JP4112345B2

JP4112345B2 - How to use plastic substrates for microarrays

Info

Publication number: JP4112345B2
Application number: JP2002339171A
Authority: JP
Inventors: 秀行島岡; 兼久横山
Original assignee: Sumitomo Bakelite Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Bakelite Co Ltd
Priority date: 2002-11-22
Filing date: 2002-11-22
Publication date: 2008-07-02
Anticipated expiration: 2022-11-22
Also published as: JP2004170351A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シグナルを蛍光量として検出するマイクロアレイ用プラスチック基板の使用方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
核酸マイクロアレイを用いたハイブリダイゼーション反応後の蛍光シグナル検出において、マイクロアレイ基板に由来する蛍光（バックグラウンド）が高いと、Ｓ／Ｎ比の低下により検出精度が低下する。ゆえに、マイクロアレイ基板の材料には低蛍光性のものを使用することが多い。また、基板表面には核酸を効率良く固定化するための化学的修飾が施されることが通常であり、アルデヒド基やアミノ基を導入したものが多用されている。これらの官能基に由来する蛍光を低減することは、マイクロアレイを用いたアッセイの精度向上の観点から重要となってくる。マイクロアレイ用基板はガラスもしくはプラスチック製であることが多いが、通常これらの材料表面は化学的に不活性であることから、核酸を固定化するためには表面修飾を施す必要がある。表面修飾としては、アルデヒド基、アミノ基などの活性な官能基を導入する場合が多い。特にアルデヒド基を導入した基板では、固定化する核酸分子にアミノ基を予め導入しておくことにより、共有結合形成による強固な固定化が可能であることから、特に塩基数が数十個以下のオリゴＤＮＡ固定化用基板として広く用いられている。（例えば特許文献１、特許文献２、特許文献３）
ガラスやプラスチックなどの表面修飾の手法として、シランカップリング剤による表面コーティングがある。この方法では、比較的簡便な工程で表面に官能基を導入することが可能であることから多用されている。例えばシランカップリング剤としてアミノアルキルシランを用いた場合、浸漬処理工程と加熱処理工程のみで表面にアミノ基を導入することが可能である。さらに、上記の方法で導入されたアミノ基に多官能性のアルデヒドを作用させることにより、基板表面にアルデヒド基を導入することができる。しかしながら、アルデヒド基を導入した場合、基板のバックグラウンド蛍光量が大幅に増大し、シグナルの検出精度が低くなってしまうため、バックグラウンド蛍光量を低減するための有効な解決手段が求められていた。
【０００３】
【特許文献１】
特開２００２−１７６９９１号公報
【特許文献２】
特開２００２−１８１８１７号公報
【特許文献３】
特表２００２−５３２６９９号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、バックグラウンド蛍光量が低減されており、シグナル蛍光の検出精度の高いマイクロアレイ用プラスチック基板の使用方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、
(１) 表面にアルデヒド基が導入されたマイクロアレイ用プラスチック基板の使用方法であって、該基板の表面の一部に生理活性物質を固定化後、アルデヒド基のアルデヒド基以外の官能基へ変換する処理工程を含むことにより基板のバックグラウンドの蛍光発生量をより低減するマイクロアレイ用プラスチック基板の使用方法であって、プラスチック基板が飽和環状ポリオレフィンからなり、アルデヒド基が基板表面へ導入されたアミノアルキルシラン由来であるアミノ基を介して多官能性アルデヒドが共有結合することにより導入されており、多官能性アルデヒドがグルタルアルデヒドであり、生理活性物質が核酸、オリゴペプチド、タンパク質、糖鎖、又は糖タンパク質のいずれかであり、アルデヒド基のアルデヒド基以外の官能基へ変換する処理工程が、金属水素化物を介したアルデヒド基の還元反応、およびアルデヒドとアルコールの付加反応によるアセタール生成反応を含み、０．１〜０．５重量％の水素化ホウ素ナトリウム、および１０〜５０体積％のエタノールを含む溶液への接触工程を含むマイクロアレイ用プラスチック基板の使用方法、
である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明に使用するマイクロアレイは、表面にアルデヒド基が導入された基板上に生理活性物質が固定化された後に、残存するアルデヒド基が他の官能基に変換されていることを特徴とする。アルデヒド基の他の官能基への変換は、基板のバックグラウンド蛍光量を低減するとともに、検出対象物質の基板表面への非特異的な吸着を抑える効果を有する。
アルデヒド基の変換の機構は、酸化反応、還元反応、付加反応、縮合反応など一般的な反応を用いることができるが、還元反応、付加反応を利用することが好ましい。アルデヒド基の還元反応には、金属水素化物を作用させることが有効である。アルデヒドにアルコールを付加することにより、アルデヒドと比べて反応性の低いアセタールに変換することができる。
【０００７】
本発明のマイクロアレイの作製工程は、基板作製工程、基板表面修飾工程、核酸固定化工程、官能基変換工程を含む。
（基板の素材）
マイクロアレイ用基板の素材は、ガラス、プラスチック、金属その他を用いることができるが、表面処理の容易性、量産性の観点から、熱可塑性樹脂が好ましい。熱可塑性樹脂としては、蛍光発生量の少ないものが好ましい。、たとえばポリエチレン、ポリプロピレン等の直鎖状ポリオレフィン、環状ポリオレフィン、含フッ素樹脂等を用いることが好ましく、耐熱性、耐薬品性、低蛍光性、成形性に特に優れる飽和環状ポリオレフィンを用いることがより好ましい。ここで飽和環状ポリオレフィンとは、環状オレフィン構造を有する重合体単独または環状オレフィンとα−オレフィンとの共重合体を水素添加した飽和重合体をさす。
【０００８】
（基板の表面修飾）
基板表面へのアルデヒド基の導入方法として好適に用いられるのは、アミノ基導入の後に多官能性アルデヒドを反応させる方法である。アミノ基の導入手段としては、アミノ基含有シランカップリング剤による処理、窒素雰囲気下でのプラズマ処理、アミノ基含有高分子物質のコーティングなどが挙げられるが、処理の簡便性、均一性の観点から、アミノ基含有シランカップリング剤による処理が好ましい。多官能性アルデヒドとしてはグルタルアルデヒドが好ましい。一般的にアルデヒド基導入工程後の基板は、未修飾の基板、および、アミノ基導入工程後の基板と比較してバックグラウンド蛍光量が高くなる。
【０００９】
（核酸の固定化）
固定化する核酸は、アルデヒド基との反応性を高めるため、予めアミノ基を導入しておくことが好ましい。アミノ基の導入位置は核酸の分子鎖末端あるいは側鎖であってもよいが、分子鎖末端に導入されていることが好ましい。固定化は通常、核酸を溶解した溶液を基板上に点着した後、適宜処理を施すことにより行う。
【００１０】
（アルデヒド基の変換）
核酸を固定化した状態では、基板上には固定化反応に寄与しなかったアルデヒド基が残存しており、そのままハイブリダイゼーション反応を行うと、非特異的な吸着・結合が生じ、Ｓ／Ｎ比の低下につながる。そのため、基板表面を何らかの方法で不活性化する必要があり、大別して２つの方法がある。すなわち、ハイブリダイゼーション反応に無関係の物質をアルデヒド基に結合・吸着させる方法（いわゆるブロッキング）、および、アルデヒド基を他の不活性な官能基に変換する方法である。前者の方法では、ブロッキング剤自体が蛍光を発する可能性があることから、バックグラウンド蛍光量の低減化の観点からは後者が好ましい。
【００１１】
以下、アルデヒド基の変換について記述する。
アルデヒド基を他の官能基に変換する手段として、金属水素化物によるアルデヒド基の還元反応を利用することができる。金属水素化物がアルデヒドに作用するとアルミニウムアルコキシドが生成し、さらに加水分解されてアルコールが生成する（Ｈ．ハート著「基礎有機化学」、培風館、１９９６年、ｐ．２４７）。金属水素化物としては、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウムなど一般的なものを用いることができ、好ましくは水素化ホウ素ナトリウムである。金属水素化物を水性媒体中に分散・溶解した溶液中に基板を浸漬することにより、基板表面のアルデヒド基を還元することができる。水性媒体は純水、緩衝塩溶液などを用いることができ、アルコールなどの有機溶媒を含んでも良い。アルコールはアルデヒドに作用し、ヘミアセタールを経由してアセタールを生成する（同上、ｐ．２４２）ため、上記の金属水素化物による還元反応と相加的に作用し、アルデヒド基の変換効率を高めることができる。また、アルコール添加の副次的効果として、金属水素化物を水性媒体に分散・溶解するさいに、水素の発生による発泡をある程度抑えることができ、均一な処理を行うことができる。
【００１２】
溶液中の金属水素化物の濃度は、好ましくは０．００１重量パーセント以上、より好ましくは０．１〜０．５重量パーセントであり、０．１〜０．３重量パーセントが最も好ましい。アルコールとしては一価あるいは多価アルコールを用いることができるが、エタノールが最も好ましい。溶液中のアルコール濃度は、好ましくは５〜５０体積パーセント、より好ましくは１０〜５０体積パーセントであり、１０〜３０体積パーセントが最も好ましい。
【００１３】
以上の方法によって作製したマイクロアレイは、アルデヒド基の他の不活性な官能基への変換により、アルデヒド基導入工程で上昇したバックグラウンド蛍光量が低減されており、さらに、アルデヒド基変換効果によりハイブリダイゼーション反応時の非特異的吸着を抑制されているため、ハイブリダイゼーション反応後のシグナルを高精度で検出することが可能である。
【００１４】
【実施例】
（実施例１）
飽和環状ポリオレフィン樹脂をスライドガラス形状（７６×２６×１ｍｍ）に加工した。表面に親水化処理を施したのち、アミノ基含有アルキルシランの２％水溶液中に浸漬後、熱処理を施して表面にアミノ基を導入した。これを１％グルタルアルデヒド水溶液中に浸漬することにより、表面のアミノ基とグルタルアルデヒドを反応させ、アルデヒド基を導入した。
１８０ｍｌのリン酸緩衝溶液中に０．６ｇの水素化ホウ素ナトリウムと５０ｍｌのエタノールを溶解させた溶液を作製した。上記の基板を５分間浸漬した後、純水で洗浄、風乾することにより、基板表面のアルデヒド基の変換を行った。その後、基板のバックグラウンド蛍光量測定を行った。
【００１５】
（参考例１）
市販の顕微鏡用スライドガラスを十分に洗浄した後、アミノ基含有アルキルシランの２％水溶液に浸漬後、熱処理を施して表面にアミノ基を導入した。これを１％グルタルアルデヒド水溶液中に浸漬することにより、表面のアミノ基とグルタルアルデヒドを反応させ、アルデヒド基を導入した。
実施例１と同様の方法でアルデヒド基の変換を行った後、バックグラウンド蛍光量を測定した。
【００１６】
（参考例２）
市販のアルデヒド基導入マイクロアレイ用基板（CEL Associates社製 Silylated Slide, CSS-25）を準備した。
実施例１と同様の方法でアルデヒド基の変換を行った後、バックグラウンド蛍光量測定を行った。
【００１７】
（比較例１）
実施例１で作製した基板を、アルデヒド基変換操作を行わないまま、バックグラウンド蛍光量を測定した。
【００１８】
（参考比較例１）
参考例１で作製した基板を、アルデヒド基変換操作を行わないまま、バックグラウンド蛍光量を測定した。
【００１９】
（参考比較例２）
参考例２の基板を、アルデヒド基の変換を行わないまま、バックグラウンド蛍光量を測定した。
【００２０】
実施例および比較例におけるバックグラウンド蛍光量の測定には、Packard BioChip Technologies社製マイクロアレイスキャナー「ScanArray」を用いた。測定条件は、レーザー出力９０％、ＰＭＴ感度７０％、励起波長６４９ｎｍ、測定波長６７０ｎｍ、解像度５０μｍであった。
いずれの実施例においても、比較例と比べてバックグラウンド蛍光量の減少が認められ、アルデヒド基の変換がバックグラウンド蛍光量の低減に有効であることが示された。
【００２１】
【表１】

【００２２】
【発明の効果】
本発明により、生理活性物質の固定化のために導入したアルデヒド基を他の官能基に変換することにより、１）基板のバックグラウンド蛍光量を低減し、２）検出対象物質の基板へ非特異的な吸着、結合を抑制したマイクロアレイの作製が可能となり、高い検出精度を有するマイクロアレイの提供が可能となった。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method of using a plastic substrate for microarray that detects a signal as a fluorescence amount.
[0002]
[Prior art]
In fluorescence signal detection after a hybridization reaction using a nucleic acid microarray, if the fluorescence (background) derived from the microarray substrate is high, the detection accuracy decreases due to a decrease in the S / N ratio. Therefore, a material having a low fluorescence is often used as a material for the microarray substrate. In addition, chemical modification for efficiently immobilizing nucleic acid is usually performed on the substrate surface, and aldehyde groups or amino groups are often used. Reducing the fluorescence derived from these functional groups is important from the viewpoint of improving the accuracy of assays using microarrays. The substrate for microarray is often made of glass or plastic, but usually the surface of these materials is chemically inactive. Therefore, surface modification is required to immobilize nucleic acids. As surface modification, active functional groups such as aldehyde groups and amino groups are often introduced. In particular, in a substrate into which an aldehyde group has been introduced, since an amino group is introduced in advance into a nucleic acid molecule to be immobilized, strong immobilization by covalent bond formation is possible. Widely used as a substrate for immobilizing oligo DNA. (For example, Patent Document 1, Patent Document 2, Patent Document 3)
As a method for surface modification of glass or plastic, there is surface coating with a silane coupling agent. This method is frequently used because it is possible to introduce a functional group on the surface by a relatively simple process. For example, when aminoalkylsilane is used as the silane coupling agent, it is possible to introduce amino groups on the surface only by the immersion treatment step and the heat treatment step. Furthermore, an aldehyde group can be introduce | transduced on the substrate surface by making a polyfunctional aldehyde act on the amino group introduce | transduced by said method. However, when an aldehyde group is introduced, the background fluorescence amount of the substrate is greatly increased and the detection accuracy of the signal is lowered. Therefore, an effective solution for reducing the background fluorescence amount has been demanded. .
[0003]
[Patent Document 1]
JP 2002-176991 A [Patent Document 2]
JP 2002-181817 A [Patent Document 3]
Japanese translation of PCT publication No. 2002-532699
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a method for using a plastic substrate for a microarray, in which the amount of background fluorescence is reduced and signal fluorescence is detected with high accuracy.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present invention
(1) A method of using a microarray plastic substrate having an aldehyde group introduced on its surface, wherein a physiologically active substance is immobilized on a part of the surface of the substrate and then converted to a functional group other than the aldehyde group of the aldehyde group A method of using a plastic substrate for a microarray that further reduces the amount of fluorescence generated in the background of the substrate by including a processing step, wherein the plastic substrate is made of a saturated cyclic polyolefin, and an aminoalkylsilane in which an aldehyde group is introduced to the substrate surface Introduced by covalent bonding of a polyfunctional aldehyde via an amino group that is derived, the polyfunctional aldehyde is glutaraldehyde, and the physiologically active substance is a nucleic acid, oligopeptide, protein, sugar chain, or glycoprotein And the aldehyde group is changed to a functional group other than the aldehyde group. Treatment steps include a reduction reaction of the aldehyde group via a metal hydride and an acetal formation reaction by addition reaction of an aldehyde and an alcohol, and 0.1 to 0.5 wt% of sodium borohydride, and 10 to 50 A method of using a plastic substrate for microarray, comprising a step of contacting a solution containing ethanol by volume,
It is.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The microarray used in the present invention is characterized in that after a physiologically active substance is immobilized on a substrate having an aldehyde group introduced on its surface, the remaining aldehyde group is converted to another functional group. Conversion of the aldehyde group into another functional group has an effect of reducing the amount of background fluorescence of the substrate and suppressing nonspecific adsorption of the detection target substance to the substrate surface.
As a mechanism for converting the aldehyde group, a general reaction such as an oxidation reaction, a reduction reaction, an addition reaction, or a condensation reaction can be used, but it is preferable to use a reduction reaction or an addition reaction. It is effective to allow a metal hydride to act on the reduction reaction of the aldehyde group. By adding an alcohol to the aldehyde, it can be converted into an acetal that is less reactive than the aldehyde.
[0007]
The microarray production process of the present invention includes a substrate production process, a substrate surface modification process, a nucleic acid immobilization process, and a functional group conversion process.
(Substrate material)
The material for the microarray substrate can be glass, plastic, metal, or the like, but a thermoplastic resin is preferable from the viewpoint of ease of surface treatment and mass productivity. As a thermoplastic resin, a thing with little fluorescence generation amount is preferable. For example, it is preferable to use linear polyolefins such as polyethylene and polypropylene, cyclic polyolefins, fluorine-containing resins, etc., and more preferable to use saturated cyclic polyolefins that are particularly excellent in heat resistance, chemical resistance, low fluorescence, and moldability. . Here, the saturated cyclic polyolefin refers to a saturated polymer obtained by hydrogenating a polymer having a cyclic olefin structure or a copolymer of a cyclic olefin and an α-olefin.
[0008]
(Substrate surface modification)
As a method for introducing an aldehyde group onto the substrate surface, a method in which a polyfunctional aldehyde is reacted after the introduction of an amino group is used. Examples of amino group introduction means include treatment with an amino group-containing silane coupling agent, plasma treatment under a nitrogen atmosphere, and coating of an amino group-containing polymer substance. From the viewpoint of simplicity of treatment and uniformity. The treatment with an amino group-containing silane coupling agent is preferred. As the polyfunctional aldehyde, glutaraldehyde is preferable. In general, the substrate after the aldehyde group introduction step has higher background fluorescence than the unmodified substrate and the substrate after the amino group introduction step.
[0009]
(Immobilization of nucleic acid)
The nucleic acid to be immobilized is preferably preliminarily introduced with an amino group in order to increase the reactivity with the aldehyde group. The amino group may be introduced at the molecular chain end or side chain of the nucleic acid, but is preferably introduced at the molecular chain end. Immobilization is usually performed by applying a treatment appropriately after spotting a solution in which nucleic acid is dissolved on a substrate.
[0010]
(Conversion of aldehyde group)
In the state in which the nucleic acid is immobilized, aldehyde groups that did not contribute to the immobilization reaction remain on the substrate. When the hybridization reaction is performed as it is, nonspecific adsorption / binding occurs, and the S / N ratio is increased. Leading to a decline. Therefore, it is necessary to inactivate the substrate surface by some method, and there are roughly two methods. That is, a method of binding and adsorbing a substance unrelated to the hybridization reaction to the aldehyde group (so-called blocking), and a method of converting the aldehyde group into another inactive functional group. In the former method, since the blocking agent itself may emit fluorescence, the latter is preferable from the viewpoint of reducing the amount of background fluorescence.
[0011]
Hereinafter, the conversion of the aldehyde group will be described.
As a means for converting the aldehyde group into another functional group, a reduction reaction of the aldehyde group with a metal hydride can be used. When a metal hydride acts on an aldehyde, an aluminum alkoxide is produced and further hydrolyzed to produce an alcohol (H. Hart, “Basic Organic Chemistry”, Baifukan, 1996, p. 247). As the metal hydride, common materials such as sodium borohydride and lithium aluminum hydride can be used, and sodium borohydride is preferable. By immersing the substrate in a solution in which a metal hydride is dispersed and dissolved in an aqueous medium, aldehyde groups on the substrate surface can be reduced. As the aqueous medium, pure water, a buffer salt solution, or the like can be used, and an organic solvent such as alcohol may be included. Alcohol acts on an aldehyde and produces acetal via hemiacetal (same as above, p. 242), and thus acts in addition to the reduction reaction by the above metal hydride to increase the conversion efficiency of the aldehyde group. Can do. Further, as a secondary effect of the addition of alcohol, foaming due to generation of hydrogen can be suppressed to some extent when the metal hydride is dispersed and dissolved in an aqueous medium, and uniform treatment can be performed.
[0012]
The concentration of the metal hydride in the solution is preferably 0.001 weight percent or more, more preferably 0.1 to 0.5 weight percent, and most preferably 0.1 to 0.3 weight percent. As the alcohol, a monohydric or polyhydric alcohol can be used, and ethanol is most preferable. The alcohol concentration in the solution is preferably 5 to 50 volume percent, more preferably 10 to 50 volume percent, and most preferably 10 to 30 volume percent.
[0013]
In the microarray produced by the above method, the background fluorescence increased in the aldehyde group introduction step is reduced due to conversion of aldehyde groups to other inactive functional groups, and further hybridization is achieved by the aldehyde group conversion effect. Since non-specific adsorption during the reaction is suppressed, the signal after the hybridization reaction can be detected with high accuracy.
[0014]
【Example】
(Example 1)
The saturated cyclic polyolefin resin was processed into a slide glass shape (76 × 26 × 1 mm). After the surface was hydrophilized, it was immersed in a 2% aqueous solution of an amino group-containing alkylsilane and then heat treated to introduce amino groups on the surface. This was immersed in a 1% glutaraldehyde aqueous solution to react the surface amino groups with glutaraldehyde to introduce aldehyde groups.
A solution was prepared by dissolving 0.6 g of sodium borohydride and 50 ml of ethanol in 180 ml of phosphate buffer solution. The substrate was immersed for 5 minutes, washed with pure water, and air-dried to convert aldehyde groups on the substrate surface. Then, the background fluorescence amount measurement of the board | substrate was performed.
[0015]
(Reference Example 1)
A commercially available glass slide for a microscope was thoroughly washed, immersed in a 2% aqueous solution of an amino group-containing alkylsilane, and then heat treated to introduce amino groups on the surface. This was immersed in a 1% glutaraldehyde aqueous solution to react the surface amino groups with glutaraldehyde to introduce aldehyde groups.
After converting the aldehyde group by the same method as in Example 1, the background fluorescence was measured.
[0016]
(Reference Example 2)
A commercially available substrate for an aldehyde group-introduced microarray (Cil Associates, Silylated Slide, CSS-25) was prepared.
After converting the aldehyde group by the same method as in Example 1, the background fluorescence was measured.
[0017]
(Comparative Example 1)
The background fluorescence was measured for the substrate produced in Example 1 without performing the aldehyde group conversion operation.
[0018]
(Reference Comparative Example 1)
The background fluorescence amount was measured for the substrate produced in Reference Example 1 without performing the aldehyde group conversion operation.
[0019]
(Reference Comparative Example 2)
The background fluorescence amount of the substrate of Reference Example 2 was measured without converting the aldehyde group.
[0020]
A microarray scanner “ScanArray” manufactured by Packard BioChip Technologies was used for measurement of the amount of background fluorescence in Examples and Comparative Examples. The measurement conditions were laser output 90%, PMT sensitivity 70%, excitation wavelength 649 nm, measurement wavelength 670 nm, and resolution 50 μm.
In any of the examples, a decrease in the background fluorescence amount was observed as compared with the comparative example, indicating that the conversion of the aldehyde group is effective in reducing the background fluorescence amount.
[0021]
[Table 1]

[0022]
【The invention's effect】
According to the present invention, by converting an aldehyde group introduced for immobilization of a physiologically active substance into another functional group, 1) the background fluorescence amount of the substrate is reduced, and 2) the non-specificity of the detection target substance to the substrate is reduced. It is possible to produce a microarray that suppresses general adsorption and binding, and it is possible to provide a microarray having high detection accuracy.

Claims

A method of using a plastic substrate for microarray having an aldehyde group introduced on the surface, wherein a bioactive substance is immobilized on a part of the surface of the substrate and then converted into a functional group other than the aldehyde group of the aldehyde group. A method of using a plastic substrate for microarray, characterized in that the amount of fluorescence generated in the background of the substrate is further reduced by including,
The plastic substrate is made of a saturated cyclic polyolefin, and the polyfunctional aldehyde is introduced by covalent bonding through an amino group derived from an aminoalkylsilane having an aldehyde group introduced on the substrate surface. An aldehyde, a physiologically active substance is any one of a nucleic acid, an oligopeptide, a protein, a sugar chain, or a glycoprotein, and the process of converting the aldehyde group into a functional group other than the aldehyde group is an aldehyde via a metal hydride A step of contacting a solution containing 0.1 to 0.5% by weight of sodium borohydride and 10 to 50% by volume of ethanol, including a group reduction reaction and an acetal formation reaction by addition reaction of an aldehyde and an alcohol. A method for using a plastic substrate for microarrays.