JP3706906B2 - Caffe oil homoserine and radical scavenger - Google Patents

Description

（式中、R¹、R²及びR³は、それぞれ独立して、水素、C₁〜C₅アルキル基、又は-CO-R⁴（R⁴はC₁〜C₅アルキル基を表す。）を表す。）で示される化合物又はその塩。
（２）前記（１）に記載の化合物を有効成分として含有するラジカル消去剤。
（３）クサソテツ属(Matteuccia)植物の水溶性抽出物を含有するラジカル消去剤。
（４）クサソテツ属(Matteuccia)植物から抽出することを特徴とする下記式（I）：
【０００７】
【化４】

（式中、R¹、R²及びR³は、それぞれ独立して、水素、C₁〜C₅アルキル基、又は-CO-R⁴（R⁴はC₁〜C₅アルキル基を表す。）を表す。）で示される化合物又はその塩の製造方法。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明について詳しく説明する。
クサソテツ（別名：コゴミ）はオシダ科の多年草のシダで、北半球の温帯地域に広く分布しており、日本では北海道、本州、四国、九州の日当たりのよい原野の湿った場所に群生する。また、早春の融雪後まもなく芽を出した葉先がまいた状態の若い葉は食用となる。
【０００９】
クサソテツの健康機能についてはこれまで報告されていなかったが、本発明者らはクサソテツが強いラジカル消去活性を有することを見出した。クサソテツの抽出液は非常に強いラジカル消去活性を示すことから、この活性成分を明らかにすべく、鋭意検討を重ね、クサソテツに含まれる活性成分を単離し、その化学構造を明らかにすることに成功した。その結果クロロゲン酸、及び、Ｌ-O-カフェオイルホモセリンが活性の主成分であると同定した。その一つのＬ-O-カフェオイルホモセリンは文献未記載の新規な化合物であり、本発明者らが新たに見出したものである。
【００１０】
請求項１に係る本発明は、上記一般式（ I ）で表される化合物である。上記一般式（ I ）で表される化合物は、アミノ酸の一種であるホモセリンのγ-水酸基とカフェ酸とがエステル結合した化合物であって、文献未記載の新規化合物である。
【００１１】
一般式（Ｉ）において、R¹、R²及びR³は、それぞれ独立して、水素、C₁〜C₅アルキル基、又は-CO-R⁴（R⁴はC₁〜C₅アルキル基を表す。）を表す。C₁〜C₅アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、イソブチル基等が挙げられる。また、R¹、R²及びR³は、それぞれ独立して、例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、ルチノース等の糖類、グルタミン酸、リジン等のアミノ酸であってもよい。本発明では、R¹、R²及びR³のうち、少なくとも1つは水素であることが好ましく、少なくとも2つが水素であることが更に好ましく、3つとも水素であることが最も好ましい。
【００１２】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、化学的合成法によっても製造することができるが、例えば以下のようにして、一般式（ I ）で表される化合物を産生する植物から抽出、分離精製して得ることもできる。
本発明の化合物を生産する植物としては、オシダ科（イワデンダ科）植物、好ましくはクサソテツ属(Matteuccia)に属する植物、例えばクサソテツ（Matteuccia struthiopteris (L.)Todaro）、イヌガンソク（Matteuccia orientalis）等が挙げられる。なお、クサソテツからは、下記式(II)で表される化合物が得られる。
【００１３】
【化５】

上記式(II)で表される化合物に、慣用の化学合成手法を利用してアミノ酸部分のアミノ基及び／又はカルボキシル基を化学修飾することにより、上記一般式(I)で表される種々の誘導体を得ることができる。
以下に、クサソテツから本発明の化合物を抽出する方法について説明する。
【００１４】
上記植物を、必要に応じて裁断、破砕、圧搾及び／又はホモジナイズして、植物が十分浸る量の溶媒に浸漬する。また、この抽出工程を、必要に応じて加温しながら行なってもよく、抽出時間は抽出温度に応じて適宜変更してよい。抽出溶媒としては、本化合物は水溶性が高いことから水、又は水溶性・極性の有機溶媒、若しくはこれらの混合溶媒を用いることが好ましい。水溶性又は極性の有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、n-プロパノール、イソプロパノール、n-ブタノール等の水溶性アルコール、アセトン等が挙げられる。
【００１５】
上述のようにして抽出した後に、濾過、分液、遠心分離、減圧濃縮等の慣用の方法を用いて、本発明の化合物等の水溶性抽出物を含む抽出液を得る。この水溶性抽出物を含む抽出液は、これ以上精製することなくそのままラジカル消去剤として用いることもできる。
【００１６】
また、さらに精製する場合には、カラムクロマトグラフィー等の通常の分離精製手段を適宜組み合わせて、上述の抽出液から一般式（Ｉ）で表される化合物を単離することができる。例えば、得られた抽出液をODSのカラムに通し、メタノールの濃度勾配をかけて溶出させて紫外部吸収を指標にポリフェノールの画分を得る。この画分に含まれる成分を分取高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で分離後、再結晶して単一の純粋な一般式（Ｉ）で表される化合物を得る。
【００１７】
本発明の化合物は、強いラジカル消去活性を有する。また、本発明の化合物は、古くから山菜として食用とされているクサソテツより得られるため、安全性の上でも問題がない。また、アミノ酸のアミノ基、カルボキシル基の親水基を有していることから水溶性である特徴を有する。クサソテツから得られる一般式(II)で表される化合物だけでなく、その誘導体、光学異性体、及びその塩も同様にラジカル消去活性を有する。塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩等が挙げられる。
【００１８】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、例えば食品分野、化粧品分野及び農薬・医薬品分野等のラジカル消去剤（ラジカル補足剤）として有用である。食品分野又は化粧品分野で用いる場合には、食品又は化粧品中に本発明の化合物を0.001〜50重量％含有させることが好ましく、また、医薬品として人体に投与する場合には、成人一日当たり0.01〜10000mgを投与することが好ましい。
【００１９】
本発明の化合物は、単独で用いてもよいし、又は食品分野、化粧品分野及び農薬・医薬品分野等で通常用いられる他の成分と組み合わせて組成物として用いてもよい。そのような他の成分としては、例えば、食品分野では、保存料、乳化剤、安定剤、増粘剤、矯味矯臭剤、呈味剤、甘味剤、酸味剤、着色料等が挙げられ、化粧品分野では、ワセリンやマイクロクリスタリンワックス等のような炭化水素類、ホホバ油やゲイロウ等のエステル類、牛脂、オリーブ油等のトリグリセライド類、セタノール、オレイルアルコール等の高級アルコール類、ステアリン酸、オレイン酸等の脂肪酸、グリセリンや１，３−ブタンジオール等の多価アルコール類、非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、エタノール、カーボポール等の増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、粉体類等が挙げられ、医薬品分野では、賦形剤、結合剤、被覆剤、滑沢剤、糖衣剤、崩壊剤、増量剤、矯味矯臭剤、乳化・可溶化・分散剤、安定剤、ｐＨ調整剤、等張剤等が挙げられる。
【００２０】
従来の抗酸化剤、ラジカル消去剤が疎水性のであるのに対し、本発明の新規化合物(I)は水溶性であり、現在、水溶性の抗酸化剤、ラジカル消去剤が強く望まれる中、本発明の化合物は非常に有用性が高い。これを例えば食品に添加することにより、食品の酸化を抑制することができる。また、親油性ラジカル消去剤、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＡとの相乗作用も期待でき、効率的に食品の酸化が抑制される。この他、本発明の化合物を摂取、又は投与することにより、体内で老化、生活習慣病を引き起こすといわれている活性酸素種を消去することが期待される。
【００２１】
【実施例】
次に本発明を実施例によって詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）クサソテツからの本発明の化合物の単離
クサソテツのラジカル消去活性を指標にして分離精製を進めた。
クサソテツ2kgにメタノールを加えてホモジナイズした。濾紙で吸引濾過し、濾液を遠心分離（5000rpm×10min）し、約10Ｌの上清を得た。これを減圧濃縮しメタノールを除去した。得られた濃縮液を更に遠心分離し、上清をフィルター濾過し、濾液をODS（INERTSIL PREP-ODS, 20×250mm, GLサイエンス社）カラムクロマトグラフィー（流速7ml/min、水／メタノール 10/90〜0/100の直線濃度勾配、40min）で溶出をおこなった。分画は14mlずつ行い、各々の画分についてラジカル消去試験を行った。活性が見られた２つの画分のうち、後半に溶出されるピークはクサソテツのもう一つのラジカル消去活性の主体成分であるクロロゲン酸であった。前半に溶出される活性ピークを更にカラムに通し、280nmにおける紫外線吸収で単独ピークになったことを確認し、これを再結晶し白色の結晶を得ることができた。
【００２２】
（実施例２）クサソテツから単離した本発明の化合物の構造解析
得られた化合物が、上記一般式（ I ）で表される化学構造であることを下記のようにして確認した。
上記実施例１で得られた化合物について、NMR（核磁気共鳴）及びMS（質量分析法）により、構造解析を行った。以下に、各データを示す。
【００２３】
【表１】

ネガティブ高分解能質量分析（HRESIMS）：
m/z 280.0835 ([M-H]^-)（C₁₃H₁₄O₆, 計算値280.08156）
同様にネガティブHRESIMSでインソースCID(Collision Induced Dissociation)によるフラグメンテーションによって得られたピーク：
m/z 179.0376 (C₉H₇O₄, 計算値179.03389), 135.0484 (C₈H₇O₂, 計算値135.04406)
【００２４】
【化６】

この結果、上記実施例１で得られた化合物は、前記式（II）で表される化合物であることが同定された。
【００２５】
（実施例３）クサソテツから単離した本発明の化合物のラジカル消去活性試験
上記実施例１で得られた化合物について、DPPH（ジフェニルピクリルヒドラジル）ラジカル消去法、及び、化学発光法によるラジカル消去活性試験を行った。2つの原理の異なる方法を組み合わせることにより、より正確なラジカル消去活性を知ることができるが、他の測定法を用いることもできる。
▲１▼ DPPHラジカル消去法
クサソテツより単離した本発明の化合物の10mM/DMSO 溶液を調製し、これを更に1.78倍ずつ0.01mMまでDMSOを用いて希釈していく。この希釈したサンプルを96穴プレートに15μlづつ分注し、その後200μMのDPPH／50％エタノール水溶液を175μl分注し、5分間室温で撹拌し、その後550nmにおける吸光度を測定する。
活性は、サンプルがDPPHの550nmの吸光度を、無添加の時に対し50%にまで減少させるときのサンプルの濃度を没食子酸の時に相当する濃度で示す。
【００２６】
▲２▼ 化学発光法
DPPHラジカル消去法と同じく、クサソテツより単離した本発明の化合物の10mM/DMSO 溶液を調製し、これを更に1.78倍ずつ0.01mMまでDMSOを用いて希釈していく。この希釈したサンプルを96穴プレートに10μlづつ分注し、その後、100μlのキサンチン、MCLA（2-メチル-6-[4-メトキシフェニル]-3,7-ジハイドロイミダゾ[1,2-a]ピラジン-3-オン）溶液と、100μlのキサンチンオキシダーゼ溶液を添加する。キサンチンとキサンチンオキシダーゼにより、生体内で発生する活性酸素のひとつのスーパーオキサイドアニオンを産生させ、これに特異的な発色試薬であるMCLAにより発色させ、この発光強度を測定する。活性はサンプルが無添加の時の発光強度に対し、50%にまで減少させるときのサンプルの濃度をスーパーオキサイドアニオンジスムターゼ（SOD）の時に相当する活性で示す。
【００２７】
これらの結果、上記実施例１で得られた化合物、つまり一般式（ I ）で表される本発明のＬ-O-カフェオイルホモセリンは、天然型ラジカル消去剤として知られるクロロゲン酸、ルチン、カフェ酸と同等以上の強力なラジカル消去活性を持つことが分かった。
【００２８】
【発明の効果】
請求項１に係る本発明により、新規カフェオイルホモセリンが提供される。この新規カフェオイルホモセリンは、アミノ酸のひとつであるホモセリンのγ水酸基とカフェ酸のカルボキシル基がエステル結合した化合物である。この新規カフェオイルホモセリンはその構造から非常に親水性が高い。これまで知られているポリフェノール系の抗酸化剤は疎水性が高いものが多く、そのため親水性の高い水溶性抗酸化剤が望まれており、本発明の新規カフェオイルホモセリンはその点で注目される。
【００２９】
請求項１記載のカフェオイルホモセリンは、請求項２に係る本発明のように、抗酸化剤として有用であり、特に古くから食用とされているクサソテツ（コゴミ）に比較的多量に含まれる成分であるため、食品用の抗酸化剤として用いたときにも安全性の上で問題がない。
【００３０】
また、本発明により、水溶性で強力なラジカル消去活性を有する一般式（Ｉ）で表される化合物を有効成分として含有するラジカル消去剤を提供できる。クサソテツの水溶性抽出液又は請求項１記載のカフェオイルホモセリンを食品に添加することにより、食品中の油脂エマルジョンなどの酸化が抑制される。すなわち、食品中の油脂エマルジョンにおいて不飽和脂肪酸の酸化などが抑制される。また、その食品摂取後は、体内で抗酸化性を発揮することが期待される。
【００３１】
さらに、本発明によりクサソテツから一般式（Ｉ）で表される化合物を容易に製造する方法を提供できる。クサソテツ（コゴミ）は、主に東北地方を代表する山菜として食されており、今までは特にその食品としての機能は知られていなかったが、本発明により、抗酸化性を有するカフェオイルホモセリンの原料としての利用も期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】各化合物のラジカル消去活性を比較した図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel L-O-caffeoyl homoserine and radical scavenger useful in the food industry field, chemical industry field and the like.
[0002]
[Prior art]
Phenolic acid compounds having skeletons such as chlorogenic acid and caffeic acid are known as natural antioxidants and radical scavengers, and have been reported as antioxidants for living bodies in addition to preventing food oxidation. However, they have strong hydrophobic properties and hardly dissolve in water.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a hydrophilic compound useful as a food antioxidant or the like, a method for producing the compound, and a radical scavenger containing the compound as an active ingredient.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have extensively screened radical scavenging activity for over 400 kinds of agricultural products in the Tohoku region. As a result, we found that Kusotatsu, a typical wild vegetable in the Tohoku region, has strong activity, and succeeded in isolating a compound having a strong radical scavenging activity.
[0005]
That is, the present invention includes the following inventions.
(1) The following formula (I):
[0006]
[Chemical 3]

(In the formula, R ¹ , R ² and R ³ each independently represent hydrogen, a C ₁ -C ₅ alkyl group, or —CO—R ⁴ (R ⁴ represents a C ₁ -C ₅ alkyl group). Or a salt thereof.
(2) A radical scavenger containing the compound according to (1) as an active ingredient.
(3) A radical scavenger containing a water-soluble extract of a plant of the genus Matteuccia.
(4) Extracted from a plant of the genus Matteuccia (I):
[0007]
[Formula 4]

(In the formula, R ¹ , R ² and R ³ each independently represent hydrogen, a C ₁ -C ₅ alkyl group, or —CO—R ⁴ (R ⁴ represents a C ₁ -C ₅ alkyl group). The method of manufacturing the compound or its salt shown by this.
[0008]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The present invention is described in detail below.
Kusotatsu (aka kogomi) is a perennial fern of the family Fernaceae and is widely distributed in the temperate regions of the northern hemisphere. In Japan, it grows in the wet areas of sunny fields in Hokkaido, Honshu, Shikoku and Kyushu. In addition, young leaves with sprouted leaves soon after snow melting in early spring are edible.
[0009]
Although the health function of Kusotatsu has not been reported so far, the present inventors have found that Kusaotsutsu has a strong radical scavenging activity. Since the extract of Kusaotsutsu exhibits a very strong radical scavenging activity, in order to clarify this active ingredient, intensive investigations have been conducted, and the active ingredient contained in Kusaotsutsu has been isolated and its chemical structure has been elucidated. did. As a result, chlorogenic acid and L-O-caffeoyl homoserine were identified as the main active components. One such L-O-caffeoyl homoserine is a novel compound not described in the literature, and was newly found by the present inventors.
[0010]
The present invention according to claim 1 is a compound represented by the above general formula (I). The compound represented by the general formula (I) is a compound in which a γ-hydroxyl group of homoserine which is a kind of amino acid and caffeic acid are ester-bonded, and is a novel compound not described in any literature.
[0011]
In the general formula (I), R ¹ , R ² and R ³ each independently represent hydrogen, a C _{1 to} C ₅ alkyl group, or —CO—R ⁴ (R ⁴ represents a C _{1 to} C ₅ alkyl group). Represents.) The C ₁ -C ₅ alkyl group such as methyl group, ethyl group, n- propyl group, an isopropyl group, n- butyl group, sec- butyl group, tert- butyl group, an isobutyl group and the like. R ¹ , R ² and R ³ may each independently be a sugar such as glucose, fructose, galactose, mannose, or rutinose, or an amino acid such as glutamic acid or lysine. In the present invention, at least one of R ¹ , R ² and R ³ is preferably hydrogen, more preferably at least two are hydrogen, and most preferably all three are hydrogen.
[0012]
The compound represented by the general formula (I) of the present invention can be produced by a chemical synthesis method. For example, from the plant producing the compound represented by the general formula (I) as follows: It can also be obtained by extraction and separation and purification.
Plants that produce the compounds of the present invention include Osaceae (Iwadendae) plants, preferably plants belonging to the genus Matteuccia, for example, Matteuccia struthiopteris (L.) Todaro, Matteuccia orientalis, and the like. It is done. From Kusotatsu, a compound represented by the following formula (II) is obtained.
[0013]
[Chemical formula 5]

By chemically modifying the amino group and / or carboxyl group of the amino acid moiety to the compound represented by the above formula (II) using a conventional chemical synthesis technique, various compounds represented by the above general formula (I) can be obtained. Derivatives can be obtained.
Hereinafter, a method for extracting the compound of the present invention from Kusotatsu will be described.
[0014]
The plant is cut, crushed, pressed and / or homogenized as necessary, and immersed in an amount of solvent sufficient for the plant to soak. Moreover, you may perform this extraction process, heating as needed, and you may change extraction time suitably according to extraction temperature. As the extraction solvent, since this compound has high water solubility, it is preferable to use water, a water-soluble / polar organic solvent, or a mixed solvent thereof. Examples of the water-soluble or polar organic solvent include water-soluble alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, and n-butanol, and acetone.
[0015]
After extraction as described above, an extract containing a water-soluble extract such as the compound of the present invention is obtained using a conventional method such as filtration, separation, centrifugation, concentration under reduced pressure and the like. The extract containing this water-soluble extract can be used as a radical scavenger as it is without further purification.
[0016]
In the case of further purification, the compound represented by the general formula (I) can be isolated from the above-mentioned extract by appropriately combining ordinary separation and purification means such as column chromatography. For example, the obtained extract is passed through an ODS column and eluted with a concentration gradient of methanol to obtain a polyphenol fraction using ultraviolet absorption as an index. The components contained in this fraction are separated by preparative high performance liquid chromatography (HPLC) and then recrystallized to obtain a single pure compound represented by general formula (I).
[0017]
The compounds of the present invention have a strong radical scavenging activity. Moreover, since the compound of the present invention is obtained from Kusotatsu, which has been edible as a wild vegetable for a long time, there is no problem in terms of safety. Moreover, since it has the amino group of an amino acid, and the hydrophilic group of a carboxyl group, it has the characteristic of being water-soluble. Not only the compound represented by the general formula (II) obtained from Kusaotsutsu but also its derivatives, optical isomers, and salts thereof have radical scavenging activity. Examples of the salt include sodium salt, potassium salt, calcium salt, hydrochloride, hydrobromide, sulfate, nitrate, acetate, methanesulfonate, toluenesulfonate, citrate, fumarate, Examples include maleate.
[0018]
The compound represented by the general formula (I) of the present invention is useful as a radical scavenger (radical scavenger) in, for example, the food field, the cosmetic field, and the agrochemical / pharmaceutical field. When used in the field of food or cosmetics, the compound of the present invention is preferably contained in the food or cosmetics in an amount of 0.001 to 50% by weight. When administered to the human body as a pharmaceutical, 0.01 to 10000 mg per day for an adult Is preferably administered.
[0019]
The compound of the present invention may be used alone, or may be used as a composition in combination with other components usually used in the food field, cosmetic field, agricultural chemical / pharmaceutical field and the like. Examples of such other components include preservatives, emulsifiers, stabilizers, thickeners, flavoring agents, flavoring agents, sweeteners, sour agents, coloring agents, and the like in the food field. In, hydrocarbons such as petrolatum and microcrystalline wax, esters such as jojoba oil and geirow, triglycerides such as beef tallow and olive oil, higher alcohols such as cetanol and oleyl alcohol, fatty acids such as stearic acid and oleic acid , Polyhydric alcohols such as glycerin and 1,3-butanediol, nonionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, thickeners such as ethanol and carbopol, preservatives, UV absorbers, antioxidants, pigments, powders, etc. In the pharmaceutical field, excipients, binders, coating agents, lubricants, sugar coatings, disintegrating agents, The amount, flavoring agents, emulsifying, solubilizing and dispersing agents, stabilizers, pH modifiers, isotonic agents, and the like.
[0020]
Whereas conventional antioxidants and radical scavengers are hydrophobic, the novel compound (I) of the present invention is water-soluble, and currently water-soluble antioxidants and radical scavengers are strongly desired. The compounds of the present invention are very useful. By adding this to, for example, food, the oxidation of the food can be suppressed. In addition, synergistic action with lipophilic radical scavengers such as vitamin E and vitamin A can be expected, and the oxidation of food is efficiently suppressed. In addition, by taking or administering the compound of the present invention, it is expected to eliminate reactive oxygen species that are said to cause aging and lifestyle-related diseases in the body.
[0021]
【Example】
EXAMPLES Next, although an Example demonstrates this invention in detail, this invention is not limited to these.
(Example 1) Isolation of the compound of the present invention from Kusotatsu Separation and purification were carried out using the radical scavenging activity of Kusaotsutsu as an index.
Methanol was added to 2 kg of Kusotatsu and homogenized. The filtrate was suction filtered with a filter paper, and the filtrate was centrifuged (5000 rpm × 10 min) to obtain about 10 L of a supernatant. This was concentrated under reduced pressure to remove methanol. The resulting concentrate is further centrifuged, the supernatant is filtered, and the filtrate is ODS (INERTSIL PREP-ODS, 20 × 250mm, GL Sciences) column chromatography (flow rate 7 ml / min, water / methanol 10/90). Elution was performed with a linear concentration gradient of ˜0 / 100 (40 min). Fractionation was performed 14 ml at a time, and radical scavenging tests were performed on each fraction. Of the two fractions in which activity was observed, the peak eluted in the latter half was chlorogenic acid, which is the main component of another radical scavenging activity of Kusotatsu. The active peak eluted in the first half was further passed through a column, and it was confirmed that it became a single peak by ultraviolet absorption at 280 nm, and it was recrystallized to obtain white crystals.
[0022]
(Example 2) Structural analysis of the compound of the present invention isolated from Kusotatsu It was confirmed as follows that the obtained compound had a chemical structure represented by the above general formula (I).
The compound obtained in Example 1 was subjected to structural analysis by NMR (nuclear magnetic resonance) and MS (mass spectrometry). Each data is shown below.
[0023]
[Table 1]

Negative high resolution mass spectrometry (HRESIMS):
m / z 280.0835 ([MH] ^- ) (C ₁₃ H ₁₄ O ₆ , Calculated value 280.08156)
Similarly, negative HRESIMS peaks obtained by fragmentation with in-source CID (Collision Induced Dissociation):
m / z 179.0376 (C ₉ H ₇ O ₄ , calculated value 179.03389), 135.0484 (C ₈ H ₇ O ₂ , calculated value 135.04406)
[0024]
[Chemical 6]

As a result, it was identified that the compound obtained in Example 1 was a compound represented by the formula (II).
[0025]
(Example 3) Radical scavenging activity test of the compound of the present invention isolated from Kusotatsu The compound obtained in Example 1 above was subjected to radical elimination by DPPH (diphenylpicrylhydrazyl) radical and chemiluminescence. An activity test was performed. A more accurate radical scavenging activity can be known by combining two methods having different principles, but other measurement methods can also be used.
(1) DPPH radical scavenging method A 10 mM / DMSO solution of the compound of the present invention isolated from Kusotatsu is prepared, and this is further diluted 1.78 times to 0.01 mM with DMSO. Dispense 15 μl of this diluted sample into a 96-well plate, then dispense 175 μl of 200 μM DPPH / 50% ethanol aqueous solution, stir for 5 minutes at room temperature, and then measure the absorbance at 550 nm.
The activity indicates the concentration of the sample when the absorbance of DPPH at 550 nm is reduced to 50% with respect to the case of no addition at a concentration corresponding to that of gallic acid.
[0026]
(2) Chemiluminescence method
As in the DPPH radical scavenging method, a 10 mM / DMSO solution of the compound of the present invention isolated from Kusotatsu is prepared, and this is further diluted 1.78 times to 0.01 mM with DMSO. Dispense 10 μl of this diluted sample into a 96-well plate, and then add 100 μl of xanthine, MCLA (2-methyl-6- [4-methoxyphenyl] -3,7-dihydroimidazo [1,2-a] Add pyrazin-3-one) solution and 100 μl xanthine oxidase solution. One superoxide anion of active oxygen generated in the living body is produced by xanthine and xanthine oxidase, and the color is developed by MCLA, which is a specific coloring reagent, and the luminescence intensity is measured. The activity indicates the concentration of the sample when it is reduced to 50% with respect to the luminescence intensity when the sample is not added, as the activity corresponding to that of superoxide anion dismutase (SOD).
[0027]
As a result, the compound obtained in Example 1 above, that is, L-O-caffeoyl homoserine of the present invention represented by the general formula (I) is a chlorogenic acid, rutin, and caffeine known as natural radical scavengers. It was found to have a radical scavenging activity equivalent to or better than acid.
[0028]
【The invention's effect】
The present invention according to claim 1 provides novel caffeoyl homoserine. This novel caffeoyl homoserine is a compound in which the γ hydroxyl group of homoserine, which is one of amino acids, and the carboxyl group of caffeic acid are ester-bonded. This novel caffeoyl homoserine is very hydrophilic due to its structure. Many of the known polyphenol antioxidants have high hydrophobicity, and therefore water-soluble antioxidants with high hydrophilicity are desired, and the novel caffeoyl homoserine of the present invention has attracted attention in that respect. The
[0029]
Caffeoyl homoserine according to claim 1 is useful as an antioxidant as in the present invention according to claim 2, and is a component that is contained in a relatively large amount in Kusasotetsu (kogomi), which has been used for a long time. Therefore, there is no problem in safety when used as an antioxidant for food.
[0030]
Moreover, the present invention can provide a radical scavenger containing, as an active ingredient, a compound represented by the general formula (I) having water-soluble and strong radical scavenging activity. By adding the water-soluble extract of Kusotatsu or the caffeoyl homoserine according to claim 1 to the food, oxidation of the fat emulsion and the like in the food is suppressed. That is, the oxidation of unsaturated fatty acids and the like is suppressed in the fat and oil emulsion in food. In addition, after taking the food, it is expected to exhibit antioxidant properties in the body.
[0031]
Furthermore, the present invention can provide a method for easily producing a compound represented by the general formula (I) from Kusotatsu. Kusotatsu (kogomi) is eaten mainly as a wild vegetable representing the Tohoku region, and until now, its function as a food was not particularly known. However, according to the present invention, caffeoyl homoserine having antioxidant properties is known. Use as a raw material can also be expected.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph comparing radical scavenging activities of respective compounds.

Claims (6)

Formula (I) below

(Wherein R ¹ , R ² and R ³ represent hydrogen, a C _{1 to} C ₅ alkyl group, or —CO—R ⁴ (R ⁴ represents a C _{1 to} C ₅ alkyl group)). Or a salt thereof. R ¹ , R ² as well as R ^Three The compound of claim 1, wherein is hydrogen. The radical scavenger containing the compound of Claim 1 or 2 . Formula from the Matteuccia plant ( II ):

The radical scavenger containing the water-soluble extract containing the compound or its salt . The following formula (I), characterized by being extracted from a Matteuccia plant:

(Wherein R ¹ , R ² and R ³ represent hydrogen, a C _{1 to} C ₅ alkyl group, or —CO—R ⁴ (R ⁴ represents a C _{1 to} C ₅ alkyl group)). A method for producing a compound or a salt thereof. R ¹ , R ² as well as R ^Three 6. The method of claim 5, wherein is hydrogen.

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