JP3906992B2 - New bread production method - Google Patents
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Description
【0001】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規パンの製造に関するものであり、更に詳細には、新規パン酵母を用いて、従来未知の新しいタイプのパン、特に従来にない風香味を有するパンを効率的に製造する技術に関するものである。
【0002】
【従来の技術】
近年、製パン業界では、工程の合理化、効率化のため、また、食嗜好の多様化等消費者サイドからの各種のニーズにも対応するため、各種の要望が数多くなされている。例えば、消費者からの強い要望である焼き立てパンの効率的提供のために、冷凍パン生地を利用することが行われるようになり(そのために、冷凍耐性パン酵母という新しいタイプの酵母が開発され:例えば、特許文献1参照)、また、ひとつの酵母で食パンにも菓子パンにも使用できるような高糖生地・低糖生地兼用の新規パン酵母も新たに育種、開発されて、作業効率を高めるだけでなく、嗜好性の面でも高い評価を受けるパンの製造方法も開発されている(例えば、特許文献2参照)。
【0003】
【特許文献1】
特開平9−234058号公報
【0004】
【特許文献2】
特開平9−149785号公報
【0005】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、上記した製パン業界及び消費者サイドからの要望の内、食嗜好の多様化から、従来にない新しいタイプのパンに対する消費者の要望が強いことに着目し、特に風味、香りの面において従来にない全く新しいタイプのパンを効率的に製造するという技術課題を設定した。
【0006】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記技術課題を解決する目的でなされたものであって、本発明者らは、各方面から検討の結果、製パン工程ではなくパン製造用酵母に着目し、新規酵母を育種することによって目的を達成することとした。
【0007】
パン製造用酵母(以後、パン酵母とする)の重要な発酵能力は、小麦粉を主成分とした生地中において、速やかに炭酸ガスを発生させ、生地を大きく膨張させることである。その一方、清酒、ワイン、ビールなどの酒類製造用の醸造酵母では、原料の違いはあるものの、糖分からアルコールを生成することが最も重要な発酵性能であり、同じ酵母Saccharomyces cerevisiae(サッカロマイセス・セレビシエ)ではあるが、求められる基本的な発酵性質が異なる。つまり、醸造酵母は、アルコール収率に重点が置かれ、選抜・育種されてきた背景から、通常、パン酵母に求められる生地中での炭酸ガス発生能は低下していることが多く、それゆえ、製パンには適応しがたく、不向きとされてきた。
【0008】
また、既述したように、昨今の食嗜好の多様化から、主食の一つであるパンにも多様な特徴が求められる様になっている。その中の一つの話題に香気がある。より独特な特徴のある香りを有するパン、逆に香りの少ないパンなどが求められ、味や食感といったこれまでの観点とは異なる嗜好性分野が生じてきている。
【0009】
このような業界の現状において、本発明者らは、製パンのみにとらわれることなく広範囲に検討を行った結果、酒類などの醸造発酵性飲料では、古くからその香気を楽しみ、差別化する環境があったことに注目した。つまり、醸造発酵性飲料を製造するために用いられる酵母(要するに、醸造酵母であるが)は、パン酵母にない、あるいはより発達した香気成分生成機構を有していることに着目したのである。醸造酵母を製パンへ応用することで、パンに新たな香りの特徴を提案できる可能性があるとの着想を得、本発明者らは、醸造酵母の中から、製パン性能をも兼ね備える菌株を選抜、あるいはそれを基本に育種・改良することで、パンの香り嗜好の多様化に対応できるとの着想を得た。
【0010】
また、醸造酵母の中で、とりわけビール製造用酵母(以後、ビール酵母とする)は、菌体中に、ビタミン、ミネラル、蛋白質などを豊富に含んでいることから、乾燥菌体は、栄養補助食品に利用され、また、菌体に含まれる蛋白質や核酸などを分解・抽出した酵母エキスは、調味料素材や微生物栄養源として利用されており、近年、ビール酵母の健康指向性は高まっており、消費者の関心の的である。ビール酵母を使用することは、パン香気に特徴を付与するのと同時に、より話題性を高め、パン商品の付加価値を高めることでもある。そこで、本発明者らは、醸造酵母の中でも、ビール酵母を素材に製パン性能の高い菌株を選抜することとした。
【0011】
ビール酵母は、ビールの製造工程から説明すると、大きく2つに大別される。上面発酵酵母と下面発酵酵母である。上面発酵酵母は、Saccharomyces cerevisiae(サッカロマイセス・セレビシエ)に属し、発酵中に発生する炭酸ガスとともにビール仕込みタンクの液面に浮かんできて、泡とともに厚い褐色のクリーム状の層を形成する。下面発酵酵母は、Saccharomyces carlsbergensis(サッカロマイセス・カールスベルゲンシス)に属し(現在、微生物学の分類上では、S.cerevisiaeと同属種に区分させる)、液面には浮かばず、発酵末期に沈殿する性質を有する。
【0012】
これら上面及び下面発酵酵母の内、炭酸ガスを多く生成する、つまりパン酵母に求められる条件を潜在的に持ち合わせている酵母は上面発酵酵母であることは容易に推察できるところである。しかしながら、本発明者らは、発想を転換して、解決すべき技術課題が従来にない新しいタイプの製パンである点に鑑み、あえて予測とは逆に、パン酵母に不向きとされる下面発酵酵母に着目した。
【0013】
そして、本発明者らは、非常に多数の下面発酵酵母について広範なスクリーニングを行ったが、目的とする酵母を得るには至らなかった。そこで、目的とする酵母を得るには、野生株の単なるスクリーニングでは目的が達成されないとの観点にたち、目的とする酵母を積極的に育種する必要を認めた。しかしながら、1回の操作では目的とする酵母を分離することはできなかった。
【0014】
そこで、本発明者らは、鋭意研究の結果、ランダムではなくシステマティックに段階をおって育種する必要性を認めた。そして、本発明の目的に適合したパン酵母を育種するには、第1段階として、ビール酵母保存菌株の内から、糖蜜を基本成分とする培地で生育し得る菌株をスクリーニングして第1次選抜を行った後、第2段階として、炭酸ガス発生量の多い菌株をスクリーニングして、第2次選抜を行った。
【0015】
しかしながら、第2次選抜で得た菌株も、製パン可能な最低限の炭酸ガス発生量しか示さず、直ちに実用に供し得るものではなかったので、鋭意検討の結果、第3段階として、突然変異処理することとした。その結果、例えば変異誘発剤としてエチルメタンスルホネート(EMS)を使用して得た変異株は、炭酸ガス発生量が高く、充分製パンに使用できることが確認された。
【0016】
そこで、この変異株を用いて製パンしたところ、ガス発生量が元株に比して大幅に改善されただけでなく、一般用パンイーストで製造したパンと比較しても遜色がないばかりか、香りが全く異なることが官能検査からもまた香気成分の機器分析からも確認され、全く新しいパンの製造にはじめて成功するに至った。
【0017】
このように、本発明に係るパンは従来未知の全く新しいタイプのものであって、特に風香味に特徴を有している。そして、このような新規なパンを製造するのに成功した源であるビール酵母由来のパン酵母も新規であって、その内の1株をサッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)Ni−NB0301と命名し、この新規菌株を特許生物寄託センターにFERM P−19190として寄託した。
【0018】
本菌株は、ビール酵母(特に、サッカロマイセス・カールスベルゲンシス:Saccharomyces carlsbergensis)を親株とし、糖蜜を基本成分とした培地を用いた培養が可能であり;後記するように抗生物質耐性を有し;生地発酵性が高く(つまり、製パン性にすぐれ);従来にない風香味を有する新しいタイプのパンを製造できる;といった特徴を有するものであって、このような菌株は、従来知られておらず、新規である。また、このような菌株を含有する生地、それを用いて製造したパンも、新規である。
【0019】
以下、本発明について詳述する。
【0020】
「第1段階目」として、ビール酵母中より、通常のパン酵母を培養する条件で容易に培養可能な菌株を選抜した。現在、工業レベルにおけるパン酵母の培養は、菌体収量が発酵性糖分に対して最大となる様に設計されており、おおよそその収率は50%である。つまり、1kgの糖から、500gの菌体が生産できる。ところが、様々な負の要因が関与し、その歩留まりが低下することがある。その一つとして、廃糖蜜(以後、糖蜜とする)の性質があげられる。酵母は、ブドウ糖(グルコース)の様な構造の簡単な糖は速やかに吸収し、資化するが、複雑な糖は、その代謝が遅れる。つまり単位時間当たりの菌体生育が低下する。発酵性糖分を供給するために通常は、糖蜜が用いられる。つまり、糖蜜中の糖分が酵母生育に与える影響、いわゆる「相性」が重要であり、菌株を選択する上で、糖蜜を糖源に培養が十分に可能であることが、最重要ポイントのひとつである。
【0021】
発明者らの研究室保存のビール酵母菌株群を、糖蜜を基本成分とする培地で生育させた。保存菌株は、American Type Culture Collection(ATCC)より分譲いただき、保存している醸造用に選別された野生株であり、Saccharomyces carlsbergensis(サッカロマイセス・カールスベルゲンシス)である。供試菌株数は、29株であり、試験番号およびATCC番号は、下記の通りである。
【0022】
No. 1−ATCC 2345 No. 2−ATCC 2700 No. 3−ATCC 9080
No. 4−ATCC 9373 No. 5−ATCC 10596 No. 6−ATCC 24556
No. 7−ATCC 24904 No. 8−ATCC 24966 No. 9−ATCC 26251
No.10−ATCC 26602 No.11−ATCC 26789 No.12−ATCC 28518
No.13−ATCC 28519 No.14−ATCC 28520 No.15−ATCC 28521
No.16−ATCC 28522 No.17−ATCC 28523 No.18−ATCC 28524
No.19−ATCC 28827 No.20−ATCC 36265 No.21−ATCC 36266
No.22−ATCC 36267 No.23−ATCC 42367 No.24−ATCC 44966
No.25−ATCC 46787 No.26−ATCC 46991 No.27−ATCC 60728
No.28−ATCC 60729 No.29−ATCC 60730
【0023】
なお、No.8菌株(ATCC 24966)は、ビール醸造用酵母であって下記文献にも記載されており、別途入手したものである。B.Hess(Saccharomyces carlsbergensis)。ビール醸造用酵母、ピルビン酸キナーゼの生産(Hoppe−Seylers Z.Physiol.Chem.352:139−150、1970;ibid.,353:435−440、1972)。
【0024】
YPD保存用寒天スラント上に生育した上記ビール酵母群を、それぞれ一白金耳量、無菌的に、大型試験管で5ml容に調製したYPD液体培地に接種した。これを30℃、一昼夜、振とう培養をした。YPD培地の組成は、20g/Lポリペプトン、10g/L酵母エキス、20g/Lグルコース、pH5.2とした。得られた培養液を、500ml容坂口振とうフラスコで120ml容に調製した糖蜜基本培地に全量を接種し、30℃、48時間、振とう培養をした。糖蜜基本培地の組成は、1.9g/L硫酸アンモニウム、1.3g/L尿素、0.5g/Lリン酸二水素カリウム、0.5g/L硫酸マグネシウム七水和物、発酵性糖分25g/L相当糖蜜、pH5.2とした。得られた培養液中から酵母菌体を回収するため、遠心分離した。分離菌体を無菌水にて2回洗浄し、再度、無菌水に懸濁した。この溶液の酵母乾物量を測定し、単位発酵性糖分当たりの酵母収率を算出した。この酵母溶液は、使用まで暗所、冷蔵保存した。
【0025】
供試ビール酵母29株中、糖蜜基本培地での単位発酵性糖分当たりの酵母収率が40%以上であった菌株、つまり、糖蜜を糖源に容易に培養が可能であったと考えられた菌株は、下記18株であり、1次選抜株とした。
【0026】
No. 3−ATCC 9080 No. 4−ATCC 9373 No. 5−ATCC 10596
No. 6−ATCC 24556 No. 8−ATCC 24966 No. 9−ATCC 26251
No.10−ATCC 26602 No.11−ATCC 26789 No.13−ATCC 28519
No.15−ATCC 28521 No.16−ATCC 28522 No.17−ATCC 28523
No.18−ATCC 28524 No.22−ATCC 36267 No.23−ATCC 42367
No.26−ATCC 46991 No.27−ATCC 60728 No.28−ATCC 60729
【0027】
「第2段階目」として、調製した酵母溶液を用い、パン生地を作製し、発酵させ、発酵段階で発生する炭酸ガス量を計測した。つまり、日本イースト工業会法の手法に従い、小麦粉100g仕込みの中種配合で、無糖生地を調製し、ファーモグラフにて、炭酸ガスの発生量を計測した。調製生地40gを計測瓶に詰め、5分毎に120分間の発生ガス量を調べ、90分後のトータルガス発生量を比較した。その結果を、図1に示した。一般用パンイースト(日本甜菜製糖株式会杜製)のガス発生量を対照区とした時、1次選抜のビール酵母は、全て100%を下回り、大部分が製パンには、不十分と考えられた。しかし、No.8−ATCC 24966株は、80%を越えており、製パン可能な最低限のレベルを確保していたことから、この株を2次選抜株とした。
【0028】
ところが、2次選抜株ATCC 24966株の生地中における炭酸ガス発生量は、先にも記述した通り、製パン可能な最低限のレベルであり、通常パン酵母と比較して、生地膨張力が弱い実体にあると考察された。そこで、「第3段階目」として、2次選抜株ATCC 24966株を素材とし、これを適当な化学薬品で直接処理し、人工突然変異を誘発し、元株より生地発酵性能が改善された菌株を取得することを行った。
【0029】
人工突然変異を利用し、菌株の生産性を向上させたり、これまでにはない形質を新たに付与することは、産業上、頻繁に行われており、成功例が多い。その中でも菌の染色体DNAを直接アタックし、変異させる薬剤が中心に使用されている。本発明では、酵母で最も使用頻度の高いエチルメタンサルホネート(EMS)を用いた。EMSの様なアルキル化剤使用では、DNA中のグアニンの7位をアルキル化し、4級アンモニウム窒素を生じさせ、デオキシリボシド結合が不安定になり切断されやすくなる。すなわち、脱グアニンを起こし、修復機構で修復されても、異なった塩基が入ることが可能であり、その結果、変異が導入されると考えられている。一度導入された変異が復帰する可能性が低いのが、本法の特徴である。
【0030】
なお、突然変異処理としては、上記のほか、γ線、紫外線、温度差等の物理的処理、および、エチジウムブロマイド、ナイトロジェンマスタード、ジエポキシブタン、コルヒチン、パーオキサイド、プリン誘導体、N−メチル−N'−ニトロ−N−ニトロソグアニジン等変異誘導剤処理といった常法が適宜利用できる。
【0031】
また、本技術には、EMS処理等の突然変異処理した菌株から効率良く目的(生地発酵性能が向上した)の菌株を選抜する操作が必要である。これには菌体を生育させる培地中に、適当な抗真菌剤を混合し、この培地中に生育可能となった菌株を選抜することで解決できると考えた。これは、適度な抗生物質抵抗性を獲得した菌体は、基本的な生育、糖代謝、発酵性などの能力が向上することが多い点に着目したものであり、抗真菌剤としては、各種使用可能であり、例えばクロトリマゾールが非限定的に例示される。
【0032】
つまり、YPD保存用寒天スラント上のATCC 24966株を、一白金耳量、無菌的に、大型試験管で5ml容に調製したYPD液体培地に接種した。これを30℃、一昼夜、振とう培養をした。菌体を回収するため、遠心分離を行った。その後、1.0×10の8乗細胞個/mlの濃度となるように、SD培地に再懸濁した。ここに、終濃度が2%となるように、EMSを加えた。SD培地の組成は、20g/Lグルコース、6.7g/L酵母ニトロゲンベース(アミノ酸フリー)とした。このEMS反応液を30℃、30分間保温した。先に、この処理によって致死率が50%程度になることを確認している。
【0033】
反応後、遠心分離によって菌体を回収し、5%チオ硫酸ナトリウム溶液で1回、無菌水で2回洗浄した。この菌体を無菌水に再懸濁し、適当量に希釈し、終濃度で20μg/mlとなるように、クロトリマゾールを添加したSD培地上に塗抹した。塗抹培地を、30℃、2〜3日間、静置培養した。この静置培養の際、プレート上に先に出現し、比較的大きく形成したコロニーを陽性コロニーとして選抜した。1.0×10の11乗細胞個を変異処理して、15株の陽性コロニーを取得した。菌株番号を下記の通りとした。
【0034】
No. 1−NiNB03−1 No. 2−NiNB03−2 No. 3−NiNB03−3
No. 4−NiNB03−4 No. 5−NiNB03−5 No. 6−NiNB03−6
No. 7−NiNB03−7 No. 8−NiNB03−8 No. 9−NiNB03−9
No.10−NiNB03−10 No.11−NiNB03−11 No.12−NiNB03−12
No.13−NiNB03−13 No.14−NiNB03−14 No.15−NiNB03−15
【0035】
取得した15株を、先に記した糖蜜基本培地を用いて培養し、菌体を回収し、その菌体を用い、先に記した日本イースト工業会法の手法に従い、パン生地を作製し、発酵させ、発酵段階で発生する炭酸ガス量を計測した。小麦粉100g仕込みの中種配合で、無糖生地を調製し、ファーモグラフにて、炭酸ガスの発生量を計測した。その結果を、図2に示した。変異処理前のATCC 24966元株(対照区)と比較して、優位にガス発生量が改善され、一般用パンイースト(対照区)と比較しても、遜色のない菌株を1菌株取得した。No.5−NiNB03−5である。つまり、本菌株は、糖蜜培地で良好な生育を示し、パン生地発酵性能が改良され、ビール酵母を起源とするが、通常パン酵母として十分に使用可能なレベルに改善された有能菌株であると考えられる。
【0036】
本菌株を、「Saccharomyces cerevisiae(サッカロマイセス・セレビシエ)Ni−NB0301株」と命名し、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに、受託番号FERM P−19190として登録した。
【0037】
本発明により、新しいタイプのパンを製造し得る新規酵母が明らかにされたので、上記したような工程を経ることなく、ビール酵母、野生酵母、各機関が保存しておりあるいは販売している酵母等をスクリーニングすることによって、直接、目的菌株を育種することもできるし、突然変異処理した後に、目的菌株を育種することも可能である。その際、クロトリマゾール等の抗生物質添加培地を選択培地として使用すると、目的菌株の選択が効率的に行われる。そして、このようにして得た新規パン酵母を使用することにより、独特の香味を有する新しいタイプのパンを効率的に製造することができる。
【0038】
本発明の実施例を以下に示す。
【0039】
実施例1:Saccharomyces cerevisiae (サッカロマイセス・セレビシエ)Ni−NB0301株を用いた製パン試験
Ni−NB031株を2L容ジャーファメンターで培養し、菌体を大量製造した。500ml容坂口振とうフラスコで、糖蜜基本培地を用い、各供試菌株について使用種菌量12gに見合う本数の培養を行い、遠心分離により菌体を回収し、無菌水にて2回洗浄したものを種菌とした。培養温度30℃における飽和溶存酸素量2ppm以上を維持し、糖蜜流加培養を行った。流加糖蜜量は、81.27g、培養時間は、11.5時間、攪拌数は、700rpmで行った。窒素源は、尿素あるいは硫酸アンモニウムを使用し、ビタミン類、その他の塩類は適宜加えた。培養後、菌体は、遠心分離にて回収し、洗浄した。
【0040】
培養菌体を用い、日本イースト工業会の食パン4時間中種法仕込み法に従い、食パンを焼成した。その時の結果を表1に示した。Ni−NB0301株を使用した食パンは、ATCC 24966株使用パンより、優れたスコアーを示し、一般用イースト使用パンと、遜色のない結果となった。
【0041】
【0042】
更に、各菌株について、液体発酵力の測定を行った。同測定は以下によって行った。すなわち、「Influence of Dough Constituents on Fermentation (Cereal Chemistry,Vol.22(1945)」に記載の組成において、発酵培地の炭素源を10%のスクロースとしたもの(F10)、40%のスクロースとしたもの(F40)、8%のマルトースとしたもの(M8)を用い、200mgの乾物重量の酵母が、30℃、3時間で発生する炭酸ガス発生量(mg)を重量法で求めた。
【0043】
得られた結果を下記表2に示した。その結果から明らかなように、Ni−NB0301株(A)を使用した食パンは、ATCC 24966株(B)使用パンより、優れた発酵性を示し、一般用イースト(C)使用パンと同等ではないが、実用性が確認された。
【0044】
【0045】
実施例2: Saccharomyces cerevisiae(サッカロマイセス・セレビシエ)Ni−NB0301株を用いた食パンの香気成分分析
実施例1において焼成した食パンで、Ni−NB0301株と一般用イースト使用分について、食パンの香気成分を分析した。ガスクロマトグラフ質量分析計(GC−MS、日立製作所 モデルM2500)を用い、TENAX捕集装置に香気成分を捕集し、加熱脱着後、分析を行った。その結果を、図3に示した。
【0046】
その結果から明らかなように、Ni−NB0301株使用のパンは、一般用イースト使用パンとは、明らかに香りのパターンが相違している、具体的には例えば、エタノール、n−プロパノール、イソブタノール、イソアミルアルコール、アセトイン、酢酸、2一エチルヘキサノール、およびフェネチルアルコールなどの個々の香気物質含量が異なり、独特の特徴のある香りを有した食パンであると判断された。このような香気成分のパターンを示すパンは従来報告されていないし、実際に香りをかいだり試食したりしてみた結果からも、このようなパンは従来知られておらず、新規であることが確認された。
【0047】
本菌株使用に係るパンは、一般用イーストに係るパンに比して、官能面からは、香気の出力値が低いため、マイルドな好ましい香りを有し、成分分析面からは、アセトインの量は多いものの、イソブタノールやイソアミルアルコールの量は少なくなっており、本菌株はアルコール(エタノール)生産性が高いビール酵母由来であるにもかかわらず、エタノール生産量は、エタノール生産を主機能としないパン酵母(一般用イースト)よりも低い点も確認された。
【0048】
【発明の効果】
本発明によって、従来未知の全く新しいタイプのパン酵母が育種、分離された。本菌株は、ビール酵母を親株とし、これを突然変異処理して得られたものであるが、糖蜜含有培地で良く生育し、発酵力が高くて製パン性にすぐれ、抗生物質耐性を有し、新しいタイプのパン、特に風香味に関して従来にない、パンを製造し得るものであり、パンの多様化を希求している消費者のニーズにも適合している。また、本発明に係る新規菌株は、人工的に突然変異させた菌株から選択するほか、保存菌株、野生株等からスクリーニングして分離することも可能である。
【図面の簡単な説明】
【図1】第2段階目における各菌株のガス発生量の相対値を示す。
【図2】第3段階目における人工突然変異株のガス発生量の相対値を示す。
【図3】一般用イースト及びNi−NB0301株を用いて製造したパンの香気成分の測定結果を示す。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to the production of new bread, and more particularly, to a technique for efficiently producing a new type of bread that has not been conventionally known, particularly a bread having an unprecedented flavor, by using a new baker's yeast. Is.
[0002]
[Prior art]
In recent years, in the bakery industry, various requests have been made in order to streamline processes and improve efficiency, and to respond to various needs from the consumer side such as diversification of food preferences. For example, in order to efficiently provide freshly baked bread, which is a strong demand from consumers, the use of frozen bread dough has been carried out (for this reason, a new type of yeast called frozen tolerant bread yeast has been developed: In addition, new baker's yeast for both high sugar dough and low sugar dough that can be used for bread and confectionery bread with a single yeast has been newly bred and developed to increase work efficiency. A bread manufacturing method that has been highly evaluated in terms of palatability has also been developed (see, for example, Patent Document 2).
[0003]
[Patent Document 1]
Japanese Patent Laid-Open No. 9-234058
[Patent Document 2]
JP-A-9-149785
[Problems to be solved by the invention]
From the diversification of food preferences among the above-mentioned demands from the bakery industry and the consumer side, the present inventors pay attention to the strong consumer demand for a new type of bread that has not existed in the past. The technical challenge of efficiently producing a completely new type of bread that has never existed in terms of fragrance was set.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
The present invention has been made for the purpose of solving the above technical problem, and as a result of examination from various directions, the present inventors pay attention to yeast for bread production instead of the bread making process, and breed new yeast. The purpose was achieved.
[0007]
An important fermentative ability of bread-producing yeast (hereinafter referred to as bread yeast) is to quickly generate carbon dioxide in the dough mainly composed of wheat flour to greatly expand the dough. On the other hand, in brewing yeast for producing alcoholic beverages such as sake, wine and beer, although there are differences in raw materials, the most important fermentation performance is to produce alcohol from sugar, and the same yeast Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae) However, the basic fermentation properties required are different. In other words, brewer's yeast often has a reduced ability to generate carbon dioxide in the dough, which is usually required for baker's yeast, because of the background of selection and breeding with an emphasis on alcohol yield. It has been considered unsuitable for bread making and unsuitable.
[0008]
In addition, as described above, due to the recent diversification of food preferences, various characteristics are required for bread, which is one of staple foods. One topic is fragrance. Bread with a scent with more unique characteristics, and bread with less scent, on the contrary, has been demanded, and a palatability field different from conventional viewpoints such as taste and texture has arisen.
[0009]
In the current state of the industry, the present inventors have conducted extensive studies without being limited only to bread making, and as a result, brewed fermented beverages such as liquors have long enjoyed the aroma and differentiated environments. I noticed that there was. In other words, we focused on the fact that the yeast used to produce a brewed fermentable beverage (in short, it is a brewer's yeast) has a fragrance component generation mechanism that is not found in baker's yeast or that is more developed. By applying brewer's yeast to bread making, the idea that there is a possibility of proposing a new fragrance characteristic to bread was obtained, and the inventors of the present invention are strains that also have bread making performance from brewer's yeast. The idea of being able to cope with the diversification of bread scent preference by selecting or breeding and improving on the basis of it.
[0010]
In addition, among brewer's yeast, especially yeast for beer production (hereinafter referred to as brewer's yeast) contains abundant vitamins, minerals, proteins, etc. in the microbial cells. Yeast extracts that are used in foods and that decompose and extract proteins and nucleic acids contained in bacterial cells are used as seasoning materials and microbial nutrient sources. In recent years, the health orientation of brewer's yeast has increased. , The focus of consumer interest. The use of brewer's yeast not only imparts characteristics to the bread aroma, but also increases the topicality and increases the added value of bread products. Therefore, the present inventors selected a strain having high bread-making performance using brewer's yeast as a raw material among brewing yeasts.
[0011]
If it explains from a manufacturing process of beer, beer yeast will be divided roughly into two. These are top fermentation yeast and bottom fermentation yeast. The top fermenting yeast belongs to Saccharomyces cerevisiae, and floats on the liquid surface of the beer charging tank together with carbon dioxide generated during fermentation, and forms a thick brown cream-like layer with foam. Bottom fermentation yeast belongs to Saccharomyces carlsbergensis (Saccharomyces carlsbergensis) (currently classified as S. cerevisiae in the microbiological classification), does not float on the liquid surface, and precipitates at the end of fermentation Have
[0012]
Of these upper and lower fermented yeasts, it is easily guessed that the yeasts that produce a large amount of carbon dioxide gas, that is, potentially have the conditions required for baker's yeast, are upper fermented yeasts. However, the present inventors changed the way of thinking, and in view of the fact that the technical problem to be solved is a new type of breadmaking that does not exist in the past, contrary to prediction, the bottom fermentation that is unsuitable for baker's yeast Focused on yeast.
[0013]
And although the present inventors performed extensive screening about a very large number of bottom fermentation yeasts, they did not reach the target yeast. Therefore, in order to obtain the target yeast, it was recognized that it was necessary to actively breed the target yeast from the viewpoint that the purpose could not be achieved by simply screening wild strains. However, the target yeast could not be separated by one operation.
[0014]
Therefore, as a result of earnest research, the present inventors recognized the necessity of breeding in stages systematically rather than randomly. In order to breed baker's yeast suitable for the purpose of the present invention, as a first step, a strain capable of growing in a medium containing molasses as a basic component is screened from the brewer's yeast-preserving strains for the first selection. Then, as a second stage, a strain having a large amount of carbon dioxide gas was screened and a second selection was performed.
[0015]
However, since the strain obtained by the second selection also showed only the minimum amount of carbon dioxide generation that can be baked, it was not immediately available for practical use. It was decided to process. As a result, it was confirmed that, for example, a mutant obtained using ethyl methanesulfonate (EMS) as a mutagen has a high carbon dioxide gas generation amount and can be sufficiently used for baking.
[0016]
Therefore, when bread was made using this mutant strain, not only the gas generation was greatly improved compared to the original strain, but it was not inferior to bread made with general-purpose bread yeast. It was confirmed by sensory tests and instrumental analysis of fragrance ingredients that the scents were completely different, and it was the first time to produce a completely new bread.
[0017]
As described above, the bread according to the present invention is a completely new type which has not been known so far, and is particularly characterized by flavor. And the baker's yeast derived from brewer's yeast, which is a source that has succeeded in producing such a new bread, is also new, and one strain thereof is named Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae) Ni-NB0301, This new strain was deposited as FERM P-19190 at the Patent Organism Depositary.
[0018]
This strain can be cultured using a beer yeast (in particular, Saccharomyces carlsbergensis) as a parent strain and a medium containing molasses as a basic component; has antibiotic resistance as described later; These strains have characteristics such as high fermentability (that is, excellent bread-making properties), and the ability to produce a new type of bread having an unprecedented flavor. New. Moreover, the dough containing such a strain and the bread manufactured using it are also novel.
[0019]
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
[0020]
As the “first stage”, strains that can be easily cultured under conditions for culturing ordinary baker's yeast were selected from among brewer's yeast. Currently, the cultivation of baker's yeast at an industrial level is designed so that the yield of bacterial cells is maximized with respect to fermentable sugars, and the yield is approximately 50%. That is, 500 g of cells can be produced from 1 kg of sugar. However, various negative factors are involved, and the yield may decrease. One of these is the nature of molasses (hereinafter referred to as molasses). Yeast quickly absorbs and assimilates simple sugars such as glucose (glucose), but complex sugars are slow to metabolize. That is, the cell growth per unit time decreases. Molasses is usually used to supply fermentable sugar. In other words, the effect of sugar content in molasses on yeast growth, so-called “compatibility”, is important. One of the most important points in selecting a strain is that it can be cultured using molasses as a sugar source. is there.
[0021]
A group of brewer's yeast strains stored in the laboratory of the inventors was grown in a medium containing molasses as a basic component. The storage strain is a wild strain selected from the American Type Culture Collection (ATCC) and selected for brewing, and is Saccharomyces carlsbergensis (Saccharomyces carlsbergensis). The number of test strains is 29, and the test number and ATCC number are as follows.
[0022]
No. 1-ATCC 2345 No. 2-ATCC 2700 No. 3-ATCC 9080
No. 4-ATCC 9373 No. 5-ATCC 10596 No. 6-ATCC 24556
No. 7−ATCC 24904 No. 8−
No.10-ATCC 26602 No.11-ATCC 26789 No.12-ATCC 28518
No.13−ATCC 28519 No.14−ATCC 28520 No.15−ATCC 28521
No.16-ATCC 28522 No.17-ATCC 28523 No.18-ATCC 28524
No.19-ATCC 28827 No.20-ATCC 36265 No.21-ATCC 36266
No.22-ATCC 36267 No.23-ATCC 42367 No.24-ATCC 44966
No.25-ATCC 46787 No.26-ATCC 46991 No.27-ATCC 60728
No.28-ATCC 60729 No.29-ATCC 60730
[0023]
In addition, No. Eight strains (ATCC 24966) are yeast for beer brewing and are also described in the following literature, and were obtained separately. B. Hess (Saccharomyces carlsbergensis). Production of beer brewing yeast, pyruvate kinase (Hoppe-Seylers Z. Physiol. Chem. 352: 139-150, 1970; ibid., 353: 435-440, 1972).
[0024]
The brewer's yeast group grown on the YPD storage agar slant was inoculated into a YPD liquid medium prepared in a volume of 5 ml in a large test tube aseptically in a platinum loop amount. This was cultured with shaking at 30 ° C. all day and night. The composition of the YPD medium was 20 g / L polypeptone, 10 g / L yeast extract, 20 g / L glucose, pH 5.2. The whole amount of the obtained culture solution was inoculated into a molasses basic medium prepared to a volume of 120 ml in a 500 ml volume Sakaguchi shake flask, and cultured with shaking at 30 ° C. for 48 hours. The composition of the molasses basic medium is 1.9 g / L ammonium sulfate, 1.3 g / L urea, 0.5 g / L potassium dihydrogen phosphate, 0.5 g / L magnesium sulfate heptahydrate, fermentable sugar content 25 g / L Corresponding molasses, pH 5.2. Centrifugation was performed to recover the yeast cells from the obtained culture broth. The isolated cells were washed twice with sterile water and again suspended in sterile water. The yeast dry matter amount of this solution was measured, and the yeast yield per unit fermentable sugar was calculated. This yeast solution was stored refrigerated in the dark until use.
[0025]
Among 29 beer yeast strains tested, the yeast yield per unit fermentable sugar in the molasses basic medium was 40% or more, that is, the strain that was thought to have been easily cultured using molasses as a sugar source The following 18 strains were selected as the primary selection strains.
[0026]
No. 3-ATCC 9080 No. 4-ATCC 9373 No. 5-ATCC 10596
No. 6-ATCC 24556 No. 8-
No.10-ATCC 26602 No.11-ATCC 26789 No.13-ATCC 28519
No.15-ATCC 28521 No.16-ATCC 28522 No.17-ATCC 28523
No.18-ATCC 28524 No.22-ATCC 36267 No.23-ATCC 42367
No.26−ATCC 46991 No.27−ATCC 60728 No.28−ATCC 60729
[0027]
As the “second stage”, bread dough was prepared using the prepared yeast solution, fermented, and the amount of carbon dioxide generated in the fermentation stage was measured. That is, according to the method of the Japan East Industrial Association, a sugar-free dough was prepared with a medium seed mix of 100 g of flour, and the amount of carbon dioxide generated was measured with a farm graph. 40 g of prepared dough was packed in a measurement bottle, and the amount of gas generated for 120 minutes was examined every 5 minutes, and the total amount of gas generated after 90 minutes was compared. The results are shown in FIG. When the amount of gas generated from general-purpose bread yeast (manufactured by Nippon Sugar Sugar Co., Ltd.) was taken as the control zone, all of the primary selections of beer yeast were less than 100%, and most were considered insufficient for breadmaking It was. However, no. The 8-
[0028]
However, the amount of carbon dioxide generated in the dough of the secondary selected
[0029]
Utilizing artificial mutations to improve the productivity of strains and newly imparting new traits has been frequently carried out in the industry, and there are many successful examples. Among them, drugs that directly attack and mutate bacterial chromosomal DNA are mainly used. In the present invention, ethyl methanesulfonate (EMS), which is most frequently used in yeast, was used. When an alkylating agent such as EMS is used, the 7th position of guanine in DNA is alkylated to form a quaternary ammonium nitrogen, deoxyriboside bond becomes unstable and is easily cleaved. That is, even if deguanine is caused and repaired by a repair mechanism, it is possible that different bases can enter, and as a result, mutations are introduced. The feature of this method is that it is unlikely that a mutation once introduced will be restored.
[0030]
As the mutation treatment, in addition to the above, physical treatment such as γ-ray, ultraviolet ray, temperature difference, ethidium bromide, nitrogen mustard, diepoxybutane, colchicine, peroxide, purine derivative, N-methyl- Conventional methods such as treatment with a mutagen such as N′-nitro-N-nitrosoguanidine can be used as appropriate.
[0031]
In addition, the present technology requires an operation for efficiently selecting a target strain (improvement of dough fermentation performance) from a strain subjected to mutation treatment such as EMS treatment. It was thought that this could be solved by mixing an appropriate antifungal agent in the medium in which the cells were grown and selecting the strains that were able to grow in this medium. This is because cells that have acquired moderate antibiotic resistance are often improved in basic growth, sugar metabolism, fermentability, etc. As antifungal agents, For example, clotrimazole is exemplified without limitation.
[0032]
That is,
[0033]
After the reaction, the cells were collected by centrifugation and washed once with 5% sodium thiosulfate solution and twice with sterile water. The cells were resuspended in sterile water, diluted to an appropriate amount, and smeared on SD medium supplemented with clotrimazole to a final concentration of 20 μg / ml. The smear medium was statically cultured at 30 ° C. for 2 to 3 days. During this static culture, colonies that appeared earlier on the plate and formed relatively large were selected as positive colonies. 1.0 × 10 11 cells were mutated to obtain 15 positive colonies. The strain numbers were as follows.
[0034]
No. 1-NiNB03-1 No. 2-NiNB03-2 No. 3-NiNB03-3
No. 4-NiNB03-4 No. 5-NiNB03-5 No. 6-NiNB03-6
No. 7−NiNB03−7 No. 8−NiNB03−8 No. 9−NiNB03−9
No.10-NiNB03-10 No.11-NiNB03-11 No.12-NiNB03-12
No.13-NiNB03-13 No.14-NiNB03-14 No.15-NiNB03-15
[0035]
The 15 strains obtained were cultured using the molasses basic medium described above, and the cells were collected. Using the cells, bread dough was prepared according to the method of the Japan East Industry Association described above, and fermented. The amount of carbon dioxide generated in the fermentation stage was measured. A sugar-free dough was prepared with a medium blend of 100 g of wheat flour, and the amount of carbon dioxide generated was measured with a farmograph. The results are shown in FIG. Compared with the
[0036]
This strain was named “Saccharomyces cerevisiae (Nitrogen NB0301 strain)” and registered with the Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology under the accession number FERM P-19190.
[0037]
According to the present invention, a novel yeast capable of producing a new type of bread has been clarified. Therefore, without undergoing the above-described steps, brewer's yeast, wild yeast, yeast that is stored or sold by each institution The target strain can be bred directly by screening the above, or the target strain can be bred after mutation treatment. At that time, when an antibiotic-added medium such as clotrimazole is used as the selective medium, the target strain is efficiently selected. And by using the novel baker's yeast obtained in this way, a new type bread having a unique flavor can be efficiently produced.
[0038]
Examples of the present invention are shown below.
[0039]
Example 1: Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae) Bread-making test using Ni-NB0301 strain Ni-NB031 strain was cultured in a 2 L jar fermenter to produce a large amount of cells. In a 500 ml Sakaguchi shake flask, use the molasses basic medium, perform the number of cultures corresponding to 12 g of the inoculum used for each test strain, collect the cells by centrifugation, and wash them twice with sterile water. Inoculated. The saturated dissolved oxygen content at a culture temperature of 30 ° C. was maintained at 2 ppm or more, and molasses fed-batch culture was performed. The amount of fed molasses was 81.27 g, the culture time was 11.5 hours, and the number of stirring was 700 rpm. As the nitrogen source, urea or ammonium sulfate was used, and vitamins and other salts were appropriately added. After culturing, the cells were collected by centrifugation and washed.
[0040]
Using the cultured cells, bread was baked in accordance with the seed method for 4 hours of bread of Japan East Industry Association. The results at that time are shown in Table 1. The bread using the Ni-NB0301 strain showed a better score than the bread using the
[0041]
[0042]
Furthermore, liquid fermentation power was measured for each strain. The measurement was performed as follows. That is, in the composition described in “Influence of Dough Constituents on Fermentation (Cereal Chemistry, Vol. 22 (1945)”, the carbon source of the fermentation medium was 10% sucrose (F10), and 40% sucrose. (F40) Using 8% maltose (M8), the amount of carbon dioxide generated (mg) generated by yeast having a dry weight of 200 mg at 30 ° C. for 3 hours was determined by a weight method.
[0043]
The obtained results are shown in Table 2 below. As is clear from the results, the bread using Ni-NB0301 strain (A) shows superior fermentability than
[0044]
[0045]
Example 2: Analysis of flavor components of bread using Saccharomyces cerevisiae Ni-NB0301 strain Analyzed the flavor components of bread for the baked bread in Example 1 for the use of Ni-NB0301 strain and general yeast did. Using a gas chromatograph mass spectrometer (GC-MS, Hitachi, Ltd. model M2500), aroma components were collected in a TENAX collector, and analysis was performed after heat desorption. The results are shown in FIG.
[0046]
As is clear from the results, the bread using Ni-NB0301 strain clearly has a different scent pattern from the bread using yeast for general use. Specifically, for example, ethanol, n-propanol, isobutanol, etc. It was judged that the bread had different odorous substances such as isoamyl alcohol, acetoin, acetic acid, 2-ethylhexanol, and phenethyl alcohol, and had a characteristic characteristic aroma. Bread showing such a pattern of aroma components has not been reported in the past, and from the results of actually smelling and tasting, such bread is not known so far and may be new confirmed.
[0047]
The bread according to the use of this strain has a mild and favorable fragrance because of its low fragrance output value from the sensory aspect compared to the bread related to general yeast, and from the component analysis aspect, the amount of acetoin is Although the amount of isobutanol and isoamyl alcohol is low, this strain is derived from brewer's yeast with high alcohol (ethanol) productivity, but ethanol production is a bread that does not have ethanol production as its main function. A point lower than that of yeast (general yeast) was also confirmed.
[0048]
【The invention's effect】
According to the present invention, a completely new type of baker's yeast that has been unknown in the past has been bred and isolated. This strain is obtained by mutating a brewer's yeast as a parent strain, but it grows well in a medium containing molasses, has a high fermenting power, has excellent bread-making properties, and has antibiotic resistance. It can produce new types of bread, especially unconventional bread with respect to flavor, and also meets the needs of consumers seeking bread diversification. Further, the novel strain according to the present invention can be selected from artificially mutated strains, and can also be screened and isolated from conserved strains, wild strains and the like.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows a relative value of gas generation amount of each strain in the second stage.
FIG. 2 shows a relative value of gas generation amount of the artificial mutant strain in the third stage.
FIG. 3 shows measurement results of aroma components of bread produced using general-purpose yeast and Ni-NB0301 strain.
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