JP4164645B2 - DGAT inhibitor - Google Patents

Description

【００１０】
〔式中、R¹はフェニル基またはハロゲン置換フェニル基を示し、R²は水素原子、低級アルキル基、カルボキシル基、低級アルコキシカルボニル基、シアノ基、低級アルキルカルバモイル基、N,N-ジ低級アルキルカルバモイル基またはピロリジノカルボニル基を示し、R³は低級アルキル基を示す。〕
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明DGAT阻害剤の有効成分であるホスホン酸ジエステル誘導体を表す前記一般式(1)およびその他の本明細書中に用いられている各基は、具体的にはそれぞれ次の通りである。本明細書において炭素を含む各基につき用いられる「低級」なる語は、「炭素数1-6の」なる意味で用いられるものとする。
【００１２】
ハロゲン置換フェニル基としては、4-クロロフェニル、4-ブロモフェニル、2-クロロフェニル、3-クロロフェニル、3-ブロモフェニル、2-フルオロフェニル、4-フルオロフェニル、4-ヨードフェニル、2,3-ジクロロフェニル、3,4-ジクロロフェニル、2,4-ジクロロフェニル、2,4,6-トリクロロフェニルなどを例示することができる。
【００１３】
ハロゲン原子としては、弗素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を例示することができる。
【００１４】
低級アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ヘキシル基などの炭素数1-6の直鎖または分枝鎖状のアルキル基を例示することができる。
【００１５】
低級アルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、ペンチルオキシカルボニル、ヘキシルオキシカルボニル基などの炭素数1-6の直鎖状または分岐鎖状のアルコキシ基を有するカルボニル基を例示することができる。
【００１６】
低級アルキルカルバモイル基としては、メチルカルバモイル、エチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、イソプロピルカルバモイル、ブチルカルバモイル、イソブチルカルバモイル、tert-ブチルカルバモイル、ペンチルカルバモイル、ヘキシルカルバモイル基などの炭素数1-6の直鎖または分枝鎖状のアルキル基を有するカルバモイル基を例示することができる。
【００１７】
N,N-ジ低級アルキルカルバモイル基としては、N,N-ジメチルカルバモイル、N,N-ジエチルカルバモイル、N,N-ジプロピルカルバモイル、N,N-ジブチルカルバモイル、N,N-ジペンチルカルバモイル、N,N-ジヘキシルカルバモイル基などの炭素数1-6の直鎖または分枝鎖状のアルキル基の2個を有するカルバモイル基を例示することができる。
【００１８】
本発明DGAT阻害剤有効成分化合物として特に好適な一般式(1)で表される誘導体としては、以下の各群に属する化合物を挙げることができる。
(a)：一般式(1)中、R¹がp-ハロゲン置換フェニル基で且つR²が低級アルキル基である化合物
(b)：一般式(1)中、R¹がp-ハロゲン置換フェニル基で且つR²が水素原子である化合物
(c)：一般式(1)中、R¹がp-ハロゲン置換フェニル基で且つR²が低級アルコキシカルボニル基である化合物
尚、上記p-ハロゲン置換フェニル基とは、4-位にハロゲン原子を置換基として有するフェニル基をいう。
【００１９】
一般式(1)で表される本発明有効成分化合物(以下、本発明化合物ということがある)は、新規化合物および公知化合物の両者を包含する。これらの内の一群は、例えば本出願人の先の特許（特許第2787407）に記載の方法に従い、適当なアミン類とカルボン酸ハライド誘導体とを反応させることにより製造することができる。この方法の詳細を反応工程式-1を挙げて以下に説明する。また、他の群に属する本発明化合物は、後記反応工程式-2および-3に示す反応を利用して製造することができる。
【００２０】
【化３】

【００２１】
〔各式中、R¹およびR³は一般式(1)に同じ。R^2'は水素原子、低級アルキル基、低級アルコキシカルボニル基またはシアノ基を示し、Xはハロゲン原子を示す。〕反応工程式-1に示す方法によれば、一部新規化合物を含むアミン類(2)と公知のカルボン酸ハロゲン化物誘導体(3)とを反応させることにより、本発明化合物(1a)を得ることができる。尚、アミン類(2)中に含まれる一部の新規な化合物は、類似の公知化合物の製造法と同様にして製造することができる。その詳細は、後記参考例に詳述する。
【００２２】
反応工程式-1に示すアミン類(2)とカルボン酸ハロゲン化物誘導体(3)との反応は、一般に脱酸剤の存在下に、適当な溶媒中で実施される。ここで脱酸剤としては、反応に悪影響を与えない公知の各種のものをいずれも使用できる。その具体例としては、例えばトリエチルアミン、N,N-ジエチルアニリン、N-メチルモルホリン、ピリジン、4-ジメチルアミノピリジンなどの第三級アミン類を好ましく例示できる。これらは1種単独でまたは2種以上を組み合わせて使用することができる。また溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、石油エーテルなどの芳香族ないし脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、1,2-ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン(THF)、1,4-ジオキサンなどの鎖状ないし環状エーテル類；アセトン、メチルエチルケトン、アセトフェノンなどのケトン類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、1,2-ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類など；及びこれらの組合せを例示できる。上記反応におけるカルボン酸ハロゲン化物誘導体(2)とアミン類(3)との使用割合は、特に限定されないが、通常後者に対して前者を等モル量-過剰量用いるのがよい。また、脱酸剤は、通常カルボン酸ハロゲン化物誘導体(2)に対して等モル-過剰量用いられるのが好適である。反応は、冷却下、室温下および加熱下のいずれでも進行するが、通常室温付近-溶媒の還流温度範囲の温度条件を採用して行われるのがよく、一般に約0.5-24時間程度で終了する。
【００２３】
【化４】

【００２４】
〔各式中、R¹およびR³は一般式(1)に同じ。R⁴は低級アルキル基を示す。〕
反応工程式-2に示す方法によれば、前記反応工程式-1で得られる、R^2'が低級アルコキシカルボニル基であるホスホン酸ジエステル誘導体(1a')をアルカリ加水分解することにより、対応する基としてカルボキシル基を有する本発明化合物(1b)を得ることができる。
【００２５】
上記反応は、一般に塩基の存在下に、適当な溶媒中で実施される。ここで塩基としては、好ましくは、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムなどのアルカリ金属水酸化物を1種単独でまたは2種以上組み合わせて使用できる。溶媒としては、水、ジエチルエーテル、1,2-ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン(THF)、1,4-ジオキサンなどの鎖状ないし環状エーテル類；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類；これらの組合せなどを例示できる。上記反応におけるエステル誘導体(1a')と塩基との使用割合は、特に限定されないが、通常前者に対して後者を等モル-3倍モル量用いるのがよい。反応は、冷却下、室温下および加熱下のいずれでも進行するが、通常氷冷下-室温付近の温度条件を採用して行われるのがよく、一般に約12-24時間程度で終了する。
【００２６】
【化５】

【００２７】
〔各式中、R¹およびR³は一般式(1)に同じ。R⁵およびR⁶は同一または異なって水素原子または低級アルキル基を示すかあるいは両者が結合して基-CH₂CH₂CH₂CH₂-を示す。〕
反応工程式-3に示す方法によれば、本発明化合物(1b)と公知のアミン類(4)とを縮合させることにより、本発明化合物(1c)を得ることができる。上記縮合反応は、一般に縮合剤の存在下に、適当な溶媒中で実施される。縮合剤としては、従来公知の各種のものをいずれも使用できる。その具体例としては、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、N-ヒドロキシコハク酸イミド、ジエチルリン酸シアニド、ジフェニルリン酸アジドなどを例示できる。これらは一種単独で用いることもでき、2種以上を併用することもできる。特に、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミドと1-ヒドロキシベンゾトリアゾールとの併用が有利である。溶媒としては、公知の非プロトン性溶媒をいずれも用い得る。特に好ましい溶媒としては、N,N-ジメチルホルムアミド(DMF)を例示できる。上記反応における本発明化合物(1b)とアミン類(4)との使用割合は、特に限定されないが、通常前者に対して後者を等モル-3倍モル量用いるのがよい。縮合剤は本発明化合物(1b)に対して等モル量-過剰量、好ましくは少過剰量用いるのが望ましい。反応温度としては、氷冷下-室温付近の温度条件を採用でき、通常約12-24時間程度で反応は終了する。
【００２８】
前記各反応工程式に示す反応により得られる目的化合物は、通常の分離、精製手段、例えば、吸着クロマトグラフィー、プレパラティブ薄層クロマトグラフィー、再結晶、溶媒抽出などにより容易に単離、精製できる。
【００２９】
本発明DGAT阻害剤は、一般式(1)で表される化合物とともに、製剤学的に許容される担体を用いて、一般的な医薬組成物の形態に調製されて実用される。
【００３０】
本発明医薬組成物に利用される製剤学的に許容される担体としては、製剤の使用形態に応じて通常使用される希釈剤または賦形剤、例えば充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などを例示できる。これらは調整される医薬製剤の投与単位形態に応じて適宜選択使用される。
【００３１】
医薬製剤の投与単位形態としては、各種の形態が治療目的に応じて適宜選択できる。その代表的なものとしては、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤(液剤、懸濁剤など)、軟膏剤などが挙げられる。
【００３２】
錠剤の形態に成形するに際しては、製剤学的に許容される担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リン酸カリウムなどの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ナミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウムなどの崩壊剤；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリドなどの界面活性剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、デンプンなどの保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベンナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などを使用できる。更に、錠剤は、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠または二重錠、多層錠とすることができる。
【００３３】
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤学的に許容される担体として、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン、カンテンなどの崩壊剤などを使用できる。
【００３４】
坐剤の形態に形成するに際しては、製剤学的に許容される担体として、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを使用できる。
【００３５】
カプセル剤は、常法に従い、通常本発明化合物を上記で例示した各種の製剤学的に許容される担体と混合して、硬質ゼラチンカプセル、軟質ゼラチンカプセルなどの充填して調製される。
【００３６】
液剤、乳剤、懸濁剤などの注射剤として調製される場合、これらは殺菌され且つ血液と等張であるのが好ましい。これらの形態にするに際しては、希釈剤として、例えば、水、エタノール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどを使用できる。尚、この場合、等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖またはグリセリンを医薬製剤中に含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを添加してもよい。
【００３７】
ペースト、クリーム、ゲルなどの軟膏剤の形態に調製するに際しては、希釈剤として、例えば、白色ワセリン、パラフィン、グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベンナイトなどを使用できる。
【００３８】
更に、本発明医薬組成物中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を含有させることもできる。
【００３９】
本発明医薬組成物中に配合される本発明化合物の量は、特に限定されず広範囲より適宜選択される。通常医薬組成物中に、約0.5-90重量％、好ましくは約1-85重量％程度配合されるのがよい。
【００４０】
本発明医薬製剤の投与方法は特に制限がなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じて決定される。例えば、錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤は経口投与され、注射剤は単独でまたはブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内に、或いは筋肉内、皮内、皮下または腹腔内に投与され、坐剤は直腸内投与される。
【００４１】
本発明医薬製剤の投与量は、その用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などにより適宜選択される。通常有効成分である本発明化合物の量が1日成人1人当たり体重1kg当たり約0.5-20mg程度、好ましくは1-10mg程度とするのがよい。該製剤は1日に1回または2-4回に分けて投与することができる。
【００４２】
【実施例】
以下、本発明を更に詳しく説明するため、本発明化合物の製造例を参考例として挙げ、次いで本発明化合物につき行われた薬理試験例および本発明化合物を有効成分とする医薬の製剤例を挙げる。
【００４３】
【参考例１】
ジイソプロピル 4-[(4-(4-フルオロフェニル)-5-メチルチアゾール-2-イル)カルバモイル]ベンジルホスホナートの製造
(1) 2-アミノ-4-(4-フルオロフェニル)-5-メチルチアゾールの製造
4-フルオロプロピオフェノン179gと塩化アルミニウム(III)1gとをクロロホルム1000mLに溶解させ、氷冷撹拌下にこの混合物中に臭素197gをゆっくりと滴下した。氷冷下で1時間撹拌後、反応混合物を氷水500mL中に注ぎ込んだ。クロロホルム層を分液し、飽和重曹水500mLおよび飽和食塩水500mLで順次洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒を減圧留去して、4'-フルオロ-2-ブロモプロピオフェノンを得た。このものを精製することなく、エタノール600mLとチオ尿素86gを加え、70℃で12時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、得られた反応混合物中に酢酸エチル1000mLと2N水酸化ナトリウム水溶液800mLを加えて分液した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウム上で乾燥し減圧下に溶媒を留去し、得られた粗結晶を酢酸エチル-n-ヘキサンより再結晶して、表1に示す化合物番号1の化合物の製造のための原料である標記化合物172gを得た。
【００４４】
同様にして、表1に示す化合物番号2-11の各化合物の製造原料であるアミン類を製造した。
(2) ジイソプロピル 4-[(4-(4-フルオロフェニル)-5-メチルチアゾール-2-イル)カルバモイル]ベンジルホスホナートの製造
4-[(ジイソプロポキシホスホリル)メチル]ベンゾイル クロリド111.6gの塩化メチレン350mL溶液を氷冷撹拌し、このものに、上記(1)で得た2-アミノ-4-(4-フルオロフェニル)-5-メチルチアゾール72.9gのピリジン溶液400mLをゆっくりと滴下した。混合物を室温で12時間撹拌後、これに水500mLを加え、減圧下に塩化メチレンを留去した。得られた粗結晶をエタノール-水より再結晶して、標記化合物の無色結晶146gを得た。得られた化合物の構造および物性を表1に「化合物番号1」として示す。
【００４５】
【参考例２−１１】
参考例1の(1)と同様にして得た原料アミン類を用いて、参考例1の(2)と同様にして、表1-2に化合物番号2-11として示す各化合物を製造した。得られた化合物の構造および物性を表1-2に並記する。
【００４６】
【参考例１２】
ジイソプロピル 4-[(5-カルボキシ-4-フェニルチアゾール-2-イル)カルバモイル]ベンジルホスホナートの製造
参考例10で製造したエステル(化合物番号10)3.2gをエタノール25mLに溶解させ、氷冷撹拌下、このものに2N水酸化ナトリウム水溶液6mLをゆっくりと滴下した。混合物を室温で12時間撹拌後、これに10％塩酸水溶液を加えてｐＨを2とし、析出した結晶を濾取して、標記化合物の無色結晶2.0gを得た。得られた化合物の構造および物性を表2に「化合物番号12」として示す。
【００４７】
【参考例１３】
ジイソプロピル 4-[(5-ブチルカルバモイル-4-フェニルチアゾール-2-イル)カルバモイル]ベンジルホスホナートの製造
参考例12で製造したカルボン酸(化合物番号12)2.0g、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミドの塩酸塩1.3gおよび1-ヒドロキシベンゾトリアゾール0.54gをDMF 10mLに懸濁させ、室温で1時間撹拌した。続いて、ブチルアミン0.59gを加えて更に室温で20時間撹拌した。
【００４８】
反応混合物に水を加えて析出した結晶を濾取し、得られた粗結晶を酢酸エチル-n-ヘキサン再結晶して、標記化合物の無色結晶1.0gを得た。得られた化合物の構造および物性を表2に「化合物番号13」として示す。
【００４９】
【参考例１４−１８】
参考例13と同様にして、表2に化合物番号14-18として示す各化合物を得た。得られた化合物の構造および物性を表2に併記する。
【００５０】
尚、表中、略号による基の表示は次のことを示す。
Me:メチル基、Et:エチル基、i-Pr:イソプロピル基
【００５１】
【表１】

【００５２】
【表２】

【００５３】
尚、表中、参考例12の物性におけるNMR(1)は、次の通りである。
NMR(1):(δ：ppm, DMSO-d₆, 内部標準=TMS)
1.14(d, J=6.2Hz, 6H), 1.22(d, J=6.2Hz, 6H), 3.30(d, J=22.0Hz, 2H), 4.48-4.56(m, 2H), 7.45(m, 5H), 7.75(m, 2H), 8.08(d, J=7.9Hz, 2H), 13.02(brs, 1H)
以下、上記参考例1-18で得た各化合物(表1および2参照、参考例に対応させて化合物番号1-18という)および下記表3に記載の各化合物を被験物質として、それらのDGAT阻害活性を試験した例を挙げる。
【００５４】
【表３】

【００５５】
【薬理試験例１】
ラットDGAT阻害作用試験
(1) 試薬
DGAT酵素活性の測定には、以下の試薬を用いた。
・ホモゲナイゼーションバッファー：10mM HEPES(pH7.4), 250mMシュークロースおよび1mM EDTAを含む
・アッセイバッファー：150mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.0), 6mg/mL BSA (FFA
不含)および2mM DTTを含む
・DGAT基質液：0.1mM [1-¹⁴C]オレオイル補酵素A ([1-¹⁴C]Oleoyl-coenzyme A, 比活性：4.0Ci/mol)を含むアッセイバッファー
(2) DGAT酵素液の調製
SD系雄性ラット(60頭)より副腎を摘出し、摘出した副腎(ca.4g)にホモゲナイゼーションバッファー20mLを加え、ガラステフロン（登録商標）ホモジナイザーでホモジナイズした。得られたホモジネートを800×gで10分間、4℃下に遠心し、上清を採取した。これを次に10,000×gで10分間、4℃下に遠心し、ペレットを除去した。上清をさらに、105,000×gで60分間、4℃下で遠心し、ペレット(microsomal fraction)を得た。これを20mLのホモゲナイゼーションバッファーで洗浄後、10mLの10mM HEPES(pH7.4)、250mMシュークロースおよび2mM DDTに懸濁させた。この懸濁液の蛋白量を定量した後、-80℃で保存した。使用直前に1 Assay( 200μL)あたり75μg蛋白の濃度になるようにアッセイバッファーを用いて調製して、この調製液をDGAT酵素液とした。
(3) DGAT阻害活性の測定
被験物質は、1×10^-2mol/Lの濃度となるようDMSOで溶解した。
【００５６】
10mLネジ口試験管に被験物質溶液2.5μLをとり、これにDGAT酵素液200μLおよびDGAT酵素基質液50μLを加え、37℃で10分間インキュベーションした。n-ヘキサン4.0mLおよびエタノール1.0mLを加えて反応を停止させた。5分間振盪後、遠心(3000rpm、10分間)し、上層のヘキサン層2mLをガラス試験管に移した。窒素ガス気流下でn-ヘキサンを除去し、得られた脂質抽出物をクロロホルム／メタノール(2:1)100μLで再溶解し、TLCプレートへスポットした。TLCプレートを、n-ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸(73:25:2)で展開し、オートラジオグラフィーによりトリグリセリド画分の¹⁴Cを定量した。
【００５７】
被験物質無添加のコントロールの場合に比べて、被験物質添加時に減少するトリグリセライド量を、パーセント表示したものを、DGAT阻害率として求めた。
(4) 結果
得られた結果を表4に示す。
【００５８】
【表４】

【００５９】
(5) 考察
表4に示される結果より、本発明において有効成分とする一般式(1)に属する各化合物は、いずれもDGAT阻害活性を有することが明らかである。
【００６０】
【薬理試験例２】
ヒト白色脂肪細胞DGAT阻害作用試験
(1)試験方法
ヒト皮下脂肪組織由来白色脂肪培養細胞(24ウエルプレート、Zen-Bio社)を17日間分化させた。18日目に、[1-¹⁴C]oleate-BSA complexおよび終濃度1×10^-5mol/Lの被験物質を加えた培地に交換し、更に18時間CO₂インキュベーター内(5％CO₂、37℃)で培養した。培養後、培地を抜き、細胞をPBS(-)で3回洗浄後、これにn-ヘキサン／イソプロパノール(3:2)混液0.6mlを加えて、室温で30分間放置して抽出を行った。その後、抽出液をガラス試験管へ回収し、n-ヘキサン／イソプロパノール(3:2)混液0.4mlを加え、更に室温で30分間抽出し、抽出液を再度同じガラス試験管に回収した。窒素ガス気流下で溶媒を除去し、得られた脂質抽出物をクロロホルム／メタノール(2:1)100μLで再溶解し、TLCプレートへスポットした。TLCプレートを、n-ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸(73:25:2)で展開し、オートラジオグラフィーによりトリグリセリド画分の¹⁴Cを定量した。
【００６１】
被験物質無添加のコントロールの場合に比べて、被験物質添加時に減少するトリグリセライド量を、パーセント表示したものを、DGAT阻害率として求めた。
(2) 結果
得られた結果を、表5に示す。
【００６２】
【表５】

【００６３】
(3) 考察
表5に示される結果より、本発明において有効成分とする一般式(1)に属する各化合物は、いずれもDGAT阻害活性を有することが明らかである。
【００６４】
【製剤例１】
有効成分として、参考例1で得た本発明化合物を用いて、1錠当りその300mgを含有する錠剤(2000錠)を、次の処方により調製した。
参考例1で得た本発明化合物 600g
乳糖(日本薬局方品) 67g
コーンスターチ(日本薬局方品) 33g
カルボキシメチルセルロースカルシウム(日本薬局方品) 25g
メチルセルロース(日本薬局方品) 12g
ステアリン酸マグネシウム(日本薬局方品) 3g
即ち、上記処方に従い、参考例1で得た本発明化合物、乳糖、コーンスターチおよびカルボキシメチルセルロースカルシウムを充分混合し、メチルセルロース水溶液を用いて混合物を顆粒化し、24メッシュの篩を通し、これをステアリン酸マグネシウムと混合して、錠剤にプレスして、目的の錠剤を得た。
【００６５】
【製剤例２】
有効成分として、参考例1で得た本発明化合物を用いて、1カプセル当りその200mgを含有する硬質ゼラチンカプセル剤(2000カプセル)を、次の処方により調製した。
参考例1で得た本発明化合物 400g
結晶セルロース(日本薬局方品) 60g
コーンスターチ(日本薬局方品) 34g
タルク(日本薬局方品) 4g
ステアリン酸マグネシウム(日本薬局方品) 2g
即ち、上記処方に従い、各成分を細かく粉末にし、均一な混合物となるように混和した後、所望の寸法を有する経口投与用ゼラチンカプセルに充填して、目的のカプセル剤を得た。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a DGAT inhibitor (diacylglycerol acyltransferase inhibitor) containing a phosphonic acid diester derivative.
[0002]
[Prior art]
DGAT is an enzyme (EG 2.3.1.20) that catalyzes the reaction from diacylglyceride to triglyceride, which is the final step in triglyceride synthesis. It plays the role of reconstituting triglycerides from fatty acids derived from them.
[0003]
Recently, in an experiment using DGAT knockout mice (DGAT-deficient mice), it was clarified that the mice show a change in body weight that is almost the same as that of a normal diet, that is, resistance to obesity, even with a high-fat diet. .
[0004]
From this, it is thought that if the function of DGAT can be regulated (suppressed or inhibited), it is possible to improve the pathological conditions such as obesity and diabetes. Currently, research and development of drugs focusing on the function of DGAT None of the studies have been reported on drugs with DGAT inhibitory activity.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a substance having an action of inhibiting the DGAT activity and a DGAT inhibitor containing the substance as an active ingredient.
[0006]
In the course of continuing intensive research and development of active ingredient compounds that can be used in the pharmaceutical field, the present applicant has previously developed a series of novel phosphonic acid diester derivatives having lipid lowering action, cataract prevention and treatment action, hypoglycemic action, etc. (Patent 2787407).
[0007]
As a result of subsequent studies, the present applicant found that a compound having a DGAT inhibitory activity corresponding to the purpose exists in the phosphonic acid diester derivative and succeeded in synthesizing a derivative having a DGAT inhibitory activity. The present invention has been completed.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The present invention provides a DGAT inhibitor comprising a phosphonic acid diester derivative represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
General formula (1):
[0009]
[Chemical 2]

[0010]
[Wherein, R ¹ represents a phenyl group or a halogen-substituted phenyl group, and R ² represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a carboxyl group, a lower alkoxycarbonyl group, a cyano group, a lower alkylcarbamoyl group, an N, N-dilower alkyl group. It represents a carbamoyl group or a pyrrolidinocarbonyl group, and R ³ represents a lower alkyl group. ]
[0011]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Specific examples of the above-described general formula (1) and other groups used in the present specification representing the phosphonic acid diester derivative which is an active ingredient of the DGAT inhibitor of the present invention are as follows. In the present specification, the term “lower” used for each group containing carbon shall be used to mean “having 1-6 carbon atoms”.
[0012]
Examples of the halogen-substituted phenyl group include 4-chlorophenyl, 4-bromophenyl, 2-chlorophenyl, 3-chlorophenyl, 3-bromophenyl, 2-fluorophenyl, 4-fluorophenyl, 4-iodophenyl, 2,3-dichlorophenyl, Examples include 3,4-dichlorophenyl, 2,4-dichlorophenyl, 2,4,6-trichlorophenyl and the like.
[0013]
Examples of the halogen atom include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.
[0014]
Examples of the lower alkyl group include linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl, and hexyl groups. .
[0015]
The lower alkoxycarbonyl group is a straight chain having 1-6 carbon atoms such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl, butoxycarbonyl, isobutoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, pentyloxycarbonyl, hexyloxycarbonyl group, etc. Examples thereof include a carbonyl group having a linear or branched alkoxy group.
[0016]
Examples of the lower alkylcarbamoyl group include straight chain or branched chain having 1 to 6 carbon atoms such as methylcarbamoyl, ethylcarbamoyl, propylcarbamoyl, isopropylcarbamoyl, butylcarbamoyl, isobutylcarbamoyl, tert-butylcarbamoyl, pentylcarbamoyl, hexylcarbamoyl group An example is a carbamoyl group having an alkyl group having a shape.
[0017]
N, N-di-lower alkylcarbamoyl groups include N, N-dimethylcarbamoyl, N, N-diethylcarbamoyl, N, N-dipropylcarbamoyl, N, N-dibutylcarbamoyl, N, N-dipentylcarbamoyl, N, Examples thereof include a carbamoyl group having two straight-chain or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms such as an N-dihexylcarbamoyl group.
[0018]
Examples of the derivative represented by the general formula (1) that are particularly suitable as the DGAT inhibitor active ingredient compound of the present invention include compounds belonging to the following groups.
(a): a compound in which R ¹ is a p-halogen-substituted phenyl group and R ² is a lower alkyl group in the general formula (1)
(b): a compound in which R ¹ is a p-halogen-substituted phenyl group and R ² is a hydrogen atom in the general formula (1)
(c): a compound in which R ¹ is a p-halogen-substituted phenyl group and R ² is a lower alkoxycarbonyl group in the general formula (1), wherein the p-halogen-substituted phenyl group is a halogen atom at the 4-position As a substituent.
[0019]
The active ingredient compound of the present invention represented by the general formula (1) (hereinafter sometimes referred to as the present compound) includes both novel compounds and known compounds. One group of these can be produced by reacting an appropriate amine with a carboxylic acid halide derivative, for example, according to the method described in the applicant's earlier patent (Patent No. 2787407). Details of this method will be described below with reference to reaction process formula-1. In addition, the compounds of the present invention belonging to other groups can be produced by utilizing the reactions shown in the following reaction process formulas 2 and -3.
[0020]
[Chemical 3]

[0021]
[In each formula, R ¹ and R ³ are the same as those in the general formula (1). R ^{2 ′} represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkoxycarbonyl group or a cyano group, and X represents a halogen atom. According to the method shown in the reaction process formula-1, the compound (1a) of the present invention is obtained by reacting an amine (2) partially containing a novel compound with a known carboxylic acid halide derivative (3). be able to. Some of the novel compounds contained in the amines (2) can be produced in the same manner as in the production of similar known compounds. Details thereof will be described later in Reference Examples.
[0022]
The reaction of the amine (2) and the carboxylic acid halide derivative (3) shown in the reaction process formula-1 is generally carried out in a suitable solvent in the presence of a deoxidizing agent. Here, as the deoxidizer, any known various agents that do not adversely affect the reaction can be used. Specific examples thereof include tertiary amines such as triethylamine, N, N-diethylaniline, N-methylmorpholine, pyridine and 4-dimethylaminopyridine. These can be used alone or in combination of two or more. Solvents include aromatic or aliphatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene and petroleum ether; chain or cyclic such as diethyl ether, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran (THF), and 1,4-dioxane. Examples include ethers; ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, and acetophenone; halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, chloroform, carbon tetrachloride, and 1,2-dichloroethane; and combinations thereof. The ratio of the carboxylic acid halide derivative (2) and the amines (3) used in the above reaction is not particularly limited, but it is usually preferable to use the former in an equimolar amount-excess amount with respect to the latter. The deoxidizer is preferably used in an equimolar excess with respect to the carboxylic acid halide derivative (2). The reaction proceeds under cooling, at room temperature, or under heating, but is usually carried out using a temperature condition in the vicinity of room temperature-the reflux temperature range of the solvent, and is generally completed in about 0.5-24 hours. .
[0023]
[Formula 4]

[0024]
[In each formula, R ¹ and R ³ are the same as those in the general formula (1). R ⁴ represents a lower alkyl group. ]
According to the method shown in Reaction Scheme 2, the corresponding phosphonic acid diester derivative (1a ′) obtained in Reaction Scheme 1 wherein R ^{2 ′} is a lower alkoxycarbonyl group is subjected to alkaline hydrolysis. The compound (1b) of the present invention having a carboxyl group as a group can be obtained.
[0025]
The above reaction is generally carried out in a suitable solvent in the presence of a base. Here, as the base, preferably, alkali metal hydroxides such as potassium hydroxide and sodium hydroxide can be used singly or in combination of two or more. Examples of solvents include linear or cyclic ethers such as water, diethyl ether, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran (THF), and 1,4-dioxane; alcohols such as methanol, ethanol, propanol, and butanol; combinations thereof Etc. can be illustrated. The ratio of the ester derivative (1a ′) and the base used in the above reaction is not particularly limited, but it is usually preferable to use the latter in an equimolar to 3-fold molar amount relative to the former. Although the reaction proceeds under cooling, at room temperature, or under heating, it is usually carried out by employing a temperature condition of about ice-cooling-room temperature, and is generally completed in about 12-24 hours.
[0026]
[Chemical formula 5]

[0027]
[In each formula, R ¹ and R ³ are the same as those in the general formula (1). R ⁵ and R ⁶ are the same or different and each represents a hydrogen atom or a lower alkyl group, or both are bonded to each other to represent a group —CH ₂ CH ₂ CH ₂ CH ₂ —. ]
According to the method shown in Reaction Scheme-3, the compound (1c) of the present invention can be obtained by condensing the compound (1b) of the present invention with a known amine (4). The above condensation reaction is generally carried out in a suitable solvent in the presence of a condensing agent. Any of various conventionally known condensing agents can be used. Specific examples thereof include N, N′-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide, 1-hydroxybenzotriazole, N-hydroxysuccinimide, diethyl phosphate cyanide, Examples thereof include diphenyl phosphate azide. These can be used alone or in combination of two or more. In particular, the combined use of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide and 1-hydroxybenzotriazole is advantageous. Any known aprotic solvent can be used as the solvent. A particularly preferred solvent is N, N-dimethylformamide (DMF). The proportion of the compound of the present invention (1b) and amines (4) used in the above reaction is not particularly limited, but it is usually preferable to use the latter in an equimolar to 3-fold molar amount relative to the former. The condensing agent is desirably used in an equimolar amount-excess amount, preferably a small excess amount, relative to the compound (1b) of the present invention. As the reaction temperature, a temperature condition near ice-cooled to room temperature can be adopted, and the reaction is usually completed in about 12-24 hours.
[0028]
The target compound obtained by the reaction shown in each of the above reaction process formulas can be easily isolated and purified by ordinary separation and purification means such as adsorption chromatography, preparative thin layer chromatography, recrystallization, solvent extraction and the like.
[0029]
The DGAT inhibitor of the present invention is practically prepared in the form of a general pharmaceutical composition using a pharmaceutically acceptable carrier together with the compound represented by the general formula (1).
[0030]
Examples of the pharmaceutically acceptable carrier used in the pharmaceutical composition of the present invention include diluents or excipients that are usually used depending on the form of use of the preparation, such as fillers, extenders, binders, and humidifiers. Examples include agents, disintegrants, surfactants, lubricants and the like. These are appropriately selected and used depending on the dosage unit form of the pharmaceutical preparation to be adjusted.
[0031]
As a dosage unit form of the pharmaceutical preparation, various forms can be appropriately selected depending on the purpose of treatment. Typical examples thereof include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, suppositories, injections (solutions, suspensions, etc.), ointments and the like.
[0032]
When formed into a tablet form, pharmaceutically acceptable carriers include, for example, lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, starch, calcium carbonate, kaolin, crystalline cellulose, silicic acid, potassium phosphate and the like. Excipient: Water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution, gelatin solution, carboxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, polyvinylpyrrolidone and other binders; sodium carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium, low substituted hydroxy Disintegrants such as propylcellulose, dried starch, sodium alginate, agar powder, naminaran powder, sodium bicarbonate, calcium carbonate; polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, Surfactants such as sodium rylsulfate and monoglyceride stearate; decay inhibitors such as sucrose, stearin, cocoa butter and hydrogenated oil; absorption promoters such as quaternary ammonium base and sodium lauryl sulfate; moisturizing glycerin and starch Agents: Adsorbents such as starch, lactose, kaolin, bennite, colloidal silicic acid; lubricants such as purified talc, stearate, boric acid powder, polyethylene glycol, etc. can be used. Furthermore, the tablet can be made into a tablet coated with a normal coating as necessary, for example, sugar-coated tablet, gelatin-encapsulated tablet, enteric-coated tablet, film-coated tablet or double tablet, and multilayer tablet.
[0033]
In shaping into a pill form, as a pharmaceutically acceptable carrier, for example, excipients such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, kaolin, talc; gum arabic powder, tragacanth powder, Binders such as gelatin and ethanol; disintegrants such as laminaran and agar can be used.
[0034]
When forming into a suppository form, for example, polyethylene glycol, cacao butter, higher alcohol, higher alcohol esters, gelatin, semi-synthetic glyceride and the like can be used as a pharmaceutically acceptable carrier.
[0035]
Capsules are usually prepared by mixing the compound of the present invention with various pharmaceutically acceptable carriers exemplified above and filling hard gelatin capsules, soft gelatin capsules and the like according to a conventional method.
[0036]
When prepared as injections such as solutions, emulsions, suspensions, etc., these are preferably sterilized and isotonic with blood. In making these forms, for example, water, ethanol, macrogol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester and the like can be used as a diluent. In this case, a sufficient amount of sodium chloride, glucose or glycerin may be included in the pharmaceutical preparation to prepare an isotonic solution, and usual solubilizing agents, buffers, soothing agents, etc. are added. May be.
[0037]
When preparing into the form of an ointment such as a paste, cream, or gel, for example, white petrolatum, paraffin, glycerin, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bennite, or the like can be used as a diluent.
[0038]
Furthermore, the pharmaceutical composition of the present invention may contain a coloring agent, a preservative, a fragrance, a flavoring agent, a sweetening agent, and other pharmaceuticals as necessary.
[0039]
The amount of the compound of the present invention to be blended in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited and is appropriately selected from a wide range. Usually, about 0.5 to 90% by weight, preferably about 1 to 85% by weight, is added to the pharmaceutical composition.
[0040]
The administration method of the pharmaceutical preparation of the present invention is not particularly limited, and is determined according to various preparation forms, patient age, sex and other conditions, the degree of disease, and the like. For example, tablets, pills, solutions, suspensions, emulsions, granules and capsules are administered orally, and injections are administered alone or mixed with normal fluids such as glucose and amino acids intravenously or intramuscularly. Administered intradermally, subcutaneously or intraperitoneally, and suppositories administered intrarectally.
[0041]
The dosage of the pharmaceutical preparation of the present invention is appropriately selected depending on its usage, patient age, sex and other conditions, disease severity, and the like. The amount of the compound of the present invention, which is usually an active ingredient, is about 0.5-20 mg / kg body weight per adult per day, preferably about 1-10 mg. The preparation can be administered once or divided into 2-4 times a day.
[0042]
【Example】
Hereinafter, in order to describe the present invention in more detail, production examples of the compound of the present invention are given as reference examples, followed by examples of pharmacological tests conducted on the compound of the present invention and pharmaceutical preparations containing the compound of the present invention as an active ingredient.
[0043]
[Reference Example 1]
Preparation of diisopropyl 4-[(4- (4-fluorophenyl) -5-methylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate
(1) Production of 2-amino-4- (4-fluorophenyl) -5-methylthiazole
179 g of 4-fluoropropiophenone and 1 g of aluminum (III) chloride were dissolved in 1000 mL of chloroform, and 197 g of bromine was slowly added dropwise to this mixture with stirring under ice cooling. After stirring for 1 hour under ice cooling, the reaction mixture was poured into 500 mL of ice water. The chloroform layer was separated, washed sequentially with 500 mL of saturated aqueous sodium bicarbonate and 500 mL of saturated brine, and then dried over magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure to obtain 4′-fluoro-2-bromopropiophenone. Without purifying this product, 600 mL of ethanol and 86 g of thiourea were added and stirred at 70 ° C. for 12 hours. After distilling off the solvent under reduced pressure, 1000 mL of ethyl acetate and 800 mL of 2N aqueous sodium hydroxide solution were added to the obtained reaction mixture for liquid separation. The ethyl acetate layer was dried over magnesium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting crude crystals were recrystallized from ethyl acetate-n-hexane to produce the compound No. 1 shown in Table 1. 172 g of the title compound was obtained.
[0044]
In the same manner, amines that are production raw materials for the compounds of Compound No. 2-11 shown in Table 1 were produced.
(2) Preparation of diisopropyl 4-[(4- (4-fluorophenyl) -5-methylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate
A solution of 111.6 g of 4-[(diisopropoxyphosphoryl) methyl] benzoyl chloride in 350 mL of methylene chloride was stirred on ice, and this was added to 2-amino-4- (4-fluorophenyl)- 400 mL of a pyridine solution containing 72.9 g of 5-methylthiazole was slowly added dropwise. After stirring the mixture at room temperature for 12 hours, 500 mL of water was added thereto, and methylene chloride was distilled off under reduced pressure. The obtained crude crystals were recrystallized from ethanol-water to obtain 146 g of colorless crystals of the title compound. The structure and physical properties of the resulting compound are shown as “Compound No. 1” in Table 1.
[0045]
[Reference Example 2-11]
Using the starting amines obtained in the same manner as in Reference Example 1 (1), in the same manner as in Reference Example 1 (2), each compound shown as Compound No. 2-11 in Table 1-2 was produced. The structure and physical properties of the obtained compound are listed in Table 1-2.
[0046]
[Reference Example 12]
Preparation of diisopropyl 4-[(5-carboxy-4-phenylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate 3.2 g of the ester (Compound No. 10) prepared in Reference Example 10 was dissolved in 25 mL of ethanol and stirred with ice cooling. Then, 6 mL of a 2N sodium hydroxide aqueous solution was slowly added dropwise to this. The mixture was stirred at room temperature for 12 hours, 10% aqueous hydrochloric acid solution was added to adjust the pH to 2, and the precipitated crystals were collected by filtration to give 2.0 g of the title compound as colorless crystals. The structure and physical properties of the resulting compound are shown in Table 2 as “Compound No. 12”.
[0047]
[Reference Example 13]
Preparation of diisopropyl 4-[(5-butylcarbamoyl-4-phenylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate 2.0 g of carboxylic acid (Compound No. 12) prepared in Reference Example 12, 1- (3-dimethylaminopropyl ) -3-Ethylcarbodiimide hydrochloride 1.3 g and 1-hydroxybenzotriazole 0.54 g were suspended in 10 mL of DMF and stirred at room temperature for 1 hour. Subsequently, 0.59 g of butylamine was added and the mixture was further stirred at room temperature for 20 hours.
[0048]
Water was added to the reaction mixture, and the precipitated crystals were collected by filtration. The resulting crude crystals were recrystallized from ethyl acetate-n-hexane to obtain 1.0 g of the title compound as colorless crystals. The structure and physical properties of the resulting compound are shown in Table 2 as “Compound No. 13”.
[0049]
[Reference Examples 14-18]
In the same manner as in Reference Example 13, each compound shown as Compound No. 14-18 in Table 2 was obtained. The structure and physical properties of the obtained compound are also shown in Table 2.
[0050]
In the table, the display of groups by abbreviations indicates the following.
Me: methyl group, Et: ethyl group, i-Pr: isopropyl group
[Table 1]

[0052]
[Table 2]

[0053]
In the table, NMR (1) in the physical properties of Reference Example 12 is as follows.
NMR (1): (δ: ppm, DMSO-d ₆ , internal standard = TMS)
1.14 (d, J = 6.2Hz, 6H), 1.22 (d, J = 6.2Hz, 6H), 3.30 (d, J = 22.0Hz, 2H), 4.48-4.56 (m, 2H), 7.45 (m, 5H ), 7.75 (m, 2H), 8.08 (d, J = 7.9Hz, 2H), 13.02 (brs, 1H)
Hereinafter, each compound obtained in the above Reference Example 1-18 (see Tables 1 and 2, referred to as Compound No. 1-18 corresponding to the Reference Example) and each compound described in Table 3 below as test substances, their DGAT An example in which the inhibitory activity was tested will be given.
[0054]
[Table 3]

[0055]
[Pharmacological Test Example 1]
Rat DGAT inhibition test
(1) Reagent
The following reagents were used for the measurement of DGAT enzyme activity.
-Homogenization buffer: 10mM HEPES (pH7.4), 250mM sucrose and 1mM EDTA included-Assay buffer: 150mM potassium phosphate buffer (pH7.0), 6mg / mL BSA (FFA
(Not including) and 2 mM DTT ・ DGAT substrate solution: Assay buffer containing 0.1 mM [1- ¹⁴ C] oleoyl coenzyme A ([1- ¹⁴ C] Oleoyl-coenzyme A, specific activity: 4.0 Ci / mol)
(2) Preparation of DGAT enzyme solution
The adrenal glands were extracted from SD male rats (60 rats), 20 mL of homogenization buffer was added to the excised adrenal glands (ca. 4 g), and homogenized with a glass Teflon (registered trademark) homogenizer. The obtained homogenate was centrifuged at 800 × g for 10 minutes at 4 ° C., and the supernatant was collected. This was then centrifuged at 10,000 × g for 10 minutes at 4 ° C. to remove the pellet. The supernatant was further centrifuged at 105,000 × g for 60 minutes at 4 ° C. to obtain a microsomal fraction. This was washed with 20 mL of homogenization buffer, and then suspended in 10 mL of 10 mM HEPES (pH 7.4), 250 mM sucrose and 2 mM DDT. After quantifying the protein content of this suspension, it was stored at -80 ° C. Immediately before use, an assay buffer was used to prepare a concentration of 75 μg protein per Assay (200 μL), and this prepared solution was used as a DGAT enzyme solution.
(3) Measurement of DGAT inhibitory activity The test substance was dissolved in DMSO to a concentration of 1 × 10 ⁻² mol / L.
[0056]
A test substance solution (2.5 μL) was placed in a 10 mL screw-cap test tube, to which DGAT enzyme solution (200 μL) and DGAT enzyme substrate solution (50 μL) were added, and incubated at 37 ° C. for 10 minutes. The reaction was stopped by adding 4.0 mL of n-hexane and 1.0 mL of ethanol. After shaking for 5 minutes, the mixture was centrifuged (3000 rpm, 10 minutes), and 2 mL of the upper hexane layer was transferred to a glass test tube. N-hexane was removed under a nitrogen gas stream, and the obtained lipid extract was redissolved with 100 μL of chloroform / methanol (2: 1) and spotted on a TLC plate. The TLC plate was developed with n-hexane / diethyl ether / acetic acid (73: 25: 2), and ¹⁴ C of the triglyceride fraction was quantified by autoradiography.
[0057]
The percentage of triglyceride decreased when the test substance was added compared to the control without the test substance was expressed as a percentage, and the DGAT inhibition rate was determined.
(4) Results Table 4 shows the results obtained.
[0058]
[Table 4]

[0059]
(5) Discussion From the results shown in Table 4, it is clear that each compound belonging to the general formula (1) as an active ingredient in the present invention has DGAT inhibitory activity.
[0060]
[Pharmacological test example 2]
Human white adipocyte DGAT inhibition test
(1) Test Method Human subcutaneous adipose tissue-derived white fat cultured cells (24-well plate, Zen-Bio) were differentiated for 17 days. On day ^{18, [1- 14 C] oleate-} BSA complex and a final concentration of 1 × 10 ^-5 was replaced with medium plus test substance mol / L, further 18 hours in a CO ₂ incubator (5% CO _2, 37 ° C.). After culturing, the medium was removed, and the cells were washed 3 times with PBS (−). To this, 0.6 ml of a mixture of n-hexane / isopropanol (3: 2) was added, and the mixture was left for 30 minutes at room temperature for extraction. Thereafter, the extract was collected in a glass test tube, 0.4 ml of a mixture of n-hexane / isopropanol (3: 2) was added, and further extracted at room temperature for 30 minutes, and the extract was collected again in the same glass test tube. The solvent was removed under a nitrogen gas stream, and the obtained lipid extract was redissolved with 100 μL of chloroform / methanol (2: 1) and spotted on a TLC plate. The TLC plate was developed with n-hexane / diethyl ether / acetic acid (73: 25: 2), and ¹⁴ C of the triglyceride fraction was quantified by autoradiography.
[0061]
The percentage of triglyceride decreased when the test substance was added compared to the control without the test substance was expressed as a percentage, and the DGAT inhibition rate was determined.
(2) Results Table 5 shows the results obtained.
[0062]
[Table 5]

[0063]
(3) Discussion From the results shown in Table 5, it is clear that each compound belonging to the general formula (1) as an active ingredient in the present invention has DGAT inhibitory activity.
[0064]
[Formulation Example 1]
Using the compound of the present invention obtained in Reference Example 1 as an active ingredient, tablets (2000 tablets) containing 300 mg per tablet were prepared according to the following formulation.
600 g of the compound of the present invention obtained in Reference Example 1
Lactose (Japanese Pharmacopoeia) 67g
Corn starch (Japanese Pharmacopoeia) 33g
Carboxymethylcellulose calcium (Japanese Pharmacopoeia) 25g
Methylcellulose (Japanese Pharmacopoeia) 12g
Magnesium stearate (Japanese Pharmacopoeia) 3g
That is, according to the above formulation, the compound of the present invention obtained in Reference Example 1, lactose, corn starch and carboxymethylcellulose calcium were mixed thoroughly, the mixture was granulated using an aqueous solution of methylcellulose, passed through a 24-mesh sieve, and this was passed through magnesium stearate. And pressed into tablets to obtain the desired tablets.
[0065]
[Formulation Example 2]
Using the compound of the present invention obtained in Reference Example 1 as an active ingredient, hard gelatin capsules (2000 capsules) containing 200 mg per capsule were prepared according to the following formulation.
400 g of the compound of the present invention obtained in Reference Example 1
Crystalline cellulose (Japanese Pharmacopoeia) 60g
Corn starch (Japanese Pharmacopoeia) 34g
Talc (Japanese Pharmacopoeia) 4g
Magnesium stearate (Japanese Pharmacopoeia) 2g
That is, according to the above formulation, each component was finely powdered and mixed to form a uniform mixture, which was then filled into a gelatin capsule for oral administration having a desired size to obtain the desired capsule.

Claims (2)

General formula (1):

[Wherein, R ¹ represents a phenyl group or a halogen-substituted phenyl group, and R ² represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a carboxyl group, a lower alkoxycarbonyl group, a cyano group, a lower alkylcarbamoyl group, an N, N-dilower alkyl group. A carbamoyl group or a pyrrolidinocarbonyl group, and R ³ represents a lower alkyl group; ]
The diacylglyceride acyltransferase (DGAT) inhibitor characterized by containing the phosphonic acid diester derivative represented by these as an active ingredient. The DGAT inhibitor according to claim 1, comprising as an active ingredient a compound of the general formula (1) wherein R ¹ is a p-halogen-substituted phenyl group and R ² is a hydrogen atom or a lower alkyl group.