JP3876079B2 - Process for producing 1,24-dihydroxycholesterols - Google Patents

Description

【０００４】
この方法においては、２４位の水酸基の立体配置が望ましくないものであるＳ配置である化合物が副成する。したがって、この方法を実用的に優れた製造法とするには、この副成する２４位がＳ配置である化合物の２４位の立体配置を簡便に反転し、Ｒ配置とする技術が必要である。２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロールおよび１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールの２４位の水酸基の立体反転法は、特開昭５３−８２７６６号、特公昭６２−９１１８号、特公平７−３９４３４号各公報に記載されている。代表的な例として、特公平７−３９４３４号公報記載の方法を挙げると、１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールの３位の水酸基を保護し、２４位をメシル化した後、有機カルボン酸塩による立体反転、加水分解等をおこなうことにより、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロールを得るというものである。
【０００５】
【化５】

【０００６】
この１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールを出発原料とする２４位の立体反転法では３位の水酸基の反応性が他の水酸基に比べて高いため、２４位の立体反転を行う前に３位の水酸基を選択的に保護する必要がある。しかし、特公平７−３９４３４号公報記載の化学的な方法では、その３位の保護の収率は高々６４％であり、必ずしも十分とはいえない。また、立体反転は水酸基の活性化と反転反応を同時に実施できず、２４位の水酸基をあらかじめスルホン酸エステルに誘導したのち実施する必要があり、工程数が増加してしまうという問題点があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上記従来技術の状況のもとに、本発明の目的は入手容易な１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールを出発原料とする１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロール類の実用的な製造法を提供することである。具体的には、より簡便に２４位の立体配置を反転させる方法を提供することである。その方法は最も実用的に優れた１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロールの製造法の一つになり得る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を踏まえて１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールの３位の選択的アシル化および得られた３位アシル化体の２４位の水酸基を一気に反転させる方法について鋭意研究した結果、本発明に到達したものである。
【０００９】
すなわち、本発明は下記式（Ｉ）
【００１０】
【化６】

【００１１】
で表される１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールをリパーゼ存在下でアシル化反応に付し、下記式（II）
【００１２】
【化７】

【００１３】
［式中、Ｒ¹は炭素数２から１０のアシル基を表す。この炭素数にはカルボニル炭素を含む。以下同じ。］
で表される化合物を得、これとクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリドおよびカルボン酸塩を反応させ、次いで必要に応じ、保護または脱保護を行うことを特徴とする下記式（III）
【００１４】
【化８】

【００１５】
［式中、Ｒ¹、Ｒ²、およびＲ³はそれぞれ同一もしくは異なり、水素原子、炭素数２から１０のアシル基を表す。］
で表される１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロール類の製造法である。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明の製造法において、前記式（Ｉ）で表される化合物の３位の選択的アシル化は、リパーゼを用いることで達成できる。用いられるリパーゼは、ほぼシュードモナス属由来のリパーゼに限られ、他のリパーゼではほとんど反応自体が進行しない。シュードモナス属由来のリパーゼとしては、東洋紡製のＬＩＰ−３００およびベーリンガーマンハイム製のキラザイムＬ−６、天野製薬製のリパーゼＰＳが挙げられ、いずれも高選択的に３位のアシル化を触媒する。
【００１７】
前記式（Ｉ）で表される化合物のアシル化に用いられるアシル化剤としては、脂肪族あるいは芳香族カルボン酸のビニルエステル、イソプロペニルエステル、酸無水物、トリフルオロエチルエステル等が用いられる。具体的には酢酸、クロロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ｐ−ニトロ安息香酸のビニルエステル、イソプロペニルエステル、酸無水物、トリフルオロエチルエステルが挙げられる。その中でも特に入手の容易さ、選択性の高さより、酢酸ビニルやクロロ酢酸ビニルが好ましい。
【００１８】
前記式（Ｉ）で表される化合物のアシル化に用いられる溶媒は、炭化水素系、ハロゲン系、エーテル系の有機溶媒等が挙げられる。なかでもエーテル系の溶媒が好ましく、例としてｔ−ブチルメチルエーテル、ＴＨＦ、ジイソプロピルエーテルが挙げられ、特にその溶解力を考慮してｔ−ブチルメチルエーテルが最適である。
【００１９】
前記式（Ｉ）で表される化合物のアシル化の反応温度は、０℃から溶媒の沸点までの範囲でリパーゼの安定性により選択されるが、通常は室温で実施する。この反応温度は反応時間に影響するが、室温で実施した場合、ほぼ数時間〜数日で反応は完結する。
【００２０】
前記式（II）で表される化合物の２４位の水酸基の反転は、クロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（ビールスマイヤー試薬）存在下、カルボン酸塩と反応させることにより実施できる。この試薬の組合せはJ. Chem. Soc. Chem. Commun., 1403 (1995)に記載されてはいるが、前記式（II）の化合物のような水酸基を２個有する化合物（１位と２４位）の一方の水酸基の選択的反応例はなかった。実際に反応を行った結果、２４位が優先的に反応することおよび１位の反転反応は起こらないことを見出した。すなわち、１位がメチレンジメチルアンモニウムクロリド化された場合は後処理することにより、１位の水酸基がホルミル基で保護された化合物が得られるわけである。
【００２１】
前記式（II）で表される化合物の２４位の水酸基の反転に用いられるクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（ビールスマイヤー試薬）は購入可能であるが、Chem. Soc. Chem. Commun., 1403 (1995)に記載されているように、ＤＭＦと塩化オキサリルより容易に合成できる。また、反応系内でＤＭＦと塩化オキサリルを反応させ調製することも可能である。これは従来知られていなかった事実であり、本発明の特徴の一つとして挙げることができる。このクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（ビールスマイヤー試薬）は前記式（II）で表される化合物を残存させないために、前記式（II）で表される化合物に対して１モル倍〜５モル倍の範囲で用いられるが、好ましくは１．５モル倍〜２．５モル倍の範囲で用いられる。
【００２２】
本反応で用いる反応溶媒としては、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル等の水溶性の溶媒、トルエン、ヘキサン等の炭化水素系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン系溶媒、あるいはその混合溶媒を用いることができる。好ましい溶媒としてはＴＨＦおよびトルエンを挙げることができる。かかる溶媒の使用量としては、通常ｍｍｏｌで表される反応スケールに換算して、１ｍｌ〜１００ｍｌ用いられるが、好ましくは２ｍｌ〜２０ｍｌの範囲で用いられる。
【００２３】
反応温度としては室温から溶媒の沸点までの範囲が使用されるが、好ましくは５０℃から８０℃の温度が選択される。この反応温度は反応時間に影響する。通常、１時間から数日程度である。
【００２４】
本反応で用いられるカルボン酸の塩のカルボン酸としては、酢酸、クロロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸が挙げられ、塩としてはカリウム塩、ナトリウム塩、リチウム塩、セシウム塩等が挙げられる。特に好ましいカルボン酸塩として安息香酸カリウム、安息香酸ナトリウムが挙げられる。このカルボン酸塩は２４位の水酸基の反転の試剤であると共にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（ビールスマイヤー試薬）と前記式（II）で表される化合物が反応した際に生じる塩化水素を捕捉する目的があるため、前記式（II）で表される化合物に対して３モル倍〜３０モル倍の範囲で用いられ、好ましくは５モル倍〜１５モル倍の範囲で用いられる。
【００２５】
かくして、得られた前記式（III）で表される化合物は、３、２４位あるいは１、３、２４位が保護されている。したがって、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロールを得ることが目的ならば、脱保護する必要があり、それは通常の加水分解等の方法により達成できる。また、前記式（III）で表される化合物は、特公昭６２−５１２６５号公報に記載の方法に従って、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシビタミンＤ₃へ誘導可能である。この場合は、３、２４位が保護されている前記式（III）で表される化合物の場合は、１位の水酸基を通常の方法で保護した後、１、３、２４位が保護された化合物の場合はそのまま以降の工程に付すことができる。以上のように、必要に応じ、脱保護、保護をすることで所望の１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロール誘導体が得られる。
【００２６】
【化９】

【００２７】
また、本製造法を用いることにより、前記式（Ｉ）で表される化合物より途中精製を行うことなく、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロールを合成することができる。このように、本製造法は非常に簡便な方法といえる。
【００２８】
【実施例】
［実施例１］
【００２９】
【化１０】

【００３０】
１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（１）（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＭｅ溶液（５ｍｌ）に酢酸ビニル（０．２３ｍｌ、２．５０ｍｍｏｌ）およびＬＩＰ−３００（５０ｍｇ）を加え、室温で４時間攪拌した。リパーゼを濾去した後、溶媒を留去することで粗生成物を得た。シリカゲル（２０ｇ）を用い、ヘキサン：酢酸エチル（１０：１→３：１）でカラム精製することで、３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２１５ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【００３１】
¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、ｐｐｍ） δ；
０．６８（３Ｈ，ｓ） ０．８０−１．００（６Ｈ，ｍ） １．０５（３Ｈ，ｓ） １．００−２．５０（２１Ｈ，ｍ） ２．０３（３Ｈ，ｓ） ３．２５−３．４５（２Ｈ，ｍ） ３．８５（１Ｈ，ｂｒ） ４．９５−５．１５（１Ｈ，ｍ） ５．５５−５．６５（１Ｈ，ｍ）
【００３２】
［実施例２］
【００３３】
【化１１】

【００３４】
１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（１）（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＭｅ−ＴＨＦ溶液（４ｍｌ−１ｍｌ）に酢酸ビニル（０．２３ｍｌ、２．５０ｍｍｏｌ）およびキラザイムＬ−６（５０ｍｇ）を加え、室温で２４時間攪拌した。リパーゼを濾去した後、溶媒を留去することで粗生成物を得た。シリカゲル（２０ｇ）を用い、ヘキサン：酢酸エチル（１０：１→３：１）でカラム精製することで、３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（１８７ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、８６％）を得た。このもののＮＭＲは実施例１で得たもののそれと一致した。
【００３５】
［実施例３］
【００３６】
【化１２】

【００３７】
１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（１）（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＭｅ−ＴＨＦ溶液（３ｍｌ−２ｍｌ）にクロロ酢酸ビニル（０．５ｍｌ、４．９３ｍｍｏｌ）、およびリパーゼＰＳ−Ｄ（５０ｍｇ）を加え、室温で２４時間攪拌した。リパーゼを濾去した後、溶媒を留去することで粗生成物を得た。シリカゲル（２０ｇ）を用い、ヘキサン：酢酸エチル（１０：１→３：１）でカラム精製することで、３−クロロアセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（３）（１９７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、８４％）を得た。
【００３８】
¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、ｐｐｍ） δ；
０．６８（３Ｈ，ｓ） ０．８０−１．００（６Ｈ，ｍ） １．０５（３Ｈ，ｓ） １．００−２．５０（２１Ｈ，ｍ） ３．２５−３．３５（２Ｈ，ｍ） ３．８９（１Ｈ，ｂｒ） ４．０２（２Ｈ，ｓ） ５．０５−５．２０（１Ｈ，ｍ） ５．５５−５．６５（１Ｈ，ｍ）
【００３９】
［実施例４］
【００４０】
【化１３】

【００４１】
３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２３０ｍｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍｌ）にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（１３８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、安息香酸カリウム（４８０ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間攪拌した。放冷後、水および酢酸エチル（各２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水（各２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をＹＭＣ−ＳＩＬ（２ｃｍ×２５ｃｍ）を用いてＨＰＬＣ分取（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１、流量：２０ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）し、３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ヒドロキシコレステロール（４）（１０６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、３８％）および３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ホルミルオキシコレステロール（５）（１１５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、３９％）を得た。
【００４２】
（４）の¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、ｐｐｍ） δ；
０．６５（３Ｈ，ｓ） ０．８０−１．００（６Ｈ，ｍ） １．０３（３Ｈ，ｓ） １．００−２．５０（２１Ｈ，ｍ） ２．０１（３Ｈ，ｓ） ３．８５（１Ｈ，ｂｒ） ４．９０−５．１０（２Ｈ，ｍ） ５．５５−５．６５（１Ｈ，ｍ） ７．４０−７．６０（２Ｈ，ｍ） ８．００−８．１０（１Ｈ，ｍ）
（５）の¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、ｐｐｍ） δ；
０．６３（３Ｈ，ｓ） ０．８０−１．００（６Ｈ，ｍ） １．０８（３Ｈ，ｓ） １．００−２．５０（２１Ｈ，ｍ） ２．０２（３Ｈ，ｓ） ４．８５−５．０５（２Ｈ，ｍ） ５．２０（１Ｈ， ｂｒ） ５．５５−５．６５（１Ｈ，ｍ） ７．４０−７．６０（２Ｈ，ｍ） ８．００−８．１０（２Ｈ，ｍ）
【００４３】
［実施例５］
【００４４】
【化１４】

【００４５】
３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２３０ｍｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍｌ）にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（１３８ｍｇ、 １．００ｍｍｏｌ）、安息香酸ナトリウム（４３２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間攪拌した。放冷後、水および酢酸エチル（各２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水（各２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をＹＭＣ−ＳＩＬ（２ｃｍ×２５ｃｍ）を用いてＨＰＬＣ分取（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１、流量：２０ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）し、３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ヒドロキシコレステロール（４）（１２１ｍｇ、 ０．２１ｍｍｏｌ、４３％）および３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ホルミルオキシコレステロール（５）（６７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、２３％）を得た。これらのＮＭＲは実施例４で得られたもののそれらと一致した。
【００４６】
［実施例６］
【００４７】
【化１５】

【００４８】
３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２３０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍｌ）にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（１３８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２６８ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間攪拌した。放冷後、水および酢酸エチル（各２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水（各２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をＹＭＣ−ＳＩＬ（２ｃｍ×２５ｃｍ）を用いてＨＰＬＣ分取（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１、流量：２０ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）し、３，２４（Ｒ）−ジアセトキシ−１α−ヒドロキコレスト−５−エン（６）（５３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、２３％）および３，２４（Ｒ）−ジアセトキシ−１α−ホルミルオキシコレスト−５−エン（７）（３３ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１２％）を得た。
【００４９】
（６）の¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、ｐｐｍ） δ；
０．６７（３Ｈ，ｓ） ０．８５−０．９５（６Ｈ，ｍ） １．０４（３Ｈ，ｓ） １．００−２．５０（２１Ｈ，ｍ） ２．０３（３Ｈ，ｓ） ２．０５（３Ｈ，ｓ） ３．８５（１Ｈ，ｂｒ） ４．６５−４．７５（１Ｈ，ｍ） ４．９０−５．１５（１Ｈ，ｍ） ５．５５−５．６５（１Ｈ，ｍ）
（７）の¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、ｐｐｍ） δ；
０．６７（３Ｈ，ｓ） ０．８５−０．９５（６Ｈ，ｍ） １．０８（３Ｈ，ｓ） １．００−２．５０（２１Ｈ，ｍ） ２．０３（３Ｈ，ｓ） ２．０５（３Ｈ，ｓ） ４．６５−４．７５（１Ｈ，ｍ） ４．８５−５．０５（１Ｈ，ｍ）５．２０（１Ｈ，ｂｒ） ５．５０−５．６０（１Ｈ，ｍ） ８．０８（１Ｈ，ｓ）
【００５０】
［実施例７］
【００５１】
【化１６】

【００５２】
ＤＭＦ（０．０８５ｍｌ、１．１０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（２ｍｌ）に塩化オキサル（０．０９ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）を室温で滴下し、１０分間攪拌した。３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２３０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２ｍｌ）、安息香酸カリウム（４８０ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で６時間攪拌した。放冷後、水および酢酸エチル（各２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水（各２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をＹＭＣ−ＳＩＬ（２ｃｍ×２５ｃｍ）を用いてＨＰＬＣ分取（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１、流量：２０ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）し、３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ヒドロキシコレステロール（４）（１２０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、４２％）および３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ホルミルオキシコレステロール（５）（６９ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、２３％）を得た。これらのＮＭＲは実施例４で得られたもののそれらと一致した。
【００５３】
［実施例８］
【００５４】
【化１７】

【００５５】
３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２３０ｍｇ、０．５０ ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３ｍｌ）にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（１３８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、安息香酸ナトリウム（４３２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間攪拌した。放冷後、水および酢酸エチル（各２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水（各２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をＹＭＣ−ＳＩＬ（２ｃｍ×２５ｃｍ）を用いてＨＰＬＣ分取（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１、流量：２０ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）し、３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ヒドロキシコレステロール（４）（６５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、２３％）および３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ホルミルオキシコレステロール（５）（８５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、２８％）を得た。これらのＮＭＲは実施例４で得られたもののそれらと一致した。
【００５６】
［実施例９］
【００５７】
【化１８】

【００５８】
３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）（２３０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍｌ）にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（２１０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）、安息香酸カリウム（７００ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で５時間攪拌した。放冷後、水および酢酸エチル（各２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水（各２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をＹＭＣ−ＳＩＬ（２ｃｍ×２５ｃｍ）を用いてＨＰＬＣ分取（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝５／１、流量：２０ｍｌ／分、検出：２５４ｎｍ）し、３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ヒドロキシコレステロール（４）（３３ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１２％）および３−アセチル−２４（Ｒ）−ベンゾイルオキシ−１α−ホルミルオキシコレステロール（５）（１９０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、６４％）を得た。これらのＮＭＲは実施例４で得られたもののそれらと一致した。
【００５９】
［実施例１０］
【００６０】
【化１９】

【００６１】
１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（１）（２３０ｍｇ、純度９０％、０．５０ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＭｅ溶液（５ｍｌ）に酢酸ビニル（０．５ｍｌ、５．４１ｍｍｏｌ）とＬＩＰ−３００（５０ｍｇ）を加え、室温で３時間攪拌した。濾過後、濃縮し、３−アセチル−１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（２）を得た。このＴＨＦ溶液（３ｍｌ）にクロロメチレンジメチルアンモニウムクロリド（１３８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、安息香酸カリウム（４８０ ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間攪拌した。放冷後、濾過、濃縮し、得られた粗体にＴＨＦ（２ｍｌ）、メタノール（１ｍｌ）、水（０．５ｍｌ）を加えたのち、４Ｍ ＫＯＨのメタノール溶液（１ｍｌ）を加え、８０℃で１時間攪拌した。水（２５ｍｌ）および酢酸エチル（２５ｍｌ）でわり、水層を分離した。有機層は飽和食塩水（２５ｍｌ）で洗浄した後、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム（２０ｇ；トルエン：酢酸エチル＝１０／１→３／１）で精製し、１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロール（８）（１４５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、６９％）を得た。このもののＮＭＲは１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール（１）とほぼ同一であったが、ＨＰＬＣ分析（ＹＭＳ−ＯＤＳ（ＡＭ３０３）、アセトニトリル／水＝７／３、１．０ｍｌ／分、２１０ｎｍ、３５℃）で標品と合わせることにより１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロール（８）と同定した。
【００６２】
【発明の効果】
本発明によれば、効率的に１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロール類を得ることができる。例えば、特公平７−３９４３４号公報記載の方法では１α，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロールより４工程で５０％の収率で得られた１α，２４（Ｒ）−ジヒドロキシコレステロールが、本法を用いれば３工程、６９％の収率で得られるわけである。また、従来、途中の工程における精製操作が必須であったが、本法を用いれば、途中の工程での精製を省略することができ、一般に精製は反応と同程度の工数を要すると考えれられることを踏まえると、極めて実際的な製造法といえる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a synthetic intermediate of a vitamin D ₃ derivative useful as a pharmaceutical product. More specifically, 1α, 24 (R) -dihydroxy, which is an important synthetic intermediate of 1α, 24 (R) -dihydroxyvitamin D ₃ useful as a therapeutic agent for diseases with abnormal calcium metabolism or cell differentiation function. The present invention relates to a method for producing cholesterols.
[0002]
[Prior art]
One method for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol is described in JP-B-53-23828, JP-B-53-24073, JP-B-55-12920, and JP-A-5-043591. A combination of methods is mentioned. That is, this method is to synthesize 1α, 24-dihydroxycholesterol using 24-hydroxycholesterol as a starting material and separate the isomer at the 24-position as follows.
[0003]
[Formula 4]

[0004]
In this method, a compound having an S configuration in which the configuration of the hydroxyl group at the 24-position is undesirable is formed as a by-product. Therefore, in order to make this method practically excellent, a technique is required in which the steric configuration at the 24th position of the compound in which the 24th position is the S configuration is simply reversed to obtain the R configuration. . The method of stereoinversion of the hydroxyl group at position 24 of 24 (S) -hydroxycholesterol and 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol is disclosed in JP-A-53-82766, JP-B-62-9118, and JP-B-7-39434. It is described in the publication. As a typical example, the method described in Japanese Patent Publication No. 7-39434 is cited. After protecting the hydroxyl group at the 3-position of 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol and mesylating the 24-position, an organic carboxylate is obtained. 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol is obtained by steric inversion, hydrolysis and the like.
[0005]
[Chemical formula 5]

[0006]
In this stereoinversion method using the 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol as a starting material, the reactivity of the hydroxyl group at the 3-position is higher than that of other hydroxyl groups, so that the 3-position before the stereoinversion at the 24-position is performed. It is necessary to selectively protect the hydroxyl group. However, in the chemical method described in JP-B-7-39434, the yield of protection at the 3-position is at most 64%, which is not necessarily sufficient. In addition, the steric inversion cannot simultaneously activate the hydroxyl group and the inversion reaction, and it is necessary to carry out after the hydroxyl group at the 24-position is derived in advance to the sulfonic acid ester, resulting in an increase in the number of steps. .
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
Under the above-mentioned state of the art, the object of the present invention is to provide a practical method for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol starting from 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol which is readily available. It is to be. Specifically, it is to provide a method for inverting the configuration at the 24th position more simply. The method can be one of the most practically excellent methods for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
Based on the above-mentioned problems, the present inventor has intensively studied on selective acylation at the 3-position of 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol and a method for reversing the hydroxyl group at the 24-position of the obtained 3-position acylated compound at once. As a result, the present invention has been achieved.
[0009]
That is, the present invention provides the following formula (I)
[0010]
[Chemical 6]

[0011]
1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol represented by the following formula (II) is subjected to an acylation reaction in the presence of lipase:
[0012]
[Chemical 7]

[0013]
[Wherein R ¹ represents an acyl group having 2 to 10 carbon atoms. This carbon number includes the carbonyl carbon. same as below. ]
Wherein the compound is reacted with chloromethylenedimethylammonium chloride and a carboxylate salt, and then protected or deprotected as necessary.
[0014]
[Chemical 8]

[0015]
[Wherein, R ¹ , R ² and R ³ are the same or different and each represents a hydrogen atom or an acyl group having 2 to 10 carbon atoms. ]
Is a process for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol represented by
[0016]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the production method of the present invention, selective acylation at the 3-position of the compound represented by the formula (I) can be achieved by using lipase. The lipase used is almost limited to those derived from the genus Pseudomonas, and the reaction itself hardly proceeds with other lipases. Examples of lipases derived from Pseudomonas include Toyobo's LIP-300, Boehringer Mannheim's Kirazyme L-6, and Amano Pharmaceutical's lipase PS, both of which catalyze the acylation of the 3-position with high selectivity.
[0017]
Examples of the acylating agent used for acylating the compound represented by the formula (I) include aliphatic or aromatic carboxylic acid vinyl esters, isopropenyl esters, acid anhydrides, trifluoroethyl esters, and the like. Specific examples include acetic acid, chloroacetic acid, propionic acid, benzoic acid, vinyl ester of p-nitrobenzoic acid, isopropenyl ester, acid anhydride, and trifluoroethyl ester. Among these, vinyl acetate and vinyl chloroacetate are preferable from the viewpoint of easy availability and high selectivity.
[0018]
Examples of the solvent used for acylation of the compound represented by the formula (I) include hydrocarbon-based, halogen-based, and ether-based organic solvents. Of these, ether solvents are preferable, and examples thereof include t-butyl methyl ether, THF, and diisopropyl ether. Particularly, t-butyl methyl ether is most suitable in consideration of its dissolving power.
[0019]
The reaction temperature for the acylation of the compound represented by the formula (I) is selected depending on the stability of the lipase in the range from 0 ° C. to the boiling point of the solvent, but is usually carried out at room temperature. Although this reaction temperature affects the reaction time, when it is carried out at room temperature, the reaction is completed in about several hours to several days.
[0020]
The inversion of the hydroxyl group at the 24-position of the compound represented by the formula (II) can be carried out by reacting with a carboxylate in the presence of chloromethylenedimethylammonium chloride (Beersmeier reagent). Although this reagent combination is described in J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1403 (1995), it has two hydroxyl groups such as the compound of formula (II) (positions 1 and 24). There was no example of selective reaction of one hydroxyl group. As a result of actual reaction, it was found that the 24th position reacts preferentially and the 1st position inversion reaction does not occur. That is, when the 1-position is converted to methylenedimethylammonium chloride, a compound in which the hydroxyl group at the 1-position is protected with a formyl group is obtained by post-treatment.
[0021]
Chloromethylenedimethylammonium chloride (Beersmeier reagent) used for inversion of the hydroxyl group at the 24-position of the compound represented by the formula (II) is commercially available. Chem. Soc. Chem. Commun., 1403 (1995) Can be easily synthesized from DMF and oxalyl chloride. It can also be prepared by reacting DMF and oxalyl chloride in the reaction system. This is a fact that has not been known so far, and can be cited as one of the features of the present invention. This chloromethylenedimethylammonium chloride (Beersmeier reagent) does not leave the compound represented by the above formula (II), so that it is in the range of 1 mol times to 5 mol times with respect to the compound represented by the above formula (II). However, it is preferably used in the range of 1.5 mol times to 2.5 mol times.
[0022]
The reaction solvent used in this reaction includes ether solvents such as tetrahydrofuran and dioxane, water-soluble solvents such as N, N-dimethylformamide and acetonitrile, hydrocarbon solvents such as toluene and hexane, and halogen solvents such as dichloromethane and chloroform. A solvent or a mixed solvent thereof can be used. Preferred solvents include THF and toluene. The amount of the solvent used is usually 1 ml to 100 ml in terms of a reaction scale expressed in mmol, and preferably 2 ml to 20 ml.
[0023]
As the reaction temperature, a range from room temperature to the boiling point of the solvent is used, and a temperature of 50 ° C to 80 ° C is preferably selected. This reaction temperature affects the reaction time. Usually, it is about 1 hour to several days.
[0024]
Examples of the carboxylic acid salt used in this reaction include acetic acid, chloroacetic acid, propionic acid, and benzoic acid, and examples of the salt include potassium salt, sodium salt, lithium salt, and cesium salt. Particularly preferred carboxylate salts include potassium benzoate and sodium benzoate. This carboxylate salt is a reagent for inversion of the hydroxyl group at the 24-position, and has the purpose of capturing hydrogen chloride generated when the compound represented by the above formula (II) reacts with chloromethylenedimethylammonium chloride (Beersmeier reagent). Therefore, it is used in a range of 3 mole times to 30 mole times, preferably in a range of 5 mole times to 15 mole times with respect to the compound represented by the formula (II).
[0025]
Thus, the obtained compound represented by the formula (III) is protected at the 3,24 position or the 1,3,24 position. Therefore, if the purpose is to obtain 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol, it is necessary to deprotect it, which can be achieved by a usual method such as hydrolysis. Further, the compound represented by the formula (III) can be derived to 1α, 24 (R) -dihydroxyvitamin D ₃ according to the method described in Japanese Examined Patent Publication No. 62-51265. In this case, in the case of the compound represented by the formula (III) in which positions 3, 24 are protected, the hydroxyl group at position 1 was protected by a usual method, and then positions 1, 3, 24 were protected. In the case of a compound, it can be directly applied to the subsequent steps. As described above, the desired 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol derivative can be obtained by deprotection and protection as necessary.
[0026]
[Chemical 9]

[0027]
Further, by using this production method, 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol can be synthesized without performing purification on the way from the compound represented by the formula (I). Thus, this production method can be said to be a very simple method.
[0028]
【Example】
[Example 1]
[0029]
[Chemical Formula 10]

[0030]
To a solution of 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (1) (200 mg, 0.48 mmol) in tBuOMe (5 ml) was added vinyl acetate (0.23 ml, 2.50 mmol) and LIP-300 (50 mg), and 4 at room temperature. Stir for hours. After removing the lipase by filtration, the solvent was distilled off to obtain a crude product. Using silica gel (20 g) and column purification with hexane: ethyl acetate (10: 1 → 3: 1), 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (215 mg, 0.47 mmol, 99%).
[0031]
¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ;
0.68 (3H, s) 0.80-1.00 (6H, m) 1.05 (3H, s) 1.00-2.50 (21H, m) 2.03 (3H, s) 25-3.45 (2H, m) 3.85 (1H, br) 4.95-5.15 (1H, m) 5.55-5.65 (1H, m)
[0032]
[Example 2]
[0033]
Embedded image

[0034]
To 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (1) (200 mg, 0.48 mmol) in a tBuOMe-THF solution (4 ml-1 ml) was added vinyl acetate (0.23 ml, 2.50 mmol) and chirazyme L-6 (50 mg). In addition, the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. After removing the lipase by filtration, the solvent was distilled off to obtain a crude product. Using silica gel (20 g) and column purification with hexane: ethyl acetate (10: 1 → 3: 1), 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (187 mg, 0.41 mmol, 86%). The NMR of this product was consistent with that obtained in Example 1.
[0035]
[Example 3]
[0036]
Embedded image

[0037]
1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (1) (200 mg, 0.48 mmol) in tBuOMe-THF solution (3 ml-2 ml), vinyl chloroacetate (0.5 ml, 4.93 mmol), and lipase PS-D (50 mg) ) And stirred at room temperature for 24 hours. After removing the lipase by filtration, the solvent was distilled off to obtain a crude product. 3-Chloroacetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (3) (197 mg, 0.40 mmol) was purified by column purification with hexane: ethyl acetate (10: 1 → 3: 1) using silica gel (20 g). 84%).
[0038]
¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ;
0.68 (3H, s) 0.80-1.00 (6H, m) 1.05 (3H, s) 1.00-2.50 (21H, m) 3.25-3.35 (2H, m) 3.89 (1H, br) 4.02 (2H, s) 5.05-5.20 (1H, m) 5.55-5.65 (1H, m)
[0039]
[Example 4]
[0040]
Embedded image

[0041]
To a THF solution (3 ml) of 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (230 mg, 0.50 mmol), chloromethylenedimethylammonium chloride (138 mg, 1.00 mmol), potassium benzoate (480 mg, 3.000 mmol) was added, and the mixture was stirred at 80 ° C. for 3 hours. After standing to cool, the aqueous layer was separated by water and ethyl acetate (25 ml each). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and brine (each 25 ml), then dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was subjected to HPLC fractionation using YMC-SIL (2 cm × 25 cm) (eluent: hexane / ethyl acetate = 5/1, flow rate: 20 ml / min, detection: 254 nm), and 3-acetyl-24 (R ) -Benzoyloxy-1α-hydroxycholesterol (4) (106 mg, 0.19 mmol, 38%) and 3-acetyl-24 (R) -benzoyloxy-1α-formyloxycholesterol (5) (115 mg, 0.19 mmol, 39%).
[0042]
¹ H NMR of (4) (CDCl ₃ , ppm) δ;
0.65 (3H, s) 0.80-1.00 (6H, m) 1.03 (3H, s) 1.00-2.50 (21H, m) 2.01 (3H, s) 85 (1H, br) 4.90-5.10 (2H, m) 5.55-5.65 (1H, m) 7.40-7.60 (2H, m) 8.00-8.10 ( 1H, m)
¹ H NMR of (5) (CDCl ₃ , ppm) δ;
0.63 (3H, s) 0.80-1.00 (6H, m) 1.08 (3H, s) 1.00-2.50 (21H, m) 2.02 (3H, s) 85-5.05 (2H, m) 5.20 (1H, br) 5.55-5.65 (1 H, m) 7.40-7.60 (2H, m) 8.00-8.10 ( 2H, m)
[0043]
[Example 5]
[0044]
Embedded image

[0045]
To a THF solution (3 ml) of 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (230 mg, 0.50 mmol), chloromethylenedimethylammonium chloride (138 mg, 1.00 mmol), sodium benzoate (432 mg, 3.000 mmol) was added, and the mixture was stirred at 80 ° C. for 3 hours. After standing to cool, the aqueous layer was separated by water and ethyl acetate (25 ml each). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and brine (each 25 ml), then dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was subjected to HPLC fractionation using YMC-SIL (2 cm × 25 cm) (eluent: hexane / ethyl acetate = 5/1, flow rate: 20 ml / min, detection: 254 nm), and 3-acetyl-24 (R ) -Benzoyloxy-1α-hydroxycholesterol (4) (121 mg, 0.21 mmol, 43%) and 3-acetyl-24 (R) -benzoyloxy-1α-formyloxycholesterol (5) (67 mg, 0.11 mmol, 23%). These NMRs were consistent with those obtained in Example 4.
[0046]
[Example 6]
[0047]
Embedded image

[0048]
To a THF solution (3 ml) of 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (230 mg, 0.50 mmol), chloromethylenedimethylammonium chloride (138 mg, 1.00 mmol), potassium acetate (268 mg, 3. 00 mmol) was added, and the mixture was stirred at 80 ° C. for 3 hours. After standing to cool, the aqueous layer was separated by water and ethyl acetate (25 ml each). The organic layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate and brine (each 25 ml), then dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was subjected to HPLC fractionation using YMC-SIL (2 cm × 25 cm) (eluent: hexane / ethyl acetate = 5/1, flow rate: 20 ml / min, detection: 254 nm), and 3,24 (R) − Diacetoxy-1α-hydroxycholest-5-ene (6) (53 mg, 0.12 mmol, 23%) and 3,24 (R) -diacetoxy-1α-formyloxycholest-5-ene (7) (33 mg, 0.06 mmol, 12%).
[0049]
¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ of (6);
0.67 (3H, s) 0.85-0.95 (6H, m) 1.04 (3H, s) 1.00-2.50 (21 H, m) 2.03 (3H, s) 05 (3H, s) 3.85 (1H, br) 4.65-4.75 (1H, m) 4.90-5.15 (1H, m) 5.55-5.65 (1H, m)
¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ of (7);
0.67 (3H, s) 0.85-0.95 (6H, m) 1.08 (3H, s) 1.00-2.50 (21 H, m) 2.03 (3H, s) 05 (3H, s) 4.65-4.75 (1H, m) 4.85-5.05 (1H, m) 5.20 (1H, br) 5.50-5.60 (1H, m) 8.08 (1H, s)
[0050]
[Example 7]
[0051]
Embedded image

[0052]
To a toluene solution (2 ml) of DMF (0.085 ml, 1.10 mmol) was added oxal chloride (0.09 ml, 1.00 mmol) dropwise at room temperature, and the mixture was stirred for 10 minutes. A solution of 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (230 mg, 0.50 mmol) in THF (2 ml) and potassium benzoate (480 mg, 3.00 mmol) were added, and the mixture was stirred at 80 ° C. for 6 hours. . After standing to cool, the aqueous layer was separated by water and ethyl acetate (25 ml each). The organic layer was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and brine (25 ml each), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was subjected to HPLC fractionation using YMC-SIL (2 cm × 25 cm) (eluent: hexane / ethyl acetate = 5/1, flow rate: 20 ml / min, detection: 254 nm), and 3-acetyl-24 (R ) -Benzoyloxy-1α-hydroxycholesterol (4) (120 mg, 0.21 mmol, 42%) and 3-acetyl-24 (R) -benzoyloxy-1α-formyloxycholesterol (5) (69 mg, 0.12 mmol, 23%). These NMRs were consistent with those obtained in Example 4.
[0053]
[Example 8]
[0054]
Embedded image

[0055]
3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (230 mg, 0.50 mmol) in DMF (3 ml) was added to chloromethylenedimethylammonium chloride (138 mg, 1.00 mmol), sodium benzoate (432 mg, 3.000 mmol) was added, and the mixture was stirred at 80 ° C. for 3 hours. After standing to cool, the aqueous layer was separated by water and ethyl acetate (25 ml each). The organic layer was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and brine (25 ml each), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was subjected to HPLC fractionation using YMC-SIL (2 cm × 25 cm) (eluent: hexane / ethyl acetate = 5/1, flow rate: 20 ml / min, detection: 254 nm), and 3-acetyl-24 (R ) -Benzoyloxy-1α-hydroxycholesterol (4) (65 mg, 0.12 mmol, 23%) and 3-acetyl-24 (R) -benzoyloxy-1α-formyloxycholesterol (5) (85 mg, 0.14 mmol, 28%). These NMRs were consistent with those obtained in Example 4.
[0056]
[Example 9]
[0057]
Embedded image

[0058]
3-Acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2) (230 mg, 0.50 mmol) in THF (3 ml) was added to chloromethylenedimethylammonium chloride (210 mg, 1.52 mmol), potassium benzoate (700 mg, 4 .38 mmol) was added and the mixture was stirred at 60 ° C. for 5 hours. After standing to cool, the aqueous layer was separated by water and ethyl acetate (25 ml each). The organic layer was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and brine (25 ml each), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was subjected to HPLC fractionation using YMC-SIL (2 cm × 25 cm) (eluent: hexane / ethyl acetate = 5/1, flow rate: 20 ml / min, detection: 254 nm), and 3-acetyl-24 (R ) -Benzoyloxy-1α-hydroxycholesterol (4) (33 mg, 0.06 mmol, 12%) and 3-acetyl-24 (R) -benzoyloxy-1α-formyloxycholesterol (5) (190 mg, 0.32 mmol, 64%). These NMRs were consistent with those obtained in Example 4.
[0059]
[Example 10]
[0060]
Embedded image

[0061]
Vinyl acetate (0.5 ml, 5.41 mmol) and LIP-300 (50 mg) were added to a tBuOMe solution (5 ml) of 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (1) (230 mg, purity 90%, 0.50 mmol). And stirred at room temperature for 3 hours. After filtration, it was concentrated to obtain 3-acetyl-1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (2). To this THF solution (3 ml) were added chloromethylenedimethylammonium chloride (138 mg, 1.00 mmol) and potassium benzoate (480 mg, 3.00 mmol), and the mixture was stirred at 80 ° C. for 3 hours. After allowing to cool, the mixture was filtered and concentrated. THF (2 ml), methanol (1 ml) and water (0.5 ml) were added to the resulting crude product, and then a 4M KOH methanol solution (1 ml) was added. Stir for 1 hour. The aqueous layer was separated with water (25 ml) and ethyl acetate (25 ml). The organic layer was washed with saturated brine (25 ml), dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The crude product was purified by silica gel column (20 g; toluene: ethyl acetate = 10/1 → 3/1) to obtain 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol (8) (145 mg, 0.36 mmol, 69%). It was. The NMR of this product was almost the same as 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol (1), but HPLC analysis (YMS-ODS (AM303), acetonitrile / water = 7/3, 1.0 ml / min, 210 nm, (1), 24 (R) -dihydroxycholesterol (8).
[0062]
【The invention's effect】
According to the present invention, 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterols can be obtained efficiently. For example, in the method described in Japanese Patent Publication No. 7-39434, 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol obtained in 50% yield in 4 steps from 1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol is used in this method. In this case, it can be obtained in 3 steps with a yield of 69%. Conventionally, purification operation in an intermediate process has been essential, but if this method is used, purification in an intermediate process can be omitted, and it is generally considered that purification requires man-hours comparable to the reaction. Considering this, it can be said that this is a very practical manufacturing method.

Claims (5)

Formula (I)

1α, 24 (S) -dihydroxycholesterol represented by the following formula (II) is subjected to an acylation reaction in the presence of lipase:

[Wherein R ¹ represents an acyl group having 2 to 10 carbon atoms. ]
A compound represented by the following formula (III) is obtained, which is reacted with chloromethylenedimethylammonium chloride and a carboxylate, and then protected or deprotected as necessary:

[Wherein R ¹ , R ² and R ³ are the same or different and each represents a hydrogen atom or an acyl group having 2 to 10 carbon atoms. ]
A process for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol represented by The method for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol according to claim ¹ , wherein R ¹ in the formula (II) is an acetyl group. The method for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol according to claim 1 or 2, wherein the lipase is derived from Pseudomonas. The method for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol according to any one of claims 1 to 3, wherein the carboxylate is potassium benzoate. The method for producing 1α, 24 (R) -dihydroxycholesterol according to any one of claims 1 to 4, wherein chloromethylenedimethylammonium chloride is prepared in a reaction system.