JP4136355B2 - Method for producing camptothecin - Google Patents

Description

【０００４】
カンプトテシンは、抗腫瘍活性、すなわちＤＮＡ関連酵素阻害メカニズム（ＤＮＡトポイソメラーゼのＩ型を阻害するメカニズム）を有する事が発見され、新制癌剤への応用の期待が高まった。しかしながら、カンプトテシンは、高い骨髄抑制という毒性を有していた。
その後、カンプトテシンは化学修飾が加えられ、毒性が低減された。1994年1月には、カンプトテシン誘導体である下記式２で表されるＣＰＴ−１１（塩酸イリノテカン）が臨床試験を経て旧厚生省より認可を受けた。このようにして、カンプトテシン誘導体は日本で医薬品として認められることとなった。
【０００５】
【化２】

【０００６】
癌治療に有用な塩酸イリノテカンの原料となるカンプトテシンは、世界の亜熱帯圏に広く分布する数種類の植物に含まれており、これら植物原料から抽出することにより製造されている。又、カンプトテシンは、化学合成によっても製造されている（例えば、米国特許４，８９４，４５６号等）。
【０００７】
カンプトテシンを喜樹類等の植物原料から製造する場合、植物原料からカンプトテシンを抽出し、できるだけ純度の高いカンプトテシンを収率良く得る必要がある。しかしながら、喜樹類の成木の幹部分におけるカンプトテシンの含有量は、カンプトテシンを含有する他の植物であるクサミズキの成木の幹部分の場合と比べた場合、明かに低い。
従来、カンプトテシン抽出用に伐採された植物原料は殆どがクサミズキの成木の幹部分であり、そこに含まれる樹脂等の不純物の量は少なかった。近年、環境保全の観点から、植物原料の栽培も行われるようになり、若年木も抽出に供されるようになってきた。若年の植物原料は皮部分が厚く、葉緑素を多く含むとともに、樹脂が多量に含まれる。
一方、喜樹の実または幼葉はカンプトテシンの含有量が高く、これを原料とすれば、クサミズキと同程度の収量が期待できる。しかしながら、喜樹の実は、クサミズキの成木の幹部分と比べると樹脂分が多く、喜樹の葉は葉緑素を多く含む。したがって、このような植物原料を用いてカンプトテシンを抽出した場合、葉緑素や樹脂が不純物として混入する割合が多くなり、これらをカンプトテシンから取り除くのが困難であり、その結果、クサミズキの成木の幹部分を用いて抽出した場合と同程度のカンプトテシンの純度及び収量を達成することが難しいという問題があった。
【０００８】
カンプトテシンを植物原料から抽出する方法としては、カンプトテシンを含有する植物（例えば、クサミズキなど）からメタノール等の水溶性溶媒を用いて抽出する方法や、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【０００９】
さらに、カンプトテシンは、一般の有機溶媒にとけにくい性質を有するためカンプトテシンをジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤に溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
例えば、喜樹の実からメタノールを用いてカンプトテシンを抽出した場合、一定のカンプトテシン濃度をもった抽出液を得ることができる。しかしながら、メタノールを用いた抽出工程だけでは高純度のカンプトテシンを単離することができないという問題があった。
また、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させた場合、カンプトテシンはアルカリ溶液に容易に溶解するが、カンプトテシンのラクトン環が開裂するといった問題があった。
また、ジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤を用いれば、メタノール抽出液のカンプトテシン吸着媒から目的とするカンプトテシンを効率よく抽出する事が可能であるが、葉緑素や樹脂等を同時に溶解し抽出してしまう為、その後の分離精製が困難であるという問題があった。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、以下の発明によって解決される。
すなわち、
（１）カンプトテシンを含む喜樹類からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、抽出されたカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる溶解析出工程と、析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、を含むカンプトテシンの製造方法、
（２）抽出工程において、メタノール又は含水メタノールを用いてカンプトテシンを抽出する（１）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（３）更に、得られたカンプトテシンを再結晶により精製する精製工程を含む（１）又は（２）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（４）第１の非水溶性溶媒がトルエンである（１）から（３）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（５）吸着媒が、セライト又はシリカゲル、又はその混合物である（１）から（４）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（６）更に、活性炭を用いてろ過するろ過工程を含む、（１）から（５）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（７）第２の非水溶性溶媒が、トルエンまたは、メタノールのいずれか又は両方を含む液である（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（８）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、１：９から８：２である（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（９）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、２：８から５：５である（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１０）第１の非水溶性溶媒が、石油系炭化水素である（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１１）第１の非水溶性溶媒が、トルエンである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１２）第２の非水溶性溶媒が、ハロゲン化アルキルである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１３）第２の非水溶性溶媒が、メチレンクロライドである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１４）カンプトテシンを含む喜樹類から非水溶性溶媒を用いてカンプトテシンを抽出する工程を含むカンプトテシンの製造方法、
によって解決される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の実施態様のひとつであるカンプトテシンの製造方法のひとつは、原料を破砕した後、カンプトテシンを含む喜樹類からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、抽出されたカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる溶解析出工程と、析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解、抽出し、これを濃縮して粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、当該工程により得られた粗カンプトテシンを再結晶することにより精製するカンプトテシン精製工程とを含む。
【００１３】
［カンプトテシンの原料］
カンプトテシンの原料としては、例えば、喜樹類(Camptotheca acuminata, Nyssaceae又は、Camptotheca acuminata Decne, Nyssaceae)等のカンプトテシンを含む植物が挙げられるが、カンプトテシンを含むものであれば限定されない。本明細書において、喜樹類には、カンレンボクやキジュのいずれか又はそれらの両方を意味する場合がある。カンプトテシンを抽出する植物原料としては、生育の早い喜樹類が好ましく、更に、元の木を残して収穫可能な喜樹類の実、小枝及び葉の生の状態又は乾燥した状態のいずれかが特に好ましい。
【００１４】
本発明は、カンプトテシンを含む植物原料のうちでも乾燥した喜樹類の実からカンプトテシンを製造する場合に特に好適に用いられる。例えば、本発明は、成長した喜樹が開花した後、形成され成熟した実などは勿論のこと、発芽してから１年程度の幼木の全てからカンプトテシンを抽出するのに好適に用いることができる。成熟した喜樹類の実、又は、喜樹類の幼木の小枝及び葉は、樹脂や葉緑素を比較的多く含んでいるが、このような場合に本発明は特に有効に用いられるのである。
【００１５】
カンプトテシンは、カンプトテシンの塩として製造されてもよい。カンプトテシンの塩としては、カンプトテシンのナトリウム塩、カリウム塩やカンプトテシンのテトラアルキルアンモニウム塩が含まれる（例えば、特許１８８８４０４号）。
【００１６】
原料を伐採し、そのままカンプトテシンを抽出してもよいが、抽出効率を上げるため、原料は細かく破砕されていることが好ましい。
【００１７】
例えば、破砕された原料は、溶液中でカンプトテシンが抽出される。この際に用いられる溶液としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、クメンなどの芳香族炭化水素類、フェノール、ベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチレンクロライドなどのハロゲン化アルキルが挙げられるが、カンプトテシンを溶解するものであれば限定されない。当該溶液としてトルエンやメチレンクロライドなどの非水溶性溶媒を用いてもよい。これらは、単独で用いられてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。これらのうちで、メタノール、トルエン、メチレンクロライドが入手容易であり、しかもカンプトテシンをよく溶解するため好ましい。原料からカンプトテシンを抽出する際は、不純物が比較的多く含まれるため、入手容易かつ安価なメタノールが特に好ましい。
【００１８】
トルエンは、常温において、カンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液に投入することによってカンプトテシンを析出させ、これをセライトに吸着させる働きがある。反対に、メタノールと混合した沸騰状態でのトルエンはカンプトテシンが吸着したセライトからカンプトテシン溶解し分離する働きがある。
トルエンは、常温で単独で使用した場合は、葉緑素及び樹脂を溶解したままカンプトテシンを析出させるためカンプトテシンの分離に好ましく用いられ、メタノールとトルエンの混合溶媒はその沸点においてカンプトテシンを極めて良く溶解するので、カンプトテシンの抽出又は再結晶の溶解に好ましく用いられる。
一方、メチレンクロライドは常温においてもカンプトテシンを溶解するので、トルエンの場合の様に、メチレンクロライドを用いてカンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液からカンプトテシンを析出させることはできない。
【００１９】
表１に、トルエン、キシレン、ヘキサン、メチレンクロライドの樹脂溶解性、それぞれに対するカンプトテシン（ＣＰＴ）溶解度、それぞれのメタノールとの混合能、およびそれぞれの沸点を示す。表１から、メタノール以外の溶液としては、トルエンとメチレンクロライドが好ましいことがわかる。さらに、メチレンクロライドは、樹脂を溶解させずに、カンプトテシンを溶解するという優れた効果を有することがわかる。
【００２０】
【表１】

【００２１】
原料からカンプトテシンを抽出する際の温度としては、抽出に用いられる溶液にもよるが、例えばメタノールを用いた場合は、１０℃から６０℃が好ましく、３０℃から５５℃であれば更に好ましい。その理由は、低温で抽出を行うとカンプトテシンの溶解量がすくなく、高温で行うと、樹脂等のカンプトテシン以外の不純物を多く抽出する。
更に、植物原料に予め水分を持たせることにより、結果的に抽出工程におけるメタノールの含水量が１０から３０容量％の範囲内にあるのが好ましい。
【００２２】
原料からカンプトテシンを抽出した後、これをろ過することが好ましい。ろ液にはカンプトテシンが溶解している。この際、ろ過ケークにもカンプトテシンが残されているので、ろ過ケークから再度カンプトテシンを抽出し、ろ液を集めることも本発明の好ましい実施の態様である。
【００２３】
カンプトテシン抽出液は、液温を高める、減圧するなどして溶媒を蒸発させ、カンプトテシンの濃度を上昇させることが好ましい。カンプトテシンの濃度が高まると、カンプトテシンの微細結晶が析出してくる。同時に葉緑素及び樹脂も析出してくるので、その際に、カンプトテシンは溶解せず、葉緑素及び樹脂を溶解する石油系炭化水素を投入するのが良い。
この目的には、ノルマルヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン等の非水溶性溶媒が使用できるが、沸点、作業環境の問題、更にその後の工程での使用を考えると、トルエンが好ましい。トルエンの投入により、その後、吸着媒を混入することによって、カンプトテシンを吸着媒に選択的に吸着させることが可能となる。
この場合、メチレンクロライド等のハロゲン化アルキルはトルエンと同様に非水溶性溶媒ではあるが、常温でカンプトテシンを溶解するので、カンプトテシンを析出させる溶媒としては必ずしも適さない。
【００２４】
カンプトテシンの抽出液に混入される吸着媒としては、カンプトテシンを選択的に吸着するものが好ましく、例えば、シリカゲル、活性炭、活性白土、ゼオライト、吸着クロマトグラフィー、セライトを好適に用いることができるが、カンプトテシンを吸着することができるものであれば限定されない。これらのなかでも、セライトは特に好ましい吸着媒である。
【００２５】
吸着媒に吸着したカンプトテシンは、吸着媒ごと非水溶性溶媒に入れることにより再び溶液中に溶出する。吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる非水溶性溶媒としては、カンプトテシンを溶出することができる溶液であれば限定されず、先に掲げた溶液を用いることができる。これらの中では、メチレンクロライド、沸騰時のトルエン、及びこれらとメタノールの混合溶液を好適に用いることができる。
【００２６】
［吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液］
特に若い時期に伐採したクサミズキは、樹脂の含有量が多く、メタノールのみを用いてカンプトテシンを抽出した場合、当該樹脂が多く溶解するため、得られるカンプトテシンの純度が低くなる。このため吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる第２の非水溶性溶媒としては、メタノール単独だけではなく、メチレンクロライド及び／又は沸騰時のトルエン並びにこれらとメタノールの混同溶液が好適に用いられるのである。ただし、メチレンクロライドは、いわゆる環境ホルモンとして特定され、その排水中の規制限度値は０．２ｍｇ／Ｌ以下という厳しい規定が設けられている。このため、メチレンクロライドを用いると、特別な廃液処理を施さなくてはならないため必ずしも低コストが実現できない。したがって、沸騰時のトルエン又は沸騰時のトルエンとメタノールの混合溶液が、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として最も好ましい。
【００２７】
トルエンはメタノールと任意の割合で溶解し、トルエン自体又はメタノール自体とは異なった性質を示す。特に、カンプトテシンを溶解する能力はそれぞれ単独の場合と、混合した場合とで顕著に変化する。表２に、２０℃(実線)と７０℃(破線)における、トルエンとメタノールの重量比と溶解するカンプトテシン（ＣＰＴ）の量を示す。
【００２８】
【表２】

【００２９】
表２に示すとおり、カンプトテシンの溶解度はメタノールとトルエンの混合の比率によって、大きく変化するが、メタノールとトルエンの混合液に含まれるメタノールの量は、特に限定されるものではなく、メタノール対トルエンの容積割合としては、１：９から８：２であることが好ましく、２：８から５：５であれば更に好ましく、３：７であれば特に好ましい。メタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合液では、常温（２０℃）と沸騰時（７０℃）とでカンプトテシンの溶解度に、２倍の差がある。例えば、この系の７０℃におけるカンプトテシン溶解度は、メチレンクロライドを用いた場合よりも高い。すなわち、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として、沸騰時のトルエンとメタノールの混合液が特に好ましいことがわかる。
【００３０】
吸着媒に吸着したカンプトテシンをメタノールとトルエンの混合液で溶出させた後は、ろ過を施し、放置冷却や撹拌冷却することによりカンプトテシンを晶析させることが好ましい。ろ液中のメタノールを蒸発させ、ろ液を濃縮した後にカンプトテシンを晶析させることは本発明の好ましい実施の態様である。この場合のメタノール濃縮割合は、メタノール対トルエンの容積割合が１：９程度とすることが好ましい。
このようにして得られた粗カンプトテシンとしては、カンプトテシン含有量が８５重量％以上のものであることが好ましい。カンプトテシン含有量が、８５重量％より少なければ、その後の再結晶による工程で結晶を精製しても好ましいカンプトテシンを製造することが困難になるからである。
【００３１】
［精製（再結晶）工程］
得られた粗カンプトテシンは、例えば再結晶を施すことによって精製されることが好ましい。再結晶に用いられる溶液としては、カンプトテシンを溶解し、温度によってカンプトテシンの溶解量が変化するものであれば限定されない。熱時にはカンプトテシンを良く溶解し、冷時はカンプトテンシンを析出させるが、樹脂や不純物は依然として溶解している溶媒組成が特に好ましい。このような観点から、再結晶に用いられる溶液としては、メタノールとトルエンの混合溶液が好ましい。
【００３２】
粗カンプトテシンに含まれる不純物のうち、樹脂は常温のトルエンで溶解される。しかしながら、カンプトテシン類縁化合物は、常温のトルエンに溶解しにくい。一方、これらカンプトテシン類縁化合物はメタノールとトルエンの混合溶液には溶解する。樹脂やカンプトテシン類縁化合物を除去するためには、樹脂やカンプトテシン類縁化合物を、好ましくはメタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合溶液に、カンプトテシンとともに熱時溶解させた後、ろ過して得たろ過液を濃縮し、メタノールを溜去してカンプトテシンを析出させ分離するが、その際に、ある程度のメタノールが残っており、樹脂及びカンプトテシン類縁化合物が溶液に溶解した状態であることが望ましい。
【００３３】
カンプトテシン類縁化合物はその種類によるが、常温において、カンプトテシンのように限定された割合でのメタノールとトルエンの混合液ではなく、メタノール又はトルエン単独の溶液に近い割合の場合に比較的よく溶解する。したがって、カンプトテシン類縁化合物を除去しつつ、カンプトテシンの回収率を上げるためには、表２からわかるように、カンプトテシン析出時の溶液ができるだけメタノール又はトルエン単独の溶媒に近い状態となっていることが好ましい。メタノール又はトルエンは沸点や溶解する物質の量が異なっているので、これらの混合比を蒸発等で制御することによって、効果的にカンプトテシンを回収することができる。
【００３４】
カンプトテシンを析出する際に含まれるべきメタノールの量は、粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の種類と量に比例すると考えられる。例えば、喜樹類を原料植物とする粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の量がx重量％のときには、カンプトテシン析出終了時のトルエンとメタノール溶液中のトルエンの量としては、ｘ重量％から１０ｘ重量％が好ましく、２ｘ重量％から５x重量％であればより好ましく、２．５x重量％から４x重量％であれば更に好ましい。このように、最終濃縮液に含まれるトルエンの割合を制御することによって、カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の含有量を低下させることができる。
【００３５】
なお、粗カンプトテシンに含まれる他の不純物としては、糖質がある。糖質はトルエンに比較的溶解しにくいため、粗カンプトテシンに糖質が多量に含まれている場合等は、再結晶における粗カンプトテシン溶解時等において、これらの不純物を吸着する吸着媒を再結晶工程の熱時溶解溶液に添加すればよい。このような吸着媒としては、活性炭が好ましい。
【００３６】
再結晶工程及び／又はろ過工程が繰り返し行われることは、本発明の好ましい別の実施態様である。このように再結晶工程及び／又はろ過工程を繰り返すことで、精製されるカンプトテシンの純度が高まりより好ましいカンプトテシン結晶を得ることが可能となる。
【００３７】
【実施例】
以下実施例をあげて本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されない。
【００３８】
【実施例１】
（工程１）
発芽後、１年６ヶ月程度生育した喜樹の枝付きの葉を7日間影干しした原料を２〜３mmφのスクリーンを装着した破砕機で破砕し、得られた水分が１７％の５０Ｋｇの破砕物をステンレス製８００L抽出機に投入し、９９％以上のメタノール５００Ｌを投入し、５０℃に加温しつつ６時間抽出を行った。 得られたメタノール抽出液をろ過し、１次抽出液を分離した。分離後の残さに、新たに９９％以上のメタノールを１００Ｌ投入し２次抽出液を得た。全てのメタノール抽出液を、５０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下で濃縮した。この濃縮液に１Ｋｇのセライトを加え、更に１Ｌのトルエンを投入し、３０分間攪拌したのち、減圧濾過してカンプトテシンが吸着したセライトを分離した。
【００３９】
（工程２）
上記工程１で得られたカンプトテシンが吸着したセライトを、ガラス製コンデンサーを付けた３００Ｌのグラスライニング製加熱攪拌機に予め１００Ｌのメチレンクロライドを投入した中に投入し、攪拌しながら加熱した。１時間後、加圧ろ過し、抽出液からセライトを分離し、得られた抽出液を５０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下で濃縮した後、２０℃にまで冷却し、析出した粗カンプトテシンをろ過し、１Ｌのメチレンクロライドで洗浄した。洗浄した粗カンプトテシンを６時間減圧乾燥し、メチレンクロライドを蒸発させ、カンプトテシン含量８５ %以上の粗カンプトテシンを３１．９ｇを得た。
【００４０】
（工程３）
１０Ｌガラス製の攪拌溶解機にメチレンクロライドとメタノール混合液(容量比４：１)を５Ｌ加え、攪拌しつつ、先に得られた３０ｇの粗カンプトテシンを投入した。この粗カンプトテシン溶解液をセライトを５０ｇを用いてろ過し、不溶物を分離した。得られたろ液を１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下、メチレンクロライドとメタノールを留去して濃縮した後、メタノールを投入して得られた析出物をろ集した。この再結晶工程で得られた結晶をメタノールで洗浄後、再び５Ｌのメチレンクロライドとメタノール混合液(容量比４：１)に攪拌下投入し、溶解・ろ過した液を濃縮し、メタノールの投入を繰り返して濃縮した。析出物をろ集し、メタノールを用いて析出物を洗浄し、減圧乾燥して精製結晶を１８．５ｇ得た。得られた精製結晶の品質はカンプトテシン含量が９８．２ %以上であった。
【００４１】
【実施例２】
（工程１）
１.７５Ｋｇの乾燥した喜樹の実(乾燥減量１１％)を、２〜３mmφのスクリーンを装着した破砕機で破砕し、得られた破砕物をガラス製５０Ｌフラスコに投入し、１.７Ｌの水を散水投入し一時間放置した後、９９％以上のメタノールを１７Ｌ投入し、５０℃に加温しつつ６０分間攪拌し抽出を行った。 得られたメタノール抽出液をろ過し、１次抽出液を分離した。分離後の残さに、新たに９９％以上のメタノールを１Ｌ投入し２次抽出液を得た。全てのメタノール抽出液を、１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下で濃縮した。この濃縮液にトルエン１Ｌ及び１Ｋｇのセライトを加え、30分間攪拌したのち、減圧濾過してカンプトテシンが吸着したセライトを分離した。
【００４２】
（工程２）
実施例２の工程１で得たカンプトテシン吸着セライトをガラス製１０Ｌフラスコに投入し、これに３．５Ｌのトルエンと１．６Ｌのメタノールを投入し、攪拌しつつ加熱した。抽出液をろ紙を引いたろ過器に投入し、加温しつつ減圧ろ過した。 得られたろ液を１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置で濃縮し、濃縮装置内に析出した結晶にメタノール３Ｌを投入して洗浄し、減圧乾燥器で乾燥し、１２０．２ｇの粗カンプトテシンを得た。得られた粗カンプトテシンのカンプトテシン（ＣＰＴ）含有量は、８５重量％以上であった。
【００４３】
（工程３）
実施例２の工程２で得られた１００ｇの粗カンプトテシンと、活性炭２５ｇをガラス製１０Ｌフラスコに投入し、これに３．５Ｌのトルエンと１．６Ｌのメタノールを投入し、攪拌しつつ加熱した。抽出液をろ紙を引いたろ過器に投入し、加温しつつ減圧ろ過した。 得られたろ液を１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置で濃縮した。濃縮装置内に析出した結晶にメタノール１Ｌを投入して洗浄し、減圧乾燥器で乾燥し、８４．９ｇの精製結晶を得た。得られた精製結晶のカンプトテシン（ＣＰＴ）含有量は、９８．５重量％以上であった。また、得られた精製結晶には、不純物であるカンプトテシン類縁化合物は、いずれも０．６重量％以下であり、不純物の少ないカンプトテシンが得られたことがわかる。
【００４４】
【発明の効果】
本発明によれば、喜樹類の実、又は、喜樹類の幼木の小枝及び葉等、樹脂や葉緑素の多い植物原料を用いた場合であっても、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることが可能となる。
【００４５】
本発明によれば、トルエン、メタノール混合溶液を用いてカンプトテシンを抽出した場合は、メチレンクロライドに見られるような環境上の問題もないので、環境保全のための特段の工程を必要とするといった不都合も無く、効果的にカンプトテシンを得ることができる。また、本発明によれば、トルエン、メタノール混合溶液の混合割合を制御することによってカンプトテシン類縁化合物等のカンプトテシン製造時に含まれる不純物を容易に除去することが可能となる。
【００４６】
トルエンを含んだ溶液を用いてカンプトテシンを抽出することで、カンプトテシンを含む植物原料の実又は葉からも効果的にカンプトテシンを得ることが可能となる。
【００４７】
活性炭等の吸着媒を用いてろ過を施すことで、粗カンプトテシンに含まれる糖質を効果的に除去し、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for effectively extracting and purifying camptothecin, which is a raw material for pharmaceuticals useful for the treatment of cancer, from plant raw materials containing the same, and a method for producing camptothecin thereby.
[0002]
[Prior art]
In 1966, Wall et al. Isolated camptothecin represented by the following formula 1 from Yuki [ME Wall, MC Wani, CE Cook, KH Palmer, AT McPhail, and GA Sim, J. Am. Chem. Soc., 94, 388 (1966)]. Subsequently, camptothecin was studied as a pharmacologically effective drug at the National Cancer Institute in the United States.
[0003]
[Chemical 1]

[0004]
Camptothecin was found to have antitumor activity, that is, a DNA-related enzyme inhibition mechanism (mechanism that inhibits type I of DNA topoisomerase), and expectations for application to new anticancer agents increased. However, camptothecin has a high myelosuppressive toxicity.
Subsequently, camptothecin was chemically modified to reduce toxicity. In January 1994, CPT-11 (irinotecan hydrochloride) represented by the following formula 2, which is a camptothecin derivative, was approved by the former Ministry of Health and Welfare through clinical trials. In this way, camptothecin derivatives have been accepted as pharmaceuticals in Japan.
[0005]
[Chemical 2]

[0006]
Camptothecin, which is a raw material for irinotecan hydrochloride useful for cancer treatment, is contained in several kinds of plants widely distributed in the subtropical sphere of the world, and is produced by extraction from these plant raw materials. Camptothecin is also produced by chemical synthesis (for example, US Pat. No. 4,894,456).
[0007]
When camptothecin is produced from plant materials such as cypresses, it is necessary to extract camptothecin from plant materials and obtain camptothecin with the highest possible purity in a good yield. However, the content of camptothecin in the trunk part of the mature tree of the tree is clearly lower when compared with the trunk part of the adult tree of the redwood, which is another plant containing camptothecin.
Conventionally, most plant materials cut down for extraction of camptothecin are mostly trunks of horned wood, and the amount of impurities such as resin contained therein is small. In recent years, plant raw materials have been cultivated from the viewpoint of environmental conservation, and young trees have been used for extraction. Young plant materials have a thick skin, contain a lot of chlorophyll, and contain a large amount of resin.
On the other hand, the fruit or young leaves of Kiki have a high content of camptothecin, and if this is used as a raw material, a yield similar to that of a Japanese cherry can be expected. However, the fruit of Kiki has more resin than the trunk of an adult tree, and the leaves of Kiki contain a lot of chlorophyll. Therefore, when camptothecin is extracted using such plant materials, the proportion of chlorophyll and resin mixed as impurities increases, and it is difficult to remove these from camptothecin. There was a problem that it was difficult to achieve the same purity and yield of camptothecin as in the case of extraction using.
[0008]
As a method of extracting camptothecin from plant raw materials, a method of extracting camptothecin from a plant containing camptothecin (for example, Japanese cypress) using a water-soluble solvent such as methanol, or camptothecin is dissolved in an alkaline solution such as an aqueous sodium hydroxide solution. A method is known (for example, Japanese Patent Publication No. 5-33955).
[0009]
Furthermore, since camptothecin has a property that it is difficult to dissolve in a general organic solvent, a method of dissolving camptothecin in a water-soluble solvent having strong solubility such as dimethyl sulfoxide is known (for example, Japanese Patent Publication No. 5-33955). .
[0010]
[Problems to be solved by the invention]
For example, when camptothecin is extracted from the fruit of Miki using methanol, an extract with a certain camptothecin concentration can be obtained. However, there is a problem that high-purity camptothecin cannot be isolated only by the extraction step using methanol.
Further, when camptothecin is dissolved in an alkaline solution such as an aqueous sodium hydroxide solution, camptothecin is easily dissolved in the alkaline solution, but there is a problem that the lactone ring of camptothecin is cleaved.
Moreover, if a water-soluble solvent such as dimethyl sulfoxide is used, the target camptothecin can be efficiently extracted from the camptothecin adsorbent of the methanol extract, but chlorophyll, resin, etc. are dissolved simultaneously. Since it extracted, there existed a problem that separation and purification after that was difficult.
[0011]
[Means for Solving the Problems]
The above problems are solved by the following invention.
That is,
(1) An extraction process for extracting camptothecin from cypresses containing camptothecin, an adsorption process for adsorbing the extracted camptothecin to an adsorbent, and a resin obtained by adding a first water-insoluble solvent to a liquid obtained by concentrating the extract And a dissolution and precipitation step of dissolving chlorophyll and precipitating camptothecin, an adsorption step of adsorbing the precipitated camptothecin to an adsorbent, and dissolving and extracting the camptothecin adsorbed to the adsorbent using a second water-insoluble solvent, A dissolution extraction step for obtaining crude camptothecin, and a method for producing camptothecin,
(2) In the extraction step, camptothecin is extracted using methanol or hydrous methanol, and the method for producing camptothecin according to (1),
(3) The method for producing camptothecin according to (1) or (2), further comprising a purification step of purifying the obtained camptothecin by recrystallization,
(4) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (3), wherein the first water-insoluble solvent is toluene,
(5) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (4), wherein the adsorbent is celite, silica gel, or a mixture thereof,
(6) Furthermore, the manufacturing method of the camptothecin of any one of (1) to (5) including the filtration process filtered using activated carbon,
(7) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the second water-insoluble solvent is a liquid containing either or both of toluene and methanol,
(8) The method for producing camptothecin according to (7), wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the second water-insoluble solvent is 1: 9 to 8: 2.
(9) The method for producing camptothecin according to (7), wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the second water-insoluble solvent is from 2: 8 to 5: 5,
(10) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the first water-insoluble solvent is a petroleum hydrocarbon,
(11) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the first water-insoluble solvent is toluene,
(12) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the second water-insoluble solvent is an alkyl halide,
(13) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the second water-insoluble solvent is methylene chloride,
(14) A method for producing camptothecin, comprising a step of extracting camptothecin from a citrus tree containing camptothecin using a water-insoluble solvent,
Solved by.
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
One of the production methods of camptothecin which is one of the embodiments of the present invention includes an extraction step of extracting camptothecin from a tree containing camptothecin after crushing the raw material, and an adsorption step of adsorbing the extracted camptothecin to an adsorbent A solution-precipitation step in which a first water-insoluble solvent is added to the liquid obtained by concentrating the extract to dissolve the resin and chlorophyll, and camptothecin is precipitated; an adsorption step in which the precipitated camptothecin is adsorbed on the adsorbent; The camptothecin adsorbed on the solution is dissolved and extracted using a second water-insoluble solvent and concentrated to obtain a crude camptothecin, and purified by recrystallizing the crude camptothecin obtained in this step. A camptothecin purification step.
[0013]
[Raw material of camptothecin]
Examples of the raw material for camptothecin include plants containing camptothecin such as cypress (Camptotheca acuminata, Nyssaceae or Camptotheca acuminata Decne, Nyssaceae), but are not limited as long as they contain camptothecin. In the present specification, “kioki” may mean either or both of kanrenboku and kiju. The plant material from which camptothecin is extracted is preferably a fast-growing joy tree, and further, either the raw state of the berries, twigs and leaves that can be harvested leaving the original tree, or the dried state. Particularly preferred.
[0014]
The present invention is particularly preferably used when camptothecin is produced from dried berries of a plant material including camptothecin. For example, the present invention can be suitably used to extract camptothecin from all young trees about one year after germination, as well as the mature fruits that have formed after the matured trees have flowered. it can. Mature twigs or twigs and leaves of young trees are relatively rich in resin and chlorophyll. In such cases, the present invention can be used particularly effectively.
[0015]
Camptothecin may be produced as a salt of camptothecin. Examples of the salt of camptothecin include sodium salt and potassium salt of camptothecin and tetraalkylammonium salt of camptothecin (for example, Japanese Patent No. 1888404).
[0016]
The raw material may be felled and camptothecin extracted as it is, but the raw material is preferably finely crushed in order to increase extraction efficiency.
[0017]
For example, camptothecin is extracted from a crushed raw material in a solution. Examples of the solution used at this time include alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene, mesitylene and cumene, aromatic alcohols such as phenol and benzyl alcohol, Examples include alkyl halides such as methylene chloride, but are not limited as long as they can dissolve camptothecin. A water-insoluble solvent such as toluene or methylene chloride may be used as the solution. These may be used alone or in combination of two or more. Among these, methanol, toluene, and methylene chloride are preferable because they are easily available and camptothecin is well dissolved. When extracting camptothecin from a raw material, since it contains a relatively large amount of impurities, methanol that is easily available and inexpensive is particularly preferable.
[0018]
Toluene has the function of precipitating camptothecin by adsorbing it to celite by adding it to a concentrated solution of methanol extract containing camptothecin at room temperature. On the other hand, toluene in a boiling state mixed with methanol has a function of dissolving and separating camptothecin from celite adsorbed with camptothecin.
Toluene, when used alone at room temperature, is preferably used for separation of camptothecin to precipitate camptothecin while dissolving chlorophyll and resin, and a mixed solvent of methanol and toluene dissolves camptothecin very well at its boiling point. It is preferably used for extraction of camptothecin or dissolution of recrystallization.
On the other hand, since methylene chloride dissolves camptothecin even at normal temperature, camptothecin cannot be precipitated from a concentrated solution of a methanol extract containing camptothecin using methylene chloride as in the case of toluene.
[0019]
Table 1 shows the resin solubility of toluene, xylene, hexane, and methylene chloride, the solubility of camptothecin (CPT) for each, the mixing ability with each methanol, and the boiling point of each. From Table 1, it can be seen that toluene and methylene chloride are preferable as the solution other than methanol. Further, it can be seen that methylene chloride has an excellent effect of dissolving camptothecin without dissolving the resin.
[0020]
[Table 1]

[0021]
The temperature at which camptothecin is extracted from the raw material depends on the solution used for the extraction. For example, when methanol is used, it is preferably 10 ° C to 60 ° C, more preferably 30 ° C to 55 ° C. The reason is that if extraction is performed at a low temperature, the amount of camptothecin dissolved is small, and if it is performed at a high temperature, many impurities other than camptothecin such as a resin are extracted.
Furthermore, it is preferable that the water content of methanol in the extraction process is within the range of 10 to 30% by volume by giving moisture to the plant material in advance.
[0022]
It is preferable to extract camptothecin from the raw material and then filter it. Camptothecin is dissolved in the filtrate. At this time, since camptothecin remains in the filter cake, it is also a preferred embodiment of the present invention to extract camptothecin from the filter cake again and collect the filtrate.
[0023]
It is preferable to elevate the concentration of camptothecin in the camptothecin extract by evaporating the solvent by increasing the liquid temperature or reducing the pressure. As the concentration of camptothecin increases, camptothecin fine crystals precipitate. At the same time, chlorophyll and resin are also precipitated. At this time, camptothecin is not dissolved, but petroleum hydrocarbons that dissolve chlorophyll and resin are preferably added.
For this purpose, water-insoluble solvents such as normal hexane, cyclohexane, benzene, and toluene can be used, but toluene is preferable in view of problems of boiling point and working environment and further use in subsequent steps. It is possible to selectively adsorb camptothecin to the adsorbent by introducing toluene and then mixing the adsorbent.
In this case, an alkyl halide such as methylene chloride is a water-insoluble solvent like toluene, but dissolves camptothecin at room temperature and is not necessarily suitable as a solvent for precipitating camptothecin.
[0024]
As the adsorbent mixed in the camptothecin extract, those that selectively adsorb camptothecin are preferable. For example, silica gel, activated carbon, activated clay, zeolite, adsorption chromatography, and celite can be suitably used. If it can adsorb | suck, it will not be limited. Of these, celite is a particularly preferred adsorbent.
[0025]
The camptothecin adsorbed on the adsorbent is eluted again in the solution by putting the adsorbent together with the water-insoluble solvent. The water-insoluble solvent used for eluting the camptothecin adsorbed on the adsorbent is not limited as long as it is a solution that can elute camptothecin, and the solutions listed above can be used. Among these, methylene chloride, toluene at the time of boiling, and a mixed solution of these and methanol can be suitably used.
[0026]
[Solution used to elute camptothecin adsorbed on adsorbent]
In particular, the woodpecker cut at a young age has a high resin content, and when camptothecin is extracted using only methanol, the resin is dissolved in a large amount, so that the purity of the obtained camptothecin is low. Therefore, as the second water-insoluble solvent used for eluting camptothecin adsorbed on the adsorbent, not only methanol alone, but also methylene chloride and / or toluene at the time of boiling and a mixed solution of these with methanol are preferable. It is used. However, methylene chloride is specified as a so-called environmental hormone, and there is a strict regulation that the regulation limit value in the waste water is 0.2 mg / L or less. For this reason, when methylene chloride is used, a special waste liquid treatment must be performed, so that low cost cannot always be realized. Accordingly, toluene at the time of boiling or a mixed solution of toluene and methanol at the time of boiling is most preferable as a solution used for eluting camptothecin adsorbed on the adsorbent.
[0027]
Toluene dissolves in an arbitrary ratio with methanol and exhibits properties different from toluene itself or methanol itself. In particular, the ability to dissolve camptothecin varies markedly depending on whether it is alone or mixed. Table 2 shows the weight ratio of toluene and methanol and the amount of dissolved camptothecin (CPT) at 20 ° C. (solid line) and 70 ° C. (dashed line).
[0028]
[Table 2]

[0029]
As shown in Table 2, the solubility of camptothecin varies greatly depending on the mixing ratio of methanol and toluene, but the amount of methanol contained in the mixture of methanol and toluene is not particularly limited, The volume ratio is preferably 1: 9 to 8: 2, more preferably 2: 8 to 5: 5, and particularly preferably 3: 7. In a mixed solution having a volume ratio of methanol to toluene of 3: 7, the solubility of camptothecin is doubled between normal temperature (20 ° C.) and boiling (70 ° C.). For example, the camptothecin solubility of this system at 70 ° C. is higher than when methylene chloride is used. That is, it can be understood that a mixed solution of toluene and methanol at the time of boiling is particularly preferable as a solution used for eluting camptothecin adsorbed on the adsorbent.
[0030]
After eluting the camptothecin adsorbed on the adsorbent with a mixed solution of methanol and toluene, it is preferable to crystallize the camptothecin by performing filtration and cooling by standing or cooling. It is a preferred embodiment of the present invention to crystallize camptothecin after evaporating methanol in the filtrate and concentrating the filtrate. In this case, the methanol concentration ratio is preferably such that the volume ratio of methanol to toluene is about 1: 9.
The crude camptothecin thus obtained preferably has a camptothecin content of 85% by weight or more. This is because if the camptothecin content is less than 85% by weight, it is difficult to produce a preferred camptothecin even if the crystal is purified in the subsequent recrystallization step.
[0031]
[Purification (recrystallization) step]
The obtained crude camptothecin is preferably purified, for example, by recrystallization. The solution used for recrystallization is not limited as long as it dissolves camptothecin and the amount of camptothecin dissolved varies with temperature. A solvent composition in which camptothecin is well dissolved when heated and camptotensin is precipitated when cold, but the resin and impurities are still dissolved is particularly preferred. From such a viewpoint, the solution used for recrystallization is preferably a mixed solution of methanol and toluene.
[0032]
Of the impurities contained in the crude camptothecin, the resin is dissolved in toluene at room temperature. However, camptothecin analogs are difficult to dissolve in normal temperature toluene. On the other hand, these camptothecin analogs are dissolved in a mixed solution of methanol and toluene. In order to remove the resin and the camptothecin-related compound, the resin and the camptothecin-related compound were preferably dissolved in a mixed solution with a volume ratio of methanol to toluene of 3: 7 together with camptothecin, and then filtered. The filtrate is concentrated and methanol is distilled off to precipitate and separate camptothecin. At this time, it is desirable that a certain amount of methanol remains and the resin and the camptothecin analog are dissolved in the solution.
[0033]
Although the camptothecin-related compound depends on its type, it dissolves relatively well at room temperature, not in a mixed solution of methanol and toluene in a limited ratio like camptothecin but in a ratio close to a solution of methanol or toluene alone. Therefore, in order to increase the recovery rate of camptothecin while removing camptothecin-related compounds, it is preferable that the solution at the time of camptothecin precipitation is as close as possible to a solvent of methanol or toluene alone, as can be seen from Table 2. . Since methanol or toluene has different boiling points or different amounts of dissolved substances, camptothecin can be effectively recovered by controlling the mixing ratio by evaporation or the like.
[0034]
The amount of methanol to be included when camptothecin is precipitated is considered to be proportional to the type and amount of camptothecin-related compounds contained in the crude camptothecin. For example, when the amount of the camptothecin-related compound contained in the crude camptothecin derived from the tree is a x wt%, the amount of toluene at the end of the camptothecin precipitation and the toluene in the methanol solution is xwt% to 10xwt. %, More preferably 2 × 5% to 5 ×% by weight, and even more preferably 2.5 × 4% to 4 ×% by weight. Thus, content of the camptothecin analog compound contained in camptothecin can be reduced by controlling the ratio of toluene contained in the final concentrated solution.
[0035]
In addition, as another impurity contained in crude camptothecin, there is a saccharide. Since saccharides are relatively difficult to dissolve in toluene, if the camptothecin contains a large amount of saccharides, etc., the resorption process for adsorbing these impurities during the dissolution of the crude camptothecin during recrystallization, etc. The solution may be added to the hot solution. As such an adsorbent, activated carbon is preferable.
[0036]
It is another preferred embodiment of the present invention that the recrystallization step and / or the filtration step are repeatedly performed. By repeating the recrystallization step and / or the filtration step in this manner, the purity of the purified camptothecin is increased, and a more preferable camptothecin crystal can be obtained.
[0037]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples.
[0038]
[Example 1]
(Process 1)
After germination, the leaves with branches of Kigi grown for about 1 year and 6 months were crushed with a crusher equipped with a 2 to 3 mmφ screen for 7 days, and the resulting water was crushed into 50 kg of 17% water. The product was put into a stainless steel 800 L extractor, 500 L of 99% or more of methanol was added, and extraction was performed for 6 hours while heating to 50 ° C. The obtained methanol extract was filtered to separate the primary extract. To the residue after the separation, 100 L of 99% or more of methanol was newly added to obtain a secondary extract. All methanol extracts were concentrated under reduced pressure using a 50 L evaporator concentrator. 1 Kg of celite was added to this concentrated liquid, and 1 L of toluene was added thereto, followed by stirring for 30 minutes, followed by filtration under reduced pressure to separate celite adsorbed with camptothecin.
[0039]
(Process 2)
Celite adsorbed with camptothecin obtained in the above step 1 was put into a 300 L glass-lined heating stirrer equipped with a glass condenser in advance with 100 L of methylene chloride, and heated while stirring. After 1 hour, pressure filtration was performed to separate celite from the extract, and the resulting extract was concentrated under reduced pressure using a 50 L evaporator concentrator, cooled to 20 ° C., and precipitated crude Camptothecin was filtered and washed with 1 L of methylene chloride. The washed crude camptothecin was dried under reduced pressure for 6 hours and the methylene chloride was evaporated to obtain 31.9 g of crude camptothecin having a camptothecin content of 85% or more.
[0040]
(Process 3)
5 L of methylene chloride and methanol mixture (volume ratio 4: 1) was added to a 10 L glass stirring dissolver, and 30 g of the crude camptothecin obtained previously was added while stirring. This crude camptothecin solution was filtered using 50 g of celite to separate insoluble matters. The obtained filtrate was concentrated by distilling off methylene chloride and methanol under reduced pressure using a 10 L evaporator concentrator, and then the precipitate obtained by adding methanol was collected by filtration. The crystals obtained in this recrystallization step are washed with methanol, and again poured into a 5 L methylene chloride / methanol mixture (volume ratio 4: 1) with stirring. The dissolved and filtered solution is concentrated, and methanol is added. Concentrated repeatedly. The precipitate was collected by filtration, washed with methanol, and dried under reduced pressure to obtain 18.5 g of purified crystals. The quality of the purified crystals obtained was such that the camptothecin content was 98.2% or more.
[0041]
[Example 2]
(Process 1)
1.75 Kg of dried berries (11% loss on drying) were crushed with a crusher equipped with a screen of 2 to 3 mmφ, and the resulting crushed material was put into a glass 50 L flask and 1.7 L Water was sprinkled and the mixture was allowed to stand for 1 hour, and then 17 L of 99% or more of methanol was added, followed by extraction with stirring for 60 minutes while heating to 50 ° C. The obtained methanol extract was filtered to separate the primary extract. 1 L of 99% or more of methanol was newly added to the residue after separation to obtain a secondary extract. All methanol extracts were concentrated under reduced pressure using a 10 L evaporator concentrator. 1 L of toluene and 1 Kg of celite were added to this concentrated liquid, and the mixture was stirred for 30 minutes and then filtered under reduced pressure to separate celite adsorbed with camptothecin.
[0042]
(Process 2)
The camptothecin adsorption celite obtained in Step 1 of Example 2 was put into a glass 10 L flask, and 3.5 L of toluene and 1.6 L of methanol were added thereto and heated while stirring. The extract was put into a filter with a filter paper, and filtered under reduced pressure while heating. The obtained filtrate was concentrated with a 10 L evaporator concentrating device, and 3 L of methanol was added to the crystals precipitated in the concentrating device for washing, followed by drying with a vacuum dryer to obtain 120.2 g of crude camptothecin. The resulting camptothecin had a camptothecin (CPT) content of 85% by weight or more.
[0043]
(Process 3)
100 g of crude camptothecin obtained in Step 2 of Example 2 and 25 g of activated carbon were charged into a glass 10 L flask, and 3.5 L of toluene and 1.6 L of methanol were added thereto and heated while stirring. The extract was put into a filter with a filter paper, and filtered under reduced pressure while heating. The obtained filtrate was concentrated with a 10 L evaporator concentrator. 1 L of methanol was added to the crystals precipitated in the concentrator, washed, and dried in a vacuum dryer to obtain 84.9 g of purified crystals. The obtained purified crystals had a camptothecin (CPT) content of 98.5% by weight or more. In the purified crystals obtained, the camptothecin analog compound as an impurity was 0.6% by weight or less, indicating that camptothecin with few impurities was obtained.
[0044]
【The invention's effect】
According to the present invention, even in the case of using plant materials rich in resin and chlorophyll, such as twigs and leaves of young trees, or young trees of young trees, high purity camptothecin can be obtained in high yield. Can be obtained.
[0045]
According to the present invention, when camptothecin is extracted using a toluene / methanol mixed solution, there is no environmental problem as seen in methylene chloride, so that a special process for environmental protection is required. In addition, camptothecin can be obtained effectively. In addition, according to the present invention, it is possible to easily remove impurities contained in the production of camptothecin such as camptothecin analogs by controlling the mixing ratio of the toluene / methanol mixed solution.
[0046]
By extracting camptothecin using a solution containing toluene, it is possible to effectively obtain camptothecin from the fruit or leaf of a plant material containing camptothecin.
[0047]
By performing filtration using an adsorbent such as activated carbon, carbohydrates contained in the crude camptothecin can be effectively removed, and high purity camptothecin can be obtained in high yield.

Claims (8)

An extraction process for extracting camptothecin from cypresses containing camptothecin;
A dissolution and precipitation step in which petroleum hydrocarbon is added to the liquid obtained by concentrating the extract to dissolve the resin and chlorophyll and to precipitate camptothecin;
An adsorption step for adsorbing the precipitated camptothecin on an adsorbent;
Dissolving and extracting camptothecin adsorbed on an adsorbent using either toluene or methanol, or a mixed solution of toluene and methanol, to obtain a crude camptothecin,
A method for producing camptothecin, comprising:   The method for producing camptothecin according to claim 1, wherein in the extraction step, camptothecin is extracted using methanol or hydrous methanol.   Furthermore, the manufacturing method of the camptothecin of Claim 1 or 2 including the purification process which refine | purifies the obtained camptothecin by recrystallization. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 3 , wherein the adsorbent is celite, silica gel, or a mixture thereof. Furthermore, the manufacturing method of the camptothecin of any one of Claim 1 to 4 including the filtration process filtered using activated carbon. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 5, wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the mixed solution of toluene and methanol is 1: 9 to 8: 2. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 5, wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the mixed solution of toluene and methanol is from 2: 8 to 5: 5. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 7 , wherein the petroleum hydrocarbon is toluene.