JP4087589B2 - Method for producing camptothecin - Google Patents

Description

【０００４】
カンプトテシンは、抗腫瘍活性、すなわちＤＮＡ関連酵素阻害メカニズム（ＤＮＡトポイソメラーゼのＩ型を阻害するメカニズム）を有する事が発見され、新制癌剤への応用の期待が高まった。しかしながら、カンプトテシンは、高い骨髄抑制という毒性を有していた。
その後、カンプトテシンは化学修飾が加えられ、毒性が低減された。1994年1月には、カンプトテシン誘導体である下記式２で表されるＣＰＴ−１１（塩酸イリノテカン）が臨床試験を経て旧厚生省より認可を受けた。このようにして、カンプトテシン誘導体は日本で医薬品として認められることとなった。
【０００５】
【化２】

【０００６】
癌治療に有用な塩酸イリノテカンの原料となるカンプトテシンは、世界の亜熱帯圏に広く分布する数種類の植物に含まれており、これら植物原料から抽出することにより製造されている。又、カンプトテシンは、化学合成によっても製造されている（例えば、米国特許４，８９４，４５６号等）。
【０００７】
カンプトテシンをクサミズキ植物原料から製造する場合、植物原料からカンプトテシンを抽出し、できるだけ純度の高いカンプトテシンを収率良く得る必要がある。
従来、カンプトテシン抽出用に伐採された植物原料は殆どが成木の幹部分であり、そこに含まれる樹脂等の不純物の量は少なかった。近年、環境保全の観点から、植物原料の栽培も行われるようになり、若年木も抽出に供されるようになってきた。若年の植物原料は皮部分が厚く、葉緑素を多く含むとともに、樹脂が多量に含まれる。したがって、このような若い植物原料を用いてカンプトテシンを抽出した場合、葉緑素や樹脂が不純物として混入する割合が多くなり、これらをカンプトテシンから取り除くのが困難であり、その結果、クサミズキの成木の幹部分を用いて抽出した場合と同程度のカンプトテシンの純度を達成することが難しいという問題があった。
【０００８】
カンプトテシンを植物原料から抽出する方法としては、カンプトテシンを含有する植物（例えば、クサミズキなど）からメタノール等の水溶性溶媒を用いて抽出する方法や、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【０００９】
さらに、カンプトテシンは、一般の有機溶媒にとけにくい性質を有するためカンプトテシンをジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤に溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
例えば、クサミズキからメタノールを用いてカンプトテシンを抽出した場合、一定のカンプトテシン濃度をもったカンプトテシン抽出液を得ることができる。しかしながら、メタノールを用いた抽出工程だけでは高純度のカンプトテシンを単離することができないという問題があった。
また、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させた場合、カンプトテシンはアルカリ溶液に容易に溶解するが、カンプトテシンのラクトン環が開裂するといった問題があった。
また、ジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤を用いれば、メタノール抽出液のカンプトテシン吸着媒から目的とするカンプトテシンを効率よく抽出する事が可能であるが、葉緑素や樹脂等を同時に溶解し抽出してしまう為、その後の分離精製が困難であるという問題があった。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、以下の発明によって解決される。
すなわち、
（１）カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアのいずれかまたは両方からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、
抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる析出工程と、
析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、
吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、
を含むカンプトテシンの製造方法、
（２）抽出工程において、メタノールまたは含水メタノールを用いてカンプトテシンを抽出する（１）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（３）更に、粗カンプトテシンを再結晶により精製する工程を含む（１）又は（２）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（４）第１の非水溶性溶媒がトルエンである（１）から（３）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（５）吸着媒が、セライト、シリカゲル、またはその混合物である（１）から（４）のいずれかに記載のカンプトテシンの製造方法、
（６）更に、活性炭を用いてろ過する工程を含む、（１）から（５）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（７）溶解抽出工程において、第２の非水溶性溶媒が、トルエンまたは、メタノールのいずれか又は両方を含む液である（１）から（６）のいずれかに１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（８）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、１：９から８：２である（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（９）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、２：８から５：５である上記（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１０）第１の非水溶性溶媒または第２の非水溶性溶媒のいずれかまたは両方が、石油系炭化水素である（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
（１１）第１の非水溶性溶媒または第２の非水溶性溶媒のいずれかまたは両方が、トルエンである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
（１２）第２の非水溶性溶媒が、ハロゲン化アルキルである上記（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１３）第２の非水溶性溶媒が、メチレンクロライドである上記（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１４）カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアから非水溶性溶媒を用いてカンプトテシンを抽出する工程を含むカンプトテシンの製造方法、
によって解決される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の実施態様のひとつであるカンプトテシンの製造方法のひとつは、原料を破砕した後、カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアのいずれかまたは両方からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる析出工程と、析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、当該工程により得られた粗カンプトテシンを再結晶することにより精製するカンプトテシン精製工程とを含むカンプトテシンの製造方法が挙げられる。
【００１３】
［カンプトテシンの原料］
カンプトテシンの原料としては、例えば、クサミズキ（Nothapodytes foetida）又は、エルバタミア(Mappia foetide Miers)等のカンプトテシンを含む植物が挙げられるが、カンプトテシンを含むものであれば限定されない。カンプトテシンを含む植物としては、クサミズキが特に好ましい。
【００１４】
本発明は、カンプトテシンを含む植物原料のうちでも比較的若い時期に伐採したクサミズキからカンプトテシンを製造する場合に特に好適に用いられる。例えば、本発明は、成長したクサミズキなどは勿論のこと、発芽してから１年以上３年以内のクサミズキなどに好適に用いることができる。若木のクサミズキは、樹脂や葉緑素を比較的多く含んでいるが、このような場合に本発明は特に有効に用いられるのである。
【００１５】
カンプトテシンは、カンプトテシンの塩として製造されてもよい。カンプトテシンの塩としては、カンプトテシンのナトリウム塩、カリウム塩やカンプトテシンのテトラアルキルアンモニウム塩が含まれる（例えば、特許１８８８４０４号）。
【００１６】
原料を伐採し、そのままカンプトテシンを抽出してもよいが、抽出効率を上げるため、原料は細かく破砕されていることが好ましい。
【００１７】
例えば、破砕された原料は、溶液中でカンプトテシンが抽出される。この際に用いられる溶液としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、クメンなどの芳香族炭化水素類、フェノール、ベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチレンクロライドなどのハロゲン化アルキルが挙げられるが、カンプトテシンを溶解するものであれば限定されない。当該溶液としてトルエンやメチレンクロライドなどの非水溶性溶媒を用いてもよい。これらは、単独で用いられてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。これらのうちで、メタノール、トルエン、メチレンクロライドが入手容易であり、しかもカンプトテシンをよく溶解するため好ましい。原料からカンプトテシンを抽出する際は、不純物が比較的多く含まれるため、入手容易かつ安価なメタノールが特に好ましい。
【００１８】
トルエンは、常温において、カンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液に投入することによってカンプトテシンを析出させ、これをセライトに吸着させる働きがある。反対に、メタノールと混合した沸騰状態でのトルエンはカンプトテシンが吸着したセライトからカンプトテシン溶解し分離する働きがある。
トルエンは、常温で単独で使用した場合は、葉緑素及び樹脂を溶解したままカンプトテシンを析出させるためカンプトテシンの分離に好ましく用いられ、メタノールとトルエンの混合溶媒はその沸点においてカンプトテシンを極めて良く溶解するので、カンプトテシンの抽出又は再結晶の溶解に好ましく用いられる。
一方、メチレンクロライドは常温においてもカンプトテシンを溶解するので、トルエンの場合の様に、メチレンクロライドを用いてカンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液からカンプトテシンを析出させることはできない。
【００１９】
表１に、トルエン、キシレン、ヘキサン、メチレンクロライドの樹脂溶解性、それぞれに対するカンプトテシン（ＣＰＴ）溶解度、それぞれのメタノールとの混合能、およびそれぞれの沸点を示す。表１から、メタノール以外の溶液としては、トルエンとメチレンクロライドが好ましいことがわかる。さらに、メチレンクロライドは、樹脂を溶解させずに、カンプトテシンを溶解するという優れた効果を有することがわかる。
【００２０】
【表１】

【００２１】
植物原料からカンプトテシンを抽出する際の温度としては、抽出に用いられる溶液にもよるが、例えばメタノールを用いた場合は、１０℃から６０℃が好ましく、３０℃から５５℃であれば更に好ましい。その理由は、低温で抽出を行うとカンプトテシンの溶解量がすくなく、高温で行うと、樹脂等のカンプトテシン以外の不純物を多く抽出する。
更に、植物原料に予め水分を持たせることにより、結果的に抽出工程におけるメタノールの含水量が１０から３０容量％の範囲内にあるのが好ましい。
【００２２】
原料からカンプトテシンを抽出した後、これをろ過することが好ましい。ろ液にはカンプトテシンが溶解している。この際、ろ過ケークにもカンプトテシンが残されているので、ろ過ケークから再度カンプトテシンを抽出し、ろ液を集めることも本発明の好ましい実施の態様である。
【００２３】
カンプトテシン抽出液は、液温を高める、減圧するなどして溶媒を蒸発させ、カンプトテシンの濃度を上昇させることが好ましい。カンプトテシンの濃度が高まると、カンプトテシンの微細結晶が析出してくる。同時に葉緑素及び樹脂も析出してくるので、その際に、カンプトテシンは溶解せず、葉緑素及び樹脂を溶解する石油系炭化水素を投入するのが良い。
この目的には、ノルマルヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン等の非水溶性溶媒が使用できるが、沸点、作業環境の問題、更にその後の工程での使用を考えると、トルエンが好ましい。トルエンの投入により、その後、吸着媒を混入することによって、カンプトテシンを吸着媒に選択的に吸着させることが可能となる。
この場合、メチレンクロライド等のハロゲン化アルキルはトルエンと同様に非水溶性溶媒ではあるが、常温でカンプトテシンを溶解するので、カンプトテシンを析出させる溶媒としては必ずしも適さない。
【００２４】
カンプトテシンを抽出した濃縮液に混入される吸着媒としては、カンプトテシンを選択的に吸着するものが好ましく、例えば、シリカゲル、活性炭、活性白土、ゼオライト、吸着クロマトグラフィー、セライトを好適に用いることができるが、カンプトテシンを吸着することができるものであれば限定されない。これらのなかでも、セライトは特に好ましい吸着媒である。
【００２５】
吸着媒に吸着したカンプトテシンは、吸着媒ごと非水溶性溶媒に入れることにより再び溶液中に溶出する。吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる非水溶性溶媒としては、カンプトテシンを溶出することができる溶液であれば限定されず、先に掲げた溶液を用いることができる。これらの中では、メチレンクロライド、沸騰時のトルエン、及びこれらとメタノールの混合溶液などを好適に用いることができる。
【００２６】
［吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液］
特に若い時期に伐採したクサミズキは、樹脂の含有量が多く、メタノールのみを用いてカンプトテシンを抽出した場合、当該樹脂が多く溶解するため、得られるカンプトテシンの純度が低くなる。このため吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる第２の非水溶性溶媒としては、メタノール単独だけではなく、メチレンクロライド又は沸騰時のトルエン並びにこれらとメタノールの混同溶液が好適に用いられるのである。ただし、メチレンクロライドは、いわゆる環境ホルモンとして特定され、その排水中の規制限度値は０．２ｍｇ／Ｌ以下という厳しい規定が設けられている。このため、メチレンクロライドを用いると、特別な廃液処理を施さなくてはならないため必ずしも低コストが実現できない。したがって、沸騰時のトルエン又は沸騰時のトルエンとメタノールの混合溶液が、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として最も好ましい。
【００２７】
トルエンはメタノールと任意の割合で溶解し、トルエン自体又はメタノール自体とは異なった性質を示す。特に、カンプトテシンを溶解する能力はそれぞれ単独の場合と、混合した場合とで顕著に変化する。表２に、２０℃(実線)と７０℃(破線)における、トルエンとメタノールの重量比と溶解するカンプトテシンの量を示す。
【００２８】
【表２】

【００２９】
表２に示すとおり、カンプトテシンの溶解度はメタノールとトルエンの混合の比率によって、大きく変化するが、メタノールとトルエンの混合液に含まれるメタノールの量は、特に限定されるものではなく、メタノール対トルエンの容積割合としては、１：９から８：２であることが好ましく、２：８から５：５であれば更に好ましく、３：７であれば特に好ましい。メタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合液では、常温（２０℃）と沸騰時（７０℃）とでカンプトテシンの溶解度に、２倍の差がある。例えば、この系の７０℃におけるカンプトテシン溶解度は、メチレンクロライドを用いた場合よりも高い。すなわち、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として沸騰時のメタノールとトルエンの混合液が特に好ましいことがわかる。
【００３０】
吸着媒に吸着したカンプトテシンをメタノールとトルエンの混合液で溶出させた後は、ろ過を施し、放置冷却や撹拌冷却することによりカンプトテシンを晶析させることが好ましい。ろ液中のメタノールを蒸発させ、ろ液を濃縮した後にカンプトテシンを晶析させることは本発明の好ましい実施の態様である。この場合、メタノールの濃縮割合は、メタノール対トルエンの容積割合が１：９程度とすることが好ましい。
このようにして得られた粗カンプトテシンとしては、カンプトテシン含有量が８５重量％以上のものであることが好ましい。カンプトテシン含有量が８５重量％より少なければ、その後の再結晶による工程で結晶を精製しても好ましいカンプトテシンを製造することが困難になるからである。
【００３１】
［精製（再結晶）工程］
得られた粗カンプトテシンは、例えば再結晶を施すことによって精製されることが好ましい。再結晶に用いられる溶液としては、カンプトテシンを溶解し、温度によってカンプトテシンの溶解量が変化するものであれば限定されない。熱時はカンプトテシンを良く溶解し、冷時はカンプトテシンを析出させるが樹脂や不純物を依然として溶解しているような溶媒組成が特に好ましい。このような観点から、再結晶に用いられる溶液としては、メタノールとトルエンの混合溶液が好ましい。
【００３２】
粗カンプトテシンに含まれる不純物のうち、樹脂は常温のトルエンで溶解される。しかしながら、カンプトテシン類縁化合物は、常温のトルエンに溶解しにくい。一方、これらカンプトテシン類縁化合物はメタノールとトルエンの混合溶液には溶解する。樹脂やカンプトテシン類縁化合物を除去するためには、一度、樹脂や、カンプトテシン類縁化合物を好ましくはメタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合溶液にカンプトテシンとともに熱時溶解させた後、ろ過して得たろ過液を濃縮し、メタノールを溜去してカンプトテシンを析出させ分離するが、その際に、ある程度のメタノールが残っており、樹脂及びカンプトテシン類縁化合物が溶液に溶解した状態であることが望ましい。
【００３３】
カンプトテシン類縁化合物は、その種類によるが、カンプトテシンのように限定された割合でのメタノールとトルエンの混合液ではなく、メタノール又はトルエン単独の溶液に近い割合の場合に、常温で比較的よく溶解する。したがって、カンプトテシン類縁化合物を除去しつつ、カンプトテシンの回収率を上げるためには、表２からわかるように、カンプトテシン析出時の溶液ができるだけメタノール又はトルエンの単独溶媒に近い状態となっていることが好ましい。メタノール又はトルエンは沸点や溶解する物質の量が異なっているので、これらの容積割合を蒸発等で制御することによって、効果的にカンプトテシンを回収することができる。
【００３４】
カンプトテシンを析出する際に含まれるべきメタノールの量は、粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の種類に依存し、その量に比例すると考えられる。例えば、クサミズキを植物原料とする粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の量がx容量％のときには、カンプトテシン析出終了時のメタノールとトルエン溶液中のメタノールの量としては、ｘ容量％から１０ｘ容量％が好ましく、２ｘ容量％から５x容量％であればより好ましく、２．５x容量％から４x容量％であれば更に好ましい。このように、最終濃縮液に含まれるメタノールの割合を制御することによって、カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の含有量を低下させることができる。
【００３５】
なお、粗カンプトテシンに含まれる他の不純物としては、糖質がある。糖質はトルエンに比較的溶解しにくいため、粗ＣＰＴに糖質が多量に含まれている場合等は、再結晶における粗カンプトテシン溶解時等において、これらの不純物を吸着する吸着媒を再結晶工程の熱時溶解溶液に添加すればよい。このような吸着媒としては、活性炭が好ましい。
【００３６】
再結晶工程及び／又はろ過工程が繰り返し行われることは、本発明の好ましい別の実施態様である。このように再結晶工程及び／又はろ過工程を繰り返すことで、精製されるカンプトテシンの純度が高まり、より好ましいカンプトテシン結晶を得ることが可能となる。
【００３７】
【実施例】
以下実施例をあげて本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されない。
【００３８】
［実施例１］
（工程１）
１,３００Ｋｇのクサミズキ(NPF)の原木を、５〜７mmφのスクリーンを装着した破砕機で破砕し、得られたNPF破砕物に水を５００Ｌ添加して一夜放置後ステンレス製８，０００Ｌ抽出槽に投入し、水分が２０容量％以下の６，５００Ｌのメタノールを投入し、５０℃に加温しつつ６０分間抽出を行った。 得られたメタノール抽出液をろ過し、1次抽出液を分離した。その後、新たに水分が２０容量％以下のメタノールを４，５００Ｌ投入し、再び同様に操作して２次抽出液を得た。全てのメタノール抽出液を、ステンレス製のメタノール濃縮装置を用いて、−０．０６５ＭＰａの減圧下で加温した。これにより、メタノールを抽出液から留去させ、メタノール抽出液を濃縮した。この濃縮液に１１Ｋｇのセライトを加え、更に２００Ｌのトルエンを投入し、３０分間攪拌したのち、遠心分離してカンプトテシンが吸着したセライトを分離した。
【００３９】
（工程２）
上記工程１で得られたカンプトテシンが吸着したセライトを、１，５００Ｌのメチレンクロライド中に投入し、加熱しながら攪拌した。1時間後、加圧ろ過し、抽出液からセライトを分離した。得られた抽出液を蒸留機で濃縮した後、冷却槽に移して２０℃にまで冷却し、析出した粗カンプトテシンをろ過し、２０Ｌのメチレンクロライドで洗浄した。洗浄した粗カンプトテシンを6時間減圧し、メチレンクロライドを蒸発させ乾燥し、カンプトテシン含量８５％以上の粗カンプトテシンを２．４Ｋｇを得た。
【００４０】
（工程３）
ステンレス製の攪拌溶解槽にメチレンクロライド-メタノール混合液(容量比４：１)を１，２００Ｌ加え、攪拌しつつ、先に得られた２．４Ｋｇの粗カンプトテシンを投入した。この粗カンプトテシン溶解液に、セライトを１Ｋｇ添加し、ろ過し、不溶物を分離した。得られたろ液をグラスライニング製の蒸留器に移し、メチレンクロライド-メタノールを留去して濃縮した後、メタノールを１６０Ｌ投入して濃縮を繰り返し、液が３２０Ｌ（液温５８℃）となるまで濃縮した。この濃縮液を１０℃で１時間冷却して得られた析出物をろ集した。この再結晶工程で得られた精製結晶(一回晶)を、２０Ｌのメタノールで洗浄後、再び１，０００Ｌのメチレンクロライド-メタノール混合液(容量比４：１)に攪拌下投入し、溶解・ろ過した液を濃縮し、メタノール１６０Ｌの投入を繰り返して液温が５８℃になるまで濃縮した。析出物をろ集し、２０Ｌのメタノールを用いて析出物を洗浄し、減圧乾燥して精製結晶(二回晶)を１．２Ｋｇ得た。得られた二回晶の品質はカンプトテシン含量が９８．２重量％以上であった。
【００４１】
［実施例２］
（工程１）
実施例１の工程１と同様の方法で得たカンプトテシン吸着セライトをカンプトテシン抽出機に投入し、これに３５０Ｌのトルエンと１６０Ｌのメタノールを投入し、攪拌しつつ加熱した。抽出液をろ紙を引いたろ過器に投入し、加温しつつ減圧ろ過した。 得られたろ液をカンプトテシン濃縮機へ投入し、加熱して、メタノールを留去し放冷した。カンプトテシン濃縮機内に析出した結晶（粗カンプトテシン）を、減圧ろ過器でろ過により回収し、メタノール３０Ｌを投入して粗カンプトテシンを洗浄した。この様にして得た粗カンプトテシンを減圧乾燥器で乾燥した。同様の作業を繰り返し、粗カンプトテシンを３回製造した。これらの粗カンプトテシンのカンプトテシン含量(重量％)を表３に示す。得られた粗カンプトテシンのカンプトテシン（ＣＰＴ）含有量は、８５重量％以上であり、精製カンプトテシンを得る上で純度の高い中間体が得られた。
【００４２】
【表３】

【００４３】
（工程２）
上記工程１で、得られた粗カンプトテシンと、活性炭を容量が６００Ｌのグラスライニング溶解機に投入し、更に５００Ｌのメタノールとトルエンの混合液(容量比３：７)を投入し、加熱して粗カンプトテシンを溶解させた。粗カンプトテシンが溶解した後、ろ過器を減圧にし、溶液を加温しつつ、ろ過した。得られたろ液を容量が６００Ｌのグラスライニング濃縮機に投入し、加熱しつつ攪拌してメタノールを留去した。得られた濃縮液を１２時間放冷し、遠心分離機を用いて、析出した結晶をろ過し、回収した。得られた結晶を、２０Ｌのメタノールで洗浄し減圧乾燥し精製結晶を得た。このようにして得られた精製結晶の分析結果を表４に示す。表４中、％は、重量％を意味する。表４から、精製結晶は、いずれもカンプトテシン（ＣＰＴ）が、９８重量％以上含有されており、品質の高いカンプトテシンが得られたことがわかる。また、得られた精製結晶には、不純物であるカンプトテシン類縁化合物が、いずれも僅かであり、不純物の少ないカンプトテシンが得られたことがわかる。
【００４４】
【表４】

【００４５】
［実施例３］
実施例２の工程１で得られた粗カンプトテシン２．０ｇを５００ｍＬのメタノールとトルエンの混合液(容量割合３：７)に投入し加熱して溶解させた後、ろ過した。ろ過液を１００ｍＬまで濃縮し、メタノール４００ｍＬに注入後、放置し析出した結晶をろ過により回収した。得られた結晶を８０℃で乾燥し、１．４ｇのカンプトテシンを得た。この結晶について定量試験を行った結果、カンプトテシンが９８．５重量%、カンプトテシン類縁化合物が１．４重量%含まれていた。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば、若いクサミズキなど、樹脂や葉緑素の多い原料を用いた場合であっても、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることが可能となる。
【００４７】
本発明によれば、メタノールとトルエンの混合溶液を用いてカンプトテシンを抽出した場合は、メチレンクロライドに見られるような環境上の問題もないので、環境保全のための特段の工程を必要とするといった不都合も無く、効果的にカンプトテシンを得ることができる。また、本発明によれば、メタノールとトルエンの混合溶液の容量割合を制御することによってカンプトテシン類縁化合物等のカンプトテシン製造時に含まれる不純物を容易に除去することが可能となる。
【００４８】
トルエンを含んだ溶液を用いてカンプトテシンを抽出することで、カンプトテシンを含む植物原料の葉からも効果的にカンプトテシンを得ることが可能となる。
【００４９】
活性炭等の吸着媒を用いてろ過を施すことで、粗カンプトテシンに含まれる糖質を効果的に除去し、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for effectively extracting and purifying camptothecin, which is a raw material for pharmaceuticals useful for the treatment of cancer, from plant raw materials containing the same, and a method for producing camptothecin thereby.
[0002]
[Prior art]
In 1966, Wall et al. Isolated camptothecin represented by the following formula 1 from Yuki [ME Wall, MC Wani, CE Cook, KH Palmer, AT McPhail, and GA Sim, J. Am. Chem. Soc., 94, 388 (1966)]. Subsequently, camptothecin was studied as a pharmacologically effective drug at the National Cancer Institute in the United States.
[0003]
[Chemical 1]

[0004]
Camptothecin was found to have antitumor activity, that is, a DNA-related enzyme inhibition mechanism (mechanism that inhibits type I of DNA topoisomerase), and expectations for application to new anticancer agents increased. However, camptothecin has a high myelosuppressive toxicity.
Subsequently, camptothecin was chemically modified to reduce toxicity. In January 1994, CPT-11 (irinotecan hydrochloride) represented by the following formula 2, which is a camptothecin derivative, was approved by the former Ministry of Health and Welfare through clinical trials. In this way, camptothecin derivatives have been accepted as pharmaceuticals in Japan.
[0005]
[Chemical 2]

[0006]
Camptothecin, which is a raw material for irinotecan hydrochloride useful for cancer treatment, is contained in several kinds of plants widely distributed in the subtropical sphere of the world, and is produced by extraction from these plant raw materials. Camptothecin is also produced by chemical synthesis (for example, US Pat. No. 4,894,456).
[0007]
In the case of producing camptothecin from a plant raw material, it is necessary to extract camptothecin from the plant material and obtain camptothecin with the highest possible purity in a high yield.
Conventionally, most plant raw materials cut down for camptothecin extraction are trunk portions of mature trees, and the amount of impurities such as resin contained therein is small. In recent years, plant raw materials have been cultivated from the viewpoint of environmental conservation, and young trees have been used for extraction. Young plant materials have a thick skin, contain a lot of chlorophyll, and contain a large amount of resin. Therefore, when camptothecin is extracted using such a young plant material, the proportion of chlorophyll and resin mixed as impurities increases, and it is difficult to remove these from camptothecin. There was a problem that it was difficult to achieve the same level of purity of camptothecin as when extracted using a minute.
[0008]
As a method of extracting camptothecin from plant raw materials, a method of extracting camptothecin from a plant containing camptothecin (for example, Japanese cypress) using a water-soluble solvent such as methanol, or camptothecin is dissolved in an alkaline solution such as an aqueous sodium hydroxide solution. A method is known (for example, Japanese Patent Publication No. 5-33955).
[0009]
Furthermore, since camptothecin has a property that it is difficult to dissolve in a general organic solvent, a method of dissolving camptothecin in a water-soluble solvent having strong solubility such as dimethyl sulfoxide is known (for example, Japanese Patent Publication No. 5-33955). .
[0010]
[Problems to be solved by the invention]
For example, when camptothecin is extracted from a Japanese dogwood using methanol, a camptothecin extract having a certain camptothecin concentration can be obtained. However, there is a problem that high-purity camptothecin cannot be isolated only by the extraction step using methanol.
Further, when camptothecin is dissolved in an alkaline solution such as an aqueous sodium hydroxide solution, camptothecin is easily dissolved in the alkaline solution, but there is a problem that the lactone ring of camptothecin is cleaved.
Moreover, if a water-soluble solvent such as dimethyl sulfoxide is used, the target camptothecin can be efficiently extracted from the camptothecin adsorbent of the methanol extract, but chlorophyll, resin, etc. are dissolved simultaneously. Since it extracted, there existed a problem that separation and purification after that was difficult.
[0011]
[Means for Solving the Problems]
The above problems are solved by the following invention.
That is,
(1) an extraction step of extracting camptothecin from either or both of cedarwood and elbatamia containing camptothecin;
A precipitation step in which the first water-insoluble solvent is added to the liquid obtained by concentrating the extract to dissolve the resin and chlorophyll and to precipitate camptothecin;
An adsorption step for adsorbing the precipitated camptothecin on an adsorbent;
Dissolving and extracting camptothecin adsorbed on the adsorbent using a second water-insoluble solvent to obtain crude camptothecin;
A method for producing camptothecin,
(2) In the extraction step, camptothecin is extracted using methanol or hydrous methanol, and the method for producing camptothecin according to (1),
(3) The method for producing camptothecin according to (1) or (2), further comprising a step of purifying crude camptothecin by recrystallization,
(4) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (3), wherein the first water-insoluble solvent is toluene,
(5) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (4), wherein the adsorbent is celite, silica gel, or a mixture thereof,
(6) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (5), further comprising a step of filtering using activated carbon.
(7) Production of camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein in the dissolution and extraction step, the second water-insoluble solvent is a liquid containing either or both of toluene and methanol. Method,
(8) The method for producing camptothecin according to (7), wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the second water-insoluble solvent is 1: 9 to 8: 2.
(9) The method for producing camptothecin according to (7) above, wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the second water-insoluble solvent is from 2: 8 to 5: 5,
(10) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein either or both of the first water-insoluble solvent and the second water-insoluble solvent are petroleum hydrocarbons. .
(11) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein either or both of the first water-insoluble solvent and the second water-insoluble solvent are toluene.
(12) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the second water-insoluble solvent is an alkyl halide,
(13) The method for producing camptothecin according to any one of (1) to (6), wherein the second water-insoluble solvent is methylene chloride,
(14) A method for producing camptothecin, which comprises a step of extracting camptothecin from a dogwood or erbatamia containing camptothecin using a water-insoluble solvent,
Solved by.
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
One of the methods for producing camptothecin according to one embodiment of the present invention includes an extraction step of extracting camptothecin from either or both of cedarwood and erbatamia containing camptothecin after crushing the raw material, and a solution obtained by concentrating the extract. A first water-insoluble solvent is added to dissolve the resin and chlorophyll and a camptothecin is precipitated, an adsorption step to adsorb the precipitated camptothecin to the adsorbent, and the camptothecin adsorbed to the adsorbent to the second non-aqueous solvent. Examples include a method for producing camptothecin, which includes a dissolution extraction step for obtaining a crude camptothecin by performing dissolution extraction using a water-soluble solvent, and a camptothecin purification step for purification by recrystallization of the crude camptothecin obtained in this step.
[0013]
[Raw material of camptothecin]
Examples of the raw material for camptothecin include plants containing camptothecin, such as Japanese beetle (Nothapodytes foetida) and Elbatamia (Mappia foetide Miers), but are not limited as long as they contain camptothecin. As the plant containing camptothecin, the dogwood is particularly preferable.
[0014]
INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention is particularly preferably used when camptothecin is produced from a woodpecker cut at a relatively young time among plant raw materials containing camptothecin. For example, the present invention can be suitably used not only for the growing dogwood but also for the dogwood within one year to three years after germination. The young tree is a relatively large amount of resin and chlorophyll. In such a case, the present invention is particularly effectively used.
[0015]
Camptothecin may be produced as a salt of camptothecin. Examples of the salt of camptothecin include sodium salt and potassium salt of camptothecin and tetraalkylammonium salt of camptothecin (for example, Japanese Patent No. 1888404).
[0016]
The raw material may be felled and camptothecin extracted as it is, but the raw material is preferably finely crushed in order to increase extraction efficiency.
[0017]
For example, camptothecin is extracted from a crushed raw material in a solution. Examples of the solution used at this time include alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene, mesitylene and cumene, aromatic alcohols such as phenol and benzyl alcohol, Examples include alkyl halides such as methylene chloride, but are not limited as long as they can dissolve camptothecin. A water-insoluble solvent such as toluene or methylene chloride may be used as the solution. These may be used alone or in combination of two or more. Among these, methanol, toluene, and methylene chloride are preferable because they are easily available and camptothecin is well dissolved. When extracting camptothecin from a raw material, since it contains a relatively large amount of impurities, methanol that is easily available and inexpensive is particularly preferable.
[0018]
Toluene has the function of precipitating camptothecin by adsorbing it to celite by adding it to a concentrated solution of methanol extract containing camptothecin at room temperature. On the other hand, toluene in a boiling state mixed with methanol has a function of dissolving and separating camptothecin from celite adsorbed with camptothecin.
Toluene, when used alone at room temperature, is preferably used for separation of camptothecin to precipitate camptothecin while dissolving chlorophyll and resin, and a mixed solvent of methanol and toluene dissolves camptothecin very well at its boiling point. It is preferably used for extraction of camptothecin or dissolution of recrystallization.
On the other hand, since methylene chloride dissolves camptothecin even at normal temperature, camptothecin cannot be precipitated from a concentrated solution of a methanol extract containing camptothecin using methylene chloride as in the case of toluene.
[0019]
Table 1 shows the resin solubility of toluene, xylene, hexane, and methylene chloride, the solubility of camptothecin (CPT) for each, the mixing ability with each methanol, and the boiling point of each. From Table 1, it can be seen that toluene and methylene chloride are preferable as the solution other than methanol. Further, it can be seen that methylene chloride has an excellent effect of dissolving camptothecin without dissolving the resin.
[0020]
[Table 1]

[0021]
The temperature at which camptothecin is extracted from the plant material depends on the solution used for the extraction, but for example, when methanol is used, it is preferably 10 ° C to 60 ° C, more preferably 30 ° C to 55 ° C. The reason is that if extraction is performed at a low temperature, the amount of camptothecin dissolved is small, and if it is performed at a high temperature, many impurities other than camptothecin such as a resin are extracted.
Furthermore, it is preferable that the water content of methanol in the extraction process is within the range of 10 to 30% by volume by giving moisture to the plant material in advance.
[0022]
It is preferable to extract camptothecin from the raw material and then filter it. Camptothecin is dissolved in the filtrate. At this time, since camptothecin remains in the filter cake, it is also a preferred embodiment of the present invention to extract camptothecin from the filter cake again and collect the filtrate.
[0023]
It is preferable to elevate the concentration of camptothecin in the camptothecin extract by evaporating the solvent by increasing the liquid temperature or reducing the pressure. As the concentration of camptothecin increases, camptothecin fine crystals precipitate. At the same time, chlorophyll and resin are also precipitated. At this time, camptothecin is not dissolved, but petroleum hydrocarbons that dissolve chlorophyll and resin are preferably added.
For this purpose, water-insoluble solvents such as normal hexane, cyclohexane, benzene, and toluene can be used, but toluene is preferable in view of problems of boiling point and working environment and further use in subsequent steps. It is possible to selectively adsorb camptothecin to the adsorbent by introducing toluene and then mixing the adsorbent.
In this case, an alkyl halide such as methylene chloride is a water-insoluble solvent like toluene, but dissolves camptothecin at room temperature and is not necessarily suitable as a solvent for precipitating camptothecin.
[0024]
As the adsorbent mixed in the concentrated solution obtained by extracting camptothecin, one that selectively adsorbs camptothecin is preferable. For example, silica gel, activated carbon, activated clay, zeolite, adsorption chromatography, and celite can be suitably used. As long as it can adsorb camptothecin, it is not limited. Of these, celite is a particularly preferred adsorbent.
[0025]
The camptothecin adsorbed on the adsorbent is eluted again in the solution by putting the adsorbent together with the water-insoluble solvent. The water-insoluble solvent used for eluting the camptothecin adsorbed on the adsorbent is not limited as long as it is a solution that can elute camptothecin, and the solutions listed above can be used. Among these, methylene chloride, toluene at the time of boiling, and a mixed solution of these with methanol can be suitably used.
[0026]
[Solution used to elute camptothecin adsorbed on adsorbent]
In particular, the woodpecker cut at a young age has a high resin content, and when camptothecin is extracted using only methanol, the resin is dissolved in a large amount, so that the purity of the obtained camptothecin is low. Therefore, as the second water-insoluble solvent used for eluting the camptothecin adsorbed on the adsorbent, not only methanol alone, but also methylene chloride or toluene at the time of boiling and a mixed solution of these with methanol are preferably used. It is. However, methylene chloride is specified as a so-called environmental hormone, and there is a strict regulation that the regulation limit value in the waste water is 0.2 mg / L or less. For this reason, when methylene chloride is used, a special waste liquid treatment must be performed, so that low cost cannot always be realized. Accordingly, toluene at the time of boiling or a mixed solution of toluene and methanol at the time of boiling is most preferable as a solution used for eluting camptothecin adsorbed on the adsorbent.
[0027]
Toluene dissolves in an arbitrary ratio with methanol and exhibits properties different from toluene itself or methanol itself. In particular, the ability to dissolve camptothecin varies markedly depending on whether it is alone or mixed. Table 2 shows the weight ratio of toluene and methanol and the amount of dissolved camptothecin at 20 ° C. (solid line) and 70 ° C. (dashed line).
[0028]
[Table 2]

[0029]
As shown in Table 2, the solubility of camptothecin varies greatly depending on the mixing ratio of methanol and toluene, but the amount of methanol contained in the mixture of methanol and toluene is not particularly limited, The volume ratio is preferably 1: 9 to 8: 2, more preferably 2: 8 to 5: 5, and particularly preferably 3: 7. In a mixed solution having a volume ratio of methanol to toluene of 3: 7, the solubility of camptothecin is doubled between normal temperature (20 ° C.) and boiling (70 ° C.). For example, the camptothecin solubility of this system at 70 ° C. is higher than when methylene chloride is used. That is, it is understood that a mixed solution of methanol and toluene at the time of boiling is particularly preferable as a solution used for eluting camptothecin adsorbed on the adsorbent.
[0030]
After eluting the camptothecin adsorbed on the adsorbent with a mixed solution of methanol and toluene, it is preferable to crystallize the camptothecin by performing filtration and cooling by standing or cooling. It is a preferred embodiment of the present invention to crystallize camptothecin after evaporating methanol in the filtrate and concentrating the filtrate. In this case, the concentration ratio of methanol is preferably about 1: 9 in volume ratio of methanol to toluene.
The crude camptothecin thus obtained preferably has a camptothecin content of 85% by weight or more. This is because if the camptothecin content is less than 85% by weight, it is difficult to produce a preferred camptothecin even if the crystal is purified in the subsequent recrystallization step.
[0031]
[Purification (recrystallization) step]
The obtained crude camptothecin is preferably purified, for example, by recrystallization. The solution used for recrystallization is not limited as long as it dissolves camptothecin and the amount of camptothecin dissolved varies with temperature. A solvent composition in which camptothecin is well dissolved when heated and camptothecin is precipitated when cold but a resin and impurities are still dissolved is particularly preferable. From such a viewpoint, the solution used for recrystallization is preferably a mixed solution of methanol and toluene.
[0032]
Of the impurities contained in the crude camptothecin, the resin is dissolved in toluene at room temperature. However, camptothecin analogs are difficult to dissolve in normal temperature toluene. On the other hand, these camptothecin analogs are dissolved in a mixed solution of methanol and toluene. In order to remove the resin and the camptothecin-related compound, the resin and the camptothecin-related compound are preferably dissolved in a mixed solution having a volume ratio of methanol to toluene of preferably 3: 7 together with camptothecin and then filtered. The filtrate is concentrated, and methanol is distilled off to precipitate and separate camptothecin. At this time, it is desirable that a certain amount of methanol remains and the resin and the camptothecin analog are dissolved in the solution.
[0033]
The camptothecin-related compound depends on its type, but dissolves relatively well at room temperature when it is not a mixed solution of methanol and toluene in a limited ratio like camptothecin but in a ratio close to a solution of methanol or toluene alone. Therefore, in order to increase the recovery rate of camptothecin while removing camptothecin-related compounds, it is preferable that the solution at the time of camptothecin precipitation is as close as possible to a single solvent of methanol or toluene, as can be seen from Table 2. . Since methanol or toluene has different boiling points or different amounts of dissolved substances, camptothecin can be effectively recovered by controlling the volume ratio by evaporation or the like.
[0034]
The amount of methanol to be included when camptothecin is precipitated depends on the type of camptothecin analog compound contained in the crude camptothecin and is considered to be proportional to the amount. For example, when the amount of the camptothecin-related compound contained in the crude camptothecin, which is a plant raw material, is x vol%, the amount of methanol at the end of camptothecin precipitation and methanol in the toluene solution is from x vol% to 10 x vol%. Preferably, 2 × volume% to 5 × volume% is more preferable, and 2.5 × volume% to 4 × volume% is more preferable. Thus, content of the camptothecin analog compound contained in camptothecin can be reduced by controlling the ratio of methanol contained in the final concentrated solution.
[0035]
In addition, as another impurity contained in crude camptothecin, there is a saccharide. Since saccharides are relatively difficult to dissolve in toluene, when a large amount of saccharide is contained in the crude CPT, the resorption process for adsorbing these impurities during the dissolution of crude camptothecin during recrystallization, etc. The solution may be added to the hot solution. As such an adsorbent, activated carbon is preferable.
[0036]
It is another preferred embodiment of the present invention that the recrystallization step and / or the filtration step are repeatedly performed. By repeating the recrystallization step and / or the filtration step in this manner, the purity of the purified camptothecin is increased, and a more preferable camptothecin crystal can be obtained.
[0037]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples.
[0038]
[Example 1]
(Process 1)
Crush a 1,300 Kg woodpecker (NPF) log with a crusher equipped with a 5-7 mmφ screen, add 500 L of water to the obtained NPF crushed material, leave it overnight, and then put it in a stainless steel 8,000 L extraction tank. Then, 6,500 L of methanol having a water content of 20% by volume or less was added, and extraction was performed for 60 minutes while heating to 50 ° C. The obtained methanol extract was filtered to separate the primary extract. Thereafter, 4,500 L of methanol having a water content of 20% by volume or less was newly added, and the same operation was performed again to obtain a secondary extract. All the methanol extracts were heated under a reduced pressure of −0.065 MPa using a stainless steel methanol concentrator. Thereby, methanol was distilled off from the extract, and the methanol extract was concentrated. 11 Kg of celite was added to this concentrated liquid, 200 L of toluene was further added, and the mixture was stirred for 30 minutes and then centrifuged to separate celite adsorbed with camptothecin.
[0039]
(Process 2)
Celite adsorbed with camptothecin obtained in the above step 1 was put into 1,500 L of methylene chloride and stirred while heating. After 1 hour, pressure filtration was performed to separate celite from the extract. The obtained extract was concentrated with a distiller, then transferred to a cooling bath and cooled to 20 ° C., and the precipitated crude camptothecin was filtered and washed with 20 L of methylene chloride. The washed crude camptothecin was decompressed for 6 hours, and the methylene chloride was evaporated and dried to obtain 2.4 kg of crude camptothecin having a camptothecin content of 85% or more.
[0040]
(Process 3)
1,200 L of a methylene chloride-methanol mixture (volume ratio 4: 1) was added to a stainless steel stirring dissolution tank, and 2.4 kg of the crude camptothecin obtained previously was added while stirring. 1 Kg of celite was added to this crude camptothecin solution, followed by filtration to separate insoluble matters. The obtained filtrate was transferred to a glass-lined distiller, and after methylene chloride-methanol was distilled off and concentrated, 160 L of methanol was added and the concentration was repeated until the liquid reached 320 L (liquid temperature 58 ° C.). did. The concentrate obtained by cooling this concentrated solution at 10 ° C. for 1 hour was collected by filtration. The purified crystal (single crystal) obtained in this recrystallization step was washed with 20 L of methanol, and again poured into 1,000 L of a methylene chloride-methanol mixture (volume ratio 4: 1) with stirring. The filtered liquid was concentrated, and 160 L of methanol was repeatedly added until the liquid temperature reached 58 ° C. The precipitate was collected by filtration, washed with 20 L of methanol, and dried under reduced pressure to obtain 1.2 kg of purified crystals (double crystals). The quality of the obtained double crystals was such that the camptothecin content was 98.2% by weight or more.
[0041]
[Example 2]
(Process 1)
The camptothecin adsorption celite obtained by the same method as in Step 1 of Example 1 was put into a camptothecin extractor, and 350 L of toluene and 160 L of methanol were added thereto and heated while stirring. The extract was put into a filter with a filter paper, and filtered under reduced pressure while heating. The obtained filtrate was put into a camptothecin concentrator and heated to distill off methanol and allow to cool. Crystals (crude camptothecin) precipitated in the camptothecin concentrator were collected by filtration with a vacuum filter, and 30 L of methanol was added to wash the crude camptothecin. The crude camptothecin thus obtained was dried in a vacuum dryer. Similar operations were repeated to produce crude camptothecin three times. Table 3 shows the camptothecin content (% by weight) of these crude camptothecins. The obtained crude camptothecin had a camptothecin (CPT) content of 85% by weight or more, and a high-purity intermediate was obtained for obtaining purified camptothecin.
[0042]
[Table 3]

[0043]
(Process 2)
In the above step 1, the crude camptothecin obtained and activated carbon are put into a glass lining dissolver having a capacity of 600 L, and further 500 L of a mixed solution of methanol and toluene (volume ratio 3: 7) is added and heated to roughen. Camptothecin was dissolved. After the crude camptothecin dissolved, the filter was depressurized and filtered while warming the solution. The obtained filtrate was put into a glass lining concentrator having a capacity of 600 L and stirred while heating to distill off methanol. The obtained concentrated liquid was allowed to cool for 12 hours, and the precipitated crystals were filtered and collected using a centrifuge. The obtained crystals were washed with 20 L of methanol and dried under reduced pressure to obtain purified crystals. The analysis results of the purified crystals thus obtained are shown in Table 4. In Table 4, “%” means “% by weight”. From Table 4, it can be seen that all the purified crystals contained 98% by weight or more of camptothecin (CPT), and high quality camptothecin was obtained. In addition, it can be seen that camptothecin with few impurities was obtained in the purified crystals obtained, and there were few camptothecin analogues as impurities.
[0044]
[Table 4]

[0045]
[Example 3]
The crude camptothecin (2.0 g) obtained in Step 1 of Example 2 was charged into 500 mL of a mixed solution of methanol and toluene (volume ratio 3: 7), dissolved by heating, and then filtered. The filtrate was concentrated to 100 mL, poured into 400 mL of methanol, and allowed to stand, and the precipitated crystals were collected by filtration. The obtained crystal was dried at 80 ° C. to obtain 1.4 g of camptothecin. As a result of a quantitative test on the crystals, 98.5% by weight of camptothecin and 1.4% by weight of camptothecin analogs were contained.
[0046]
【The invention's effect】
According to the present invention, it is possible to obtain a high-purity camptothecin in a high yield even when using a raw material rich in resin and chlorophyll, such as a young Japanese dogwood.
[0047]
According to the present invention, when camptothecin is extracted using a mixed solution of methanol and toluene, there is no environmental problem as seen in methylene chloride, so a special process for environmental conservation is required. Camptothecin can be obtained effectively without inconvenience. Further, according to the present invention, it is possible to easily remove impurities contained in the production of camptothecin such as camptothecin analogs by controlling the volume ratio of the mixed solution of methanol and toluene.
[0048]
By extracting camptothecin using a solution containing toluene, camptothecin can be effectively obtained from the leaves of plant raw materials containing camptothecin.
[0049]
By performing filtration using an adsorbent such as activated carbon, carbohydrates contained in the crude camptothecin can be effectively removed, and high purity camptothecin can be obtained in high yield.

Claims (7)

An extraction step of extracting camptothecin from either or both of cedarwood and elbatamia containing camptothecin;
A precipitation step in which toluene is added to the liquid obtained by concentrating the extract to dissolve the resin and chlorophyll and to precipitate camptothecin;
An adsorption step for adsorbing the precipitated camptothecin on an adsorbent;
Dissolving and extracting camptothecin adsorbed on an adsorbent using either toluene or methanol, or a mixed solution of toluene and methanol, to obtain a crude camptothecin,
A method for producing camptothecin, comprising:   The method for producing camptothecin according to claim 1, wherein in the extraction step, camptothecin is extracted using methanol or hydrous methanol.   Furthermore, the manufacturing method of the camptothecin of Claim 1 or 2 including the process of refine | purifying crude camptothecin by recrystallization. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 3 , wherein the adsorbent is celite, silica gel, or a mixture thereof. Furthermore, the manufacturing method of the camptothecin of any one of Claim 1 to 4 including the process filtered using activated carbon. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 5, wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the mixed solution of toluene and methanol is 1: 9 to 8: 2. The method for producing camptothecin according to any one of claims 1 to 5, wherein the volume ratio of methanol to toluene contained in the mixed solution of toluene and methanol is from 2: 8 to 5: 5.