（20ml）を添加した。固体の炭酸水素ナトリウムを加えてpH８とした。相を分離し、有機相を乾燥（MgSO₄）し、蒸発させて、255mgの表題化合物を得た。
¹H-NMR：（CDCl₃）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 2.32（d, 3H）；2.58（s, 3H）；2.68（s, 3H）；5.33（m, 1H）；5.84（t, 1H）
HPLC：r_t＝33.35分（Ａ１）
PDMS：ｍ／ｚ 640.8（Ｍ＋Ｈ）⁺．
略号
HBTU：Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
NMP：Ｎ−メチルピロリドン
HATU：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
Trt-：トリチル
HOBT：７−ヒドロキシベンゾトリオゾール水和物
3-AmB：３−アミノメチルベンゾイル
N-Me-3-AMB：３−メチルアミノメチルベンゾイルField of Invention
The present invention relates to novel peptide derivatives, compositions containing them and their use to treat disabilities resulting from growth hormone deficiency.
Background of the Invention
Growth hormone is a hormone that stimulates the growth of any tissue that has growth potential. Moreover, growth hormone is known to exert numerous actions on metabolic processes, such as stimulating protein synthesis and free fatty acid mobilization, and causing a change in energy metabolism from carbohydrate metabolism to fatty acid metabolism. Growth hormone deficiency can cause various serious disabilities, such as dwarfism.
Growth hormone is released from the pituitary gland. This release is under strict control of numerous hormones and neurotransmitters, either directly or indirectly. Growth hormone release is stimulated by growth hormone releasing hormone (GHRH) and inhibited by somatostatin. In both cases hormones are released from the hypothalamus, but their action is mainly mediated by specific receptors in the pituitary gland. Other compounds that stimulate the release of growth hormone from the pituitary are also described. For example, arginine, L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-dopa), glucagon, vasopressin, PACAP (pituitary adenylyl cyclase activating peptide), muscarinic receptor agonist and synthetic hexapeptide GHRP (growth hormone releasing peptide) ) Releases endogenous growth hormone by direct action on the pituitary gland or by affecting the release of GHRH and / or somatostatin from the hypothalamus.
In disorders or conditions where it is desirable to increase growth hormone levels, the proteinaceous nature of growth hormone forces parenteral administration. In addition, other direct acting natural secretagogues such as GHRH and PACAP are high molecular weight polypeptides, and for that reason parenteral administration is preferred.
The use of short peptides to increase the level of growth hormone in mammals is described, for example, in European Patent Nos. 18 072, 83 864, WO 89/07110, 89/01711, 89. No. 10933, No. 88/9780, No. 83/02272, No. 91/18016, No. 92/01711 and No. 93/04081.
The structure of growth hormone releasing peptides or peptide derivatives is important for their ability to release growth hormone and their bioavailability (bioavailability). Accordingly, it is an object of the present invention to provide novel peptides with growth hormone releasing properties that have improved properties compared to known peptides of this type.
Summary of invention
Formula I:
A-B-C-D (-E)_p        I
{In the above formula,
p is 0 or 1;
A is hydrogen or R¹-(CH₂)_q-(X)_r-(CH₂)_s-CO-
[Wherein q is an integer selected from the group of 0 or 1, 2, 3, 4, 5;
r is 0 or 1;
s is an integer selected from the group 0 or 1, 2, 3, 4, 5;
R¹Is hydrogen, imidazolyl, guanidino, piperazino, morpholino, piperidino or N (R²-R^Three(Where R²And R^ThreeAre each independently hydrogen or lower alkyl which may be substituted by one or more hydroxyl groups, by pyridinyl groups or by furanyl groups;
X is —NH—, —CH when r is 1.₂-, -CH = CH-, -C (R¹⁶) (R¹⁷-,

(Where R¹⁶And R¹⁷Are each independently hydrogen or lower alkyl)];
B is (G)_t-(H)_uAnd
[Where t and u are each independently 0 or 1;
G and H are natural L-amino acids or their corresponding D-isomers, or non-natural amino acids such as 1,4-diaminobutyric acid, aminoisobutyric acid, 1,3-diaminopropionic acid, 4-aminophenylalanine, 3-pyridyl Alanine, 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid, 1,2,3,4-tetrahydronorharman-3-carboxylic acid, N-methylanthranilic acid, anthranilic acid, N-benzylglycine, 3 An amino acid residue selected from the group consisting of aminomethylbenzoic acid, 3-amino-3-methylbutanoic acid, sarcosine, nipecotic acid or isonipecotic acid; and when t and u are both 1, G and H The amide bond between is Y-NR¹⁸-Where Y is -CO- or -CH₂-And R¹⁸Is hydrogen, lower alkyl or lower aralkyl];
C represents the formula —NH—CH ((CH₂)_w-R^Four) -CO- D-amino acid
[Where w is 0, 1 or 2; and
R^FourIs optionally substituted by the following groups, each optionally substituted by halogen, lower alkyl, lower alkyloxy, lower alkylamino, amino or hydroxy:

Selected from the group consisting of;
D is the formula when p is 1
-NR²⁰-CH ((CH₂)_k-R^Five) -CO-, or
When p is 0, the formula
-NR²⁰-CH ((CH₂)_l-R^Five) -CH₂-R⁶Or
-NR²⁰-CH ((CH₂)_m-R^Five) -CO-R⁶And
[Where k is 0, 1 or 2;
1 is 0, 1 or 2;
m is 0, 1 or 2;
R²⁰Is selected from the group consisting of lower alkyl or lower aralkyl;
R^FiveAre optionally substituted by the following groups, each optionally substituted by halogen, lower alkyl, lower alkyloxy, amino or hydroxy:

Selected from the group consisting of;
R⁶Is piperazino, morpholino, piperidino, —OH or —N (R⁷-R⁸Where R⁷And R⁸Are each independently hydrogen or lower alkyl];
E is —NH—CH (R when p is 1;^Ten)-(CH₂)_v-R⁹And
[Wherein v is an integer selected from 0 or 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
R⁹Is hydrogen, imidazolyl, guanidino, piperazino, morpholino, piperidino, -N (R¹¹-R¹²Or

(Where n is 0, 1 or 2 and R¹⁹Is hydrogen or lower alkyl)

(Where o is an integer selected from the group of 1, 2, 3 and R¹¹And R¹²Are each independently hydrogen or lower alkyl), or

(The above groups may each be substituted by halogen, lower alkyl, lower alkyloxy, amino, alkylamino, hydroxy), or an Amadori rearrangement product from an amino group and hexapyranose or hexapyranosyl-hexapyranose; And
R^TenWhen p is 1, -H, -COOH, -CH₂-R¹³, -CO-R¹³Or -CH₂-OH, where
R¹³Is piperazino, morpholino, piperidino, —OH or —N (R¹⁴-R¹⁵Where R¹⁴And R¹⁵Are each independently hydrogen or lower alkyl];
All amide bonds in Formula I except for the bond between C and D are independently -Y-NR.¹⁸-May be replaced by-where Y is -CO- or -CH₂-And R¹⁸Is hydrogen, lower alkyl or lower aralkyl}
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
(3-Aminomethylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
3- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane
2- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -2- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane
((3R) -piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
3-((3-Aminomethylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane
2- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane
2-(((((3R) -piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane
2-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane
3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane
3-(((3R) -piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane
3-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane
2-((3-Aminomethylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane
2-(((3R) -piperidinecarbonyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane
A compound excluding
The peptide derivatives of formula I are optionally -Y-NR as indicated above.¹⁸-[E.g. Aminomethylene (-CH₂Proteins due to enzymes due to the presence of adjacent D-amino acids in the peptide sequence combined with substitution of the amide bond (-CO-NH-) by -NH-)] and / or modification at the N-terminus or C-terminus of the peptide Shows increased resistance to degradation. The increased bioavailability of the peptide derivatives of the present invention compared to those proposed in the prior art literature is due to the fact that the compounds of the present invention combine their resistance to proteolysis with a small size. It is considered abstract when it comes.
Throughout the structural formula and throughout the specification, the following terms have the following meanings:
The above-mentioned lower alkyl component includes an alkyl component having a designated length which is either a straight chain, branched chain or cyclic structure, preferably an alkyl component having 1 to 6 carbon atoms. Examples of straight chain alkyl are methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl and hexyl. Examples of branched alkyl are isopropyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl and isohexyl. Examples of cyclic alkyl are cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl.
The above-described lower alkoxy component includes an alkoxy component having a specified length which is either a straight chain, branched chain or cyclic structure, preferably an alkoxy component having 1 to 6 carbon atoms. Examples of straight chain alkoxy are methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, pentoxy and hexoxy. Examples of branched alkoxy are isopropoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, isopentoxy and isohexoxy. Examples of cyclic alkoxy are cyclopropyloxy, cyclobutyloxy, cyclopentyloxy and cyclohexyloxy.
The lower alkylamino component described above includes an alkylamino component of a specified length that is either a straight chain, branched chain or cyclic structure, preferably an alkylamino component having 1 to 6 carbon atoms. Examples of straight chain alkylamino are methylamino, ethylamino, propylamino, butylamino, pentylamino and hexylamino. Examples of branched alkylamino are isopropylamino, sec-butylamino, tert-butylamino, isopentylamino and isohexylamino. Examples of cyclic alkylamino are cyclopropylamino, cyclobutylamino, cyclopentylamino and cyclohexylamino.
As used herein, the term “aryl” refers to an aromatic ring such as phenyl, naphthyl, pyridyl, 1-H-tetrazol-5-yl, thiazolyl, imidazolyl, indolyl, pyrimidinyl, thiadiazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, thiopheneyl. A carbocyclic and heterocyclic aromatic ring selected from the group consisting of quinolinyl, pyrazinyl or isothiazolyl, optionally having one or more C_1-6Alkyl, C_1-6Includes aromatic rings that may be substituted by alkoxy, halogen, amino or aryl. Aryl is preferably halogen, amino, hydroxy, C_1-6By alkyl or C_1-6Phenyl, thienyl, imidazolyl, pyridyl, indolyl, quinolinyl or naphthyl, which may be substituted by alkoxy.
The lower aralkyl component described above is composed of a lower alkyl component and an aryl component, wherein the lower alkyl component and aryl component are as previously defined.
The term “halogen” includes Cl, F, Br and I.
Conventional three letter symbols are used for natural amino acids, for example Ala for alanine.
Detailed Description of the Invention
According to a preferred embodiment of the compound of formula I, A is hydrogen, 3-N-Me-AMB, 3-AMB or Aib. When t is 1, G in the compound of formula I is preferably Ala, Gly, sarcosine, 3-aminomethylbenzoyl, R-nipecotinyl, nipecotic acid or isonipecotic acid, more preferably 3-aminomethylbenzoyl , R-nipecotinyl, nipecotic acid or isonipecotic acid. . When u is 1, H is preferably His, Phe, Tic, Phe (4-NH₂), 3-Pyal, Gly, Ala, Sar, Pro, Tyr, Arg, Orn, 3-aminomethylbenzoic acid or D-Phe, more preferably H is His, Phe or Ala, most preferably H Is His or Ala. C in the compound of formula I is preferably D-2-naphthylalanine (D-2Nal), D-1-naphthylalanine (D-lNal), D-Phe or D-Trp, more preferably D-2Nal. Or D-Phe, most preferably N-Me-D-2Nal, D-2Nal, D-Phe or N-Me-D-Phe. D in the compound of formula I is preferably —NR²⁰-CH ((CH₂)_k-R^Five) -CO- (where k is preferably 1 and R²⁰Is lower alkyl), more preferably D is D-Phe or D-2Nal. Most preferably, D is N-Me-D-Phe-ol, N-Me-D-Phe, N-Me-D-2Nal-ol, N-Me-D-Phe-NH₂N-Me-D-Phe-NH-Me or N-Me-D- (4-I) Phe-NH-Me.
When p in the compound of formula I is 1, E is preferably Lys-NH₂, Ser-NH₂, NH- (2- (1-piperazino) ethyl), NH- (3- (1-morpholino) propyl), NH- (2-aminoethyl), NH- (4-aminomethylbenzyl), NH- (benzyl ), Lys-OH, NH- (1-hydroxy-6-amino-2S-hexyl), NH- (2- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethyl) or 3-N, N-dimethylaminopropyl. Most preferably, E is NH- (2- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethyl), 3-N, N-dimethylaminopropyl, Lys-NH.₂Or Ser-NH₂It is.
R in compounds of formula I^FourIs preferably 2-naphthyl. R^FiveIs preferably phenyl. v is preferably 2-6 and R⁹Is NH₂2-morpholinoethyl, 3-morpholinopropyl or (1-methylpyrrolidinyl) ethyl. R^TenIs preferably -COOH, -CH₂-OH, -H, -CONH₂Or -CON (CH_Three)₂It is.
Examples of specific compounds of the invention are shown below:
(2R) -2-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me) -3- (2-naphthyl) propanol:

(3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂:

3-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -N, N-dimethylaminopropane:

H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂:

(3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂:

H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂
2-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinoethane:

(3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-Me:

3-((3-Methylaminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -N, N-dimethylaminopropane:

(3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-N-Me₂:

H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe:

3-Methylaminomethyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH_Three:

Piperidine-4-carboxylic acid N-((1R) -1- (N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl) -2- ( 2-Naphthyl) ethyl) -N-methylamide:

Unnatural amino acid residue structure:

Abbreviations used for peptide bond substitutes:

Compounds of formula I can be prepared by conventional methods of liquid phase or solid phase peptide synthesis. For example, solid phase synthesis is essentially Stewart and Young,Solid Phase Peptide Synthesis, Second Edition, Rockford, Illinois, United States, 1976. Liquid phase peptide synthesis is, for example, essentially Bondansky et al.,Peptide Synthesis,It can be carried out as described by the second edition, New York, New York, USA, 1976.
Aminomethylene as an alternative to amide bonds is for example Y. Sasaki and D.H. Coy,Peptides  8 (1)1987, pages 119-121. Peptide derivatives containing amino groups derivatized with mono- or di-hexapyranose are essentially R. Albert et al.,Life Sciences  53, 1993, 517-525, by the Amadori rearrangement. Examples of suitable mono- or di-hexapyranose are glucose, galactose, maltose, lactose or cellobiose. Derivatives used as starting materials for the synthesis are commercially available and can provide suitable protecting groups when necessary, and the starting materials used to prepare the “A” component of general formula I are prepared by well known methods. And can be protected in a manner known per se if desired.
Abbreviations used for protecting groups:

Pharmaceutically acceptable acid addition salts of the compounds of formula I include the peptides with inorganic or organic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, acetic acid, phosphoric acid, lactic acid, maleic acid, phthalic acid, citric acid. , Glutaric acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, salicylic acid, succinic acid, tartaric acid, oxalic acid, toluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid, sulfamic acid, and fumaric acid.
In another aspect, the invention relates to a pharmaceutical composition comprising, as an active ingredient, a compound of general formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof together with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
The pharmaceutical compositions containing the compounds of the invention can be prepared by conventional techniques, for exampleRemington's Pharmaceutical Sciences, Can be prepared as described in 1985. The composition can be in conventional dosage forms, such as capsules, tablets, aerosols, solutions, suspensions or topical dosage forms.
The pharmaceutical carrier or diluent used can be a conventional solid or liquid carrier. Examples of solid carriers are lactose, gypsum, sucrose, cyclodextrin, talc, gelatin, agar, pectin, gum arabic, magnesium stearate, stearic acid or lower alkyl ethers of cellulose. Examples of liquid carriers are syrup, peanut oil, olive oil, phospholipids, fatty acids, fatty acid amines, polyoxyethylene and water.
Similarly, the carrier or diluent may include any sustained release material known in the art, such as glyceryl monostearate or glyceryl distearate, alone or mixed with a wax.
When a solid carrier is used for oral administration, the preparation can be formed into tablets, placed in a hard gelatin capsule in powder or pellet form, or it can be in the form of a troche or lozenge. The amount of solid carrier will vary widely but will usually be from about 25 mg to about 1 g.
A typical tablet that can be manufactured by conventional tableting techniques can contain the following ingredients:
core:
Active compound (as free compound or its salt) 100mg
Colloidal silicon dioxide (Aerosil) 1.5mg
Microcrystalline cellulose (Avicel) 70mg
Modified cellulose gum (Ac-Di-Sol) 7.5mg
Magnesium stearate
coating:
HPMC about 9mg
^*Mywacett 9-40 approx.0.9mg
(^*Acylated monoglyceride used as a plasticizer for film coating. )
When a liquid carrier is used, the preparation can be in the form of a syrup, emulsion, soft gelatin capsule or sterile injectable solution, such as an aqueous or non-aqueous suspension or solution.
For nasal or pulmonary administration, the formulation may contain a compound of formula I dissolved or suspended in a liquid carrier for aerosol administration, particularly an aqueous carrier. The carrier may be an additive such as a solubilizer such as propylene glycol, a surfactant such as bile salt, polyethylene glycol, polypropylene glycol or polyoxyethylene higher alcohol ether, an absorption enhancer such as lecithin (phosphatidylcholine) or cyclodextrin, or Preservatives such as parabens may be included.
The preparation for transdermal administration can be in a form suitable for patching or iontophoresis.
In general, the compounds of the invention are dispensed into unit dosage forms comprising 0.0001-100 mg of active ingredient per dose and a pharmaceutically acceptable carrier.
The dose of the compound of the present invention is preferably 1 to 500 mg / day, for example, about 100 mg / dose when administered as a drug to a patient (eg, human).
It has been demonstrated that compounds of general formula I have the ability to release endogenous growth hormone in vivo. Thus, the compounds can be used in the treatment of conditions that require increased plasma growth hormone levels, for example in humans deficient in growth hormone or in elderly patients or in livestock.
Thus, according to a particular aspect, the present invention provides a pharmaceutical composition for stimulating the release of growth hormone from the pituitary gland, as an active ingredient together with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. It relates to a composition comprising a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
In another aspect, the present invention is a method of stimulating the release of growth hormone from the pituitary gland in a subject in need thereof in an effective amount of a compound of general formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof. A method comprising administering.
In yet another aspect, the invention relates to a method of using general formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of a medicament that stimulates the release of growth phorone from the pituitary.
The compounds of formula I have important pharmacological properties. An example of such a property is the stimulation of the release of growth hormone from the pituitary gland which has a similar action or use as growth hormone itself. The intended use of growth hormone can be summarized as follows: stimulation of growth hormone release in the elderly; prevention of catabolic side effects of glucocorticoids, treatment of osteoporosis, stimulation of the immune system, promotion of wound healing, Accelerated fracture repair, treatment of growth retardation, treatment of renal failure or dysfunction caused by growth retardation, treatment of physiological and chronic conditions involving growth hormone deficient children, obesity and obesity related Treatment of growth retardation, treatment of growth retardation associated with Prader-Villi syndrome and Turner syndrome; accelerated recovery of burn patients and reduction of hospitalization; treatment of intrauterine growth retardation, skeletal dysplasia, hypercorticoid disease and Cushing syndrome; Induction of dynamic growth hormone release; growth hormone replacement, osteochondral dysplasia in stress patients, Noonan Treatment of symptoms, schizophrenia, depression, Alzheimer's disease, delayed injury healing and psychosocial deprivation, treatment of pulmonary dysfunction and respiratory dependence, attenuation of protein catabolism after major surgery, cancer and AIDS (AIDS) Protein loss and cachexia due to chronic diseases such as); treatment of hyperinsulinemia, including islet cell disease, adjuvant therapy to induce ovulation; thymic function to stimulate thymic growth and with aging Treatment of immunosuppressed patients, increased muscle strength, motility, maintenance of skin thickness, metabolic homeostasis, renal homeostasis, osteoblasts, bone remodeling and cartilage growth in the elderly Stimulation of the immune system in companion animals, treatment of older diseases in companion animals, promotion of livestock growth and stimulation of hair growth in sheep.
The dosage for the above indications will vary depending on the compound of formula I used, the mode of administration and the desired therapy. In general, however, dose levels of 0.0001-100 mg / kg body weight / day can be administered to patients and animals to obtain an effective release of endogenous growth hormone. In general, dosage forms suitable for oral or nasal administration comprise from about 0.0001 mg to about 100 mg, preferably from about 0.001 to about 50 mg of a compound of formula I admixed with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
The compounds of formula I can be administered in the form of pharmaceutically acceptable acid addition salts or, where appropriate, as alkali metal salts, alkaline earth metal salts or lower alkyl ammonium salts. Such salt forms appear to exhibit approximately the same order of activity as the free base form.
If desired, the pharmaceutical composition of the invention may comprise a compound of formula I in combination with one or more compounds exhibiting another activity (eg, an antibiotic or another pharmacologically active agent). This can be another secretagogue such as GHRP (1 or 6) or GHRH or analogs thereof, growth hormone or analogs thereof, or somatomedin (eg IGF-1 or IGF-2).
The route of administration can be any route that efficiently carries the active compound to the appropriate or desired site of action, such as oral, nasal, pulmonary, transdermal or parenteral, with the oral route being preferred.
Besides the pharmaceutical use of the compounds of formula I, they can be useful in vitro means for studying the control of growth hormone release.
The compounds of formula I can also be useful in vivo means for assessing the ability of the pituitary to release growth hormone. For example, serum samples taken before and after the compounds are administered to humans can be assayed for growth hormone. Comparison of growth hormone in each serum sample will directly determine the patient's pituitary ability to release growth hormone.
The compounds of formula I can be administered to commercially important animals to increase the rate and degree of growth, as well as to increase milk production.
Pharmacological method
Compounds of formula I can be evaluated in vitro for their potency and vitality in releasing growth hormone in rat primordial somatotrophs (somatotropin producing cells).
Rat primitive Somatotroph is essentially as previously described (Chen et al.,Endocrinology 1991, 129, 3337-3342 and Chen et al.Endocrinology 1989, 124, 2791-2798) can be prepared. Briefly, the rat is first sacrificed by decapitation and the pituitary gland is quickly excised. The pituitary is digested with 0.2% collagenase and 0.2% hyaluronidase in Hanks balanced salt solution. 0.37% NaHCO_ThreeSuspended in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) containing 10% horse serum, 2.5% fetal bovine serum, 1% non-essential amino acids, 1% glutamine and 1% penicillin / streptomycin, 1.5 × 10^FiveAdjust to density of cells / ml. 1 ml of this suspension is placed in each well of a 24-well plate and after 2 to 3 days the release experiment is carried out.
On the first day of the experiment, the cells are washed twice with the medium containing 25 mM HEPES, pH 7.4. Growth hormone release is initiated by the addition of medium containing 25 mM HEPES and test compound. Incubate for 15 minutes at 37 ° C. After incubation, the growth hormone released into the medium is measured by standard RIA.
Compounds of formula I can be prepared as previously described (Bercu et al.,Endocrinology 1991, 129, 2592-2598) can be evaluated for their in vitro effects on growth hormone release in female rats anesthetized with pentobarbital. Briefly, adult male Sprague-Dawley rats are anesthetized with 50 mg / kg ip pentobarbital. After the rat is fully anesthetized, a tracheal cannula and catheter are inserted into the carotid artery and jugular vein of the rat. After recovery for 15 minutes, a blood sample is taken at 0 o'clock. Pituitary secretagogues are administered iv and arterial blood samples are placed on ice for 15 minutes and then centrifuged at 12,000 × g for 2 minutes. Serum is decanted and the amount of growth hormone is measured using a standard RIA.
The invention is further illustrated in the following examples. However, this example is not intended to limit the scope of the invention.
The compounds prepared in the examples below were isolated as trifluoroacetic acid (TFA) salts.
Example 1
Preparation of 2 (R) -2-((3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me) -3-phenylpropanol

165.7 mg Boc-N-Me-D-2Nal-OH, 165.2 mg (R) -methylamino-3-phenylpropan-1-ol (Mckennon, M.J .; Meyers, A.I.,J. Org. Chem. Prepared from H-N-Me-D-Phe-OH according to 1993, 58, 3568-71) and 68.1 mg HOAt were dissolved in a mixture of 2 ml DMF and 4 ml DCM at 0 ° C. 115 mg of EDAC was added and the mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour and then at room temperature for 18 hours. After removing DCM from the mixture under a stream of nitrogen, 50 ml of EtOAc was added and the resulting mixture was extracted sequentially with 100 ml of 5% aqueous sodium bicarbonate, 100 ml of water, 100 ml of 5% aqueous potassium hydrogensulfate and 100 ml of water. The organic phase was dried using sodium sulfate and concentrated to an oil using a rotary evaporator under vacuum.
Two drops of DMF were added and 502.6 mg 3-Boc-aminomethylbenzoic acid was dissolved in 10 ml DCM and then stirred with 191.6 mg EDAC for 10 minutes to convert to symmetrical anhydride. A solution containing the lyophilized 2 (R)-(HN-Me-D-2Nal-N-Me) -3-phenylpropanol and 342 μl DIEA in 5 ml DCM is added to the mixture and at room temperature. The reaction was performed for 20 hours. The reaction mixture was concentrated to an oil that was redissolved in 50 ml of EtOAc. This solution was extracted successively with 100 ml of 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution, 100 ml of water, 100 ml of 5% aqueous potassium hydrogen sulfate solution and 100 ml of water. The resulting organic phase was dried using sodium sulfate and concentrated to an oil on a rotary evaporator under vacuum. This oil was dissolved in 4 ml DCM / TFA (1: 1) and stirred. After 10 minutes, the mixture was concentrated under a stream of nitrogen, the resulting oil was redissolved in 20 ml of 70% acetonitrile / 0.03 M hydrochloric acid and 480 ml of water was added. Seven half-times on a 25 mm × 250 mm column pre-equilibrated with 0.05 M ammonium sulfate containing 28% acetonitrile, adjusted to pH 2.5 with 4 M sulfuric acid, and packed with 7 μC-18 silica. The crude product was purified by preparative HPLC.
The column was eluted with a gradient of 28% to 38% acetonitrile in 0.05M ammonium sulfate at 40 ° C. over 47 minutes at pH 2.5, flow rate 10 ml / min, and the recovered peptide-containing fraction was recovered in 3 volumes of water. Sep-Pak diluted with and equilibrated with 0.1% TFA^{▲ R ▼}C18 cartridge (Waters part. #: 51910) was loaded. Sep-Pak with 70% acetonitrile / 0.1% TFA^{▲ R ▼}The peptide was eluted from the cartridge, diluted with water, lyophilized and isolated from the eluate. The final product was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). As a result of the mass spectrum, the obtained molecular mass agreed with that of the expected structure within the range of experimental error (mass spectrum ± 0.9 amu). RP-HPLC analysis was performed using 214 nm ultraviolet detection and a Vydac 218TP54 4.6 mm × 250 mm 5 μC-18 silica column (The Separation Group, Hesperia) eluted at 1 ml / min, 42 ° C. Two different elution conditions were used.
A: The column was equilibrated with 0.1 M ammonium sulfate buffer adjusted to pH 2.5 with 4 M sulfuric acid containing 5% acetonitrile, and 5% to 60% of acetonitrile in the same buffer over 50 minutes. Elute with a gradient to.
B: The column was equilibrated with 5% acetonitrile / 0.1% TFA / water and eluted with a gradient from 5% acetonitrile / 0.1% TFA / water to 60% acetonitrile / 0.1% TFA / water over 50 minutes.
As a result of using the elution conditions of A1 and B2, the retention times were 29.90 minutes and 31.52 minutes, respectively.
Synthesis of 3-Boc-aminomethylbenzoic acid
25 g of 3-cyanobenzoic acid was dissolved in 70 ml of 25% ammonia / water, and 200 ml of water and 5 g of 10% Pd / C were added thereto under a nitrogen atmosphere. The mixture was hydrogenated at room temperature under normal pressure while constantly adjusting the pH to 10.5 by adding 12% ammonia / water. After 18 l of hydrogen was absorbed over 18 hours, the reaction was stopped and filtered to remove the catalyst. The filtrate was concentrated to 20 ml under vacuum, acidified with 200 ml of 1.5M hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate to remove unreacted starting material. The aqueous phase was concentrated to dryness and redissolved in 400 ml THF and 343 ml 1M sodium hydroxide. 30 g of Boc anhydride dissolved in 100 ml of THF was added and the mixture was stirred overnight. The mixture was then acidified to pH 3.0 with 1N hydrochloric acid and extracted with 3 × 300 ml of EtOAc. The organic phase was evaporated to a foam. The yield was 22g.
Abbreviations:
r.t .: Room temperature
EDAC: N-ethyl-N ′-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride
EtOAc: ethyl acetate
Boc: t-Butyloxycarbonyl
N-Me-D-2Nal: N-methyl-D-2-naphthylalanine
DCM: Dichloromethane
DIEA: Diisopropylethylamine
DMF: N, N-dimethylformamide
HOAt: 1-hydroxy-7-azabenzotriazole
N-Me-D-Phe-ol: N-methyl-D-phenylalaninol
TFA: trifluoroacetic acid
THF: tetrahydrofuran
Example 2
3-((3-Aminomethylbenzoyl))-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -N, N-dimethylaminopropane

Boc-N-Me-D-Phe-OH (279 mg) was dissolved in DMF (4 ml) and stirred with HoBt (168 mg) and EDAC (230 mg) for 10 minutes. 3-Dimethylamino-1-propylamine (188 μl) was added and stirred at room temperature for 18 hours. Then 5% aqueous sodium bicarbonate (50 ml) was added, the resulting mixture was extracted with EtOAc (50 ml), the organic phase was dried over sodium sulfate and concentrated under vacuum to an oil. The oil was stirred for 10 minutes at room temperature with TFA / DCM (1: 1) (6 ml). TFA / DCM was then evaporated under a stream of nitrogen, and the resulting oil was dissolved in a mixture of 70% acetonitrile (10 ml), 1N hydrochloric acid (3 ml) and water (37 ml), and the mixture was immediately frozen and frozen. Dried.
The lyophilized product was dissolved in DMF (6 ml) and DCM (12 ml). While stirring, Boc-N-Me-D-2Nal-OH (494 mg), HOAt (204 mg), DIEA (171 μl) were added, and after cooling to 0 ° C., further EDAC (288 mg) was added. . After stirring at room temperature for 18 hours, DCM was evaporated under a stream of nitrogen and EtOAc (100 ml) was added. The mixture was extracted twice with 5% aqueous sodium bicarbonate (100 ml) and water (100 ml), dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo to an oil (480 mg). The oil was stirred with TFA / DCM (1: 1) (6 ml) for 10 minutes at room temperature. The TFA / DCM was then evaporated under a stream of nitrogen and the resulting oil was redissolved in 70% acetonitrile (10 ml). 1N hydrochloric acid (1 ml) and water (47 ml) were added and the resulting mixture was immediately lyophilized to an oil. (2HCl ・ H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH- (CH₂)_Three-N (CH_Three)₂).
Half of the above oil (2HCl ・ H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH- (CH₂)_Three-N (CH_Three)₂) Was dissolved in DCM (9 ml) and 2 drops of DMF and DIEA (342 μl) were added. To this solution was added a solution of Boc-3AMB-OH (503 mg) and EDAC (192 mg) in DCM (5 ml) that had been stirred for 15 minutes at room temperature. After stirring for 20 hours, the reaction mixture was concentrated to an oil under a stream of nitrogen and stirred with 5% aqueous sodium bicarbonate (100 ml) for 15 minutes. Then EtOAc (50 ml) was added and the organic phase was extracted and washed with 5% aqueous sodium bicarbonate (100 ml) and water (100 ml), dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo to an oil (340 mg ).
The oil was stirred with TFA / DCM (1: 1) (6 ml) for 10 minutes at room temperature. TFA / DCM was evaporated under a stream of nitrogen and the resulting oil was dissolved in 70% acetonitrile (10 ml) and diluted with water to a final volume of 50 ml. The crude product was purified by semi-preparative HPLC in 8 portions using the same procedure as described in Example 1 and then lyophilized. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 608.2amu) is the expected structure within the range of experimental error (theoretical MH)⁺: 608.8amu). As a result of using the elution conditions A1 and B2 shown in Example 1, the retention times of RP-HPLC were 25.23 minutes and 26.58 minutes, respectively.
Example 3
3-(((3R) -3-piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-N, N-dimethylaminopropane

2HCl · H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH- (CH obtained as oil in Example 2₂)_Three-N (CH_Three)₂Was dissolved in DCM (9 ml) and 2 drops of DMF and DIEA (342 μl) were added. This solution was added to a DCM (5 ml) solution containing Boc- (R) nipecotic acid (459 mg) and EDAC (192 mg) that had been stirred for 15 minutes at room temperature. After stirring for 20 hours, the reaction mixture was concentrated to an oil under a stream of nitrogen and the oil was stirred with 5% aqueous sodium bicarbonate (100 ml) for 15 minutes. Then EtOAc (50 ml) was added and the organic phase was separated and extracted with 5% aqueous sodium bicarbonate (100 ml) and water (100 ml), dried over sodium sulfate and concentrated under vacuum to an oil. . The oil was stirred with TFA / DCM (1: 1) (6 ml) for 10 minutes at room temperature. The TFA / DCM was evaporated under a stream of nitrogen and the resulting oil was dissolved in 70% acetonitrile (10 ml) and diluted with water to a final volume of 50 ml. The crude product was purified by semi-preparative HPLC in 5 portions and then lyophilized using the same procedure as described in Example 1. The final product was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 586.3amu) is an expected structure within the range of experimental error (theoretical MH)⁺: 585.8amu). As a result of using the elution conditions A1 and B2 shown in Example 1, the retention times of RP-HPLC were 25.33 minutes and 26.35 minutes, respectively.
Example 4
2-(((3R) -3-piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane

Boc-N-Me-D-Phe-OH (279 mg) was dissolved in DMF (10 ml) and stirred with HOBt (168 mg) and EDAC (384 mg) at room temperature for 10 minutes. 2- (Aminoethyl) -1-methylpyrrolidine (290 μl) and DIEA (171 μl) were added and the mixture was stirred at room temperature for 20 hours. The mixture was then concentrated to an oil, dissolved in 50 ml of water and dried. Sep-Pak redissolved in 25 ml water and equilibrated with 0.03N hydrochloric acid^{▲ R ▼}It was applied to a C18 cartridge (Waters part. #: 43345). Sep-Pak with 0.03N hydrochloric acid containing 70% acetonitrile^{▲ R ▼}The product eluted from the cartridge was diluted with water, then lyophilized and isolated from the eluate. The resulting product was stirred with TFA / DCM (1: 1) (6 ml) at room temperature for 10 minutes. The TFA / DCM was then evaporated under a stream of nitrogen and the resulting oil was dissolved in 70% acetonitrile (10 ml) and 1N hydrochloric acid (2 ml) was added. After dilution with water (50 ml), the product was isolated by lyophilization.
The obtained material was dissolved in DMF (3 ml), and Boc-N-Me-D-2Nal-OH (329 mg), HOAt (136 mg), EDAC (230 mg) and DIEA (171 μl) were added, followed by 18 hours at room temperature. Stir with. EtOAc (50 ml) was then added and the mixture was extracted with 5% aqueous sodium bicarbonate (50 ml), 5% aqueous potassium hydrogen sulfate (50 ml) and water (50 ml). The organic phase was dried over sodium sulfate and concentrated under vacuum to an oil.
The oil was stirred with TFA / DCM (1: 1) (6 ml) for 10 minutes at room temperature. The TFA / DCM was evaporated under a stream of nitrogen and the resulting oil was dissolved in 70% acetonitrile (10 ml) and 1N hydrochloric acid (3 ml) was added. After dilution with water (50 ml), the product was isolated by lyophilization.
286 mg of lyophilized product was dissolved in DCM (15 ml) and DIEA (171 μl). This solution was added to a solution (10 ml) of Boc- (R) -nipecotic acid (459 mg) and EDAC (192 mg) in DCM (10 ml) that had been stirred for 25 minutes at room temperature. After stirring for 20 hours, the reaction mixture was concentrated to an oil under a stream of nitrogen, redissolved in EtOAc (100 ml), 5% aqueous sodium bicarbonate (50 ml), 5% aqueous potassium hydrogen sulfate (50 ml), and water (50 ml). This mixture was extracted and washed. The organic phase was dried over sodium sulfate and concentrated under vacuum to an oil. The oil was stirred with TFA / DCM (1: 1) (6 ml) for 10 minutes at room temperature. The TFA / DCM was evaporated under a stream of nitrogen and the resulting oil was dissolved in 70% acetonitrile (10 ml) and diluted with water to a final volume of 50 ml. The crude product was purified by semi-preparative HPLC in three portions using the same procedure as described in Example 1 and then lyophilized. The final product was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 612.2amu) is the expected structure within the range of experimental error (theoretical MH)⁺: 612.39 amu). As a result of using the elution condition A1 shown in Example 1, the retention time of RP-HPLC was 25.80 minutes.
Example 5
(2R) -2-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me) -3- (2-naphthyl) propanol

(R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (2-naphthyl) -propionic acid methyl ester

(R) -2-tert-Butoxycarbonylamino-3- (2-naphthyl) propionic acid (5.0 g; 16.4 mmol) was dissolved in dry DMF (50 ml). Iodomethane (6.2 ml; 98.4 mmol) and silver (I) oxide (13.3 g; 57.4 mmol) were added and the mixture was stirred overnight. The reaction mixture was filtered and the filtrate was extracted with methylene chloride (200 ml). The organic phase was washed with potassium cyanate (2 × 50 ml; 5%) and water (3 × 75 ml). The organic phase was dried (magnesium sulfate) and the solvent was removed under vacuum. The residual oil was purified by chromatography using ethyl acetate / heptane (1: 2) as eluent (silica, 5 × 40 cm) and 4.98 g of (R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N— Methylamino) -3- (2-naphthyl) -propionic acid methyl ester was obtained.
¹H-NMR (CDCl_Three): 1.30, 1.35 (2s, 9H); 2.71, 2.75 (2s, 3H); 3.19, 3.47 (2m, 2H); 3.74, 3.77 (2s, 3H); 4.65, 5.05 (2dd, 1H); 7.29-7.82 (M, 7H) (Rotational isomer mixture)
(R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (2-naphthyl) propionic acid

(R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (2-naphthyl) -propionic acid methyl ester (21.73 g; 65.57 mmol) was dissolved in 1,4-dioxane (200 ml). And water (20 ml) was added. The reaction mixture was cooled in ice and lithium hydroxide (1.73 g; 72.13 mmol) was added. After 15 minutes, water (140 ml) was added and the mixture continued to stir at room temperature for an additional 3 hours. Ethyl acetate (400 ml) and water (300 ml) were added, and the pH was adjusted to 2.5 with 1M sodium hydrogen sulfate (110 ml). The phases were separated and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (200 ml). The combined organic phases are washed with water (300 ml), dried over magnesium sulfate, the solvent is removed in vacuo and 20.1 g of (R) 2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3 -(2-Naphthyl) propionic acid was obtained.
¹H-NMR (DMSO): 1.18, 1.21 (2s, 9H); 2.62, 2.66 (2s, 3H); 3.11-3.58 (m, 2H); 4.75, 4.90 (2dd, 1H); 7.48-7.88 (m, 7H ); 1.85 (s (br), 1H) (rotational isomer mixture)
(R) 2-Formylamino-3- (2-naphthyl) propionic acid

(R) 2-Amino-3- (2-naphthyl) propionic acid (18.11 g; 84.14 mmol) was dissolved in formic acid (204 ml) and acetic anhydride (70 ml) was added dropwise. The reaction mixture was heated to 55 ° C. and stirred at room temperature for 3.5 hours. Ice water (70 ml) was added dropwise and stirred at 0 ° C. for 20 minutes. The reaction mixture was filtered and washed with ice water (20 ml) to give 20.26 g of (R) 2-formylamino-3- (2-naphthyl) propionic acid.
¹H-NMR (DMSO): 3.05 (dd, 1H); 3.27 (dd, 1H); 4.64 (m, 1H); 7.48-7.87 (m, 7H); 7.95 (s, 1H); 8.45 (d, 1H) 12.9 (s (br), 1H)
(R) -Methylamino-3- (2-naphthyl) propan-1-ol

(R) 2-Formylamino-3- (2-naphthyl) propionic acid (4.37 g; 18 mmol) was dissolved in dry tetrahydrofuran (100 ml) and sodium borohydride (1.6 g; 43.2 mmol) was added. Iodine (4.57 g; 18 mmol) was dissolved in dry tetrahydrofuran (40 ml) and added dropwise to the reaction mixture, keeping the temperature below 40 ° C. After the addition, the reaction mixture was heated at reflux for 12 hours. Potassium hydroxide (50 ml; 20%) was added. The aqueous phase was extracted with methyl tert butyl ester (4 × 50 ml). The combined organic phases were washed with saturated sodium chloride (150 ml), dried (magnesium sulfate) and the solvent removed in vacuo. The residue was purified by chromatography (silica; 5 × 40 cm) using DCM / methanol / ammonia (100: 10: 1) to give 1.81 g of (R) -methylamino-3- (2-naphthyl) propane- 1-ol was obtained.
¹H-NMR (CDCl_Three): 2.43 (s, 3H); 2.88-3.05 (m, 3H); 3.10 (s (br), 2H); 3.42 (dd, 1H); 3.69 (dd, 1H); 7.30-7.82 (m, 7H)
N-{(1R) -1- [N-((1R) -2-hydroxy-1-((2-naphthyl) methyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl] -2- (2-naphthyl) ethyl}- N-methylcarbamic acid tert-butyl ester

(R)-(N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (2-naphthyl) propionic acid (0.55 g; 1.67 mmol) and (R) -methylamino-3- (2-naphthyl) propane -1-ol (0.38 g; 2.00 mmol) was dissolved in methylene chloride (15 ml) and dimethylformamide (7.5 ml). The reaction mixture was cooled in an ice bath. 1-Hydroxy-7-azabenzotriazole (0.24 g; 2.09 mmol) and N- (3-dimethylaminopropyl) -N′-ethylcarbodiimide hydrochloride (0.38 g; 2.0 mmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The reaction mixture was concentrated under vacuum. Ethyl acetate (200 ml) was added and the organic phase was washed with water (100 ml), sodium hydrogen carbonate / sodium carbonate (pH 9) (75 ml), sodium hydrogen sulfate (75 ml; 10%), water (100 ml) and dried. (Magnesium sulfate). The solvent was removed under vacuum and the residue was purified by chromatography with ethyl acetate (Silica; 2 × 45 cm) and 0.25 g of N-{(1R) -1- (N-[(1R) -2-hydroxy- 1-((2-Naphtyl) methyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl] -2- (2-naphthyl) ethyl} -N-methylcarbamic acid tert-butyl ester was obtained.
¹H-NMR (DMSO): 0.80-1.99 (several s, 9H); 2.45-4.20 (m, 12H); 4.70-5.12 (m, 2H) (extracted peaks; rotamer mixture).
(2R) -N-((1R) -2-hydroxy-1-((2-naphthyl) methyl) ethyl) -N-methyl-2-methylamino-3- (2-naphthyl) propionamide

N-{(1R) -1- (N-[(1R) -2-hydroxy-1-((2-naphthyl) methyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl] -2- (2-naphthyl) ethyl}- N-methylcarbamic acid tert-butyl ester (0.25 g; 0.475 mmol) was dissolved in DCM (3 ml). Trifluoroacetic acid (1 ml) was added and the reaction mixture was stirred for 20 minutes. The solvent was removed under vacuum. DCM (5 ml) was added and removed under vacuum. This operation was repeated. The residue was dissolved in methanol (5 ml). Sodium bicarbonate / sodium carbonate (5 ml; pH 9) was added and the solution was extracted with ethyl acetate (2 × 10 ml). The organic phase is dried (magnesium sulfate), the solvent is removed and 0.22 g of (2R) -N-((1R) -2-hydroxy-1-((2-naphthyl) methyl) ethyl) -N-methyl- 2-Methylamino-3- (2-naphthyl) propionamide was obtained.
¹H-NMR (CDCl_Three): 1.70, 2.37, 2.45, 2.93 (4s, 6H); 2.56-3.05 (m, 2H); 3.52-3.85 (m, 7H); 4.25, 4.97 (2m, 1H); 6.86-7.78 (m, 14H) (Extracted peak, mixture of rotamers)
(2R) -2-((3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me) -3- (2-naphthyl) propanol

3-Boc-aminomethylbenzoic acid (502.6 mg) was dissolved in DCM (6 ml) and then converted to the symmetric anhydride by stirring with EDAC (191.6 mg) for 15 minutes.
(2R) -N-((1R) -2-hydroxy-1-((2-naphthyl) methyl) ethyl) -N-methyl-2-methylamino-3- (2-naphthyl) dissolved in DCM (5 ml) ) A solution of propionamide (200 mg) was added to the mixture and allowed to react for 20 hours at room temperature.
The reaction mixture was then concentrated to an oil and redissolved in EtOAc (100 ml). This solution was sequentially added to 5% NaHCO._ThreeAqueous solution (2 x 50 ml), 5% KHSO_FourAqueous solution (2 x 50 ml) and H₂Extracted with O (2 × 50 ml). The resulting organic phase is Na₂SO_FourAnd dried in a vacuum on a rotary evaporator to give an oil. This oil was dissolved in DCM / TFA (1: 1) (6 ml) and stirred. After 10 minutes, the mixture was concentrated with a stream of nitrogen and the resulting oil was 70% CH_ThreeRedissolved in CN / 0.1% TFA (5 ml) and diluted with water to a volume of 100 ml.
The crude product was purified in two portions by semi-preparative HPLC and lyophilized by a procedure similar to that described in Example 1.
The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 559.5amu) is the expected structure (theoretical value: MH) within the experimental error range of this method⁺: 560.72amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 33.07 minutes and 34.63 minutes, respectively.
Example 6
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This peptide was obtained on an Applied Biosytems 431A peptide synthesizer at 0.22 mmol scale using the FastMoc UV protocol supplied by the manufacturer using UV monitoring of HBTU mediated coupling in NMP and deprotection of the Fmoc protecting group. Synthesized according to the method. The starting resin used in the synthesis is cat. #: D-1675, (427) mg from Bachem Feinchemikalien AG, Bubendorf, Switzerland, which is Fmoc-2,4 bound to an aminomethylpolystyrene resin by an amide bond. -Dimethoxy-4 '-(carboxymethyloxy) benzhydrylamine. The displacement capacity was 0.55 mmol / g. The protected amino acid derivatives used were Fmoc-N-N-Me-D-Phe-OH, Fmoc-D-2Nal-OH, Fmoc-His (Trt) and Fmoc-Aib-OH. The coupling of Fmoc-N-Me-D-Phe-OH was performed as a double coupling. After synthesis, the peptide was incubated at room temperature for 180 minutes with 8 ml TFA, 600 mg phenol, 200 μl ethanedithiol, 400 μl thioanisole and 400 μl H.₂Cleavage from 750 mg of peptide resin by stirring with O. The cleavage mixture was filtered and the filtrate was concentrated to approximately 2 ml with a stream of nitrogen. The crude peptide was precipitated from the oil using 50 ml diethyl ether and washed twice with 50 ml diethyl ether. The crude peptide was dried, washed once by semi-preparative HPLC and lyophilized using the same procedure as described in Example 1.
The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 598.5amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 598.73amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 24.68 minutes and 25.58 minutes, respectively.
Example 7
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Ser-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 6. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 685.6amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 685.81 amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 24.42 minutes and 25.92 minutes, respectively.
Example 8
(3-Aminomethylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 6. However, coupling of Fmoc-D-2Nal-OH was performed using HATU as an activating reagent. H-N-Me-D-Phe-resin (0.23 mmol) was coupled with 1 mmol Fmoc-D-2Nal-OH in the presence of DIEA (2 mmol) for 150 min.
The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 511.2amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 509.6 amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 30.73 minutes and 32.47 minutes, respectively.
Example 9
(4-piperidinecarbonyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 8. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 486.8amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 487.6 amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 27.03 minutes and 28.48 minutes, respectively.
Example 10
((3R) -3-piperidinecarbonyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 8. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 486.9amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 487.6 amu).
RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 28.03 minutes and 29.50 minutes, respectively.
Example 11
(3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 8. However, the last residue was introduced using a symmetric anhydride coupling method. Boc-3-aminomethylbenzoic acid (251 mg) was stirred with EDAC (96 mg) in DCM for 15 minutes. Resin (429 mg) was then added and stirring was continued for 18 hours. Another exception was that the peptide cleavage time from the resin was reduced to 60 minutes. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 522.9amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 523.6amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 28.83 minutes and 30.13 minutes, respectively.
Example 12
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 8, except that both Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH and Fmoc-His (Trt) were coupled using HATU, The peptide cleavage time from the resin was shortened to 60 minutes. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 612.3amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 612.8amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 24.33 minutes and 26.20 minutes, respectively.
Example 13
(3-Aminomethylbenzoyl) -D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 8. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 587.2amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 586.74 amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 21.13 minutes and 22.60 minutes, respectively.
Example 14
(3-Aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 11. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 601.6amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 601.77amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 20.40 minutes and 21.70 minutes, respectively.
Example 15
((3R) -3-piperidinecarbonyl) -N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 11. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 579.4amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 579.8amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 19.88 minutes and 21.20 minutes, respectively.
Example 16
H-Aib-His-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 12. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 690.6amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 690.9amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 15.71 minutes and 17.82 minutes, respectively.
Example 17
((3R) -3-piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 11, except that Fmoc-N-Me-D-Phe-OH, Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH and Boc- (R) -Nipecotic acid was used. Here, both Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH and Boc- (R) -nipecotic acid were coupled using HATU. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 500.7amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 501.7amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 28.18 minutes and 29.55 minutes, respectively.
Example 18
H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH₂

This compound was synthesized using a procedure similar to that described in Example 6. The final product obtained was analyzed by analytical RP-HPLC (retention time) and plasma desorption mass spectrum (molecular mass). Measured molecular mass (MH⁺: 660.7amu) is the expected structure (theoretical MH) within the experimental error range of this method⁺: 660.8amu).
The RP-HPLC retention times using elution conditions A1 and B1 defined in Example 1 were found to be 25.63 minutes and 26.75 minutes, respectively.
Example 19
H-3-Aminomethylbenzoyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH_Three

Boc-3AMB-OH (115 mg, 0.458 mmol), 1-hydroxy-7-azabenzotriazole (62 mg, 0.458 mmol) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (97 mg, 0.504 mmol) Was dissolved in DCM (8 ml) and DMF (1 ml) and stirred for 15 minutes. N-methyl-2-methylamino-N-((1R) -1- (methylcarbamoyl) -2-phenylethyl) -3- (2-naphthyl) propionamide (185 mg, 0.458 mmol) dissolved in DCM (5 m) ) Was added followed by diisopropylethylamine (80 ml, 0.458 mmol) and the mixture was stirred for 20 hours.
The organic phase is sodium bicarbonate (50 ml, 5%), H₂O (50 ml) and saturated NaCl / H₂Washed with O (50 ml), dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in DCM (2 ml) and treated with TFA (2 ml) for 10 minutes. N₂Volatiles were removed by flow. Dissolve the residue in 50 ml of 20% MeCN,₂Diluted with O to 500 ml.
Semi-preparative HPLC
10ml / min, 5 times, 30-40% MeCN / 0.1M (NH_Four)₂SO_Four, PH 2.5
Detection 276nm, Sep-Pak^{▲ R ▼}, 70% MeCN / 0.1% TFA, lyophilized

Example 20
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe

Fmoc-L-His (Trt) -OH (1.54 g, 2.48 mmol) (BACHEM B-1570) and 1-hydroxyazabenzotriazole (338 mg, 2.48 mmol) were dissolved in 9 ml of DMF and cooled to 0-4 ° C. 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (475 mg, 2.48 mmol) was added. The reaction mixture was stirred for 15 minutes at 0-4 ° C. N-methyl-2-methylamino-N-((1R) -1- (methylcarbamoyl) -2-phenylethyl) -3- (2-naphthyl) propionamide (500 mg, 1.24) dissolved in methylene chloride (18 ml) Mmol) was added cooled to 0-4 ° C., stirred at 0-4 ° C. for 1 hour, and then diisopropylethylamine (0.425 ml, 2.48 mmol) was added. The temperature of the mixture was slowly raised to room temperature and stirred for 72 hours. DCM to N₂Evaporated in a stream, 100 ml of ethyl acetate was added to the mixture and washed with sodium bicarbonate (2 × 100 ml, 5%) and potassium hydrogen sulfate (100 ml, 5%). The phases were separated and the organic phase was dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The residue is dissolved in DMF (8 ml) and treated with piperidine for 15 minutes.₂Dilute with O (100 ml) and quench with acetic acid (1.5 ml). Acetonitrile is added and the mixture is H₂Diluted with O to 250 ml. Apply the clear solution to 10 g “Seppaks” #Water,₂Washed with O / 0.03M HCl and eluted with 50 ml of 35% MeCN / 0.03M HCl. H₂Diluted with O and lyophilized to 200 ml.
Boc-alpha aminoisobutyric acid (756 mg, 3.72 mmol), 1-hydroxyazabenzotriazole hydrate (506 mg, 3.72 mmol) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (713 mg, 3.72 mmol) Was dissolved in DMF (6 mg), and 15 minutes later, HL-His (Trt) -NMe-D2Nal-NMe-D-Phe-NHCH dissolved in DCM (12 ml)_Three. 2HCl was added followed by diisopropylethylamine (0.637 ml) and stirred for 72 hours. DCM to N₂Evaporated in a stream, 100 ml of ethyl acetate was added to the mixture and washed with sodium bicarbonate (2 x 50 ml, 5%) and potassium hydrogen sulfate (50 ml, 5%). The phases were separated and the organic phase was dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in DCM (6 ml), cooled to 0-4 ° C. and treated with TFA (6 ml) for 10 minutes at 0-4 ° C. N₂Volatiles were removed by flow. The oily residue is dissolved in 35 ml of 70% acetonitrile and H₂Diluted with O to 50 ml, added 10 ml concentrated hydrochloric acid (12 mol) and stirred for 72 hours. Mix the mixture with H₂Dilute with O to 200 ml, neutralize with solid sodium carbonate and finally H₂Diluted with O to 400 ml.
Semi-preparative HPLC

Example 21
3-Methylaminomethylbenzoyl-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH_Three

Boc-NMe3AMB-OH (658 mg, 2.48 mmol), 1-hydroxyazabenzotriazole hydrate (338 mg, 2.48 mmol) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (475 mg, 2.48 mmol) Was dissolved in 6 ml of DMF and stirred for 15 minutes.
N-methyl-2-methylamino-N-((1R) -1- (methylcarbamoyl) -2-phenylethyl) -3- (2-naphthyl) propionamide (500 mg, 1.24) dissolved in methylene chloride (12 ml) Mmol) followed by diisopropylethylamine (0.425 ml, 2.48 mmol). The mixture was stirred for 20 hours.
DCM to N₂Evaporated in a stream, 75 ml of ethyl acetate was added to the mixture and washed with sodium bicarbonate (2 × 50 ml, 5%) and potassium hydrogen sulfate (50 ml, 5%). The phases were separated and the organic phase was dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in 10 ml of methylene chloride, cooled to 0-4 ° C. and treated with TFA (10 ml) for 10 minutes at 0-4 ° C. N₂Volatiles were removed in a stream. The oily residue is dissolved in 25 ml of 70% MeCN / 0.1% TFA and H₂Diluted with O to 600 ml.
Semi-preparative HPLC
Large column, 40ml / min, 8 times 28-40 & Pll (NH_Four)₂SO_Four276nM
Seppak, lyophilized

Example 22
Piperidine-4-carboxylic acid N-((1R) -1- (N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl) -2- ( 2-Naphthyl) ethyl) -N-methylamide

(2R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (4-iodophenyl) propionic acid

Prepared according to Can J. Chem. (1977), 55, 906.
¹H-NMR: (CDCl_Three) D 1.34 (s, 4.5H), 1.38 (s, 4.5H), 2.70 (s, 1.5H), 2.75 (s, 1.5H); 2.85-3.10 (m, 1H), 3.2-3.4 (m, 1H) ); 4.4-4.6 (m, 0.5H), 6.9-7.0 (m, 2H), 7.62 (d, J = 10Hz, 2Hz), 9.5-10 (bs, 1H)
N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamic acid tert-butyl ester

(2R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (4-iodophenyl) propionic acid (2.00 g, 4.9 mmol) was dissolved in methylene chloride (20 ml). Hydroxybenzotriazole hydrate (0.67 g, 4.9 mmol) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (0.99 g, 4.9 mmol) were added and the mixture was stirred for 15 minutes. Methylamine (0.38 g of a 40% solution in methanol, 4.9 mmol) was added and the mixture was stirred overnight. Methylene chloride (40 ml) was added and the mixture was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate (50 ml) and sodium hydrogen sulfate solution (10%, 50 ml). The organic phase is dried (MgSO_FourAnd the solvent was removed in vacuo. The residue was purified by chromatography on silica (2.5 × 20 cm) using ethyl acetate / heptane (2: 1) as eluent to give 1.77 g N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (Methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamic acid tert-butyl ester was obtained.
¹H-NMR: (CDCl_Three) (Extracted peaks for the major rotamers) d 1.39 (s, 9H); 2.75 (s, 3H); 2.80 (d, 3H); 3.29 (dd, 1H); 4.88 (t, 1H).
(2R) -3- (4-Iodophenyl) -N-methyl-2- (methylamino) propionamide

N- (1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamic acid tert-butyl ester (1.7 g, 4.0 mmol) was dissolved in methylene chloride (10 ml). Fluoroacetic acid (5 ml) was added. The mixture was stirred for 1 hour. Methylene chloride (30 ml) and water (30 ml) were added. Solid sodium bicarbonate was added to adjust the pH to 8. The organic phase is separated and dried (MgSO_Four) And evaporated in vacuo to give 1.22 g of (2R) -3- (4-iodophenyl) -N-methyl-2- (methylamino) propionamide.
H-NMR: (CDCl_Three) D 2.28 (s, 3H); 2.68 (dd, 1H); 2.81 (d, 3H); 3.08-3.19 (m, 2H); 6.95 (d, 2H); 7.63 (d, 2H)
N-methyl-N-((1R) -1- (N-methyl-N-((1R) -1- (methylcarbamoyl) -2- (4-iodophenyl) ethyl) carbamoyl) -2- (2- Naphthyl) ethyl) carbamic acid tert-butyl ester

(2R) -2- (N-tert-butoxycarbonyl-N-methylamino) -3- (2-naphthyl) propionic acid (1.10 g, 3.30 mmol) was dissolved in methylene chloride (10 ml) and HOAt (0.45 g , 3.1 mmol) and EDAC (0.66 g, 3.5 mmol). After stirring for 15 minutes, (2R) -3- (4-iodophenyl) -N-methyl-2- (methylamino) propionamide (1.0 g, 3.1 mmol) and diisopropylethylamine (0.45 g, 3.4 mmol) were added. And the mixture was stirred overnight. Methylene chloride (30 ml) was added and the mixture was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate (30 ml) and sodium hydrogen sulfate solution (10%, 30 ml). The organic phase is dried (MgSO_Four), The solvent was removed under vacuum. The residue was purified by chromatography on silica (2.5 × 20 cm) using ethyl acetate / heptane (2: 1) as eluent to give 1.74 g N-methyl-N-((1R) -1- ( N-methyl-N-((1R) -1- (methylcarbamoyl) -2- (4-iodophenyl) ethyl) carbamoyl) -2- (2-naphthyl) ethyl) carbamic acid tert-butyl ester was obtained.
¹H-NMR: (CDCl_Three) (Extracted peaks for the major rotamers) d 1.38 (s, 9H); 2.18 (d, 3H); 2.45 (s, 3H); 2.75 (s, 3H); 5.05 (m, 1H); 5.42 ( m, 1H).
(2R) -N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methyl-2-methylamino-3- (2-naphthyl) propionamide

N-methyl-N-((1R) -1- (N-methyl-N-((1R) -1- (methylcarbamoyl) -2- (4-iodophenyl) ethyl) carbamoyl) -2- (2- Naphthyl) ethyl) carbamic acid tert-butyl ester was dissolved in a mixture of methylene chloride and trifluoroacetic acid and stirred for 15 minutes.
Methylene chloride (20 ml) and water (30 ml) were added. Solid sodium bicarbonate was added to pH 8. The organic phase is separated and dried (MgSO_Four), Evaporated in vacuo, 1.40 g of (2R) -N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methyl-2-methylamino-3 -(2-Naphthyl) propionamide was obtained.
¹H-NMR: (CDCl_Three) (Extracted peaks for the major rotamers) d 1.79 (s, 3H); 2.02 (d, 3H); 2.55 (s, 3H); 3.78 (dd, 1H); 5.44 (dd, 1H).
4- (N-((1R) -1- (N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl) -2- (2-naphthyl) ) Ethyl) -N-methylcarbamoyl) piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester

1-tert-Butoxycarbonylpiperidine-4-carboxylic acid (143 mg, 0.66 mmol) was dissolved in methylene chloride (10 ml) and HOAt (90 mg, 0.66 mmol) and EDAC (140 mg, 0.73 mmol) were added. After stirring for 15 minutes, (2R) -N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methyl-2-methylamino-3- (2-naphthyl) Propionamide (350 mg, 0.66 mmol) and diisopropylethylamine (85 mg, 0.66 mmol) were added and the mixture was stirred overnight. Methylene chloride (20 mg) was added and the mixture was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate (20 ml) and sodium hydrogen sulfate solution (10%, 20 ml). The organic phase is dried (MgSO_Four), The solvent was removed in vacuo. The residue was purified by chromatography on silica (2.5 x 20 cm) using ethyl acetate as eluent to give 412 mg of 4- (N-((1R) -1- (N-((1R) -2- (4-Iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl) -2- (2-naphthyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl) piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester was obtained. .
4- (N-((1R) -1- (N-((1R) -2- (4-iodophenyl) -1- (methylcarbamoyl) ethyl) -N-methylcarbamoyl) -2- (2-naphthyl) ) Ethyl) -N-methylcarbamoyl) piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (412 mg, 0.56 mmol) was dissolved in a mixture of methylene chloride (5 ml) and trifluoroacetic acid (5 ml) and stirred for 5 minutes. Methylene chloride (20 ml) and a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate (20 ml) were added. Solid sodium bicarbonate was added to adjust the pH to 8. The phases are separated and the organic phase is dried (MgSO_Four) And evaporated to give 255 mg of the title compound.
¹H-NMR: (CDCl_Three) (Extracted peak for main rotamers) d 2.32 (d, 3H); 2.58 (s, 3H); 2.68 (s, 3H); 5.33 (m, 1H); 5.84 (t, 1H)
HPLC: r_t= 33.35 minutes (A1)
PDMS: m / z 640.8 (M + H)⁺.
Abbreviation
HBTU: O- (benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
NMP: N-methylpyrrolidone
HATU: O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
Trt-: Trityl
HOBT: 7-hydroxybenzotriozol hydrate
3-AmB: 3-aminomethylbenzoyl
N-Me-3-AMB: 3-methylaminomethylbenzoyl

Claims (2)

Formula II:

{In the above formula,
AB is

Is;
R ¹⁸ is hydrogen, C _1-6 alkyl or C _1-6 alkyl substituted with aryl;
E is —NH—CH (R ¹⁰ ) — (CH ₂ ) _v —R ⁹ or R ⁶ , where v is 0, 1, 2, 3 or 4;
R ⁹ is hydrogen, morpholino, piperidino, —N (R ¹¹ ) —R ¹² , or

(Where n is 0, 1 or 2 and R ¹⁹ is hydrogen or C _1-6 -alkyl)
Is;
R ¹¹ and R ¹² are independently hydrogen or C _1-6 -alkyl;
R ¹⁰ is —H, —COOH, —CH ₂ R ¹³ , —COR ¹³ or —CH ₂ OH, wherein R ¹³ is piperazino, morpholino, piperidino or —N (R ¹⁴ ) R ¹⁵ . , R ¹⁴ and R ¹⁵ are independently hydrogen or C _1-6 - alkyl der Ri; and
R ⁶ is —OH or —N (R ⁷ ) R ⁸ , where R ⁷ and R ⁸ are independently hydrogen or C _1-6 -alkyl }
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
(3-amino-methylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me -D-Phe-Lys-NH 2,
H-Aib-His-D- 2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH 2,
H-Aib-His-N- Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH 2,
3- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane,
2- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane,
((3R) - piperidine-carbonyl) -N-Me-D-2Nal -N-Me-D-Phe-Lys-NH 2,
3-((3-aminomethylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane,
2- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane,
2-(((3R) -piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane,
2-((3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane,
3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane,
3-((((3R) -piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane,
3-((3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinopropane,
2-((3-aminomethylbenzoyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane, and 2-(((3R) -piperidinecarbonyl)- Compound excluding D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-methyl-2-pyrrolidinyl) ethane. 3-((3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (N, N-dimethylamino) propane and its TFA salt;
3-((((3R) -3-piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (N, N-dimethylamino) propane and its TFA salt;
(4-piperidinecarbonyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH ₂ and its TFA salt;
((3R) -3-piperidinecarbonyl) -D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH ₂ and its TFA salt;
((3R) -3-piperidinecarbonyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH ₂ and its TFA salt;
(3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH ₂ and its TFA salt;
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH ₂ and its TFA salt;
(3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH ₂ ;
H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH ₂ and its TFA salt;
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH ₂ and its TFA salt;
2-((3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1-morpholinoethane;
(3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-Me;
3-((3-methylamino) methylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) -1- (N, N-dimethylamino) propane;
(3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-N-Me ₂ ;
(3-aminomethylbenzoyl) -N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH ₃ and its TFA salt;
3-methylamino-methylbenzoyl -N-Me-D-2Nal- N-Me-D-Phe-NH-CH 3 and its TFA salt; and H-Aib-His-N- Me-D-2Nal-N-Me 2. The compound according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof selected from the group consisting of -D-Phe-NHMe and its hydrochloride.